Ферментативные процессы, осуществляемые панкреатической липазой в неводных средах тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.23, кандидат технических наук Зиновьева, Мария Евгеньевна

• Зиновьева, Мария Евгеньевна
• кандидат технических наук
• 1999

Оглавление диссертации кандидат технических наук Зиновьева, Мария Евгеньевна

1. ВВЕДЕНИЕ.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

2. 1. Ферменты в органических средах.

2.1.1. Выбор растворителя.

2.1.2. Микрогетерогенные реакционные среды.

2.1.2.1. Обращенные мицеллы.

2.1.2.2. Бездетергенные микроэмульсии.

2.1.2.3. Ферменты, модифицированные полиэтиленгликолем.

2.1.3. Макрогетерогенные двухфазные системы.

2.1.3.1. Системы жидкость-жидкость.

2.1.3.2. Системы жидкость-твёрдая фаза.

2.1.4. Закрепление фермента.

2.2. Липолитические ферменты, их значение, применение.

2.2.1. Липолитические ферменты.

2.2.2. Применение липолш-ических ферментов.---------.

2.2.2.1. Применение липаз для модификации жиров и масел.

2.2.3. Липазы в органическом синтезе.

2.2.3.1. Липазы, модифицированные полиэтиленгликолем.

2.2.3.2. Иммобилизованные липазы.

2. 2.3.3. Липазы в сверхкритических жидкостях и газовой фазе.

2.2.3.4. Разделение рацемических спиртов и кислот.

3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

3.1. Материалы.

3.1.1. Ферментный препарат.

3.1.2. Субстраты.

3.1.3. Индукторы биосинтеза липазы дрожжами Sac. lipolytica 35.

3.1.4. Детергенты.

3.1.5. Растворители и другие реагенты.

3.2. Методы исследования.

3.2.1. Дополнительная очистка субстрата.

3.2.3. Определение влажности ферментного образца.

3.2.4. Определение кислотного числа масла.

3.2.5. Включение фермента в мицеллы и определение ли-политической активности.

3.2.6. Гидролиз касторового масла панкреатической липазой в мицеллярных системах.

3.2.7. Переэтерификация касторового масла.

3.2.8. Хроматография продуктов переэтерификации касторового масла деканолом.

3.2. 9. Получение и свойства липазы дрожжей

ЭасжЬагамусзд^з Нро1уЫса 35.

3.2.10. Оптимизация среды выращивания дрожжей 8асс1шгшуссрз1г Иро1уЪ1са 35.

3.2.11. Вцделение липазы из культуральной жидкости.

3.2.12. Определение активности липаз.

3.2.13. Гидролиз и переэтерификация касторового масла липазой выделенной из культуральной жидкости дрожжей 8ас«Ьагояусорз£8 Нро1уЫса 35.

3.2.14. Синтез эфиров деканола и жирных кислот с помощью панкреатической липазы.

3.2.15. Хроматография полученного продукта при проведении синтеза эфиров деканола с помощью панкреатической липазы.

3. 2.16. Синтез эфиров цетилового спирта и жирных кислот с помощью панкреатической липазы.

3.2.17. Переэтерификация рапсового масла цетиловьм спиртом.

3. 2.18. Хроматография полученного продукта при проведении синтеза эфиров цетилового спирта с помощью панкреатической липазы.

3.2.19. Синтез эфиров ПЭГ 400 и мирных кислот с помощью панкреатической липазы.

3.2.20. Хроматография полученного продукта при проведении синтеза эфиров ПЭГ 400 с помощью панкреатической липазы.

3.2.21. ИК- спектроскопия полученных образцов.

3.2.22. Реакция с бромтимоловым синим.

3.2.23. Обработка полученных результатов.

4. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

4.1. ГИДРОЛИЗ ОЛИВКОВОГО МАСЛА ПАНКРЕАТИЧЕСКОЙ ЛИПАЗОЙ. МИЦЕЛЛЯРНЫЕ СИСТЕМЫ.

4.2. ПОЛУЧЕНИЕ И СВОЙСТВА ЛИПАЗЫ ДРОЛОЙЕЙ SACCHAROMYCCFSIS LIPOLYTICA 35.

4.3. СИНТЕЗ ЭФИРОВ ДЕЦИЛОВОГО СПИРТА И ЛИРНЫХ КИСЛОТ В ОРГАНИЧЕСКИХ СРЕДАХ С ПОМОЩЬЮ ПАНКРЕАТИЧЕСКОЙ ЛИПАЗЫ.

4.3.1. Синтез дециллаурата с помощью панкреатической липазы в неводных средах.

4.3.2. Синтез децилпальмитата в неводных средах с помощью панкреатичееой липазы.

4.3.3. Исследование синтеза децилдеканоата и сравнительный анализ синтеза эфиров деканола в гексане.

4.4. СИНТЕЗ ЭФИРОВ ЦЕТИЛ0В0Г0 СПИРТА И ШРНЫХ

КИСЛОТ С ПОМОЦЬЮ ПАНКРЕАТИЧЕСКОЙ ЛИПАЗЫ.

4.5. СИНТЕЗ ЭФИРОВ ЖИРНЫХ КИСЛОТ И ПОЛИЭТИЛЕНГЛИКОЛЯ

С ПОМОЦЬЮ ПАНКРЕАТИЧЕСКОЙ ЛИПАЗЫ.

4.6. ТЕХНОЛОГИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ПОЛУЧЕНИЯ ЗАМЕНИТЕЛЕЙ ПРИРОДНЫХ ВОСКОВ С ПОМОЩЬЮ ПАНКРЕАТИЧЕСКОЙ ЛИПАЗЫ

НА ПРИМЕРЕ ЦЕТИЛЛАУРАТА).

ВЫВОДЫ. -.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Ферментативные процессы, осуществляемые панкреатической липазой в неводных средах»

Актуальность работы. Одним из перспективных направлений биотехнологии является применение биокатализа в тонком органическом синтезе.

Уникальная специфичность и стереоспецифичность действия ферментов, возможность проведения процесса в мягких условиях с высокой скоростью при использовании незначительных количеств катализатора, практическое отсутствие побочных реакций - всё это делает биокаталитические процессы чрезвычайно привлекательными и перспективными с технологической точки зрения.

В последнее время всё большее внимание уделяется биокаталитическим процессам в неводных средах. Осуществление биокаталитических процессов в неводных средах позволяет значительно расширить области применения биокатализа. Одной из перспективных областей применения неводного биокатализа является проведение реакций гидролиза сложных эфиров природных жиров и обратных процессов этерификации.

Сложные эфиры, карбоновые кислоты и спирты - эти три большие группы органических соединений нашли широкое применение как в синтезе других более сложных веществ, так и в фармацевтической, косметической, пищевой и многих других отраслях промышленности. Этим объясняется интерес к исследованию ферментативных реакций, направленных на синтез сложных эфиров или их гидролиз. Существенным фактором является доступность гидролитических ферментов и простота их использования. Значительная устойчивость липаз по отношению к многим органическим растворителям позволяет им осуществлять реакции получения и модификации органических соединений, нерастворимых в водной среде, в мягких условиях с высоким выходом.

Цель работы. Изучение гидролитических и синтетазных реакций, осуществляемых панкреатической липазой в неводных средах, и разработка принципиальной технологической схемы получения заменителей природных восков.

Научная новизна. Показано, что в системе обращенных мицелл панкреатическая и микробная липазы (липаза дрожжей ЗассЬаготусорз 1 б Про1уИса 35) гидролизуют оливковое и касторовое масла в 2-3.5 раза эффективнее, чем в водной среде. Исследована гидролитическая активность липаз в ми-целлярных системах в зависимости от природы среды и поверхностно-активного вещества (ПАВ).

Показана возможность осуществления реакций этерифика-ции и переэтерификации в системе твёрдая фаза: жидкость с помощью панкреатической липазы в неводных средах.

Биокатализом в неводных средах получены сложные эфиры жирных кислот (ЖК) и децилового спирта путем как прямой этерификации, так и переэтерификацией касторового масла де-канолом.

С помощью панкреатической липазы получены сложные эфиры ЖК и цетилового спирта , путем как прямой этерификации, так и переэтерификацией рапсового масла.

Синтезированы эфиры ЖК и полиэтиленгликоля 400 с помощью панкреатической липазы в органической среде.

Практическая значимость. Показана возможность осуществления гидролиза природных масел путём биокатализа в неводных средах в мягких условиях (Т=25°С, отсутствие повышенного давления и агрессивных агентов), что после дальнейших технологических проработок может быть использовано в промышленности.

В результате исследования были установлены оптимальные условия проведения процесса этерификации с помощью панкреатической липазы с получением синтетических восков,имеющих большое практическое значение в различных отраслях промышленности. Предложена и реализована в лабораторном масштабе технологическая схема получения зфиров с помощью панкреатической липазы (на примере получения цетиллаурата).

Апробация работы Результаты работы были доложены на ежегодных отчётных конференциях КГТУ (1998-1999), на IX Международной конференции молодых учёных "Синтез, исследование свойств, модификация и переработка высокомолекулярных соединений" (Казань, 1998), на второй Межрегиональной конференции " Пищевая промышленность-2000" (Казань,1998 г),на конференции "Пищевые технологии" (Казань,1998 г), на У-той международной конференции " Методы кибернетики химико-технологических процессов" ( Казань, 1999 г.).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 10 работ.

Объём и структура работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания объектов и методов исследования, результатов и их обсуждения (6 глав), выводов и библиографического указателя (211 наименований источников). Работа изложена на 218 страницах машинописного текста, включает в себя 18 таблиц и 52 рисунка.

Заключение диссертации по теме «Биотехнология», Зиновьева, Мария Евгеньевна

ВЫВОДЫ

1. Проведено сравнительное изучение гидролиза оливкового масла панкреатической липазой в водной среде и в обращенных мицеллах АОТ в органических средах (пентане, гекса-не, гептане, октане). Показано, что липаза в органической среде способна расщеплять оливковое масло в 2-3. 5 раза эффективнее, чем в водной среде. Наилучшим из исследованных растворителей является пентан. Изучены субстратная зависимость и зависимость активности фермента от природы поверхностно- активного вещества на основе которого готовили ми-целлярную систему. Наилучшим из исследованных поверхностно-активных веществ является АОТ. Определены кинетические параметры реакции.

2. Показано,что и микробная липаза из дрожжей оассЬаготусорз 1 б Про1уиса 35, и панкреатическая липаза способны к гидролизу касторового масла, находясь в обращенных мицеллах АОТ в органической среде. Гидролиз протекает в органической среде в 2-3 раза эффективнее, чем в водной среде. Обе липазы, кроме гидролиза, способны осуществлять перезтерификацию касторового масла, находясь в системе твердая фаза : жидкость, в результате чего получается воекоподобный эфир - ценный продукт для косметической и фармацевтической промышленности.

3. Панкреатическая липаза способна к синтезу эфиров деканола и Ж в органических средах, как в мицеллярной

- 190 системе, так и в системе твёрдая фаза: жидкость.

Оптимальные условия для синтеза эфиров деканола и Ж (каприновой, лауриновой и пальмитиновой) следующие: среда реакции гексан, температура проведения процесса 25°С,содержание воды в системе не более 0.2%, соотношение кислота: спирт 1:1.5, отсутствие перемешивания.

4. Показана возможность получения эфиров цетилового спирта и Ж с помощью панкреатической липазы в системе твёрдая фаза: жидкость, используя как реакцию прямой зтери-фикации, так и перезтерификацию. Оптимальными условиями для проведения реакции этерификации являются: среда реакции -гексан; соотношение кислота: спирт - 1:2; температура 20-30Ь; проведение реакции целесообразно в течении 24 часов.

Перезтерификация протекает в среде гексана при температуре - 22-32"С,содержание цетилового спирта в системе 1:2 (на 1 М масла - 2 М спирта).

5. Синтезированы эфиры Ж и полиэтиленгликоля 400 с помощью панкреатической липазы в системе твёрдая фаза: жидкость: среда для проведения реакции - бензол+гексан в соотношении 2:3, соотношение кислота: спирт 1:1. 8, оптимальная температура 25вС, отсутствие перемешивания.

6. Предложена и реализована в лабораторном масштабе технологическая схема проведения процесса этерификации с помощью панкреатической липазы. Полученный продукт по своим физико-химическим константам близок к показателям спермацета.

Список литературы диссертационного исследования кандидат технических наук Зиновьева, Мария Евгеньевна, 1999 год

1. Халгаш Я. Биокатализаторы в органическом синтезе. Е: Мир, 1991. - 204 с.

2. Диксон Е , Уэбб Э. Ферменты. Т. 1. - Е : Мир, 1982. - С. 332.

3. Самарцев Е А., Беляков Е В. , Кеетнер А. Е Применение иммобилизованных ферментов в промышленных процессах. -Е , 1984. 60 с.

4. Godfrey Т. , ReicheIt J. Industrial Enzymology:

5. The application of enzymes in industry. The Nature Press, Macmillan UK, 1983. - P. 20-25.

6. Schindler J. , Schmid R. D. Fragrance or aroma chemical microbial synthesis and enzymatic transformation a review // Process Biochem. - 1982. - V. 17, N 5. -P. 2-8.

7. Linko Matti. Enzymes in the fore front of food and feed industries // Food Biotechnol. 1989. - V. 3, N 5. P. 1-9.

8. Биотехнология. Принципы и применение. / Под ред. И. Хиг-гинса, Д. Бреста, Д. Джонса. Е: Мир, 1988. - 480 с.

9. Семёнов А. И. , Титов Е И., Мартинек К. Ферменты в препаративном органическом синтезе. Проблема повышения выхода целевого продукта // Биотехнология и химия. 1989. Т. 1, N 1. - С. 14-18.

10. Семёнов А. И. , Титов Е И. , Мартинек К. Ферменты в препаративном органическом синтезе. Проблема повышения- 192 выхода целевого продукта // Биотехнология и химия. -1989. Т. 1, N 1. - С. 12-13.

11. Zaks А. , Emple М. , Cross A. Potentially commercial enzymatic processes for the fine and specialty chemical industries // Trends Biotechnol. 1988. -V. 6, N 11. - P. 272-275.

12. Porter R. , Clark S. Enzymes in organic synthesis. London, Pitman Publishers. , 1985. - 120 p.

13. Klibanov A. M. Unconventional catalytic properties of conventional enzymes: application in organic chemistry // Basic Life Sci. 1983. - V. 25. - P. 497-518.

14. Noworyta A., Bryjak J. Process of penicillin G hydrolysis catalyzed by penicillinacylase immobilized on acrylic carrier // Bioprocess Eng. 1993. - V. 9, N 6. - P. 271-275.

15. Robert S. M. Use of enzymes as catalysts to promote key transformations in organic synthesis // Phil. Trans. Roy Soc. 1989. - V. 324, N 1224. - P. 577-587.

16. Biocatalysts in Organic Synthesis. Eds J. Trampes, H. S. Plas, Vander P. Linko. Amsterdam, Elsevier, 1985. - 200 p.

17. Carrea Giacomo, Ottolina Gianluca, Riva Sergio. Role of solvent in the control of enzyme selectivity in organic media // Trends Biotechnol. 1995. - V. 13,1. N 2. P. 63-70.

18. Анисимова В. В. , Ягорекая Е. И., Филлипова И. Ю. и др. Катализируемый пепсином синтез пептидов в органических растворителях // Биоорганическая химия. 1994.1. Т. 20, N 3. С. 316.- 193

19. Cassells John M., Hailing Peter J. Protease-catalyzed peptide synthesis in low-water organic two-phase systems and problems affecting it // Biotechnol. and Bioeng. 1989. - V. 33, N 11. - P. 1489-1494.

20. Seip John E. , Fager Susan K. , Gavagan John E. et al. Biocatalytic production of glyoxylic acid // J. Org. Chem. 1993. - V. 58, N 8. - P. 2253-2259.

21. Каменская Э. 0. 5 Саподынская И. К. , Левашов А. В. Зависимость иммобилизованного а^химотрипсина в водно-органических смесях от композиции микроокружения (жёсткой матрицы и гидратируюших добавок) // Биоорганическая химия. 1995. - Т. 21, N 11. - С. 825.

22. Parmar V. S. International symposium on enzymes in organic synthesis // Pure and Appl. Chem. 1992.1. V. 64, N 8. P. 82-94.

23. Buhler M. , Wandrey C. Oleochemicals by biochemical reactions // Fett Wiss. Technol. 1992. - V. 94, N 3. - P. 82-94.

24. Claon Paul A. , Akoh Casimir C. Lipase catalyzed synthesis of terpene esters by transesterification in n-hexane // Biotechnol. Lett. - 1994. - V. 16, N 3. -P. 235-240.

25. Brunow Gosta. Enzymatic synthesis in organic solvents // Kemia-Kemi. 1989. - V. 16, N 3. - P. 247-249.

26. Klibanov A. M. Enzymatic catalysis in anhydrous organic solvents // Trends Biochem. Sci. 1989. - V. 14, N 4. - P. 141-144.

27. Miethe P. , Gruber R. , Voss H. Enzymes in lyotropic lyquid crystal a new method of bioconversion in- 194 non-aqueous media // Biotechnol. Lett. 1989. - V. 11, N 7. - P. 449-454.

28. Yee Lisa N. , Akoh Casimir С. , Phillips Robert S. Pseudomonas sp. lipase-catalyzed synthesis of geranyl esters by transester i ficat i on // J. Amer. Oil. Chem. Soc. 1995. - V. 72, N 11. - P. 1407-1408.

29. Mizuno Masao, Tsuji Masao, Kitamura Takarori, Nakahara Humio. Application of biotechnology of organic synthesis // J. Soc. Fiber Sei. and Technol. 1987. -V. 43, N 9. - P. 365.

30. Rupley J. A. , Gratton E. , Carer i G. Enzymes in organic media // Trends Biochem. Sei. 1983. - V. 8. - P. 18-22.

31. Мартинек К , Клячко E Л. , Левашов A. В. и др. Препаративный ферментативный синтез в двухфазных водно-органических системах // Биоорганическая химия. 1977. -Т. 3, N 5. - С. 696.

32. Клибанов А. К , Семёнов А. Е , Самохин Г. Е , Мартинек К. Ферментативные реакции в водно-органических смесях: критерий для выбора оптимального органического растворителя // Биоорганическая химия. 1978. - Т. 4, N 1. - С. 82-87.

33. Клячко Е Л. , Богданова Е Г. , Левашов А. В. и др. Ферментативный катализ в коллоидном растворе глицерина в органическом растворителе // ДАН СССР. 1987. - Т. 297, N 2. - С. 483-487.

34. Хмельницкий Ю. Л., Левашов А. В., Клячко Е Л., Мартинек К Конструирование биокаталитических систем в органических растворителях с малым содержанием воды // Био- 195 технология. 1988. - T. 4, N 3. - С. 292-294.

35. Graille J. , Pina M. Bioorganic synthesis of gluceride standarts // Fat. Sei. 1983. - Proc. 16th. ISF Congr. Budapest, 4-7 Oct. 1983. - P. 285-294.

36. Анисимова В. В. , Ясногорская Е. Е , Филлипова И. Ю. и др. Катализируемый пепсином синтез пептидов в органических растворителях // Биоорганическая химия. 1994. - Т. 20, N 3. - С. 316.

37. Bufler L. G. , Reithel F.J. Bioorganic synthesis // Arch. Biochem. Biophys. 1977. - V. 178. - P. 43-50.

38. Биотехнология: Учеб. пособие для вузов. Кн. 8: Инженерная энзимология / И. В. Бе резин, A.A. Клёсов,

39. B. К. Швядае и др. М. : Высш. шк. , 1987. - С. 64.

40. Хургин Ю. И. , Росляков В. Я. , Азизов Ю. М. и др. Эстераз-ная активность химотрипсина в диметилсульфоксиде // Известия АН СССР. Серия: Химическая. 1968. - Т. 12.1. C. 2840.

41. Намёткин С. Е , Дадаян А. К. , Кабанов А. В., Левашов А. В. Модуляция мембраноактивности фермента в системе обращенных мицелл изменением pH среды (на примере щелочной фосфатазы) // Биоорганическая химия. 1992. - Т. 18, N 6. - С. 777.

42. Laane Colja. Bi©technological application of reversed micelles // Rapp. Ingenjors-veterskapsacad. -1988. N 346. - P. 36-38.

43. Пшежецкий А. В. , Клячко К Л , Левашов А. В. и др. Роль липидного полиморфизма в регуляции мембранных ферментов. Лакказа в системе ПАВ вода - органический растворитель // Биологические мембраны. - 1987. - Т. 4, N 8. - С. 1209-1215.

44. Левашов А. В., Клячко Е JL , Пшежецкий А. В. и др. Суперактивность кислой фосфатазы в обращенных мицеллах ПАВ в органических растворителях // ДАН СССР. 1986. - Т. 289, N 5. - С. 1271-1273.

45. Gajjar L. , Dubey R. S. , Srivastava R. С. Activation and stabilization of enzymes entrapped into reversed micelles: studies on hydrolyzing enzymes protease and a-amylase // Appl. Biochem. and Biotechnol. A. -1994. - V. 49, N 2. - P. 101-112.

46. PiresEJ. , Cabral J. M. S. Thermal stability of a Desulfovibriogigas periplasmic hydrogenase in reverse micelles // Appl. Biochem. and Biotechnol. A. 1994. - V. 48, N 3. - P. 137-147.

47. Vicente Laura C. , Aines-Barros Raquel. , Empis Jose M. A. Stability and proteolytic activity of papain in reverse micellar and aqeous media: A kinetic and spectroscopic study // J. Chem. Technol. and Biotechnol. 1994. - V 60, N 3. - P. 291- 297.

48. Safari Mohammad, Kerasha Selim, Lambour-Sain Lauranse, Sheppard John D. Interesterification of butter fat by lipase from Rhizopus niveum in reverse micellar- 197 systems // Biosci., Biotechnol. and Biochem. 1994. -V 58, N 9. - P. 1553.

49. O'Connor Charmian J. , Cleverly Douglas R. Fourier transform infrared assay of bile salt-stimulated lipase activity in reversed micelles // J. Chem. Technol. and Biotechnol. 1994. - V. 61, N 3. -P. 209-214.

50. Rao A. Madhusudham, John Vijay T. , Gonzalez Richard D. et al. Catalytic and interfacial aspects of enzymatic polymer synthesis in reversed micellar systems // Biotechnol. and Bioeng. 1993. - V. 41, N 5. - P. 531-540.

51. Кост 0. A., Орт Т. A., Никольская И. И и др. Ангиотен-зинпревращающий фермент в системе обращенных мицелл АОТ в октане, взаимодействие с матрицей // Биоорганическая ХИМИЯ. 1995. - Т. 21, N 6. - С. 403.

52. Арташов Д. К. , Гевантмахер С. В. , Вагина О. И. и др. Очистка и свойства липазы из PeniciIlium species в водной среде и обращенных мицеллах в бензоле // Биохимия. 1994. - Т. 59, N 3. - С. 425-433.

53. Bro Roque, Sanchez-Ferrer Alvaro, Garcia-Carmona Francisco. Characteristics of tyrosinase in AOT-isooctane reverse micelles // Biotechnol. and Bioeng. 1989. - V. 34, N 3. - P. 304-308.

54. Matzke S. F. , Greagh A. L. , Haynes C. A. et al. Mechanisms of protein solubilization in reverse micelles // Biotechnol. and Bioeng. 1992. - V. 40, N 1. - P. 91-102.

55. Flether Paul D. I. , Freedman Robert B. , Robinson Brian- 198

56. H. et al. Lipase-catalysed ester synthesis in oil-continuous microemulsions // Biochem. et Biophys. acta: Protein Struct, and Ktol. Enzyme. 1987. - V. 912, N 2. - P. 278-282.

57. Stamatic H. , Xerak's A., Dimitriadis E. , Kolisis F.N. Catalytic behaviour of Pseudomonas ceracia lipase in w/o microemylsions // Biotechnol. and Bioeng. 1995. - V. 45, N 1. P. 33-41.

58. Luisi P. L. , Wolf R. Solution Behaviour of Surfactants. Teoretical and Apllied Aspects. N.-Y. Plenum Press., 1982. - 220 p.

59. Мартинек К , Левашов А. В. , Хмельницкий Ю. JL и др. Физико-химические проблемы ферментативного катализа. М.: Наука, 1989. С. 18-28.

60. Беляева Е. Е , Бровко А. Ю. , Угарова Е I. и др. Регуляция каталитической активности люциферазы светляков в системе Бридж 96 октан - вода // ДАН СССР. - 1983. -Т. 273, N 2. - С. 494-496.

61. Мартинек К. , Левашов А. В., Клячко ЕЛ и др. Мицелляр-ная знзимология // Биологические мембраны. 1985.1. Т. 2, N 7. С. 669-695.

62. Семёнов А. Е , Мартинек К , Березин Е В. Ферментативный синтез в двухфазных водноорганических средах II. Сдвигхимического равновесия // Биоорганическая химия. Т. 6, N 4. - С. 600.

63. Barsi Mahiran. Synthesis of fatty esters by polyethyleneglycol-modified lipase // J. Chem. Technol. and Biotechnol. 1995. - V. 64, N 1. - P. 10-16.

64. Vemura Takeshi, Furukawa Makoto, Kodera Yoh et al. Polyethylene-glycol-modified lipase catalyzed assymmetric alcoholysis of -decalactone in n-decanol // Biotechnol. Lett. 1995. - V. 17, N 1. - P. 61-66.

65. Mizatahi F. , Yabuki S. , Lijima S. Amperometic glucose-sersing electrode based on carbon paste containing poly(ethyleneglycol)-modified gluco-seoxydase and cobalt octaethoxyphthalocyanine // Anal. Chem. acta. 1995. - V. 300, N 1. - P. 5964.

66. Dunnill P., Lilly M. D. Enzymic conversion of steroids. Brit. Pat. 1555004. 1979.

67. Cremonesi P., Carre A. G. , Spoffoletti G. , Antonini G. Enzymatic dehydrogenation of steroids by b-hydroxystегоid dehydrogenase in two-phase system // Arch. Biochem. Biophys. 1973. - V. 159. - P. 7-10.

68. Аринбасарова А. Ю. , Кощенко К А. Использование водно-органических систем в знзиматической трансформации стероидов // Прикладная биохимия и микробиология.- 200 1984. T. 19. N 1. - G. 20-29.

69. Lozano Pedro. , Diego Teresa. , Iborra Jose L. Effect of water-mi se i'ble aprotic solvents on kyotoprhin synthesis catalysed by immobilized archymotrypsin // Biotechnol. Lett. 1995. - V. 17, N 6. - P. 603-608.

70. Nagayasu Takeshi, Miyanaga Masamitsu, Tanaka Takaaki et al. Synthesis of aspartame precursor with immobilized thermolysin in tertamyl alcohol // Biotechnol. and Bioeng. 1994. - V. 43, N 11. - P. 1118-1123.

71. Safari M. , Kermasha S. , Pabai F. Interester if i cat ion of butter fat by lipase from Mucor miehei in organic solvent media // Food Biotechnol. 1993. - V. 7, N 3. P. 265-273.

72. Gutman Arie L. , Meyer Elazar, Kalerin Evgeny et al. Enzymatic resolution of racemic amines in a continuous reactor in organic solvents // Biotechnol. and Bioeng. 1992. - V. 40, N 7. - P. 760-767.- 201

73. Blanco R. M. , Gulsan J. M., Hailing P.J. Agarose-chymotrypsin as a catalyst for peptide and arninoacid ester synthesis in organic media // Biotechnol. Lett. 1989. - V. 11, N 11. - P. 1255.

74. Knez Z., Leitgeb M Membrane reactors for esters synthesis // Chem. and Biochem. Eng. Quart. 1988. -V. 2, N 4. - P. 233-234.

75. Stroh William H. Trends in use of industrial bioprocessing enzymes for the 21st century // Genet. Eng. News. 1994. - V. 14, N 16. - P. 10-12.

76. Zaks A., Russell A.J. Enzymes in organic solvents: properties and application // J. Biotechnol. 1988. -V. 8, N 4. - P. 259-269.

77. Langrand G. , Bciratti J. , Buono G. et al. Lipase catalyzed reactions and strategy for alcohol resolution // Tetrahedron. Lett. 1986. - V 27. - P. 29-32.

78. Zaks A., Klibanov A. M. Enzymatic Catalysis in Organic Media at 100 С // Science. 1984. - V. 224. - P. 1249-1251.

79. Kosugi Yoshitsugu. Синтез и гидролиз масел и жиров с помощью иммобилизованной липазы // Repf. Ferment. Res. Inst. 1992. - N 75. - P. 1-13.- 202

80. Ergan F. , Tram E , Andre G. Solvent free triglyceride synthesis using Lipozyme IM 20 // Biotechnol. Lett. -1988. V. 10, N 9. - P. 629-634.

81. Omar Ibrahim Che, Nishio Naomichi, Nagai Shiro. The role of water on the equilibrium of esterification by immobilized lipase packed-bed-column reactor // Biotechnol. Lett. 1988. - V. 10, N 11. - P. 799-809.

82. Yamane Tsuneo. Enzyme technology for the lipids industry: an engineering „ overview // J. Amer. Oil Chem. Soc. 1987. - V. 64, N 12. - P. 1657-1662.

83. Shimada Yuji, Sugihara Akio, Nakano Hirofumi et al. Purification of docosahexaenoic acid by selective esterification of fatty acid from tuna oil with Rhizopus delemar lipase // J. Amer. Oil Chem. Soc. -1997. V. 74, N 2. - P. 97-101.

84. Безбородов A. E Биотехнология продуктов микробного синтеза. Е: Агропромиздат, 1991. - С. 134-137.

85. Lobazzewsi J. , Wojcik А. , Blaszozynska Т. Immobilization of enzymes on porous silica supports // Acta Biotechnol. 1989. - V. 9, N 3. - P. 239-246.

86. Negishi S. , Sato S. , Mukataka S. , Takahashi J. Utilization of powdeced pig bone as a support for immobilization // J. Ferment, and Bioeng. 1989. - V. 67, N 5. - P. 350-355.

87. Зиновьева E E., Калачёва E В. , Гамаюрова В. С. Методы иммобилизации глюкозоизомеразы // Биотехнология. -1997. N 6. - С. 47-50.

88. Тривен Майкл Д. Иммобилизованные ферменты. Е: Мир, 1983. - 213 с.- 203

89. Муромец В. Е , Наградова И. К. Иммобилизованные ферменты. М.: Наука, 1984. - 208 с.

90. Брокерхоф X , Дженсен Р. Липолитичеекие ферменты. М.: Мир, 1978. - С. 9-20.

91. Глазунова JL М. , Гончаров Ю. И. , Минина В. С. Липазы микроорганизмов. Обзорная информация. Серия Y. Получение и применение ферментов, витаминов, аминокислот, премиксов. М., 1984. - 36 с.

92. Фомина JL А. В сборнике: Исследования в области обработки, методов контроля пушно-мехового сырья. М.,1980. С. 3-7.

93. Kottwitz В. , Upadek Н. , Carrer G. Application and benefits of enzymes in detergents // Riv. ital. sostanze grasse. 1995. - V. 72, N 1. - p. 29-33.

94. Щёлокова С. С. Применение липолактина в птицеводстве // Узбекский биологический журнал. 1982. - N 1. - С. 13-14.

95. Syed Rahmatullah М. S. К. , Shukla V. К. S. , Mukherjee К. D. Enrichment of y-linolenic acid from evening primroje oil and borage oil via lipase-catalyzed hydrolysis // J. Amer. Oil Chem. Soc. 1994. - V. 71, N 6. - P. 569-571.

96. Hayes Douglas G. , Kleiman Robert. The isolation and recovery of fatty acids with дб-unsaturation from meadowtoam oil by lipase-catalyzed hydrolysis and esterification // J. Amer. Oil Chem. Soc. 1993. - V. 70, N 6. - P. 555-560.

97. Breivik Harald, Haradsson Gudmundur G., Kristinsson Bjorn. Preparation of highly eicosapentaenoic acid anddocosahexaenoic acid // J. Amer. Oil Chem. Soc. 1997. V. 74, N 11. P. 1425-1429.

98. Miao Dexun, Yuchi Li, Li Shuben, Cao Shugui. Исследование гидролиза кокосового масла в присутствии липазы в системе органический растворитель вода // Fenzicuihua = J. Mol. Catal. (China). - 1994. - V. 8, N 6. - P. 458-461.

99. Virto M. D. Enzymic hydrolysis of animal fats in organic solvent of temperature below thein metting point // J. Amer. Oil Chem. Soc. 1991. - V. 68, N 5.- P. 324-327.

100. MacKenzie Andrew D. , Stevenson David E. Modification of the nutritional properties of fats using lipase catalysed directed interesterification // Biotechnol. Lett. 1995. - V. 17, N 4. - P. 383-388.

101. Yang Dougsoo, Rhee Joon Shick. Continuous hydrolysis of olive oil by immobilised lipase in organic solvent // Biotechnol. and Bioeng. 1992. - V. 40, N 6. - P. 748-752.

102. Gunstone Frank D. Chemical reactions of oils and fa,ts // Biochem. Soc. Trans. 1989. - V. 17, N 6. - P. 1141-1142.

103. McNeill Gerald P., Sonnet Philip E. Isolation of erucic acid from rapeseed oil by lipase-catalyzed hydrolysis // J. Amer. Oil Chem. Soc. 1995. - V. 72, N 2. - P. 213-218.

104. Jensen R. G. Studies of the fatty acid specificity of the lipase from Geotrichum candidum // Lipids. 1974.- V. 9, N 3. P. 149-157.- 205

105. Maprae A. R., Rat ledge G. , Dawson P. , Rattray J. Biotechnology for the Oils and Fatts Industry // Amer. Oil Chem. Soc. Champaign. 1985. - V. 3, N 2. - P. 189-198.

106. Muderhwa J. R , Pina M., Graille J. Aptitude a'la transesterification de quelques lipases régi ose lectives 1-3. III. Stabilité de la regioselective 1-3 // Oleagineux. 1988. - V. 43, N12. P. 465-470.

107. Kato P. , Huotar H. , Antita M. Pseudomonas fluoresceins lipase-catalysed interesterification of butter fat // Fett. Wiss. Technol. 1989. - V. 91, N 7. - P. 276-281.

108. Cho France, De Man John M. Lipase catalyzed interesterification of fats and oils from palm and Canola origin // Int. News Fats Oil and Relat Mater. -1991. V. 2, N 4. - P. 318.

109. Hoang Kuan-Hsiang, Akoh Casimir C. Enzymatic synthesis of structured lipids. Transeserification of triolein and caprylis acid ethyl esters // J. Amer. Oil Chem. Soc. 1996. V. 72, N 2. - P. 245-250.

110. Jachmanian Ivan, Muknerjee Kumar D. Germinating rapeseed as biocatalyst : hydrolysis of oil containing common and unusual fatty acids // Scientifor. 1995. - V. 19, N 4. - P. 2997-3000.

111. Gioilli L. A. , Pitombo R. N. M. , Vitolo ML, et al. Enzymatic hydrolysis of oils and fats // Riv. ital. sostanze grasse. 1995. - V. 72, N 3. - P. 113-117.

112. Pedersen S. B. , Holmer G. Studies of the fatty acid specificity of the lipase from Rhizomucor miehei Toward 20: In-9, 20: 5n-3, 22: ln-9, 22: 6n-3 // J. Amer. Oil Chem. Soc. 1995. - V. 72, N 2. - P. 239-243.

113. Haas Michael J., Scott Karen, Cichowicz David, Jun Wang. The applications of lipases to hydrolyze crude industrial lipid mixtures // INFORM. Int. News Fats, Oil and Relat Mater. 1994. - V. 5, N 4. - P. 541.

114. Valenzueta Alfonso, Nieto Susana. Biotechnology of lipids : The use of lipase for the structural modification of fats and oils // Grasas y aceifes. 1994. V. 5, N 5. - P. 337-343.

115. Myrnes Bjornar, Barstad Harald, Olsen Ragnar L. , Elvevoll Edel 0. Solvent-free enzymatic glycerolysis of marine oil // J. Amer. Oil Chem. Soc. 1995. - ¥. 72, N 11. - P. 1339-1344.

116. Hayes Douglas G., Kleiman Robert. Recovery of hydroxy fatty acids from lesguerella oil with lipases // J.

117. Ainer. Oil Chem. Soc. 1992. - V. 69, N 10. - P. 982-985.

118. Sridhar R. , Lakshminarayana G. Incorporation of eicosapentaenoic and docosahexaenoic acids into ground not oil by lipase catalyzed ester interchange // J. Amer. Oil Chem. Soc. 1992. - V. 69, N 10. - P. 1041-1042.

119. Hills M J. , Kiewitt J., Mukherjee K. D. Enzymatic fractionation of fatty acid : enrichment of v-linolenic acid and docosaehaxaenoic acid by selective esterifications catalyzed by lipases // J. Amer. Oil Chem. Soc. 1990. - V. 67, N 9. - P. 561-664.

120. Macrao A. R. , Radley F. B. , Chandler J. C. Transesterification // Патент N 8920715. Заявл. 19.09.89. - Опубл. 10.09.91. - Великобритания, МКИ А 23 Д 7/00, 7/02.

121. Lie Ken Jie, Marcel S. F. , Syed Rahmatullah M. S. K. Lipase-catalyzed reactions involving thia fatty acid and ester derivatives // J. Amer. Oil Chem. Soc. 1995. V. 72, N 11. - P. 1381.

122. Razafindralambo Hary, Blecket Christophe, Lognay Georges et al. Improvement of enzymatic synthesis yields of flavour acetates: The example of the isoamylacetate // Biotechnol. Lett. 1994. - V. 16, N 3. - P. 247-250.

123. Rees G. D. , Jenta T. R. J. , Nascimento M. G. et al. Use of water-in-oil microemulsions and gelatin-containing microemulsion-based gels for lipase-catalysed ester- 208 synthesis in organic solvents // Indian J. Chem. B. -1993. V. 32, N 1. - P. 30-34.

124. Langrand G. , Triantaphylides C. , Barrati I. Lipase catalyzed formation of flavour esters // Biotechnol. Lett. 1988. - V. 10, N 8. - P. 549-554.

125. Catfield I. L. The enzymatic synthesis of esters in nonaqueous systems // Ann. N. Y. Acad. Sci. 1986. -V. 434. - P. 569-572.

126. Yee Lisa N. , Akoh Casimir C. , Phillips Robert S. Lipase PS-catalyzed transesterification of citronellyl butyrate and geranyl caproate effect of reaction parameters // J. Amer. Oil Chem. Soc. 1997. - V. 74, N 3. - P. 255-260.

127. Yee Lisa N. , Akoh Casimir C. Enzymatic synthesis of geranyl acetate by transesterification with acetic anhydride as acyl donor // J. Amer. Oil Chem. Soc. -1996. V. 73, N 11. - P. 1374-1384.

128. Yee Lisa N. , Akoh Casimir C. , Phillips Robert S. Pseudomonas sp. lipase catalyzed synthesis of geranyl esters by transesterification // J. Amer. Oil Chem. Soc. 1995. - V. 72, N 11. - P. 1407-1408.

129. Claon Paul a , Akoh Casimir C. Enzymatic synthesis of geranyl acetate in n-hexane with Candida antarctica lipase // J. Amer. Oil Chem. Soc. 1994. - V. 71, N 6. - P. 575-778.

130. Paiva Ana L. , Malcata F. Xavier. Process integration involving lipase-catalyzed ester synthesis reactions // Biotechnol. Techn. 1994. - V. 8, N 9. - P. 629-634.- 209

131. Welsh Frank W. , William Ross E., Dawson Kathrun H. Lipase mediated synthesis of low molecular weight flavour esters // J. Food Sci. 1990. - V. 55, N 6. -P. 1679-1682.

132. Trani M. , Ergan F. , Andre G. Lipase-catalyzed production of wax esters // J. Amer. Oil Chem. Soc. -1991. V. 68, N 1. - P. 20-22.

133. Isono Yasuyuki, Natoetani Hiroshi, Nakajima Mitsutoshi. Wax esters synthesis in a membrane reactor with lipase-surfactant complex in hexane // J. Amer. Oil Chem. Soc. 1995. - V. 75, N 8. - P. 887-890.

134. Hailing Peter J. Lipase catalyzed reactor in low water organic media effects of water activity and chemical modification // Biochem Soc. Trans. 1989. - V. 17, N 6. - P. 1147-1149.

135. Okumura S. , Iwai M. , Tominaga Y. Lipase catalyzed productions esters // Agr. Biol. Chem. 1984. - V. 48, N 11. - P. 2805.

136. Hayes D. G. , Kleimar K. Lipase catalyzed and properties of estolides and their esters // J. Amer. Oil Chem. Soc. 1995. V. 72, N 11. - P. 1304-1316.

137. Athawale V. D. , Gaonkav S. R. Enzymatic synthesis of polyesters by lipase catalyzed polytrans ester if ioat ion // Biotechnol. Lett. 1994. - V. 16, N 2. - P. 149-154.

138. Tokiwa Yutaka, Suzuki Tomoo, Takeda Kiyoshi. Two types of lipases in hydrolysis of polyesters // Agr. and Biol. Chem. 1988. - V. 52, N 8. - P. 1937-1943.

139. Walter Torsten, Augusta Josef, Muller Rolf-Joachim et- 210 al. Enzymatic degradation of a model polyester by lipase from Rhizopus delemar // Enzyme and Microbial. Technol. 1995. - V. 17, N 3. - P. 218-224.

140. Schreider Manfred P. , Berger M . , Jakob B. Lipase catalyzed transformation of glycerides mexanistic studies and synthetic application // INFORM. Int. News Fats, Oils and Relat. Mater. - 1994. - V. 5, N 4. - P. 544.

141. Jensen Robert J. Discoveries in synthesising glycerides // INFORM Int. News Fats, Oils and Relat. Mater. 1995. - V. 6, N 4. - P. 440-442.

142. Давранов К. Д., Хахамейзер В. Б., Вагина О. Е Синтетаз-ная активность липазы из PeniciIlium sp. в водной среде и системе обращенных мицелл // Прикладная биохимия и микробиология. 1996. - Т. 32, N 4. - С. 386-389.

143. Jensen Robert J. Discoveries in synthesisingglycerides // INFORM Int. News Fats, Oils and Relat. Mater. 1995. - V. 6, N 4. - P. 445.

144. Padt A. van der, Keurentjes J. T. F. , Sewalt J. J. W. et al. Enzymatic synthesis of monoglycerides in a membrane bioreactor with an in-line adsorption column // J. Amer. Oil Chem. Soc. 1992. - V. 69, N 8. - P. 748-754.

145. Kwon Dae Young, Song Hyo Nam, Yoon Suk Hoo. Esterification patterns of lipases for synthesizing tricaproylglycerols in organic solvent // J. Amer. Oil Chem. Soc. 1997. - V. 74, N 10. - P. 1287-1290.

146. Bloomer S. , Adlerkreutz P. , Mattiasson B. Triglyceride interesterification by lipases :1. Cocoa butterequivalents from a fraction of palm oil // J. Amer. Oil Chem. Soc. 1990. - V. 67, N 8. - P. 519-524.

147. Bornscheuer Uwe Т. Lipase-catalyzed synthesis of monoacylglycerols // Enzyme " and MIcrob. Technol. 1995. V. 17, N 7. - P. 578-586.

148. Ergan F. , Trani M. , Andre G. Solvent free triglyceride synthesis using Lipozyme IM 20 // Biotechnol. Lett. -1988. V. 10, N 9. - P. 629-634.

149. Paradimitrio V. , Petit C. , Cassin G. et al. Lipase-catalyzed esterification in AOT reverse micelles a structural study // Adv. Colloid and Interface Sei. 1995. - V. 54, N 1. - P. 1-16.

150. Sonnet Philip E. , Foglia Thomas A. , Welch Baillargeon Mary. Fatty acid selectivity the selectivity of lipases of Geotriehum eandidum // J. Amer. Oil Chem. Soc. 1993. - V. 70, N 10. - P. 1043-1045.

151. MoCrae A., Roehl E.-L. , Brand H. M. Bio-ester // Seiten Ole-Fette-Wachse. 1990. - V. 116, N 5. - P. 201-205.

152. Yang Ching-Lun, Gulari Erdogan. Enzymatic esterification of diol in reverse micellar media // Biotechnol. Progr. 1994. - V. 10, N 3. - P. 269-276.

153. Graille Jean, Etabl Gatfefoise. Procede de synthese d'esters d'acides organiques et d'alcoos en phase heterogene par catalyse enzymatique // Патент N 8514827, Франция. 1987.

154. Yadav Raman P., Saxena Rajendra K., Gupta Rani, Davidson Sheba. Production of biosurfactant from sugar alcohols and natural triglycerides by Aspergillus terreus lipase // J. Sei. and Ind. Res. 1997. - V.- 212 -58, N 8. P. 479-482.

155. Akoh Casimir C. Enzymatic synthesis of acetylated glucose fatty acid esters in organic solvent // J. Amer. Oil Chem. Soc. 1994. - V. 71, N 3. - P. 319-323.

156. Lorica R. G. , Venzon С. V. , Bernardo D. L. et al. Microbial esterase in surcose ester synthesis and restructuring of coconut oil // Philipp. J. Sci. 1990. V. 119, N 1. - P. 1-21.

157. Sonnet Philip E. , Moore Gordon G. Esterification 1-and rac-2-octanols with selected acids and acid derivatives using lipases // Lipids. 1988. - V. 23, N 10. - P. 955-966.

158. Gouloh D. , Girardin M. , Rovel B. , Choul M. Comparison of direct esterification and transesterification of fructose by Candida antarctica lipase // Biotechnol. Lett. 1995. - V. 17, N 2. - P. 183-186.

159. Kurane R. , Suzuki T. , Fukuoka S. The enzymatic synthesis of esters by lipase from Nocardia erythropolis // Apl. . Microbiol, and Biotechnol. 1984. V. 20. - P. 387.

160. Enomato Kanehiko, Miyamori Takao, Sakimae Akihiro. Process of the enzymatic preparation of organic esters of ascorbic acid or erythorbic acid // Патент N 5071753, США. 1991.

161. Myojo Katsurori, Matsuture Yohichi, Yoshikawa Shiro. Synthesis of sterol fatty acid ester by lipase // Chem. Ind. 1987. - V. 38, N 5. - P. 410-417.

162. Iwai Mieko, Nagano Noriсо. Utilization of lipase. II.- 213

163. Hydrolysis of rice bran wax ester by two kind of commercial lipases // J. Jap. Oil Chem. Soc. 1987. -V. 36, N 11. - P. 852.

164. Султанович Ю. JL , Коше ник Т. Б. Способ получения этиловых эфиров жирных кислот // Патент СССР N 1822411, 1993.

165. Крюкова Е. В., Султанович Ю. А. , Свешникова Е В. , Адриа-нова В. А. Биохимический способ получения сложных эфиров жирных кислот // Прикладная биохимия и микробиология. 1993. - Т. 29, N 3. - С. 370-373.

166. Yang Fangxiao, Russell Alan J. Two-step biocatalytic conversion of an ester to an aldehyde in reverse micelles // Biotechnol. and Bioeng. 1994. - V. 43, N 3. - P. 232-241.

167. Takahashi Katsunobu, Yoshimoto Takayuki, Tamaura Yutaka et al. Ester synthesis at extraordinari low temperature of -3°C by modified lipase of benzene // Biochem. Int. 1985. - V. 10, N 4. - P. 627-691.

168. Inada Yuji, Nishimura Hiroyuki, Takahashi Katsunobi et al. Ester synthesis catalyzed by polyethylene glycol-modified lipase in benzen // Biochem. and Biophys. Res. Commun. 1984. - V. 122, N 2. P. 845-850.

169. Kodera Yoh, Takahashi Katsunobu, Nishimura Niroyuki et al. Ester synthesis from a-substituted carboxylic acid catalyzed by polyethylenglycol-modified lipase from Candida cylindrasea in benzene // Biotechnol. Lett. -1986. V. 8, N 12. - P. 881-884.

170. Bailargeon M. W. , Sonnet P. E. Polyethyleneglycol-modification of Candida rugosa lipase // J. Amer. Oil Chem. Soc. 1988. - V. 65, N 11. - P. 1812-1815.

171. Barsi Mahiran, Ampon Kamaruzaman, Yunus Zin Wan et al. Synthesis of fatty esters by polyethylene glycol-modified lipase // J. Chem. Technol. and Biotechnol. 1995. - V. 64, N 1. - P. 10-16.

172. Furukawa Makofu, Kodera Yoh, Hinoto Misao et al. Polyethylene glycol-modified lipase catalyzed asymmetric alcoholysis of 6-decalactone in n-dekan // Biotechnol. Lett. 1995. - V. 17, N 1. - P. 61-66.

173. Nishioi Takahashi K. , Tsuzuki T. , Yoshimoto T. et al. Esters synthesis in benzene by polyethylene glycol-modified lipase from Pseudomonas fragi 22. 39B // J. Biotechnol. 1988. - V. 8,N 1. - P. 39.

174. SugiharaAkio, Shimada Yuji, Tominaga Yoshio. Синтез сложных эфиров в среде бензола с использованием липазы модифицированной полиэтиленгликолем // Кагаку то когё, Chem. and Chem. Ind. 1988. - V. 41, N 3. - P. 115-117.

175. Ajima Ayako, Inada Yuji. Ester synthesis and esters exchange reaction with polyethylene glycol-modified lipases // J. Jap. Oil Chem. Soc. 1988. - V. 37, N 12. P. 1097-1103.

176. Ito Yoshihito, Fujii Hajime, Imanishi Yukio. Lipase modification by various synthetic polymers for use in chloroform // Biotechnol. Lett. 1992. - V. 14, N 12. - P. 1149-1152.

177. Bovara Roberto, Ottolina Gianluca, Carrea Giacomo et- 215 al. Modification of lipase from Pseudomonas sp. with poly(aerylylmorpholine) and study of its catalytic properties in organic solvent // Biotechnol. Lett. 1994. V. 16, N 10. - P. 1069-1074.

178. Basheer Sobni, Mogi Ken-ishi, Nakajima Mitsutoshi. Surfactant-modified lipase for the catalysis of the interesterification of triglycerides and fatty acid // Biotechnol. and Bioeng. 1995. - V. 45, N 3.1. P. 187-195.

179. Ito Yoshihiro, Fujii Hajime, Imanashi Yukio. Modification of with various synthetic polymers and their catalytic activités in organic solvent // Biotechnol. Progr. 1994. - V. .10, N 4. - P. 398-402.

180. Mar lot G. , Langrand G. , Triantaphylides C. , Barratti J. Esterification and transesterification by polyuretan-immobilized lipase // Biotechnol. Lett. 1987. V. 7, N 6. - P. 647.

181. Phutrakul Suree, Kanasawud Pawinee. Immobilization of lipase on various supports and its activity in water-poor media // Indian J. Chem. B. 1992. - V. 31, N 12. - P. 911-913.

182. Zaidi Ahmed, Gainer John L. , Carta Giorgio. Fatty acid esterification using nylon-immobilized lipase // Biotechnol. and Bioeng. 1995. - V. 48, N 6. - P. 601-605.

183. Nicolosi Giovanni, Piattelli Mario, Sanfilippo Claudia. Acetylation of phenols in organic solvent catalyzed by a lipase from Chromobacterium viscosum // Tetrahedron. 1992. - V. 48, N 12. - P. 2470-2482.- 216

184. Habulin M. , Knez Z. Enzymatic synthesis of n-bytil oleate in a hollow fiber membrane reactor // J. Mentor. Sci. 1990. - V. 61, Spec. Issue. - P. 315-324.

185. Knez Z. , Leftgep M . , Posel F. et al. Esters synthesis with immobilized lipase // Proc. 4th Eur. Congr. Biotechnol. Amsterdam. June 14-19, 1987. V. 1. - P. 48-49.

186. Barsi E , Ampon K. , Wan Yunus W. M. Z. et al. Stability of hydrophobic lipase derivatives immobilized in organic polymer beads // Appl. Biochem. and Biotechnol. A. 1994. - V. 48, N 3. - P. 173-183.

187. Jaeger Karl-Erich, Ransae Stephane, Dijkstra Bauke W. et al. Bacterial lipases // FEMS Microbial. Rev. 1994. V. 15, N 1. - P. 29-63.

188. Knez Z. , Rizner V. , Habulin M. , Bauman D. Enzymatic synthesis of oleyl oleate in dense fluids // J. Amer. Oil Chem. Soc. 1995. - V. 72, N 11. - P. 1345-1349.

189. Yu Zer-Rar, Rizvi Syed S. H. , Zollweg John A. Enzymatic esterifications of fatty acid mixtures from milk fat with canola oil in supercritical carbon dioxide // Biotechnol. Progr. 1992. - V. 8, N 6. -P. 508-513.

190. Marty A. , Chulalaksananukul W. , Condore J. S. et al. Comparison of lipase-catalysed esterification in supercritical carbon dioxide and in n-hexane // Biotechnol. Lett. 1990. - V. 12, N 1. - P. 11-16.

191. Chi Young Min, Nakamura Koro, Yano Toshimasa. Enzymatic interesterification in supercritical carbon dioxide // Agr. and Biol. Chem. 1988. - V. 52, N 6.- P. 1541-1542.

192. Hwang Soon Ook, Park Young Hoon. Ethylacetate production in the gas phase // Biotechnol. Lett. 1994. V. 16, N 4. - P. 379-384.

193. Commercial lipase useful in synthesis of optically pure pheromones // Bioprocess. Technol. 1986. -Y. 8, N 10. - P. 5.

194. Sin Charles J. , Go Qu-Ming, Fulling Gerd et al. The use of microbial lipase for the synthesis of optically active p'harmaceuticalls // Dev. Ind. Microbiol. -1988. V. 29. - P. 221-229.

195. Kirchner Gerald, Scollar Mark, Klibanov Alexander M. Resolution of racemic mixtures via lipase catalysis in organic solvents // J. Amer. Chem. Soc. 1985. - V. 107, N 24. P. 7072-7076.

196. Schneider Manfred. Lipases offer route for optical resolutions // Perform. Chem. 1989. - V. 4, N 2. -P. 28-29.

197. Izumi Taeko, Eda Yuji. Enzymatic synthesis of R- and (S-)-2-cyclohepten-l-ol // J. Chem. Technol. and Biotechnol. 1995. - V. 62, N 1. - P. 25-29.

198. Thakkar Narendra V., Banerji Ankur A., Bevinakatti Hanumat-hsa S. Double kinetic resolution of (+) ethyl-4-chloro-3-o-acetil butanoate // Biotechnol. Lett. 1994. - V. 16, N 2. - P. 1299-1302.

199. Gruber-Khadjawl ML , Honlg H. Chemoenzymatic preparation of optically active hydroxy azido butyric acids // Biotechnol. Lett. 1992. - V. 14, N 5.1. P. 367-372.- 218

200. Miyazawa Toshifumi, Miо Motoe, Watanabe Yuko et al. Lipase catalyzed transesterification procedure for the resolution of non-protein amino acid // Biotechnol. Lett. 1992. - V. 14, N 9. - P. 784-794.

201. Грачёва И. M. , Грачёв Ю. IL , Мосичев М. С. и др. Лабораторный практикум по технологии ферментных препаратов.- М.: Легкая и пищевая промышленность, 1982. 240 с.

202. Зиновьев А. Химия жиров. М.: Наука, 1965. - 550 с.

203. Кейте М. Техника липидологии. М.: Мир, 1975.- -322 с.

204. Шенфельд Е Поверхностно-активные вещества на основе оксида этилена. М.: Мир, 1982. - 752 с.

205. Закупра В. А. Методы анализа и контроля в производстве поверхностно-активных веществ. М.: Химия, 1977. -368 с.

206. Гинзбург О. Ф., Завгородний В. С., Зубрицкий Л. М. и др. Практикум по органической химии. Синтез и идентификация органических соединений. Е: Высшая школа, 1989.- С. 275-280.

207. Иоффе Б. В., Костиков Р. Р. , Разин В. В. Физические методы определения строения органических соединений. М.: Высшая школа, 1984. - С. 73.

208. Место испытаний: НПА "Экология' Время испытаний: 1999 год.

209. Объект испытаний: колоночный биореактор с иммобилизованной панкреатической липазой.

210. Цель испытаний: определение возможности и условий получения цетиллаурата из лауриновой кислоты и цетилового спирта с "использованием иммобилизованной панкреатической липазы в качестве Оио-катализатора.

211. Были рассмотрены различные режимы работы колонки, данные представлены в таблице (см. приложение к акту испытаний).

212. Полученные результаты испытаний позволяют заключить:

213. Использование колоночного биореактора с иммобилизованной панкреатической липазой позволяет получить цетиллаурат с достаточно высоким выходом (до 78 %).

214. Процесс протекает в мягких условиях: • температура 22-25°С, отсутствует повышенное давление , не применяются агрессивные реагенты.

215. Целесообразно использование лауриновой кислоты с исходной концентрацией 0.1 Е

216. Возможно использование соотношения реагентов не только 1:2, как это было определено ранее, но и 1:1.2, что при определённых режимах работы мало сказывается на выходе целевого продукта.

217. При непрерывной работе колонки в течении 240 часов активность липазы снижалась незначительно.