Ферментативный гидролиз растительных масел с использованием неводных сред тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 02.00.15, кандидат химических наук Шнайдер, Ксения Леонидовна

• Шнайдер, Ксения Леонидовна
• кандидат химических наук
• 2009

Оглавление диссертации кандидат химических наук Шнайдер, Ксения Леонидовна

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1 Ферменты в неводных средах.

1.1.1 Выбор растворителя для проведения реакции.

1.1.2 Основные подходы к реализации процессов, протекающих в средах с низким содержанием воды (макрогетерогенные двухфазные системы, микрогетерогенные реакционные среды).

1.1.2.1 Макрогетерогенные двухфазные системы.

1.1.2.1.1 Системы жидкость - жидкость.

1.1.2.1.2 Системы жидкость - твердая фаза.

1.1.2.2 Микрогетерогенные реакционные среды.

1.1.2.2.1 Система обращенных мицелл.

1.1.2.2.2 Бездетергентные микроэмульсии.

1.1.2.2.3 Ферменты, модифицированные полиэтиленгликолем.

1.2 Липазы в неводных средах.

1.2.1 Липазы общая характеристика.

1.2.2 Применение липаз в неводных средах.

1.3 Полиненасыщенные жирные кислоты семейства оэ-3.

1.3.1 Значение полиненасыщенных жирных кислот семейства со-3.

1.3.2 Источники полиненасыщенных жирных кислот семейства со-3.

1.4 Модификация жиров и масел липазами.

1.4.1 Химический и ферментативный гидролиз жиров и масел.

1.4.2 Химическая и ферментативная переэтерификацйя жиров и масел.

1.4.3 Иммобилизация липаз.

Глава 2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1 Материалы.

2.1.1 Ферментные препараты.

2.1.2 Субстраты.

2.1.3 Детергенты.

2.1.4 Растворители и другие реагенты.

2.2 Методы исследования. 2.2.1 Определение активности липазы (модифицированный метод Ота, Ямада).

2.2.2 Влияние ионов металлов на активность ферментного препарата панкреатической липазы.

2.2.3 Колориметрический метод определения активности ферментных препаратов липаз.

2.2.5 Иммобилизация ферментных препаратов липаз.

2.2.6 Изучение процесса ферментативного гидролиза иммобилизованными препаратами липаз.

2.2.7 Иммобилизация ферментного препарата панкреатической липазы в гель агара в присутствии АОТ.

2.2.8 Гидролиз льняного и рапсового масел ферментными препаратами липаз в системе масло/вода.

2.2.9 Получение натриевых солей жирных кислот.

2.2.10 ИК-спектроскопия полученных образцов.

2.2.11 Определение качественного и количественного состава высших жирных кислот методом газожидкостной хроматографии.

2.2.12 Получение кальциевых солей жирных кислот.

2.2.13 ИК-спектроскопия кальциевых солей жирных кислот.

2.2.14 Анализ липидов методом тонкослойной хроматографии.

2.2.15 Обработка полученных результатов.

Глава 3 РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

3.1 Гидролиз льняного и рапсового масел ферментными препаратами липаз в системе масло/вода.

3.2 Гидролиз растительных масел ферментными препаратами липаз. Мицеллярные системы.

3.2.1 Гидролиз льняного и рапсового масел ферментным препаратом панкреатической липазы.

3.2.2 Гидролиз льняного масла липазой из Candida rugosa.

3.3 Активация и стабилизация ферментного препарата панкреатической липазы неорганическими соединениями.

3.4 Иммобилизация ферментных препаратов липаз в гель агара.

3.4.1 Проведение ферментативного гидролиза иммобилизованными препаратами липаз.

ВЫВОДЫ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Ферментативный гидролиз растительных масел с использованием неводных сред»

Актуальность работы. Ферментные препараты находят все более широкие области применения в биотехнологии пищевой, фармацевтической, косметической и других отраслях промышленности. Сравнительно новое направление - изучение применения ферментных препаратов в неводных средах, что позволяет значительно расширить круг объектов и процессов, для которых могут быть использованы ферментные препараты.

В настоящей работе объектами исследования являются растительные масла различного жирно-кислотного состава — льняное и рапсовое масла. Эти масла важны, как для пищевой промышленности, так и для технических целей. Так, химический гидролиз рапсового масла является основой для крупнотоннажного получения ПАВ.

К перспективнейшим объектам исследования среди растительных масел можно отнести льняное масло, содержание со-3 ПНЖК (а-линоленовой кислоты) в котором составляет 35-65 % к сумме кислот. Благодаря своему жирно-кислотному составу и присутствию антиоксидантов льняное масло используется для профилактики и комплексного лечения многих заболеваний.

Наряду с льняным маслом неплохим источником а-линоленовой кислоты может служить рапсовое масло.

Современные сорта рапса содержат 40-49 % масла, богатого олеиновой (45-70 %), линолевой (15-28 %) и линоленовой (6-13 %) кислотами, вследствие чего рапсовое масло можно отнести к ценным растительным маслам.

Изучение процесса ферментативного гидролиза растительных масел актуально с точки зрения получения свободных высших жирных кислот, которые имеют очень широкий спектр применения. Ферментативные процессы, как известно, протекают в мягких условиях и обладают более выраженной селективностью.

Для пищевой промышленности указанные масла представляют ценность, как источники незаменимых со-3 и со-6 полиненасыщенных жирных кислот (ПНЖК) - линолевой и а-линоленовой кислот, которые выполняют функцию особого витамина, получившего наименование витамин F. ПНЖК семейства со-3 и со-6 обладают широким спектром лечебно-профилактического действия, так как они являются биологическими предшественниками эйкозаноидов и структурными блоками биологических мембран.

В связи с этим интерес исследователей различного профиля к незаменимым ПНЖК семейств со-3 и со-6 чрезвычайно высок. При этом если источники ПНЖК семейства со-6 довольно распространены, то гораздо более ограничен круг источников ПНЖК семейства со-3. Поэтому поиск новых источников со-3 ПНЖК, доступных и легко усвояемых является актуальной задачей. Для получения продуктов с повышенным содержанием со-3 ПНЖК, а, следовательно, с повышенной пищевой ценностью была использована ферментативная трансформация растительных масел липазами различного происхождения.

Цель и задачи исследования. Выявление особенностей ферментативного гидролиза растительных масел различного жирно-кислотного состава липазами животного и микробиологического происхождения.

Получение нового модифицированного липидного продукта с повышенным содержанием со-3 ПНЖК, а, следовательно, с повышенной пищевой ценностью.

Научная новизна. Панкреатическая липаза и липаза из Candida rugosa гидролизуют растительные масла в органических средах (углеводороды) в ми-целлярных системах АОТ гораздо эффективнее, чем в эмульсии масло/вода стабилизированной АОТ.

Панкреатическая липаза в системе обращенных мицелл АОТ специфична по отношению к жирно-кислотному составу гидролизуемых масел и легче отделяет в ацилглицеридах остатки полиненасыщенных жирных кислот, чем насыщенных и мононенасыщенных.

Липаза из Candida rugosa в системе масло/вода гораздо эффективнее подвергает гидролизу растительные масла, чем панкреатическая липаза, при этом она труднее всего отделяет в ацилглицеридах остатки полиненасыщенной а-линоленовой кислоты, что позволяет получить модифицированные масла с повышенным относительным содержанием этой кислоты.

Практическая значимость. Разработан метод гидролиза льняного масла с применением липазы из Candida rugosa в отсутствии эмульгатора, что позволяет получить биологически-активный липидный продукт с повышенным относительным содержанием со-З-ПНЖК.

Подобраны оптимальные условия для получения активных иммобилизованных препаратов липаз различного происхождения. Показано, что при иммобилизации необходимо введение хлорида кальция в гель агара и подобраны его оптимальные концентрации.

Разработан метод выделения кальциевых и натриевых солей жирных кислот льняного масла, который включает последовательную ферментативную и химическую обработку масла. Данные соли находят применение в качестве добавок к корму сельскохозяйственных животных, а также могут использоваться как основа для получения ПАВ, восков и др.

Апробация работы. Результаты работы были доложены на Международной научно-практической конференции "Биотехнология. Вода и пищевые продукты" (Москва, 2008), на X Международной конференции молодых ученых "Пищевые технологии и биотехнологии" (Казань, 2009), на XIV Международной конференции, посвященной 20-летию партнерства между Казанским государственным университетом и Гиссенским университетом им. Ю. Либиха (Казань, 2009), на ежегодных отчетных конференциях КГТУ (2007-2009).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 12 работ.

Объем и структура работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания объектов и методов исследования, результатов и их обсуждения (3 главы), выводов и библиографического указателя (129 наименова

Заключение диссертации по теме «Катализ», Шнайдер, Ксения Леонидовна

выводы

1. Гидролиз льняного масла липазой из Candida rugosa в системе масло/вода без внесения эмульгатора, позволяет выделить липидный продукт, обогащенный а-линоленовой кислотой. Относительное содержание ценной со-3-ПНЖК в липидном продукте увеличилось с 49,5 % до 66,7 %.

Установлено, что в данной системе липаза из Candida rugosa проявляет более высокую специфичность по отношению к насыщенным, а также моно- и диненасыщенным жирным кислотам. Для выделения высших жирных кислот и отделения их от модифицированного масла (липидного продукта) применен метод холодной рафинации.

Панкреатическая липаза в системе масло/вода практически не осуществляет гидролиз растительных масел.

2. Установлено, что панкреатическая липаза способна расщеплять льняное масло в системе обращенных мицелл АОТ в среде декана в 3,3 раза эффективнее, чем в эмульсии масло/вода, стабилизированной АОТ. Гидролиз рапсового масла в среде гексана в 16,5 раз эффективнее гидролиза стабилизированной АОТ эмульсии масло/вода.

Определены оптимальные условия для проведения гидролиза льняного и рапсового масел ферментным препаратом панкреатической липазы. Выход жирных кислот в оптимальных условиях составил 85 % для льняного масла и 45 % — для рапсового масла.

3. Фермент панкреатическая липаза в системе обращенных мицелл АОТ специфичен по отношению к жирно-кислотному составу гидролизуемых масел и легче отделяет в ацилглицеридах остатки полиненасыщенных жирных кислот, чем остатки насыщенных и мононенасыщенных кислот, что приводит к тому, что в системе обращенных мицелл АОТ в среде декана льняное масло гидролизуется почти в 2 раза эффективнее рапсового масла.

4. Установлено, что гидролиз льняного масла липазой из Candida rugosa в системе мицелл АОТ лучше всего протекает в среде гептана и в 3,6 раз более эффективен, чем в эмульсии масло/вода, стабилизированной АОТ. Выход жирных кислот в оптимальных условиях составил 36 %.

5. Установлено, что на липолитическую активность и стабильность ферментного препарата панкреатической липазы оказывают активирующий эффект хлориды кальция и магния, сульфат магния. Подобраны оптимальные концентрации активирующих добавок.

6. Получены иммобилизованные препараты липаз с высокой удельной активностью. Активность иммобилизованных ферментных препаратов выше липолитической активности исходных ферментов: ферментного препарата панкреатической липазы - в 12,4 раза; липазы из Candida rugosa - в 5 раз, препарата "Novozyme 868" - в 11,6 раз.

Список литературы диссертационного исследования кандидат химических наук Шнайдер, Ксения Леонидовна, 2009 год

1. Варфоломеев, С.Д. Химическая энзимология / С.Д. Варфоломеев. — М.: Издательский центр «Академия», 2005. — 480 с.

2. Кирейко, А.В. Ферментативное определение рядя лекарственных веществ в прямых и обращенных мицеллах додецилсульфата натрия / А.В. Кирейко, И.А. Веселова, Т.Н. Шеховцова // Вест. Моск. Ун-та. Сер. 2. Химия. -2007. Т. 48, № 4. - С. 255-270.

3. Kobayashi Т. Reaction equilibrium for lipase-catalyzed condensation in organic solvent systems / T. Kobayashi, S. Adachi // Biotechnol. Lett. 2004. - Vol. 26, № 19.-P. 1461-1468.

4. Мартинек, К. Сдвиг химического равновесия в двухфазных водно-органических системах и препаративный органический синтез / К. Мартинек, А.Н. Семенов, И.В. Березин // Доклады академии наук. 1980. — Т. 252, № 2. -С. 394-398.

5. Поверхностно-активные вещества и полимеры в водных растворах / К. Холмберг и др.; пер. с англ. М.: БИНОМ. Лаборатория знаний, 2007. - 528 с.

6. Enhanced activity and stability of ionic liquid-pretreated lipase / D. T. Dang et al. // Journal of Molecular Catalysis B: Enzymatic. 2007. -№ 45. - P. 118-121.

7. Биотехнология: учеб. пособие для вузов.: в 8 кн. / под ред. Н.С. Егорова, В.Д. Самуилова. Кн. 7: Иммобилизованные ферменты / И.В. Березин и др. - М.: Высшая школа, 1987. - 159 с.

8. Халгаш, Я. Биокатализаторы в органическом синтезе / Я. Халгаш; пер. со словац. М.: Мир, 1991. - 204 с.

9. Конструирование биокаталитических систем в органических растворителях с малым содержанием воды / Ю.Л. Хмельницкий и др. // Биотехнология. 1988. - Т. 4, № 3. - С. 292-303.

10. Ферментативные реакции в водно-органических смесях: критерий для выбора оптимального органического растворителя / A.M. Клибанов и др. // Биоорганическая химия. 1978. — Т. 4, № 1. - С. 82-87.

11. Sivalingam G. Solvent effects on the lipase catalyzed biodegradation of poly(s-caprolactone) in solution / G. Sivalingam, S. Chattopadhyay, G. Madras // Po-lym. Degrad. and Stab. 2003. - Vol. 79, № 3. - P. 413-418.

12. Stability of hydrolytic enzymes in water-organic solvent systems / L.M. Simon et al. // Journal of Molecular Catalysis B: Enzymatic. 1998. - Vol. 4, № 1-2.-P. 41-45.

13. Villeneuve P. Lipases in lipophilization reactions / P. Villeneuve // Biotechnology Advances. 2007. - doi: 10.1016/j.biotechadv.2007.06.001.

14. Enhanced activity and stability of immobilized lipases by treatment with polar solvents prior to lyophilization / J.C. Wu et al. // Journal of Molecular Catalysis B: Enzymatic. 2007. - № 45. - P. 108-112.

15. Enzymatic dehydrogenation of steroids by b-hydroxysteroid dehydrogenase in two-phase system / P. Cremonesi et al. // Arch. Biochem. Biophys. 1973. -Vol. 159-P. 7-10.

16. Аринбасарова, А.Ю. Использование водно-органических систем в эн-зиматической трансформации стероидов / А.Ю. Аринбасарова, К.А. Кощенко // Прикладная биохимия и микробиология. — 1984. Т. 19, № 1. - С. 20-29.

17. Реут, Е.Н. Выделение мио-инозита из растворов ферментативной биотрансформацией / Е.Н. Реут, М.М. Рахимов // Прикладная биохимия и микробиология. 2003. - Т. 39, №4.-С. 413-418.

18. Горохова, И.В. Соосаждение липазы Pseudomonas fluorescens с гидрофобными соединениями как подход к ее иммобилизации при катализе в неводных средах / И.В. Горохова, А.Е. Иванов, В.П. Зубов // Биоорганическая химия.- 2002. Т. 28, № 1. - С. 44-49.

19. Биохимический способ получения сложных эфиров жирных кислот / Е.В. Крюкова и др. // Прикладная биохимия и микробиология. — 1993. Т. 29, № 3. - С. 370-373.

20. Смирнова, Н.А. Фазовое поведение и формы самоорганизации растворов смесей поверхностно-активных веществ / Н.А. Смирнова // Успехи химии.- 2005. Т. 74, № 2. - С. 138-154.

21. Жуджикова, Г.В. Молекулярно-динамическое моделирование микроагрегатов ПАВ в неполярной среде н-октана / Г.В. Жуджикова, Е.Н. Бродская // Коллоидный журнал. 2005. - Т. 67, № 4. - С. 500-507.

22. Бендер, М. Биоорганическая химия ферментативного катализа / М. Бендер, Р. Бергерон, М. Комияма; пер. с англ. М.: Мир, 1987. - 352 с.

23. Мицеллярная энзимология. Каталитическая активность пероксидазы в коллоидном растворе воды в органическом растворителе / К. Мартинек и др. // Доклады академии наук. 1983. - Т. 269, № 2. - С. 491-493.

24. Мицеллярная энзимология / К. Мартинек и др. // Биологические мембраны. 1985. - Т. 2, № 7. - С. 669-689.

25. Образование и свойства микроэмульсий, стабилизированных оксиэти-лированными глицеридами / Т.В. Глухова и др. // Коллоидный журнал. 2005. -Т. 67, №3.- С. 328-332.

26. Давранов, К.Д. Синтетазная активность липазы из Penicillium sp. в водной среде и в системе обращенных мицелл / К.Д. Давранов, В.Б. Халамей-зер, О.Н. Вагина // Прикладная биохимия и микробиология. 1996. - Т. 32, № 4. -С. 386-388.

27. Захарченко, H.JI. Влияние микроокружения трипсина на константы скорости элементарных стадий реакции гидролиза этилового эфира >Г-бензоил1.аргинина / H.JI. Захарченко, E.A. Ермакова, Ю.Ф. Зуев // Биоорганическая химия. 2008. - Т. 34, №3. - С. 404-408.

28. Исследование щелочного и ферментативного гидролиза п-нитрофенилацетата в перколирующей микроэмульсии вода-масло на основе АОТ / H.JI. Захарченко и др. // Вест. Моск. Ун-та. Сер.2. Химия. 2000. -Т.41, № 6. - С. 386-389.

29. Павленко, И.М. Влияние химической модификации липазы на регуляцию липолитической активности в системе обращенных мицелл / И.М. Павленко, H.JI. Клячко, А.В. Левашов // Биоорганическая химия. 2005. - Т. 31, № 6. -С. 593-601.

30. Особенности иммобилизации субстрата и каталитическая активность трипсина в обращенной микроэмульсии / Ю.Ф. Зуев и др. // Вест. Моск. Унта. Сер. 2. Химия.-2003.-Т. 44, № 1.-С. 13-15.

31. Влияние заряда межфазной поверхности на структуру и активность трипсина в обращенных мицеллах / Ю.Я. Валиуллина // Биоорганическая химия. 2008. - Т. 34, № 3. - С. 399-403.

32. Гликозилированный а-химотрипсин в системах обращенных мицелл Аэрозоля ОТ в октане как модель в изучении роли углеводных фрагментов в гликопротеинах / Р. В. Рарий и др. // Биоорганическая химия. 1994. - Т. 20, № 3. - С. 249-256.

33. Замена воды на водно-органическую смесь в системах обращенных мицелл — путь к повышению эффективности ферментативного катализа / H.JT. Клячко и др. // Биоорганическая химия. 1990. - Т. 16, № 5. - С. 581-589.

34. Бездетергентные микроэмульсии как среда для ферментативных реакций: каталитические свойства лакказы в трехкомпонентной системе гексанпронанол-2 вода / Ю. JI. Хмельницкий и др. // Биоорганическая химия. — 1989. - Т. 15, № 12. - С. 1611-1617.

35. Ферментативная активность комплексов полимер-белок в смешивающихся с водой органических растворителях / И.К. Сакодынская и др. // Биоорганическая химия. 1999. - Т. 25, № 6. - С. 439-443.

36. Этилен гликоль и термостабильность трипсина в системе обращенных мицелл / Е.А. Ступишина и др. // Биохимия. 2006. — Т. 71, № 5. - С. 660-665.

37. Barsi М. Synthesis of fatty esters by polyethyleneglycol-modified lipase / M. Barsi //J. Chem. Technol. and Biotechnol. 1995. - Vol. 64, № 1. - P. 10-16.

38. Vemura T. Polyethyleneglycol-modified lipase catalyzed asymmetric alco-holysis of decalactone in n-decanol / T. Vemura, M. Furukawa, Y. Kodera // Biotechnol. Lett.- 1995.-Vol. 17, № 1.-P. 61-66.

39. Chemoselectivity and enhanced activity of poly(ethyleneglycol)-modified lipases acylating hydrophilic aminoasid derivatives in organic solvents / C. Ebert et al. // Biotechnol. Techn. 1994. -Vol. 8, № 11. - P. 811-816.

40. Multiple effects of water on solvent-free enzymatic esterifications / M.L. Foresti et al. // Enzyme and Microbial Technology. 2007. - № 41. - P. 62-70.

41. Жеребцов, H.A. Ферменты: Их роль в технологии пищевых продуктов: учеб. пособие / Н.А. Жеребцов, О.С. Корнеева, Е.Д. Фаранжева. Воронеж: Издательство Воронежского государственного университета, 1999. — 120 с.

42. Исследование гидролиза в монослоях новых липидоподобных субстратов и трилаурина под действием липазы Pseudomonas fluorescens i С.Ю. Зайцев и др. // Биоорганическая химия. — 2000. — Т. 26, № 3. С. 224-230.

43. Биферментная система липаза/липоксигеназа в обращенных мицеллах АОТ в октане / И.М. Павленко и др. // Биоорганическая химия. 2002. - Т. 28, № 1.-С. 50-55.

44. Особенности выбора температуры для проведения реакции каталитического гидролиза масла сафлора под действием липазы из Candida rugoza / А.Б. Майдина и др. // Вест. Моск. Ун-та. Сер.2. Химия. 2008. - Т.49, № 2. -С. 134-137.

45. Кислухина, О.В. Биотехнологические основы переработки растительного сырья / О.В. Кислухина, И. Кюдулас. Каунас.: Технология, 1997. - 183 с.

46. Варфоломеев, С.Д. Каталитические центры гидролаз: структура и каталитический цикл / С.Д. Варфоломеев, И.А. Гариев, И.В. Упоров // Успехи химии.-2005.-Т. 74, № 1.-С. 68-83.

47. Варфоломеев, С.Д. Активные центры гидролаз: основные типы структур и механизм катализа / С.Д. Варфоломеев, А.Е. Пожитков // Вестн. Моск. Ун-та. Сер. 2. Химия. 2000. - Т. 41, № 3. - С. 147-156.

48. Amperometric biosensor based on Prussian Blue-modified screen-printed electrode for lipase activity and triacylglycerol determination / I.B. Rejeb et al. // Analytica Chimica Acta. 2007. - № 594. p. 1-8.

49. Transesterification of primary and secondary alcohols using Pseudomonas aeruginosa lipase / M. Singh et al. // Bioresource Technology. 2007. - doi: 10.1016/ j .biortech.2007.05.041.

50. Исследование особенностей строения активного центра липазы Rhizopus japonicus / Т.А. Ковалева и др. // Вестник ВГУ. Серия химия, биология. 2001.-№ 2. - С. 114-117.

51. Идентификация каталитически активных групп липазы зародышей семян пшеницы (Triticum aestivum L.) / О.С. Корнеева и др. // Прикладная биохимия и микробиология. 2008. - Т. 48, № 4. - С. 387-393.

52. Тырсин, Ю.А. Идентификация гистидина в активном центре липазы I Rhizopus oryzae 1403 / Ю.А. Тырсин, С.А. Шеламова // Вестник ОГУ. 2009. -№ 6. - С. 374-378.

53. Грачева, И.М. Технология ферментативных препаратов / И.М. Грачева. М.: Агропромиздат, 1987. - 335 с.

54. Рубан, E.JI. Синтез и гидролиз липидов у микроорганизмов (Обзор) / E.JI. Рубан // Прикладная биохимия и микробиология. — 1980. — Т. XVI, № 4. — С. 490-501.59. http://opm.phar.umich.edu/species.php.cBo6oflHbm.

55. Давранов, К. Микробные липазы в биотехнологии (Обзор) / К. Давра-нов // Прикладная биохимия и микробиология. 1994. — Т. 30, Вып. 4-5. — С. 527-533.

56. Вилкинсон, Д. Принципы и методы диагностической энзимологии / Д. Вилкинсон. М.: Медицина, 1981. - 624 с.

57. Activity and stability of Chromobacterium viscosum lipase in modified AOT reverse micelles / M.M.R. Talukder et al. // Journal of Molecular Catalysis B: Enzymatic. 2003. - № 22. - P. 203-209.

58. Chen-Li C. Activity and stability of lipase in aerosol-OT / isooctane reverse micelles / C. Chen-Li // Biotechnology Techniques. 1999. - Vol. 13, № 7. -P. 453-457.

59. Gutierrez-Ayesta C. Relation between lipase structures and their catalytic ability to hydrolyse triglycerides and phospholipids / C. Gutierrez-Ayesta, A. A. Carelli, M. L. Ferreira // Enzyme and Microbial Technology. 2007. № 41. -P. 35-43.

60. Dandavate V. Novel approach for the synthesis of ethyl isovalerate using surfactant coated Candida rugosa lipase immobilized in microemulsion based organogels / V. Dandavate, D. Madamwar // Enzyme and Microbial Technology. — 2007. -№41. -P. 265-270.

61. Koike H. Enrichment of triglyceride docosahexanoic acid by lipase used as a hydrolysis medium in lecithin-based nano-scale molecular assemblage / H. Koike, M. Imai, I. Suzuki // Biochemical Engineering Journal. 2007. - № 36. - P. 38-42.

62. Характеристика семян льна и их применение в производстве продуктов питания / Л.П. Пащенко и др. // Хранение и переработка сельхозсырья. -2004.-№7.-С. 56-57.

63. Источники липидов в энтеральном и парентеральном питании / Г.И. Юсупова и др. // Вопросы питания. 2003. - № 3. - С. 32 - 35.

64. Трумина, Э.Н. О механизмах действия полиненасыщенных жирных кислот на иммунную систему / Э.Н. Трумина, O.K. Мустафина, М.Н. Волгарев // Вопросы питания. 2003. - № 3. - С. 35 - 40.

65. Конь, И.Я. Омега-3 полиненасыщенные жирные кислоты в профилактике и лечении болезней детей и взрослых / И.Я. Конь, Н.М. Шилина, С.Б. Вольфсон // Лечащий врач. 2006. - № 4. - С. 14-17.

66. Нечаев, А.П. Растительные масла функционального назначения / А.П. Нечаев, А.А. Кочеткова // Масложировая промышленность. 2005. - №3. -С. 20-21.

67. Запасы и потенциальная продукция незаменимых полиненасыщенных жирных кислот зообентоса Енисея / М.И. Гладышев и др. // Доклады академии наук. 2004. - Т. 394, № 1.-С. 133-135.

68. Химия биологически активных природных соединений / под ред. Н.А. Преображенского. -М.: Химия, 1976. 456 с.

69. Ляпков, Б.Г. Молекулярные виды триацилглицеринов пищевых растительных масел / Б.Г. Ляпков, Д.Б. Меламед // Прикладная биохимия и микробиология. 1990. - Т. 26, № 2. - С. 157-167.

70. Кулакова, С.Н. О растительных маслах нового поколения в нашем питании / С.Н. Кулакова, М.Г. Гаппаров, Е.В. Викторова // Масложировая промышленность. 2005. - № 1. - С. 4-8.

71. Некоторые факторы, определяющие стабильность растительных масел к окислению / А.Н. Лисицын и др. // Масложировая промышленность. 2005. — № 3. — С. 11-15.

72. Галкин, Ф.М. Особенности селекции льна масличного / Ф.М. Галкин // Масложировая промышленность. — 2000. — № 3. С. 13-14.

73. Паронян, В.Х. Пути обогащения жирнокислотного состава эмульсионного жирового продукта / В.Х. Паронян, К.Г. Восканян // Хранение и переработка сельхозсырья. 2005. - № 6. - С. 54.

74. Использование семян льна для повышения биологической ценности хлебобулочных изделий / Л.П. Пащенко и др. // Хранение и переработка сель-хозсырья. 2003. - № 4. - С. 82-85.

75. Характеристика семян льна и их применение в производстве продуктов питания / Л.П. Пащенко и др. // Хранение и переработка сельхозсырья. -2004. № 7. - С. 56-57.

76. Постолов, Ю.М. Руководство по технологии получения и переработки растительных масел и жиров: в 4 т. Т 4 / Ю.М. Постолов, А.Н. Николавский. — Ленинград: Издательство ВНИИ жиров, 1975. 375 с.

77. Пат 2 246 535 РФ МПК С2 С 11 С 1/06, С 07 С 51/087. Способ получения жирных кислот / A.M. Иванов, И.А. Иванов; заявитель и патентообладатель Курск, гос. технич. ун-т. № 2003108096/04; заявл. 24.03.2003; опубл. 20.02.2005.

78. Пат 2 166 534 РФ МПК С2 С 11 С 1/04. Способ получения жирных кислот / Ф.И.О.; заявитель и патентообладатель Курск, гос. технич. ун-т.- № 99112458/04; заявл. 08.06.1999; опубл. 10.05.2001.

79. Immobilization of lipase by ultrafiltration and cross-linking onto the poly-sulfone membrane surface / W. Yujun et al. // Bioresource Technology. 2007. -doi: 10.1016/ j .biortech.2007.05.014.

80. Production of a diacylglycerol-enriched palm olein using lipase-catalyzed partial hydrolysis: Optimization using response surface methodology / Cheong L.-Z. et al. // Food Chemistry. 2007. - doi: 10.1016/ j.foodchem.2007.03.070.

81. Mercon F. Enzymatic hydrolysis of babasso oil in a membrane bioreactor / F. Mercon, L. Geraldo // J. Amer. Oil Chem. Soc. 2000. - Vol. 77, № 10. -P. 1043-1048.

82. McNeill G.P. Isolation of erucic acid from rapeseed oil by lipase catalyzed hydrolysis / G.P. McNeill, P.E. Sonnet // J. Amer. Oil Chem. Soc. 1995. - Vol. 72, №2-P. 213-218.

83. Douglas G. Isolation of fatty acids from Limnantes alba oil by lipase catalyzed hydrolysis / G. Douglas, R. Kleiman // J. Amer. Oil Chem. Soc. 1993. - Vol. 70, №6. -P. 555-560.

84. Can A. Enrichment of hazelnut oil with long-chain n-3 PUFA by lipase-catalyzed acidolysis: optimization by response surface methodology / A. Can // J. Amer. Oil Chem. Soc. 2005. - Vol. 82, № 1. - P. 27-32.

85. Фермента переработка тваринних жир1в / П.О. Некрасов и др. // ITE: 1нтегров. технол. та енергозбереження. 2005. - № 3. — С. 95-99. - Реф. в: Химия и технология пищевых продуктов: науч.- реф. сб. — 2006. — Вып.6

86. Углеродсодержащие макроструктурированные керамические носители для адсорбционной иммобилизации ферментов и микроорганизмов. 1. Адсорбция глюкоамилазы / Г.А. Коваленко и др. // Биотехнология. — 2002. — № 3. — С. 55-66.

87. Li S.-F. Electrospun polyacrylonitrile nanofibrous membranes for lipase immobilization / S.-F. Li, J.-P. Chen, W.-T. Wu // Journal of Molecular Catalysis B: Enzymatic. 2007. - № 47. - P. 117-124.

88. Bayramoglu G. Immobilization of Candida rugosa lipase onto spacer attached poly-(GMA-HEMA-EGDMA) microspheres / G. Bayramoglu, В. Kaya, A. M. Yakup // Food Chem. 2005. - Vol. 92, № 2. - P. 261-268.

89. Иммобилизация липазы Rhizopus japonicus 1403 путем ковалентного связывания / C.A. Шеламова и др. // Биотехнология. 2001. - № 5. - С. 32—39.

90. Исследование условий иммобилизации некоторых гидролитических ферментов на ионообменных смолах / Т.А. Ковалева и др. // Сорбц. и хрома-тогр. процессы.-2005.-Т. 5, № 5.-С. 704-711.

91. Неклюдов, А.Д. Свойства препарата иммобилизованной липазы Rhizopus oryzae 14-14 / А.Д. Неклюдов, Б.Д. Шведов, В.В. Цибанов // Прикладная биохимия и микробиология. — 1981. Т. XVII, № 4. - С. 510-515.

92. Chowdary G.V. Synthesis of ethyl iosovalerate using Rhizomucor miehei lipase: optimization / G.V. Chowdary, S.G. Prapulla // Прикладная биохимия и микробиология. -2003. Т. 39, № 3. - С. 278-283.

93. Многокомпонентные термочувствительные системы для биокатализа / Д.В. Капустин и др. // Известия Академии наук. Серия химическая. 2005. -№2.-С. 443-448.

94. Multiple effects of water on solvent-free enzymatic esterifications / M.L. Foresti et al. // Enzyme and Microbial Technology. 2007. - № 41 - P. 62-70.

95. Fernandez-Lorente G. Effect of the immobilization protocol in the activity, stability, and enantioselectivity of Lecitase Ultra / G. Fernandez-Lorente et al. // Journal of Molecular Catalysis B: Enzymatic. 2007. - № 47. - P. 99-104.

96. Кока-Армас, X. Исследование некоторых каталитических свойств иммобилизованной липазы из Mucor griseocyanus / X. Кока-Армас, X.JI. Марти-нес-Эрнандес, X. Дустет-Мендоса // Вест. Моск. Ун-та. Сер.2. Химия. 2006. -Т. 47, №2.-С. 103-108.

97. Адсорбционная иммобилизация щелочной липазы / Е.Я. Софьина и др. // Прикладная биохимия и микробиология. 1991. - Т. 27, № 4. — С. 523-528.

98. Bagi К. Immobilization and characterization of porcine pancreas lipase / K. Bagi, L.M. Simon, B. Szajani // Enzymatic and Microbial Technology. — 1997. -№20. -P. 531-535.

99. Shukla A. Experimental studies and mass-transfer analysis of the hydrolysis of olive oil in a biphasic zeolite-membrane reactor using chemically immobilized lipase / A. Shukla, A. Kumar // Ind. and Eng. Chem. Res. 2004. - Vol. 43, № 9. -P. 2017-2029.

100. Abbas Н. Aroma synthesis by immobilized lipase from Mucor sp / H. Abbas, L. Comeau // Enzyme and Microbial Technology. 2003. - Vol. 32, № 5. -P. 589-595.

101. Aylin A. Activity and adsorption of lipase from nogella sativa seeds on celite at different pH values / A. Aylin, U. Guldem // Biotechnology Letters. 2000.- Vol. 22, № 5. P. 355-359.

102. Jeganathan J. Hydrolytic pretreatment of oily wastewater by immobilized lipase / J. Jeganathan, G. Nakhla, A. Bassi // Journal of Hazardous Materials. — 2007.- № 145.-P. 127-135.

103. Jeganathan J. Pre-treatment of high oil and grease pet food industrial wastewaters using immobilized lipase hydrolyzation / J. Jeganathan, G. Nakhla, A. Bassi //Journal of Hazardous Materials. 2006. -№ 137. - P. 121-128.

104. Бакулина, О.Н. Формула пищи: микронутриенты для детского питания / О.Н. Бакулина // Пищевая промышленность. — 2005. — JN® 4. — С. 22-24.

105. Асташов, В. И. Урожаи рапса и подсолнечника растут / В. И. Аста-шов // Технические культуры. — 1988. — № 5. — С. 53-68.

106. Перспективы и реальность использования масел растительного происхождения в качестве биотоплива / В. А. Гаврилова и др. // Масложировая промышленность. 2005. - № 4. — С. 15-17.

107. Зиновьева, М.Е. Гидролиз оливкового масла панкреатической липазой в неводных средах / М.Е. Зиновьева, Н.В. Калачева, B.C. Гамаюрова // Биотехнология. 1998. - № 2. - С. 64-67.

108. Брокерхоф, X. Ли политические ферменты / X. Брокерхоф, Р. Джек-сен; пер. с англ. М.: Мир, 1978. - 388 с.

109. Рабинович, В.А. Краткий химический справочник / В.А. Рабинович, З.Я. Хавин. Л.: Изд-во «Химия», 1978. - 392 с.

110. Объемные свойства растворов олеиновой, линолевой и линоленовой кислот в н-гексане и н-гептане при 298,15 К / А.Г. Рамазанова и др. // Известия Академии наук. Серия химическая. 2006. - № 4. - С. 643-647.

111. Попадич, И.А. Активация ферментных систем и микроорганизмов / И.А. Попадич, С.Е Траубенберг. сб. научн. тр. Совершенствование пищевой технологии и техники. - М.: МТИПП, 1981. - С. 10-17.

112. Иммобилизованные клетки и ферменты. Методы / под ред. Д. Вуд-вордса; пер. с англ. -М.: Мир, 1988. — 215 с.