Состав и свойства экстрактов из шрота чаги тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 15.00.02, кандидат химических наук Юмаева, Ляйсан Рифгатовна

• Юмаева, Ляйсан Рифгатовна
• кандидат химических наук
• 2009

Оглавление диссертации кандидат химических наук Юмаева, Ляйсан Рифгатовна

Список сокращений и условных обозначений.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1 ХИМИЧЕСКИЙ СОСТАВ ГРИБА ЧАГИ И ПРЕПАРАТЫ НА ЕГО ОСНОВЕ.

1.1 Химический состав чаги.

1.1.1 Химический состав водных извлечений из чаги.

1.1.2 Спиртовые экстракты из чаги.

1.2 Лекарственные препараты на основе чаги.

1.2.1 Препарат «Бефунгин».

1.2.2.Чаговит и Чаголюкс.

1.2.3 Спиртовые настойки из чаги.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1 Получение и анализ водных извлечений из чаги.

2.2 Объекты исследования.

2.2.1 Экстракция шрота чаги спиртом.

2.2.1.1 Получение спиртовых экстрактов из шрота чаги.

2.2.1.2 Анализ спиртовых экстрактов из шрота чаги.

2.2.1.3 Оптимизация условий экстракции шрота чаги спиртом.

2.2.1.4 Анализ меланинов и осадков, выделенных из спиртовых экстрактов шрота чаги.

2.2.1.4.1 Анализ меланина.

2.2.1.4.2 Анализ садка.

2.3 Получение и анализ хлороформных экстрактов из шрота чаги.

2.4 Получение и анализ метилтретбутиловых экстрактов шрота чаги.

2.5 Получение косметических средств на основе спиртовых экстрактов шрота чаги.

2.6. Общие методы анализа.

2.6.1 Определение содержания экстрактивных веществ, золы и меланина.

2.6.2 Определение углеводов антроновым методом.

2.6.3 Определение фенолов фотометрическим методом.

2.6.4. Определение общего количества гемицеллюлоз.

2.6.5 Тонкослойная хроматография липидов.

2.6.6 Тонкослойная и бумажная хроматография фенольных веществ.

2.6.7 Тонкослойная хроматография терпеновых веществ.

2.6.8 Тонкослойная хроматография лактонов.

2.6.10 ВЭЖХ анализ экстрактов шрота чаги.

2.6.11 Определение антиоксидантной активности.

2.6.12 Определение размеров глобул меланинов методом фотонно-корреляционной спектроскопии.

2.6.13 Статистическая обработка данных.

ГЛАВА 3ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.

3.1 Экстракция шрота чаги спиртом.

3.1.1 Два способа экстракции шрота чаги.

3.1.2 Исследование меланинов и осадков, выделенных из спиртовых экстрактов шрота чаги.

3.2 Экстракция шрота чаги хлороформом.

3.3 Экстракция шрота чаги метилтретбутиловым эфиром.

3.4 Разработка косметических средств на основе спиртовых экстрактов из шрота чаги.

ВЫВОДЫ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Состав и свойства экстрактов из шрота чаги»

Актуальность работы. В настоящее время фармацевтическая промышленность выпускает на основе водных извлечений из гриба чаги препарат Бе-фунгин. Отходом этого производства является шрот, состав веществ остающихся в нём не исследован. Водой из чаги экстрагируется около 25% сухих веществ гриба. В водном извлечении из чаги содержатся меланин, фенольные вещества, полисахариды и неорганические соединения. Меланин чаги проявляет высокую антиоксидантную активность и является основным действующим компонентом, обеспечивающим терапевтическую активность препарата Бефун-гин и водных извлечений из чаги. Их применяют в афицинальной медицине для лечения онкологических заболеваний. Получение дополнительного выхода биологически активных веществ (БАВ), в том числе и меланина, из шрота чаги является актуальной задачей. Это позволит разработать на основе экстрактов из шрота чаги новые лекарственные препараты.

Цель работы: разработать способы экстракции,шрота чаги и изучить состав и свойства полученных экстрактов.

Для достижения поставленной цели были решены следующие задачи:

- выявить оптимальный экстрагент и способ проведения экстракции шрота чаги;

- использовать математическое планирование эксперимента для получения максимального выхода БАВ в спиртовых экстрактах;

- изучить состав и свойства спиртовых и хлороформных экстрактов, а также экстракта, полученного с помощью метилтретбутилового эфира (МТБЭ экстракт);

- определить параметр для стандартизации лекарственных препаратов, разрабатываемых на основе экстрактов из шрота чаги.

Методы исследований. Для изучения экстрактов из шрота чаги использован широкий спектр методов, который соответствует современному состоянию науки. Применены: различные виды хроматографии, ИК и электронная спектроскопия, кондуктометрия, фотон - корреляционная спектроскопия (ФКС), методы химического и физико-химического анализа, а также стандартные методики определения физико-химических характеристик получаемых экстрактов и выделяемых соединений. Для оптимизации процессов получения« экстрактов применён модуль планирования эксперимента, метод латинских параллелепипедов первого порядка, пакета 8ТАТ18Т1СА 6.0.

Результаты измерений и исследований обрабатывались с применением методов математической статистики с использованием пакета программ 8ТА-ТКТГСА 6.0.

Научная новизна работы. Впервые разработаны способы получения* экстрактов из шрота чаги с применением органических растворителей.

Впервые показано, что при смене способа экстракции шрота чаги этиловым спиртом возможно получение экстрактов с преобладающим содержанием в них либо меланинов, либо фенольных веществ, обеспечивающих их высокую антиоксидантную активность (АОА).

Установлены закономерности извлечения экстрактивных веществ из шрота чаги в зависимости от типа экстрагента, температуры, времени, способа экстракции.

Показано, что меланин, выделенный из спиртового экстракта шрота чаги, схож по строению с меланином водного извлечения из чаги, имеет глобулы большего размера № превосходит его по антиоксидантной активности в два раза.

Впервые применён комплексный подход к исследованию качественного состава БАВ в экстрактах, полученных из шрота чаги.

Практическая ценность работы. Разработаны способы получения спиртовых и хлороформных экстрактов из шрота чаги с высокими антиоксидантны-ми свойствами (АОС), превышающими аналогичные свойства водных извлечений чаги и спиртовых настоек, выпускаемых фармацевтической промышленностью.

Показана возможность стандартизации лекарственных препаратов на основе шрота чаги по их АОА.

Определён количественный и качественный состав экстрактов, полученных из шрота чаги, способных обеспечить их высокую биологическую активность.

Разработаны и апробированы рецептуры косметических средств на основе спиртового экстракта из шрота чаги.

Реализация результатов. Полученные результаты могут быть реализованы на предприятиях фармацевтической и косметической промышленности, что позволит значительно расширить ассортимент эффективных препаратов обладающих АОС, а также - в процессе обучения студентов и магистров по специальностям, связанным с производством и использованием БАВ.

На защиту выносятся:

- экспериментальные данные, полученные при применении различных способов экстракции шрота чаги с помощью органических растворителей;

- результаты математического планирования эксперимента по оптимизации экстракции шрота чаги для получения максимального выхода БАВ в спиртовых экстрактах;

- экспериментальные данные о составе и свойствах спиртовых, хлороформных и МТБЭ экстрактов из шрота чаги.

Личный вклад автора состоит в выборе объектов и методов исследований, непосредственном проведении основных экспериментов, систематизации и интерпретации полученных результатов, формулировании научных положений и выводов.

Апробация работы и публикации. Результаты работы докладывались и обсуждались на: Общероссийской конференции молодых ученых с международным участием «Пищевые технологии» (Казань 2006г.); IX и X Международных конференциях молодых учёных «Пищевые технологии и биотехнологии» (Казань 2008 г. и 2009г.); II Международной научно-практической конференции «Постгеномная эра в биологии и проблемы биотехнологии» (Казань 2008г.), 2-ой Международной научно-практической конференции «Интеграция науки и производства» (Тамбов 2009г.); II Региональной научно-практической конференции «Синтез и перспективы использования новых биологически активных соединений» (Казань 2009г.); IV Всероссийской конференции «Новые достижения в химии и химической технологии растительного сырья» (Барнаул

2009г.).

Работа поддержана грантом ФПФСР МФП НТС «УМНИК-09» 2009 г. По теме диссертации опубликовано 2 статьи в научных журналах, 8 тезисов докладов и получено 3 патента РФ.

Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, 3 глав, выводов, библиографического списка и приложения. Работа изложена на 135 страницах машинописного текста, содержит 53 рисунка, 41 таблицу.

Заключение диссертации по теме «Фармацевтическая химия и фармакогнозия», Юмаева, Ляйсан Рифгатовна

выводы

1. Установлено, что оптимальным экстрагентом для проведения экстракции шрота чаги являются спиртовые растворы различной концентрации, позволяющие извлечь из шрота до 17% сухих веществ, 6% меланина, 75% фе-нольных веществ, 26% углеводов.

2. Показано, что проведение экстракции шрота чаги настаиванием -при использовании в качестве экстрагента 50% спирта - позволяет извлечь из него максимальное количество меланина — 6% с высоким значением АОА - 69 Кл/1 ООгмеланина.

3. Проведение экстракции шрота чаги кипячением - при использовании в качестве экстрагента 70% спирта - позволяет получить спиртовый экстракт с максимальной АОА — 3,92 Кл/мл за счёт высокого содержания в нём веществ фенольной природы.

4. С использованием математического планирования эксперимента осуществлена оптимизация получения спиртовых экстрактов из шрота чаги двумя способами экстракции. Подтверждено, что выбранные условия экстракции шрота чаги являются оптимальными.

5. С помощью ФКС, РЖ и УФ спектроскопии установлено, что меланин, выделенный из спиртовых экстрактов шрота чаги, близок по структурной организации меланинам из водного извлечения чаги, но имеет больший размер глобул и проявляет более высокую АОА.

6. Определён состав осадка, выделенного из спиртового экстракта шрота чаги. В нём содержатся: фенолкарбоновые кислоты - ванилиновая, сиреневая и оксибензойные кислоты; флавоноиды - апигенин, кверцетин, наринге-нин, робинетин и незначительное количество полярных липидов. Обнаружены семь веществ терпеновой природы, в том числе иридоиды, одиннадцать лакто-нов и их гликозидов, два из которых являются стереоизомерами. В осадке преобладает вещества, схожие по структуре с ЗР-гидрокси-8,24 -диен-ланоста-21,23-лактоном. Углеводный состав представлен гемицеллюлозами и полисахаридами или гликозидами, в состав которых входят ксилоза, глюкоза и арабино-за.

7. Установлено, что хлороформный экстракт из шрота чаги имеет высокую АОА, в 1,5 раз превышающую АОА спиртовых настоек промышленного производства и в 2 раза водного извлечения из чаги. С помощью ВЭЖХ и ТСХ в этих экстрактах показано присутствие нейтральных и полярных липидов, лак-тонов, терпенов, а также вещества схожего по структуре с 3(3-гидрокси-8,24 -диен- ланоста-21,23-лактоном.

8. Показано, что в экстракте, полученном из шрота чаги с помощью метилтретбутилового эфира, преобладают фенолкарбоновые кислоты и флаво-ноиды, присутствуют вещества терпеновой природы, такие, как тритерпены, тетратерпены, сесквитерпены и иридоиды, а также небольшое количество полярных липидов.

9. Проведённые исследования позволяют рекомендовать использование АОА для стандартизации разрабатываемых препаратов на основе экстрактов из шрота чаги.

Список литературы диссертационного исследования кандидат химических наук Юмаева, Ляйсан Рифгатовна, 2009 год

1. Саакян, К.Р. Чага (черный березовый гриб) FUNGUS BETULINUS. Аналитический обзор / Саакян К.Р., Ващенко К.Ф., Дармграй Р.Э . Львов.: Львовский государственный медицинский университет им. Д. Галицкого, 1986. - 152 с.

2. Якимов, П.А. Общая биологическая и химическая характеристика чаги как исходного сырья для получения лечебных препаратов // Чага и её лечебное применение при раке IV стадии. Л.: Медгиз, 1959. - С. 36-48

3. Шиврина, А. Н. О химическом составе чаги / А. Н. Шиврина, Е.В. Ло-вягина, Е. Г. Платонова // Чага и её лечебное применение при раке IV стадии. -Л.: Медгиз, 1959. С. 55 -61.

4. Шашкина, М. Я. Химические и медико-биологические свойства чаги (обзор) / М. Я. Шашкина, П. Н. Шашкин, А. В. Сергеев // Химико-фармацевтический журнал : научно-технический и производственный журнал. -2006. Том 40,N 10 . - С. 37-44.

5. Шиврина, А.Н. Физиологически активные вещества высших грибов (Кл. Basidiomycetes, пор. Hymenomycetailes). Автореферат дисс. на соиск. уч. ст. д-ра биол. наук /А.Н. Шиврина. Л., 1966. - 39 с.

6. Шиврина, А.Н. Биологически активные вещества высших грибов/ А.Н. Шиврина. М. -Л.: Наука, 1965. - 199с.

7. Ловягина, Е.В. Изучение продуктов гидролиза действующего начала чаги методами распределительной хроматографии/ Е.В. Ловягина, А.Н. Шиврина , Е.Г Платонова // Биохимия. 1958. - т.23. - вып.1. - С.41-46.

8. Шиврина, А.Н. К характеристике комплекса сложных органических соединений чаги / А.Н. Шиврина, Е.В. Ловягина, Е.Г. Платонова Чага и её лечебное применение при раке IV стадии. Л.: Медгиз, 1959. — С. 72-84.

9. Ловягина, Е.В. Исследование карбонильной фракции гидролизатов водорастворимого пигментного комплекса, образуемого трутовым грибом чага

10. E.B. Ловягина, A.H. Шиврина, Е.Г. Платонова // Биохимия. 1960. - Т.25. -№4. - С.640-645.

11. Ю.Шиврина, А.Н. Химическая и спектрофотометрическая характеристика воднорастворимых гуминоподобных соединений, образуемых грибом Inono-tus obliquus (Pers.) Pil. / A.H. Шиврина // Почвоведение. 1962. - №11. - C.51-60.

12. И.Козицина, JI.A. Применение УФ- ИК- и ЯМР-спектроскопии в органической химии /Л.А. Козицина, Н.Б. Куплетская. — М.: Издательство Высшей школы, 1979. -238с.

13. Сысоева, М.А. Разделение водных извлечений чаги с использованием этилацетата. II. Парамагнитные свойства хромогенов чаги/ М.А.Сысоева, В.Р. Хабибрахманова, B.C. Минкин и др.// Химия растительного сырья. — 2007. -№4. С.105-109.

14. Кукулянская, Т.А. Физико-химические свойства меланинов, образуемых чагой в природных условиях и при культивировании/ Т.А. Кукулянская, Н.В. Курченко, В.П. Курченко //Прикладная биохимия и микробиология. — 2002.-Т. 38, №1.-С. 68-72.

15. Соловьев, В.А. Применение метода парамагнитного резонанса для изучения чаги и продуктов метаболизма некоторых других дереворазрушаю-щих грибов/ В.А. Соловьев, A.M. Кутневич // Высшие грибы и их физиологически активные соединения. Л., — 1973. — С.35-39.

16. Шиврина, А.Н. Аминокислотный состав гумиподобных веществ, образуемых некоторыми древоразрушающими грибами / А.Н. Шиврина, P.A. Маслова// Почвоведение. 1963. - №11. - С.63-67.

17. Шиврина, А.Н. О полисахаридных комплексах гуминоподобных соединений, образуемых древоразрушающими грибами // А.Н. Шиврина, Е.Г.

18. Платонова// Продукты биосинтеза высших грибов и их использование. — M.-JL: Наука, 1966.-С. 38-42.

19. Рыжова, Г.Л. Химические и фармакологические свойства сухого экстракта чаги/ Г.Л. Рыжова, С.С.Кравцова, С.А.Матасова и др. // Химико-фармацевтический журнал. 1997. - №10. - С.44-47.

20. Clancy, С. М. Ultrastructural organization of eumelanin from Sepia officinalis measured by atomic force microscopy/ С. M. Clancy, J. D. Simon // Biochemistry. 2001.-40.-P. 13353-13360

21. Liu, Y. The effect of preparation procedures on the morphology of melanin from the ink sac of Sepia officinalis/ Y. Liu, J. D. Simon// Pigm. Cell Res. 2003. -16.- P.72-80.

22. Clancy, С. M. A hierarchical self-assembly of eumelanin/C. M. Clancy, J. B.Nofsinger, R. K.Hanks, J. D. Simon// J. Phys. Chem. 2000. - В 104. - P.7871-7873.

23. Wheeler, M. H. Ultrastructure of melanin formation in Verticillium dahl-iae with (+)-scytalone as a biosynthetic intermediate/ M. H. Wheeler, W. J.Tolmsoff, S.Meola //Can. J. Microbiol. 1976. - 22. - P.702-711.

24. Сысоева, М.А. Исследование золя вводных извлечений чаги. IX. Определение размеров частиц дисперсной фазы золя извлечений из чаги / М.А. Сысоева,В.Р. Хабибрахманова, B.C. Гамаюрова, Л.А. Кудрявцева // Химия растительного сырья. 2008 - 2. - С.75 - 80.

25. Кукулянская, Т.А. Физико-химические свойства меланинов, образуемых чагой в природных условиях и при культивировании/ Т.А. Кукулянская, Н.В. Курченко, В.П. Курченко //Прикладная биохимия и микробиология. -2002.-Т. 38, №1.-С. 68-72

26. Соловьев, В.А. Применение метода парамагнитного резонанса для изучения чаги и продуктов метаболизма некоторых других дереворазрушаю-щих грибов/ В.А. Соловьев, A.M. Кутневич // Высшие грибы и их физиологически активные соединения. Л., - 1973. - С.35-39.

27. Бабанин, В.Ф. О природе линий в спектрах ЭПР гумусовых кислот/ В.Ф.Бабанин, Н.П. Ильин, Д.С.Орлов и др. // Почвоведение. 1977. - 1. - С. 65-72.

28. Бабицкая, В.Г. Меланиновый комплекс гриба Inonotus obliquus / В.Г. Бабицкая, В.В. Щерба, Н.В. Иконникова// Прикладная биохимия и микробиология. 2000. - Т. 36, №4. - С. 439-444.

29. Драгендорф, Г. Химическое исследование гриба, встречающегося на белой березе (Betula alba) и близких к ней видах / Г. Драгендорф // Фармацевтический журнал. 1864. — Т. 1. —№10-13.

30. Булатов, П.К. Чага, её свойства / П.К. Булатов, М.П.Березина, П.А. Якимов // Чага и её лечебное применение при раке IV стадии. — Л.: Медгиз, 1959.-С. 17-23.

31. Шиврина, А.Н. О химическом составе чаги / А.Н. Шиврина, Е.В. Ловя-гина, Е.Г. Платонова // Чага и её лечебное применение при раке IV стадии. — Л.: Медгиз, 1959.-С. 55-61

32. Платонова, Е.Г. О содержании белка в плодовых телах древоразру-шающих грибов /Е.Г. Платонова // Кормовые белки и физиологические вещества для животноводства. М.-Л.: Наука - 1965. - С. 55-58.

33. Шашкина, М.Я. Чага, чаговит, чаголюкс как средство профилактики и лечения больных/ М.Я. Шашкина, П.Н Шашкин., А.В Сергеев. М.: Эдас.-2008.-80с.

34. Якимов, П.А Зольные элементы чаги и препарата из неё / П.А. Якимов, М.Ф. Ступак // Чага и её лечебное применение при раке IV стадии. Л.: Медгиз, 1959.-С. 50-54.

35. Кузнецова, О.Ю. Физико-химические характеристики и биологическая активность водных извлечений и полифенологсикарбонового комплекса чаги:автореф. дис. на соиск. уч. степ. канд. хим. наук / О.Ю. Кузнецова. Казань, 2004.- 19 С.

36. Якимов, П.А. Методы переработки чаги в лекарственные формы// П.А. Якимов, С.М. Андреева, Е.В. Алексеева// Комплексное изучение физиологически активных веществ низших растений. M.-JL: Наука, 1961. - С. 129138.

37. Фармакопейная статья на Бефунгин «ФС 42-3291-96»

38. Калашникова, Е.А. Изучение химического состава и стандартизация сырья чаги и лекарственного препарата «Бефунгин»: автореф.дис. . канд.фарм.наук/ Е.А.Калашникова. — Пятигорск, 2003. — 23с.

39. Корсун, В.Ф. Клиническая фитотерапия в онкологии / В.Ф. Корсун, К.А. Трескунов. Минск: Беларусь - 2003. - С. 172-175.

40. Шиврина, А.Н. О полисахаридных комплексах гуминоподобных соединений, образуемых древоразрушающими грибами / А.Н. Шиврина, Е.Г. Платонова// Продукты биосинтеза высших грибов и их использование. M.-JL: Наука, 1966.-С. 38-42.

41. Mizuno, Т. The extraction and development of antitumoractin polysaccharides from medicinal mushrooms in Japan/ T. Mizuno// Int. J. Med. Mushrooms. 1999. - 1. - P. 9-29.

42. Хабибрахманова, В.P. Состав и свойства дисперсной фазы золя водных извлечений чаги: автореф. дис. канд. хим. наук / В.Р. Хабибрахманова. -Казань, 2008.- 18 с.

43. Хабибрахманова, В.Р. Исследование липидного состава водных извлечений чаги I. Липиды, извлекаемые этилацетатом/ B.P. Хабибрахманова, М.А. Сысоева, B.C. Гамаюрова и др.// Новые лекарственные средства: успехи и перспективы. Уфа: Гилем, 2005. С. 133-135.

44. Сысоева, М.А. Исследование золя водных извлечений чаги. XI. Липиды водного извлечения чаги/ М.А. Сысоева, В.Р.Хабибрахманова, В.С.Гамаюрова, А.Х.Тазеева // Химия растительного сырья. 2008 - 3. - С. 119 -122.

45. Сысоева М.А. Высокоактивные антиоксиданты на основе гриба Inono-tus obliquus: автореф. дис. д-ра. хим. наук / М.А. Сысоева. — Казань, 2009. — 32 с.

46. Шиврина, А.Н. Содержание соединений типа фолиевой кислоты в дре-воразрушающих грибах / А.Н. Шиврина, Е.В. Ловягина // Комплексное изучение физиологически активных веществ низших растений. — М.-Л.: Наука, 1961.- С. 57-62.77

47. Ловягина, Е.В. Изучение продуктов гидролиза действующего начала чаги методами распределительной хроматографии / Е.В. Ловягина, А.Н. Шиврина, Е.Г. Платонова// Биохимия. 1958. - Т.23. - №1. - С.41-46.

48. Ловягина, Е.В. Исследование карбонильной фракции гидролизатов водорастворимого пигментного комплекса, образуемого трутовым грибом чага / Е.В. Ловягина, А.Н. Шиврина, Е.Г. Платонова // Биохимия. 1960. - Т.25. - №4.- С.640-645.

49. Разделение водных извлечений чаги с использованием этилацетата. IV. Состав веществ фенольной и терпеновой природы, отделяемых из водного извлечения чаги этилацетатом / Сысоева М.А. и др. // Химия растительного сырья. 2008. - №4. - С. 111-114.

50. Назаренко, М.В. Природные азулены и сесквитерпеновые соединения азуленового ряда (проазулены) / М.В. Назаренко // В кн.: Растительное сырье. — М.-Л.: Изд-во АН СССР, 1961. Вып. 8. - С. 83-210.

51. Nakajima, Y. Antioxidant small phelic ingredients in Inonotus obliquus (persoon) Pilat (Chaga) / Y.Nakajima, Y.Sato, T. Konishi// Chem Pharm Bull (Tokyo). 2007. - 55. - 2. - P. 1222-1226.

52. Машковский, М.Д. Лекарственные средства / М.Д. Машковский. — М.: Медицина, 1977. 1 т. - С. 304. .

53. Шиврина, А.Н. Биологически активные вещества высших грибов / А.Н. Шиврина. М.-Л.: Наука, 1965.-199 с.

54. Калашникова, Е.А. Изучение химического состава и стандартизация сырья чаги и лекарственного препарата «Бефунгин»: автореф.дис. канд.фарм.наук/ Е.А.Калашникова. — Пятигорск, 2003. — 23с

55. Beecher, G.R. Overview of dietary flavonoids: nomenclature, occurrence and intake / G.R. Beecher // J Nutr. 2003. - 133. - 10. - P. 3248-3254.

56. Rice-Evans, C.A. Flavonoids in Health and Disease./ Rice-Evans, C.A //-New York: Packer Marcel Dekker. 1997. - 66. - 2. - P.25-28.

57. Knekt, P. Quercetin intake and the incidence of cerebrovascular disease/ P. Knekt, S. Isotupa, H. Rissanen // J Clin Nutr. 2000. - 54. - 5. - P.415-417.

58. Janssen, K. Effects of the flavonoids quercetin and apigenin on hemostasis in healthy volunteers: results from an in vitro and a dietary supplement study/ К Janssen, RP Mensink, FJ Cox//Am J Clin Nutr. 1998. - 67. - 2. - P.255-262.

59. Williams, R.J. Flavonoids: antioxidants or signalling molecules? / R.J. Williams, J.P. Spencer, C.Rice-Evans // Free Radic Biol Med. 2004. - 36. 7. -P.838-849.

60. Heijnen, C.G. Flavonoids as peroxynitrite scavengers: the role of the hy-droxyl groups/ C.G.Heijnen, G.R.Haenen, F.A.van Acker, W.J.van der Vijgh, A. Bast//Toxicol In Vitro. -2001. 15. - 1. -P.3-6.

61. Максименко, Г.Н. О противовоспалительном действии азулена мятного масла / Г.Н Максименко // Фармакология и токсикология. 1964. - т.27. - № 5. - С. 51-52.

62. Корти, В. Местное лечение специфических язвенных циститов гвайа-зуленом / В. Корти // Урология. 1963. - № 2. - С. 51-52.

63. Гордон, М. Азулены / М. Гордон // Успехи химии. 1953. - №8. -С.948-1001.

64. Болдина, И.Г. Фармакологическое исследование азулена полыни Си-верса / И.Г Болдина // Растительные ресурсы. 1983. - т. 19. - Вып.1. - С. 54-60.

65. Kahlos, К. 3p,22-Dihydroxylanosta-7,9(ll),24-triene, a new minor compound from Inonotus obliquus / K. Kahlos, R. Hiltunen // Planta Medica. 1986. - № 52. - pp. 495-496.

66. Kahlos, K. 3P-hydroxy-lanosta-8,24-dien-21-al,a new triterpene from Inonotus obliquus / K. Kahlos, R. Hiltunen, M.V. Schantz // Planta Medica. 1984. -№50.-pp. 197-198.

67. Kahlos, K. Antitumor activity of triterpenes in Inonotus obliquus / K. Kahlos, L. Kangas, R. Hiltunen // Planta Medica. 1986. - № 52. - 554 p.

68. Nakata, T. New lanostane triterpenoids, inonotsutriols D and E from Inonotus Obliquus / T. Nakata, S. Taji, T. Yamada // Bulletin of Osaka University of Pharmaceutical Sciences. 2009. - V. 3. - pp. 53-64.

69. Lee, I.K. New antioxidant polephenols from the medicinal mushroom Inonotus obliquus / I.K. Lee, Y.S. Kim, Y.W. Jang//Bioorg. Med. Chem.Lett. 2007. - Vol. 17. - № 24. - P. 6678-6681

70. Park, YK, (2004). Chaga mushroom extract inhibits oxidative DNA damage in human lymphocytes as assessed by comet assay/ Lee HB, Jeon EJ, Jung HS, Kang MH//. BioFactors -2004. 21 - p 109-12

71. Kim, YO, "Anti-cancer effect and structural characterization of endo-polysaccharide from cultivated mycelia of Inonotus obliquus/YO Kim, H.W Park, JY Lee // Life Sci -2005 -1 -p: 72-80.

72. Nomura, M,. Inotodiol, a lanostane triterpenoid, from Inonotus obliquus inhibits cell proliferation through caspase-3-dependent apoptosis/ M. Nomura, T. Ta-kahashi, A. Uesugi, R Tanaka R// Anticancer Research 2008 - 2 - P/ 2691-2696.

73. Shin, Y. Chemical constituents of Inonotus obliquus I. A new triterpene, 3p-hydroxy-8,24-dien-lanosta-21,23-lactone from sclerotium / Y. Shin, Y. Tamai, M. Terazawa // Euras. J. Forest Res. 2000. - V 1. - pp. 43-50.

74. Shin, Y. Chemical constituents of Inonotus obliquus III. A new triterpene, 3 3,22,25-trihydroxy-lanosta-8-ene from sclerotium / Y. Shin, Y. Tamai, M. Terazawa // Int. J. of Medicinal Mushrooms. 2000. - V. 2,1. 3. - pp. 201-207.

75. Shin, Y. Chemical constituents of Inonotus obliquus II. A new triterpene, 21,24-cyclopentalanosta-3b,21,25-triene from sclerotium / Y. Shin, Y. Tamai, M. Terazawa // Journal of Wood Science. -2001. V. 47,1. 4. - pp. 313-316.

76. Shin, Y. Triterpenoids, steroids and a new sesquiterpen from Inonotus obliquus (Pers.: Fr.) Bond, et Sing. / Y. Shin, Y. Tamai, M. Terazawa // Int. J. of Medicinal Mushrooms. 2001. - V. 3. - 250 p.

77. Shin, Y. Chemical constituents of Inonotus obliquus IV/Triterpene and steroids from cultured mycelia / Y. Shin, Y. Tamai, M. Terazawa // Euras. J. Forest Res. 2001. - V 2. - pp. 27-30

78. Ludwiczak, R.S. Badania skladnikow chemicznych Inonotus obliquus. Lanosterol/ R.S. Ludwiczak, U. Wrzeciono// Roczn. Chem. 1960. - 34. - 1. -P.77-84.

79. Park, Y.M. In vivo and in vitro anti-inflammatory and anti-nociceptive effects of the methanol extract of Inonotus obliquus / Y.M. Park, J.H. Won, Y.H. Kim// J. Ethnopharmacol. 2005. — 1. — P.120-128.

80. Романова, Г.В. Целительная чага. Лечение рака, язвы и других заболе-ваний/.Г.В. Романова. М.: Невский проспект, 2001. - 320 с.

81. Романова, JI.H. Высшие грибы и их физиологически активные соединения/ Г.В. Романова. JL: Наука, 1973, - 120с.

82. Махлаюк, В.П. Лекарственные растения в народной медицине./ В.П. Махлаюк. Саратов: Приволжское кн. изд-во, 1993. - 544с.

83. Березина, М.П. К анализу действия чаги на организм / М.П. Березина, М.В. Еременко, С.М. Андреева, П.А. Якимов, Е.А. Гусева// Комплексное изучение физиологически активных веществ низших растений. М.-Л.: Наука, 1961.-С. 166-189.

84. Петряевская, Н.В. О фармакологических свойствах осажденного препарата чаги / Н.В. Петряевская, Е.А. Спалва// Продукты биосинтеза высших грибов и их использование. М.-Л.: Наука.- 1966. — С. 69-71.

85. Досычев, Е.А., Быстрова В.Н. Вестник дерматологии и венерологии. -1973.-№5.-С. 79-83.

86. Youn, M.J. Chaga mushroom (Inonotus obliquus) induces G0/G1 arrest and apoptosis in human hepatoma HepG2 cells/ M.J.Youn, J.K. Kim, S.Y. Park // World Jgastroenterol. 2008. - Vol. 14. - 4. - P.511-517.

87. Park, J.R. Reversal of the TPA-induced inhibition of gap junctional intercellular communication by Chaga mushroom (Inonotus obliquus) extract: effects on

88. MAP kinases /J.R. Park, J.S. Park, J.W. Hwang // Biofactors. 2006. - Vol. 27.-1. -P. 147-155.

89. Rzymowska, J. Antimitotic activity of aqueous extracts of Inonotus obliquus / J. Rzymowska// Boll. Chim. Farm. 1996. - Vol.135. - 5. - P. 306-309.

90. Rzymowska, J. The effect of aqueous extracts from Inonotus obliquus on the mitotic index and enzyme activities / J. Rzymowska// Boll. Chim. Farm. — 1998. -Vol.137.- 1.-P. 13-15.

91. Журавлева, Т.Б. Влияние чаги на дистрофические изменения в печени, вызванные четыреххлористым углеродом/ Т.Б. Журавлева, Е.А. Сплава // Чага и её лечебное применение при раке IV стадии. Л.: Медгиз, 1959. — С. 132-140.

92. Мартынова, Е.Я. Комплексное изучение физиологически активных веществ низших растений / Е.Я. Мартынова . М.-Л., 1961. - 235 с.

93. Мартынова, Е.Я. Продукты биосинтеза высших грибов и их использование/ Е.Я. Мартынова.- М.-Л.: Наука, 1966, с. 89-99.

94. Мартынова, Е.Я. Высшие грибы и их физиологически активные соединения/ Е.Я. Мартынова,- Л.: Наука, 1973, с. 83-94, 108-115.

95. Гаврилов, А.С. Адаптагенное действие препарата чаги / А.С. Гаври-лов, А.А. Щеголев, Е.В. Гусельникова// Химико-фармацевтический журнал. -2003. Т.37. - № 2. - С.43-46.

96. Рудаков, В.Ф. Влияние чаги на развитие устойчивости мышей к высокой температуре/ В.Ф. Рудаков// Высшие грибы и их физиологически активные соединения. Л.: Наука, 1973. - С. 49-52.

97. Еременко, М.В. Внутривенное введение чаги/ М.В. Еременко, С.М. Андреева, П.А. Якимов// Продукты биосинтеза высших грибов и их использование. М.-Л.: Наука, 1966. - С. 71-77.

98. Капич, А.Н. Антиокисдантные и проокисдантные свойства ксило-трофных базидиомицетов/А.Н. Капич// Успехи медицинской микологии.-Материалы третьего всероссийского конгресса по медицинской микологии.-Т5, -М.: 2005.-336 с.

99. Булатов, П.К. Клинические наблюдения за лечебным действием чаги на больных раком IV стадии/ П.К. Булатов, Е.Я. Мартынова //Комплексное изучение физиологически активных веществ низших растений. М.-Л.: Наука, 1961.-С. 354.

100. Мартынова, Е.Я. Клинические наблюдения больных раком пищевода IV стадии пр лечении чагой/ Е.Я Мартынова //Чага и ее лечебное применение при раке IV стадии. Медгиз, 1959, с. 271-305.

101. Журавлева, Т.Б. Влияние чаги на дистрофические изменения в печени, вызванные четыреххлористым углеродом/ Т.Б. Журавлева, Е.А. Сплава // Чага и её лечебное применение при раке IV стадии. — Л.: Медгиз, 1959. С. 132-140.

102. Комяков, И.П. Влияние настоя чаги на токсичность и противоопухолевую активность этимидина / И.П. Комяков // Вопросы онкологии. — 1967. — Т.13. -Ж2.-С.112.

103. Пясковский, С. Применение препаратов из чаги при лечении злокачественных опухолей/ С. Пясковский, С. Рихтер//Комплексное изучение физиологически активных веществ низших растений. — М.-Л.: Наука, 1961. С. 258-263.

104. Шварц, С. Применение препаратов из чаги/ С. Шварц, А Гельбих, З.Ошевский // Комплексное изучение физиологически активных веществ низших растений. АН СССР. М.-Л., 1961, с. 266-267.

105. Овчинникова //И. Чага и ее лечебное применение при раке IV стадии. Медгиз, 1959, с. 306-309.

106. Гроздов, Т.М. Сборник научно-практических работ врачей Тамбовской области. Тамбов: Тамбов, кн. изд., 1959, вып. 2, с. 132-138.

107. Ерусалимский, А.Л. Врачебное дело. 1962, № 6, с. 144-145.

108. Коровин, М.Ф. Вопросы научно-практической оториноларингологии. Матер. 3 Карагандинской областной конф. отоларингологов. Караганда, 1972, с. 143-144.

109. Лазовская, A.B. О токсичности чаги / A.B. Лазовская // Чага и её лечебное применение при раке IV стадии. Л.: Медгиз, 1959. - С. 96-102.

110. Лазовская, A.B. Об отсутствии у чаги пирогенных свойств / A.B. Лазовская // Чага и её лечебное применение при раке IV стадии. — Л.: Медгиз, 1959.-С. 103-104.

111. Спалва, Е.А. Определение токсичности некоторых очищенных препаратов из чаги / Е.А. Спалва, Н.В. Петряевская //Комплексное изучение физиологически активных веществ низших растений. М.-Л.: Наука, 1961. - С. 206-209.

112. Яцкевич, В.В. Влияние настоя чаги на показатели крови / В.В. Яц-кевич // Чага и её лечебное применение при раке IV стадии. Медгиз, 1959, с. 313-317

113. Маттисон, Н.Л.Влияние чаги на активность некоторых ферментов у больных IV стадии рака/ Н.Л. Маттисон //Чага и её лечебное применение при раке IV стадии. Л.: Медгиз, 1959. - С. 246-260.

114. Иванова, З.В.Изменение общего количесвта белка и белковых фракций сыворотки у больных раком IV стадии, лечившихся чагой/3.В. Иванова //Чага и её лечебное применение при раке IV стадии. JL: Медгиз, 1959. - С. 239-245.

115. Кроткина, H.A. Влияние чаги на перевиваемые опухоли у крысы ии./ Н.А Кроткина/ / Чага и её лечебное применение при раке IV стадии. Л.: Медгиз, 1959.-С. 114-118.

116. Мартынова, Е. Я. Клинические наблюдения за больными язвенной болезнью, леченными бефунгином // Высшие грибы и их физиологически активные соединения. Л.: «Наука», 1973. С. 91-94.

117. Рачагов, A.A., ФедотовА.А. О лечении больных язвенной болезнью бефунгином/ A.A. Рачагов, А.А Федотов// Советская медицина, 1973. №12. -С. 81-84.

118. Шашкина, М. Я. Чага в онкологии: Обзор / М.Я. Шашкина, П.Н. Шашкин, A.B. Сергеев// Российский биотерапевтический журнал 2005г. т. 4 № 4 - С.59-72

119. Патент РФ № 2238751 от 3.02.03 г.

120. Лахтин, В.М., Корсун В.Ф., Лахтин М.В., Корсун Е.В. Практическая фитотерапия. 2004, № 3, с. 9-16

121. Корсун, В.Ф Фитолектины. Руководство по клинической фитотерапии/ В.Ф Корсун. -. М.: Практ.мед., 2007, с. 172-175, 200-204.

122. Хубулова, А.Е. Антиканцерогенная активность препаратов эссен-циале -Н и чаговит/ А.Е. Хубулова, Ф.К.Джиоев, А.В.Сергеев//. Российский биотерапевтический журнал. 2008 № 1 - С. 10-15.

123. ВФС 42-659-94 Спиртовая настойка чаги

124. Mouria, Michelle, Gukovskaya A.S., Jung Yoon et al. Int. J. Cancer 2002, vol. 98, № 5, pp. 761-769.

125. Государственная фармакопея СССР: Вып. 2. Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье. 11-е изд., доп. — М.: Медицина, 1990 — 400с.

126. Патент 2 336 888 Способ получения спиртового экстракта чаги / Сысоева М.А., Хабибрахманова В.Р., Юмаева Л.Р., Гамаюрова B.C.: заявитель и патентообладатель КГТУ. №2336888; заявл.2007115936/15, 20.04.2007;опубл. 27.10.2008 Бюл.№30.

127. Патент 2 341 277 Способ получения спиртового экстракта чаги / Сысоева М.А., Хабибрахманова В.Р., Юмаева Л.Р., Гамаюрова B.C.: заявитель и патентообладатель КГТУ. №2341277; заявл.2007126575/12.07.2007 ;опубл. 20.12.2008 Бюл.№35.

128. Методы биохимического исследования растений/ А.Н.Ермаков, В.В. Арасимович, Н.П. Ярош и др; под ред. Ермакова.-З-е изд.-Л.:Агропромиздат.-1987.-430с.

129. ГОСТ 26878-86. Методы определения хлоридов

130. ГОСТ 26927-86 Методы определения pH в неводных средах

131. Государственная фармакопея СССР: Вып.1. Общие методы анализа. 11-е изд., доп. М.:Медицина, 1987. - 336 с.

132. Муравьева, Д.А. Фармакогнозия / Д.А. Муравьева, И.А. Самылина, Г.П. Яковлева. М.Медицина, 2002. - 656 с.

133. Ермаков, А.И. Методы биохимического исследования растений/ А.И.Ермаков, В.В. Арасимович, М.И. Смирнова-Иконникова, И.К. Мурри. -М., 1972.-400с.

134. Сафонова, М.Ю. Спектрометрический метод определения содержания полисахаридов в слоевищах Cetraria Islandica (L.) Ach. / М.Ю. Сафронова,

135. Е.И. Саканян, Е.Е. Лесиовская// Растительные ресурсы. 1999. - Т.35. - Вып. 2.1. С. 101-105.

136. Полюдек-Фабини, Р. Органический анализ/ Р. Полюдек-Фабини, Т Бейрих. Л., 1981.-623с

137. Кейтс, М. Техника липидологии/ М. Кейтс. М.: Изд-во Мир, 1975.- 324с.

138. Бергельсон, Л.Д. Препаративная биохимия липидов / Л.Д. Бергельсон.-М.: Наука, 1981.-259 с.

139. Cazes, J. Encyclopedia of Chromatography/J.Cazes. Florida. Atlantic University, Boca Raton, U.S.A., 2001. 927p

140. Кирхнер, Ю. Тонкослойная хроматография. T.2. ПО. Кирхнер. М.: Изд-во «Мир», 1981. - 524с.

141. Хроматография на бумаге / под ред. И.М. Хайса — М.: Издательство иностранной литературы, 1962. — 365 с.

142. Запрометов, М. Н. Основы биохимии фенольных соединений: учебное пособие для биол. специальностей университетов / М. Н. Запрометов М.: Высшая школа, 1974. - 214 с

143. Георгиевский, В.П. Биологически активные вещества лекарственных растений / В.П. Георгиевский, Н.Ф. Комисаренко, С.Е. Дмитрук. — Новосибирск: Наука, 1990. 333 с.

144. Шталь, Э. Хроматография в тонких слоях. М.: Мир, 1965. 508с.

145. Рыбалко, К. С. Природные сесквитерпеновые лактоны/ К.С. Рыбалко М. : Медицина 1987 - 378с

146. Минкин, B.C. Исследование процессов вулканизации жидких тиок-лов диоксидом марганца/ B.C. Минкин, Л.А. Аверко-Антонович, П.А. Кирпичников // Высокомолекулярные соединения. 1981. - Т. 23. - С.593-596.

147. Шиврина, А.Н. Химическая и спектрофотометрическая характеристика воднорастворимых гуминоподобных соединений, образуемых грибом Inonotus obliquus (Pers.) Pil. / А.Н. Шиврина // Почвоведение. 1962. - №11. -С.51-60.

148. Козицина, JI.А. Применение УФ- ИК- и ЯМР-спектроскопии в органической химии /Л.А. Козицина, Н.Б. Куплетская. М.: Издательство Высшей школы, - 1979. - 238с.

149. Орлов, Д.С. Практикум по биохимии гумуса / Д.С. Орлов, Л.А. Гришина, Н.Л. Ерошичева. -М.: Изд-во Моск. ун-та, 1969. 156 с.

150. Орлов, Д.С. Гумусовые кислоты почв и общая теория гумификации / Д.С. Орлов. М.: Изд-во Моск. ун-та, 1987. - 311 с.

151. Шатц, В. Д., Сахартова О. В. Высокоэффективная жидкостная хроматография: Основы теории. Методология. Применение в лекарственной химии. — Рига: Зинатне. — 1988. — 390 с. — ISBN 5-7966-0035-4.

152. Сычев, С. Н Высокоэффективная жидкостная хроматография как метод определения фальсификации и безопасности продукции /С.Н. Сычев, В.А. Гаврилина, P.C. Музалевская // М.: Изд-во Химия.-2005.- С. 148 с.

153. Стыскин, Е. Л., Ицкинсон Л. Б., Брауде Е. В., "Практическая высокоэффективная жидкостная хроматография. М.: Химия, 1986.

154. Столяров, Б. В., Савинов И. М., Витенберг А. Г., Карцова Л. А., Зенкевич И. Г., Калмановский И. В., Каламбет Ю. А. "Практическая газовая и жидкостная хроматография: Учеб. Пособие", Спб: Изд-во С.-Петербург. Ун-та, 2002.

155. Абдуллин, И.Ф. Электрогенерированный бром реагент для определения антиоксидантной способности соков и экстрактов/ И.Ф. Абдуллин, Е.Н.Турова, Г.К Будников // Заводск. лаборатория. - 2002. - Т.68. - №9. - С.12-15.

156. Zakharova, L.Ya. Nanosized reactors based on polyethylene imines: from microheterogeneous systems to immobilized catalysts/ L.Ya. Zakharova, A.R. Ibragimova, L.A. Kudryavtseva // Langmuir. 2007. 23. p. 3214-3224.

157. Хабибрахманова, В.Р. Применение фотонно-корреляционной спектроскопии в исследовании золя извлечений чаги/ В.Р. Хабибрахманова, J1.3. Ризванова, B.C. Гамаюрова и др. // В материалах научной сессии. Казань: КГТУ, 2006. С.-258.

158. Кузнецова, О.Ю. Антиоксидантная активность водных извлечений и полифенолов чаги / О.Ю.Кузнецова, М.А. Сысоева, B.C. Гамаюрова и и др.// В матер. III Всероссийской конференции «Химия и технология растительных веществ». Саратов,2004. - С. 149-151.

159. Вершинин, В. И.,. Планирование и математическая обработка результатов химического эксперимента: учебное пособие/В .И. Вершинин, Перцев.- Омск: Изд-во ОмГУ, 2005. С.243.

160. Методические указания к обработке результатов эксперимента по технологии лекарств/ А.И. Тенцова, Т.А. Грошовый, В.А. Головкин, С.М. Мах-камов; Медицина. Ташкент, 1980. — 69 с.

161. Красовский, Г.И. Планирование эксперимента/ Г.И Красовский, Г.Ф Филаретов- Мн.:: Изд-во БГУ, 1982. 302 с.

162. Пономарев, В.Д. Планирование эксперимента/ В.Д Пономарев // Хим.- фарм. Журнал. 1973. - №7. - С. 23-28.

163. Юмаева, Л.Р. Фотонно-корреляционная спектроскопия спиртовых извлечений чаги / Л.Р. Юмаева, М.А.Сысоева, B.C. Гамаюрова // X Международная конференция «Пищевые технологии и биотехнологии». — Казань: Изд-во1. Отечество», 2009, -С.278.

164. Наканиси, К. Инфракрасные спектры и строение органических соединений/ К. Наканиси. М.: Мир, 1965. - 220 с.

165. Юмаева, JI.P Исследование осадка спиртовых извлечений шрота ча-ги/Л.Р.Юмаева, М.А.Сысоева и др. // IV Всероссийская конференция «Новые достижения в химии и химической технологии растительного сырья». Барнаул: Изд-во «Алт. ун-та», 2009.-Кн.2. -С. 129.

166. Mazurkiewicz, W. Analisis of aqueous extract of Inonotus obliquus/ W.Mazurkiewicz//Acta Pol Pharm. 2006. - 63. - 6. - P. 497-501.

167. Файзрахманова, И.Х. Извлечение двухатомных фенолов метилрет-бутиловым эфиром из водных сред: автореф. дис. канд. хим. наук/И.Х. Файзрахманова. Уфа, 2004. - 23.