Фармакогностическое изучение отдельных представителей рода Dioscorea L. тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.04.02, кандидат наук Бу Вэй

• Бу Вэй
• кандидат наук
• 2015

Оглавление диссертации кандидат наук Бу Вэй

ОГЛАВЛЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Ботанико-фармакогностическая характеристика диоскореи

1.1.1. Характеристика семейства диоскорейных

1.1.2.Ботанико-фармакогностическая характеристика

диоскореи ниппонской и диоскореи супротивной

1.1.3. Особенности заготовки и сушки сырья диоскореи

1.1.4. Химический состав метаболома диоскореи ниппонской и диоскореи супротивной

1.2. Фармакологическая активность и медицинское применение сырья и препаратов диоскореи

1.3. Стандартизация сырья диоскореи

Выводы главы 1

ГЛАВА 2. Объекты и методы исследования

ГЛАВА 3. Морфолого-анатомическое изучение двух видов

диоскореи

3.1. Изучение внешнего вида сырья диоскореи ниппонской и диоскореи супротивной

3.2. Анатомическое изучение корневищ с корнями диоскореи ниппонской

Выводы главы 3

ГЛАВА 4. Изучение состава биологически активных веществ диоскореи ниппонской и диоскореи супротивной и определение некоторых числовых показателей

4.1. Изучение состава БАВ сырья диоскорей ниппонской и супротивной с помощью качественных реакций

4.2.Изучение состава БАВ двух видов диоскореи методом ТСХ

4.3. Определение некоторых числовых показателей сырья диоскореи

4.3.2. Определение содержания экстрактивных веществ

Выводы главы 4

ГЛАВА 5. Количественная оценка содержания отдельных групп

БАВ диоскореи ниппонской и диоскореи супротивной

5.1. Определение содержания суммы стероидных сапонинов

и диосгенина в сырье двух видов диоскореи

5.2. Определение содержания полисахаридов в сырье диоскореи

5.3. Определение содержания флавоноидов в сырье диоскореи

5.4. Определение содержания дубильных веществ в сырье диоскореи

5.5. Определение содержания в сырье диоскореи органических кислот

5.6. Определение содержания аскорбиновой кислоты в сырье диоскореи супротивной

5.7. Определение содержания аминокислот в сырье диоскореи ниппонской и супротивной

Выводы главы 5

ГЛАВА 6. Изучение фармакологической активности сырья

диоскореи ниппонской и диоскореи супротивной

6.1. Изучение гипогликемической активности полисахаридов

диоскореи супротивной

6.2. Изучение иммуномоделирующего действия сапонинов

диоскореи ниппонской при адъювантном артрите

Выводы главы 6

ГЛАВА 7. Разработка проекта ФС «Корневища с корнями

диоскореи ниппонской»

Выводы главы 7

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

Литература

Приложение

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ЛР - лекарственное растение

ЛРС - лекарственное растительное сырье

БАВ - биологически активные вещества

БАД - биологически активная добавка

КТМ —китайская традиционная медицина

НД - нормативный документ

ГФ - государственная фармакопея

ОФС — общая фармакопейная статья

ФС - фармакопейная статья

ЛП - лекарственный препарат

ТСХ - тонкослойная хроматография

ВЭЖХ - высокоэффективная жидкостная хроматография

МС - масс-спектрометрия

ПДА - детектор с диодной матрицей

Ш— расстояние от линии старта до середины пятна, отнесенное к расстоянию. От линии старта до линии фронта растворителя

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Фармакогностическое изучение отдельных представителей рода Dioscorea L.»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. Для флоры некоторых регионов России и Китая характерно наличие растений, применяемых в медицине и относящихся к одному ботаническому роду. Представителями этой группы лекарственных растений являются растения рода Dios corea L.

Род Dioscorea L. включает более 650 видов, которые широко распространены на всех пяти континентах. Диоскорея ниппонская — Dioscorea nipponica Makino — двудомная лиана, произрастает в России на территории Дальнего Востока. В Китае диоскорея ниппонская встречается практически по всей северо-восточной части страны. Сырье этого вида диоскореи разрешено к медицинскому применению в обеих странах. Диоскорея супротивная — Dioscorea opposita Thunb - древнейшее культурное растение Китая и Японии, используемое и как лекарственное, и как пищевое растение и известное как «китайский ямс».

В первой половине прошлого столетия медицинское применение диоскореи было ограниченным. Настойка из корневищ с корнями диоскореи входила в состав комплексного препарата «Холелитин» №1, рекомендованного для лечения желчно-каменной болезни. Научный и практический интерес к растениям рода диоскорея возник в 60-70-х годах XX в. как к источнику диосгенина, используемого в производстве кортикостероидных препаратов. Из-за невысокого содержания диосгенина сырье диоскореи ниппонской в России использовалось для получения препарата «Полиспонин», представляющего сумму водорастворимых стероидных сапонинов и применяемого как гипохолистеринемическое средство. Корневища с корнями диоскореи включены также в Перечень однокомпонентных гомеопатических лекарственных средств, разрешенных к применению в РФ.

В Китае в медицинских целях для приема внутрь используются порошок подземных органов диоскореи ниппонской, отвар и спиртовая настойка.

Показаниями к применению являются: ревматические артриты, растяжения сухожилий, хронические бронхиты, астма др. В Корее сырье диоскореи ниппонской в форме отвара назначают при комплексном лечении сахарного диабета. Корневища диоскореи супротивной используются в традиционной китайской медицине (ТДК) при заболеваниях желудка, селезенки, анорексии с хронической диареей, при ряде урологических заболеваний и др.

В настоящее время на Российском фармацевтическом рынке присутствует большое число биологически активных добавок (БАД), в состав которых входит сухой экстракт диоскореи (Wild Yam, пилюли с диоскореей, Ливер-плас, Pro-G-Yam NSP, солид-суспензия, «Добрый молодец» и др.). Основными показаниями к применению этих БАД являются: регуляция работы женских половых желез, нарушение сексуальной функции у мужчин, остеопорез, снижение уровня холестерина в крови, нормализация артериального давления и др.

Документом, нормирующим в РФ качество корневищ с корнями диоскореи ниппонской, является фармакопейная статья (ФС) 42 1521-80. В Китае качество сырья диоскорей ниппонской и супротивной регламентируется соответствующими статьями ГФ КНР (2005). Оба нормативных документов (НД) не соответствуют современным критериям оценки качества лекарственного растительного сырья (ЛРС) и нуждаются в совершенствовании.

С учетом состояния изученности состава БАВ диоскореи, лекарственных форм, получаемых из лекарственного растительного сырья (ЛРС) в ТКМ, развивающихся торговых отношений и с целью гармонизации требований к качеству сырья в РФ и КНР целесообразным и актуальным является углубленное изучение двух видов диоскореи (ниппонской и супротивной) и разработка современной НД на ЛРС, удовлетворяющей международным требованиям.

Целью исследования является углубленное изучение метаболома двух видов диоскореи - ниппонской и супротивной, и совершенствование нормативной документации на сырье.

Постановка задач и выбор средств для их решения:

Для осуществления поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

■ провести информационно-аналитическое исследование по вопросам изучения состава БАВ и биологической активности двух видов диоскореи;

■ изучить и уточнить состав БАВ двух видов диоскореи;

■ уточнить и разработать характеристики подлинности подземных органов диоскорей ниппонской и супротивной;

■ используя принципы доказательной медицины и опыт применения сырья диоскореи в КТМ, провести изучение биологической активности сырья диоскореи;

■ на основании полученных данных разработать проект НД на корневища с корнями диоскореи ниппонской, отвечающий современным требованиям.

Решение задач осуществлялось путем обобщения данных литературы и проведения экспериментальных исследований.

Научная новизна. Дана подробная качественная и количественная характеристика состава метаболома диоскореи ниппонской и диоскореи супротивной с использованием комплекса современных методов анализа: тонкослойной хроматографии (ТСХ), титриметрии, потенциометрии, спектрофотометрии, ВЭЖХ и др. Идентифицированы: флавоноиды - рутин, кверцетин, кислоты - аскорбиновая, лимонная, яблочная, свободные сахара — фруктоза, манноза, рамноза, глюкоза, 17 аминокислот. Для определения содержания диосгенина, суммы органических кислот, кислоты аскорбиновой, дубильных веществ, суммы флавоноидов, полисахаридов, суммы свободных аминокислот адаптированы действующие методики определения.

Исследования по гармонизации НД РФ на сырье диоскореи со статьями Государственной фармакопеи КНР ранее не проводились. Теоретическая значимость работы. Использование современных физико-химических методов анализа позволило получить новую информацию о качественном составе БАВ диоскорей ниппонской и супротивной и дать их количественную оценку. Использование предложенных методик анализа сырья позволит систематизировать контроль качества сырья диоскореи. Экспериментально-практический материал, представленный в работе, может служить теоретической основой создания лекарственных средств диоскореи, применяемых в терапии сахарного диабета и ревматоидного артрита.

Практическая значимость результатов исследования. На основании проведенных исследований:

■ получены новые сведения о составе БАВ двух видов диоскореи — ниппонской и супротивной;

■ разработан проект ФС «Корневища с корнями диоскореи ниппонской»;

■ получены экспериментальные данные, обосновывающие применение сырья диоскореи в КТМ в терапии сахарного диабета и ревматоидного артрита;

■ результаты исследования внедрены в учебный процесс кафедры фармакогнозии фармацевтического факультета ГБОУ ВПО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава России в тему «Лекарственное растительное сырье, содержащее сапонины».

Публикации. По теме диссертации опубликовано 9 научных работ, из них 2 статьи — в журналах, включенных в перечень ведущих периодических изданий ВАК РФ.

Основные положения, выносимые на защиту:

- результаты морфолого-анатомического изучения сырья диоскореи ниппонской и диоскореи супротивной;

- результаты изучения состава и определения содержания биологически активных веществ (органических кислот, кислоты аскорбиновой,

дубильных веществ, флавоноидов, полисахаридов, аминокислот) в сырье двух видов диоскореи - ниппонской и супротивной; - результаты изучения фармакологической активности сырья двух видов диоскореи.

Апробация диссертации. Основные положения диссертации доложены на XXIV Московской Международной конференции «Человек и лекарство» (Москва, 2014г.), XXIV Московской международной Гомеопатической конференции» (Москва, 2014г.), научно-практической конференции «II Гаммермановские чтения» (Санкт-Петербург, 2014г.), II научно-практической конференции «Современные аспекты использования растительного сырья и сырья природного происхождения в медицине» (Москва, 2014г.) Объем и структура диссертации. Работа изложена на 115 страницах компьютерного текста, содержит 18 таблиц и 23 рисунка. Работа состоит из введения, обзора литературы, 6 экспериментальных глав, выводов, библиографии из 102 наименований, из которых 23 на иностранных языках и 5 интернет ресурсов, приложения.

Во введении раскрыта актуальность темы, определены цель и задачи исследования, сформулированы научная новизна и практическая значимость работы. В первой главе на основании данных литературы рассмотрены сведения о ботанической характеристике семейства диоскорейных и двух видов диоскореи (ниппонской и супротивной); химическом составе; методах стандартизации сырья в зарубежной нормативной документации; фармакологических свойствах метаболома и лекарственных препаратов (ЛП) диоскореи. Вторая глава посвящена характеристике объектов и методов исследования. В третьей главе изложены результаты морфолого-анатомического изучения сырья двух видов диоскореи. В четвертой главе обобщены результаты изучения качественного состава БАБ диоскореи. Экспериментальные данные по изучению количественного содержания отдельных групп БАВ в сырье диоскореи изложены в пятой главе.

В шестой главе рассмотрены результаты изучения фармакологической активности сырья диоскореи. Седьмая глава посвящена разработке проекта фармакопейной статьи «Корневища с корнями диоскореи ниппонской».

Результаты, полученные при проведении исследований, обработаны статистически и представлены в таблицах и на рисунках, которые приведены в тексте работы. В приложение вынесены проект фармакопейной статьи, акты внедрения результатов работы.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1.Ботанико-фармакогностическая характеристика двух видов

диоскореи.

1.1.1. Характеристика семейства диоскорейных.

Семейство диоскорейных - Dioscoreaceae — входит в порядок диоскореецветных класса однодольных цветковых растений. Оно представлено многолетними травянистыми растениями или кустарниками своеобразного габитуса. В подавляющем большинстве это вьющиеся растения с подземным запасающим клубнем или корневищем. Клубни достаточно крупные, несут всего один тонкий и недолговечный, чаще всего однолетний вьющийся побег, не успевающий, как правило, за один сезон существования подняться по своей опоре на большую высоту. Листья диоскорейных очередные, реже супротивные, достигающие иногда больших размеров, характеризуются пальчатым жилкованием с анастомозами между жилками первого порядка, чем создается сетчатость (что является более характерным для двудольных растений). Цветки большей частью мелкие, собранные в соцветия разных типов, двудомные, реже обоеполые, актиноморфные, трехчленные. Околоцветник из 6 сегментов, расположенных в два круга, большей частью сросшихся в короткую трубку. Тычинок 6, также расположенных в два круга, причем 3 внутренние иногда перекрещиваются в стаминодии или вообще не развиваются. Нити тычинок прикреплены к трубке околоцветника; гинецей синкарпный, с трехгнездной нижней завязью и свободными, более или менее сросшимися столбиками. В каждом гнезде завязи развивается по 2, реже 3—4 анатропных семязачатка. Плод диоскорейных обычно коробочка, иногда нераскрывающаяся крылатка, редко - ягода [20].

Семейство диоскорейных состоит из 2 подсемейств: диоскорейные {Dios coreoideae) и трихоподовые (Trichopodoideae). Подсемейство собственно диоскорейных включает две трибы - стеномерисовых

(Stenomerideae) и диоскорейных (Dioscoreae). Триба диоскорейных охватывает 6 родов, объединяющих более 700 родов: тамус, рейания, стеномерис, аветра, трихопус и диоскорея. Центральное место в трибе диоскорейных, и во всем семействе занимает род диоскорея — Dios corea L., включающий 650 родов. Виды рода диоскорея распространены во всех тропических областях мира, исключая лишь некоторые обширные крайне засушливые территории Африки (Сахара) и Евразии (Аравийский полуостров) [20].

Н.И.Вавилов (1935) и английский ботаник Г.Беркилл (1960) центром происхождения рода диоскорея считали Восточную Азию. Отсюда, в отдаленные времена предки современных видов диоскореи мигрировали на запад до Европы и оставили на этом пути, как следы переселения, ареалы таких современных внетропических видов, как диоскорея ниппонская (Dioscorea nipponica Makino), диоскорея кавказская (Dioscorea caucasica Lipsky), диоскорея балканская (Dioscorea balcanica Koanin). Позднее и другим путем (через Берингию) виды секции мигрировали на северо-восток, в Северную Америку. Но большая часть видов и ныне сосредоточена в Японии, Китае и Юго-Восточной Азии [20].

1.1.2.Ботанико-фармакогностическая характеристика диоскореи ниппонской и диоскореи супротивной.

Диоскорея ниппонская - Dioscorea nipponica Makino — (синонимы: диоскореия многокистевая - Dioscorea polystachya auct. non Turcz., диоскорея Жиральда - Dioscorea giraldii Knuth.) - многолетняя травяная лиана с вьющимися стеблями длиной до 4 м, реже более. Корневище горизонтальное, расположенное неглубоко от поверхности почвы, толстое. Мало разветвленное, коричневато-бурое, длиной до 1,5 м и до 2 см в диаметре, со следами отмерших стеблей, несущее на всем протяжении тонкие, жесткие, шнуровидные корни. Молодые участки корневища более светлые, желтоватые, мясистые, упругие, с крупными почками. Опробковевший

наружный слой коры корневища легко отделяется в виде тонкой темноокрашенной, шелушащейся пленки. Стеблей несколько, они простые, голые.

Листья длиной 6—12 см, очередные, черешковые, широкояйцевидные с сердцевидным основанием. Нижние листья семи-лопастные, с короткими боковыми лопастями и более крупной, вытянутой, заостренной средней. Верхние листья трех- пяти-лопастные или с почти не выраженными лопастями. Листовые пластинки коротко-опушенные или у некоторых форм снизу густо и мягко-опушенные.

Цветки однополые, двудомные, около 3 мм в диаметре, с простым венчиковидным, глубоко шести-раздельным, желтовато-зеленоватым околоцветником. Тычиночные цветки обычно собраны по 3—7 в полузонтики, образующие простые, реже ветвистые пазушные кисти. Тычинок 6, прикрепленных к околоцветнику, пестик редуцирован. Пестичные цветки собраны в простую кисть с 1 пестиком и 6 редуцированными тычинками. Пестик с нижней трехлопастной завязью, коротким столбиком и 3 рыльцами (рис. 1.1.2.1).

Плод - почти сидячая, трех-гнездная, широко эллиптическая коробочка, длиной 1,6-2,5 см, с 3 широкими крыльями на ребрах и с выемкой на верхушке. Семена плоские, с длинным, тонко-перепончатым, оттянутым вверх крылом, длина семени без крыла 5-7 мм, ширина 2-4 мм [2]. Растение цветет в июле-августе, семена созревают в августе-октябре.

В России на территории Приморья и южного Приамурья преобладает разновидность с опушенными снизу листьями {Dioscorea nipponica var.rosthornii Prain et Burk.), которую некоторые исследователи выделяют в отдельный вид - диоскорею Жиральда. В долине реки Раздольной встречается разновидность с листьями, опушенными с двух сторон.

Рис. 1.1.2.1.

Для России диоскорея ниппонская является дальневосточным эндемом [2]. Растет в Приморском крае, южных районах Хабаровского края, на юго-востоке Амурской области. В Китае растение встречается практически по всей северо-восточной части страны, в провинциях Ляонин, Цзилинь, Хэйлунцзян, Внутренняя Монголия, Хэбэй и Цзянсу, Аньхой (рис. 1.1.2.2). Местами обитания диоскореи ниппонской являются изреженные широколиственные и смешанные леса, лесные поляны и опушки, долины рек, ручьев и стариц. Часто растение встречается среди зарослей кустарников.

Рис. 1.1.2.2.

Диоскорея супротивная - Оюясогеа оррояка ТЬипЬ. - древнейшее культурное растение Китая и Японии. Корневища цилиндрической формы, длиной 60-100 см расположены глубоко в земле. Стебель более или менее угловатый, иногда скрученный, до 9 см в высоту, с пурпурным оттенком. В пазухах листьев располагаются небольшие шаровидные клубеньки. Листья супротивные, длиной 4-7 см, в очертании яйцевидные или треугольные, с широко-сердцевидным основанием и неглубокой широкой выемкой по сторонам (почти трехлопастные), с заостренной верхушкой. Поверхность листьев блестящая, жилкование дугонервное, с 7-9 главными жилками. Белые цветки, расположенные в одиночных или парных пазушных кистях, обладают запахом корицы (рис. 1.1.2.3).

и«>т>е гп ооо ооо

№ том

Рис. 1.1.2.3.

1.1.3. Особенности заготовки и сушки сырья диоскореи.

В качестве лекарственного растительного сырья у диоскореи ниппонской используют корневища с корнями (ЯЫготШа сит гасНЫЪш Эю8согеае трротсае), у диоскореи супротивной - корневища (ЯЫготМа Ою8согвае оррохиае).

Согласно «Инструкции по сбору и сушке корневищ с корнями диоскореи ниппонской» [49] сырье заготавливают в течение всего летне-осеннего периода, преимущественно после созревания ее семян. Выкопанные лопатой или киркой корневища отряхивают от земли. После удаления стеблей и загнивших частей корневища рубят на куски длиной около 10 см. Заготовленные корневища не должны попадать под дождь (увлажняться). Перед сушкой корневища диоскореи ниппонской подвяливают. Сушить сырье диоскореи лучше всего в сушилках с принудительной вентиляцией при температуре нагрева корневища не более 60°С. Для сушки можно

использовать чердачные помещения с хорошей вентиляцией, допускается сушка на солнце.

Средний вес корневищ зависит от возраста растений, условий местообитания и степени нарушенности зарослей заготовками. На промысловых зарослях средний вес сырых корневищ диоскореи ниппонской от растений в возрасте 10-20 лет колебался от 10 до 50 г. На участках, не тронутых заготовками, средний вес сырых корневищ от растений такого же возраста составлял 114-200г. В природных условиях диоскорея ниппонская возобновляется очень медленно. Годичный прирост корневищ очень мал, от 1 до 9 г сырого веса на 1 побег. Для полного восстановления зарослей после заготовок требуется 10-20 лет. В связи с чем в 70-х годах XX в. сотрудниками ВИЛАРа на Дальневосточной зональной станции успешно проводились исследования о введении диоскореи ниппонской в культуру в пределах ее естественного ареала [2,74,75]. Также активно изучались вопросы культуры ткани диоскореи [18].

Корневища диоскореи супротивной в Китае собирают в декабре. После отмирания стебля и листьев. Корневища выкапывают, очищают от земли, отмерших частей, тщательно моют, снимают шелушащуюся кору, сортируют, режут на куски длиной около 30 см и сушат на солнце. В зависимости от обработки корневищ получают 3 вида сырья [95]:

> корневища диоскореи супротивной - подготовленное и высушенное на солнце сырье;

> «Уиап§ БЬапуао» или полированный обыкновенный ямс — для получения этого вида сырья отбирают после сушки крупные прямые корневища, тщательно размягчают, замачивая в чистой воде, и режут на куски длиной 15-18 см. затем корневища трут на доске, придавая им цилиндрическую форму, снова сушат на солнце и окончательно шлифуют;

> китайский ямс с отрубями — для получения этого вида сырья подготовленные к сушке корневища диоскореи супротивной режут на

небольшие тонкие ломтики, смешивают с отрубями и высушивают на солнце.

1.1.4. Химически состав метаболома диоскореи ниппонской и диоскореи супротивной.

Активное изучение состава метаболома растений рода диоскорея началось в 60-70-е годы XX в., когда было установлено, что подземные органы некоторых видов диоскореи могут служить источником диосгенина, который применялся в синтезе кортикостероидых препаратов - кортизона и ДР- [4].

В ходе проведенного фитохимического изучения было установлено, что корневища с корнями диоскореи ниппонской содержат около 2%, а по некоторым данным около 8% суммы стероидых сапонинов [2, 22, 47, 60, 84]. Стероидные сапонины диоскореи были охарактеризованы как спиростаноловые и фуростаноловые сапонины. Основными соединениями являются диосгенин, тигогенин и их гликозиды - диосцин (преобладающий в сумме сапонинов), грациллин, триаллин, йононин, токоранин [21].

Изучение состава стероидных сапонинов диоскореи ниппонской активно продолжается до настоящего времени. Так, из подземных органов диоскореи ниппонской были выделены фурастаноловые сапонины парвифлозид, метилпрортодельтонин, тригофенолзид-1 и спиростаноловые сапонины дельтонин, производное зингиверезина-1, протодиосцин. Так же из суммы сапонинов диоскореи ниппонской был выделен новый водорастворимый сапонин, названный диосцин ОС и охарактеризованный как диосгенин-З-О-[а-Ь-рамнопиранозил( 1 —>3)-а-Ь-рамнопиранозил (1 —>4)-а-Ь-рамнопиранозил (1—>4)]-р-Б-глюкопиранозил, а также нерастворимый в воде диосгенин-З-О-[а-Ь-рамнопиранозил(1—>2)-[(3-0-глюкопиранозил(1—>3)]-р-0-глюкопиранозид [76,82]. Группой ученых [80] из водного экстракта растения был впервые выделен фурастаноловый сапонин с одной углеводной

цепочкой в положении С26 - 26-0-Р-Б-глюкопиранозил-/ига^-5(6),20(22)-диен-3,26- Р-диол.

На предмет наличия стероидных соединений изучались другие части диоскореи ниппонской. Из стеблей и листьев растения были выделены производные фенантрена: 3 известных соединения - 6-метоксицелонин; 4,7-дигидрокси-2,3,6-триметоксифенантрен и 3,7-дигидрокси-2,4,6-

триметоксифенантрен. Кроме того, были выделены 2 новых соединения, структура которых была охарактеризована с помощью НЯ-М8, ЯМР, НМВС: 7-гидрокси-2,3,5-триметокси-9,10-дигидрофенантрен и 2,21,7,71-

тетрагидрокси^^'Дб^тетраметокси-!,! ^бефенантрен [92].

Помимо стероидных сапонинов в сырье диоскореи ниппонской было установлено наличие холина, жирного масла, гликопротеинов, крахмала [67]. Данных о наличии других классов биологически активных веществ в доступной литературе найти не удалось.

Изучение минерального состава диоскореи ниппонской [34] показало наличие (в мг/г) калия (7,70), кальция (2,10), магния (1,10), железа (0,30), а также микроэлементов марганца, меди, цинка, кобальта, хрома, алюминия, селена, никеля, стронция, свинца, вора, иода. Установлено, что корневища с корнями концентрируют хром и селен.

Несколько подробнее изучался химический состав диоскореи супротивной. Помимо диосцина и диосгенина, в корневищах растения было установлено наличие дофамина, бетатозина гидрохлорида, алантоина, а-абсцизина-И, аминокислот цистеина и у-аминомасляной, фитостеринов (холестерина, эргостерина, кампестерола, стигмастерина, (3-ситостерина), полисахаридов (слизи, крахмала), маннозы, фитиновой кислоты, танинов, 3,4-дигидроксифенилэтиламина [47,87,90,102].

1.2. Фармакологическая активность и медицинское применениесырья и препаратов диоскореи.

Применение диоскореи в медицине уходит своими корнями в глубину веков. Подземные и воздушные клубни диоскореи издавна применялись в медицине коренных народов Азии и Северной Америки как средство против ревматизма, кожных болезней, против укусов змей.

Новая история диоскореи началась после второй мировой войны, когда с особой остротой встала проблема получения гормональных препаратов группы кортизона в связи с широким спектром их терапевтического действия и крайне низкой обеспеченностью сырьем. В то время единственным источником для получения кортизона - гормона коры надпочечников — были железы убойного скота. В 60-70-х годах XX в. возник научный и практический интерес к растениям рода диоскорея как источнику диосгенина, используемого в синтезе кортикостероидных препаратов. Было исследовано 125 видов диоскореи: 64 американских, 33 азиатских, 28 африканских. Наиболее перспективными в этом плане оказались 3 мексиканских вида: диоскорея колосоцветковая (Dioscorea spiculiflora Hemsl.), диоскорея сложная (Dioscorea composita L.f.) и диоскорея обильноцветущая (Dioscorea floribunda Martens&Galeotti) [10,30] с максимальным содержанием диосгенина в клубнях - 15%. 13% и 10% соответственно. Ценным источником сырья стала индийская диоскорея дельтовидная (Dioscorea deltoidea Wall ex Griseb.). В 80-е годы XX в. в этом направлении активно изучались виды диоскореи, произрастающие во Вьетнаме [10, 43].

Из-за невысокого содержания диосгенина российские виды диоскореи (д.кавказская, д.ниппонская) использовались только для получения очищенных суммарных препаратов «Диоспонин» и «Полиспонин», используемых как гипохолестеринемическое и гиполипидемическое средство [66,67].

В Государственном Реестре лекарственных средств, разрешенных к медицинскому применению в РФ, корневища с корнями диоскореи

ниппонской зарегистрированы как ЛРС, используемое для получения готовых лекарственных средств гипохолестеринемического действия [40].

Стероидные сапонины корневищ с корнями диоскореи ниппонской и настойка из сырья фармакологически изучены достаточно хорошо. В России диоскорея ниппонская использовалась для получения препарата «Полиспонин», представляющего сумму водорастворимых стероидных сапонинов подземных органов растений и применяемого как гиполипидемическое средство. Препарат выпускался в таблетках по 0,1г. [40].

В экспериментах на животных было установлено, что полиспонин уменьшает гиперхолистеринемию и отложение липидов в артериальных сосудах, печени, коже и на роговице глаза. Он увеличивает соотношение лецитин/холестерин, понижает артериальное давление, улучшает функцию сердца, расширяет периферические сосуды, увеличивает диурез у кроликов с экспериментальным атеросклерозом. На 90-й день введения холестерина совместно с полиспонином, содержание холестерина в крови контрольных животных было в 3 раза выше, чем у экспериментальных животных. Содержание лицетина в опытной группе также снижалось примерно в 1,5-2 раза. Повышение коэффициента лицетин/холестерин под действием полиспонина способствует удержанию холестерина в состоянии коллоидного раствора и уменьшает возможность отложения его в артериальных сосудах [32,59]. В группах кроликов с выраженным экспериментальным атеросклерозом применение полиспонина помимо снижения уровня холестерина в крови и нормализации коэффициента лицетин/холестерин отмечалось понижение до нормы артериального давления, которое до лечения у животных было достаточно высоким. Полиспонин обладает холиномиметическими свойствами: он замедляет пульс на 20-40 ударов в минуту, углубляет дыхание, улучшает проведение импульсов к сердцу по блуждающему нерву. У экспериментальных животных, получавших полиспонин, в артериях не наблюдалось липоидной инфильтрации, внутренние органы у них были без видимых изменений. Экспериментально

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Бу Вэй, 2015 год

ЛИТЕРАТУРА:

1. Ажурова, Т.А. Гиполипидемическое и сахароснижающее действие комплексного растительного средства. / Т.А. Ажурова, С.М. Николаев, В.Г. Банзаракшеев // Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии. - 2007. - №2. - с.27-29.

2. Атлас ареалов и ресурсов лекарственных растений СССР. М., 1976. - 248с.

3. Баландина, H.A. Совершенствование принципов и методов фармакопейного анализа в системе стандартизации лекарственного растительного сырья и лекарственных средств на его основе. [Текст]: автореф. дис. док. фарм. наук / И.А.Баландина; Москва, 2004.-38 с.

4. Биологически активные вещества растительного происхождения (под ред.Б.Н.Головкина)./М.: Наука, 2001, т.1, 368с.

5. Бандюкова, В.А. Исследование химии флавоноидных соединений и закономерности их распределения в растениях. [Текст]: автореф. дис. док. биол. наук / В.А.Бандюкова; Ереван. - 1975. - 41с.

6. Баранов, В.Г. Экспериментальный сахарный диабет / В.Г. Баранов, И.М. Соколоверова, Э.Г. Гаспарян. - Л., 1983. - 198 с.

7. Беликов, В.В. Унифицированная методика определения флавоноидов для стандартизации фитохимических препаратов. / В.В.Беликов // Новые лекарственные препараты из растений Сибири и Дальнего Востока: Тезисы Всесоюзной конференции. - Томск, 1989. — с. 21—22.

8. Броновицкая, З.Г. Аминокислоты, их производные и регуляция метаболизма. / З.Г. Броновицкая. — Ростов-на-Дону, 1983. — 112 с.

9. Васильев, А.Е. Ботаника: Анатомия и морфология растений / А.Е. Васильев, Н.С. Воронин, А.Г. Еленевский, Т.И. Серебрякова. - М.: Просвещение, 1978. - 480 с.

10. Васильева, И.С. Стероидные гликозиды растений и культура клеток диоскореи, их метаболизм и биологическая активность. / И.С.Васильева,

Пасешниченко В.А. Успехи биологической химии. - 2000. -т.40. - с. 153— 204.

11. Воронкова, М.П. Противодиабетическая активность гимнемовых кислот. [Текст]: дис ....докт.биолог, наук. / М.П.Воронкова, Волгоград, 2009, -338с.

12. Выделение и анализ природных биологически активных веществ (под ред. Е.Е.Сироткиной).//Томск.: изд-во Томск. Ун-та. - 1987. - 184с.

13. Гейсс, Ф. Основы тонкослойной хроматографии / Ф. Гейсс; М.: Мир, 1999. - 405 с.

14. Георгиевский, В.П. Биологически активные вещества лекарственных растений. / В.П. Георгиевский, Н.Ф. Комисаренко, С.Е. Дмитрук. -Новосибирск: Наука сиб. отд-ние, 1990. - 333 с.

15. Государственная фармакопея СССР: Выпуск 1/ МЗ СССР. - XI-е изд., доп. - М.: Медицина, 1987. - 336 с. с ил.

16. Государственная фармакопея СССР: Выпуск 2/ МЗ СССР. - XI-е изд., доп. - М.: Медицина, 1989. - 400 с. с ил.

17. Гусев, A.A. Сравнительное изучение биологических свойств сапонинов. / А.А.Гусев; Ветеринария. 1980, № 1. - с.26-30.

18. Доан, Т.Т. Клональное микроразмножение редких и исчезающих видов растений. / Т.Т.Доан, Е.А.Калашникова, О.И.Молканова. - Известия Тимирязевской сельскохозяйственной академии. — 2012. -№ 5. - с.48—52.

19. Долгова, A.A. Руководство к практическим занятиям по фармакогнозии./

A.А.Долгова, Е.Я.Ладыгина - М.: Медицина. -1977. - 255с.

20. Жизнь растений, в 6 томах (под ред. А.Л.Тахтаджяна). М.: 1982, т.6. - с. 228-241.

21. Ибрагимова, B.C. Китайская медицина. Методы диагностики и лечения. Лекарственные средства./ В.С.Ибрагимова -М.: Антарес. 1994. 637с.

22. Киченко, В.И. Содержание диосгенина в корневищах некоторвых видов диоскореи, интродуцированных в Подмосковье. / В.И.Киченко,

B.В.Панина - Растительные ресурсы, 1965, т.1, вып 3.

23. Киселева Т.JI. Гомеопатическая фармация: введение и руководство./ Т.Л. Киселева, A.A. Карпеев - М.: изд-во ФНКЭЦ ТМДЛ Росздрава. - 2005. -с.274.

24. Киселева, Т.Л. Лекарственные растения в мировой медицинской практике: государственное регулирование, номенклатура и качество. / Т. Л. Киселева, Ю.А. Смирнова. - М.: Издательство Профессиональной ассоциации натуртерапевтов, 2009. — 295 с. с ил.

25.Клышев, Л.К. Флавоноиды растений (распространение, физико-химические свойства, методы исследования).// Л.К.Клышев, В.А. Бандюкова, A.C. Алюкина - Алма-Ата: Наука, 1978. - 220 с.

26. Коржавых, В. Фитопрепараты на зарубежном фармацевтическом рынке/ В. Коржавых// Фармацевтический мир. - 1997. - №2. — С. 41 - 43.

27. Корокин, М.В. К вопросу фармакологической коррекции гипоэстрогениндуцированной эндотелиальной дисфункции. / М.В.Корокин, М.В.Покровский, Т.Г.Покровская [и др.] — «Человек и его здоровье», научно-практический вестник. - Курск. - 2008. - № 1. — с.31-35.

28. Краснов, Е.А. Выделение и анализ природных биологически активных веществ / Е.А.Краснов, Т.П. Березовская, Н.В. Алексеюк [и др.]. — Томск: Изд-во ТГУ, 1987.- 184 с.

29. Кристиан, Г. Аналитическая химия. / Г. Кристиан. - М.: Бином, 2007. -298 с.

30. Лавренов, В.К. Полная энциклопедия лекарственных растений.// В.К.Лавренов, Г.В. Лавренова - СПб.: «Издательский дом Нева»., М.: «ОЛМА-ПРЕСС», 1995. - Т. 1. - с. 206 - 207.

31. Ладыгина, Е.Я., Химический анализ лекарственных растений/ Е.Я. Ладыгина, Л.Н. Сафронич, В.Э. Отряшенкова [и др.]; под ред. Н.И. Гринкевич, Л.Н. Сафронич. -М.: Высшая школа, 1983. - 176 с.

32. Легчаев, В.Я. Фармакология диоскореи кавказской и многокистевой. [Текст]: Аавтореферат ... канд. мед. наук. / В.Я. Легчаев- Львов. 1968. 24с.

33. Лещенко, К.А. Способ лечения желчно-каменной болезни у человека./ К.А. Лещенко - Патент SU 114346, заявлено 22.08.1957, опубл. 21.08.1958.

34. Ловкова, М.Я., Почему растения лечат./М.Я. Ловкова, А.М.Рабинович, С.М.Пономарева [и др.] - М.: Наука. 1989- с.58-60.

35. Лотова, Л.И. Морфология и анатомия высших растений. / Л.И.Лотова -М.: Эдиториал, 2000.- 528 с.

36. Мальцева A.A., Оценка гипогликемического действия препарата синюхи голубой. / А.А.Мальцева, А.А.Сорокина, Т.А.Брежнева, А.И. Сливкин -Фармация,- 2010. - №2. - с. 18-20.

37. Марахова, А.И. Методологические подходы к использованию спектрофотометрии в анализе лекарственного растительного сырья [Электронный ресурс]/ А.И. Марахова, H.H. Федоровский, Т.А. Скалозубова, A.C. Аврач, A.A. Сорокина, Е.В. Сергунова// Электронный научный журнал «Медицина и образование в Сибири». - 2011. - №5. — Режим доступа: http://www.ngmu.ru/cozo/mos/article/text full.php?id=526. — Загл. с экрана.

38. Марахова, А.И. Спектрофотометрия в анализе сборов [Электронный ресурс]/ А.И. Марахова, A.C. Аврач, Т.А. Скалозубова, A.A. Сорокина, Е.В. Сергунова, H.H. Федоровский// Электронный научный журнал «Медицина и образование в Сибири». - 2012. - №2. Режим доступа: http://www.ngmu.ru/cozo/mos/article/text_full.php?id=706. - Загл. с экрана.

39. Маслов Д.А. Сравнительное изучение гипогликемической активности нового пептида миметика инсулина и лейкоантоцианидинов, выделенных из экстракта листьев аронии черноплодной. [Текст]: дис .... канд. биолог, наук. / Д.А.Маслов - Москва, 2002, 132с.

40. Машковский, М.Д. Лекарственные средства/ М.Д. Машковский . - 15-е изд., перераб., испр. и доп. - М.: ООО «Издательство "Новая волна"», 2005. - 1200 с. сил.

41. Медик, В. А. Руководство по статистике в медицине и биологии. В 2-х томах / В. А. Медик, М. С. Токмачев, Б. Б. Фишман; под ред. проф. Ю.М. Комарова. - М.: Медицина, 2000. - Т. 1. Теоретическая статистика. — 412 с.

42. Методы фармакогностического анализа лекарственного растительного сырья, в 2-х ч. Ч. II. Химический анализ: / Г.И. Калинкина [и др.]. - Томск: СибГМУ, 2008. - 55 с.

43. Нгуен Минь Кхой. Фармакогностическое и биологическое ихучение видов рода Dioscorea L. флоры Вьетнама. [Текст]: автореф. дис ... докт. фарм. наук. / Нгуен Минь Кхой. - Москва, 2000. - 48с.

44. Олейников, Д.Н. Методики количественного определения суммарного содержания органических кислот в растительном сырье/ Д.Н. Олейников, Л.М. Танхаева, Г.Г. Николаева, A.A. Маркарян// Растительные ресурсы. — 2004.-вып. 3.-С. 112- 117.

45. Олешко, Г.И. Разработка унифицированной методики количественного определения суммы свободных аминокислот в лекарственном растительном сырье и экстракционных препаратах/ Г.И. Олешко, Т.И. Ярыгина, Е.В. Зорина, М.Д. Решетникова// Фармация. - 2011. - №3. - С. 14-17.

46. Патудин, A.B. Мировые ресурсы гомеопатического лекарственного сырья. /А.В.Патудин, Н.С.Терешина, В.С.Мищенко, И.А. Губанов - М. - 2006. -с.94.

47. Попова, Н.В. Лекарственные растения мировой флоры. / Н.В.Попова, В.И. Литвиненко - Харьков.: СПДФЛ Мосякин В.Н., 2008. - с. 143-144.

48. Правила доклинических исследований безопасности и эффективности фармакологических веществ. Правила качественной лабораторной практики в РФ - G < Р или РДИ: руководство по экспериментальному

(доклиническому) изучению новых фармакологических веществ // сост. Т.А. Гуськова [и др.]. - М.: ЗАО «ИИА «Ремедиум»», 2000. - с. 7-24.

49. Правила сбора и сушки лекарственных растений (сборник инструкций). М.: Медицина, 1985. - с.76-79.

50. Рябинина, Е.И. Потенциометрическое определение дубильных веществ в лекарственном растительном сырье. /Е.И.Рябинина, Е.Е.Зотова, Н.И. Пономарева - Фармация. - 2012. - №2. - с.8-9.

51. Самылина, И.А. Фармакогнозия. Атлас в 3-х томах/ И.А. Самылина, В.А. Ермакова, Н.В. Бобкова, О.Г. Аносова. - М.: ГЭОТАР - Медиа, 2009. -Т.1.-192 с.

52. Самылина, И.А. Фармакогнозия. Атлас в 3-х томах/ И.А. Самылина, В.А. Ермакова, Н.В. Бобкова, О.Г. Аносова. - М.: ГЭОТАР - Медиа, 2009. -Т.2.-384 с.

53. Самылина, И.А. Фармакогнозия. Атлас в 3-х томах/ И.А. Самылина, В.А. Ермакова, Н.В. Бобкова, О.Г. Аносова. - М.: ГЭОТАР - Медиа, 2009. -Т.3.-488 с.

54. Сапонины. Методы выделения, разделения, очистки и анализа. Методические указания, (под редакцией С.А. Мининой, Л.Я. Шимолиной) / С.-Петербург. -1991.-21 с.

55. Саушкина, A.C. Использование ТСХ для идентификации биологически активных веществ в некоторых видах лекарственного сырья. /A.C. Саушкина, В.А.Карпенко, Л.Н.Савченко, Д.А. Муравьева - Сорбционные и хроматографические процессы. - 2001. - т.1. -№5. - с.902-905.

56. Сергунова, Е.В. Исследования по стандартизации плодов шиповника и лекарственных форм на его основе [Текст]: дисс. канд. фарм. наук/ Е.В. Сергунова. - Москва, 2002. - 150 с.

57. Скалозубова, Т. А. Изучение метабол ома сырья и лекарственных форм крапивы двудомной [Текст]: дисс. канд. фарм. наук /Т.А.Скалозубова. — Москва, 2013.-131 с.

58. Сливкин, А.И. Физико-химические и биологические методы оценки качества лекарственных средств. /А.И.Сливкин, В.Ф.Селеменев, Е.А.Суховерхова - Воронеж: Издательство Воронежского Государственного университета, 1999. - 368с.

59. Соколов, С.Я. Фитотерапия и фитофармакология. / С.Я.Соколов — М.: МИА, 2000. с.163—166.

60. Соколова, А.Н. Диоскорея ниппонская - источник сырья для получения полиспонина - препарата противосклеротического действия. / А.Н.Соколова, А.Д.Турова, А.И.Шретер - Растительные ресурсы. - 1968, т.З, - в.1.

61. Сорокина, A.A. Методы фармакогностического анализа./ А.А.Сорокина — Фармация.- 2002. - №5. - с.33-34.

62. Сорокина, A.A. Потенциометрия как метод контроля качества лекарственного растительного сырья, содержащего дубильные вещества, и препаратов на его основе. / А.А.Сорокина, А.И. Марахова - Фармация. - 2014. - № 2. - с.49-53.

63. Стандарты качества лекарственных средств. Основные положения [Текст]: ОСТ 91500.05.001-00. -Введ. 01.03.2000. - М.: Изд-во стандартов, 1999. -23 с.

64. Сумина, Е.Г. Тонкослойная хроматография. Теоретические основы и практическое применение. / Е.Г.Сумина, С.Н.Штыков, Н.В.Тюрина -Саратов: Изд-во Сарат. ун-та, 2002. - 102 с.

65. Татиева, Н.М. Гомеопатическое лекарственное средство для лечения в комплексной терапии ишемической болезни сердца, начальной стадии сердечной недостаточности, транзиторной гипертензии, миокардиодистрофии, нарушении ритма, кардионеврозе. / Н.М. Татиева Патент RU 2162332.

66. Торшилова, A.A. Репродуктивная биология Dioscorea nipponica Makino. [Текст]: дисс. канд.. .биол.наук / A.A. Торшилова - СПб. -2007. - 191с.

67. Турова, А.Д. Лекарственные растения СССР и их применение. /А.Д. Турова-М.: Медицина. - 1974. - с. 191-195.

68. Улащик, B.C. Иммуномоделирующее действие лечебных физических факторов. / B.C. Улащик - Медицинские новости. 2006. - №11- с. 8-13.

69. Федоровский, Н.Н. Потенциометрическое титрование в анализе водных извлечений. /Н.Н.Федоровский, А.И.Марахова, А.А.Сорокина, О.В. Ольшанская - Фармация. - 2008. - №2. — с. 15-16.

70. ФС 42-1521-80 Корневища с корнями диоскореи ниппонской.

71. Хребтовский, М.А. Изучение иммуномоделирующей активности комплексного растительного средства. [Текст]: дисс...канд.мед.наук. / М.А. Хребтовский - Удан-Уде. - 2007. - 142с.

72. Чхве Тхэсоп. Лекарственные растения (перевод с корейского)./ Чхве Тхэсоп. - М.: Медицина. - 1987. - с.249-250.

73. Шаршунова, М. Тонкослойная хроматография в фармации и клинической биохимии, т.2. / М.Шаршунова , В.Шварц , Ч.Михалец - М.: «Мир», 1980. -610 с.

74. Шретер, А.И. О номенклатуре, распространении и запасах сырья диоскореи советского Дальнего Востока». / А.И.Шретер, М.Г. Пименов, В.Д. Васильева - Растительные ресурсы - 1965, тЛ.-вып.З.

75. Шретер А.И. Ресурсы важнейших лекарственных растений советского Дальнего Востока. /А.И.Шретер, М.Г.Пименов — в кн. «Ресурсы дикорастущих лекарственных растений СССР» - Л.: Наука, — 1968.

76. Ali, Z. A new spirostane steroid glycoside from Dioscorea nipponica. / Z.Ali, I.A. - Khan Planta med. 2012; 78/; p. 1436.

77. Bate-Smith, E.C. The phenolic constituents of plants and their taxonomic significance/ E.C. Bate-Smith // I. Soc. London: Botany. - 1962. - Vol. 58 - N. 371.-P.95 - 175.

78. Brezhneva T.A. Quantitative analysis triterpene saponins by HPTLS with scanning densitometry / T.A. Brezhneva, V.F. Selemenev, A.I. Slivkin, Nakhla

Yusef, Azakhman Fuslya, A. S. Shestakov, E.F. Safonova // Pharmaceutical chemistry journal.-1999.-Vol.33.-№12.-p. 671-675.

79. Charles L. Analysis and Quantitative Determination of Group B Saponins in Processed Soybean Productstt /Mark A. Berhow, Charles L. Cantrell, Sandra M. Duval, Thomas A. Dobbins, Jonathan Mavnes , Steven F. Vaughnl // Phvrochelll. Allal.-2002.-Vol. 13. -p.343-348.

80. Chen Bin CU. A new furastonola Saponin from an aqueous of Dioscorea nipponica Makino./ Chen Bin CU, Chi XU, Qian Xun GU, Shi Dong CH, Hong Hai GO, Gang JING. - Chinese Chemical Letters. 2004. vol.15, № 10, p.l 191-1194.

81. den Broeder A.A. Dose Reduction strategy of subcutaneous TNF inhibitors in rheumatoid arthritis: design of a pragmatic randomised non inferiority trial, the DRESS study, /den Broeder A.A., van Herwaarden N., van der Maas A., et al.

- J.BMC Musculoskelet Disord, 2013.14(1). 299.

82. Du, S.H. Isolation and identification of steroidal saponins in total saponin from Dioscorea nipponica Makino./ Du S.H., Liu W.Y., Fu T.J., Xia B.G., Xia C.D.

- Yao Xue Xue Bao. 2002; 37 (4); 267-270.

83. Duke, J. A. Handbook of medicinal herbs. 2-nd ed./ J.A.Duke, M.J.Bogenshutz-Godwin, J.du Cellier, P-A.K. Duke - New-Jork: CRC PRESS, 2002. 894h.

84. Hegnauer R. Chemotaxonomie der Pflanzen. Bd.2. / R.Hegnauer - BaselStuttgart. 1963.

85. Jiaju, Zhou. Encyclopedia of Traditional Chinese Medicines. Molecular Structures, Pharmacological Activities, Natural Sources and Applications. Vol.5. / Jiaju Zhou, Guirong Xioe, Xinjian'an. - Springer/ London-New-York. -2011.

86. Kan, T.H. Diosgenin from Dioscorea nipponica Makino improves diabetic nejropatiü, causing nerve growth factor./ T.H.Kan, E.Luna, B.N.Hong, S.Z.Choi, M. San, P J.H.arc, Kim S.Y. - Biol.Pharm.Bul. 2011; 34 (9); 14931498.

87. Kim Simon. Wild yam./http://mason.gmu.edu/-sy/projects/plant/plant/htm.

88. Kim, N. Neurotrophic activity of DA-9801, a mixture of Dioscorea japónica Thunb. and Dioscorea nipponica Makino, in vitro. / N.Kim, S.H.Kim, Y.J.Kim, K J.K.im, M.K. Nam et al. - J.Ethnopharmacol. 2011, 137 (1), p.312-319.

89. Know, C.S. Anti-obesity effect of Dioscorea nipponica Makino with lipase-inhibitory activity in rodents./ C.S.Know, H.Y.Sohn, S.H.Kim, et al. - Biosci. Biotechnol. Biochem. 2003. Vol.67, 7, p. 1451-1456.

90. Kyle J. Norton. Chinese herbs in Western View - Shan Yaj or Huai Shan (Radix Dioscoreae oppositae): Health benefits and side effects./ Kyle J. Norton. - Haelth Articles. 2012. 7.

91. Liao, Xiujun. Effects of total saponin from Rhizoma Dioscorea nipponica on inflammatory cytokines in collagen-induced arthritis rat. / Liao Xiujun, Sun Tongyou, Dong Wenjuan. - J. Lishizhen Medicine and Material Medica Researth. 2013. 24(3). 522-524.

92. Lu, D. Dihydrophenantyrenes from the stems and leaves of Dioscorea nipponica Makino./ Lu D., Liu J., Li P. - Nat.Prod. res. 2010/ 24 (13); p. 12531257.

93. Miu, Yi Progress immunological study of rheumatoid arthritis. / Miu Yi, Hu Chaoying, Qian Liu. - J. Shanghai Jiaotong University (Medical Sciences). 2011. 31 (7). 103 5—103 9.

94. Nie Ying jie. The potential of IL-4/IL-10 pre-treated dendritic cells on rheumatoid arthritis. / Nie Ying jie, Zhou Xiao-quan. - Chinese Journal of Immunology. 2011. 27(12).l 104-1112.

95. Pharmacopoeia of the People's Republic of China., v.I, 2005. Chinese Pharmacopoeia Commission. - p.262-263.

96. Qinga, L.S. Ligand fishing from Dioscorea nipponica extract using human serum albumin fimctionalized magnetic nanoparticles./ Qinga L.S., Xue Y., Zheng J., Xiong J. et al. - J.Chromatogr. A. 2010; 1217 (28); 4663-4668.

97.Sun, R. MMP-2, TNF-a and NLRP1 polymorphisms in Chinese patients with ankylosing spondylitis and rheumatoid arthritis./ R.Sun , Y.Huang , H.Zhang et al. - J.Mol. Biol. Rep. 2013. 40(11). 6303-6308.

98.Van, Т. Trillin, a steroidal saponin isolated from the rhizomes of Dioscorea nipponica, exerts protective effects against hyperlihidemia and oxidative stress./ T.Van, R.C.Choi, J.Li, C.W.Bi, W.Pan et al. - J.Ethnopharmacol. 2012, 139 (1), p.214-220.

99.Van, T. Antihyperlipidemic effect protodioscina, the active ingredient, isolated from rhizomes Dioscorea nipponica. / T.Van, R.C.Choi, J.Li, C.W.Bi, L. Zang et al. - Planta medica, 2010; 76 (15); p. 1642-1646.

100. Zernone Giorgi A. Chinese yam/ http://healthline.com/health/chinese-yam.

101. Zhou Xinghui, Lin Lianbin. Changes in synovial fluid of patients with rheumatoid arthritis heme oxygenase-1 levels and clinical significance. Journal of Laboratory Medicine. 2011. 26(10). 672-674.

102. Интернет-ресурс. Режим доступа: http://www.gluconature.com/dioscorea nipponica_makino.html.