Электрохимические биосенсоры для определения обратимых ингибиторов ацетилхолинэстеразы, используемых в терапии нейродегенеративных заболеваний тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 02.00.02, кандидат наук Давлетшина Регина Рудисовна

• Давлетшина Регина Рудисовна
• кандидат наук
• 2021

Оглавление диссертации кандидат наук Давлетшина Регина Рудисовна

ВВЕДЕНИЕ

1.1 Особенности взаимодействия холинэстераза - ингибитор

1.1.1 Общая характеристика холинэстераз

1.1.2 Необратимое ингибирование

1.1.3 Обратимое ингибирование

1.2 Особенности сборки холинэстеразных биосенсоров

1.2.1 Иммобилизация фермента

1.2.2 Измерение сигнала холинэстеразных биосенсоров

1.3 Холинэстеразные биосенсоры для определения обратимых ингибиторов фермента

1.4 Определение лекарств, используемых при нейродегенеративных заболеваниях

2 ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

2.1 Материалы и реагенты

2.2 Приборы и оборудование

2.3 Методики экспериментов

3 ХАРАКТЕРИСТИКА ОБРАЗОВАНИЯ ПОЛИЭЛЕКТРОЛИТНЫХ КОМПЛЕКСОВ И ИММОБИЛИЗАЦИИ НА ИХ ПОВЕРХНОСТИ АХЭ МЕТОДОМ ПОВЕРХНОСТНОГО ПЛАЗМОННОГО РЕЗОНАНСА

4 ВЛИЯНИЕ МОДИФИКАТОРОВ ХОЛИНЭСТЕРАЗНЫХ СЕНСОРОВ НА ИХ ОПЕРАЦИОННЫЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ И КИНЕТИЧЕСКИЕ ПАРАМЕТРЫ ГИДРОЛИЗА АЦЕТИЛТИОХОЛИНА

4.1 Характеристика модификаторов СУЭ при окислении тиохолина

4.2 Амперометрический холинэстеразный сенсор с ковалентной иммобилизацией АХЭ

4.3 Амперометрические холинэстеразные сенсоры с нековалентной иммобилизацией АХЭ на поверхности полиэлектролитных комплексов

4.3.1 Ацетилхолинэстеразные сенсоры, полученные с использованием полиэлектролитных комплексов, имеющих в составе ПАА, ПДДА, ПСС

4.3.2 Ацетилхолинэстеразные сенсоры, полученные с использованием полиэлектролитных комплексов, имеющих в составе ДНК

4.3.3 Ацетилхолинэстеразные сенсоры, полученные с использованием полиэлектролитных комплексов, имеющих в составе ПАМАМ

5 ХАРАКТЕРИСТИКА БИОСЕНСОРОВ ПРИ ОПРЕДЕЛЕНИИ ОБРАТИМЫХ ИНГИБИТОРОВ АХЭ

5.1. Холинэстеразный сенсор для определения физостигмина

5.2. Холинэстеразные сенсоры для определения донепезила и берберина

5.2.1 Оптимизация условий определения донепезила

5.2.2. Оптимизация условий определения берберина

5.3. Холинэстеразные сенсоры для определения ГУП и ГАЛ

5.3.1. Сенсоры на основе полиэлектролитных комплексов, содержащих ДНК

5.3.2. Сенсоры на основе полиэлектролитных комплексов с ПАМАМ

ЗАКЛЮЧЕНИЕ И ВЫВОДЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Электрохимические биосенсоры для определения обратимых ингибиторов ацетилхолинэстеразы, используемых в терапии нейродегенеративных заболеваний»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы исследования. Ферментативные методы анализа находят широкое применение в анализе токсических препаратов, таких как пестициды и тяжелые металлы, в объектах эколого-аналитического контроля, а также в контроле лекарственных препаратов в медицине и фармакологии. Количественная характеристика состава объектов анализа основана на изменении активности ферментов в присутствии аналитов за счет их ингибирующего действия. Таким образом, ферментативный анализ моделирует таргетные биохимические взаимодействия в организме человека и позволяет делать выводы о потенциальной опасности или фармакологическом действии тех или иных соединений. Среди ферментов, используемых для определения ингибиторов, особое внимание уделяется холинэстеразам, и в первую очередь, ацетилхолинэстеразе (АХЭ). Данный фермент присутствует в синаптической щели, разделяющей нервные окончания нейронов большинства высших животных, и обеспечивает дискретность передачи нервных импульсов за счет каталитического гидролиза ацетил-холина - природного нейромедиатора. Снижение активности АХЭ приводит к гипервозбуждению мышц и в случае острых отравлений - к летальному исходу. Поскольку антихолинэстеразные агенты производились как боевые отравляющие вещества нервно-паралитического действия, ферментативные методы анализа ингибиторов АХЭ развивали первоначально для предотвращения потерь в условиях боевого применения отравляющих веществ. Впоследствии биосенсоры на основе АХЭ нашли применение в контроле фосфорорганических и карбами-натных пестицидов. В последнее время интерес к аналитическому применению АХЭ усилился в связи с большим вниманием, уделяемым нервно-дегенеративным заболеваниям. В частности, болезнь Альцгеймера сопровождается подавлением активности холин-ацетилтрансферазы, ответственной за синтез ацетилхолина, поэтому использование обратимых ингибиторов АХЭ восстанавливает концентрацию нейротрансмиттера и подавляет симптоматику заболевания. В настоящее время анализ таких препаратов производится методами жидкостной хроматографии, не совместимой с форматом проведения анализа у по-

стели больного вне лечебного учреждения (point-of-care diagnostics). В этой связи актуальна задача создания быстрых и чувствительных сенсоров для определения обратимых ингибиторов АХЭ с целью контроля количества препаратов ан-тихолинэстеразного действия в организме при терапевтическом приеме и предотвращения случайных отравлений в связи с приемом избыточных количеств лекарств.

Степень разработанности проблемы. Хотя биосенсоры с иммобилизованной АХЭ хорошо изучены, они в основном ориентированы на определение необратимых ингибиторов фермента. Анализ обратимого ингибирования предъявляет более высокие требования к условиям иммобилизации фермента, поскольку взаимодействие фермент - ингибитор проходит в присутствии субстрата и условия реакции более сложным образом влияют на чувствительность фермента к определяемому соединению. Электрохимические способы регистрации сигнала холинэстеразных сенсоров выгодно отличаются от оптических методов простотой используемого оборудования, удобством реализации в виде компактных сенсоров, чувствительностью регистрации сигнала. Внедрение новых материалов на основе полиэлектролитных комплексов, обеспечивающих коммуникацию биохимических и электрохимически активных компонентов, может существенно улучшить характеристики электрохимической регистрации сигнала об ин-гибировании холинэстераз, что расширит область контроля остаточных количеств пестицидов антихолинэстеразного действия.

Цель работы состояла в создании электрохимических ацетилхолинэсте-разных сенсоров для определения обратимых ингибиторов АХЭ с улучшенными аналитическими характеристиками на основе полиэлектролитных комплексов -носителей фермента, а также их тестирование на модельных растворах и в искусственно загрязненных объектах анализа.

Для достижения поставленной цели было необходимо решить следующие задачи:

1. Изучить с использованием метода поверхностного плазмонного резонанса (ППР) процессы формирования полиэлектролитных комплексов и адсорб-

ции на их поверхности АХЭ.

2. Определить условия электрохимической регистрации тиохолина с использованием стеклоуглеродных электродов (СУЭ), модифицированных медиа-торными системами - комбинированными покрытиями из углеродной сажи (УС) и фталоцианина кобальта (ФЦК).

3. Установить рабочие условия иммобилизации АХЭ с применением полиэлектролитных комплексов для достижения высокой чувствительности регистрации ингибирования фермента.

4. Установить зависимость операционных и аналитических характеристик разработанных биосенсоров при определении ацетилтиохолина (АТХ) и обратимых ингибиторов АХЭ в зависимости от способа модификации преобразователя сигнала.

5. Провести тестирование биосенсоров в модельных растворах ингибиторов и искусственно приготовленных образцах физиологических жидкостей с помощью разработанных ацетилхолинэстеразных биосенсоров и определить требования к пробоподготовке образцов с учетом оказываемого матричного эффекта.

Научная новизна работы состоит в следующем:

1. С использованием метода ППР выявлены закономерности образования полиэлектролитных комплексов на поверхности преобразователя сигнала из растворов полиэлектролитов - полиаллиламина (ПАА), поли(диаллилдиметил-аммоний хлорида) (ПДДА), дендримера поли(амидоамина) (ПАМАМ) 4 поколения, полистиросульфоната натрия (ПСС) и дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК), включая закономерности сборки комплексов и количество иммобилизованной на них АХЭ.

2. Определено влияние строения полиэлектролитных комплексов и конфигурации носителя на кинетику гидролиза субстрата АХЭ и операционные характеристики ацетилхолинэстеразных сенсоров.

3. Разработаны и охарактеризованы ацетилхолинэстеразные сенсоры на основе полиэлектролитных комплексов, различающихся по способу модифика-

ции поверхности трансдьюсера, в определении обратимых ингибиторов АХЭ, используемых в терапии нейродегенеративных заболеваний, таких как физо-стигмин, донепезил, берберин, гуперзин А (ГУП), галантамин (ГАЛ).

4. Определена возможность использования разработанных, биосенсоров для определения донепезила, берберина, ГУП и ГАЛ в искусственной урине на уровне, меньшем, чем ожидаемые концентрации указанных ингибиторов при регулярном терапевтическом приеме.

Теоретическая и практическая значимость диссертационной работы состоит в том, что:

1. Разработаны простые и надежные способы модификации СУЭ слоями УС, ФЦК и полиэлектролитными комплексами - носителями фермента, обеспечивающие быстрый отклик и высокую точность измерения сигнала биосенсоров на субстрат и обратимые ингибиторы АХЭ.

2. Установлены факторы, влияющие на структуру полиэлектролитных комплексов и их способность удерживать фермент в процессе измерения инги-бирующего действия ингибиторов обратимого действия.

3. Проведена кинетическая характеристика АХЭ на различных носителях в реакциях гидролиза АТХ и ингибирования лекарственными препаратами, применяемыми при лечении нейродегенеративных заболеваний.

4. Предложены высокочувствительные способы определения обратимых ингибиторов АХЭ, используемых в терапии нейродегенеративных заболеваний, с хроноамперометрической регистрацией сигнала ацетилхолинэстеразного биосенсора.

5. Проведена оценка потенциальных матричных эффектов и предложены простые протоколы пробоподготовки и проведения измерения ингибирующего действия указанных препаратов в искусственно приготовленных образцах урины.

Методология и методы исследования. Для подтверждения образования полиэлектролитных комплексов и иммобилизации на их поверхности АХЭ использовали метод регистрации ППР. Изменение электрохимических характери-

стик СУЭ при их модификации УС, ФЦК, полиэлектролитными комплексами и иммобилизации АХЭ изучали с помощью регистрации циклических вольтампе-рограмм и с помощью спектроскопии электрохимического импеданса. Регистрацию аналитического сигнала ацетилхолинэстеразных сенсоров в присутствии субстрата и ингибиторов осуществляли, измеряя ток окисления тиохолина -продукта ферментативного гидролиза, в хроноамперометрическом режиме. Математическую обработку полученных данных и метрологическую оценку результатов эксперимента осуществляли с помощью специализированного программного комплекса OriginPro 8.1 (OringLab Corporation).

Положения, выносимые на защиту:

1. Образование полиэлектролитных комплексов различного состава в виде тонкой пленки на поверхности ППР сенсора и иммобилизация АХЭ на поверхности образовавшихся комплексов. Зависимость характеристик фермента от состава комплекса и числа слоев полиэлектролитов.

2. Модификация СУЭ с помощью УС и ФЦК с последующим формированием на них полиэлектролитных комплексов для иммобилизации АХЭ для улучшения условий переноса электрона и регистрации сигнала хроноамперометриче-ским методом.

3. Выбор рабочих условий формирования биочувствительного слоя биосенсоров и измерения обратимого ингибирующего действия лекарственных препаратов, исходя из особенностей модификации электродов-трансдьюсеров.

4. Результаты определения физостигмина, донепезила, берберина, ГУП и ГАЛ с помощью разработанных амперометрических ацетилхолинэстеразных сенсоров, различающихся составом полиэлектролитных комплексов, в модельных растворах и в искусственной урине. Оценка и способы нивелирования матричного эффекта пробы.

Личный вклад автора. Давлетшина Р.Р. формулировала цели и задачи исследования, выполнила литературный обзор библиографических данных по теме диссертации, провела эксперименты по модификации и характеристике электродов с помощью УС и ФЦК, осуществила эксперименты по получению и

характеристике полиэлектролитных комплексов, по иммобилизации на их поверхности АХЭ, по установлению аналитических и операционных характеристик разработанных биосенсоров при определении субстрата и обратимых ингибиторов ацетилхолинэстеразы. Давлетшина Р.Р. участвовала в критическом рассмотрении и обобщении полученных результатов экспериментов, ею также проводилась математическая и метрологическая обработка экспериментальных данных и подготовка публикаций по теме диссертации и самой диссертации.

Степень достоверности полученных результатов подтверждается применением комплекса современных физических методов исследования, включающих электрохимические, измерение ППР, спектроскопию электрохимического импеданса, основанных на использовании сертифицированного оборудования.

Апробация работы. По материалам научно-квалификационной работы опубликовано 4 статьи, из них 3 - в международных журналах, входящих в международные системы цитирования Scopus и Web of Science, и одна статья - в отечественном журнале, входящем в список ВАК для опубликования результатов кандидатских, докторских диссертаций и систему Web of Science. Все полученные результаты опубликованы. Результаты диссертации докладывались и обсуждались на следующих конференциях: Третий съезд аналитиков России (Москва, 2017 г.), Ломоносов-2018 (Москва, 2018 г.), Четвертый междисциплинарный симпозиум по медицинской, органической и биологической химии и фармацевтике (Новый свет, 2018 г.), Материалы и технологии 21 века (Казань, 2018 г.), Итоговая научная конференция сотрудников Казанского университета за 2018 год (Казань, 2019 г.), XXI Менделеевский съезд по общей и прикладной химии (Санкт-Петербург, 2019г.), Х Юбилейная всероссийская конференция по электрохимическим методам анализа «ЭМА-2020» (Казань, 2020 г.).

Связь работы с научными программами, планами, темами. Работа выполнена в рамках основного научного направления Химического института им. А.М. Бутлерова «Синтез, строение, реакционная способность и практически полезные свойства органических, элементорганических и координационных со-

единений» и поддержана грантом РФФИ № 17-03-00381 «Новые подходы к повышению чувствительности определения обратимых ингибиторов - потенциальных фармпрепаратов от нейродегенеративных заболеваний с помощью электрохимических ацетилхолинэстеразных сенсоров».

Публикации. По теме диссертационного исследования опубликовано 10 печатных работ, из них 4 статьи в реферируемых журналах, входящих в библиографические базы данных Web of Science и Scopus и 6 тезисов доклада на всероссийских и международных конференциях. Соавторами в публикациях являлись: д.х.н. Евтюгин Г. А., научный руководитель, к.х.н. Иванов А.Н, студент Шарафиева И.Р., к.х.н. Шамагсумова Р.В., к.х.н. Евтюгин В.Г. принимали участие в изучении образования полиэлектролитных комплексов.

Объем и структура работы. Диссертационная работа изложена на 132 страницах текста компьютерной верстки, включает 23 рисунка и 20 таблиц. Диссертация состоит из Введения, 5 глав, Заключения и Списка использованных библиографических источников, содержащего 245 ссылок на работы российских и зарубежных авторов.

Во Введении охарактеризована актуальность темы исследования, сформулированы цель и задачи для ее достижения, представлены положения, составляющие научную новизну, теоретическую и практическую значимость диссертационной работы, методологию исследования, положения, выносимые на защиту. Указаны личный вклад автора и сведения об апробации диссертации. Дана общая структура диссертации и число публикаций, в которых изложены полученные результаты.

Глава 1 (Обзор литературы) посвящена биосенсорам для определения ингибиторов холинэстераз. В частности, рассмотрены особенности взаимодействия холинэстераза - ингибитор, сборка холинэстеразных биосенсоров, характеристики холинэстеразных биосенсоров для определения необратимых ингибиторов фермента и лекарств, используемых при лечении нейродегенеративных заболеваний.

Глава 2 (Экспериментальная часть) содержит описание использованных в работе реактивов и оборудования, методик модификации электродов и иммобилизации фермента при создании биосенсоров, а также методики определения субстрата и ингибиторов ацетилхолинэстеразы с помощью биосенсоров с различным составом поверхностного слоя.

Глава 3 (Характеристика образования полиэлектролитных комплексов и иммобилизации на их поверхности АХЭ методом ППР) посвящена результатам, полученным с помощью метода ППР, при формировании полиэлектролитных комплексов и иммобилизации АХЭ на их поверхности.

В Главе 4 (Влияние модификаторов ацетилхолинэстеразных сенсоров на их операционные характеристики и кинетические параметры гидролиза ацетил-тиохолина) приведены характеристики модификаторов, улучшающих электрохимические условия регистрации аналитического сигнала в виде тока окисления тиохолина, а также рассмотрены операционные и кинетические характеристики биосенсоров при гидролизе АТХ, отличающихся составом модификаторов для иммобилизации и способами иммобилизации фермента.

Глава 5 (Характеристика биосенсоров при определении обратимых ингибиторов АХЭ) содержит результаты, полученные с использованием разработанных биосенсоров, отличающихся составом модификаторов для иммобилизации и способами иммобилизации фермента, при определении обратимых ингибиторов АХЭ, используемых в терапии нейродегенеративных заболеваний, в модельных растворах и в растворе искусственной урины.

Диссертация выполнена на кафедре аналитической химии Химического института им. А.М. Бутлерова ФГАОУ ВО «Казанский (Приволжский) федеральный университет».

1 БИОСЕНСОРЫ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ИНГИБИТОРОВ ХОЛИНЭСТЕРАЗ (Литературный обзор)

1.1 Особенности взаимодействия холинэстераза - ингибитор

1.1.1 Общая характеристика холинэстераз

Холинэстеразы - ферменты, представители класса гидролаз, катализирующие реакцию гидролиза ацетилхолина (1), являющегося одним из наиболее важных нейромедиаторов, обеспечивающих передачу нервных импульсов [1].

Ацетилхолин

Холинэстеразы присутствуют только в организме высших животных, в растениях и микроорганизмах есть их аналоги, выполняющие сходные функции каталитического гидролиза сложных эфиров, называемые карбоксилэстеразами. Они отличаются меньшей селективностью в отношении субстрата и иными условиями проявления каталитической активности по сравнению с холинэстераза-ми животного происхождения.

В биоанализе из всего многообразия холинэстераз применяют два фермента - это АХЭ (Кф 3.1.1.7) и бутирилхолинэстераза (БХЭ, Кф 3.1.1.8). Их название связано с субстратом, гидролиз которого происходит наиболее быстро. АХЭ, называемая также истинной или эритроцитарной холинэстеразой, катализирует лучше всего гидролиз АТХ и практически не гидролизует бутирилхолин. БХЭ в наибольшей степени влияет на скорость гидролиза бутирилхолина. Скорость гидролиза ацетилхолина в присутствии БХЭ примерно в 1.7 раза ниже. Описаны и другие холинэстеразы (пропионилхолинэстераза, бензоилхолинэстераза), однако их применение в определении ингибиторов носит эпизодический характер.

Среди всех холинэстераз наиболее изучен механизм взаимодействия с субстратом АХЭ. Показано, что в нем участвуют аминокислотные остатки серина-200, глутамина-326 и гистидина-440 [2]. Активный центр фермента располагает-

(СН3)3К+СН2СН2ОСШ3 + Н20 О

Холинэстераза

(СНз^К+С^СН^Н + СН3СООН

Холин

(1)

ся почти в центре белковой глобулы, в складке глубиной 20 А, стенки которой выстланы гидрофобными остатками триптофана [3, 4]. Внедрение в складку молекулы ацетилхолина, несущей положительный заряд, обеспечивается градиентом электростатического поля в направлении дна складки, выстланной остатками серина, участвующими в образовании связи С-О. [5, 6]. Для объяснения легкости распада фермент-субстратного комплекса, который также сопровождается выводом катионного холина, не способного выходить из складки против градиента потенциала, было высказано предположение о возможности его переноса сквозь «дно» складки. Такой механизм, предложенный немецкими и израильскими учеными, противоречит каноническому механизму связывания субстрата, связанному с точечным взаимодействием субстрата с триадой «серин - глутамин - гистидин», и представлению о существовании в АХЭ дополнительного анионного центра связывания, координирующего триметиламмонийную группу молекулы субстрата (см., например, [7]) (рис. 1).

Рисунок 1 - Схема ферментативного гидролиза ацетилхолина в соответствии с механизмом локализованного активного центра АХЭ

С помощью анионного центра авторы объясняли некоторые особенности поведения фермента, в частности, его аллостерическую регуляцию и феномен ингибирования избытком субстрата [8]. Предполагалось, что вторая молекула ацетилхолина занимает активный центр фермента и препятствует достижению требуемой координации ацетилхолина в активном центре. Следует, однако, помнить, что доказательства структуры такого центра были получены малоинфор-

мативным способом исследования влияния структуры фосфорорганического ингибитора на степень ингибирования активного фермента. В настоящее время с помощью рентгеноструктурного анализа и молекулярного моделирования структура и аминокислотный состав «складки» надежно охарактеризованы. Установлен вклад в ориентацию анионных фрагментов аминокислотных остатков тира-мина, расположенных вблизи входа в «складку» [9, 10]

Состав этих фрагментов для АХЭ и БХЭ, различается, что и определяет способность БХЭ также катализировать гидролиз нейтральных субстратов [11].

БХЭ не ингибируется избытком субстрата и вообще по своей субстратной специфичности и условиям реализации катализа достаточно сильно отличается от АХЭ. Назначение этой вариации холинэстераз, присутствующей в сыворотке крови, не совсем ясно. Обнаружены биохимические аномалии людей, не имеющих БХЭ, что не мешает им развиваться и давать жизнеспособное потомство. По одной из версий, БХЭ играет роль резервного фермента, компенсирующего недостаток АХЭ в экстремальных случаях. По другой версии, фермент участвует в гидролизе некоторых форм белков, накапливающихся в крови, т.е. играет роль «мусорщика».

В соответствии с кинетикой реакции гидролиза ацетилхолина АХЭ - один из наиболее «быстрых» ферментов, известных человеку. На одну молекулу фермента приходится по кинетическим данным более 200 активных центров [12]. Это необходимо для обеспечения быстрой передачи нервного импульса в синап-тической щели, когда нужно разрушить выбрасываемые из липосом молекулы медиатора.

Холинэстеразы привлекали внимание химиков-аналитиков в течение более чем 50 лет. Первые системы использовали фермент, иммобилизованный на пенополиуретане в присутствии стабилизирующих добавок крахмала. Через реактор прокачивали раствор синтетического субстрата - бутирилтиохолин иодида. Электроды в виде сеток на выходе из реактора поляризовали постоянным током. Сигналом о взаимодействии фермента с необратимым ингибитором служил смещение потенциала. Формально система не подходила под определение био-

сенсора, поскольку система регистрации сигнала было пространственно отделена от системы генерации аналитического сигнала, но ее использовали в военных целях для регистрации боевых отравляющих веществ нервнопаралитического действия, а позднее - для контроля присутствия опасных количеств фосфорор-ганических и карбаминатных пестицидов. Все эти вещества относятся к необратимым ингибиторам фермента [13]. Обратимое ингибирующее действие на хо-линэстеразы оказывают тяжелые металлы, четвертичные аммонийные соли, биогенные амины [14, 15, 16]. Во всех вариантах измерения концентрации ингибиторов сигналом является снижение активности фермента, выражаемое величии и и с» 1

ной степени ингибирования или связанной с ней остаточной активности фермента [17].

Различение обратимого и необратимого ингибирования производится в зависимости от кинетики ингибирования и устойчивости ингибированного фермента. Для необратимых ингибиторов реакция связана с образованием фермент-ингибиторного комплекса, который при реактивации фермента распадается на компоненты, отличные от исходного ингибитора. В природе нет необратимых ингибиторов. Самые известные из антропогенных - вещества нервнопаралити-ческого действия, упомянутые выше. Необратимые ингибиторы определяют, инкубируя фермент сначала с раствором ингибитора, а затем - с субстратом. Обратимые ингибиторы образуют комплекс, распадающийся на исходный фермент и неизменный ингибитор. Определение обратимого ингибитора проводят, инкубируя фермент в смеси субстрата и ингибитора. Среди других отличительных признаков - зависимость степени ингибирования от соотношения концентрация субстрата и ингибитора, невозможность достижения 100% ингибирования, регенерация фермента в относительно мягких условиях и т.д.

Некоторые обратимые ингибиторы, например, ионы ртути(П), образуют достаточно прочные комплексы, не диссоциирующие за время эксперимента. В этом случае реактивация требует дополнительных реагентов, таких как дитиот-реитол или ЭДТА. В других случаях необратимый ингибитор (карбамат) дает

и и 1 и и

неустойчивый фермент-ингибиторный комплекс, быстро распадающийся с реге-

нерацией активной молекулы фермента. И в том, и в другом случае формальная кинетика ингибирования будет противоречить наблюдаемому изменению активности фермента в эксперименте. Ртуть будут относить к необратимым ингибиторам, а карбаматные пестициды - к обратимым. Такое «феноменологическое» описание требует уточнения, что подразумевается под обратимостью процесса в конкретном случае.

Ингибирование следует также отличать от денатурации, при котором происходит разрушение (частичное или полное, обратимое или необратимое) пространственной структуры белковой глобулы. Как правило, денатурация не селективна в том смысле, что затрагивает все участки молекулы белка, а не область активного или аллостерического центров, как ингибирование. Кроме того, химические денатурирующие агенты действуют на все молекулы белка, а не только на ферменты. К таким агентам относятся мочевина, поверхностно-активные вещества, органические растворители, смешивающиеся с водой [18]. Действие денатурирующих агентов может складываться аддитивно или синерге-тически с действием классических ингибиторов. Например, спирты, ацетон суммируют оказываемое на АХЭ действие с необратимым ингибированием параок-сона, если общее снижение активности фермента не превышает 30-50% [19]. В то же время, ацетонитрил усиливает необратимое действие фосфорорганических необратимых ингибиторов [20]. Иммобилизация холинэстераз снижает денатурирующее действие химических агентов и физических факторов (повышенные температуры) в силу дополнительной фиксации трёхмерной структуры белка. Это позволяет использовать при определении остаточных количеств пестицидов схемы пробоподготовки ВЭЖХ с экстракцией аналитов, адаптированные под контакт разбавленного водой экстракта с биосенсором.

1.1.2 Необратимое ингибирование

Необратимое ингибирование предполагает последовательный контакт фермента, в растворе или на носителе, с ингибитором и потом с субстратом. Иммобилизованный фермент отмывают от избытка ингибитора перед измерени-

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Давлетшина Регина Рудисовна, 2021 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Садыков А. С. Холинэстеразы. Активный центр и механизм действия [Текст] / А. С. Са-дыков, Е. В. Розенгарт, А. А. Абдулвахабов, Х. А. Асланов // Ташкент: ФАН. - 1976. - 208 с.

2. Бресткин А. П. Холинэстеразы наземных животных и гидробионтов [Текст] / А. П. Бре-сткин, Л. П. Кузнецова, С. Н. Моралев, Е. В. Розенгарт, Л. М. Эпштейн // Владивосток: Изд-во ТИНРО-Центр. - 1997. - 466 с.

3. Моралев С. Н. Современные представления о структуре и каталитических свойствах холинэстераз позвоночных и беспозвоночных [Текст] / С. Н. Моралев, Е. В. Розенгарт // Журн. эвол. биохим. физиол. - 1999. - Т. 35, № 1. - С.3-14.

4. Sussman J. L. Atomic structure of acetylcholinesterase from Torpedo californica: a prototypic acetylcholine-binding protein [Text] / J. L. Sussman, M. Harel, F. Frolow, C. Oefner, A. Goldman, L. Toker, I. Silman // Science. - 1991. - V. 253. - P. 872-879.

5. Harel M. Quaternary ligand binding to aromatic residues in the active gorge of acetylcholinesterase [Text] / M. Harel, I. Schalk, L. Ehret-Sabatier, F. Bouet, M. Goeldner, C. Hirth, P. H. Axelsen, I. Silman, J. L. Sussman // Proc. Nat. Acacd. Sci. - 1993. - V. 90. - P. 9031-9035.

6. Ripoll D. R. An electrostatic mechanism for substrate guidance down the aromatic gorge of acetylcholinesterase [Text] / D. R. Ripoll, C. Faerman, P. H. Axelsen, I. Silman, J. L. Sussman // Biochem. - 1993. - V. 90. - P. 5128-5132.

7. Оксенгендлер Г. И. Яды и противоядия [Текст] / Г. И. Оксенгендлер // Л.: Химия, 1982. - 182 с.

8. Моралев С. Н. "Субстратное ингибирование" - один из аспектов субстратной специфичности холинэстераз позвоночных и беспозвоночных [Текст] / С. Н. Моралев, Е. В. Ро-зенгарт // Журн. эвол. биохим. физиол. - 2001. - T. 37. - C. 358-373.

9. Zhang Y. Influence of structural fluctuation on enzyme reaction energy barriers in combined quantum mechanical/molecular mechanical studies [Text] / Y. Zhang, J. Kual, A. McCammon // J. Phys. Chem. B. - 2003. - V. 107, № 18. - P. 4459-4463.

10. Белинская Д. А. Роль электростатических взаимодействий в процессе сорбции лиган-дов в активные центры холинэстераз по данным молекулярного моделирования [Текст] / Д. А. Белинская, А. Х. Йуффер, Н. Н. Шестакова // Биоорг. Хим. - 2010. - Т. 36, № 2. - С. 200-205.

11. Cokugra§ A. N. Butyrylcholinesterase: structure and physiological importance [Text] / A.N. Cokugra§, Y. Adresi // Turkish J. Biochem. - 2003. - V. 28. - P. 54-61.

12. Яковлев В. А. Кинетика ферментативного катализа [Текст] / В. А. Яковлев. М.: Наука, 1965. - 248 с.

13. Rajangam B. Progress in enzyme inhibition based detection of pesticides [Text] / B. Rajan-gam, D. K. Daniel, A. I. Krastanov // Eng. Life Sci. - 2018. - V.18. - P.4-19.

14. Araujoa M.C. Brain acetylcholinesterase of jaguar cichlid ( Parachromis managuensis ): From physicochemical and kinetic properties to its potential as biomarker of pesticides and metal ions [Text] / M. C. de Araujoa, C. R. D. Assis, L. C. Silva, D. C. Machado, K. C. C. Silva, A. V. A. Lima, L. B. Carvalho, R. de Souza Bezerra, M. B. M. de Oliveira // Aquatic Toxicol. - 2016.

- V. 177. - P. 182-189.

15. Ramsay R. R. Assessment of enzyme inhibition: A review with examples from the development of monoamine oxidase and cholinesterase inhibitory drugs [Text] / R. R. Ramsay, K. F. Tipton // Molecules. - 2017. - V. 22. - Reg. №1192.

16. Karasova J. Z. Small quaternary inhibitors K298 and K524: cholinesterases inhibition, absorption, brain distribution, and toxicity [Text] / J. Z. Karasova, M. Hroch, K. Musilek, K. Kuca // Neurotox. Res. - 2016. - V. 29. - P. 267-274.

17. Songa E. A. Recent approaches to improving selectivity and sensitivity of enzyme-based biosensors for organophosphorus pesticides: A review [Text] / E. A. Songa, J. O. Okonkwo // Ta-lanta. - 2016. - V. 155. - P. 289-304.

18. Andreescu S. Screen-printed electrode based on ache for the detection of pesticides in presence of organic solvents [Text] / S. Andreescu, T. Noguer, V. Magearu, J.-L. Marty // Talanta. -2002. - V. 57. - P. 169-176.

19. Evtugyn G. A. Biosensors for the determination of environmental inhibitors of enzymes [Text] / G. A. Evtugyn, H. C. Budnikov, E. B. Nikolskaya // Russ. Chem. Rev. - 1999. - V. 68.

- P.1041-1064.

20. Gogol E. V. Amperometric biosensors based on nafion coated screen-printed electrodes for the determination of cholinesterase inhibitors [Text] / E. V. Gogol, G. A. Evtugyn, J.-L. Marty, H. C. Budnikov, V. G. Winter // Talanta. - 2000. - V. 53. - P. 379-389.

21. Aldridge W. N. The mechanism of inhibition of cholinesterases by organophosphorus compounds [Text] / W. N. Aldridge, A. N. Davison // Biochem. J. - 1953. - V. 55. - P. 763-766.

22. Alfthan K. Characterization and semiquantitative estimation of organophosphorus compounds based on inhibition of cholinesterases [Text] / K. Alfthan, H. Kenttamaa, T. Zukale // Anal. Chim. Acta. - 1989. - V. 217. - P. 43-51.

23. Evtugyn G. Biosensors: Essentials (Lectures Notes in Analytical Chemistry) [Text] / G. Evtugyn // Springer Verlag. - 2014. - 274 p.

24. Thomas D. Kinetic behavior of enzymes in artificial membranes. Inhibition and reversibility effects [Text] / D. Thomas, C. Bourdillon, G. Broun, J. P. Kernevez // Biochem. - 1974. - V. 13.

- P.2995-3000.

25. Ramachandran K. B. Modelling the effects of electrostatic interaction with reaction-generated pH change on the kinetics of immobilized enzymes [Text] / K. B. Ramachandran, A. S. Rathore, S. K. Gupta // Chem. Eng. J. Biochem. Eng. J. - 1995. - V. 57. - P. B15-B21.

26. Leskovac V. Comprehensive enzyme kinetics [Text] / V. Leskovac // Kluwer Academic Publishers. - 2004. - 438 p.

27. Colovic M. B. Acetylcholinesterase inhibitors: Pharmacology and toxicology [Text] / M. B. Colovic, D. Z. Krsti, T. D. Lazarevic-Pasti, A. M. Bondzic, V. M. Vasic // Curr. Neuropharm. -2013. - V. 11. - P. 315-335.

28. Amine A. Analytical aspects of enzyme reversible inhibition [Text] / A. Amine,

L. El Harrad, F. Arduini, D. Moscone, G. Palleschi // Talanta. - 2014. - V. 118. - P. 368-374.

29. Arduini F. Reversible enzyme inhibition-based biosensors: applications and analytical improvement through diagnostic inhibition [Text] / F. Arduini, A. Amine, D. Moscone, G. Palleschi // Anal. Lett. - 2009. - V. 42. - P. 1258-1293.

30. Евтюгин Г. А. Биосенсоры для определения инргибиторов ферментов в окружающей среде [Текст] / Г. А. Евтюгин, Г. К. Будников, Е. Б. Никольская // Усп. химии. - 1999. -Т.68, № 12. - С. 1142-1167.

31. Baumann E. K. Preparation of immobilized cholinesterase for use in analytical chemistry [Text] / E. K. Baumann, L. H. Goodson, G. G. Guilbault, D. N. Kramer // Anal. Chem. - 1961. -V. 37. - P. 1378-1381.

32. Bonnet C. Adsorption: and easy and efficient immobilisation of acetylcholinesterase on screen-printed electrodes [Text] / C. Bonnet, S. Andreescu, J.-L. Marty // Anal. Chim. Acta. -2003. - V. 481. - P. 209-211.

33. Sotiropoulou S. Lowering the detection limit of the acethylcholinesterase biosensor using a nanoporous carbon matrix [Text] / S. Sotiropoulou, N. A. Chaniotakis // Anal. Chim. Acta. -2005. - V. 530. - P. 199-204.

34. Liu G. Biosensor based on self-assembling acetylcholinesterase on carbon nanotubes for flow injection/ amperometric detection of organophosphate pesticides and nerve agents [Text] / G. Liu, Y. Lin // Anal. Chem. - 2006. - V. 78. - P. 835-843.

35. Joshi K. A. A disposable biosensor for organophosphorus nerve agents based on carbon nanotubes modified thick film strip electrode [Text] / K. A. Joshi, J. Tang, R. Haddon, J. Wang, W. Chen, A. Mulchandani // Electroanal. - 2005. - V. 17. - P. 54-58.

36. Sun X. Acetylcholinesterase biosensor based on poly(diallyldimethylammonium chloride)-multiwalled carbon nanotubes-graphene hybrid film [Text] / X. Sun, Z. Gong, Y. Cao, X. Wang // Nano-Micro Lett. - 2013. - V. 5. - P. 47-56.

37. Payentko V. Composites of silica with immobilized cholinesterase incorporated into polymeric shell [Text] / V. Payentko, A. Matkovsky, Y. Matrunchik // Nanoscale Res. Lett. - 2015. -V. 10, № 82. - 3 p.

38. £akmak9i E. Nonhydrolytic sol-gel synthesized oligosiloxane resin reinforced thiolene photocured coatings for the immobilization of acetylcholinesterase [Text] / E. £akmak9i, S. Demir // J. Sol-Gel Sci. Technol. - 2019. - V. 91. - P. 72-81.

39. Oujji N. B. Sol-gel immobilization of acetylcholinesterase for the determination of organophosphate pesticides in olive oil with biosensors [Text] / N. B. Oujji, I. Bakasa, G. Istamboulie, I. Ait-Ichou, E. Ait-Addi, R. Rouillon, T. Noguer // Food Control. - 2013. - V. 30. - P. 657-661.

40. Ciu H.-F. A highly stable acetylcholinesterase biosensor based on chitosan-TiO2-graphene nanocomposites for detection of organophosphate pesticides [Text] / H.-F. Cui, W.-W. Wu, MM. Li, X. Song, Y. Lv, T.-T. Zhang // Biosens. Bioelectron. - 2018. - V. 99. - P. 223-229.

41. Du D. An amperometric acetylthiocholine sensor based on immobilization of acetylcholi-nesterase on a multiwall carbon nanotube-cross-linked chitosan composite [Text] / D. Du, X. Huang, J. Cai, A. Zhang, J. Ding, S. Chen // Anal. Bioanal. Chem. - 2007. - V. 387. - P. 10591065.

42. Kumar T. H. V. Electrochemical biosensor for methyl parathion based on single-walled carbon nanotube/glutaraldehyde crosslinked acetylcholinesterase-wrapped bovine serum albumin nanocomposites [Text] / T. H. V. Kumar, A. K. Sundramoorthy // Anal. Chim. Acta. - 2015. -V. 1074. - P. 131-141.

43. Sharma S.P. Acetylcholinesterase inhibition-based biosensor for amperometric detection of Sarin using single-walled carbon nanotube-modified ferrule graphite electrode [Text] / S. P. Sharma, L. N. S. Tomar, J. Acharya, A. Chaturvedi, M. V. S. Suryanarayan, R. Jain // Sens. Actuators B. - 2012. - V. 166-167. - P. 616-623.

44. Arduini F. Disposable electrochemical biosensor based on cholinesterase inhibition with improved shelf-life and working stability for nerve agent detection [Text] / F. Arduini, G. Palleschi // Portable Chemical Sensors. NATO Science for Peace and Security Series A: Chemistry and Biology . Springer. - 2012. - P. 261-278.

45. Dutta R. R. Amperometric biosensing of organophosphate and organocarbamate pesticides utilizing polypyrrole entrapped acetylcholinesterase electrode [Text] / R. R. Dutta, P. Puzari // Biosens. Bioelectron. - 2014. - V. 52. - P. 166-172.

46. Turan J. Development of an amperometric biosensor based on a novel conducting copolymer for detection of anti-dementia drugs [Text] / J. Turan, M. Kesik, S. Soylemez, S. Goker, M. Kolb, M. Bahadir, L. Toppare // J. Electroanal. Chem. - 2014. - V. 735. - P. 43-50.

47. Tumturk H. A new method for immobilization of acetylcholinesterase [Text] / H. Tumturk, F. §ahin, G. Demirel // Bioproc. Biosyst. Eng. - 2007. - V. 30. - P. 141-145.

48. Shamagsumova R. Acetylcholinesterase biosensor for inhibitor measurements based on glassy carbon electrode modified with carbon black and pillar[5]arene [Text] /

R. V. Shamagsumova, D. N. Shurpik, P. L. Padnya, I. I. Stoikov, G. A. Evtugyn // Talanta. -2017. - V. 144. - P. 559-568.

49. Khaldi K. Comparative investigation of two methods for Acetylcholinesterase enzyme immobilization on modified porous silicon [Text] / K. Khaldi, S. Sam, A. Lounas, C. Yaddaden, N.-E. Gabouze // Appl. Surf. Sci. - 2017. - V. 421A. - P. 148-154.

50. Ivanov Y. Amperometric biosensor based on a site-specific immobilization of acetylcholi-nesterase via affinity bonds on a nanostructured polymer membrane with integrated multiwall carbon nanotubes [Text] / Y. Ivanov, I. Marinov, K. Gabrovska, N. Dimcheva, T. Godjevargova // J. Mol. Catal. B. - 2010. - V. 63. - P. 141-148.

51. Bucur B. Cholinesterase immobilisation on the surface of screen-printed electrodes based on concanavalin A affinity [Text] / B. Bucur, A. F. Danet, J.-L. Marty // Anal. Chem. Acta. - 2005. - V. 530. - P. 1-6.

52. Bucur B. Affinity methods to immobilize acetylcholinesterases for manufacturing biosensors [Text] / B. Bucur, S. Andreescu, J.-L. Marty // Anal. Lett. - 2004. - V. 37. - P. 1571-1588.

53. Istamboulie G. Highly sensitive detection of organophosphorus insecticides using magnetic microbeads and genetically engineered acetylcholinesterase [Text] / G. Istamboulie, S. Andreescu, J.-L. Marty, T. Noguer // Biosens. Bioelectron. - 2007. - V. 23. - P. 506-512.

54. Trevan M. D. Effect of immobilization on enzymatic activity. Immobilized enzymes : an introduction and application in biotechnology [Text] / M. D. Trevan // Wiley & Sons: New York. -1980. - P. 11-55. - 138 p.

55. Zhang Y. Layer-by-layer assembled carbon nanotube-acetylcholinesterase biopolymer renewable interfaces: SPR and electrochemical characterization [Text] / Y. Zhang, M. A. Arugula, J. S. Kirsch, X. Yang, E. Olsen, A. L. Simonian // Langmuir. - 2015. - V. 31. - P. 1462-1468.

56. Villate F. Acetylcholinesterase assay for rapid expression screening in liquid and solid media [Text] / F. Villatte, T. T. Bachman, A. S. Hussein, R. D. Schmid // Biotechniques. - 2001. - V. 30. - P. 81-86.

57. Pohanka M. Assessment of acetylcholinesterase activity using indoxylacetate and comparison with the standard Ellman's method [Text] / M. Pohanka, M. Hrabinova, K. Kuca, J.-P. Si-monato // Int. J. Mol. Sci. - 2011. - V. 12. - P. 2631-2640.

58. Pohanka N. Acetylcholinesterase based dipsticks with indoxylacetate as a substrate for assay of organophosphates and carbamates [Text] / M. Pohanka // Anal. Lett. - 2012. - V. 45. - P. 367-374.

59. Krupka R. M. Indophenyl acetate and acetylcholinesterase: Binding of a non-specific substrate on the margin of the active center [Text] / R. M. Krupka // Biochim. Biophys. Acta. -1975. - V. 410. - P. 120-129.

60. Hossain S. M. Z. Reagentless bidirectional lateral flow bioactive paper sensors for detection of pesticides in beverage and food samples [Text] / S. M. Z. Hossain, R. E. Luckham, M. J. McFadden, J. D. Brennan // Anal. Chem. - 2009. - V. 81, № 21. - P. 9055-9064.

61. Rozengart E. V. Indophenol chromogenic substrates of cholinesterases of different origin [Text] / E. V. Rozengart, N. E. Basova, A. A. Suvorov , A. E. Khovanskikh // J. Evol. Biochem. Physiol. - 2002. - V. 38. - P. 16-23.

62. Ellman G. L. A new and rapid colorimetric determination of acetylcholinesterase activity [Text] / G. L. Ellman, K. D. Courtney, V. Andres, R. M. Featherstone // Biochem. Pharmac. -1961. - V. 7. - P. 88-95.

63. Sabelle S. Design and synthesis of chemiluminescent probes for the detection of choli-nesterase activity [Text] / S. Sabelle, P.-Y. Renard, K. Pecorella, S. de Suzzoni-Dezard, C. Cre-minon, J. Grassi, C. Mioskowski // J. Am. Chem. Soc. - 2002. - V. 124. - P. 4874-4880.

64. Lin T.-J. Determination of organophosphorous pesticides by a novel biosensor based on localized surface plasmon resonance [Text] / T.-J. Lin, K.-T. Huang, C.-Y. Liu // Biosens. Bioelec-tron. - 2006. - V. 22. - P. 513-518.

65. Huang X. A gold nanoparticle labeling strategy for the sensitive kinetic assay of the car-bamate-acetylcholinesterase interaction by surface plasmon resonance [Text] / X. Huang, H. T. Danhu, Z. D. Du, A. Zhang // Talanta. - 2009. - V. 78. - P. 1036-1042.

66. Puiu M. Kinetic approach of aflatoxin B1-acetylcholinesterase interaction: A tool for developing surface plasmon resonance biosensors [Text] / M. Puiu, O. Istrate, L. Rotariu, C. Bala // Anal. Biochem. - 2012. - V. 421, № 2. - P. 587-594.

67. Liron Z. Surface-enhanced Raman scattering detection of cholinesterase inhibitors [Text] / Z. Liron, A. Zifman, V. Heleg-Shabtai // Anal. Chim. Acta. - 2011. - V. 703, № 2. - P. 234-238.

68. Tan M. J. Metal carbonyl-gold nanoparticle conjugates for highly sensitive SERS detection of organophosphorus pesticides [Text] / M. J. Tan, Z.-Y. Hong, M.-H. Chang, C.-C. Liu, H.-F. Cheng, X. J. Loh, C.-H. Chen, C.-D. Liao, K. V. Kong // Biosens. Bioelectron. - 2017. - V. 96. - P.167-172.

69. Barveen N. R. Synergistic action of star-shaped Au/Ag nanoparticles decorated on AgFeO2 for ultrasensitive SERS detection of a chemical warfare agent on real samples [Text] / N. R. Barveen, T.-J. Wang, Y.-H. Chang // Anal. Methods. - 2020. - V. 12. - P. 1342-1352.

70. Goodson L. H. An immobilized cholinesterase product for use in the rapid detection of enzyme inhibitors in air or water [Text] / L. H. Goodson, W. B. Jacobs, A. W. Davis // Anal. Biochem. - 1973. - V. 51, № 2. - P. 362-367.

71. Guilbault G. G. The application of modified Nernstian equations to the electrochemical determination of enzyme kinetics [Text] / G. G. Guilbault, D. N. Kramer, P. Goldberg // J. Phys. Chem. - 1965. - V. 67. - P. 1747-1749.

72. Kramer D. N. Electrochemical determination of cholinesterase and thiocholine esters [Text] / D. N. Kramer, P. L. Cannon, G. G. Guilbault // Anal. Chem. - 1962. - V. 34, № 7. - P. 842-845.

73. Bucur M.-P. Critical evaluation of acetylthiocholine iodide and acetylthiocholine chloride as substrates for amperometric biosensors based on acetylcholinesterase [Text] / M.-P. Bucur, B. Bucur, G.-L. Radu // Sensors. - 2013. - V. 13. - P. 1603-1613.

74. Ricci F. Characterisation of Prussian blue modified screen-printed electrodes for thiol detection [Text] / F. Ricci, F. Arduini, A. Amine, D. Moscone, G. Palleschi // J. Electroanal. Chem. -2004. - V. 563, № 2. - P. 229-237.

75. Suprun E. Acetylcholinesterase sensor based on screen-printed carbon electrode modified with Prussian blue [Text] / E. Suprun, G. Evtugyn, H. Budnikov, F. Ricci, D. Moscone, G. Palleschi // Anal. Bioanal. Chem. - 2005. - V. 383. - P. 597-604.

76. Chen H. An electrochemical sensor for pesticide assays based on carbon nanotube-enhanced acetylcholinesterase activity [Text] / H. Chen, X. Zuo, S. Su, Z. Tang, A. Wu, S. Song, D. Zhang, C. Fan // Analyst. - 2008. - V. 133. - P. 1182-1186.

77. Zhao H. An ultra-sensitive acetylcholinesterase biosensor based on reduced graphene oxide-Au nanoparticles-P-cyclodextrin/Prussian blue-chitosan nanocomposites for organophosphorus pesticides detection [Text] / H. Zhao, X. Ji, B. Wang, N. Wang, X. Li, R. Ni, J. Ren // Biosens. Bioelectron. - 2015. - V. 65. - P. 23-30.

78. Shimada H. A novel cholinesterase assay for the evaluation of neurotoxin poisoning based on the electron-transfer promotion effect of thiocholine on an Au electrode [Text] / H. Shimada, Y. Kiyozumi, Y. Koga, Y. Ogata, Y. Katsuda, Y. Kitamura, M. Iwatsuki, K. Nishiyama, H. Baba, T. Ihara // Sens. Actuators B. - 2019. - V. 298. - Reg. 126893.

79. Laschi S. Evaluation of pesticide-induced acetylcholinesterase inhibition by means of disposable carbon-modified electrochemical biosensors [Text] / S. Laschi, D. Ogonczyk, I. Pal-chetti, M. Mascini // Enz. Microb. Technol. - 2007. - V. 40, № 3. - P. 485-489.

80. Ivanov A. N. Acetylcholinesterase biosensor based on single-walled carbon nanotubes - Co phtalocyanine for organophosphorus pesticides detection [Text] / A. N. Ivanov, R. R. Younusov, G. A. Evtugyn, F. Arduini, D. Moscone, G. Palleschi // Talanta. - 2011. - V. 85. - P. 216-221.

81. Fang C. S. Rapid and sensitive electrochemical detection of carbaryl based on enzyme inhibition and thiocholine oxidation mediated by a ruthenium(III) complex [Text] / C. S. Fang, K. H. Oh, J. K. Park, H. Yang // Electroanal. - 2017. - V. 29, № 2. - P. 339-344.

82. Zamfir L.-G. Acetylcholinesterase biosensor for carbamate drugs based on tetrathiafulvalene-tetracyanoquinodimethane/ionic liquid conductive gels [Text] / L.-G. Zamfir, L. Rotariu, C. Bala // Biosens. Bioelectron. - 2013. - V. 46. - P. 61-67.

83. Rotariu R. A rational design of the multiwalled carbon nanotube-7,7,8,8-tetracyanoquinodimethan sensor for sensitive detection of acetylcholinesterase inhibitors [Text] / R. Rotariu, L.-G. Zamfir, C. Bala // Anal. Chim. Acta. - 2012. - V. 748. - P. 81-88.

84. Zhang Y. An acetylcholinesterase inhibition biosensor based on a reduced graphene oxide/silver nanocluster/chitosan nanocomposite for detection of organophosphorus pesticides [Text] / Y. Zhang, H. Liu, Z. Yang, S. Ji, J. Wang, P. Pang, L. Feng, H. Wang, Z. Wu, W. Yang // Anal. Methods. - 2015. - V. 7. - P. 6213-6219.

85. Gorbatchuk V. V. Co-polymers of oligolactic acid and tetrasubstituted thiacalix[4]arenes as a new material for electrochemical sensor development [Text] / V. V. Gorbatchuk, A. V. Por-fireva, V. B. Stepanova, Yu I. Kuzin, V. G. Evtugyn, R. V. Shamagsumova, I. I. Stoikov, G. A. Evtugyn // Sens. Actuators B. - 2017. - V. 246. - P. 136-145.

86. Tang W. Amperometric determination of organophosphorus pesticide by silver electrode using an acetylcholinesterase inhibition method [Text] / W. Tang, J. Wu // Anal. Methods. - 2014. - V. 6. - P. 924-929.

87. Lang Q. A sensitive acetylcholinesterase biosensor based on gold nanorods modified electrode for detection of organophosphate pesticide [Text] / Q. Lang, L. Han, C. Hou, F. Wang, A. Liu // Talanta. - 2016. - V. 156-157. - P. 34-41.

88. Yao Y. The development of a novel biosensor based on gold nanocages/graphene oxide-chitosan modified acetylcholinesterase for organophosphorus pesticide detection [Text] / Y. Yao, G. Wang, G. Chu, X. An, Y. Guo, X. Sun // New J. Chem. - 2019. - V. 43. - P. 13816-13826.

89. Crochet K. L. Enzyme electrode system for assay of serum cholinesterase [Text] / K. L. Crochet, J. G. Montalvo // Anal. Chim. Acta. - 1973. - V. 66. - P. 259-269.

90. Ivanov A. N. New polyaniline-based potentiometric biosensor for pesticides detection [Text] / A. N. Ivanov, G. A. Evtugyn, L. V. Lukachova, E. E. Karyakina, H. C. Budnikov, S. G. Kise-leva, A. V. Orlov, G. P. Karpacheva, A. A. Karyakin // IEEE Sens. J. - 2003. - V. 3. - P. 333340.

91. Snejdarkova M. Acetylcholinesterase sensors based on gold electrodes modified with den-drimer and polyaniline: A comparative research [Text] / M. Snejdarkova, L. Svobodova, G. Evtugyn, H. Budnikov, A. Karyakin, D. P. Nikolelis, T. Hianik // Anal. Chim. Acta. - 2004. - V. 514. - P. 79-88.

92. Mousavi M. P. S. In situ sensing of the neurotransmitter acetylcholine in a dynamic range of 1 nM to 1 mM [Text] / M. P. S. Mousavi, M. K. Abd El-Rahman, A. M. Mahmoud, R. M. Ab-delsalam, P. Bühlmann // ACS Sens. - 2018. - V. 3, № 12. - P. 2581-2589.

93. Ashmawy N. H. Novel carbon/PEDOT/PSS-based screen-printed biosensors for acetylcho-line neurotransmitter and acetylcholinesterase detection in human serum [Text] / N. H. Ash-mawy, A. A. Almehizia, T. A. Youssef, A. E. Amr, M. A. Al-Omar, A. H. Kamel // Molecules. -2019. - V. 24. - Reg. 1539.

94. Juárez-Gómez J. Construction and optimization of a novel acetylcholine ion-selective electrode and its application for trace level determination of propoxur pesticide [Text] / J. Juárez-Gómez, M. T. Ramírez-Silva, D. Guzmán-Hernández, M. Romero-Romo, M. Palomar-Pardavé // J. Electrochem. Soc. - 2020. - V. 167. - Reg. 087501.

95. Hai A. Acetylcholinesterase-ISFET based system for the detection of acetylcholine and acetylcholinesterase inhibitors [Text] / A. Hai, D. Ben-Haim, N. Korbakov, A. Cohen, J. Shappir, R. Orena, M. E. Spira, S. Yitzchaik // Biosens. Bioelectron. - 2006. - V. 22, № 5. - P. 605-612.

96. Reher S. The potentiometric biosensor acetylcholine esterase as a model system [Text] / S. Reher, Y. Lepka, G. Schwedt // Microchim. Acta. - 2002. - V. 140. - P. 15-20.

97. Upadhyay S. Immobilization of acetylcholineesterase-choline oxidase on a gold-platinum bimetallic nanoparticles modified glassy carbon electrode for the sensitive detection of organo-phosphate pesticides, carbamates and nerve agents [Text] / S. Upadhyay, G. R. Rao, M. K. Sharma, B. K. Bhattacharya, V. K. Rao, R. Vijayaraghavan // Biosens. Bioelectron. - 2009. - V. 25, № 4. - P. 832-838.

98. Chauhan N. Highly sensitive and rapid detection of acetylcholine using an ITO plate modified with platinum-graphene nanoparticles [Text] / N. Chauhan, J. Naranga, U. Jain // Analyst. -2015. - V. 140. - P. 1988-1994.

99. Chauhan N. Sensitive biosensing of neurotransmitter: 2D material wrapped nanotubes and MnO2 composites for the detection of acetylcholine [Text] / N. Chauhan, S. Balayan, U. Jain // Synth. Metals. - 2020. - V. 263. - Reg. 116354.

100. Pchelintsev N. A. A novel procedure for rapid surface functionalisation and mediator loading of screen-printed carbon electrodes [Text] / N. A. Pchelintsev, P. A. Millner // Anal. Chim. Acta. - 2008. - V. 612, № 2. - P. 190-197.

101. Ricci F. Sensor and biosensor preparation, optimisation and applications of Prussian Blue modified electrodes [Text] / F. Ricci, G. Palleschi // Biosens. Bioelectron. - 2005. - V. 21, № 3. - P. 389-407.

102. Rejeb I. B. Development of a bio-electrochemical assay for AFB1 detection in olive oil [Text] / I. B. Rejeb, F. Arduini, A. Arvinte, A. Amine, M. Gargouri, L. Micheli, C. Bala, D. Moscone, G. Palleschi // Biosens. Bioelectron. - 2009. - V. 24, № 7. - P. 1962-1968.

103. Espinosa M. Development of a disposable organophosphate biosensor [Text] / M. Espinosa, P. Atanasov, E. Wilkins // Electroanal. - 1999. - V. 11. - P. 1055-1062.

104. Ghindilis A. L. Potentiometric biosensors for cholinesterase inhibitor analysis based on me-diatorless bioelectrocatalysis [Text] / A. L. Ghindilis, T. G. Morzunova, A. V. Barmin, I. N. Ku-rochkin // Biosens. Bioelectron. - 1996. - V. 11. - P. 873-880.

105. Diehl-Faxon J. Direct electron transfer based tri-enzyme electrode for monitoring of or-ganophosphorus pesticides [Text] / J. Diehl-Faxon, A. L. Ghindilis, P. Atanasov, E. Wilkins // Sens. Actuators B. - 1996. - V. 36. - P. 448-457.

106. Pohanka M. Spectrophotomeric assay of aflatoxin B1 using acetylcholinesterase immobilized on standard microplates [Text] / M. Pohanka // Anal. Lett. - 2013. - V. 46, № 8. - P. 13061315.

107. Soldatrkin O. Acetylcholinesterase-based conductometric biosensor for determination of aflatoxin B1 [Text] / O. Soldatkin, O. S. Burdak, T. A. Sergeyeva, V. M. Arkhypova, S. V. Dzyadevych, A. P. Soldatkin // Sens. Actuators B. - 2013. - V. 188. - P. 999-1003.

108. Stepurska K. V. Development of novel enzyme potentiometric biosensor based on pH-sensitive field-effect transistors for aflatoxin B1 analysis in real samples [Text] / K. V. Stepurska, O. O. Soldatkin, V. M. Arkhypova, A. P. Soldatkin, F. Lagarde, N. Jaffrezic-Renault, S. V. Dzyadevych // Talanta. - 2015. - V. 144. - P. 1079-1084.

109. Chrouda A. An acetylcholinesterase inhibition-based biosensor for aflatoxin B1 detection using sodium alginate as an immobilization matrix [Text] / A. Chrouda, K. Zinoubi, R. Soltane, N. Alzahrani, G. Osman, Y. O. Al-Ghamdi, S. Qari, A. Al Mahri, F. K. Algethami, H. Majdoub, N. Jaffrezic-Renault // Toxins. - 2020. - V. 12. - Reg. 173.

110. Yuan Q. Detection of AFB1 via TiO2 Nanotubes/Au Nanoparticles/Enzyme Photoelectro-chemical Biosensor [Text] / Q. Yuan, C. He, R. Mo, L. He, C. Zhou, P. Hong, S. Sun, C. Li // Coatings. - 2018. - V. 8, № 3. - P. 90.

111. Espinoza M. A. Detection of glycoalkaloids using disposable biosensors based on genetically modified enzymes [Text] / M. A. Espinoza, G. Istamboulie, A. Chira, T. Noguer, M. Stoytcheva, J.-L. Marty // Anal. Biochem. - 2014. - V. 457. - P. 85-90.

112. Cuartero M. New approach for the potentiometric-enzymatic assay of reversible-competitive enzyme inhibitors. Application to acetylcholinesterase inhibitor galantamine and its determination in pharmaceuticals and human urine [Text] / M. Cuartero, M. S. García, F. García-Cánovas, J. Á. Ortuño // Talanta. - 2013. - V. 110. - P. 8-14.

113. Kostelnik A. Construction of an acetylcholinesterase sensor based on synthesized paramagnetic nanoparticles, a simple tool for neurotoxic compounds assay [Text] / A. Kostelnik, P. Ko-pel, A. Cegan, M. Pohanka // Sensors. - 2017. - V. 17. - Reg. 676.

114. Wang X. Colorimetric assay of butyrylcholinesterase activity based on para-sulfonatocalix[4]arene-modified gold nanoparticles [Text] / X. Wang, K. Koh, H. Chen // Sens. Actuators B. - 2017. - V. 251. - P. 869-876.

115. Fabini E. Combination of human acetylcholinesterase and serum albumin sensing surfaces as highly informative analytical tool for inhibitor screening [Text] / E. Fabini, A. Tramarin, M. Bartolini // J. Pharm. Biomed. Anal. - 2018. - V. 155. - P. 177-184.

116. Hu X. Nanoporous gold electrode for ultrasensitive detection of neurotoxin fasciculin [Text] / X. Hu, C. Z. Dinu // Anal. Chim. Acta. - 2019. - V. 1085. - P. 91-97.

117. Alvau M. D. Enzyme-based electrochemical biosensor for therapeutic drug monitoring of anticancer drug irinotecan [Text] / M. D. Alvau, S. Tartaggia, A. Meneghello, B. Casetta, G. Calia, P. A. Serra, F. Polo, G. Toffoli // Anal.Chem. - 2018. - V. 90, № 10. - P. 6012-6019.

118. Asturias-Arribas L. Screen-printed biosensor based on the inhibition of the acetylcholinesterase activity for the determination of codeine [Text] / L. Asturias-Arribas, M. A. Alonso-Lomillo, O. Domínguez-Renedo, M. J. Arcos-Martínez // Talanta. - 2013. - V. 111. - P. 8-12.

119. Soldatkin O. O. Application of enzyme multibiosensor for toxicity analysis of real water samples of different origin [Text] / O. O. Soldatkin, O. S. Pavluchenko, O. L. Kukla, I. S. Ku-cherenko, V. M. Peshkova, V. M. Arkhypova, S. V. Dzyadevych, A. P. Soldatkin, A. V. El'skaya // Biopolymer Cell. - 2009. - V. 25. - P. 204-209.

120. Gumpu M. B. Amperometric determination of As(III) and Cd(II) using a platinum electrode modified with acetylcholinesterase, ruthenium(II)-tris(bipyridine) and graphene oxide [Text] / M. B. Gumpu, M. Veerapandian, U. M. Krishnan, J. B. B. Rayappan // Microchim. Acta. - 2018. - V. 185, № 297.

121. David M. Development and evaluation of sol-gel-based biosensors for cadmium ions detection [Text] / M. David, M. Badea, M. Florescu // Env. Eng. Manag. J. - 2018. - V. 17, № 2. - P. 316-326.

122. Kumar D. N. Spectrofluorimetric determination of Hg2+ and Pb2+ using acetylcholinesterase (AChE)-based formation of silver nanoparticles [Text] / D. N. Kumar, J. Roy, S. A. Alex, N. Chandrasekaran, A. Mukherjee// RSC Adv. - 2016. - V. 6. - P. 21261-21270.

123. Stepurska K. V. Feasibility of application of conductometric biosensor based on acetylcholinesterase for the inhibitory analysis of toxic compounds of different nature [Text] / K. V. Stepurska, O. O. Soldatkin, I. S. Kucherenko, V. M. Arkhypova, S. V. Dzyadevych, A. P. Soldatkin // Anal. Chim. Acta. - 2015. - V. 854. - P. 161-168.

124. Domínguez-Renedo O. Determination of metals based on electrochemical biosensors [Text] / O. Domínguez-Renedo, M. A. Alonso-Lomillo, M. J. Arcos-Martínez // Crit. Rev. Environ. Sci. Technol. - 2013. - V. 43. - P. 1042-1073.

125. Volotovskky V. Ion-sensitive field effect transistor-based multienzyme sensor for alternative detection of mercury ions, cyanide, and pesticide [Text] / V. Volotovskky, N. Kim // J. Microbiol. Biotechnol. - 2003. - V. 13. - P. 373-377.

126. Evtugyn G. A. The application of cholinesterase potentiometric biosensor for preliminary screening of the toxicity of waste waters [Text] / G. A. Evtugyn, E. P. Rizaeva, E. E. Stoikova, V. Z. Latipova, H. C. Budnikov // Electroanal. - 1997. - V. 9. - P. 1124-1128.

127. Evtugyn G. A. Influence of surface-active compounds on the response and sensitivity of cholinesterase biosensors for inhibitor determination [Text] / G. A. Evtugyn, H. C. Budnikov, E. B. Nikolskaya // Analyst. - 1996. - V. 121. - P. 1911-1915.

128. Khaled E. Novel enzymatic potentiometric approaches for surfactant analysis [Text] / E. Khaled, H. N. A. Hassan, M. A. Abdelaziz, R. O. El-Attar // Electroanal. - 2017. - V. 29, № 3. -P. 716-721.

129. Kucherenko I. S. A novel biosensor method for surfactant determination based on acetylcholinesterase inhibition [Text] / I. S. Kucherenko, O. O. Soldatkin, V. M. Arkhypova, S. V. Dzyadevych, A. P. Soldatkin // Measur. Sci. Technol. - 2012. - V. 23, № 6. - Reg. 065801.

130. Hadd A. G. Microfluidic assays of acetylcholinesterase inhibitors [Text] / A. G. Hadd, S. C. Jacobson, J. M. Ramsey // Anal. Chem. - 1999. - V. 71. - P. 5206-5212.

131. Liao S. Acetylcholinesterase liquid crystal biosensor based on modulated growth of gold nanoparticles for amplified detection of acetylcholine and inhibitor [Text] / S. Liao, Y. Qiao, W. Han, Z. Xie, Z. Wu, G. Shen, R. Yu //Anal. Chem. - 2012. - V. 84. - P. 45-49.

132. Hardy J. Amyloid deposition as the central event in the aetiology of Alzheimer's disease [Text] / J. Hardy, D. Allsop // Trends Pharmacol. Sci. - 1991. - V. 12. - P. 383-388.

133. Martorana A. Beyond the c-holinergic hypothesis: do current drugs work in Alzheimer's disease? [Text] / A. Martorana, Z. Esposito, G. Koch // CNS Neurosci. Ther. - 2010. - V. 16, № 4. - P.235-245.

134. Bartus R. T. The cholinergic hypothesis of geriatric memory dysfunction [Text] / R. T. Bar-tus, R. Dean, B. Beer, A. S. Lippa // Science. - 1982. - V. 217, № 4558. - P.408-414.

135. De los Rios C. Cholinesterase inhibitors: A patent review (2007 - 2011) [Text] / C. De los Rios // Expert Opin. Ther. Pat. - 2012. - V. 22, № 8. - P. 853-869.

136. Pinho B. R. Nature as a source of metabolites with cholinesterase-inhibitory activity: An approach to Alzheimer's disease treatment [Text] / B. R. Pinho, F. Ferreres, P. Valentao, P. B. Andrade // J. Pharm. Pharmacol. - 2013. - V. 65. - P. 1681-1700.

137. Yacoubian T. A. Neurodegenerative disorders: Why do we need new therapies? [Text] / T. A. Yacubian // Drug discovery approaches for the treatment of neurodegenerative disorders. Academic Press. - 2017. - P. 1-16.

138. Strafella C. Application of precision medicine in neurodegenerative diseases [Text] / C. Strafella, V. Caputo, M. R. Galota, S. Zampatti, G. Marella, S. Mauriello, R. Cascella, E. Giardina // Front. Neurol. - 2018. - V.9. - P. 701.

139. Bravo-Anaya L. M. Rheological Properties of DNA Molecules in Solution: Molecular Weight and Entanglement Influences [Text] / L. M. Bravo-Anaya, F. Pignon, F. A. Soltero Martínez, M. Rinaudo // Polym. - 2016. - V. 8. - P. 279.

140. Evdokimov Y. M. A compact form of double-stranded DNA in solution [Text] / Y. M. Evdokimov, A. L. Platonov, Y. M. Varshavsky // FEBS Lett. - 1972. - V. 23, № 2. - P. 180184.

141. Lahiri J. A Strategy for the Generation of Surfaces Presenting Ligands for Studies of Binding Based on an Active Ester as a Common Reactive Intermediate: A Surface Plasmon Resonance Study [Text] / J. Lahiri, L. Isaacs, J. Tien, G. M. Whitesides // Anal. Chem. -1999. - V.71, № 4. - P.777-790.

142. Jung L. S. Quantitative Interpretation of the Response of Surface Plasmon Resonance Sensors to Adsorbed Films [Text] / L. S. Jung, C. T. Campbell, T. M. Chinowsky, M. N. Mar, S. S. Yee // Langm. - 1998. - V.14. - P. 5636-5648.

143. Malinsky M. D. Chain Length Dependence and Sensing Capabilities of the Localized Surface Plasmon Resonance of Silver Nanoparticles Chemically Modified with Alkanethiol Self-Assembled Monolayers [Text] / M. D. Malinsky, K. L. Kelly, G. C. Schatz, R. P. Van Duyne // J. Am. Chem. Soc. - 2001. - V. 123. - P. 1471-1482.

144. Stenberg E. Quantitative determination of surface concentration of protein with surface plasmon resonance using radiolabeled proteins [Text] / E. Stenberg, B. Persson, H. Roos, C. Ur-baniczky // Journ. Coll. Interf. Scien. - 1991. - V.143. - P. 513-526.

145. Lahiri J. A Strategy for the Generation of Surfaces Presenting Ligands for Studies of Binding Based on an Active Ester as a Common Reactive Intermediate: A Surface Plasmon Resonance Study [Text] / J. Lahiri, L. Isaacs, J. Tien, G. M. Whitesides // Anal. Chem. - 1999. - V. 71 - P. 777-790.

146. Dvir H. Acetylcholinesterase: from 3D structure to function [Text] / H. Dvir, I. Silman, M. Harel, T. L. Rosenberry, J. L. Sussman // Chem-biol. Interact. - 2010. - V. 187, № 1-3. - P. 1022.

147. Du D. Immobilization of acetylcholinesterase based on the controllable adsorption of carbon nanotubes onto an alkanethiol monolayer for carbaryl sensing [Text] / D. Du, M. Wang, J. Cai, Y. Tao, H. Tu, A. Zhang // Analyst. - 2008. - V. 133, № 12. - P. 1790-1795.

148. Losche M. Detailed structure of molecularly thin polyelectrolyte multilayer films on solid substrates as revealed by neutron reflectometry [Text] / M. Losche, J. Schmitt, G. Decher, W. G. Bouwman, K. Kjaer // Macromolecules. - 1998. - V. 31, № 25. - P. 8893-8906.

149. Nazaran P. Lateral mobility of polyelectrolyte chains in multilayers [Text] / P. Nazaran,

V. Bosio, W. Jaeger, D. F. Anghel, R. v. Klitzing // J. Phys. Chem. B. - 2007. - V. 111, № 29. -P. 8572-8581.

150. Wong J. E. Swelling behavior of polyelectrolyte multilayers in saturated water vapor [Text] / J. E. Wong, F. Rehfeldt, P. Hanni, M. Tanaka, R. v. Klitzing // Macromolecules. - 2004. - V. 37, № 19. - P. 7285-7289.

151. Elzbieciak M. Nonlinear growth of multilayer films formed from weak polyelectrolytes [Text] / M. Elzbieciak, M. Kolasinska, S. Zapotoczny, R. Krastev, M. Nowakowska,

P. Warszynski // Colloid. Surf. A. - 2009. -V. 343. - P. 89-95.

152. Klitzing R. V. Short range interactions in polyelectrolyte multilayers [Text] / R. v. Klitzing, J. E. Wong, W. Jaeger, R. Steitz // Curr. Opin. Coll. Interf. Scien. - 2004. -V. 9. - P. 158-162.

153. Decher G. Multilayer Thin Films: Sequential Assembly of Nanocomposite Materials [Text] / G. Decher, J. B. Schlenoff // Wiley-VCH. - 2012. - 1112 p.

154. Xu L. Linear versus Exponential Growth of Weak Polyelectrolyte Multilayers: Correlation with Polyelectrolyte Complexes [Text] / L. Xu, D. Pristinski, A. Zhuk, C. Stoddart, J. F. Ankner, S. A. Sukhishvili // Macromolec. - 2012. - V. 45, № 9. - P. 3892-3901.

155. Guzman E. Evidence of the influence of adsorption kinetics on the internal reorganization of polyelectrolyte multilayers [Text] / E. Guzman, H. Ritacco, F. Ortega, R. G. Rubio // Coll. Surf. A: Physicochem. Engin. Asp. - 2011. - V. 384. - P. 274-281.

156. Tang K. Formation of polyelectrolyte multilayers: ionic strengths and growth regimes [Text] / K. Tang, A. M. Besseling // Soft Matter. - 2016. - V. 12. - P. 1032-1040.

157. Voigt U. Charge Effects on the Formation of Multilayers Containing Strong Polyelectrolytes [Text] / U. Voigt, W. Jaeger, G. H. Findenegg, R. v. Klitzing // J. Phys. Chem. B. - 2003. -V. 107, № 22. - P. 5273-5280.

158. Davletshina R. Electrochemical biosensor based on polyelectrolyte complexes for the determination of reversible inhibitors of acetylcholinesterase [Text]/ R. Davletshina, A. Ivanov, I. Sharafieva, G. Evtugyn // Talanta. - 2019. - V.194. - P. 723-730.

159. Davletshina R. Acetylcholinesterase Sensor Based on Polyelectrolyte Complexes with DNA inclusion for the Determination of Reversible Inhibitors [Text]-/ R. Davletshina, A. Ivanov, G. Evtugyn // Electroanal. - 2020. - V. 32, №2. - P. 308-316.

160. Davletshina R. Electrochemical Biosensor Based on Polyelectrolyte Complexes with Den-drimer for the Determination of Reversible Inhibitors of Acetylcholinesterase [Text]/ R. Davletshina, A. Ivanov, R. Shamagsumova, V. Evtugyn, G. Evtugyn //Anal. Lett. - 2020. - P. 1-20.

161. Ivnitskii D. M. A potentiometric biosensor for pesticides based on the thiocholine hexa-cyanoferrate (III) reaction [Text] / D. M. Ivnitskii, J. Rishpon // Biosens. Bioelectron.. - 1994. -V. 9, № 8. - P. 569-576.

162. Dondoi M. P. Organophosphorus insecticides extraction and heterogeneous oxidation on column for analysis with an acetylcholinesterase (AChE) biosensor [Text] / M. P. Dondoi, B. Bucur, A. F. Danet, C. N. Toader, L. Barthelmebs, J.-L. Marty // Anal. Chim. Acta. - 2006. - V. 578, № 2. - P. 162-169.

163. Er J.-K. Detection of thiocholine ions with cobalt phthalocyanine mediated screen printed electrode [Text] / J.-K. Er, S. H. Ng, K. H. H. Li, C. S. Shin, P.-C. Su, N. B. Tay, W. Wang, Y-J. Yoon // Int. J. Precis. Eng. Man. - 2014. - V. 15, № 12. - P. 2573-2579.

164. Rotariu L. Low potential thiocholine oxidation at carbon nanotube-ionic liquid gel sensor [Text] / L. Rotariu, L. G. Zamfir, C. Bala // Sensor. Actuat. B-Chem. - 2010. - V. 150, № 1. - P. 73-79.

165. Zhang S.-P. Complex and new modification techniques of thiocholine detection electrodes with carbon nanotubes [Text] / S-P. Zhang, Y. Zheng, L.-G. Shan, L.-Y. Shi, K.-L. Leng // App. Surf. Sci. - 2008. - V. 255, № 2. - P. 439-441.

166. Kohjiya S. Visualisation of carbon black networks in rubbery matrix by skeletonisation of 3D-TEM image [Text] / S. Kohjiya, A. Katoh, T. Suda, J. Shimanuki, Y. Ikeda // Polymer. -2006. - V. 47, № 10. - P. 3298-3301.

167. Zhang X. Carbon nanotubes, conductive carbon black and graphite powder based paste electrodes [Text] / X. Zhang, Y. Cui, Z. Lv, M. Li, S. Ma, Z. Cui, Q. Kong //Int. J. Electrochem Sci. - 2011. - V. 6, № 12. - P. 6063-6073.

168. Vicentini F. C. Imparting improvements in electrochemical sensors: evaluation of different carbon blacks that give rise to significant improvement in the performance of electroanalytical sensing platforms [Text] / F. C. Vicentini, A. E. Ravanini, L. C. S. Figueiredo-Filho, J. Iniesta, C. E. Banks, O. Fatibello-Filho // Electrochim. Acta. - 2015. - V. 157. - P. 125-133.

169. Radeke K. H. Electrical conductivity of activated carbons [Text] / K. H. Radeke, K. O. Backhaus, A. Swiatkowski // NY: Carbon. - 1991. - V. 29, № 1. - P. 122-123.

170. Arduini F. Screen-printed biosensor modified with carbon black nanoparticles for the determination of paraoxon based on the inhibition of butyrylcholinesterase [Text] / F. Arduini, M. Forchielli, A. Amine, D. Neagu, I. Cacciotti, F. Nanni, D. Moscone, G. Palleschi // Microchim. Acta. - 2015. - V. 182, № 3-4. - P. 643-651.

171. Posthuma-Trumpie G. A. Amorphous carbon nanoparticles: a versatile label for rapid diagnostic (immuno) assays [Text] / G. A. Posthuma-Trumpie, J. H. Wichers,

M. Koets, L. B. J. M. Berendsen, A.v. Amerongen //Anal. Bioanal. Chem. - 2012. - V. 402, № 2. - P. 593-600.

172. Deroco P. B. An electrochemical sensor for the simultaneous determination of paracetamol and codeine using a glassy carbon electrode modified with nickel oxide nanoparticles and carbon black [Text] / P. B. Deroco, F. C. Vicentini, O. Fatibello-Filho // Electroanal. - 2015. - V. 27, № 9. - P. 2214-2220.

173. Silva T. A. Electrochemical biosensors based on nanostructured carbon black: a review [Text] / T. A. Silva, F. C. Moraes, B. C. Janegitz, O. Fatibello-Filho // J. Nanomater. - 2017. -V. 2017. -14 p.

174. Cinti S. Novel carbon black-cobalt phthalocyanine nanocomposite as sensing platform to detect organophosphorus pollutants at screen-printed electrode [Text] / S. Cinti, D. Neagu, M. Carbone, I. Cacciotti, D. Moscone, F. Arduini // Electrochim. Acta. - 2016. - V. 188. - P. 574581.

175. Jung D.I. Acetylcholinesterase (AChE)-catalyzed hydrolysis of long-chain thiocholine esters: shift to a new chemical mechanism [Text] / D. I. Jung, Y. J. Shin, E. S. Lee, T. Moon, C. N. Yoon, B. H. Lee // Bull. Korean Chem. Soc. - 2003. - V. 24. - P. 65-69.

176. Andreescu S. Immobilisation of AChE on screen-printed electrodes; Comparative study between three immobilisation methods; Applications to the detection of organo-phosphorus insecticides [Text] / S. Andreescu, L. Barthelmebs , J.-L. Marty // Anal. Chim. Acta. - 2002. - V. 464. - P. 171-180.

177. Bucur B. Versatile method of cholinesterase immobilisation via affinity bonds using conca-navalin A applied to the construction of a screen-printed biosensor [Text] / B. Bucur, A. F. Danet, J.-L. Marty // Biosens. Bioelectron. - 2004. - V. 20. - P. 217-225.

178. Suprun E. Acetylcholinesterase sensor based on screen-printed carbon electrode modified with Prussian Blue [Text] / E. Suprun, G. Evtugyn, H. Budnikov, F. Ricci, D. Moscone, G. Palleschi // Anal. Bioanal. Chem. - 2005. - V. 383. - P. 597-604.

179. Hou C. Immobilized lipase on macroporous polystyrene modified by PAMAM-dendrimer and their enzymatic hydrolysis [Text] / C. Hou, H. Zhu, D. Wu, Y. Li, K. Hou, Y. Jiang, Y. Li // Process Biochem. - 2014. - V. 49, № 2. - P. 244-249.

180. Uzun K. Covalent immobilization of invertase on PAMAM-dendrimer modified superparamagnetic iron oxide nanoparticles [Text] / K. Uzun, E. Çevik, M. §enel, H. Sozeri, A. Baykal, M. F. Abasiyanik, M. S. Toprak // J. Nanopart Res. - 2010. - V. 12, № 8. - P. 30573067.

181. Svobodova L. Properties of glucose biosensors based on dendrimer layers. Effect of enzyme immobilization [Text] / L. Svobodova, M. Snejdârkovâ, T. Hianik // Anal. Bioanal. Chem. -2002. - V. 373, № 8. - P. 735-741.

182. Klajnert B. Interactions between PAMAM dendrimers and bovine serum albumin [Text] / B. Klajnert, L. Stanislawska, M. Bryszewska, B. Palecz // BBA-Proteins and Proteom. - 2003. -V. 1648, № 1-2. - P. 115-126.

183. Cardoso F. P. The use of PAMAM dendrimers as a platform for laccase immobilization: Kinetic characterization of the enzyme / F. P. Cardoso, S. A. Neto, P. Ciancaglini, A. R. de Andrade [Text] //Appl. Biochem. Biotech. - 2012. - V. 167, № 7. - P. 1854-1864.

184. Cardoso F. P. Kinetic and electrochemical characterization of laccase using PAMAM dendrimers enzyme immobilization [Text] / F. P. Cardoso, S. Aquino, P. G. Fenga, Z. Valtencir, P. Ciancaglini, A. R. de Andrade // ECS Meeting Abstracts. - 2012, № 39. - P. 1459-1459.

185. Crespilho F. N. A strategy for enzyme immobilization on layer-by-layer dendrimer-gold nanoparticle electrocatalytic membrane incorporating redox mediator [Text] / F. N. Crespilho, M. E. Ghica, M. Florescu, F. C. Nart, O. N. Oliveira Jr, C. M. A. Brett // Electrochem. Commun. - 2006. - V. 8, № 10. - P. 1665-1670.

186. Yaneva S. Synthesis and investigation of the properties of hybrid materials for enzyme immobilization [Text] / S. Yaneva, V. Semerdzhieva, R. Raykova, D. Marinkova,

G. Chernev, I. Iliev, L. Yotova // J. Chem. Technol. Metallurgy. - 2018. - V. 53, № 6. - P. 1211-1216.

187. Neto S. A. The kinetic behavior of dehydrogenase enzymes in solution and immobilized onto nanostructured carbon platforms [Text] / S. A. Neto, J. C. Forti, V. Zucolotto, P. Ciancaglini, A. R. de Andrade // Process Biochem. - 2011. - V. 46, № 12. - P. 2347-2352.

188. Neto S. A. Development of nanostructured bioanodes containing dendrimers and dehydrogenases enzymes for application in ethanol biofuel cells [Text] / S. A. Neto, J. C. Forti, V. Zucolotto, P. Ciancaglini, A. R. de Andrade // Biosens. Bioelectron. - 2011. - V. 26, № 6. - P. 2922-2926.

189. Forti J. C. Development of novel bioanodes for ethanol biofuel cell using PAMAM dendrimers as matrix for enzyme immobilization [Text] / J. C. Forti, S. A. Neto, V. Zucolotto, P. Ciancaglini, A. R. de Andrade // Biosens. Bioelectron. - 2011. - V. 26, № 5. - P. 2675-2679.

190. Klajnert B. The effect of polyamidoamine dendrimers on human erythrocyte membrane acetylcholinesterase activity [Text] / B. Klajnert, M. Sadowska, M. Bryszewska // Bioelectro-chemistry. - 2004. - V. 65, № 1. - P. 23-26.

191. Shcharbin D. Effect of dendrimers on pure acetylcholinesterase activity and structure [Text] / D. Shcharbin, M. Jokiel, B. Klajnert, M. Bryszewska // Bioelectrochemistry. - 2006. - V. 68, № 1. - P. 56-59.

192. Snejdarkova M. Acetylcholine biosensor based on dendrimer layers for pesticides detection [Text] / M. Snejdarkova, L. Svobodova, D. P. Nikolelis, J. Wang, T. Hianik // Electroanal. -2003. - V. 15, № 14. - P. 1185-1191.

193. Snejdarkova M. Acetylcholinesterase sensors based on gold electrodes modified with dendrimer and polyaniline: a comparative research [Text] / M. Snejdarkova, L. Svobodova, G. Ev-

tugyn, H. Budnikov, A. Karyakin, D. P. Nikolelis, T. Hianik // Anal. Chim. Acta. - 2004. - V. 514, № 1. - P. 79-88.

194. Miao Y. History and new developments of assays for cholinesterase activity and inhibition [Text] / Y. Miao, N. He, J.-J. Zhu // Chem. Rev. - 2010. - V. 110, № 9. - P. 5216-5234.

195. Pohanka M. Electrochemical biosensors based on acetylcholinesterase and butyrylcholi-nesterase. A review [Text] / M. Pohanka // Int. J. Electrochem. Sci. - 2016. -V. 11. - P. 74407452.

196. Singh M. Acetylcholinesterase inhibitors as Alzheimer therapy: From nerve toxins to neuroprotection [Text] / M. Singh, M. Kaur, H. Kukreja, R. Chugh, O. Silakari, D. Singh // Eur. J. Med. Chem. - 2013. - V. 70. - P. 165-188.

197. Milkani E. Direct detection of acetylcholinesterase inhibitor binding with an enzyme-based surface plasmon resonance sensor [Text] / E. Milkani, C.R. Lambert, W.G. McGimpsey // Anal. Biochem. - 2011. - V. 408, № 2. - P. 212-219.

198. Stoycheva M. Bioelectrocatalytical studies of the effect of some pharmaceuticals on the acetylcholinesterase activity [Text] / M. Stoycheva, R. Zlatev // Electroanal. - 1996. - V. 8, №7. - P.676-679.

199. Rehak M., Snejdarkova M., Hianik T. Acetylcholine minisensor based on metal-supported lipid bilayers for determination of environmental pollutants [Text] // Electroanal. - 1997. - V.9, № 14. - P. 1072-1077.

200. ipek Y. Selective electrochemical pesticide sensor modified with "click electrochemistry" between cobalt phthalocyanine and 4-azidoaniline [Text] / Y. ipek, H. Din9er, A. Koca // J. Electrochem. Soc. - 2014. - V. 161, № 9. - P. B183-B190.

201. Goldstein A. The mechanism of enzyme-inhibitor-substrate reactions. Illustrated by the cholinesterase-physostigmine-acetylcholine system [Text] / A. Goldstein // J. Gen. Physiol. -1944. - V. 27, № 6. - P. 529-580.

202. Fedosseeva O.V. Novel type cholinesterase sensor based on SPV measurement technique [Text] / O. V. Fedosseeva, H. Uchida, T. Katsube, Y. Ishimaru, T. Iida // Sens. Actuators B. -2000. - V. 65. - P. 55-57.

203. Aldridge W.N. Acetylcholinesterase. Two types of inhibition by an organophosphorus compound: one the formation of phosphorylated enzyme and the other analogous to inhibition by substrate [Text] / W.N. Aldridge, E. Reiner // Biochem. J. - 1969. - V. 115, № 2. - P. 147-162.

204. Давлетшина Р.Р. Амперометрический ацетилхолинэстеразный сенсор для определения физостигмина [Текст]/ Р.Р. Давлетшина, А.Н. Иванов, Г.А. Евтюгин // Учен. зап. Казан. ун-та. Сер. Естеств. науки. - 2018.- Т. 160, кн. 1. - С. 5-16.

205. Давлетшина Р.Р. Амперометрический биосенсор для определения обратимых ингибиторов ацетилхолинэстеразы [Текст] / Р.Р. Давлетшина, А.Н.Иванов, Г.А. Евтюгин //

Третий съезд аналитиков России (8-13 октября 2017, Москва). - Москва. - 2017. - Тез. докл. - С.104.

206. Kryger G. Structure of acetylcholinesterase complexed with E2020: implications for the design of new anti-Alzheimer drugs [Text] / G. Kryger, I. Silman, J. L. Sussman // Structurer. -1999. - V. 7, № 3. - P. 297-307.

207. Cheung J. Structures of human acetylcholinesterase in complex with pharmocologically important ligands [Text] / J. Cheung, M. J. Rudolph, F. Burshteyn, M. S. Cassidy, E. N. Gary, J. Love, M. C. Franklin, J. J. Height // J. Med. Chem. - 2012. - V. 55, № 22. - P. 10282-10286.

208. Kuznetsova L. P. Inhibition of human blood acetylcholinesterase and butyrylcholinesterase by some alkaloids [Text] / L. P. Kuznetsova, E. B. Nikol'skaya, E. E. Sochilina, M. D. Faddeeva // J. Evol. Biochem. Phys+. - 2002. - V. 38, № 1. - P. 35-39.

209. Zhu F. Berberine chloride can ameliorate the spatial memory impairment and increase the expression of interleukin-1beta and inducible nitric oxide synthase in the rat model of Alzheimer's disease [Text] / F. Zhu, C. Qian // BMC Neurosci. - 2006. - V. 7, № 1. -P. 1-9.

210. Veloso A. J. Miniaturized electrochemical system for cholinesterase inhibitor detection [Text] / A. J. Veloso, P. M. Nagy, B. Zhang, D. Dhar, A. Liang, T. Ibrahim, S. Mikhaylichenko, I. Aubert, K. Kerman // Anal. Chim. Acta. - 2013. - V. 774. - P. 73-78.

211. Chae M.-S. Graphene-based enzyme-modified field-effect transistor biosensor for monitoring drug effects in Alzheimer's disease treatment [Text] / M.-S. Chae, Y. K. Yoo, J. Kim, T. G. Kim, K. S. Hwang // Sensor. Actuat. B-Chem. - 2018. - V. 272. - P. 448-458.

212. Vandeput M. Flow-through enzyme immobilized amperometric detector for the rapid screening of acetylcholinesterase inhibitors by flow injection analysis [Text] / M. Vandeput, C. Parsajoo, J. Vanheuverzwijn, S. Patris, Y. Yardim, A. le Jeune, A. Sarakbi, D. Mertens, J.-M. Kauffmann // J. Pharmaceut. Biomed. - 2015. - V. 102. - P. 267-275.

213. Tiseo P. J. Metabolism and elimination of 14C-donepezil in healthy volunteers: A single dose study [Text] / P. J. Tiseo, C. A. Perdomo, L. T. Friedhoff // Brit. J. Clin. Pharmaco. -1998. - V. 46, № 1. - P. 19-24.

214. Clark W. F. Urine volume and change in estimated GFR in a community-based cohort study [Text] / W. F. Clark, J. M. Sontrop, J. J. Macnab, R. S. Suri, L. Moist, M. Salvadori, A. X. Garg // Clin. J. Am. Soc. Nephro. - 2011. - V. 6, № 11. - P. 2634-2641.

215. Ji H.-F. Berberine: a potential multipotent natural product to combat Alzheimer's disease [Text] / H.-F. Ji, L. Shen // Molecules. - 2011. - V. 16, № 8. - P. 6732-6740.

216. Jiang Y. Traditional Chinese medicinal herbs as potential AChE inhibitors for anti-Alzheimer's disease: a review [Text] / Y. Jiang, H. Gao, G. Turdu // Bioorg. Chem. - 2017. - V. 75. - P. 50-61.

217. Wang L. Online screening of acetylcholinesterase inhibitors in natural products using monolith-based immobilized capillary enzyme reactors combined with liquid chromatography-

mass spectrometry [Text] / L. Wang, Y. Zhao, Y. Zhang, T. Zhang, J. Kool, G. W. Somsen, Q. Wang, Z. Jiang // J. Chromatogr. A. - 2018. - V. 1563. - P. 135-143.

218. Ma J.-Y. Excretion of Berberine and Its Metabolites in Oral Administration in Rats [Text] / J.-Y. Ma, R. Feng, X.-S. Tan, C. Ma, J.-W. Shou, J. Fu, M. Huang, C.-Y. He, S.-N. Chen, Zh.-X. Zhao, W.-Y. He, Y. Wang, J.-D. Jiang // J. Pharm. Sci. - 2013. - V. 102, № 11. - P. 4181-4192.

219. Salam M. A. E. Cytotoxic, Anti-HCV, Anticholinesterase and Antioxidant Activities of the Ethanolic Extract of Berberis vulgaris roots, Berberine, Di-berberine sulfate and Berberrubine [Text] / M. A. E. Salam, H. Mekky, E. M. B. El-Naggar, D. Ghareeb, M. El-Demellawy, F. E. Fiky // J. Pharm. Biology. - 2016. - V. 6, № 2. - P. 89-97.

220. Давлетшина Р.Р. Амперометрический биосенсор для определения обратимых ингибиторов ацетилхолинэстеразы [Текст] / Р.Р. Давлетшина, А.Н.Иванов, Г.А. Евтюгин // XXV Международная научная конференция студентов, аспирантов и молодых учёных «Ломоносов-2018» (9-13 апреля 2018, Москва) - Москва. - 2017. - Тез. докл.

221. Давлетшина Р.Р. Биосенсор для определения лекарственных препаратов для лечения болезни Альцгеймера на основе полиэлектролитных комплексов с включением ацетилхолинэстеразы / Р.Р.Давлетшина, А.Н.Иванов, Г.А.Евтюгин // Четвёртый Междисциплинарный Симпозиум по Медицинской, Органической и Биологической Химии и Фармацевтике (23-26 сентября 2018, Новый свет, Крым). - Новый Свет. - 2018. - Тез. докл. - С. 119.

222. Давлетшина Р.Р. Амперометрический биосенсор на основе полиэлектролитных комплексов для определения обратимого ингибитора ацетилхолинэстеразы берберина / Р.Р. Давлетшина, А.Н.Иванов, Г.А.Евтюгин // III Международная школа-конференция студентов, аспирантов и молодых ученых «Материалы и технологии XXI века» (29-31 октября 2018, Казань). - Казань. - 2018. - Тез. докл.- C. 229.

223. Wang R. Progress in studies of huperzine A, a natural cholinesterase inhibitor from Chinese herbal medicine [Text] / R. Wang, H. Yan, X.-C. Tang // Acta Pharm. Sinic. - 2006. - V. 27, № 1. - P. 1-26.

224. Jiang H. Progress in clinical, pharmacological, chemical and structural biological studies of huperzine A: A drug of traditional Chinese medicine origin for the treatment of Alzheimer's disease [Text] / H. Jiang, X. Luo, D. Bai // Curre. Med. Chem. - 2003. - V. 10, № 21. - P. 22312252.

225. Shang Y.-Z. Improving effects of huperzine A on abnormal lipid peroxidation and superoxide dismutase in aged rats [Text] / Y.-Z. Shang, J. W. Ye, X. C. Tang // Acta Pharm. Sinic. -1999. - V. 20, № 9. - 824 p.

226. Xiao X. Q. Huperzine A protects rat pheochromocytoma cells against hydrogen peroxide-induced injury [Text] / X. Q. Xiao, J. W. Yang, X. Ca.Tang // Neurosci. Lett. -1999. - V. 275, № 2. - P. 73-76.

227. Wang R. Huperzine A attenuates cognitive dysfunction and neuronal degeneration caused by ß-amyloid protein-(1-40) in rat [Text] / R. Wang, H. Y. Zhang, X. C. Tang // Eur. J. Pharmacol. - 2001. - V. 421, № 3. - P. 149-156.

228. Ved H. S. Huperzine A, a potential therapeutic agent for dementia, reduces neuronal cell dearth caused by glutamate [Text] / H. S. Ved, M. L. Koenig, J. R. Dave, B. P. Doctor // Neuroreport. - 1997. - V. 8, № 4. - P. 963-967.

229. Lallement G. Review of the value of huperzine as pretreatment of organophosphate poisoning [Text] / G. Lallement, V. Baille, D. Baubichon, P. Carpentier, J.-M. Collombet, P. Filliat, A. Foquin, E. Four, C. Masqueliez, G. Testylier, L. Tonduli, F. Dorandeu // Neurotoxicology. -2002. - V. 23, № 1. - P. 1-5.

230. Rafii M. S. A phase II trial of huperzine A in mild to moderate Alzheimer disease [Text] / M. S. Rafii, S. Walsh, J. T. Little, K. Behan, B. Reynolds, C. Ward, S. Jin, R. Thomas, P. S. Aisen // Neurology. - 2011. - V. 76, № 16. - P. 1389-1394.

231. Aronson S. Optimal dosing of galantamine in patients with mild or moderate Alzheimer's disease [Text] / S. Aronson, B. V. Baelen, S. Kavanagh, S. Schwalen // Drug. Aging. - 2009. -V. 26, № 3. - P. 231-239.

232. Mannens, G. S. J. The metabolism and excretion of galantamine in rats, dogs, and humans [Text] / G. S. J. Mannens, C. A. W. Snel, J. Hendrickx, T. Verhaeghe, L. L. Jeune, W. Bode, A. V. Peer // Drug Metab. Dispos. - 2002. - V. 30, № 5. - P. 553-563.

233. Lin P.-P. Evaluation of the in vitro and in vivo metabolic pathway and cytochrome P450 inhibition/induction profile of Huperzine A [Text] / P.-P. Lin, X.-N. Li, F. Yuan, W.-L. Chen, M.-J. Yang, H.-R. Xu // Bioch. Bioph. Res. Co. - 2016. - V. 480, № 2. - P. 248-253.

234. Zhang J.-M. Huperzine A, a nootropic alkaloid, inhibits N-methyl-D-aspartate-induced current in rat dissociated hippocampal neurons [Text] / J.-M. Zhang, G.-Y. Hu // Neuroscience. -2001. - V. 105, № 3. - P. 663-669.

235. Pohanka M. Toxicological scoring of Alzheimer's disease drug huperzine in a guinea pig model [Text] / M. Pohanka, F. Zemek, H. Bandouchova, J. Pikula // Toxicol. Mech. Method. -2012. - V. 22, № 3. - P. 231-235.

236. Yoshino M. A graphical method for determining inhibition constants [Text] / M. Yoshino, K. Murakami // J. Enzym. Inhib. Med. Ch. - 2009. - V. 24, № 6. - P. 1288-1290.

237. Dixon M. The determination of enzyme inhibitor constants [Text] / M. Dixon // Biochem. J. - 1953. - V. 55, № 1. - P. 170-171.

238. Silva J. I. Acetylcholinesterase capillary enzyme reactor for screening and characterization of selective inhibitors [Text] / J. I. da Silva, M. C. de Moraes, L. C. C. Vieira, A. G. Correa, Q. B. Cass, C. L. Cardoso // J. Pharmaceut. Biomed. - 2013. - V. 73. - P. 44-52.

239. Kalaria D. R. Controlled iontophoretic transport of huperzine A across skin in vitro and in vivo: Effect of delivery conditions and comparison of pharmacokinetic models [Text] / D. R.

Kalaria, P. Patel, V. Merino, V. B. Patravale, Y. N. Kalia // Mol. Pharm. - 2013. - V. 10, № 11. - P.4322-4329.

240. Wang B. Electrochemical biosensor for organophosphate pesticides and huperzine-A detection based on Pd wormlike nanochains/ graphitic carbon nitride nanocomposites and acetylcholinesterase [Text] / B. Wang, C. Ye, X. Zhong, Y. Chai, S. Chen, R. Yuan // Electroanal. - 2016. -V. 28, № 2. - P. 304-311.

241. Kostelnik A. Construction of an acetylcholinesterase sensor based on synthesized paramagnetic nanoparticles, a simple tool for neurotoxic compounds assay [Text] / A. Kostelnik, P. Ko-pel, A. Cegan, M. Pohanka // Sensors. - 2017. - V. 17, № 4. - 676 p.

242. Ovalle M. Electrochemical study on the type of immobilized acetylcholinesterase inhibition by sodium fluoride [Text] / M. Ovalle, M. Stoytcheva, R. Zlatev, B. Valdez, Z. Velkova // Elec-trochim. Acta. - 2008. - V. 53, № 22. - P. 6344-6350.

243. Solna R. Multienzyme electrochemical array sensor for determination of phenols and pesticides [Text] / R. Solna, S. Sapelnikova, P. Skladal, M. Winther-Nielsen, C. Carlsson, J. Emneus, T. Ruzgas // Talanta. - 2005. - V. 65, № 2. - P. 349-357.

244. Давлетшина Р.Р. Биосенсор для определения обратимых ингибиторов ацетилхолинэ-стеразы на основе полиэлектролитных комплексов с включением ДНК / Р.Р. Давлетшина, А. Н. Иванов, Г. А. Евтюгин // Менделеевский съезд по общей и прикладной химии (9-13 сентября 2019, Санкт-Петербург). - Санкт-Петербург. - 2019. - Т. 4. - Тез. докл. - С.257.

245. Давлетшина Р.Р. Биосенсор для определения обратимых ингибиторов ацетилхо-линэстеразы на основе полиэлектролитных комплексов с включением полиамидоа-минного дендримера / Р.Р. Давлетшина, А. Н. Иванов // X Юбилейная всероссийская конференция по электрохимическим методам анализа «ЭМА-2020» (16-20 ноября 2020, Казань). - Казань. - 2020. - Тез. докл. - С.152.