Экологическая оценка новых классов селенорганических соединений - солей селенопирилия и октагидроселеноксантенов тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.16, кандидат биологических наук Ратушная, Елена Валериевна

• Ратушная, Елена Валериевна
• кандидат биологических наук
• 2001

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Ратушная, Елена Валериевна

Введение.

Глава I. Химические свойства и биологическая активность соединений селена и серы.

1.1. Строение и химические свойства соединений селена и серы.

1.1.1. Химические свойства органических соединений серысолей тиапирилия.

1.1.2. Строение и химические свойства неорганических соединений селена.

1.1.3. Химические свойства органических соединений селена-селенопирилия, селенохромилия и селеноксантилия.

1.2. Биологическая активность соединений селена и серы.

1.2.1. Антибактериальная активность серо- и селенорганических соединений.

1.2.1.1. Антибактериальная активность соединений тиапирилия.

1.2.1.2. Антибактериальное действие селенорганических соединений.

1.2.2. Использование селена микроорганизмами.

1.2.3. Биохимические свойства соединений селена.

1.2.4. Действие серо- и селенорганических соединений на нуклеиновые кислоты.

1.2.5. Антиоксидантные свойства соединений селена.

1.2.6. Токсическое действие соединений селена.

Глава II. Материалы и методы.

2.1. Органические соединения селена.

2.2. Методы определения антибактериальной активности селенорганических соединений.

2.2. Изучение антиоксидантного действия селенорганических соединений.

2.3. Физико-химические методы изучения взаимодействия селенорганических соединений с нуклеиновыми кислотам в растворе.

Глава III. Изучение антибактериального действия органических соединений селена.

Глава IV. Взаимодействие селенорганических соединений с нуклеиновыми кислотами.

4.1. Комплексообразование органических соединений селена с ДНК.

4.2. Взаимодействие соединений селена с плазмидной ДНК.

Глава V. Антиоксидантные свойства селенорганических соединений.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Экологическая оценка новых классов селенорганических соединений - солей селенопирилия и октагидроселеноксантенов»

Актуальность работы

В настоящее время многие хронические заболевания человека, такие как рак, атеросклероз, сердечно-сосудистые заболевания, артрит и др., связывают с недостаточностью в организме селена.

Селен выполняет роль катализатора ряда ферментативных реакций: участвует в регуляции окислительно-восстановительных процессов; является стабилизатором плазматических и ядерных мембран; обладает антиоксидантными свойствами, входит в состав глутатионпероксидазы, катализирующей распад пероксида водорода и т.д.

Следует отметить, что в возникновении многих патологических процессов значительную роль играет свободно-радикальное окисление липидов биологических мембран, которое приводит к нарушению клеточного метаболизма. Своевременное ингибирование свободно-радикального окисления липидов может способствовать предотвращению развития патологических процессов.

Известно, что селен, входящий в состав глутатионпероксидазы, оказывает защитное действие от окислительного воздействия свободных радикалов, катализируя распад перекиси водорода или разложение гидроперекисей липидов, т.е. выполняет функции антиоксиданта.

В последнее время во многих районах отмечается увеличение дефицита соединений селена, которые могут усваиваться животными и человеком. Следует отметить, что неорганические соединения селена, используемые в качестве пищевых добавок, обладают политропным действием и способны поражать такие органы как печень, почки, а также органы центральной нервной системы. Поэтому задача синтеза биологически активных малотоксичных органических соединений селена для использования их в качестве пищевых добавок является актуальной. Вследствие поставленной задачи появляется необходимость в изучении действия селенорганических соединений на биологические системы. В первую очередь на бактериальные клетки, поскольку микроорганизмы являются естественным биологическим барьером при поступлении в организм соединений селена, которые могут не только подвергаться метаболическим превращениям в желудочно-кишечном тракте с участием микрофлоры кишечника, но и оказывать на микрофлору прямое антибактериальное действие. Следует отметить, что клетки бактерий являются наиболее простыми и надежными биологическими системами для исследования механизма действия селенорганических соединений.

Вышеизложенное определило цели и задачи нашего исследования.

Цель и задачи исследования

Целью данной работы явилась экологическая оценка новых селенорганических соединений, относящихся к классам селенопирилия и селеноксантенов, которые могут быть использованы для коррекции экологически обусловленных состояний, связанных с недостаточностью селена.

1. Исследовать антибактериальное действие нового класса селенорганических соединений на грамположительные и грамотрицательные микр оорганизмы.

2. Выяснить механизм связывания селенорганических соединений с

ДНК.

3. Исследовать антиоксидантную активность селенорганических соединений.

4. Изучить взаимосвязь между структурой селенорганических соединений и их биологической активностью.

Научная новизна работы

Настоящая работа имеет фундаментальный и прикладной характер. Впервые изучено влияние 2,4,6-трипараметоксифенилселенопирилия хлорида, 9-парахлорфенилоктагидроселеноксантена, пергидроселеноксантена и 9-парафторфенилоктагидроселеноксантена на бактериальные клетки E.coli, St. aureus. При помощи методов молекулярной биологии и физической химии детально исследован механизм комплексообразования селенорганического соединения - 2,4,6-трипараметоксифенилселенопирилия хлорида с ДНК, установлены места преимущественного связывания соединения селена с нуклеотидными последовательностями в молекуле ДНК. Обнаружена взаимосвязь между структурой селенорганических соединений и их антибактериальной активностью. Изучено антиоксидантное действие нового класса органических соединений селена.

Практическая значимость

Изучение различных аспектов биологического действия селенорганических соединений позволит выяснить вероятный механизм антибактериального, а также антиоксидантного действия изучаемых соединений и ,на основе полученной информации, синтезировать новые более эффективные малотоксичные препараты селена, что позволит использовать некоторые из соединений селена в качестве антибактериальных препаратов, а часть селенорганических соединений с низкой антибактериальной активностью применять в виде пищевых добавок.

Зарегистрировано 2 рацпредложения: «Подавление роста микроорганизмов с использованием препаратов - производных пирилия и тиапирилия» и «Цитотоксическая активность препарата 2-фенил-4(4'-метоксистирил)тиапирилоцианин».

Результаты диссертационной работы, касающиеся исследования биологических свойств производных препарата «Селексен» были использованы для принятия решения о целесообразности разработки на ЗАО «Сульфат» приемлемого для производства метода синтеза данного класса веществ и дальнейшего изучения их биологической активности с целью внедрения в практику новых препаратов типа «Селексен».

На защиту выносятся следующие положения:

1. Выявление антибактериальной активности селенорганических соединений в отношении клеток E.coli НВ-101, E.coli С-600, E.coli К-12, St.aureus 209Р.

2. Взаимодействие селенорганических соединений с нуклеиновыми кислотами.

3. Обнаружение антиоксидантной активности селенорганическими соединениями.

Апробация работы

Основные результаты диссертационной работы докладывались и обсуждались на:

1. Межвузовской научно-практической конференции, посвященной 10-летию кафедры клинической фармакологии СГМУ «Клиническая фармакология - практическому здравоохранению»- Саратов, РФ, 1998 г.

2. Межвузовской конференции «Химия для медицины и ветеринарии»-Саратов, РФ, 1998 г.

3. Юбилейной научной конференции студентов и молодых ученых, посвященной 90-летию СГМУ - Саратов, РФ, 1999 г.

4. Международном конгрессе «Лазер и здоровье» - Москва, РФ, 1999 г.

5. Научно-практическая конференция студентов и молодых ученых «Молодые ученые - здравоохранению региона» - Саратов, РФ, 2001г.

Заключение диссертации по теме «Экология», Ратушная, Елена Валериевна

ВЫВОДЫ

1. Впервые изучено действие новых классов селенорганических соединений на грамположительные и грамотрицательные бактериальные клетки. Изучаемые селенорганические соединения по-разному действуют на грамположительную и грамотрицательную микрофлору, в частности на E.coli и St.aureus. Из четырех изученных селенорганических соединений наибольшей антибактериальной активностью, т.е. концентрацией вызывавшей гибель 50% бактериальных клеток обладали соединение I - хлорид 2,4,6-трипараметоксифенилселенопирилия - для E.coli К-12, С-600 и соединение IV -пергидроселеноксантен - для E.coli НВ-101. Наибольшей противостафилококковой активностью в отношении St.aureus 209Р обладало соединение I в концентрации 3,2-10"4 М. Снижение противостафилококковой активности наблюдалось в ряду соединений II>III>IV.

2. Наблюдается различие в действии исследуемых веществ на разные штаммы E.coli. Так для E.coli НВ-101 наибольшей антибактериальной активностью обладало соединение IV в концентрации 9-10"5 М, дальнейшее снижение антибактериальной активности при той же концентрации наблюдалось в ряду соединений 11>1>Ш. Для E.coli С-600 незначительное снижение антибактериальной активности (выживание 50%клеток) наблюдалось в ряду соединений I>II=IV=III, для E.coli К-12 - I>III=IV>II.

3. Исследована взаимосвязь между структурой селенорганических соединений и их антибактериальным действием. При включении в структуру вещества атома кислорода увеличивается антибактериальная активность селенсодержащего препарата (соединение IV) на клетки E.coli НВ-101. Соединение I проявляло большую антибактериальную активность на клетках штаммов E.coli НВ-101 и St.aureus 209Р. Антибактериальная активность соединений II и IV на клетках E.coli С-600 и К-12 отличалась незначительно и была низкой. В случае клеток E.coli НВ-101 и St.aureus 209Р соединение II, которое в своей структуре содержит атом хлора, обладало несколько более высокой активностью, по сравнению с соединением III, содержащим в своей структуре атом фтора.

4. Обнаружено комплексообразование соединения I (хлорид 2,4,6-трипараметоксифенилселенопирилия) с ДНК. Изучены оптические и структурные характеристики процесса взаимодействия селенорганического соединения с ДНК.Выявлены характерные места связывания лиганда на ДНК -САА и СА-сайты.

5. Обнаружено антиоксидантное действие селенорганических препаратов при разных условиях культивирования. Наибольшей антиоксидантной активностью обладали соединения II и III, в меньшей степени соединение I. Соединение IV явилось прооксидантом. Таким образом, можно заключить, что наличие селена в органических соединениях еще не определяет антиоксидантные свойства препарата. Антиоксидантные и прооксидантные свойства определяются в целом структурой молекулы, содержащей селен.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В настоящем исследовании было проведено изучение антибактериальной, антиоксидантной и ДНК-тропной активности селеорганических соединений: хлорид 2,4,6-трипараметоксифенилселенопирилия,

9-парахлорфенилоктагидроселеноксантен,

9-парафторфенилоктагидроселеноксантен, пергидроселеноксантен.

Соединение I является аналогом солей тиапирилия, биологическое действие которых было изучено ранее [35].

Нами было выявлено взаимодействие соединения I с ДНК. Стехиометрия насыщения лигандом ДНК соответствует одной молекуле соединения I, то есть на одну пару оснований ДНК приходится одна молекула соединения I. Наиболее вероятной моделью адсорбции соединения I на полимере ДНК является модель представленная на рисунке 18а.

Методом футпринтинга были определены места преимущественного связывания лиганда I с фрагментом плазмидной ДНК. В основном к таким сайтам можно отнести цитидил-адениловую пару нуклеотидов.

Соединения II, III и IV не адсорбировались на полимерах нуклеиновых кислот, что вероятно, объясняется их большей гидрофобностью в сравнении с соединением I.

Исследования, проведенные нами, позволили выявить, что соединение I проявляет антибактериальное действие в отношении грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов В то же время, соединения II,III и IV обладает меньшей антимикробной активностью. Исключением для соединений II и IV оказались клетки E.coli НВ-101. Вероятно, это можно объяснить с одной стороны, строением препаратов, а с другой стороны - различным строением бактериальной стенки грамотрицательных и грамположительных микроорганизмов (рис.31)[3].

У грамположительных бактерий над периплазмой располагается слой пептидогликана, над которым находятся тейхоевые кислоты - полимеры из остатков глицерина и рибита, соединенные фосфоэфирными мостиками, благодаря чему пептидогликан приобретает отрицательный заряд.

Над тонким слоем пептидогликана клеточной стенки грамотрицательных микроорганизмов находится многокомпонентный слой липополисахаридов. Вероятно, именно этот слой способствует устойчивости бактерий E.coli действию соединения I.

По всей видимости, соединение I легко проникает через клеточную стенку стафилококка, поскольку имеет на концах положительно заряженные закрепленные метоксильные группы. Проницаемость же через слой фосфолипидов мембраны золотистого стафилококка обусловлена наличием четырех гидрофобных фенильных радикалов в молекуле соединения I, что обеспечивает ей липофильность.

Характер химического строения соединений II, III и IV не позволяет им проявить активность в отношении стафилококка. Низкая активность по отношению к грамположительным клеткам, вероятно, обусловлена

Рис. 31. Схема строения бактериальной стенки грамотрицательных (А) и грамположительных (Б) бактерий. гидрофобностью указанных соединений, то есть их способностью образовывать комплексы в растворе, а не сорбироваться на заряженные клеточные мембраны.

Следует обратить внимание на то, что соединения указанной структуры и в отношении клеток грамотрицательного ряда - E.coli С-600 и E.coli К-12, а соединение III и по отношению к штамму E.coli НВ-101, также проявляли низкую антибактериальную активность. Можно полагать, что хорошая растворимость в мембранах, а следовательно и хорошая проницаемость препаратов II, III и IV к клетки грамотрицательных микроорганизмов обусловлена их гидрофобным строением. Однако, между фосфолипидными слоями в подобных клетках находится различной толщины слой пептидогликана, который препятствует дальнейшему погружению препаратов внутрь клетки. Отсутствие значительного слоя пептидогликана между фосфолипидными слоями в мембране штамма E.coli НВ-101, вероятно, обеспечивает лучшую проницаемость для препаратов II и IV. В то же время многокомпонентный липидный каркас подобных клеток тормозит процесс дальнейшего растворения заряженного соединения I в толще мембраны E.coli НВ-101.

Нельзя исключить прооксидантную активность соединения IV в отношении липидов штаммов E.coli НВ-101, С-600 и К-12, что будет способствовать разрушению мембран, а, следовательно, и клеток, и также увеличивать проницаемость мембраны для препарата IV.

При сравнении структуры соединений II и III с их антибактериальной активностью обращает на себя внимание факт присутствия в соединении II атома хлора, который обладает большей поляризационной способностью по сравнению с атомом фтора, входящим в структуру соединения III.

Возможно это является объяснением того, что соединение II более активно в сравнении с соединением III в отношении клеток стафилококка. Анализируя анимикробную активность соединений II и III в отношении штамма E.coli НВ-101, следует отметить факт более высокой антибактериальной активности препарата II по сравнению с соединением III.

Кривая количества живых клеток бактерий штамма E.coli НВ-101 в зависимости от концентрации препарата II имеет практически прямолинейную зависимость (рис.12) на интервале концентраций 10"6 - 101М, что указывает, вероятно, на неспецифический характер адсорбции препарата на мембранах бактерий данного штамма.

Более сложная зависимость процента выживших клеток штамма E.coli НВ-101 от концентрации добавленного препарата обнаруживается для соединения I. На интервале концентраций 10~5 - 10"2М не выявляется ингибирующего действия данного препарата на клетки штамма E.coli НВ-101 (рис.6).

Вероятно, в случае соединения I реализуется не один, а несколько механизмов антибактериального действия препарата на клетки микроорганизмов. В то же время, относительно низкие концентрации соединения I, при которых обнаруживается антибактериальный эффект данного препарата скорее всего указывает на ДНК-тропный механизм действия соединения I. Нельзя исключить также и предположение о наличии рецепторов и (или) переносчиков для этого соединения внутрь бактериальной клетки.

При изучении антиоксидантных свойств селенорганических соединений при моделировании перекисного окисления липидов нами был использован озон, поскольку он в результате цепных реакций в растворе образует перекись водорода. Этот процесс протекает через промежуточное образование свободных радикалов:

03 + ОН" —► о2'+ но2 Н02 + 02--* о2*+ но2*

Н02*+ Н02*-►НзОг + 02.

Изучение антиоксидантных и антибактериальных свойств исследуемых селенорганических соединений позволило выявить соединения, которые обладают высокой антиоксидантной и низкой антибактериальной активностью. Это соединения, которые являются представителями октагидроселеноксантенов - 9-парахлорфенилоктагидроселеноксантен, 9-парафторфенилоктагидроселеноксантен.

Кроме озона в своих исследованиях мы использовали две химические системы: FeCl3 + аскорбинат натрия + перекись водорода и C11SO4 + аскорбинат натрия.

В результате использования первой химической системы (реакция Фентона) генерируются ОН* радикалы. При взаимодействии между собой подобные радикалы образуют Н202. В результате применения второй химической системы в присутствии кислорода воздуха могут генерироваться частицы Н202 или супероксидрадикал:

СН2ОН

О +Cu2++02

СН2ОН

Си2+ 0=0

СН2ОН

Си

6=он

СН2ОН О + Си2+ + Н202 о7' \

Кроме того, медь из валентного состояния +2 может переходить в валентное состояние +1 и восстанавливать субстраты, находящиеся вблизи одновалентного катиона меди. Легко заметить, что в случае использования химической системы, содержащей медь, обнаруживается гораздо большее количество активных частиц по сравнению с использованием химической системы, содержащей железо. Неудивительно, что селенорганические соединения не оказались антиоксидантами в отношении химической системы, содержащей медь. Отметим, что катион меди может непосредственно взаимодействовать с гетероциклическими атомами азота, входящими в структуру пар оснований дезоксирибонуклеиновой кислоты, способствовать искажению структуры последней и, в конечном счете, разрушать двойную спираль ДНК.

Необходимо отметить, что процесс образования активных кислородсодержащих частиц включает несколько стадий: е

О, +н

Н+ на, н2о2

Однако, заключительным метаболитом выступает перекись водорода, которая может непосредственно принимать участие в перекисном окислении липидов. Поэтому обнаружение неферментативных (химических) каталаз позволит активно использовать их в системах, содержащих ингибиторы природных (биологических, ферментативных) каталаз.

Соединения II и III, предположительно, действуют на конечный продукт, образующийся из свободных радикалов,- перекись водорода. Ниже приводятся предположительные химические реакции, иллюстрирующие инактивацию перекиси водорода соединениями II и III по двум механизмам:

C6H4Cl(F)-p

Н202

Se'

C6H4Cl(F)-p,

Se' О А

Н202

6H4CI(F)

Se

ОН"

C6H4C1(F)-p

Промежуточное соединение А не может быть выделено в чистом виде и должно или окисляться или перегруппировываться в гетероароматические катионы.

Соединение IV, как следует из литературных данных [101], является катализатором окислительных реакций.

Исследуемые соединения, содержащие в своей структуре селен, могут являться транспортными формами элемента к местам его утилизации в организме, в том числе являться «поставщиками» селена для глутатионпероксидазы.

Необходимо также отметить, что соединение III, содержащее в своей структуре атом фтора, может быть активно использовано в стоматологической практике для профилактики такого заболевания как кариес зубов.

Соединения II и III являются хорошо растворимыми в липидах препаратами подобно витамину Е. Спектры поглощения данных селенорганических соединений дают сильное рассеивание, что указывает на их пересольватацию и соответственно на низкую растворимость в воде. В то же время необходимо отметить, что в отличие от витамина Е, представленного ниже, соединения II и III имеют более короткую гидрофобную часть и, следовательно, обладают большей дифильностью, то есть могут, вероятно, располагаться как в мембране, так и в водной среде.

119 сн3 сн3 сн3 сн3 но

X.

CH2)3-CH-(CH2)3-CH-(CH2)3-CH-CH зС о

СН3 сн3 а-Токоферол (витамин Е).

Витамин Е ингибирует аутоокисление липидов биомембран, поскольку токоферолы ингибируют, в основном, супероксиданион радикалы.

Данные соединения возможно будет использовать в качестве пищевых добавок для поддержания на необходимом уровне селена в организме. Кроме того, изученные соединения класса октагидроселеноксантенов, вероятно, можно будет использовать параллельно с витамином Е для усиления антиоксидантного эффекта на начальных и конечных стадиях процесса перекисного окисления липидов.

Синтез подобных соединений, вероятно, может открыть новые пути для решения проблемы недостатка селена, а также для предотвращения повреждающего воздействия свободно-радикальных процессов.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Ратушная, Елена Валериевна, 2001 год

1. .Беренштейн Ф.Я., Гидранович В.И., Нестеров Т.С., Алешко С.Ф. Химия в сельском хозяйстве.- 1966, №4.

2. Блинохватов А.Ф. 9-К-сим-нонагидро-10-окса(халькогена)-антрацены и соли 9-К-сим-окта-гидро-10-оксониа(халькогенониа)антрацена:Дисс. .докт. хим. наук.- Саратов, 1993, 378 с.

3. Болдырев А.А., Котелевцев С.В., Ланио М., Альварес К., Перес П. Введение в биомембранологию: Учеб. Пособие.- М.: Изд-во МГУ.- 1990, с. 58-60

4. Бэгналл К. Химия селена, теллура и полония.- М.: «Атомиздат»- 1971, 216 с.

5. Гейл Э., Кандлифф Э., Рейнолдс П. И др. Молекулярные основы действия антибиотиков. // М.:ир.- 1975, 500 с.

6. Гигиенические критерии состояния окружающей среды. 58. Селен.- Женева: Всемирная организация здравоохранения. 1989, 270 с.

7. Гурский Г.В. Структура комплекса ДНК-актиномицин. // Мол. биол.- 1969, т. 3, №5, с. 749-757.

8. Губерниева Л.М., Силаев А.Б. К вопросу о комплексообразовании антибиотиков с нуклеиновыми кислотами. // Антибиотики.- 1964, т. 9, с. 716719.

9. Девис М., Остин Дж., Патридж Д. Витамин С: Химия и биохимия: Пер с англ.- М.: Мир.- 1999, р. 150-152.

10. Дудник Ю.В., Останина JI.H., Козьмян Л.И., Раузе Г.Г. О механизме действия карминомицина. // Антибиотики.- 1974, №6, с.514-517.

11. И.Евтушенко И.Я., Клименко С.К., Харченко В.Г., Ионин Б.И. Исследование I-меркапто-2-тиабицикло/4.4.0/деценов методами ЯМР и ЯМДР.// Ж. орган, химии,- 1977, т.ХШ,№ 1, с. 193-196.

12. И.Евтушенко И.Я., Клименко С.К. Ионин Б.И., Харченко В.Г. К вопросу о стереохимических особенностях строения некоторых конденсированных производных 4Н-тиопиранов. // Ж. орган, химии. 1975, т. XI, №11, с. 24172421.

13. Ермаков В.В., Ковальский В.В. Биологическое значение селена. // М.:Наука.-1974, 298 с.

14. Ершов В.П. Гигиеническая характеристика производства селенсодержащей стали и профилактика интоксикаций селеном.// Гиг. труда и профзаболевания 1969, №12, с. 29-33.

15. Клименко С.К., Столбова Т.В., Бережнаяя М.Н. и др. Новые данные о диспропорционировании "семициклических" 1,5-дикетонов с сероводородом и кислотами. // Ж. орган, химии.- 1974, т.Х, с. 1942-1947.

16. Клименко С.К. Столбова Т.В., Бережная М.Н., Смирнова Н.С., Евтушенко И .Я., Харченко В.Г. Новые данные о диспропорционировании "семициклических" 1,5-дикетонов с сероводородом и кислотами. // Ж. орган, химии,- 1977, т. X, №9, с. 1942-1947.

17. Ковальский В.В., Ермаков В.В. Вопросы экстремальной геохимической экологии животных в условиях селеновых провинций и некоторые подходы к изучению биологической роли селена.// Витамины. Вып. VIII. Биохимия витамина Е и селена. Киев- 1975, с.80-87.

18. Кудрявцев А.А. химия и технология селена и теллура. Под ред. И.В. Тананаева.- М.: «Высшая школа».- 1961.

19. Куликова JI.K., Клименко С.К., Столбова Т.В., Харченко В.Г. Антимикробная активность конденсированных производных тиапирилия. // Хим.-фармацевт. ж.- 1976, т.Х, №1, с. 73-75.

20. Куликова JI.K., Харченко В.Г., Кривенько А.П., Федотова О.В., Кравцова Г.К. Поиск проотивомикробных средств в ряду солей бензогидро(тиа)хромилия и их производных.// Хим.-фармацевт. ж.- 1982, №5, с. 33-36.

21. Лелюх Л.И., Харченко В.Г. О взаимодействии "семициклических" оксо-1,5-дикетонов с сернистыми реагентами. // Ж. орган, химии.- 1974, т. X, №7, с. 1547-1548.

22. Лохманн Э.-Р., Михелер А. Связывание органических красителей с нуклеиновыми кислотами и фотодинамический эффект. // В кн.: Физико-химические свойства нуклеиновых кислот. Под ред. Акад Н.М.Эмануэля.-М, 1976, с. 233-252.

23. Манафова М.И., Тагдиси Д.Г., Алиев С.Д. О влиянии соединений селена на различные стороны обменных процессов. // Селен в биологии.- Баку: Изд-во «Элм»- 1981,310 с.

24. Мейнелл Дж., Мейнелл Э. Экспериментальная микробиология (теория и практика). Пер. с англ.// М.: Мир.- 1967, 374 с.

25. Московина Т.В., Тимеченко М.Н., Куриленко В.М., Федяева-Басова Л.П. Поиск лекарственных веществ в ряду гидрохинонов. // Хим.-фармацевт. ж.-1973, №3, с. 3-6.

26. Назаренко И.И., Ермакова А.Н. Аналитическая химия селена и теллура,- М.: Наука,- 1971,251с.

27. Нехорошев М.В., Охлобыстин О.Ю. Пространственно затрудненные фенолы в ряду солей пирилия. Окислительное дегидрирование пиранов. // Ж. орган, химии,- 1977, т. XIII, №6, с. 1294-1300.

28. Николаева М.Н. Автореферат дисс. канд хим. наук. Саратов: изд-во СГУ, 1976, 29 с.

29. Николаева М.Н. Исследования в области химии бициклических сульфидов: Дисс. канд. хим. наук.- Саратов, 1976.

30. Плетникова И.П. Биологическое действие и уровень безопасности селена при поступлении в организм с питьевой водой.// Гиг. и сан. 1970, №2, с. 1419.

31. Полетаев А.И. Круговой дихроизм комплексов ДНК с низкомолекулярными лигандами и полипептидами. // В сб.: Итоги науки и техн. ВИНИТИ АН СССР, серия молекул биол.- 1976, т. 8, ч. 2, с. 180-241.

32. Рокицкий П.Ф. Биологическая статистика. // Минск: Вышейшая школа.-1973,320 с.

33. Сазыкин Ю.О. Антибиотики как ингибиторы биохимических процессов. // М.: Наука.- 1968, 447 с.

34. Сазыкин Ю.О., Борисова Г.Н. Действие бактериостатических антибиотиков на синтез белка и нуклеиновых кислот в клетках золотистого стафилококка. // Антибиотики,- 1962, т. 7, №11, с. 975-979.

35. Сазыкин Ю.О., Чернух A.M. Действие антибиотиков неомициновой группы на синтез белка и нуклеиновых кислот у бактерий в анаэробных условиях. // Антибиотики,- 1963, т.8, с. 796-802.

36. Сазыкин Ю.О., Чернух A.M. Изучение влияния мономицина и канамицина на синтез белка и нуклеиновых кислот в клетках E.coli. // Антибиотики.-1964, т.9, №11, с. 1007-1011.

37. Селен в биологии. Материалы третьей научной конференции.- Баку: Изд-во «Элм»- 1981,310 с.

38. Синдеева И.Д. Минералогия, типы месторождений и основные черты геохимии селена и теллура.- М.: изд-во АН СССР.- 1959, 257 с.

39. Терешин И.М. Преодоление лекарственной устойчивости возбудителей инфекционных заболеваний. // JL: Медицина.- 1977, 182 с.

40. Федотова О.В., Древко Б.И., Петраков С.Н. и др. Способ получения замещенных 4Н-тиопиранов. // Авт. Свид. №1583421 от 8.04.90.

41. Филатова B.C. О токсичности селенистого ангидрида.// Гиг. и сан. 1951, №5, с. 18-23.

42. Харченко В.Г., Блинохватов А.Ф., Митюрина К.В., Парнес З.Н., Курсанов Д.Н. Диспропорционирование пиранов. // Известия Академии наук СССР (серия химическая).- 1976, №3, с. 612-615.

43. Харченко В.Г., Клименко С.К.Синтез гидротиоксантенов. // Химия гетероцикл. соедин.- 1967, №4, с. 630-632.

44. Харченко В.Г., Клименко С.К.Синтез гидротиоксантенов. // Химия гетероцикл. соедин.- 1967, №4, с. 630-632.

45. Харченко В.Г., Клименко С.К., Крупина Т.И. О реакции алкилидендициклогексанонов с сероводородом. // Ж. орган, химии.- 1967, т. III, с. 1709-1710.

46. Харченко В.Г., Крупина Т.И. О новом продукте взаимодействия метилен-бис-циклогексанона с пятисернистым фосфором. // Ж. орган, химии,- 1967, т.Ш, с. 1710-1711.

47. Харченко В.Г., Крупина Т.И., Клименко С.К. и др. О взаимодействии перхлоратов конденсированных производных тиапирилия с ароматическими альдегидами. // Химия гетероцикл. соедин.- 1974, №1, с. 6466.

48. Харченко В.Г., Купранец Н.М. Новое о реакции "семициклических" 1,5-дикетонов с сероводородом. // Ж.орган. химии.- 1979, т. VI, №1, с. 193-195.

49. Харченко В.Г., Маркова Л.И., Коршунова К.М. О реакциях оксо-1,5-дикетонов с сернистыми реагентами.// Ж.орган. химии.- 1976, т.ХП, №3, с. 663-666.

50. Харченко В.Г., Рассудова А.А. Изомеризация 9-бензил-9-К-симм.-октагидротиоксантенов. // Ж.орган. химии.- 1973, т.1Х, с. 2177-2181.

51. Харченко В.Г., Рассудова А.А. Синтез гидротиоксантенов. IX. О диспропорционировании 9-алкил- и 9-арил-симм.-октагидротиоксантенов с переносом гидрид-иона. // Химия гетероцикл. соедин.- 1973, №2, с. 196-198.

52. Харченко В.Г., Смирнова Н.С., Чалая С.Н., Татаринов А.С., Чиченкова Л.Г. Гидрогенизация соединений с пирановыми и тиопирановыми циклами. //Ж. орган, химии,- 1975, т. XI, №7, с. 1543-1546.

53. Харченко В.Г., Станкевич М.Е., Купранец Н.М. и др. О реакции 1,5-дикетонов с сероводородом и кислотами. // Ж.орган. химии.- 1972, т.VIII, №1, с. 193-199.

54. Харченко В.Г., Чалая С.Н., Коновалова Т.Н. Тиопираны и соли тиапирилия.// Изд. Сарат. университета. 1975, 56 с.

55. Харченко В.Г., Чалая С.Н., Норицина М.В., Куликова J1.K. Синтез и антимикробная активность солей тиапирилия. // Хим.-фармацевт. ж.- 1976, т. X, №1, с.80-83.

56. Харченко В.Г., Чалая С.Н., Чиченкова Л.Г. О реакциях 1,5-дифенил-2,4-диметилпентандиона с сероводородом. // Химия гетероцикл. соедин.- 1975, №5, с.643-647.

57. Харченко В.Г., Чалая С.Н., Чиченкова Л.Г., Татаринов А.С. О реакции диспропорционирования 1,5-дикетонов с кислотами. // Ж. орган, химии.-1975, т. XI, №2, с. 444-446.

58. Харченко В.Г., Ярцева Н.М., Рассудова А.А. О реакциях алкилидендициклогексанонов с сероводородом и галогеноводородами. // Ж. орган, химии.- 1970, т.VI, №7, с. 1513-1517.

59. Экологически обусловленные заболевания человека. Методологические проблемы и пути их решения. Материалы пленума межрегионального научного совета по экологии человека и гигиене окружающей среды РФ -21-22 декабря, 2000.

60. Allen W.M., Moore P.R., Sanson B.F. Selenium and activiti of glutatione peroxidase in bovine eritrocites.// Vet. Rec.- 1981, v. 98, №16, p. 360-361.

61. Arthur J.R., Nicol F., Bechett G.J. The role of selenium in thyroid hormone metabolism and effect of selenium difeciency on thy roid hormon and iodine methabolism // Biol. Trance. Elem. Res.- 1992.- vol. 34.- N3.-P.321-325.

62. Ajana A., Bideau I.D., Cotrait M., Buisson I.P., Demerseman P., Einhorn I., Royer R. Molecular and Electronic Structure of Some Mutagenic Nitrophthofurans: Structure-Activity Relationship. //Eur. J. Med. Chem.- 1988, v. 23, p. 341-346.

63. Bettger W.J. Zinc and Selenium, site-specific versus general antioxidation.// Can.J.Physiol.Pharmacol.- 1993.- vol.71.- N9.- P.721-724.

64. Calendi E., Di Marco A., Reggiani M., Scarpinato В., Valentini L. On phisico-chemical interactions between daunovycin and nucleic acids. // Biochim. et Biophys. Acta.- 1965, v. 103, №1, p. 25-49.

65. Cfirns J. The application of autoradiography to the study of DNA viruses. // Jn.: basic Mechanism Animal virus Biol., Gold spring Harbor, N-Y, Symp. Quant. Biol.- 1962, v. 27, p. 311-318.

66. Chan E.W., Ball J.K. Interaction of DNA with three dimethil derivatives of benzacridines. // Biochim. etBiophis. Acta.- 1971, v. 238,№1, p. 31-45.

67. Chubb F., Hay A., Sandin R. The Leuckart reaction of some 1,5-dicetons.// J. Amer. Chem. Soc.- 1953, №5, p. 6042-6044.

68. Colonge J., Dreux J., Deleplace H. Structure de la spiramicine-1. Etude des produits de degradation: caracterisation du mysarose. // Bull. Soc. Chim. France.-1957, v. 3, p. 444-448.

69. Chaires J.B., Priebe W., Graves D.E., Burke T.G. Dissection of the free energy of anthracycline antibiotic to DNA: electrostatic contributions. // J. Am. Chem. Soc.-1993, v. 115, p. 5360-5364.

70. Cohen S.S. Streptomycin and desoxyribonuclease in the study of variations in the properties of abacterial virus. // J. Biol. Chem.- 1974, v. 168, №2, p. 511-526.

71. Сох E.C., White J.R., Flanks J.G. Streptomycin action and the ribosome. // Proc. Nat. Acad. Sci. USA.- 1964, v. 51, №4, p. 703-709.

72. Currier T.C., Nester E.W. Isolation of Covalently closed circular DNA of high molecular weight from bacteria. // Anal, biochem.- 1976, v. 76, №2, p. 431-441.

73. Dalgeleish D.C., Feylj G., Kersten W. Circular dichroism studies of complexes of the antibiotics daunomycin, nogalamycin, chromomycin and mithramycin with DNA. //Biopolimers.- 1974, v. 13, №9, p. 1757-1758.

74. Diplock A.T. In «Vitamin E in animal nutrrition», Denmark.- 1971, p. 57.

75. Diplock A.T. Metabolic aspects of selenium action and toxicity. // CRC Crit. Rev. Toxicol.- 1976, p. 271-329.

76. Erdos Т., ullmann A. Effect of streptomycin on the incorporation of amino-acids labelled with carbon 14 into ribonucleic acid protein in cell-free system of a Mycobacterium. // Nature.- 1959, v. 183, №4661, p. 618-619.

77. Facchinetti Т., Mantovani A., Cantoni R., Salmona M. Intercalation with DNA is a preperqnisite for daunomycin, adriamycin and its congeners in inhibiting DNAase.// J. Chem. Diol. Interact- 1978. v. 20, №1, p. 97-102.

78. Forces involved in the stacking interaction between aminoquinoline and the nucleotide bases. // J. Med. Chem.- 1977, v. 20, p. 1607-1611.

79. Forchhammer К., Boek A. Biology and biochemistry of selenium elements // Naturwissen shaften 1991,- vcol.78.- N11.- S.497-504.

80. Fox k.R., Samson C.E., Stevens V.F.G. Footprinting studies on the sequence-selective binding of pentamidine to DNA. // FEBS Lett.- 1990, v. 266, p. 150-154.

81. Frost D.V., Indostad D. Ecological aspects of selenium in human and animal health.// Chemica Scripta 1975, p. 96-107.

82. Ganther H.E., Goudie C., Sunde M.L., Kopecky M.J. Selenium: relation to decreased toxicity of methylmercury added to diets contaning tuna // Sciense.-1972, v. 175, p.l 122-1124.

83. Ganther H.E. Reduction of the selenotrisulfide derivative of glutathione to a persulfide analog by glutathione reductase.// Biochemistry.- 1970, v. 10, p. 40894098.

84. Gao Y.-G., Striram M., Denny W.A., Wang A.H.-J. Minor groove binding of SN6999 to an alkylated DNA: molecular structure of d(CGCe6G.AATTCGCG)-SN6999 complex. //Biochemistry.- 1993, v. 32, p. 9639-9648.

85. Grokhovsky S.L., Zubarev V.E. Sequence-specific cleavage of double stranded DNA caused by X-ray ionization of the platinum atom in the Pt-Bis-netropsin-DNA complex. // Nucleic Acids res.- 1990, v. 19, №2, p. 257-264.

86. Hafeman D.G. Effect of dietary selenium on erythrocyte in the rat. // J. Nutr.-1974, №104, p.580-587.

87. Hoekstra W.G. Biochemical function of selenium and its relation to vitamin E. // Fed. Proc.- 1975, №34, p. 2083-2089.

88. Hoecstra W.G. Effect of dietary selenium on liver and erythrocyte glutathione peroxidase in the rat.// Fed. Proc.- 1973, №32, p. 885.

89. Ikeda T. Katalitic propertis of onium compounds.// Bull. Jap. Petrol. Inst. -1970, v. 12, p. 130-135.

90. Imura Nobumasa, Naganuma Akira. Possible mechanism of detoxifying effect of selenium and the toxicity of mercury compounds // Adv. Mercury. Toxical.-1990 (Pub. 1991).- p.275-278.

91. Jackson K., Mason S.F. Linear and circular dichroism studies of DNA-monoaminoacridine complexes. // Trans. Faraday Soc.- 1971, v. 67, №4, p. 966989.

92. Jones G.B., Gudwin K.O. Distribution of radioactive selenium in mice.// Nature 1962, v. 196, p. 1294- 1296.105. 105 Jones G.B., Gudwin K.O. Distribution of radioactive selenium in mice.// Nature 1962, v. 196, p. 1294- 1296.

93. Levander O.A. Lead toxity and nutritional deficiencies.// Environ. Health Perspect.- 1979, №29,p. 115-125.

94. Levander O.A. Metabolic interrelationships between arsenic and selenium.// Environ. Health Perspect., 19- 1997, p. 159-164.

95. Levander O.A. Selected aspects of the comparative metabolism and biochemistry of selenium and sulfur. In: prasad A.S., ed. Trace elements in human health and disease.,v.2, Essential and toxic elements., New York, Academic Press.- 1976, p. 135-163.

96. Li.HJ., Crothers D.M. Studies of the proflavine DNA complex. // Biopolimers.- 1969, v. 8, №2, p. 217-235.

97. Lippard S.J. Platinum complexes: probes of polynucleotide structure and antitumor drugs. // Acc. Chem. Res.- 1978, v. 11, p. 211-217.

98. Lloyd P.H., Prutton R.N., Peacocke A.R. Sedimentation studies on the interaction of proflavine with deoxyribonucleic acid. // Biochem. J.- 1968, v. 107, №3, p. 353-359.

99. Mack D.P., Iverson B.L., Dervan P.V. Design and chemical synthesis of a sequence specific DNA - cleaving protein. // J. Am. Chem. Soc.- 1988, v. 110, №22, p. 7572-7574.

100. Maher L.J., Wold В., Dervan P.V. Inhibition of DNA binding proteins by oligonucleotide directed triple helix formation. // Science.- 1989, v. 245, p. 725730.

101. Maxama.M., Gilbert W. A new method for sequencing DNA. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.- 1977, v.74, №2, p. 560-564.

102. McConnell K.P., Portman O.W. Toxicity of dimethyl selenide in the rat and mouse.// Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 1952, v. 79, p. 230-231.

103. Muller W.E.G. Chromomycin, olivomycin and bleomycin as inhibitors of DNA and RNA polymerases. // Pharm. And Ther. 1977, №4, p. 457-474.

104. Muller W.E.G., Grothers D.M. Studies of the binding of actinomycin and related compounds to DNA. // J. Mol. Biol.- 1968, v. 35,№2, p. 251-290.

105. Mutetikka D.B., Mahan D.C. Effect of posture, confinement, and diet fortification with vitamin E and selenium on reproducing gilts and their progeny.// J. Anim. Sci.- 1993, v. 71, №12, p. 3211-3218.

106. Nakamura K., Yoshikawa K., Sayato Y., Kurata H., Tonomura M., Tonomura A. Studies of selenium-related compounds/ Cytogenic effect and reactivity with DNA.// Mutat. Res. 1977, v. 40, p. 177-184.

107. Neve J., Therond P. Selenium. / Oligoelem.Med.Biol. 1991.- P.425-457.121. "Organic Selenium compounds: their chemistry and biology." / New York.-Wiley-interci.- 1973.- 1188.P. .

108. Rosenfeld I., Beath O.A. Effect of selenium on reproduction in rats.// Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 1979, v. 87, p. 295-297.

109. Rotruck J.T. Selenium: biochemical role as a component of glutatione peroxidase. // Science.- 1973, p. 588-590.

110. Rukgauer М., Neugerbauer R., Plecko Т., Kruse-Jarres J.D. The selenium-dependent antioxidative system.// Metal ions in Biol.and Med.- 1998, v.5, p.400-404.

111. Smith M.I. Studies on the fate of selenium in the organism. // US. Public Health Rep.- 1938, p. 1199-1216.

112. Schwarz K., Pathak K.D. The Biologically Active Organoselenium Compounds of Minimum Toxicity.- Chemica Scripta.- 1975.- vol.8A.- P.85-95.

113. Tilak B.D., Ravindransthan Т., Subbaswami X.N. Synthesis of nitrogen heterocyclics. Part I. // Indian J. Chem.- 1968, v. 6, №8, p. 422-427/

114. Thederahn T.B., Kuwabara M.D., Larsen T.A., Sigman D.S. Nuklease activity of 1,10-phenanthroline-copper: kinetic mechanism.// J. Am. Chem Soc. 1989, v. Ill, №13, p. 4941-4946.

115. Thompson C.D., Stewart R.D.H. Metabolic studies of Se selenometionine and 75Se selenite in the rat. // Br. J. Nutr.- 1973, №30, p. 139-147.

116. Uchida K., Pyle A.M., Morii Т., Barton J.K. High resolution footprinting of EcoRJ and distavycin wich Rh(phi)2(bpy)3", a new photoprinting reagent. // nucleic Acids Res.- 1989, v. 17, p. 10259-10279.

117. Van Dyke M.W., Dervan P.v. Chromomycin, mitramycin and oligomycin binding sites on heterogeneous deoxyribonucleic acid. Footprinting with (methidiummpropyl-EDTA)iron(II). //Biochemistry.- 1983, v. 22, p. 2373-2377.

118. Voet D. Intercalation complexes of DNA. // Nature.- 1977, v. 269, p. 285-286.

119. Wallach S., Chausnier A.B. Essential trace metal deficiency and skeleton. // Met.Ions.Biol.Med.Proc.Int.Symp.- 1992.- P.395-401.

120. Walsh D.M., Kennedy D.G., Goodall E.A., Kennedy S. Antioxidant enzyme activity in the muscles of caves depleted of vitamin E or selenium or both. // Br. J. Nutr. 1993,- vol.70.- N2.- P.621-630.

121. Wang Wanchun. Interaction between selenium and trace elements in living organisms. // Ziran Zazhi .- 1989.- vol.12.- N4,- P.266-269. / Chem.Abst.- 1991.-vol.l 14.- 114111c.

122. Wendel Albrecht. Biochemical function of selenium.// Phosforus, sulfur, silicon. Relat Elem.- 1992, v. 67, №1-4, p. 405-425.

123. Whanger P.D. Sulfur-Selenium relationships in animal nutrition. // Sulfur Inst. S. 1970, v.6 ,№3, p.6-10.

124. White J.R., Flakns J.G. Inhibition of protein synthesis and other effects of E.coli. // Federal Proc.- 1962, v.21, №2, p. 412.

125. Yang G-F., Shen H-M., Ong C-N. A comparative study on ebselen and sodium selenite against hydrogen peroxide indused oxidative damage in Hep G2 cells.// Metal ions in Biol. And Med.- 1998, v. 5, p. 405-410.

126. Yin Shaian, Sato Ikuo, Hosokawa Yu, niizeki Shiro, Tojo Hitomi, Yamaguchi Keji. The necessity of dietary vitamin B6 to selenium biopotency for tissue selenium and glutatione peroxidase in rats.// J. Nutr. Sci. Vitaminol.- 1991, v. 37, №5, p. 509-516.