Эффективность противоопухолевого препарата эстразин при спонтанных опухолях собак тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.14, кандидат биологических наук Борисова, Лариса Михайловна

• Борисова, Лариса Михайловна
• кандидат биологических наук
• 2004

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Борисова, Лариса Михайловна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ЧАСТЬ I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

Глава 1. Гистологическое строение и функции перианальных желез у собак.

Глава 2. Опухоли перианальных желез у собак.

2.1.Частота возникновения, возраст и пол животных.

2.2. Диагностика и клинические признаки.

2.3. О дисгормональной природе развития аденомы перианальных желез.

2.4. Морфологическое строение опухолей перианальных желез.

2.5. Лечение опухолей перианальных желез.

Глава 3. Опухоли яичка у собак.

Глава 4. Опухоли предстательной железы у собак.

ЧАСТЬ И. МАТЕРИАЛЫ и МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

ЧАСТЬ III. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Глава 1. Дифференциальная диагностика опухолей перианальных желез у собак.

Глава 2. Изучение противоопухолевой активности препарата эстразин на спонтанных аденомах перианальных желез у собак в сравнении с синэстролом.

Глава 3. Определение цитоплазматических рецепторов андрогенов и эстрогенов в аденомах перианальных желез собак.

Глава 4. Изучение патоморфоза аденомы перианальных желез у собак после лечения препаратом эстразин.

Глава 5. Изучение терапевтической эффективности препарата эстразин при аденоматозной гиперплазии предстательной железы и опухолях яичка у собак.

ЧАСТЬ IV. ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ.

ВЫВОДЫ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Эффективность противоопухолевого препарата эстразин при спонтанных опухолях собак»

Актуальность темы

Одной из актуальных проблем современной онкологии и урологии является лечение рака предстательной железы (РПЖ). Во всех странах мира наблюдается устойчивая тенденция роста заболеваемости этой патологией. В Европе РПЖ в структуре онкологической заболеваемости занимает второе место (82 на 100 ООО мужчин), в России - 4 место (13,3 на 100 ООО мужчин). РПЖ обнаруживается в основном у мужчин пожилого и старческого возраста. Средний возраст больных определяется в интервале 65-75 лет [13,29,33]. В связи с особенностями клинического течения и несовершенством ранней диагностики, 60-80 % больных РПЖ при первичном обращении имеют распространенный процесс с метастазами в лимфоузлы, кости и отдаленные органы - D стадия [22,23]. Основным методом лечения РПЖ в D стадии является паллиативная гормональная терапия.

За последние годы разработаны новые гормональные препараты, среди которых широкое применение в клинике находят антиандрогены и агонисты рилизинг гормон-лютеинизирующего гормона (ЛГРГ), а также их комбинация, получившая название «максимальная андрогенная блокада» (МАБ) и рекомендуемая в качестве первой линии гормонального лечения [16,60,88,89]. Относительная безопасность такого вида лечения привела к ограничению эстрогенотерапии из-за наличия первичной и вторичной гормонорезистентности РПЖ к известным эстрогенам и выраженных осложнений со стороны сердечно-сосудистой системы, желудочно-кишечного тракта, свертывающей системы крови и др. [7,24].

В последнее время вновь возрос интерес к эстрогенотерапии РПЖ в связи с наличием осложнений и недостатков при терапии антиандрогенами и аналогами ЛГРГ, а также отсутствием убедительных клинических и экспериментальных данных о преимуществе противоопухолевого действия других видов гормонотерапии перед эстрогенами, вероятно, из-за прямого цитотоксического действия последних на опухоль [59,80]. В текущих исследованиях показано, что частота сердечно-сосудистых осложнений при эстрогенотерапии носит дозозависимый характер. Так при суточной дозе диэтилстильбэстрола 1 мг частота венозных и артериальных тромбозов составили 14,2 %, а при 2-3 мг - 30 %, при более 5 мг - 35 %. Кроме того рядом авторов показана высокая противоопухолевая активность эстрогенов при низких побочных эффектах со стороны сердечно-сосудистой системы при комбинации их с препаратами, обладающими дезагрегатными и антикоагулянтными свойствами [23].

Выраженные побочные эффекты большинства эстрогенов и низкая стоимость лечения этими препаратами поставили вопрос о целесообразности синтеза новых производных эстрогенов, которые обладали бы выраженным пролонгированным противоопухолевым действием и низкой токсичностью [131].

В Уральском государственном техническом университете (г. Екатеринбург) совместно с институтом проблем эндокринной патологии им. В.Я. Данилевского АМН Украины (г. Харьков) и ГУ Российским онкологическим научным центром им. Н. Н. Блохина РАМН (г. Москва) разработан препарат Эстразин (3-окси-экстра-1,3,5-триен-17-гидразон). Основанием для синтеза эстразина послужило предположение, что простейшие гидразоны стероидных кетонов в организме способны подвергаться окислению с образованием реакционно-способных диазостероидов, более прочно связывающихся с рецепторами соответствующих гормонов и тем самым оказывающих более длительное гормональное и противоопухолевое действие.

По структуре входящего гормона (эстрон) и модифицирующего фрагмента (гидразоновая группировка) эстразин не имеет аналогов среди применяющихся для лечения рака предстательной железы отечественных и зарубежных эстрогенов, а также отличается от эстрогеноцитостатика — эстрацита [18,27]. Лекарственная форма Эстразина - свечи на водорастворимой полиэтиленоксидной основе для ректального введения. Ректальный способ введения эстрогенного препарата имеет ряд преимуществ. Во-первых, лекарственное вещество попадает в ток кровообращения, минуя печень, где происходит метаболизм эстрогенов и, во-вторых, часть препарата через систему коллатералей непосредственно поступает в предстательную железу.

Данные о высокой противоопухолевой активности на перевиваемых и индуцированных опухолях мышей и крыс, а также низкой токсичности эстразина, полученные при доклиническом изучении препарата, послужили основанием оценить его эффективность при спонтанных гормонозависимых опухолях собак.

Цель исследования

Целью настоящего исследования явилось доклиническое изучение препарата эстразин на спонтанных опухолях собак для рекомендации его на клинические испытания.

В соответствии с целью исследования были поставлены следующие задачи:

1. Провести дифференциальную диагностику опухолей перианальных желез собак.

2. Изучить противоопухолевую активность препарата эстразин на спонтанных аденомах перианальных желез у собак в сравнении с синэстролом.

3. Определить наличие цитоплазматических рецепторов андрогенов и эстрогенов в аденомах перианальных желез собак. Оценить эффект лечения эстразином аденом перианальных желез в зависимости от наличия и уровня содержания цитоплазматических рецепторов андрогенов и эстрогенов.

4. Изучить патоморфоз аденомы перианальных желез у собак после лечения препаратом эстразин.

5. Изучить терапевтическую эффективность препарата эстразин при аденоматозной гиперплазии предстательной железы и опухолях яичка у собак.

Научная новизна

Спонтанные опухоли собак позволяют исследователям оценивать различные методы лечения при этих новообразованиях.

Выявлено, что андроген-зависимая аденома перианальных желез собак по гормональной чувствительности к орхиэктомии, эстрогенотерапии и наличию цитоплазматических рецепторов андрогенов и эстрогенов соответствует характеристикам гормоночувствительности рака предстательной железы человека. На основании этих данных спонтанная аденома перианальных желез собак использована для доклинического'изучения нового противоопухолевого препарата эстразин, отработки его режима применения с целью передачи препарата на клинические испытания.

Впервые было показано, что препарат эстразин обладает высоким противоопухолевым действием в отношении андроген-зависимой спонтанной аденомы перианальных желез собак. Показана возможность объективной морфологической и клинической оценки эффективности препарата при гиперпластических процессах в перианальных железах собак.

Сравнительное изучение противоопухолевой активности эстразина на спонтанных аденомах перианальных желез собак выявило его преимущества перед синэстролом, который применяется в ветеринарной практике при лечении этой патологии.

Установлено пролонгированное действие эстразина по сравнению с синэстролом по срокам и частоте возникновения рецидивов после лечения.

Выявлен выраженный патоморфоз под действием эстразина вплоть до полной регрессии аденом перианальных желез.

Выявлен положительный объективный эффект у 5 собак с гиперплазией предстательной железы при лечении эстразином.

Научно-практическая значимость.

Показана высокая и равная эффективность эстразина при двух режимах введения, которые рекомендуются для клинических испытаний при РПЖ человека: введение препарата в дозе 20 мг/кг в течение 5 дней или в дозе 10 мг/кг в течение 10 дней.

Препарат эстразин можно рекомендовать для лечения спонтанных аденом перианальных желез и гиперплазии предстательной железы собак в ветеринарной клинике.

Апробация диссертации. Материалы представлены на 6 International Congress on Anti-Cancer Treatment, Paris, 1996; Международной конференции по проблеме ветеринарной медицины мелких домашних животных, Москва, 1998; Научно-практической конференции с международным участием л

Отечественные противоопухолевые препараты», Москва, 2003 и 2004 гг.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 6 работ.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 117 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, главы - материалы и методы, 5 глав собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов и списка цитируемой литературы. Список литературы включает 148 источников, среди которых 37 работ отечественных и 111 работ иностранных авторов. Работа иллюстрирована 19 рисунками и 17 таблицами.

Заключение диссертации по теме «Онкология», Борисова, Лариса Михайловна

выводы

1. Новый противоопухолевый препарат эстразин из группы гидразонов стероидных кетонов вызывает терапевтический эффект у 94 - 100% собак со спонтанными аденомами перианальных желез. Терапевтический эффект выражается в полных и частичных регрессиях аденом, возникающий через 4-7 недель после начала лечения.

2. Равная эффективность препарата выявлена при двух режимах введения: в дозе 10 мг/кг в течение 10 дней и в дозе 20 мг/кг в течение 5 дней. При этом полная регрессия опухолей наблюдается у 45 — 56 % животных, частичная ремиссия - у 45 -31 %.

3. Выявлены преимущества терапевтической эффективности эстразина по сравнению с синэстролом:

• по числу полных и частичных ремиссий: синэстрол в суммарной дозе 12-24 мг/кг вызывает терапевтический эффект у 86 % собак, из них полную ремиссию - у 31 % и частичную ремиссию у 24% животных;

• по длительности курса лечения: продолжительность лечения собак эстразином составляет 5-10 дней, а синэстролом - 30-60 дней;

• по срокам и частоте возникновения рецидивов: после лечения эстразином рецидивы опухоли возникают у 13 из 33 собак, из них у 15 % через 1-4 месяца, у 38 % через 5-8 месяцев и у 46 % собак через 9-12 месяцев. При лечении синэстролом рецидивы опухоли возникают у 18 из 29 животных, причем у 78 % собак через 1-4 месяца и у остальных 22 % собак через 5-8 месяцев.

4. Эффективность препарата подтверждена морфологическими исследованиями. Выраженные дистрофические изменения в опухолевой ткани выявляются с 21-30-го дня от начала лечения. К 3050-му дню возникают некротические изменения, появляются инфильтраты из лимфоидных и плазматических клеток, разрастание соединительной ткани.

5. Эстразин высоко эффективен при лечении рецидивов аденомы перианальных желез. Терапевтический эффект наблюдается у 85 % животных.

6. Лечение эстразином хорошо переносится животными, не вызывая осложнений и побочных эффектов, а синэстрол вызывает анорексию, рвоту и вялость у 15 из 29 собак (в 52 % случаев)

7. Выявлена корреляция величины терапевтического эффекта эстразина с уровнем экспрессии рецепторов андрогенов и эстрогенов в ткани аденомы перианальных желез.

8. Выявлен положительный объективный терапевтический эффект эстразина у собак с гиперплазией предстательной железы: уменьшение объема предстательной железы, восстановление актов дефекации и мочеиспускания. У части животных (у 2-х из 5-ти) обнаружено уменьшение объема предстательной железы более чем на 50 %.

9. Выявленная гормональная чувствительность аденомы перианальных желез к орхиэктомии, эстрогенотерапии и наличие цитоплазматических рецепторов андрогенов и эстрогенов соответствуют характеристикам гормоночувствительности рака предстательной железы человека. Это дает основание рекомендовать эстразин для лечения рака предстательной железы.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Результаты проведенного исследования показали, что препарат эстразин обладает противоопухолевым действием при аденоматозной гиперплазии предстательной железы. У всех собак с аденоматозной гиперплазией простаты наблюдалось восстановление актов дефекации и мочеиспускания, а объем предстательной железы уменьшился более чем на 25 %. У двух собак, получавших препарат эстразин в дозе 20 мг/кг в течение 10 дней, объем предстательной железы уменьшился более чем на 50 %.

После проведенного лечения у 2 животных, получивших суммарную дозу эстразина 200 мг/кг, при морфологическом исследовании была выявлена картина выраженной атрофии предстательной железы с признаками плоскоклеточной метаплазии, атрофии эпителия ацинусов и разрастанием соединительной ткани.

При лечении собак с опухолями яичек противоопухолевый эффект наблюдался у 4 собак. Из них у одной собаки с опухолью из клеток Лейдига выявлена частичная ремиссия заболевания, у 2-х собак со злокачественной опухолью из клеток Сертоли и одной собаки с семиномой - стабилизация опухолевого роста.

При морфологическом исследовании после лечения эстразином выявлен патоморфоз опухоли из клеток Лейдига. В ткани опухоли выявлены выраженные пикноз и лизис ядер, некроз клеток, а также участки разрастания соединительной ткани.

ЧАСТЬ IV. ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ

Рак предстательной железы относится к наиболее тяжелым онкологическим заболеваниям и занимает 3-5 место среди всех злокачественных новообразований у мужчин среднего и старшего возраста. Как причина смертности у мужчин в России это опухолевое заболевание занимает 10 место, составляя в 1999 году 8 человек на 100 ООО населения [1,15,29,33].

При развитии РПЖ большое значение придается тестикулярной функции и повышенным концентрациям тестостерона в крови. Основной мужской половой гормон тестостерон в крови связан с плазменными белками - гормоносвязывающим глобулином и альбумином. Лишь 2 % тестостерона находится в свободном состоянии. Именно это количество диффундирует внутрь эпителиальных клеток простаты, где превращается в дигидротестостерон (ДГТ) под действием фермента 5а-редуктазы. Далее ДГТ соединяется с андрогенными рецепторами, находящимися в ядрах клеток.

Андрогенная регуляция характеризуется тремя видами эффекта на эпителиальные клетки предстательной железы [6]. Недифференцированные или инволютивные клетки простаты начинают синтез ДНК и пролиферацию благодаря транскрипционному влиянию позитивных генов, заведенных андрогенами.

Когда простата приобретает нормальный размер, в присутствии высоких цифр андрогенов, вступает в процесс транскрипция тормозных генов, приводящая к сохранению определенного лимита клеток и синтеза ДНК. Этот вид регуляции называется негативным.

Когда секреция андрогенов прекращается или уменьшается, начинают функционировать так называемые андроген-репрессорные гены, вследствие чего наблюдается физиологическая гибель клеток - апоптоз. Погибают до 80% эпителиальных клеток и клинически это проявляется атрофией ткани простаты.

Опухолевая трансформация эпителиальных клеток простаты связана с нарушением гормонального контроля со стороны позитивных, негативных и андроген-репрессорных генов. Когда отмечается делеция негативного типа генной регуляции (нет механизма ограничения числа клеток), опухоли остаются андроген-зависимыми. При нарушении негативной регуляции и делеции андроген-репрессорных типов генов (нет механизма ограничения числа клеток и их физиологической смерти) в опухоли есть клоны клеток андроген-чувствительные и андроген-независимые.

При дальнейшем прогрессировании отмечается поломка генов позитивной регуляции (инициации клеточного деления), в этой ситуации опухоль становится андроген-независимой и ее рост автономным.

Удаление андрогенов ведет к замедлению инициации синтеза и индукции апоптической смерти клеток [52].

Ответственность за рост и прогрессию РПЖ возлагается также на пептидные факторы роста - трансформирующий (3 и эпидермальный, которые обладают способностью подавлять рост опухоли и одновременно снижать продукцию трансформирующего а и инсулиноподобного, стимулирующих этот рост.

Выбор метода лечения рака предстательной железы зависит от стадии заболевания, уровня дифференцировки опухоли и возраста больного. У достаточно молодых больных со стадией А и В, особенно при низкодифференцированном раке применяется радикальный метод лечения — простатэктомия. В стадии С методом выбора является лучевая терапия.

Основным методом лечения РПЖ в D стадии является паллиативная гормональная терапия и в качестве первой линии гормонального лечения «максимальная андрогенная блокада» (МАБ) [5,16,60,88,89]. 80 % больных в этой стадии отвечают субъективным эффектом. Среднее время до прогрессирования после начала гормональной терапии — 12 месяцев, а средняя выживаемость после ее начала — 30 месяцев.

При гормононезависимой форме РПЖ показана химиотерапия. Химиотерапия при лечении РПЖ вызывает регрессию опухоли только у 3040 % больных.

Целесообразность использования нового эстрогенного препарата, обладающего противоопухолевым действием, диктовалась следующими факторами: первичной нечувствительностью ряда больных РПЖ к известным эстрогенным препаратам; различиями в степени проявления побочных эффектов у разных эстрогенов; возникновением лекарственной устойчивости при длительном применении одного и того же эстрогенного препарата; отсутствием среди известных эстрогенов препаратов пролонгированного действия [10,12,14,24]. Кроме того, с экономической точки зрения лечение РПЖ эстрогенами гораздо дешевле, чем применение агонистов ЛГРГ и антиандрогенов. Так, затраты на 28-дневное лечение диэтилстильбэстролом в дозе 1 мг в сочетании с аспирином в 48 раз дешевле чем лечение золодексом в комбинации с флутамидом [131]. А

Эстразин обладает высокой степенью сродства (I 5о — 1 х 10 ~вМ) и необратимо связывается с РЭ матки крыс in vitro. Препарат проявляет выраженное и длительное антиандрогенное действие: уменьшает массу вентральной доли простаты, семенников и семенных пузырьков; вызывает химическую кастрацию мышей-самцов; снимает гиперплазию предстательной железы, вызванную тестостероном [25,26].

Высокое противоопухолевое и пролонгированное действие эстразина показано в отношении перевиваемых опухолей молочной железы (РМК-1, F-24), индуцированных по методике Бискиндов опухолей яичников (ЧР у 72 % и стабилизацию опухолевого процесса у 14 % животных) и гормонозависимой аденокарциномы предстательной железы R3327-H (тормозит рост на 82 %) [27].

Острая и хроническая токсичность препарата была изучена на мышах, крысах и собаках. Эстразин в летальной, высокой и низкой токсической дозах оказывает влияние на функциональное состояние сердца, вызывая преходящую умеренную гипоксию сердечной мышцы [18].

Лимитирующим видом токсичности является гепатотоксичность. Токсическое действие эстразина на печень связано с нарушением ее углеводной и белоксинтезирующей функций. Функциональная обратимость гепатотоксического действия - 120-150 суток после применения эстразина. Препарат в низких токсических дозах не оказывает токсического действия на печень. Токсическое действие на печень имеет дозозависимый характер, учитывая это, препарат можно классифицировать как умеренно опасный (ГОСТ 12.1.007-76) [18].

Данные о дозозависимом уровне токсического действия эстразина, а также высоком и пролонгированном противоопухолевом действии на грызунах, у которых отсутствует анальный сфинктер, послужили основанием оценить его эффективность на спонтанных гормоночувствительных опухолях собак.

Собака является, по-видимому, единственным из домашних животных, которое на протяжении всей своей жизни живет около человека, разделяя с ним среду обитания и испытывая на себе влияние тех же или весьма близких факторов внешней среды. В отличие от многих других домашних животных собаки, как правило, доживают до своей естественной смерти и, возможно, именно поэтому у них так широк и разнообразен спектр опухолевых заболеваний, которые, как известно, возникают чаще всего у старых животных.

Для изучения противоопухолевого действия препарата эстразин была предложена спонтанная аденома перианальных желез собак. Аденома перианальных желез собак является гормонозависимой доброкачественной опухолью и возникает у старых самцов в условиях повышенного уровня андрогенов в организме. Как и в РПЖ человека [3], в аденоме перианальных желез нами обнаружены рецепторы андрогенов и эстрогенов, что согласуется с данными литературы об их наличии в этих опухолях [55,65,68]. Эффективными методами лечения аденомы перианальных желез, по мнению большинства исследователей, являются эстрогенотерапия и орхиэктомия, применяемые как в отдельности, так и в сочетании. За рубежом для лечения аденомы ПЖ применяют: эстрадиола циклопропионат, эстрадиола ципионат, диэтилстильбэстрол. Продолжительность ремиссии в результате применения этих препаратов составляет 6 месяцев, после чего возможно развитие рецидивов [55,67,111,117,139]. Таким образом, по гормональной чувствительности аденома ПЖ соответствует характеристикам гормоночувствительности рака предстательной железы человека, и она может быть использована для доклинического испытания новых гормональных препаратов.

Кроме того, прижизненная диагностика спонтанных опухолей ПЖ собак не вызывает особых трудностей. Аденома ПЖ доступна визуально, что позволяет проводить осмотр животного и оценивать результаты лечения по клиническим признакам, путем измерения объема аденомы и по патоморфозу опухоли.

И, наконец, спонтанная аденома ПЖ является достаточно распространенной и плохо поддающейся лечению опухолью собак. Поэтому ее лечение остается актуальной проблемой в ветеринарной практике и сегодня.

При изучении противоопухолевой активности эстразина на спонтанных аденомах перианальных желез выявлены явные преимущества препарата по сравнению с синэстролом, применяемым при лечении этих опухолей. Эстразин в дозе 10 мг/кг при введении в его течение 10 дней вызывает терапевтический эффект у 100 % животных (ПР в 45,5 % случаев, ЧР также в 45,5% случаев и стабилизации опухолевого процесса в 9 % случаев) через 4-7 недель после начала лечения. В те же сроки наблюдения эстразин в дозе 20 мг/кг при применении его в течение 5 дней вызывает ПР в 56,2 % случаев, ЧР в 31,2 % случаев и стабилизацию опухолевого процесса в 6,3 % случаев.

На лечение аденом ПЖ синэстролом требуется больше времени — прием таблеток внутрь в течение 1-2 месяцев в дозах 12 — 24 мг/кг, а терапевтический эффект развивается только через 8-13 недель после начала лечения. При этом ПР наблюдаются в 31 % случаев, ЧР в 24,5 % случаев и стабилизация опухолевого процесса в 31 % случаев (терапевтический эффект у 86,2 % собак).

Наибольшее преимущество в лечении аденом - ПР двумя препаратами выявлено при небольшом объеме опухоли — 0,5 — 10 см3. После введения эстразина высокий терапевтический эффект наблюдается у 100 % собак (ПР в 83 % случаев и ЧР в 17 % случаев). После приема синэстрола внутрь терапевтический эффект проявляется у 83,4 % собак, при этом ПР наблюдаются в 66,7 % и ЧР в 16,7 % случаев.

Выявлена также разная частота и сроки возникновения рецидивов после лечения эстразином и синэстролом. Из 13 собак после проведенного лечения эстразином, с достигнутой ранее ПР, через 1-4 месяца только у 2 животных (15,4 %) наблюдали возобновление роста опухоли, через 5-8 месяцев - у 5 животных (38,5 %) и через 9-12 месяцев у 6 животных (46,1 %). Тогда как из 18 собак, леченных синэстролом, уже через 1—4 месяца у 14 животных (77,8 %) возникли рецидивы аденомы ПЖ, а еще через 4 месяца и у остальных 4 собак (22,2 %).

Морфологическое изучение аденом перианальных желез собак в процессе применения препарата эстразин выявило, что в опухолях появляются выраженные дистрофические изменения с 21-30 дня от начала лечения. К 30-50-му дню от начала лечения в опухолях возникают некротические изменения, появляются инфильтраты из лимфоидных и плазматических клеток, а также разрастание соединительной ткани.

К 50-60-му дню от начала лечения у 48,5 % животных выявляется полная регрессия опухоли. Собаки с ЧР в эти же сроки подвергались хирургическому лечению. При морфологическом исследовании полученного от них биопсийного материала в тканях опухоли наблюдались признаки лекарственного патоморфоза.

На основании клинических данных во время лечения эстразином собак со спонтанной аденомой перианальных желез установлено, что препарат не вызывает осложнений и побочных эффектов. В то же время в процессе лечения синэстролом у 15 (51,7 %) из 29 собак наблюдались побочные явления в виде анорексии, рвоты и вялости.

Изучение эстразина проводили также на спонтанной аденоматозной гиперплазии предстательной железы, которая также является гормоно-зависимой у собак.

Гиперплазия простаты встречается у 60-87 % собак старше 5-7-летнего возраста [84,85,126]. Гиперплазия простаты возникает на фоне длительных гормональных нарушений в организме. С возрастом у животных может уменьшаться секреция эстрогенов клетками Сертоли и андрогенов -интерстициальными клетками Лейдига яичка, что может привести к нарушению количественного соотношения этих гормонов и их предшественников. Избыточная длительная стимуляция андрогенными гормонами становится одной из причин возникновения и развития изменений в предстательной железе [44,126,119,132]. Кастрация вызывает инволюцию как нормальной, так и гиперплазированной железы. Противоположный эффект достигается при введении тестостерона, в результате чего развивается гиперплазия простаты, и восстанавливается секретирование атрофированной железы [106].

При лечении гиперплазии предстательной железы собак чаще проводится орхиэктомия. Кроме того, при гиперплазии предстательной железы проводится эстрогенотерапия, которая может применяться в течение многих лет. Из эстрогенных препаратов за рубежом в основном применяется диэтилстильбэстрол и эстрадиола ципионат [54,62]. В последнее время стали применяться прогестины - мегестрола ацетат, обладающий антиандрогенным действием [55] и антиандрогены — хлормадинон ацетат [85], озатерон ацетат [140].

В случаях, когда гиперплазия простаты не отвечает на кастрацию или эстрогенотерапию, прибегают к хирургическим способам лечения: капсулотомия, частичная или полная простатэктомия. Капсулотомия и частичная простатэктомия вызывают временную ремиссию [45,67,70].

Развитие доброкачественнной гиперплазии предстательной железы (Д111Ж) человека связано не столько с уровнем циркулирующих гормонов, сколько с процессами, происходящими в самой железе, хотя последние и зависят от гормонального гомеостаза [2].

Важными факторами в патогенезе ДГПЖ являются:

• Повышенная активность ядерной 5-а-редуктазы, которая приводит к высокой концентрации ДГТ в гиперплазированной простате человека (в 5 - 8 раз превышает нормальные уровни) [137]. При этом концентрация тестостерона в нормальной и гиперплазированной предстательной железе практически не различается.

• Эстрогены в низких дозах не влияют или незначительно стимулируют превращение тестостерона в ДГТ при участии 5-а-редуктазы. В то же время, учитывая возможность влияния эстрогенов на накопление андрогенов в простате, а также вмешательство в метаболические процессы, связанные с образованием ДГТ, трудно принять жесткую альтернативу в отношении эстрогенной или андрогенной теории патогенеза ДГПЖ. По-видимому, определящим фактором является дисбаланс в системе обоих гормонов и их взаимодействия [2]. • Дискутабельным остается вопрос о роли пролактина в патогенезе ДГПЖ. Предстательная железа содержит рецепторы к пролактину. « Прямое влияние пролактина на простату было установлено в опытах как in vitro, так in vivo. Пролактин стимулирует пролиферацию эпителиальных клеток в монослойной культуре простаты. Кроме того, пролактин повышает чувствительность простаты к тестостерону, а потому, если и не непосредственно, то через механизм потенцирования влияния андрогенов может способствовать гиперплазии простаты [2].

При консервативном лечении ДГПЖ патогенетически обснованными для лечения ДГПЖ являются:

1. Блокаторы 5-а-редуктазы (финастерид и др.).

2. Агонисты J11РГ (нафарелин ацетат, бусерелин, золадекс)

3. Прогестины (депостат, мегестрол ацетат, гидроксипрогестерона 4 ацетат, медрогестрона ацетат).

4. Антиандрогены (флутамид, андрокур, ципротерон ацетат).

5. Кетоконазол, ингибирующий синтез стероидов.

6. Ингибиторы секреции пролактина (бромкриптин и др.). Основным все-таки методом лечения ДГПЖ является хирургический простатэктомия.

Препарат эстразин применяли для лечения гиперплазии предстательной железы у 5 собак. В результате лечения у всех животных р отмечался положительный объективный эффект, который выражался в „ уменьшении объема предстательной железы и восстановлении актов дефекации и мочеиспускания. Уменьшение объема предстательной железы более чем на 50 % наблюдали у 2-х животных при использовании эстразина в дозе 20 мг/кг и введении в течение 5 дней. Все животные были подвергнуты патологоанатомическому исследованию. При морфологическом изучении у 2-х собак была выявлена картина выраженной атрофии предстательной железы с признаками плоскоклеточной метаплазии и атрофии эпителия ацинусов.

Данные о наличие у эстразина прямого цитотоксического действия и влияния его на массу яичек крыс [25,26] позволили предположить возможность его эффективности при опухолях яичка собак.

У собак наиболее часто встречаются три типа опухолей яичка: семиномы, Сертоли-клеточные опухоли и опухоли из клеток Лейдига.

Спонтанные опухоли яичка у собак возникают относительно редко, и на их долю приходится по данным различных авторов от 5 % до 10 % всех злокачественных опухолей собак, но по отношению к опухолям самцов частота опухолей яичка может составлять 17 % [21,97,111,128]. Опухоли яичка обнаруживаются чаще у старых животных в возрасте 7-9 лет, однако, этот возраст может колебаться от 4 до 16 лет, а средний возраст находится в пределах от 8 до 11,5 лет [55,92,111,114,128].

Некоторые клинические признаки определяются гормональной активностью той или иной опухоли яичка. Сертоли-клеточные опухоли секретируют эстрогенные стероиды, и в соответствии с изменяющимся гормональным статусом у собак-самцов развивается характерный комплекс симптомов феминизации: увеличение молочных желез и сосков, билатеральная симметричная алопеция, гиперпигментация, особенно в перианальной и генитальной областях, угасание либидо, тяготение к другим самцам, атония крайней плоти, атрофия эпидермального слоя и метаплазия клеток плоского эпителия предстательной железы. Волосы становятся сухими и ломкими, кожа утолщается, развивается отечность, особенно вокруг мошонки. Происходит характерное отложение жира в подкожной клетчатке грудной клетки, бедер, поясничной области. Нередко развивается атрофия непораженного яичка [19,95,111,119,120,134].

Семиномы - опухоли, возникающие из герминогенного эпителия. Симптомы связаны с проявлением андрогенной активности опухоли. К ним можно отнести возникновение аденомы перианальных желез одновременно с семиномой, что обнаруживается в 8-10 % случаев [110,111,114,119,129]. В некоторых случаях одновременно с семиномой яичка может развиваться гиперплазия предстательной железы, а иногда — и рак предстательной железы [114].

Интерстициально-ютеточные опухоли, или опухоли из клеток Лейдига, возникают чаще у более старых животных. Их часто обнаруживают случайно при вскрытии старых собак, погибших от других заболеваний [114]. Эти опухоли продуцируют андрогены, поэтому при их развитии у собак могут возникать аденомы перианальных желез и гиперплазия простаты [55,114].

Злокачественные опухоли яичка у собак метастазируют редко. Метастазы возникают у 10 % собак с Сертоли-клеточными опухолями и семиномами, тогда как интерстициально-клеточные опухоли метастазируют еще реже. Метастазирование происходит по лимфатическим сосудам в глубокие паховые, внутренние подвздошные и сублюмбальные лимфоузлы [95].

В целом злокачественные опухоли яичка у собак менее часты, чем у человека (особенно редки тератомы и эмбриональный рак) [72,95].

Эстразин вводили 6 животным с опухолями яичка в дозах: 10 мг/кг в течение 10 дней (3 животных) и 20 мг/кг в течение 5 дней (3 животных) в суммарной дозе 100 мг/кг. Из 6 у двух собак со злокачественной опухолью из клеток Сертоли и у одной с семиномой наблюдалась стабилизация роста опухоли. У собаки с доброкачественной опухолью из клеток Лейдига выявлена частичная ремиссия. У одной собаки со злокачественной опухолью из клеток Сертоли и у одной собаки со смешанной опухолью участки семиномы и сертолиомы) выявлен рост опухолей.

Животные с опухолями яичка наблюдались в течение 24-30 суток от начала лечения, после чего им была проведена орхиэктомия. У собаки с частичной регрессией доброкачественной опухоли из клеток Лейдига при морфологическом исследовании после лечения эстразином выявлены признаки патоморфоза опухоли. В ткани опухоли наблюдались выраженные пикноз и лизис ядер, некроз клеток, а также участки фиброзного разрастания соединительной ткани.

Полученные данные свидетельствуют о том, что препарат эстразин обладает выраженным противоопухолевым действием на гормоно-зависимые опухоли собак - спонтанную аденому перианальных желез и аденоматозную гиперплазию предстательной железы. По сравнению с синэстролом противоопухолевое действие эстразина реализуется раньше и имеет пролонгированный характер. Кроме того, эстразин обладает меньшими побочными эффектами. Препарат эстразин рекомендуется для клинических испытаний при раке предстательной железы человека и для лечения аденомы перианальных желез собак.

В заключение хотелось бы выразить глубокую благодарность моему первому руководителю диссертации [В.И. Пономарькову] , а также всем тем, кто помогал в выполнении представленной работы: сотрудникам лаборатории сравнительной онкологии, сотрудникам лаборатории клинической биохимии, сотрудникам отдела экспериментальной химиотерапии.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Борисова, Лариса Михайловна, 2004 год

1. Аксель Е.М., Матвеев Б.П. Состояние онкоурологической помощи больным в России в 1997 году. Клиническая онкология 1999, т. 1, 1, стр. 3-5.

2. Аромире O.K., Терещук С.И., Арнольди Э.К., Лесовой В.Н. Доброкачественная гиперплазия простаты и половая функция. Ростов-на-Дону, 2001,249 С.

3. Бассалык Л.С., Кузьмина З.В., Муравьева Н.И. и соавт. Рецепторы стероидных гормонов в опухолях человека. Москва, Медицина, 1987, 224 С.

4. Вайс Э., Фрезе К. (Е. Weiss, К. Frese). Опухоли кожи. Международная гистологическая классификация опухолей домашних животных. Бюллетень ВОЗ. Женева. 1975, 50, 1-2, стр.77-99.

5. Возианов А.Ф., Резников А.Г., Клименко И.А. Эндокринная терапия рака предстательной железы. Монография, Киев, 1999, 279 С.

6. Гарин A.M. Принципы и возможности современной эндокринной терапии опухолей. М., 2001, стр. 109-129.

7. Гершанович М.Л. Осложнения при химио- и гормонотерапии злокачественных опухолей. М., Медицина, 1982, 223 С.

8. Голубева В.А. Опухоли яичка у собак (клиника, диагностика, лечение). 9-й Московский Международный ветеринарный конгресс. Материалы, Москва, 2001, с. 161-162.

9. Голубева В.А., Кузьмина З.В., Герштейн Е.С. и соавт. Стероидные гормоно-рецепторы в спонтанных опухолях яичек у собак. Вопросы онкологии. 1992, 38, 4, стр. 464-469.

10. Ю.Гончар М.А., Попов А.И. Сердечно-сосудистые осложнения при эстрогенотерапии больных. Урол. и нефрол., 1985,2, стр.31-32.11 .Григорашвили 3. Материалы по изучению спонтанных опухолей у собак. Тбилиси, 1968, 195 С.

11. Дунаевский Л.И. О резистентности к эстрогенам при лечении рака предстательной железы. Урол. и нефрол., 1962, 1, стр.63-68.13.3аридзе Д.Г. Эпидемиология рака простаты. Материалы Европейской школы онкологов " Рак предстательной железы", Москва, 1997.

12. Лейзеруков Е.М. Эстрогенотерапия как причина пиелонефрита в эксперименте и клинике. Эксп. хирургия и анестезия. 1976,4, стр. 47-50.

13. Лопаткин Н.А., Зиброва И.В., Сивков А.В. Экономические вопросы лечения рака предстательной железы. Материалы Пленума правления российского общества урологов, 22-24 сентября 1999, Омск-Москва, 1999, с.30-35.

14. Матвеев Б.П. и др. Рак предстательной железы. Москва: ИЧП Фирма "Рима", 1999, 153 С.

15. П.Меркулов Г.А. Курс патологогистологической техники. Лен. отд. Медгиз, 1961, 340 С.

16. Михайлова Л.М., Пильщиков С.Н., Ермакова Н.П., Сыркин А.Б. Предклиническая токсикология нового отечественного противоопухолевого препарата — эстразина. Вестник ОНЦ АМН России, 1996,3, стр. 28-32.

17. Пономарьков В. И., Голубева В.А. Клинико-морфологический анализ спонтанных опухолей яичка у собак. Архив патологии. 1986, 8, с. 28-34.

18. Портной А.С., Бегунов А.Б. " Рак предстательной железы". Монография, Москва, 1997.

19. Пытель Ю.А., Золотарев И.И., Цомык В.Г. О возможном побочном действии эстрогенов на уродинамику верхних мочевых путей при лечении рака простаты. Урол. и нефрол., 1974, 3, стр.51-53.

20. Смирнова З.С. Новые производные гормонов как противоопухолевые препараты (экспериментальное исследование). Автореферат докт дисс., 2001,46С.

21. Смирнова З.С., Кулагина Т.Ф., Осетрова И.П. и соавт. Оценка противоопухолевой эффективности эстразина на модели аденокарциномы предстательной железы крыс. Экспериментальная онкология, 2000, т.22, с.222-224.

22. Смирнова З.С., Лагова Н.Д., Киселев В.И. и соавт. Эстразин — новый противоопухолевый препарат адресованного действия. Вестник ОНЦ АМН России, 1996,3,с. 24-28.

23. Соколов В.Е., Шабадаш С.А. Гепатоидные железы особый тип кожных желез млекопитающих. Известия АН СССР. Серия биологическая, 1987, 1, с.82-95.

24. Степанов В.Н., Гориловский Л.М. Рак предстательной железы. Сборник материалов Пленума всероссийского общества урологов, 1999, с. 5-27.

25. Тарасов С.А., Сахаров С.Ф. Опухоли у собак по секционным данным. Вопросы онкологии, 1968, т. 14, 12, с. 72-75.31 .Терехов П.Ф. Ветеринарная клиническая онкология. Москва, Колос, 1983,208 С.

26. Терехов П.Ф. Спонтанные злокачественные новообразования домашних животных. (Клиника, распознавание, лечение). Автореф. дисс. д.м.н., М, 1972, 39 С.

27. Трапезников Н.Н., Аксель Е.М. Заболеваемость злокачественными новообразованиями и смертность от них населения стран СНГ в 1997 году. Москва, 1999,281 С.

28. Холл. У.,Нильсен С., Мак-Энти K.(Hall W. С., Nielsen S. W., McEntee К.) Опухоли простаты и пениса. Международная гистологическая классификация опухолей домашних животных. Бюллетень ВОЗ. Женева. 1977, 53,2-3, с.229-238.

29. Шабадаш С.А., Зеликина Т.И. Гистологические и гистохимические характеристики гепатоидных циркуманальных желез собаки: черты сходства и различия с кожными железами других типов. Известия АН СССР. Серия биологическая, 1991-6, 3, с. 388-397.

30. Шабадаш С.А., Зеликина Т.И. Новые данные о гистологических вариантах гепатоидных желез: смена гистологических вариантов в гистогенезе циркуманальных желез собаки. Известия АН. Серия биологическая, 1993, 3, с. 410-425.

31. Шабадаш С.А., Зеликина Т.И. Особенности строения гепатоидных циркуманальных желез собаки: межклеточные секреторные канальцы и выводные протоки. Известия АН СССР. Серия биологическая, 1991-а, 1, с.94-105.

32. Шабадаш С.А., Зеликина Т.И. Еще раз о гепатоидных циркуманальных железах собаки. История их открытия и причины пересмотра сведений об их строении и функции. Известия АН СССР. Серия биологическая, 2002, 2, с. 176-185.

33. Шабадаш С.А., Зеликина Т.И. Противоречия современных данных относительно строения и функции гепатоидных циркуманальных желез собаки. Известия АН СССР. Серия биологическая, 2002, 3, с. 286-295.

34. Шабадаш С.А., Зеликина Т.И. Половой диморфизм гепатоидных циркуманальных желез собаки и динамика его развития. Известия АН. Серия биологическая, 19956, 5, с.590-605.

35. Alexander J. W., Appel G. О. A malignant neoplasms resembling a circumanal gland adenocarcinoma in a dog. Cornell Vet., 1976, 66, 1, pp.97-104.

36. Baker K.P. The histology and histochemistry of the circumanal hepatoid glands of a dog. J. Small Anim. Pract. 1967, 8 :11, P. 639-647.

37. Banks W.J. Applied veterinary histology. Baltimore ect, Williams and Wilkins, 1986, P. 583.

38. Barsanti J. A., Finco D. R.Canine prostatic diseases. Vet. Clin, of N. Am. Small Animal Pract.,1986, 16, 3, P.587-591.

39. Barsanti J. A., Finco D. R. Medical management of canine prostatic hyperplasia. In Kirk's Current Veterinary Therapy XII. Eds J.D. Bonagura and R.W. Kirk. Philadelphia, W.B.Saunders. 1995, P.1033-1073.

40. Barsanti J. A., Finco D. R. Evaluation of techniques for diagnosis of canine prostatic diseases. J. Amtr. Vet. Med. Assoc. 1984, 185, 2, P. 198-200.

41. Bastianello S.S. A survey on neoplasia in domestic species over a 40-year period from 1935 to 1974 in the Republic of South Africa. VI. Tumours occurring in dogs. Onderstepoort J. of Vet. Res. 1983, 50 : 3, P. 199-220.

42. Batista A.M., Gonzalez V.F., Cabrera M.F.et al. Morphologic and endocrinologic characteristics of retained canine testes. Canine Practice. 2000, 25 :3, 12-15.

43. Berrocal A., Vos J.H., Ingh T. et al. Canine perianal tumours. J. Vet. Med. Series A.1989,36, 10, P. 739-749.

44. Bocardi J. J.Cryptorchidism as a cause of testicular neoplasms in dogs.UNIMAR-Ciencias. 1997, 6: 1, P.l 19-122.51 .Bostock D.E. Neoplasms of the skin and subcutaneous tissues in dogs and cats. Brit. Vet. J., 1986, 142, P. 1-19.

45. Brochovsky N. Androgens and antiandrogens. In "Cancer Medicine" Eds. Holland J.F. et al.,1997, P. 1133-1148.

46. Carpenter L., McNeel S., Grier R.What's your radiographic diagnosis? Perianal gland adenocarcinoma with secondary metastasis to sublumbar lymph nodes in dog. Iowa St. Univ. Vet. 1982, 44, 2, p. 118-120.

47. Chastain C., Ganjam V. Chemical endocrinology of companion animals. Lea and Febiger, Philadelphia, 1986, 568 p., P.498-499.

48. Christoph H.J. Diseases of dog. The encyclopedia for the small animals practitioner. Pergamon press, Oxford, 1975, 496 p.

49. Cotchin E. Comparativ oncology. Neoplasms of interest to medical and veterinary pathologists. Bras., Rio de Janeiro, 1972, P. 54.

50. Cotter S.M. Treatment of infectious tumors in dogs and cats. Contemporary issues in Small Animal Practice. Ed. advisory board : Schaer M., New York ect C. Livingstone , 1986, v.3, P. 129-151.

51. Cox R.L., Grawford E.D. Estrogens in the treatment of prostate cancer. J. Urol., 1995, v. 154, P. 1991-1998.

52. Denis L. Commentary on maximal androgen blockade in prostae cancer: A theory to put into practice? Prostate 1995, v.27, P. 233-240.

53. Dhaliwal R.S., Kitchell B.E., Knight B.L., Schmidt B.R. Treatment of aggressive testicular tumors in four dogs. J.of the Amer. Anim. Hosp.Assoc.1999, 35: 4, P.311-318.

54. Dorfman М., Barsanti J. Diseases of the canine prostate gland. Сотр. On Contin. Educ. for the Pract. Veter. 1995, 17: 6, P. 791-811.

55. Dorn A.S., Bone D. L., Bellah J. R. Sex hormone-related diseases treated surgically in male dogs. Modern Vet. Practice, 1985, 66, 10, P. 727-733.

56. Durham S.K., Dietze A.E. Prostatic adenocarcinoma with and without metastasis to bone in dogs. J. Amer. Vet. Med. Assoc. 1986,188 : 12, P. 14321436.

57. Elling H., Ungemach F.R. Steroidhormonrezeptoren in perianaltumoren des hundes. Berliner und Munchener Tierarztliche Wochenschrift, 1981, 94, 2, s.33-35.

58. Er J.C., Sutton R.H. A survey of skin neoplasms in dogs from the Brisbane region. Austral. Vet. J. 1989, 66:7, P. 225-227.

59. Ettinger S.J. Textbook of veterinary internal medicine: Diseases of the dog and cat. 3rd ed., W.B. Saunders Сотр., Philadelphia, 1989, v. 1,2, P. 1276-1328.

60. Evans C.R., Pierrepoint C.G. Tissue-steroid interactions in canine hormone-dependent tumours. Vet. Rec. 1975, 97, P. 464-467.

61. Flanders J.A., Schlafer D.H., Yeager A.E., Bonagura J.D. Diseases of the canine testes. Kirk's current veterinary therapy XIII: Small Animal Practice. 2000, P. 941-947.

62. Gandini C. L'iperplasia prostatica benigna nel cane. Summa, 1989,6,4, P.263-266.

63. Gilson S.D., Miller R.T., Hardie E.M., Spaulding K.A. Unusual prostatic mass in a dog. J. Amer. Vet. Med. Assoc. 1992, 200, 5, P. 702-704.

64. Gonzales C.G., Morales S.E. Estudio comparativo de neoplasias testiculares on el hombre у el perro. Vet. Mexico. 1997, 28: 2, P. 169-174.

65. Helfand S. C.Principles and applications of chemotherapy. Vet. Clin. N. America: Small Anim. Pract., 1990, 20, 4, P.879-1197.

66. Hess P.W. Principles of cancer chemotherapy. Vet. Clinics of N. Amer. 1977, 7, 1, P. 21-33.

67. Isitor G.N. Comparative ultrastructural study of normal, adenomatous, carcinomatous and hyperplastic cells of canine hepatoid circumanal glands. Amer. J. Vet. Res., 1983,44, 3, P. 463-474.

68. Isitor G.N., Weinman D. E. Origin and early development of canine circumanal glands. Amer.J. Vet. Res., 1979,40,4, P. 487-492.

69. Isitor G.N., Weinman D. E., Paulsen A.Q. Intranuclear cisternal and vesicular structures in canine circumanal gland carcinoma cells. Amer. J. Vet. Res., 1979, 40,12, P. 1748-1751.

70. Johansson J-E, Anderson S-O, Holmberg L., Bergstom R. Primary orchiectomy versus estrogen therapy in advanced prostatic cancer a randomized study: result after 7 to 10 years of followup. J. Urol., 1991, v.145, P.519-523.

71. Jubb K.V.F., Kennedy P.C., Palmer N. Pathology of domestic animals. USA, Academic press Inc Orlando, Florida, 1985, v.l, 1600 p., P.511-512.

72. Kaneko J.J. Clinical biochemistry of domestic animals. USA, New York, Acad. Press, 1980, VIII, 832 p.

73. Kay N.D., Birchard S.J., Sherding R.G. Diseases of the prostate gland. Saunders manual of small animal practice. 1999, ed. 2, P. 987-994.

74. Kaya M., Atasoy N. Koperlerde prostat hastaliklarinin klinik degerlendirmesi. Uludag Univ. Veter. Fak. Derg. 1989/1990, 8/9, 1/3, s. 185-197.

75. Kawakami E.,Tsutsui Т., Shimisu M. et al. Effects of oral administration of chlormadinone acetate on canine prostatic hypertrofy. J Vet. Med. Scien., 1993, 55, 4, P.631-635.

76. Kennedy P.C., Cullen J.F., Edwards J.F. et al. Histological classification of tumors of the genital system of domestic animals. Washington: Armed Forces Institute of Pathology, 1998.

77. Kennedy P.C., Ling G.V. Pathology of the lower urinary tract and prostate. USA, St. Louis, Mosby-Year Book. Lower urinary tract diseases of dog and cat: diagnosis, medical, management, prevention. 1995, P. 107-113.

78. Labrie F.,Dupont A., Belanger A. et al.New hormonal therapy in prostatic carcinoma: combined treatment with an LH-RH and an antiandrogen. Clin.Invest.Med., 1982, 267-275.

79. Larsen J.F., Walter S., Krarup T. Complete Androgen Blockade as Primary Treatment for Advanced Metastatic Cancer of the Prostate. Intern.Urology and Nephrology. 1990, v.333, P. 249-255.

80. Lee-Parritz D.E., Lamb C.R. Prostatic adenocarcinoma with asseous metastases in a dog. J. Amtr. Vet. Med. Assoc. 1988, 192, 11, P. 1569-1572.

81. Lipowitz A.J., Schwartz A., Wilson G.P. et al. Testicular neoplasms and concomitant clinical changes in the dog. J. Am Vet. Med. Assoc. 1973, 163, P. 1364-1368.

82. Looijenga L.H.J., Olie R.A., Gaag I. van-der et al.Seminomas of the cfnine testis. Counterpart of spermatocytic seminoma of men? Laboratory Investigation. 1994, 71, 4, P.490-496.

83. Lowry O.H., Rozenbroungli N.J., Farr U.I., Randall R,J. Protein measurement with folin phenol reagent. J.Biol.Chem., 1951, v.93, pp. 265-275

84. MacEwen E.G.Current concepts in cancer therapy. Biologic therapy and chemotherapy. Seminars in Vet. Med. Surg.Small Anim. 1986,1, 1, P. 5-16.

85. Madewell B.R., Mulnix J.A. Neoplasms of endocrine glands. Vet. Clincs of Noth Amer., 1977, 7,1, P. 195-204.

86. Maita K., Ishida K. Structure and development of the perianal gland of the dog. Jap. J. Vet. Sci. 1975,37, P. 349-356.

87. Malicka E., Piusinski W., Sendecka H. et al.Canine neoplasms diagnosed between 1985 and 1993. Medycyna Weterynaryjna. 1996, 52 : 2, P.103-106.

88. Maxfield A. L. Perianal adenocarcinoma in a dog. Modern Vet. Practice. 1979, 60, 12, P. 1012-1013.

89. McGavin M.D., Fishburn F. Perianal adenoma of apocrine origin in a dog. J. Amer. Vet. Med. Assoc. 1975, 166 : 4, P. 388-389.

90. Mert N., Kaya M., Antapli M., Tranziverdi M. Farkli kopek irklarinda serum asit fastataz duzeyieri ile prostat bezihiperplazileri arazindaki iliskiler urerinde biyokimyasal arastirmalar. Uludag. Univ.Veter. Fak. Derg. 1989/1990, 8/9,1/3, s. 69-72.

91. Meurer D.G., Mischke R. Clinical features of tumours of the testis in dogs. Praktische Tierarzt. 2000, 81: 8, P. 628-637.

92. Milli U.H., Kutsal O. Canine perianal gland tumors. The J. of the faculty of vet. medicine university of Ankara. 1993, 40 : 3, P. 361-368.

93. Moriello K.A., Rosental R.C. Clinical approach to tumors of the skin and subcutaneous tissues. The Vet. Clinics of Noth. Amer. 1990, 20,4, P. 11631190.

94. Morrison W.B. Diagnosis and treatment of cancer in aged animals. The Vet. Clin. N. America Small Anim. Pract. 1989, 19, 1, P. 137-153.

95. Morrison W.B. Paraneoplastic syndroms of the dog. J. of the Am. Vet. Med. Assoc. 1979, 175, P.559-561.

96. Moulton J.E. Tumors in domestic animals. USA, Univ. of California press, 1978, 465 p.

97. Muller G.H., Kirk R.W., Scott W. Small animal dermatology. Philadelphia, W.B. Saunders Co, 1983.

98. Murakoshi M, Ikeda R, Tagawa M, Nakayama T. Immunohistochemical studes in canine prostatic hyperplasia effect of anti-androgen.Tokai J. of Experim. and Clin. Med. 1999, 24:2, P.77-83.

99. Murakoshi M., Ikeda R., Tagawa M., Nakayama T. Immunolocalization of androgen receptor in canine prostatic hyperplasia effect of antiandrogen.Tokai J. of Experim. and Clin. Med.1998, 23 :5, P. 209-212.

100. Nandi S.K., Bose P.K., Das B.B., Sengupta J. Seminoma in a dog. Indian Vet. J. 1995,72: 11, P. 1217-1218.

101. Nestbitt G.H. Canine and feline dermatology. A systematic approach. USA, Lea and Febiger, Philadelphia, 1983, 224 p.

102. Nielsen S. W., Afitosmis J. Canine perianal gland tumors. J. Amer. Vet. Med. Assoc. 1964, 144,2, P. 127-135.

103. Nielsen S. W., Kennedy P.C. Tumors of the genital systems. In Moulton J.E. (ed.) Tumors in domestic animals. Berkeley: University of California press, 1990, P.479-517.

104. Nieto J., Pizarro M., Balaguer L., Romano J.Canine testicular tumors in descended and cryptorchid testes. Dtsch. Tierarztl. Wschr.1989, 96, 4, P. 186189.

105. Ogilvi G., Reynolds H.Phase II evalution of doxorubicin for treatment of various canine neoplasms. J. Amer. Vet. Med. Assoc.1989, 195, 11, P.1580-1583.

106. Owen L.N. Neoplasms in older dogs with particular reference to managment. Br. Vet. J. 1984, 140, 3, P. 245-256.

107. Ozer K. Chemotherapie in der tumorbehandlung bei hund und katze. Istanbul universitesi veteriner fakultesi ve Munich Ludwig-maximilian universitesi veteriner facultesi Avcilar. Istanbul, 1993, s. 302-312.

108. Patnaik A. K., Mostofi F. K. A clinicopathologic, histologic and immunohistochemical study of mixed germ cell-stromal tumors of the testis in 16 dogs. Vet. Pathology. 1993, 30, 3, P. 287-295.

109. Pena F.J., Dominguez J.C. Clinical aspects of testicular cancer in the dog. Medicina Veterinaria. 1997, 14: 11, P. 625-631.

110. Peters M.A.J., Rooij D.G., Teerds K.J. et al. Spermatogenesis and testicular tumours in ageing dogs. J. of Reproduction and Fertility. 2000, 120: 2, P. 443452

111. Preziosi R., Salda L.D., Ricci A. et al. Quantification of nucleolar organiser regions in canine perianal gland tumours. Res. In Vet. Scien. 1995, 58 : 3, P. 277-281.

112. Prufer A. Diagnostic und therapie von prostataerkrankungen. Kleinierpraxis. 1990, 35, 12, s. 633-643.

113. Ramirez O.I., Homco L.D. Ultrasonographic diagnosis. Cystic prostatic hyperplasia. Vet. Radiolgy and Ultrasound. 1995, 36 : 2, P. 146-147.

114. Reinfinger M. Statistische untersuchungen zum vorkommen von hodentumoren bei haussaugetieren. J. veter. Med. Ser. A. 1988, 35 :1, s.63-72.

115. Rink J., Rink R., Rink M. et al.Prostate diseases in the dog. ACTA Vet.Brno.1998, 67:1, P. 59-64.

116. Rogers K. S., Wantschek L., Lees G.E. Diagnostic evalution of the canine prostate. Compend Contin. Educ. Pract. 1986, 8:11, P. 799-811.

117. Romagnoli S.E. Canine criptorchidism. Vet. Clin. North Am. Small Anim. Pract. 1991, 21:3, P.533-544.

118. Santos R.L., Silva C.M., Ribeiro A.F.C., Serakides R. Testicular tumors in dogs: frequency and age distribution. Arquivo Brasileiro de Medicina Veterinaria e Zootecnia. 2000, 52 : 1, P.25-26.

119. Scott D.W., Reimers Ph. D. Tail gland and perianal gland hyperplasia associated with testicular neoplasia and hypertestosteronemia in a dog. Canine practice, 1986,13, 1,P.15-17.

120. Shimizu M., Tsutsui Т., Kawakami E et al. Effect of chlormadinone acetate-pellet implantation on the volume of prostate, peripheral blood levels of sex hormones and semen quality in the dog. J. of Vet. Med. Scien. 1995, 57: 3, P. 395-399.

121. Smith P.H. and Robinson M.R.G. Renaissance der estrogenotherapie bein fortgeschrittenen prostatakarzinon? Urologe, 1995, Spriger-Verlag, v.34, P.393-397.

122. Spackman C. J. A., Roth L. Prostatic cyst and concurrent Sertoli cell tumor in a dog. J. Amer. Vet. Med. Assoc., 1988, 192, 8, P. 1096-1098.

123. Stftel A.D., Spirnal J.P.,Resnich M.J. Hormonal therapy for advanced prostatic carcinoma. J. Surg. Oncol., 1989 (suppl.l), P. 14-20.

124. Stone E.A. Urogenital tumors. Vet. Clinics of N. Amer.: Small Anim. Pract. 1985, 15,3, P. 597-608.

125. Strafuss A.C. Skin tumors. Vet. Clinics of N. Amer.: Small Anim. Pract. 1985, 15:3, P. 473-492.

126. Suess R.J., Barr S.C., Sacres B.J.Bone marrow hypoplasia in a feminized dog with an interstitial cell tumor. J. Amer. Vet. Med. Assoc. 1992, 200, 9, P. 1346-1348.

127. Szeci M., Toth I., Rengei B. et al. Androgenic steroids in normal and hyperplastic tissue samples from human prostates. Adv. Steroid. Anal. 93:Proc 5-th Symp. Anal. Steroids, Szom 1994

128. Tafti A.K., Ahmadi M.R, Baniadam A. Sertoli cell tumour and metastatic seminoma in a dog. Indian Vet. J. 1998, 75: 5, P. 412-415.

129. Theilen С. H., Madewell B. R. Veterinary cancer medicine. USA, Lea and Febiger, Philadelphia, 1987, 436 p.

130. Tsumagari S., Kuyama M., Kuyama T. et al. Efficacy of osateron acetate on benign prostatic hiperplasia in dogs. J. Japan Vet. Med. Assoc. 1999, 52:11, P. 703-706.

131. Umplet R.C., Bertoy R. Tumors of the perianal gland: a case report and review. Companion Anim. Pract. 1988, 2:12, P. 30-32.

132. Vail D.M., Withrow S.J., Schwarz P.D., Powers B.E. Perianal adenocarcinoma in the canine male: a retrospective study of 41 cases. J. Amer. Anim.Hospit. Assoc. 1990,26 : 3, P. 329-334.

133. Wellman M.L. The cytologic diagnosis of neoplasia. Vet. Clin, of N. Amer. 1990, 20,4, P.919-920.

134. Williams J., Niles J. Prostatic diseases in the dog. In Practice. 1999, 21: 10, P. 558-575.

135. Willson J.E., Brown D.E. Malignant perianal gland tumor with metastasis in a dog. J. Amer. Vet. Med. Assoc. 1964,144,4, P. 389-394.

136. Wilson G.P., Hayes H.M. Castration for treatment of perianal gland neoplasms in the dog. J. Amer.Vet. Med. Assoc., 1979,174,15, P. 1301-1303.

137. Withrow S.J. Mammary and perianal cancer. Congress synopses and clinical research abstract. International Convention Centre, Birmingham, UK. WSAVA, BSAVA and FECAVA World Congress, 3 ed., 6-th April 1997, 333 p., P. 167.

138. Yager J.A., Wilcock B.P. Color atlas and text of surgical pathology of the dog and cat. Dermatopathology and skin tumors. Canada, Ontario, Wolfe, 1994, v.l, 315 p.