Дилатационная кардиомиопатия как клиническая модель преждевременного старения организма: молекулярный профиль и диагностические маркеры тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 00.00.00, кандидат наук Кравченко Кирилл Павлович

• Кравченко Кирилл Павлович
• кандидат наук
• 2025

Оглавление диссертации кандидат наук Кравченко Кирилл Павлович

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Дилатационная кардиомиопатия: современный взгляд на проблему

1.1.1Понятие, подходы к определению и классификации

1.1.2 Основные этиологические факторы и патологические состояния, связанные с дилатационной кардиомиопатией

1.1.3 Современный взгляд на патогенетические механизмы

1.1.4 Эпидемиология

1.1.5 Диагностика

1.1.6 Современные подходы к терапии

1.2 Сигнальные молекулы в норме при дилатационной кардиомиопатии

1.2.1Сиртуин-1

1.2.2 Сиртуин-2

1.2.3 Сиртуин-3

1.2.4 Сиртуин-6

1.2.5 Мелатотин и рецепторы к нему

1.2.6 Факторы клеточного старения (р16, р21, ВАХ)

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1 Характеристика исследуемого материала

2.2 Дизайн исследования

2.3 Статистическая обработка

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

3.1 Результаты иммуноцитохимического исследования уровня сигнальных молекул в буккальном эпителии и клеточной культуре миокарда

3.2 Молекулярный профиль людей среднего возраста в норме и при дилатационной кардиомиопатии (45-59 лет)

3.3 Молекулярный профиль людей пожилого возраста в норме и при дилатационной кардиомиопатии (60-74 лет)

3.4 Молекулярный профиль людей старческого возраста в норме и при дилатационной кардиомиопатии (75-89 лет)

3.5 Дилатационная кардиомиопатия как клиническая модель преждевременного старения организма

3.6 Диагностические диапазоны значений SIRT1, SIRT2, SIRT3, SIRT6, мелатонина и рецепторов к нему МТ1, МТ2, р16, р21 и ВАХ в норме и при дилатационной кардиомиопатии в буккальном эпителии у пациентов разного возраста

3.7 Клинические признаки и усовершенствованный алгоритм диагностики дилатационной кардиомиопатии и преждевременного старения, ассоциированного с сердечно-сосудистой патологией

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

ПРИЛОЖЕНИЯ

Приложение А. Выделение культуры кардиомиоцитов, полученной от пациентов с дилатационной кардиомиопатией

Приложение Б. Характеристика нормальной культуры миокарда линии Girardi Heart

Приложение В. Характериатика антител, используемых при проведении исследования

Приложение Г. Алгоритм проведения исследования

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Дилатационная кардиомиопатия как клиническая модель преждевременного старения организма: молекулярный профиль и диагностические маркеры»

ВВЕДЕНИЕ Актуальность работы

Согласно данным Всемирной организации здравоохранения, к 2050 году ожидается практически двукратный прирост численности населения возрастной категории от 60 лет и старше [57]. Благодаря популяризации здорового образа жизни и выстроенной медико-социальной стратегии профилактики и лечения хронических неинфекционных заболеваний, за последние десятилетия в развитых странах мира продолжительность жизни значительно увеличилась. Соответственно в популяции наблюдается рост возрастных, т.е. связанных со старением, множественных заболеваний [87, 152]. К возрастным заболеваниям прежде всего относят болезни сердечно-сосудистой системы, хронические неинфекционные заболевания почек, легких, костной ткани, метаболические нарушения, нейродегенеративные расстройства. Количественно среди причин смертности возрастные заболевания занимают приблизительно половину1.

Сердечно-сосудистые заболевания (ССЗ) наиболее распространены и являются ведущими причинами инвалидности и смертности [32, 112]. Несмотря на успехи в развитии фармакологических и хирургических лечебных технологий, и в стратегиях управления поведением для борьбы с хорошо известными факторами риска, бремя сердечно-сосудистых заболеваний все еще увеличивается. Кардиоваскулярная патология занимает лидирующие позиции в структуре причин смертности в развитых странах. Например, в 2019 году была зафиксировано почти 18 миллионов случаев смерти от сердечно-сосудистой патологии2. Особенно актуальна эта проблема для клинической геронтологии и гериатрии - хронические ССЗ составляют значительное число случаев заболеваемости и смертности пациентов старших возрастных групп. Количество сердечно-сосудистых катастроф возрастает от 3 случаев на 1 тыс. населения в возрасте 35-44 лет до 74 случаев на 1

1 http ://www .cdc. gov/nchs/fastats/deaths. htm

2 https://www.who.int/health-topics/cardiovascular-diseases

тыс. в возрасте 85-94 лет [14]. У людей пожилого и старческого возраста они протекают тяжелее, чаще ведут к осложнениям [101].

Отмечено, что те нарушения здоровья, в которых оказывается задействована сердечно-сосудистая система, ассоциированы с увеличением скорости старения. Это патоморфологически и клинически проявляется в изменении структуры интимы и эластичности сосудов, уменьшении плотности функционирующих капилляров, увеличении общего периферического сосудистого сопротивления, снижении минутного объема кровотока. Вследствие снижения активности обменных процессов и склеротических изменений развивается снижение сократительной способности миокарда, снижается скорость проведения возбуждения [1]. Изменяется баланс активностей различных отделов вегетативной нервной системы, отмечается централизация регуляции.

Генетические особенности организма, а также влияние модифицируемых факторов риска и неблагоприятных условий окружающей среды обуславливают формирование траектории старения организма по ускоренному типу [13]. При данном типе старения, который также считается «преждевременным», патологическим, происходит «опережение» среднего темпа развития возраст-ассоциированных изменений организма относительно своей возрастной группы [231].

В основу формирования концепции преждевременного старения организма легли результаты исследований данных пациентов с редкими генетическими нарушениями, среди которых можно выделить прогерию Хатчинсона-Гилфорда, синдром Дауна, синдром Вернера, и анеуплоидии [82]. Данные современных исследований важны для уточнения ключевых механизмов формирования траектории преждевременного старения организма [267]. Например, тяжелая форма СОУГО-19 связана с увеличением возраста ДНК и повышенными рисками, по результатам анализа «биологических часов» по эпигенетическим показателям (тест «ОпшА§е») [55]. При этом наблюдается акселерация у пациентов при целом ряде неинфекционных заболеваний. Например, пациенты с синдромом Дауна, ВИЧ, ожирением, болезнью Хантингтона, синдромом Вернера и синдромом Сотоса [113, 114, 115, 116, 163, 166], как правило, демонстрируют патологическое

возрастное ускорение на фоне увеличения средней продолжительности жизни у больных с данными заболеваниями. При этом в развитии этих патологий большой вклад вносят как генетические мутации, так и особенности онтогенеза.

В качестве перспективной для рассмотрения с позиций модели преждевременного старения патологией на современном этапе развития науки может быть предложена дилатационная кардиомиопатия (ДКМП). Данная патология ассоциирована с течением процесса старения по патологическому типу. Если несколько десятилетий назад ДКМП встречалась преимущественно у людей молодого возраста, то благодаря развитию социально-медицинских технологий сегодня дилатационной кардиомиопатии составляет значительную долю у лиц старше 60 лет [2]. Дилатационная кардиомиопатия проявляется систолической дисфункцией левого желудочка (ЛЖ), вследствие растяжения полостей сердца [6]. Около 20-30% всех случаев дилатационной кардиомиопатии обусловлено мутацией генов, ответственных за образование белков мышечного цитоскелета кардиомиоцитов, прежде всего различных форм белков дистрофина и ламинина. Дефицит этих белков приводит к дистрофическим изменениям сердечной мышцы, замедлению проводимости, прогрессирующему снижению насосной функции сердца.

Уточнение клеточно-молекулярных механизмов патогенеза заболеваний, вызывающих преждевременное старение, позволяет разрабатывать новые подходы к диагностике и лечению людей старших возрастных групп. Изучение молекулярного профиля людей с нормальной траекторией старения и пациентов с верифицированной дилатационной кардиомиопатией, выявление диагностических маркеров, ассоциированных с патологическим старением, имеет большой потенциал в данном аспекте [8, 10].

Анализируя литературные данные, можно выделить ряд сигнальных молекул, которые могут являться маркерами преждевременного старения организма на примере дилатационной кардиомиопатии. К таким молекулам можно отнести сиртуины-1,2,3,6, мелатонин и рецепторы к нему МТ-1, МТ-2, маркеры старения р16, р21 и апоптоза ВАХ.

Белок сиртуин-1 (БГОЛ) обладает кардиопротекторным действием, принимает участие в регуляции липидного обмена, ингибирует воспалительную реакцию и процесс образования атеросклеротических бляшек. Снижение экспрессии 81ЯТ1 ассоциировано со старением миокарда, и явиться предиктором дилатационной кардиомиопатии [9].

Белок сиртуин-2 (8ШТ2) действует также важнейший кардиопротекторный агент, который защищает организм от развития различных патологий сердца [250, 240]. Его уровень снижается в сердце и сосудистой сети с возрастом и при различных патологических состояниях, таких как гипертрофия миокарда, сахарный диабет 2 типа, окислительный стресс и сердечная недостаточность [95, 215, 216, 237, 270, 266].

К эффектам белка сиртуина-3 (8ГОТ3) можно отнести кардиопротекторное действие за счет уменьшения ремоделирования миокарда, которое реализуется посредством регуляции метаболизма глюкозы и липидов и поддержания уровня АТФ в миокарде, что особенно актуально в условиях оксидативного стресса [11, 234].

Белок сиртуин-6 (8ШТ6) регулирует различные клеточные процессы при старении клеток и сердечно-сосудистых заболеваниях, связанных со старением [138]. Среди сиртуинов БГОП и 81ЯТ6 в большей мере характеризуются своей защитной ролью против воспаления, старения сосудов, болезней сердца и развития атеросклеротических бляшек [70].

Мелатонин (МТ) является многофункциональной молекулой и проявляет различные эффекты, связанные с регуляцией сна, температуры тела, эмоционального состояния, адаптационными перестройками [225], регуляцией метаболизма путем участия в метаболизме глюкозы и энергетическом обмене [184].

Реализация эффектов мелатонина происходит опосредовано путем воздействия на рецепторы МТ1 и МТ2, находящиеся на клеточной мембране [205, 221]. МТ1 выполняет защитную роль при окислительном стрессе и воспалительных процессах [94, 264]. МТ2 является эндогенным сердечным защитным агентом против повреждения миокарда при ишемии/реперфузии [99].

В клеточном старении и процессе апоптоза одну из важнейших ролей играют сигнальные пути с участием молекул р16, р21 и ВАХ [142]. Так, белки р16 и р21 рассматриваются как основные маркеры старения. Длительная экспрессия р16 подталкивает клетки к старению, необратимой остановке клеточного цикла, которая предотвращает рост потенциальных раковых клеток, но также способствует клеточному старению. Белок р21 участвует в регуляции воспалительного и окислительного стресса, участвуя в развитии сердечной дисфункции [118].

Вс1-2-ассоциированный Х-белок (ВАХ) обеспечивает тканевой гомеостаз, является регулятором внутреннего (митохондриально регулируемого) пути клеточной гибели. Благодаря активации ВАХ происходит один из ключевых этапов апоптоза - пермеабилизация [196], нарушение регуляции ВАХ приводит к аберрантной гибели клеток [227].

Выявление в биоматериалах пациентов с дилатационной кардиомиопатии высокого уровня экспрессии молекул р16, р21 и ВАХ, может свидетельствовать о патологическом старении сердечно-сосудистой системы и организма в целом. Сравнительный анализ экспрессии 81ЯТ1, 81КТ2, 81КТ3, 8ШТ6, мелатонина и рецепторов к нему МТ1, МТ2, маркеров старения р16, р21 и маркера апоптоза ВАХ в биоматериалах у людей разного возраста с дилатационной кардиомиопатией и без сердечно-сосудистой патологии, до сих пор не проводился.

Цель исследования

Поиск диагностических маркеров преждевременного старения организма на клинической модели дилатационной кардиомиопатии.

Задачи исследования

1. Сравнить уровни экспрессии сигнальных молекул 81КТ1, 81КТ2, 8ГОТ3, 8ГОТ6, мелатонина и рецепторов к нему МТ1, МТ2, маркеров старения р16,

р21 и маркера апоптоза ВАХ в буккальном эпителии, полученном у людей разного возраста, при дилатационной кардиомиопатии и при отсутствии сердечно -сосудистых заболеваний.

2. Оценить экспрессию сигнальных молекул 81ЯТ1, 8ГОТ2, 81ЯТ3, 8ГОТ6, мелатонина и рецепторов к нему МТ1, МТ2, маркеров старения р16, р21 и маркера апоптоза ВАХ в культурах кардиомиоцитов при старении в норме и при дилатационной кардиомиопатии.

3. Проверить наличие признаков преждевременного старения по уровню экспрессии изучаемых сигнальных молекул в буккальном эпителии людей разного возраста при дилатационной кардиомиопатии.

4. Определить диагностически значимые маркеры и диапазоны их значений для оценки физиологического старения и дилатационной кардиомиопатии в буккальном эпителии у людей разного возраста.

Степень разработанности темы исследования

Показано, что возрастные изменения структуры и функции сердечнососудистой системы, возраст-ассоциированные изменения чувствительности рецепторного аппарата сердечно-сосудистой системы к гуморальным агентам, регуляции метаболизма сосудистой стенки и ткани миокарда, гипоксия ткани способствуют снижению адаптационно-компенсаторным возможностей сердечнососудистой системы у лиц пожилого и старческого возраста, что обусловливает развитие заболеваний сердечно-сосудистой системы как болезней старения [5].

Исследование дилатационной кардиомиопатии в качестве модели преждевременного старения обосновано тем, что данное заболевание сопровождается клиническими признаками ускоренного (патологического) старения. Дилатационная кардиомиопатия сопровождается сердечной недостаточностью. В трети всех случаев наблюдается фибрилляция предсердий, желудочковые экстрасистолы встречаются у 90% больных с дилатационной кардиомиопатией [159].

Основанием для выбора биологических маркеров преждевременного старения, ассоциированного с сердечно-сосудистой патологией, служат многочисленные исследования, в которых выявлены закономерности между их экспрессией при сердечно-сосудистых заболеваниях и старении организма. Ранее установлено, что сиртуины-1,2,3,6 участвуют в регуляции воспалительного процесса, старении сосудов и патологии сердца [70]. Их уровень снижается с возрастом и при различных патологических состояниях, таких как гипертрофия миокарда, окислительный стресс и хроническая сердечная недостаточность [86, 215]. Также с возрастом снижается уровень экспрессии мелатонина и рецепторов к нему МТ1 и МТ2, участвующих в регуляции ответа стресс-реализующих и стресс-лимитирующих систем при повреждении миокарда, воспалении, окислительном стрессе, метаболических нарушениях и старении [144, 186]. Известно, что уровень синтеза молекул клеточного старения р16, р21 и апоптоза ВАХ при старении и сердечно-сосудистых заболеваниях увеличивается [142].

Научная новизна исследования

Выявлено, что уровни экспрессии сигнальных молекул 81ЯТ1, 8ГОТ2, 81ЯТ3, 8ГОТ6, мелатонина и рецепторов к нему МТ1, МТ2, маркеров старения р16, р21 и маркера апоптоза ВАХ в норме и при дилатационной кардиомиопатии в изучаемых возрастных группах статистически значимо различаются, при этом в буккальном эпителии и материале клеточных культур выявленные изменения носят однонаправленный характер.

Впервые дилатационная кардиомиопатия обоснована как клиническая модель преждевременного старения.

Впервые предложен подход, позволяющий подтвердить дилатационную кардиомиопатию и оценить преждевременное старение организма, ассоциированного с сердечно-сосудистой патологией, по уровню экспрессии сигнальных молекул в буккальном эпителии.

Теоретическая и практическая значимость исследования

Сформирована диагностическая панель сигнальных молекул, имеющих значимость для дифференциальной диагностики дилатационной кардиомиопатии с учетом возрастных аспектов: для среднего возраста - SIRT1, SIRT2, мелатонин и ВАХ; для пожилого возраста - SIRT1, SIRT2, SIRT3 и ВАХ; для старческого возраста - SIRT3, мелатонин и рецептор к нему МТ2.

Обоснован набор сигнальных молекул, уровень экспрессии которых имеет диагностическую ценность для оценки преждевременного старения организма, ассоциированного с сердечно-сосудистой патологией: SIRT1, SIRT3, SIRT6, мелатонин и рецептор первого типа к нему, р16, р21 и маркер апоптоза ВАХ.

Определены диагностические диапазоны значений изучаемых сигнальных молекул в буккальном эпителии у лиц разного возраста с дилатационной кардиомиопатией.

Впервые показано, что при изучении преждевременного старения организма на модели дилатационной кардиомиопатии в культурах кардиомиоцитов диагностически значимыми маркерами являются SIRT1, SIRT6, мелатонин и рецепторы к нему МТ1 и МТ2.

Результаты работы внедрены в учебно-методическое обеспечение дисциплин кафедры внутренних болезней им. Б.И. Шулутко, в циклы дополнительного профессионального образования специальностям «гериатрия», «терапия», «кардиология» частного образовательного учреждения высшего образования «Санкт-Петербургский медико-социальный институт», используются в научно-методическом обеспечении исследований клинического отдела ФГУП «Научно -исследовательский институт гигиены, профпатологии и экологии человека» ФМБА России; внедрены в научно-исследовательскую, педагогическую работу АННО ВО НИЦ «Санкт-Петербургский институт биорегуляции и геронтологии».

Методология и методы диссертационного исследования

Объектами исследования явились лица разного возраста с дилатационной кардиомиопатией и без сердечно-сосудистой патологии. Предмет исследования - площадь экспрессии сигнальных молекул SIRT1, SIRT2, SIRT3, SIRT6, мелатонина и рецепторов к нему МТ1, МТ2, р16, р21, ВАХ в буккальном эпителии и клеточной культуре миокарда у людей разного возраста с дилатационной кардиомиопатией и без сердечно-сосудистой патологии. Использовались анализ клинико-лабораторных и клинико-инструментальных исследований, иммуноцитохимический метод, морфометрическая оценка и анализ микроскопических изображений, математико-статистические методы обработки данных. В результате применения данных методов проводилось выявление особенностей молекулярного профиля, характерны для

дилатационной кардиомиопатии у лиц разного возраста, и определить диагностически значимые маркеры преждевременного старения организма, ассоциированного с сердечно-сосудистой патологией, в буккальном эпителии и культуре клеток миокарда

Основные положения, выносимые на защиту

1. При физиологическом старении организма в буккальном эпителии снижаются уровни экспрессии протекторных агентов сердечной ткани 81ЯТ1, 8ГОТ2, 8ГОТ3, 8ГОТ6, мелатонина и рецепторов к нему МТ1, МТ2 и увеличиваются уровни экспрессии маркеров клеточного старения р16, р21 и маркера апоптоза ВАХ.

2. Выявленные возраст-ассоциированные изменения изучаемых сигнальных молекул при дилатационной кардиомиопатии носят более выраженный характер, что свидетельствует о повышении активности процессов воспаления, окислительного стресса и клеточной гибели при данной патологии.

3. Уровни экспрессии сигнальных молекул SIRT1, SIRT3, SIRT6, мелатонина и рецептора первого типа к нему, р16, р21 и маркера апоптоза ВАХ в буккальном эпителии у людей с дилатационной кардиомиопатией «опережают» соответствующие показатели своей возрастной нормы, что позволяет рассматривать дилатационную кардиомиопатию как модель преждевременного старения организма.

Связь с научно-исследовательской работой института

Диссертационная работа является темой, выполняемой по основному плану АННО ВО НИЦ «Санкт-Петербургский институт биорегуляции и геронтологии».

Публикации по теме диссертации

По материалам диссертации опубликовано 14 научных работ, из них 3 статьи в научных журналах из перечня ВАК Минобрнауки РФ, 3 статьи в журналах, индексируемых в SCOPUS, 7 работ опубликованы в других изданиях.

Апробация и реализация диссертации

Основные материалы диссертации доложены на XXVII Международной научно-практической конференции «Пожилой больной. Качество жизни», (Москва, 2021), на XXVII Всероссийского съезда сердечно-сосудистых хирургов (Москва, 2021); на ежегодной Всероссийской научно-практической конференции «Кардиология на марше!» (Москва, 2021); на ежегодной Всероссийской научно-практической конференции «Кардиология на марше!» (Москва, 2022); на XV Международном форуме «Старшее поколение» (Санкт-Петербург, 2022); на 12-й Международном конгрессе «Актуальные направления современной кардио-торакальной хирургии» (Санкт-Петербург, 2023); на Шестом Национальном

конгрессе «Реабилитация-ХХ1 век: традиции и инновации» (Санкт-Петербург, 2023).

Личный вклад автора

Автором самостоятельно проведены определение темы диссертационного исследования, составление плана работы, анализ литературных источников по проблеме диссертационного исследования, взятие образцов биологического материала для исследования, проведение иммуноцитохимического окрашивания и иммунофлуоресцентной конфокальной микроскопии, морфометрии, культивирование клеток, систематизация и статистическая обработка данных, разработка алгоритма диагностики дилатационной кардиомиопатии и преждевременного старения, ассоциированного с сердечно-сосудистой патологией, подготовка текста рукописи диссертации, рисунков и графических материалов, формирование выводов и практических рекомендаций.

Структура и объем диссертации

В структуру рукописи диссертации включены следующие главы: введение; обзор литературы в котором представлена актуальная информация по ключевым моментам этиопатогенеза, классификации и диагностики дилатационной кардиомиопатии, а также обзору сигнальных молекул, ассоциированных с преждевременным старением; материалы и методы исследования; глава, посвященная описанию результатов собственных исследований, состоящая из 7 разделов; заключение; выводы; практические рекомендации; список сокращений; список литературы; приложения. Текст диссертации изложен на 134 страницах, содержит 4 таблицы, 20 рисунков. Список литературы содержит 272 источника, среди которых 14 источников из них на русском языке, 258 - на английском.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Дилатационная кардиомиопатия: современный взгляд на проблему

1.1.1 Понятие, подходы к определению и классификации

Кардиомиопатии (КМП) - это группа заболеваний, при которых миокард имеет структурные и функциональные нарушения при отсутствии других причин. Еще несколько десятилетий назад в медицинской литературе существовала неопределенность в отношении этой группы заболеваний. В последние годы достижения в области патофизиологии, генетики и молекулярной медицины позволили серьезно продвинуться в понимании патогенетических механизмов и методов лечения кардиомиопатии [162].

С 1956 года было принято несколько определений КМП с использованием таких терминов как «воспалительные», «некоронарные», «нарушения миокарда неизвестной этиологии» [26].

Классификации кардиомиопатий основывались в основном на фенотипическом подходе [89, 207], в которых не всегда учитывались другие аспекты. В 2006 году американская кардиологическая ассоциация выработала определение: «кардиомиопатии представляют собой гетерогенную группу заболеваний миокарда, связанных с механической или электрической дисфункцией и проявляющихся обычно (но не всегда) проявляются неадекватной гипертрофией или расширением желудочков и обусловлены множеством причин, которые часто являются генетическими. Кардиомиопатии могут ограничиваться областью сердца, либо являются частью генерализованных, системных расстройств, часто приводя к смерти или прогрессирующей инвалидности, связанной с сердечной недостаточностью» [167].

Эта классификация основана на этиологии, разделяя кардиомиопатии на генетические, приобретенные и смешанные, а также первичные или вторичные, поскольку они поражают преимущественно сердце. В качестве отдельных нозологических единиц выделяются синдром Бругада, синдромы удлиненного интервала РТ, синдромы короткого интервала РТ, катехоламинергическая желудочковая полиморфная тахикардия и внезапная ночная смерть [181].

С 2008 года выделяют также дилатационную, гипертрофическую, рестриктивную, неклассифицированную и аритмогенную правожелудочковую кардиомиопатии, каждая из которых, в свою очередь, подразделяется на семейную (наследуемую) и несемейную (спорадическую), в соответствии с классификацией, предложенной Европейским обществом кардиологов [75].

Предложенная ЛгЬшйт и др. в 2013 году другая классификация была принята Всемирной федерацией сердца. Обозначается как МООЕ(8), аббревиатура основных классификационных признаков: по морфологическим изменениям (М), по поражению органов и систем (О), степени генетической детерминированности (О), а также учитывает этиологические факторы (Е) и степень сохранности функции сердца (8) [213]. Эта система напоминает классификацию опухолей ТЫМ и обеспечивает корреляцию генотип-фенотип. Такой подход представляет собой связующее звено между фундаментальной наукой и клинической медициной, и подталкивает клиницистов к комплексному подходу к пациентам, не сосредотачиваясь только на сердце. Однако, его использование в клинической практике встречается редко [77].

Дилатационная кардиомиопатия (ДКМП) - это патология, характеризующаяся выраженным расширением полости левого желудочка и ассоциированной с ней диффузной гипокинезией миокарда, снижением фракции выброса. Признаки органического поражения миокарда иной этиологии (артериальная гипертензия, пороки сердца, ишемическая болезнь сердца) при этом отсутствуют. Дилатационная кардиомиопатия сопровождается сердечной недостаточностью, нарушениями сердечной проводимости, аритмиями [129, 159]. О заболевании свидетельствуют такие целевые индикаторы, как снижение фракции

выброса левого желудочка (от 45 % и ниже), при увеличении полости левого желудочка (от 6 см и больше) в диастолу. В качестве этиологической причины ДКМП как правило имеет место взаимодействие нескольких факторов [145, 200, 256].

Термин «дилатационная кардиомиопатия» был принят в 1957 г. (W.Brigden). Определение, классификация и диагностика этой патологии неоднократно пересматривались, и до настоящего времени они остаются дискуссионными [162].

В 2016 году Pinto et al. предложили пересмотренное определение ДКМП, которое пытается охватить широкие клинические особенности заболевания и его изменения с течением времени [201]. Предложено понятие «клинического континуума ДКМП», который подразумевает наличие нескольких клинических вариантов течения патологии, с последовательными проявлениями от субклинической формы до развернутой картины кардиомиопатии [224].

Стадия систолической дисфункции обусловлена дилатацией ЛЖ, но может и отсутствовать (у носителей мутаций в генах ламина A/C) [23, 35, 102]. В связи с этим было предложено выделять гипокинетическую кардиомиопатию без дилатации желудочков, как промежуточный фенотип ДКМП [177, 189].

Дилатационная кардиомиопатия отличается широкой гетерогенностью генотипической составляющей и клинических проявлений [45, 201].

1.1.2 Основные этиологические факторы и патологические состояния, связанные с дилатационной кардиомиопатией

Ишемическая кардиомиопатия

Ишемическая кардиомиопатия (ИКМ) относится к часто выявляемой специфической кардиомиопатии, на долю которой приходится более 60 % пациентов с симптоматической сердечной недостаточностью, и значительно

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Кравченко Кирилл Павлович, 2025 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Акашева, Д. У. Сердце и возраст (часть I): теории старения, морфологические изменения / Д. У. Акашева, И. Д. Стражеско, Е. Н. Дудинская, [и др.] // КВТиП. - 2013. - №1.

2. Алаева, Е. Н. Диагностика и лечение дилатационной кардиомиопатии в повседневной клинической практике (данные первого российского регистра по дилатационной кардиомиопатии) / Е. Н. Алаева, О. Ю. Нарусов, С. Н. Терещенко, [и др.] // Кардиологический вестник. - 2014. - №2. - С.54-61

3. Баранов, В. С. Геном человека и гены "предрасположенности": Введение в предиктивную медицину / В. С. Баранов, Е. В. Баранова, Т. Э. Иващенко // СПб.: Интермедика. - 2000. - 271 с.

4. Вайханская, Т. Г. Дилатационная кардиомиопатия: новый взгляд на проблему / Т. Г. Вайханская, Л. Н. Сивицкая, Т. В. Курушко, [и др.] // Российский кардиологический журнал. - 2019. - Т.24, №4. - С.35-47.

5. Горбачев, В. В. Практическая кардиология: руководство для врачей / В. В. Горбачев, А. Г. Мрочек, М. С. Пристром [и др.] // М., 2012. - 126 с.

6. Гуревич, М. А. Принципы лечения хронической сердечной недостаточности у больных с дилатационной кардиомиопатией / М. А. Гуревич, Л. В. Архипова // Болезни сердца и сосудов. - 2011. - Т.6, №1. - С.37-40.

7. Забозлаев, Ф. Г. Морфометрические показатели стромально-паренхиматозных взаимоотношений при старении организма / Ф. Г. Забозлаев, А.

B. Сорокина // Клиническая практика. - 2011. - №2. - С.26-31.

8. Кравченко К. П., Козлов К. Л., Дробинцева А. О. [и др.] Возрастные особенности уровня экспрессии маркеров апоптоза в кардиомиоцитах у пациентов с дилатационной кардиомиопатией / // Успехи геронтологии. - 2021. - Т. 34, № 6. -

C. 885-890.

9. Кравченко К. П., Медведев Д. С., Морозкина С. Н. [и др.] Дилатационная кардиомиопатия как клиническая модель преждевременного

старения организма человека / // Врач. - 2023. - Т. 34, № 12. - С. 10-13. - DOI 10.29296/25877305-2023-12-02.

10. Кравченко. К. П., Медведев Д. С., Морозкина С. Н. [и др.] Диагностические маркеры преждевременного старения (на клинической модели дилатационной кардиомиопатии) // Современные проблемы здравоохранения и медицинской статистики. - 2023. - № 1. - С. 189-204.

11. Кравченко К. П., Полякова В. О., Медведев Д. С., Троцюк Д. В. Молекулярный профиль людей разного возраста в «норме» и при дилатационной кардиомиопатии / // Научные результаты биомедицинских исследований. - 2024. -Т. 10, № 1. - С. 143-155.

12. Мухаметгалиева, Г. М. Дилатационная кардиомиопатия: современные представления и пример клинического течения / Г. М. Мухаметгалиева, О. Б. Ощепкова, Н. А. Цибулькин [и др.] // Вестник современной клинической медицины. -2018. - Т.11, вып 4. - С.113-119.

13. Пристром, М. С. Старение физиологическое и преждевременное. Современный взгляд на проблему / М. С. Пристром, С. Л. Пристром, И. И. Семененков // Международные обзоры: клиническая практика и здоровье. - 2017. №5-6.

14. Савина, А. А. Динамика заболеваемости болезнями системы кровообращения взрослого населения Российской Федерации в 2007-2019 гг. / А. А. Савина, С. И. Фейгинова // Социальные аспекты здоровья населения [сетевое издание]. - 2021. - Т.67, №2. - С. 1.

15. Abbas, T. p21 in cancer: Intricate networks and multiple activities / T. Abbas, A. Dutta // Nat Rev Cancer. - 2009. - Vol.9, №6. - P.400-414.

16. Afílalo, J. Age-related changes in lamin A/C expression in cardiomyocytes / J. Afialo, I.A. Sebag, L.E. Chalifour // American Journal Physiology. - 2007. - Vol.293, №3. - P.1451-1456.

17. Aksel, T. Ensemble force changes that result from human cardiac myosin mutations and a small-molecule effector / T. Aksel, E. Choe Yu, S. Sutton, [et al] // Cell Reports. - 2015. - Vol.11, №6. - P. 910-920.

18. Aleksova, A. Impact of atrial fibrillation on outcome of patients with idiopathic dilated cardiomyopathy: data from the Heart Muscle Disease Registry of Trieste / A. Aleksova, M. Merlo, M. Zecchin, [et al] // Clin Med Res. - 2010. - Vol. 8, №3-4. P.142-149.

19. Aleksova, A. New-onset left bundle branch block independently predicts long-term mortality in patients with idiopathic dilated cardiomyopathy: data from the Trieste Heart Muscle Disease Registry / A. Aleksova, C. Carriere, M. Zecchin, [et al]. -Eur Pacing Arrhythm Card Electrophysiol J Work Groups Card Pacing Arrhythm Card Cell Electrophysiol Eur Soc Cardiol. - 2014. - Vol.16, №10. P. 1450-1459.

20. Alcendor, R.R. SIRT1 regulates aging and resistance to oxidative stress in the heart / R.R. Alendor, S. Gao, P. Zhai, [et al] // Circulation Results. - 2007. - Vol.100, №10. - P.1512-1521.

21. Amaral, F.G.D. New insights into the function of melatonin and its role in metabolic disturbances / F.D.G. Amaral, J. Andrade-Silva, W.M.T. Kuwabara, J. Cipolla-Neto // Expert Rev Endocrinol Metab. - 2019. - Vol.14, №4. - P.293-300.

22. Anamika, Mitochondrial SIRT3 and neurodegenerative brain disorders / Anamica, A. Khanna, P. Acharjee, [et al] // SK.J Chem Neuroanat. - 2019. - Vol.95. -P.43-53.

23. Anastasakis, A. Sudden unexplained death in the young: epidemiology, aetiology and value of the clinically guided genetic screening / A. Anastasakis, E. Papatheodorou, K. Ritsatos, [et al] // Europace. - 2018. -Vol.20, №3. - P.472-480.

24. Andreini, D. Diagnostic accuracy of multidetector computed tomography coronary angiography in patients with dilated cardiomyopathy / D. Andreini, G. Pontone, M. Pepi, [et al] // J Am Coll Cardiol. - 2007. - Vol.49. - P.2044-50.

25. Arbelo, E. ESC Scientific Document Group. 2023 ESC guidelines for the management of cardiomyopathies / E. Arbelo, A. Protonotarios, J.R. Gimeno, [et al] // Eur Heart J. - 2023. - Vol.44. - P.3503-3626.

26. Arbustini, E. The MOGE(S) classification of cardiomyopathy for clinicians / E. Arbustini, N. Narula, L. Tavazzi, [et al] // J Am Coll Cardiol. - 2014. - Vol.64, №3. - P.304-318.

27. Barasch, E. Clinical significance of calcification of the fibrous skeleton of the heart and aortosclerosis in community dwelling elderly / E. Barasch, J.S. Gottdiener, E.K. Larsen // The Cardiovascular Health Study (CHS). - American Heart Journal. -2006. - Vol.151, №1. - P.39-47.

28. Benjamin, E.J. Heart disease and stroke statistics-2017 update: a report from the American Heart Association / E.J. Benjamin, M.J. Blaha, S.E. Chiuve, [et al] // Circulation. - 2017. - Vol.135, №10. - P.146-603.

29. Bernhard, D. The aging cardiomyocyte: a mini-review / D. Bernhard, G. Laufer // Gerontology. - 2008. - Vol.54, №1. - P.24-31.

30. Bertini, M. Efficacy of cardiac resynchronization therapy in patients with isolated ventricular noncompaction with dilated cardiomyopathy: a systematic review of the literature / M. Betrini, C. Balla, R. Pavasini, G. Boriani // J Cardiovasc Med (Hagerstown). - 2018. - Vol.19, №7. - P.324-328.

31. Beltrami, C.A. The cellular basis of dilated cardiomyopathy in humans / C.A. Beltrami, N. Finato, M. Rocco, [et al] // J. Mol. Cell Cardiol. - 1995. - Vol.27, №1. -P.291-305.

32. Bing, W. A simple method for measuring the relative force exerted by myosin on actin filaments in the in vitro motility assay: evidence that tropomyosin and troponin increase force in single thin filaments / W. Bing, A. Knott, S.B. Marston // Biochemistry Journal. - 2000. - Vol.350., №Pt 3 - P. 693-699.

33. Bollen, I.A.E. Genotype-specific pathogenic effects in human dilated cardiomyopathy / I.A.E. Bollen, M. Schuldt, M. Harakalova, [et al] // J Physiol (Lond). -2017. - Vol.595, №14. - P.4677-4693.

34. Bonnema, D.D. Effects of age on plasma matrix metalloproteinases (MMP) and tissue inhibitor of metalloproteinases (TIMPs) / D.D. Bonnema, C.S. Webb, W.R. Pennington // Journal Card Failure. - 2007. - Vol.13, №7. - P.530-540.

35. Bozkurt, B. Current diagnostic and treatment strategies for specific dilated cardiomyopathies: a scientific statement from the American Heart Association / B. Bozkurt, M. Colvin, J. Cook, [et al] // Circulation. - 2016. - Vol.134, №23. - P.579-646.

36. Besson, A. CDK inhibitors: Cell cycle regulators and beyond / A. Besson, S.F. Dowdy, J.M. Roberts. // Dev. Cell. - 2008. - Vol.14. - P.159-169.

37. Braidy, N. Age related changes in NAD+ metabolism oxidative stress and SIRT1 activity in wistar rats / N. Braidy, G.J. Guillemin, H. Mansour, [et al] // PLoS ONE. - 2011. - Vol.6, №4. - P.19194.

38. Braunwald, E. Cardiomyopathies: an overview / E. Braunwald //Circ. Res. -2017. - Vol.121, №7. - P.711-721.

39. Caforio, A.L.P. Dilated cardiomyopathy (DCM) and myocarditis: classification, clinical and autoimmune features / A.L.P. Caforio, S. Bottaro, S. Iliceto // Applied Cardiopulmonary Pathophysiology. - 2012. - Vol.16, №1. - P.82-95.

40. Carracedo, A. New guidelines for the publication of genetic population data / A. Carracedo, J.M. Butler, L. Gusmao, [et al] // Forensic Sci. Int. Genet. - 2013. - Vol.7, №2. - P.217-220.

41. Carrascal, L. Role of melatonin in the inflammatory process and its therapeutic potential / L. Carrascal, P. Nunez-Abades, A. Ayala, M. Cano // Curr Pharm Des. - 2018. - Vol.24, №14. - P.1563-1588.

42. Cazzalini, O. Multiple roles of the cell cycle inhibitor p21CDKN1A in the DNA damage response / O. Cazzalini, A.I. Scovassi, M. Savio, [et al] / Mutat Res. - 2010. - Vol.704, №1-3. - P.:12-20. вместе с Abbas

43. Cecon, E. Melatonin receptors: molecular pharmacology and signalling in the context of system bias / E. Cecon, A. Oishi, R. Jockers // Br J Pharmacol. -2018. -Vol.175, №16. - P.3263-3280.

44. Chang, A.R. SIRT6, a mammalian deacylase with multitasking abilities / A.R. Chang, C.M. Ferrer, R. Mostoslavsky // Physiol Rev. - 2020. - Vol.100, №1. -P.145-169.

45. Charron, P. The Cardiomyopathy Registry of the EUR Observational Research Programme of the European Society of Cardiology: baseline data and contemporary management of adult patients with cardiomyopathie / P. Charron, P.M. Elliott, J.R. Gimeno, [et al] // Eur Heart J. - 2018. - Vol.29, №20. - P.270-310.

46. Chen, Y.C. Effective top-down LC/MS+ method for assessing actin isoforms as a potential cardiac disease marker / Y.C. Chen, S. Ayaz-Guner, Y. Peng, [et al] // Analitic Chemistry. - 2015. - Vol.87, №16. - P.8399-8406.

47. Cheng. Y, Interaction of Sirt3 with OGG1 contributes to repair of mitochondrial DNA and protects from apoptotic cell death under oxidative stress / Y. Cheng, X. Ren, A.S. Gowda, [et al] // Cell Death Dis. - 2013. - Vol.4, №7. - P.731.

48. Cheng, S. Age-related left ventricular remodeling and associated risk for cardiovascular outcomes: the multi-Ethnic Study of Atherosclerosis / S. Cheng, V.R. Fernandes, D.A. Bluemke // Circ Cardiovascular Imaging. - 2009. - Vol.2, №3. - P.191-198.

49. Cheng, S. Correlates of echocardiographic indices of cardiac remodeling over the adult life course: longitudinal observations from the Framingham Heart Study / S. Cheng, V. Xanthakis, L.M. Sullivan // Circulation. - 2010. - Vol.122, №6. - P. 570578.

50. Chothani, S. Widespread translational control of fibrosis in the human heart by RNA-binding proteins / S. Chothani, S. Schäfer, E. Adami, [et al] // Circulation. -2019. - Vol.140, №11. - P.937-951.

51. Chowdhury, S. Discovery of selective SIRT2 inhibitors as therapeutic agents in B-cell lymphoma and other malignancies / S. Chowdhury, S. Sripathy, A.A. Webster, [et al] // Molecules. - 2020. - Vol.25. - P.455.

52. Codd, M.B. Epidemiology of idiopathic dilated and hypertrophic cardiomyopathy. A population-based study in Olmsted County, Minnesota, 1975-1984 / M.B. Codd, D.D. Sugrue, B.J. Gersh, L.J. Melton // Circulation. - 1989. - Vol.80. -P.564-572.

53. Comai, S. Melatonin MT1 receptor as a novel target in neuropsychopharmacology: MT1 ligands, pathophysiological and therapeutic implications, and perspectives / S. Comai, M. Lopez-Canul, D. De Gregorio, [et al] // Pharmacol Res. - 2019. - Vol.144. - P.343-356.

54. Cooper, L.T. Jr. Myocarditis / L.T. Cooper Jr // N Engl J Med. - 2009. -Vol.360. - P.1526-1538.

55. Corley, M.J. Genome-wide DNA Methylation Profiling of Peripheral Blood Reveals an Epigenetic Signature Associated with Severe COVID-19 / M.J. Corley, A.P.S. Pang, K. Dody, [et al] // J Leukoc Bio. - 2021. - Vol. 110, №1. - P.21-26.

56. Cotter, G. Role of cardiac power in heart failure / G. Cotter, S.G. Williams, Z. Vered // Current Opinion Cardiology. - 2003. - Vol.18, №3. - P. 215-222.

57. Crimmins, E.M. Recent trends and increasing differences in life expectancy present opportunities for multidisciplinary research on aging / E.M. Crimmins // Nature aging. - 2021. - Vol. 1, №1. - P.12-13.

58. Christiansen, L. DNA methylation age is associated with mortality in a longitudinal Danish twin study / L. Christiansen, A. Lenart, Q. Tan, [et al] // Aging Cell.

- 2016. - Vol.15, №1. - P.149-154.

59. Cristofalo, V.J. Replicative senescence: a critical review / V.J. Cristofalo, A. Lorenzini, R.G. Allen // Mech. Ageing Dev. - 2004. - Vol.125, №10-11. - P.827-848.

60. Cui, X. SIRT6 regulates metabolic homeostasis in skeletal muscle through activation of AMPK / X. Cui, L. Yao, X. Yang, [et al] // Am J Physiol Endocrinol Metab.

- 2017. - Vol.313, №4. - P.493-505.

61. Cuspidi, C. Normal values of left-ventricular mass: echocardiographic findings from the PAMELA study / C. Cuspidi, R. Facchetti, C. Sala // Journal Hypertension. - 2012. - Vol.30, №5. - P.997-1003.

62. Dainis, A.M. Cardiovascular precision medicine in the genomics era / A.M. Dainis, E.A. Ashley // JACC Basic Transl Sci. - 2018. - Vol.3, №2. - P.313-326.

63. Damy, T. Senile systemic amyloidosis: definition, diagnosis, why thinking about? / T. Damy, D. Mohty, J.F. Deux // Presse Med. - 2013. - Vol.42, №6. - P.1003-1014.

64. Deng, T. Deubiquitylation and stabilization of p21 by USP11 is critical for cell-cycle progression and DNA damage responses / T. Deng, G. Yan, X. Song, [et al] // Proc Natl Acad Sci USA. - 2018/ - Vol.115, №18. - P.4678-4683.

65. Di Marco, A. Late gadolinium enhancement and the risk for ventricular arrhythmias or sudden death in dilated cardiomyopathy: systematic review and meta-

analysis / A. Di Marko, I. Anguera, M. Schmitt, [et al] / JACC Heart Fail. - 2017. - Vol.5, №1. - P.28-38.

66. Diekman, B.O. Expression of p16INK4a is a biomarker of chondrocyte aging but does not cause osteoarthritis / B.O. Diekman, G.A. Sessions, J.A. Collins, [et al] // Aging Cell. - 2018. - Vol.17, №4. - P.12771.

67. Dikalova, A.E. Mitochondrial deacetylase sirt3 reduces vascular dysfunction and hypertension while sirt3 depletion in essential hypertension is linked to vascular inflammation and oxidative stress / A.E. Dikalova, A. Pandey, L. Xiao, [et al] // Circ Res.

- 2020. - Vol. 126, №4). - P.439-452.

68. Donal, E. Mitral regurgitation in dilated cardiomyopathy: value of both regional left ventricular contractility and dyssynchrony / E. Donal, C. De Place, G. Kervio, [et al] // Eur J Echocardiogr. - 2009. - Vol.10. - P.133-8.

69. Donato, A.J. SIRT1 and vascular endothelial dysfunction with ageing in mice and humans / A.J. Donato, K.A. Magerko, B.R. Lawson, [et al] // Journal of Physiology. - 2011. - Vol.589, №Pt18. - P.4545-4554.

70. D'Onofrio, N. SIRT1 and SIRT6 Signaling Pathways in Cardiovascular Disease Protection / N. D'Onofrio, L. Servillo, M.L. Balestrieri // Antioxid Redox Signal.

- 2018. - Vol.28, №8. - P.711-732.

71. D'Oria, R. The role of oxidative stress in cardiac disease: from physiological response to injury factor / R. D'Oria, R. Schipani, A. Leonardini, [et al] // Oxid Med Cell Longev. - 2020. - Vol.2020. - P.5732956.

72. Dotto, G.P. p21(WAF1/Cip1): More than a break to the cell cycle? / G.P. Dotto // Biochim Biophys Acta. - 2000. - Vol.1471, №1. - P.43-56.

73. Dutto, I. Biology of the cell cycle inhibitor p21CDKN1A: Molecular mechanisms and relevance in chemical toxicology / I. Dutto, M. Tillhon, O. Cazzalini, [et al] // Arch. Toxicol. - 2015. - Vol.89. - P.155-178.

74. Elkhwanky, M.S. Extranuclear sirtuins and metabolic stress / M.S. Eikhwanky, J. Hakkola // Antioxid Redox Signal. - 2018. - Vol.28, №8. - P.662-676.

75. Elliott, P. Classification of the cardiomyopathies: a position statement from the European Society Of Cardiology Working Group on Myocardial and Pericardial

Diseases / P. Elliott, B. Andersson, E. Arbustini, [et al] // European Heart Journal. - 2008. - Vol.29, №2. - P.270-276.

76. Elkayam, U. Maternal and fetal outcomes of subsequent pregnancies in women with peripartum cardiomyopathy / U. Elkayam, P.P. Tummala, K. Rao, [et al] // N Engl J Med. - 2001. - Vol.344. - P.1567-1571.

77. Fedele, F. Heart failure: TNM-like classification / F. Fedele, P. Severino, S. Calcagno, M. Mancone // J Am Coll Cardiol. - 2014. - Vol.63. - P.1959-1960.

78. Feldman, J. Cardiovascular complications of cocaine use / J. Feldman, J. Auer, R. Berent, [et al] // N Engl J Med/ - 2001. - Vol.345. - P.1575-1576.

79. Fiechter, M. Age-related normal structural and functional ventricular values in cardiac function assessed by magnetic resonance / M. Fiechter, T.A. Fuchs, C. Gebhard // BMC Medical Imaging. - 2013. - Vol.13. - P.6.

80. Finocchiaro, G. Electrocardiographic differentiation between 'benign T-wave inversion' and arrhythmogenic right ventricular cardiomyopathy / G. Finocchiaro, M. Papadakis, H. Dhutia, [et al] // EP Eur. - 2019. - Vol.21, №2). P.332-338.

81. Fiorentino, F. The two-faced role of SIRT6 in cancer / F. Florentino, V. Carafa, G. Favale, [et al] / Cancers (Basel). - 2021. - Vol.13, №5. - P.1156.

82. Franceschi, C. The continuum of aging and age-related diseases: common mechanisms but different rates / C. Franceschi, P. Garagnani, C. Morsiani, [et al] // Front Med (Lausanne). - 2018. - Vol.5. - P.61.

83. Gazoti Debessa, C.R. Age related changes of the collagen network of the human heart / C/R. Gazoti Debessa, L.B. Mesiano Maifrino, R. Rodrigues de Souza // Mech Ageing Dev. - 2001. - Vol.122, №10. - P.1049-1058.

84. Georgakilas, A.G. p21: A Two-Faced Genome Guardian / A.G. Georgakilas, O.A. Martin, W.M. Bonner // Trends Mol Med. - 2017. - Vol.23, №4. - P.310-319.

85. Goldberger, JJ. Sudden cardiac death risk stratification in patients with nonischemic dilated cardiomyopathy / JJ. Goldberger, H. Subacius, T. Patel, [et al] // J Am Coll Cardiol. - 2014. - Vol.63, №18. P.1879-1889.

86. Grootaert, M.O.J. SIRT6 protects smooth muscle cells from senescence and reduces atherosclerosis / M.O.J. Grootaert, A. Finigan, N.L. Figg, [et al] // Circ Res. -2021. - Vol.128, №4. - P.474-491.

87. Carmona, J.J. Biology of Healthy Aging and Longevity / J.J. Carmona, S. Michan // Rev Invest Clin. - 2016. - Vol.68, №1. - P.7-16.

88. Charron, P. The Cardiomyopathy Registry of the EUR Observational Research Programme of the European Society of Cardiology: baseline data and contemporary management of adult patients with cardiomyopathies / P. Charron, P.M. Elliott, J.R. Gimeno, [et al] / Eur Heart J. - 2018. - Vol.39, №20. - P.270-310.

89. Chazov, E.I. Report of the WHO/ISFC task force on the definition and classification of cardiomyopathies / E.I. Chazov, G. Cherian, A.O. Falase, [et al] // Br Heart J. - 1980. - Vol.44. - P. 672-673.

90. Chong, Z.Z. Targeting cardiovascular disease with novel SIRT1 pathways / Z.Z. Chong, S. Wang, Y.C. Shang, K. Maiese // Future Cardiology. - 2012. - Vol.8, №1.

- P.89-100.

91. Gélinas, R. AMPK activation counteracts cardiac hypertrophy by reducing O-GlcNAcylation / R. Gélinas, F. Mailleux, J. Dontaine, [et al] // Nat Commun. - 2018.

- Vol.9. - P.374.

92. George, RT. Myocardial CT perfusion imaging and SPECT for the diagnosis of coronary artery disease: a head-to-head comparison from the CORE320 multicenter diagnostic performance study / RT. George, VC. Mehra, MY. Chen, [et al] // Radiology.

- 2014. - Vol.272. - P.407-16.

93. Ghio, S. Prognostic usefulness of the tricuspid annular plane systolic excursion in patients with congestive heart failure secondary to idiopathic or ischemic dilated cardiomyopathy // S. Ghio, F. Recusani, C. Klersy, [et al] // Am J Cardiol. - 2020.

- Vol.85. - P.837-42.

94. Gu, C. Microglial MT1 activation inhibits LPS-induced neuroinflammation via regulation of metabolic reprogramming / C. Gu, F. Wang, Y.T. Zhang, [et al] // Aging Cell. - 2021. - Vol.20, №6. - P.13375.

95. Gu, W. PHD finger protein 19 pro-motes cardiac hypertrophy via epigenetically regulating SIRT2 / W. Gu, Y. Cheng, S. Wang, [et al] // Cardiovasc Toxicol. - 2021. - Vol.21. - P.451- 461.

96. Gunaratnam, K. Review of cardiomyopathy imaging / K. Gunaratnam, LH. Wong, A. Nasis, [et al] // Eur J Radiol. - 2013. - Vol.82. - P. 1763-75.

97. Haas, J. Atlas of the clinical genetics of human dilated cardiomyopathy / J. Haas, K.S. Frese, B. Peil, [et al] // Eur Heart J. - 2015. - Vol.36. - P.1123-35a.

98. Hall, J.A. The sirtuin family's role in aging and age-associated pathologies / J.A. Hall, J.E. Domini, Y. Lee, P. Puigserver // Journal Clinical Invest. - 2013. - Vol.123, №3. - P. 973-979.

99. Han, D. Activation of melatonin receptor 2 but not melatonin receptor 1 mediates melatonin-conferred cardioprotection against myocardial ischemia/reperfusion injury / D. Han, Y. Wang, J. Chen, [et al] // J Pineal Res. - 2019. - Vol.67, №1. - P.12571.

100. Hantson, P. Mechanisms of toxic cardiomyopathy / P. Hantson // Clin. Toxicol (Phila). - 2019. - Vol.57, №1. - P.1-9.

101. Harkness, K. The older patient with heart failure: high risk for frailty and cognitive impairment / K. Harkness // Expert Rev Cardiovasc Ther. - 2012. - Vol.10, №6. - P.779-795.

102. Hasselberg, N.E. Risk prediction of ventricular arrhythmias and myocardial function in Lamin A/C mutation positive subjects / N.E. Hasselberg, T. Edvardsen, H. Petri, [et al] // Europace. - 2014. - Vol.16. - P.563-571.

103. He, Y. Sensitive and selective monitoring of the DNA damage-induced intracellular p21 protein and unraveling the role of the p21 protein in DNA repair and cell apoptosis by surface plasmon resonance / Y. He, Z. Wang, Y. Hu, [et al] // Analyst. -2020. - Vol.145, №10. - P.3697-3704.

104. He, Y. The role of SIRT3-mediated mitochondrial homeostasis in osteoarthritis / Y. He, Z. Wu, L. Xu, [et al] // Cell Mol Life Sci. - 2020. - Vol.77, №19. - P.3729-3743.

105. Heckbert, S.R. Traditional cardiovascular risk factors in relation to left ventricular mass, volume, and systolic function by cardiac magnetic resonance imaging:

The Multi-Ethnic Study of Atherosclerosis / S.R. Heckbert, W. Post // Journal American Coll. Cardiology. - 2006. - Vol.48, №11. - P.2285-2292.

106. Hees, P.S. Left ventricular remodeling with age in normal men versus women: novel insights using three-dimensional magnetic resonance imaging / P.S. Hees, J.L. Fleg, E.G. Lakatta // American Journal Cardiology. - 2002. - Vol.90, №11. -P.1231-1236.

107. Heijenbrok-Kal, M.H. Stress echocardiography, stress single-photonemission computed tomography and electron beam computed tomography for the assessment of coronary artery disease: a meta-analysis of diagnostic performance / M.H. Heijenbrok-Kal, K.E. Fleischmann, M.G.M. Hunink // Am Heart J. - 2007. - Vol.154. -P.415-23.

108. Herbig, U., Regulation of growth arrest in senescence: telomere damage is not the end of the story / U. Herbig, J.M. Sedivy // Mech. Aging Dev. - 2006. - Vol.127, №1. - P.16-24.

109. Hershberger, R.E. Dilated Cardiomyopathy Overview / R.E. Hershberger, J.D. Kushner, S.B. Parks // Gene Reviews. - 2009.

110. Hershberger, R.E. Update 2011: clinical and genetic issues in familial dilated cardiomyopathy / R.E. Hershberger, J.D. Siegfried // J Am Coll Cardiol. - 2011. - Vol.57, №16. - P.1641-1649.

111. Heymans, S. The quest for new approaches in myocarditis and inflammatory cardiomyopathy / S. Heymans, U. Eriksson, J. Lehtonen, L.T.J. Cooper // J Am Coll Cardiol. - 2016. - Vol.68. - №2348-2364.

112. Ho, W.M. Genetic variants behind cardiovascular diseases and dementia / W.M. Ho, Y.Y. Wu, Y.C. Chen // Genes. - 2020. - Vol.11, №12. - P.1514.

113. Horvath, S. Accelerated epigenetic aging in Down syndrome / S. Horvath, P. Garagnani, M.G Bacalini. [et al] // Aging Cell. - 2015. - Vol.14, №3. - P.491-495.

114. Horvath, S. Increased epigenetic age and granulocyte counts in the blood of Parkinson's disease patients / S. Horvath, B.R. Ritz // Aging (Albany NY). - 2015. - Vol.7, №12. - P.1130-1142.

115. Horvath, S. HIV-1 Infection Accelerates Age According to the Epigenetic Clock / S. Horvath, A.J. Levine // J. Infect. Dis. - 2015. - Vol.212, № 10. - P.1563-1573.

116. Horvath, S. An epigenetic clock analysis of race/ethnicity, sex, and coronary heart disease / S. Horvath, M. Gurven, M.E. Levine, [et al] // Genome Biol. - 2016. -Vol.17, №1. - P.171.

117. Hou, J. Erythropoietin employs cell longevity pathways of SIRT1 to foster endothelial vascular integrity during oxidant stress / J. Hou, S. Wang, Y.C. Shang, [et al] // Current Neurovascular Research. - 2011. - Vol.8, №3. - P.220-235.

118. Huang, S. Autophagy is involved in the protective effect of p21 on LPS-induced cardiac dysfunction / S. Huang, M. Xu, L. Liu, [et al] // Cell Death Dis. - 2020. - Vol.11, №7. - P.554.

119. Hunt, S.A. American College of Cardiology; American Heart Association Task Force on Practice Guidelines; American College of Chest Physicians; International Society for Heart and Lung Transplantation; Heart Rhythm Society: ACC/AHA 2005 Guideline Update for the Diagnosis and Management of Chronic Heart Failure in the Adult: A report of the American College of Cardiology/American Heart Association Task Force on Practice Guidelines (Writing Committee to Update the 2001 Guidelines for the Evaluation and Management of Heart Failure): Developed in collaboration with the American College of Chest Physicians and the International Society for Heart and Lung Transplantation: Endorsed by the Heart Rhythm Society / S.A. Hunt, W.T. Abraham, M.H. Chin, [et al] // Circulation. - 2005. - Vol.112, №12. - P.154-235.

120. Imenshahidi, M. Effects of melatonin on cardiovascular risk factors and metabolic syndrome: a comprehensive review / M. Imenshahidi, G. Karimi, H. Hosseinzadeh // Naunyn Schmiedebergs Arch Pharmacol. - 2020. - Vol.393, №4. -P.521-536.

121. Janczewski, A.M. Modulation of sarcoplasmic reticulum Ca(2+) cycling in systolic and diastolic heart failure associated with aging / A.M. Janczewski, E.G. Lakatta // Heart Failure Review. - 2010. - Vol.15, №5. - P.431-445.

122. Japp, A.G. The Diagnosis and Evaluation of Dilated Cardiomyopathy / A.G. Japp, A. Gulati, S.A. Cook, [et al] // J Am Coll Cardiol. - 2016. - Vol.67, №25. - P.2996-3010.

123. Jefferies, J.L. Dilated cardiomyopathy / J.L. Jefferies, J.A. Towbin // Lancet.

- 2010. - Vol.375, №9716. - P. 752-762.

124. Jeon, S.M. Regulation and function of AMPK in physiology and diseases / S.M. Jeon // Exp. Mol. Med. - 2016 - Vol.48, №7. - P.245.

125. Jia, G. Insulin resistance and hyper-insulinaemia in diabetic cardiomyopathy / G. Jia, V.G. DeMarco, J.R. Sowers // Nat Rev Endocrinol. - 2016. - Vol.12. - P.144-153.

126. Jing, X.D. The role of SIRT6 in nonalcoholic steatohepatitis [Chinese] / X.D. Jing, Q. Tang, J.H. // Sheng li xue bao: [Acta physiologica Sinica]. - 2021. - Vol.73, №5.

- P.745-754.

127. Johnson, S.C. mTOR is a key modulator of ageing and age-related disease / S.C. Johnson, P. Rabinovitch, M. Kaeberlein // Nature. - 2013. - Vol.493, №7432. -P.338-345.

128. José, M-G. Aging and the Heart. A Post-Genomic View / M-G. Jose // Springer. - 2008. - P.568.

129. Kadish, A.H. Early Arrhythmic Risk Assessment in Idiopathic Cardiomyopathy: A Tincture of Time Can Be the Wrong Medicine / A.H. Kadish, J.T. Jacobson // JACC Clin Electrophysiol. - 2016. - Vol.2, №5. - P.544-545.

130. Kayvanpour, E. Genotype-phenotype associations in dilated cardiomyopathy: meta-analysis on more than 8000 individuals / E. Kayvanpour, F. Sedaghat-Hamedani, A. Amr, [et al] // Clin Res Cardiol. - 2017. - Vol.106, №2. - P.127-139.

131. Khan, R.I. A Review of the recent advances made with SIRT6 and its implications on aging related processes, major human diseases, and possible therapeutic targets / R.I. Khan, S.S.R. Nirzhor, R. Akter //Biomolecules. - 2018. - Vol.8, №3.- P.44.

132. Khatiwala, R.V. Inhibition of p16INK4A to rejuvenate aging human cardiac progenitor cells via the upregulation of anti-oxidant and NFkB signal pathways / R.V.

Khatiwala, S. Zhang, X. Li, [et al] // Stem Cell Rev Rep. - 2018. - Vol.14, №4. - P.612-625.

133. Khouri, M.G. Assessment of age-related changes in left ventricular structure and function by freehand three-dimensional echocardiography / M.G. Khoury, M.S. Maure., L. El-Khoury Rumbarger // American Journal Geriatric Cardiology. - 2005. -Vol.14, №3. - P.118-125.

134. Kim, H.S. Hepatic-Specific Disruption of SIRT6 in mice results in fatty liver formation due to enhanced glycolysis and triglyceride synthesis / H.S. Kim, C. Xiao, R.H. Wang, [et al] // Cell Metab. - 2010. - Vol.12, №3. - P.224-236.

135. Kim, T.S. SIRT3 promotes antimycobacterial defenses by coordinating mitochondrial and autophagic functions / T.S. Kim, Y.B. Jin, Y.S. Kim, [et al] // Autophagy. - 2019. - Vol.15, №8. - P.1356-1375.

136. Kinker, G.S. MT1 and MT2 melatonin receptors play opposite roles in brain cancer progression / G.S. Kinker, L.H. Ostrowski, P.A.C. Ribeiro, [et al] // J Mol Med (Berl). - 2021. - Vol.99, №2. - P.289-301.

137. Klimentova, E.A. Expression of Apoptotic Markers Bcl-2 and Bax in the Vascular Wall / E.A. Klimentova, I.A. Suchkov, A.V. Shchulkin, [et al] // Sovrem Tekhnologii Med. - 2021. - Vol.13, №2. - P.46-50.

138. Koelling, T.M. Prognostic significance of mitral regurgitation and tricuspid regurgitation in patients with left ventricular systolic dysfunction / T.M. Koelling, K.D. Aaronson, R.J. Cody, [et al] // Am Heart J. - 2002. - Vol. 144. - P.524-529.

139. Koentges, C. SIRT3 in Cardiac Physiology and Disease / C. Koentges, C. Bode, H. Bugger // Front Cardiovasc Med. - 2016. - Vol.3. - P.38.

140. Kolthur-Seetharam, U. Control of AIF-mediated cell death by the functional interplay of SIRT1 and PARP-1 in response to DNA damage / U. Kolthur-Seetharam, F. Dantzer, M.W. McBurney, [et al] // Cell Cycle. - 2006. - Vol.5, №8. - P.873-877.

141. Kreis, N.N. The Multifaceted p21 (Cip 1 /Waf1 /CDKN1 A) in Cell Differentiation, Migration and Cancer Therapy / N.N. Kreis, F. Louwen, J. Yuan // Cancers. - 2019. - Vol.11. - P.1220.

142. Krishnamurthy, J. Ink4a/Arf expression is a biomarker of aging / J. Krishnamurthy, C. Torrice, M.R. Ramsey // J. Clin. Invest. - 2004. - Vol.114, №9. -P.1299-1307.

143. Kuang, J. The Role of Sirt6 in Obesity and Diabetes / J. Kuang, L. Chen, Q. Tang, [et al]. - Front Physiol. - 2018. - Vol.9. - P.135.

144. Kurhaluk, N. Melatonin and alcohol-related disorders / N. Kurhaluk, H. Tkachenko // Chronobiol Int. - 2020. - Vol.37, №6. - P.781-803.

145. Kühl, U. Antiviral treatment of myocarditis and acute dilated cardiomyopathy / U. Kühl // Heart Failure Clinics. - 2005. - Vol.1, №3. - P.467-474.

146. Kühl, U. High prevalence of viral genomes and multiple viral infections in the myocardium of adults with "idiopathic" left ventricular dysfunction / U. Kühl, M. Pauschinger, M. Noutsias, [et al] // Circulation. - 2005. - Vol. 111, №7. - P.887-893.

147. Lancellotti, P. The clinical use of stress echocardiography in non-ischaemic heart disease: recommendations from the European Association of Cardiovascular Imaging and the American Society of Echocardiography / P. Lancellotti, P.A. Pellikka, W. Budts, [et al] // Eur Hear J Cardiovasc Imaging. - 2016. - Vol.17. - P. 1191-229.

148. LaPak, K.M. The molecular balancing act of p16(INK4a) in cancer and aging / K.M LaPak, C.E. Burd // Mol Cancer Res. - 2014. - Vol.12, №2. - P.167-183.

149. Leibowitz, D. Echocardiography and the Aging Heart / D. Lebowitz, D. Gilon // Current Cardiovascular Imaging Reports. - 2012. - Vol.5, №6. - P.501-506.

150. Li, X. SIRT6 in senescence and aging-related cardiovascular diseases / X. Li, L. Liu, T. Li, [et al] // Front Cell Dev Biol. - 2021. - Vol.9. - P.641315.

151. Li, Y. Clinical significance of P16 gene methylation in lung cancer / Y. Li, T. Zhang, H. Zhang, [et al] // Adv Exp Med Biol. - 2020. - Vol. 1255. - P.133-142.

152. Li, Z. Aging and age-related diseases: from mechanisms to therapeutic strategies / Z. Li, Z. Zhang, Y. Ren, [et al] // Biogerontology. - 2021. - Vol.22, №2. -P.165-187.

153. Lindsey, M.L. Age-dependent changes in myocardial matrix metalloproteinase/tissue inhibitor of metalloproteinase profiles and fibroblast function /

M.L. lindsey, D.K. Goshorn, C.E. Squires // Cardiovasc Res. - 2005. - Vol. 66. - P. 410419.

154. Liu, B. Resveratrol rescues SIRT1-dependent adult stem cell decline and alleviates progeroid features in laminopathy-based progeria / B. Liu, S. Ghosh, X. Yang, [et al] / Cell Metab. - 2012. - Vol.16, №6. - P.738-750.

155. Liu, G. Emerging roles of SIRT6 in human diseases and its modulators / G. Liu, H. Chen, Y. Liu, [et al] // Med Res Rev. - 2021. - Vol.41, № 2. - P.1089-1137.

156. Liu, G. Loss of NAD-dependent protein deacetylase sirtuin-2 alters mitochondrial protein acetylation and dysregulates mitophagy / G. Liu, S.H. Park, M. Imbesi M, [et al] // Antioxid Redox Signal. - 2017. - Vol.26. - P.849-863.

157. Liu, Q. MicroRNA-140-5p aggravates hypertension and oxidative stress of atherosclerosis via targeting Nrf2 and Sirt2 //Q. Liu, K.E. Ren, S. Liu, [et al] // Int J Mol Med. - 2019. - Vol.43. - P.839-849.

158. Lopez-Otin, C. The hallmarks of aging / C. Lopez-Otin, M.A. Blasco, L. Partridge, [et al] // Cell. - 2013. - Vol.153. - P.1194-1217.

159. Losurdo, P. Early arrhythmic events in idiopathic dilated cardiomyopathy / P. Losurdo, D. Stolfo, M. Merlo, [et al] // JACC Clin Electrophysiol. - 2016. - Vol.2, №5. - P.535-543.

160. Ma, H. ROR: nuclear receptor for melatonin or not? / H. Ma, J. Kang, W. Fan, et al] // Molecules. - 2021. - Vol. 26, №9. - P.2693.

161. Magnani, J.W. Myocarditis. Current trends in diagnosis and treatment / J.W. Magnani, G.W. Dec // Circulation. - 2006. - Vol.113. - P.876-890.

162. Mahmaljy, H. Dilated Cardiomyopathy / H. Mahmaljy, V.S. Yelamanchili, M. Singhal // StatPearls. Treasure Island (FL): StatPearls Publishingю - 2022.

163. Maierhofer, A. Analysis of global DNA methylation changes in primary human fibroblasts in the early phase following X-ray irradiation / A. Maierhofer, J. Flunkert, M. Dittrich, [et al] // PLoS One / 2017. - Vol.12, №5. - P.0177442.

164. Maisch, B. Definition of inflammatory cardiomyopathy myocarditis: on the way to consensus - a status report / B. Maisch, I. Portig, A.D. Ristic, [et al] // Herz. -2000. - Vol.25. - P. 200-209.

165. Malhotra, A. Accuracy of the 2017 international recommendations for clinicians who interpret adolescent athletes' ECGs: a cohort study of 11 168 British white and black soccer players / A. Malhotra, H. Dhutia, T-J. Yeo, [et al]. - Br J Sports Med. -2020. - Vol.54, №12. - P.739-745.

166. Martin-Herranz, D.E. Screening for genes that accelerate the epigenetic aging clock in humans reveals a role for the H3K36 methyltransferase NSD1 / D.E. Martin-Herranz, E. Aref-Eshghi, M.J. Bonder, [et al] // Genome Biol. - 2019. - Vol.20, №1. - P.146.

167. Maron, B.J. Contemporary definitions and classification of the cardiomyopathies: an American Heart Association scientific statement from the Council on Clinical Cardiology, Heart Failure and Transplantation Committee / B.J. Maron, J.A. Towbin, G. Thiene, [et al] // Circulation. - 2006. - Vol.113. - P.1807-1816.

168. Masarone, D. Epidemiology and clinical aspects of genetic cardiomyopathies / D. Masarone, J.P. Kaski, G. Pacileo, [et al] // Heart Fail Clin. - 2018. - Vol.14, №2. - P.119-128.

169. Mason, J.W. Myocarditis and dilated cardiomyopathy: an inflammatory link / J.W. Mason // Cardiovascular Results. - 2003. - Vol.60. - P. 5-10.

170. Massudi, H. Age-associated changes in oxidative stress and NAD+ metabolism in human tissue / H. Massudi, R. Grant, N. Braidy, [et al] // PLoS ONE. -2012. - Vol.7. - P.42357.

171. Mathew, T. Diagnosis and assessment of dilated cardiomyopathy: a guideline protocol from the British Society of Echocardiography // T. Mathew, L. Williams, G. Navaratnam, [et al] // Echo Res Pract. - 2017. - Vol.4. - P.G1-13.

172. Mattagajasingh, I. SIRT1 promotes endothelium-dependent vascular relaxation by activating endothelial nitric oxide synthase / I. Mattagajasingh, C.S. Kim, A. Naqvi, [et al] // Articles from Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. - 2007. - Vol.104, №37. - P.14855-14860.

173. Mays, P.K. Age-related changes in collagen synthesis and degradation in rat tissues. Importance of degradation of newly synthesized collagen in regulating collagen

production / P.K. Mays, R.J. McAnulty, J.S. Campa, G.J. Laurent // Biochem. J. - 1991.

- Vol.276. - P.307-313.

174. Mazucanti, C.H. Longevity pathways (mTOR, SIRT, Insulin/IGF-1) as key modulatory targets on aging and neurodegeneration / C.H. Mazucanti, J.V. Cabral-Costa, A.R. Vasconcelos, [et al] // Curr. Top. Med. Chem. - 2015. - Vol.15. - P.2116-2138.

175. McKenna, W.J. Classification, epidemiology, and global burden of cardiomyopathies / W.J. McKenna, B. J. Maron, G. Thiene // Circ. Res. 2017. - Vol.121.

- P.722-730.

176. McMurray, JJV. ESC Guidelines for the diagnosis and treatment of acute and chronic heart failure 2012: The Task Force for the Diagnosis and Treatment of Acute and Chronic Heart Failure 2012 of the European Society of Cardiology. Developed in collaboration with the Heart / JJV. McMurray, S. Adamopoulos, SD. Anker, [et al] // Eur Heart J. - 2012. - Vol.33. - P. 1787-847.

177. McNally, E.M. Dilated Cardiomyopathy: Genetic Determinants and Mechanisms / E.M. McNally, L. Mestroni // Circ Res American Heart Association. -2017. - Vol.121. - P.731-748.

178. Mendes A.B., Ferro M., Rodrigues B. Quantification of left ventricular myocardial collagen system in children, young adults, and the elderly // Medicina (B Aires). - 2012. - Vol. 72(3). - P. 216-220.

179. Mericskay, M. Nicotinamide adenine dinucleotide homeostasis and signalling in heart disease: pathophysiological implications and therapeutic potential / M. Mericskay // Arch Cardiovasc Dis. - 2016. - Vol.109. - P.207- 215.

180. Merlo, M. ECG in dilated cardiomyopathy: specific findings and long-term prognostic significance / M. Merlo, D. Zaffalon, D. Stolfo, [et al] // J Cardiovasc Med. -2019. - Vol.20, №7. - P.450-458.

181. Merlo, M. Evolving concepts in dilated cardiomyopathy / M. Merlo, A. Cannata, M. Gobbo, [et al] // Eur J Heart Fail. - 2018. - Vol.20, №2. - P.228-239.

182. Merlo, M. The prognostic impact of the evolution of RV function in idiopathic DCM / M. Merlo, M. Gobbo, D. Stolfo, [et al] // JACC Cardiovasc Imaging. -2016. - Vol.9. - P.1034-42.

183. Mihanfar, A. SIRT3-mediated cardiac remodeling/repair following myocardial infarction / A. Mihanfar, H.R. Nejabati, A. Fattahi, [et al] // Biomed Pharmacother. - 2018. - Vol.108. - P.367-373.

184. Michishita, E. Evolutionarily conserved and nonconserved cellular localizations and functions of human SIRT proteins / E. Michishita, J.Y. Park, J.M. Burneskis, [et al] // Molecular Biology Cell. - 2005. - Vol.16, №10. - P.4623-4635.

185. Mitropoulou, P. Multi-Modality Imaging in Dilated Cardiomyopathy: With a Focus on the Role of Cardiac Magnetic Resonance / P. Mitropoulou, G. Georgiopoulos, S. Figliozzi, [et al] // Frontiers in cardiovascular medicine. - 2020. - Vol. 7. - P.97.

186. Mohammadi-Sartang, M. Effects of melatonin supplementation on blood lipid concentrations: A systematic review and meta-analysis of randomized controlled trials / M. Mohammadi-Sartang, M. Ghorbani, Z. Mazloom // Clin Nutr. - 2018. - Vol.37, №6, Pt A. - P.1943-1954.

187. Mu, M. Adherence to treatment guidelines in heart failure patients in the top end region of northern territory / M. Mu, S.W. Majoni, P. Iyngkaran, [et al] // Heart Lung Circ. - 2019. -Vol.28, №7. - P.1042-1049.

188. Nag, A.C. Study of non-muscle cells of the adult mammalian heart: a fine structural analysis and distribution / A.C. Nag // Cytobios. - 2008. - Vol.28. - P.41-61.

189. Narula, N. Quantitative expression of the mutated lamin A/C gene in patients with cardiolaminopathy / N. Narula, V. Favalli, P. Tarantino, [et al] // J Am Coll Cardiol. - 2012. - Vol.60. - P.1916-1920.

190. Nikitin, N.P, Left ventricular morphology, global and longitudinal function in normal older individuals: a cardiac magnetic resonance study / N.P. Nikitin, P.H. Loh, R. de Silva // Internal Journal Cardiology. - 2006.- Vol.108, №1) - P.76-83.

191. Okura, H. Age- and gender-specific changes in the left ventricular relaxation: a Doppler echocardiographic study in healthy individuals / H. Okura, Y. Takada, A. Yamabe // Circ. Cardiovascular Imaging. - 2009. - Vol.2, №1. - P.41-46.

192. O'Neal-Moffitt, G. Genetic deletion of MT1/MT2 melatonin receptors enhances murine cognitive and motor performance / G. O'Neal-Moffitt, J. Pilli, S.S. Kumar, J. Olcese // Neuroscience. - 2014. - Vol.277. - P.506-521.

193. Orallo, F. The possible implication of trans-Resveratrol in the cardioprotective effects of long-term moderate wine consumption / F. Orallo, E. Alvarez, M. Camiña, [et al] // Molecular Pharmacology. - 2002. - Vol. 61, №2. - P.294-302.

194. Olivetti, G. Cardiomyopathy of the aging human heart. Myocyte loss and reactive cellular hypertrophy / G. Olivetti, M. Melissari, J.M. Capasso, P. Anversa // Circ. Res. - 1991. - Vol.68. - P. 1560-1568.

195. Oxenham, H. Cardiovascular aging and heart failure / H. Oxenham, N. Sharpe // European Journal Heart Failure. - 2003. - Vol.5, №4. - P.427-434.

196. Peña-Blanco, A. Bax, Bak and beyond - mitochondrial performance in apoptosis / A. Peña-Blanco, A.J. García-Sáez // FEBS J. - 2018. - Vol.285, №3. - P.416-431.

197. Petretta, M. Review and meta-analysis of the frequency of familial dilated cardiomyopathy/ M. Petretta, F. Pirozzi, L. Sasso, [et al] The American Journal of Cardiology. - 2011. - Vol.108. - P.1171-1176.

198. Pfeffer, M. The endogenous melatonin (MT) signal facilitates reentrainment of the circadian system to light-induced phase advances by acting upon MT2 receptors / M. Pfeffer, A. Rauch, H.W. Korf, von C. Gall // Chronobiol Int. - 2012. - Vol.29, №4. -P.415-429.

199. Piano, M.R. Alcoholic cardiomyopathy. Incidence, clinical characteristics, and pathophysiology / M.R. Piano // Chest. - 2002. - Vol.121. - P.1638-1650.

200. Piano, M.R. Alcoholic cardiomyopathy: is it time for genetic testing? / M.R. Piano // J Am Coll Cardiol. - 2018. - Vol.71, №20. - P.2303-2305.

201. Pinto, Y.M. Proposal for a revised definition of dilated cardiomyopathy, hypokinetic non-dilated cardiomyopathy, and its implications for clinical. practice: f position statement of the ESC working group on myocardial and pericardial diseases / Y.M. Pinto, P.M. Elliott, E. Arbustini, [et al] // Eur Heart J. - 2016. - Vol.37. - P.1850-1858.

202. Ponikowski, P. 2016 ESC Guidelines for the diagnosis and treatment of acute and chronic heart failure / P. Ponikowski, A.A. Voors, S.D. Anker, [et al] // Eur Heart J. - 2016. - Vol.37. - P.2129-2200.

203. Puggia, I. Natural history of dilated cardiomyopathy in children / I. Puggia, M. Merlo, G. Barbati, [et al] // Journal American Heart Associatea. - 2016. - Vol.5, №7.

- P.e003450

204. Rapezzi, C. Diagnostic work-up in cardiomyopathies: bridging the gap between clinical phenotypes and final diagnosis. A position statement from the ESC Working Group on Myocardial and Pericardial Diseases / C. Rapezzi, E. Arbustini, A.L.P. Caforio, [et al] // Eur Heart J. - 2013. - Vol.34. - P.1448-1458.

205. Reppert, S.M. Molecular characterization of a second melatonin receptor expressed in human retina and brain: the Mel1b melatonin receptor / S.M. Reppert, C. Godson, C.D. Mahle, [et al] // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 1995.- Vol.92, №19. -P.8734-8738.

206. Rheinwald, J.G. A two-stage, p16(INK4A)- and p53-dependent keratinocyte senescence mechanism that limits replicative potential independent of telomere status / J.G. Rheinwald, W.C. Hahn, M.Rl. Ramsey // Molec. cell. Biol. - 2002. - Vol. 22, №14.

- P. 5157-1572.

207. Richardson, P. Report of the 1995 World Health Organization/ International Society and Federation of Cardiology Task Force on the definition and classification of cardiomyopathies / P. Richardson, W. McKenna, M. Bristow, [et al] // Circulation. -1996. - Vol. 93. - P.841-842.

208. Roichman, A. Restoration of energy homeostasis by SIRT6 extends healthy lifespan / A. Roichman, S. Elhanati, M.A. Aon, [et al] // Nat Commun. - 2021. - Vol. 12, №1. - P.3208.

209. Roshdy, E. Selective SIRT2 inhibitors as promising anticancer therapeutics: an update from 2016 to 2020 / E. Roshdy, M. Mustafa, A.E. Shaltout, [et al] // Eur J Med Chem. - 2021. - Vol.224. - P. 113709.

210. Russel, J.R. Melatonin: exceeding expectations / J.R. Russel, D.X. Tan, A. Galano // Physiology. - 2014. - Vol. 29. - P.325-333.

211. Safwan-Zaiter, H. Dynamic spatiotemporal expression pattern of the senescence-associated factor p16ink4a in development and aging / H. Safwan-Zaiter. N. Wagner, J.F. Michiels, K.D. Wagner // Cells. - 2022. - Vol.11, №3. - P.541.

212. Sagar, S. Myocarditis / S. Sagar, P.P. Liu, L.T.J. Cooper // Lancet. - 2012. -Vol.379. - P.738-747.

213. §ahan, E. The MOGE(S) classification / E. Sahan, S.§ahan, M. Karamanlioglu, [et al] // Herz. - 2016. - Vol. 41. - P.503-506.

214. Salminen, A. Emerging role of NF-kB signaling in the induction of senescence-associated secretory phenotype (SASP) / A. Salminen, A. Kauppinen, K. Kaarniranta // Cell Signal. - 2012. - Vol.24, №4. - P.835-845.

215. Sarikhani, M. SIRT2 deacetylase represses NFAT transcription factor to maintain cardiac homeostasis / M. Sarikhani, S. Maity, S. Mishra, [et al] // J Biol Chem.

- 2018. - Vol.293. - P.5281-5294.

216. Sarikhani, M. SIRT2 deacetylase regulates the activity of GSK3 isoforms independent of inhibitory phosphorylation / M. Sarikhani, S. Mishra, S. Maity, [et al] // eLife. - 2018. - Vol.7. - P.32952.

217. Sasaki, H. Melatonin MT2 receptor is expressed and potentiates contraction in human airway smooth muscle / H. Sasaki, Y. Zhang, C.W. Emala Sr, K. Mizuta // Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. - 202. - Vol.321, №6. - P.991-1005.

218. Serra, S. p16 / S. Serra, R. Chetty // J Clin Pathol. - 2018. - Vol.71, №10. -P.853-858.

219. Sharan, K. Regulation of bone mass through pineal-derived melatonin-MT2 receptor pathway / K. Sharan, K. Lewis, T. Furukawa, V.K. Yadav // J Pineal Res. - 2017.

- Vol.63, №2. - P.12423.

220. She, M. Melatonin receptors in diabetes: a potential new therapeutical target? / M. She, M. Laudon, W. Yin // Eur J Pharmacol. - 2014. - Vol.744. - P.220-223.

221. Scheer, F.A. Daily night-time melatonin reduces blood pressure in male patients with essential hypertension / F.A. Scheer, G.A. van Montfrans, E.J. van Someren, [et al] // Hypertension. - 2004. - Vol.43, № 2. - P.192-197

222. Sharma, A. Meta-analysis of global left ventricular function comparing multidetector computed tomography with cardiac magnetic resonance imaging / A. Sharma, AJ. Einstein, A. Vallakati, [et al] // Am J Cardiol. - 2014. - Vol.113. - P.731-8.

223. Shi, L. MiR-339 is a potential biomarker of coronary heart disease to aggravate oxidative stress through Nrf2/FOXO3 targeting Sirt2 / L. Shi, Y. Zhang, J. Zhang, [et al] // Ann Palliat Med. - 2021. - Vol.10. - P.2596- 2609.

224. Sinagra, G. Dilated cardiomyopathy: from genetics to clinical management / G. Sinagra, M. Merlo, B. Pinamonti, editors // Springer. - 2019.

225. Slominski, A.T. Melatonin: a cutaneous perspective on its production, metabolism, and functions / A.T Slominski, R. Hardeland, M.A. Zmijewski, [et al] // J Invest Dermatol. - 2018. - Vol.138. - P.490-499.

226. Songbo, M. Oxidative stress injury in doxorubicin-induced cardiotoxicity / M. Songbo, H. Lang, C. Xinyong, [et al] // Toxicol Lett. - 2019. - Vol.307. - P.41- 48.

227. Spitz, A.Z. Physiological and pharmacological modulation of BAX / A.Z. Spitz, E. Gavathiotis // Trends Pharmacol Sci. - 2022. - Vol.43, №3. - P.206-220.

228. Stauch, B. Structural insights into melatonin receptors / B. Stauch, L.C. Johansson, V. Cherezov // FEBS J. - 2020. - Vol.287, №8. - P.1496-1510.

229. Stauch, B. Structural basis of ligand recognition at the human MT1 melatonin receptor / B. Stauch, L.C. Johansson, J.D. McCorvy, [et al] // Nature. - 2019. -Vol.569, №7755. - P.284-288.

230. Steiner, I. Patterns of isolated atrial amyloid: a study of 100 hearts on autopsy / I. Steiner, P. Hajkova // Cardiovascular Pathology. - 2006. - Vol. 15, №5. - P. 287-290.

231. Stenvinkel, P. Chronic kidney disease: a clinical model of premature aging / P. Stenvinkel, T. Larsson // Am J Kidney Dis. -2013. - Vol.62, №2. - P.339-351.

232. Strait, J.B. Aging-associated cardiovascular changes and their relationship to heart failure / J.B. Strait, E.G. Lakatta // Heart Failure Clinic. - 2012. - Vol.8, №1. -P.143-164.

233. Sun, H. Effects of melatonin on cardiovascular diseases: progress in the past year / H. Sun, A.M. Gusdon, S. Qu // Curr Opin Lipidol. - 2016. -Vol.27, №4. - P.408-413.

234. Sun, W. SIRT3: a new regulator of cardiovascular diseases / W. Sun, C. Liu, Q. Chen, [et al] // Oxid Med Cell Longev. - 2018. - Vol.2018. - P.7293861.

235. Sundaresan, N.R. The deacetylase SIRT1 promotes membrane localization and activation of Akt and PDK1 during tumorigenesis and cardiac hypertrophy I N.R. Sundaresan, V.B. Pillai, D. Wolfgeher, [et al] II Science Signal. - 2011. - Vol. 4, №182. - P.ra46.

236. Sweet, M. Diagnosis, prevalence, and screening of familial dilated cardiomyopathy I M. Sweet, M.R. Taylor, L. Mestroni II Expert Opin Orphan Drugs. -2015. - Vol.3. - P.869-876.

237. Tang, X. SIRT2 acts as a cardio-protective deacetylase in pathological cardiac hypertrophy I X. Tang, X.F. Chen, N.Y. Wang, [et al] II Circulation. - 2017. -Vol.136. - P.2051-2067.

238. Tan, D.X. Melatonin as a potent and inducible endogenous antioxidant: synthesis and metabolism I D.X. Tan, L.C. Manchester, E. Esteban-Zubero, [et al] II Molecules. - 2015. - Vol.20, №10. - P.18886-18906.

239. Tang, X. SIRT2 acts as a cardio-protective deacetylase in pathological cardiac hypertrophy I X. Tang, X.F. Chen, N.Y. Wang, [et al] II Circulation. - 2017. -Vol.136. - P.2051-2067.

240. Taneja, A. Emerging roles of Sirtuin 2 in cardiovascular diseases I A. Taneja, V. Ravi, J.Y. Hong, [et al] II FASEB J. - 2021. - Vol.35, №10. - P.21841.

241. Terman A. Aging of cardiac myocytes in culture: oxidative stress, lipofuscin accumulation, and mitochondrial turnover I A. Ternan, H. Dalen, J.W. Eaton II Ann NY Acad Science. - 2004. - Vol. 1019. - P. 70-77.

242. Thomas, D.E. The role of echocardiography in guiding management in dilated cardiomyopathy I D.E. Thomas, R. Wheeler, Z.R. Yousef, N.D. Masani II Eur J Echocardiogr. - 2009. - Vol.10. P. iii15-21.

243. Thomson, D.M. Mice lacking melatonin MT2 receptors exhibit attentional deficits, anxiety and enhanced social interaction I D.M. Thompson, E.J. Mitchell, R.L. Openshaw, [et al] II J Psychopharmacol. - 2021. - Vol.35, №10. - P.1265-1276.

244. Toprak, G. Fibrosis in heart failure subtypes / G. Toprak, H. Yüksel, Ö. Demirpençe, [et al] // European Review Medical Pharmacology Science. - 2013. -Vol.17. - P. 2302-2309.

245. Towbin, J.A. Left ventricular noncompaction: a new form of heart failure / J.A. Towbin // Heart Fail. Clin. - 2010. - Vol. 6. - P. 453-469.

246. Tsutsui, H. Oxidative stress and heart failure / H. Tsutsui, S. Kinugawa, S. Matsushima // American journal of physiology. Heart and circulatory physiology. - 2011. - Vol.301, №6. - P.2181-2190.

247. Waddingham, PH. Contractile reserve as a predictor of prognosis in patients with non-ischaemic systolic heart failure and dilated cardiomyopathy: a systematic review and meta-analysis / PH. Waddingham, S. Bhattacharyya, J. Van Zalen, G. Lloyd // Echo Res Pract. - 2018. - Vol.5. - P.1-9.

248. Wagner, K.D. The senescence markers p16INK4A, p14ARF/p19ARF, and p21 in organ development and homeostasis / K.D. Wagner, N. Wagner // Cells. - 2022. -Vol.11, №12. - P.1966.

249. Wang, C.H. Roles of mitochondrial sirtuins in mitochondrial function, redox homeostasis, insulin resistance and type 2 diabetes / C.H. Wang, Y.H. Wei // Int J Mol Sci. - 2020. - Vol.21. - P.1-18.

250. Wang, X. SIRT2 Acts as a Cardioprotective Deacetylase in Pathological Cardiac Hypertrophy / X. Wang, X.F. Chen, N.Y. Wang, [et al] // Circulation. - 2017. -Vol.136, №21. - P.2051-2067.

251. Wang, X.T. Expression and prognostic significance of melatonin receptor MT1 in patients with gastric adenocarcinoma / X.T. Wang, C.W. Chen, X.M. Zheng, [et al] // Neoplasma. - 2020. - Vol. 67, №2. - P.415-420.

252. Wang, Y. SIRT2: Controversy and multiple roles in disease and physiology / Y. Wang, J. Yang, T. Hong, [et al] // Ageing Res Rev. - 2019. - Vol.55. - P.100961.

253. Wang, Y. High expression of p16INK4a and low expression of Bmi1 are associated with endothelial cellular senescence in the human cornea / Y. Wang, X. Zang, Y. Wang, P. Chen // Mol Vis. - 2012. - Vol.18. - P.803-815.

254. W^troba, M. Sirtuins, Epigenetics and Longevity / M. W^troba, I. Dudek, M. Skoda, [et al] // Ageing Res Rev. - 2017. - Vol. 40. - P. 11-19.

255. Weintraub, R.G. Dilated cardiomyopathy / R.G. Weintraub, C. Semsarian, P. Macdonald // Lancet. - 2017. - Vol.390, №10092. - P.400-414.

256. Wilcox, J.E. Genetic cardiomyopathies / J.E. Wilcox, R.E. Hershberger // Curr Opin Cardiol. - 2018. - Vol.33, №3. - P. 354-362.

257. Williams, TJ. Cardiomyopathy: appearances on ECG-gated 64-detector row computed tomography / TJ. Williams, NE. Manghat, A. Mckay-Ferguson, [et al] // Clin Radiol. - 2008. - Vol.63. - P.464-74.

258. Williams, D.G. Prevalence of overt dilated cardiomyopathy in two regions of England / D.G. Williams, E.G. Olsen // Heart. - 1985. - Vol.54. - P.:153-155.

259. Wispelaere, N. High prevalence of p16 staining in malignant tumors / N. Wispelaere, S.D. Rico, M. Bauer, [et al] // PLoS One. - 2022. - Vol.17, №7. -P.e0262877.

260. Wu, J. Emerging role of SIRT3 in mitochondrial dysfunction and cardiovascular diseases / J. Wu, Z. Zeng, W. Zhang, [et al] // Free Radic Res.- 2019. -Vol. 53, №2. - P.139-149.

261. Xu, R. A systematic review of hypermethylation of p16 gene in esophageal cancer / R. Xu, F. Wang, L. Wu, [et al] // Cancer Biomark. - 2013. - Vol.13, №4. - P. 215-226.

262. Yamaji, K. Apoptotic myocardial cell death in the setting of arrhythmogenic right ventricular cardiomyopathy / K. Yamaji, S. Fujimoto, Y. Ikeda, [et al] // Acta Cardiol. - 2005. - Vol. 60. - P. 440-65.

263. Yamamuro, M. Cardiac functional analysis with multi-detector row CT and segmental reconstruction algorithm: comparison with echocardiography, SPECT, and MR imaging / M. Yamamuro, E. Tadamura, S. Kubo, [et al] // Radiology. - 2005. -Vol.234. - P.381-90.

264. Yan, G. Melatonin antagonizes oxidative stress-induced mitochondrial dysfunction in retinal pigmented epithelium cells via melatonin receptor 1 (MT1) / G. Yan, L. Yu, S. Jiang, J. Zhu // J Toxicol Sci. - 2018. - Vol.43, №11. - P.659-669.

265. Yeh, E.T.H. Cardiovascular complications of cancer therapy: Diagnosis, pathogenesis, and management / E.T.H. Yeh, A.T. Tong, D.J. Lenihan, [et al] // Circulation. - 2004. - Vol. 109, №25. - P. 3122-3131.

266. Yuan, Q. SIRT2 regulates microtubule stabilization in diabetic cardiomyopathy / Q. Yuan, L. Zhan, Q.Y. Zhou, [et al] // Eur J Pharmacol. -2015. -Vol.764. - P.554-561.

267. Yusipov, I. Accelerated epigenetic aging and inflammatory/immunological profile (ipAGE) in patients with chronic kidney disease / I. Yusipov, E. Kondakova, A. Kalyakulina, [et al] // Geroscience. -2022. - Vol.44, №2. - P.817-834.

268. Zhang, J. Sirt1/sirt3 modulates redox homeostasis during ischemia/reperfusion in the aging heart / J. Zhang, D. Ren, J. Fedorova, [et al] // Antioxidants. - 2020. - Vol. 9. - P.1-16.

269. Zhang, N. Deacetylation-dependent regulation of PARP1 by SIRT2 dictates ubiquitination of PARP1 in oxidative stress-induced vascular injury / N. Zhang, Y. Zhang, B. Wu, [et al] // Redox Biology. - 2021. - Vol. 47. -P. 102141.

270. Zhao L. Protective effect of dioscin against doxorubicin-induced cardiotoxicity via adjusting microRNA-140-5p-mediated myocardial oxidative stress / L. Zhao, X. Tao, Y. Qi, [et al] // Redox Biology. -2018. - Vol. 16. - P. 189-198.

271. Zisapel, N. New perspectives on the role of melatonin in human sleep, circadian rhythms and their regulation / N. Zisapel // British journal of pharmacology. -2018. - Vol. 175, №16. - P. 3190-3199.

272. Zullo, A. Redox homeostasis in cardiovascular disease: the role of mitochondrial sirtuins / A. Zullo, R. Guida, R. Sciarrillo, F.P. Mancini // Front Endocrinol (Lausanne). - 2022. - Vol.13. - P.858330.

ПРИЛОЖЕНИЯ

Приложение А. Выделение культуры кардиомиоцитов, полученной от пациентов с дилатационной кардиомиопатией

К работе приступали спустя 4 часа после получения образцов миокарда, хранение осуществлялось в холодильнике при температуре +6°С.

В стерильных условиях ламинарного шкафа образцы были извлечены из транспортировочной емкости и помещены в чашку Петри диаметром 7 см. Для удаления остатков крови и секрета образцы промывались сбалансированным солевым раствором Хенкса (HBSS) с антибиотиками (пенициллин, стрептомицин, здесь и далее 5 мг/мл) 3 раза. Ткань нарезали на мелкие кусочки (1-2 мм3) с помощью стерильных ножниц. Кусочки переносили в центрифужную пробирку объемом 15 мл и заливали 10 мл HBSS с добавлением 0,2 % коллагеназы I (Gibco, активность 205 ед/мг). В течение 30 секунд материал откручивали на центрифуге -вортекс и далее инкубировали ткань в течение 20 минут при 370°С в термостате. Полученные клеточные агрегаты диспергировали пропусканием через пипетку (пипетирование). После 5 минутного осаждения 8 мл супернатанта, содержащего клетки, центрифугировали 5 мин при 400 g. После центрифугирования надосадочную жидкость сливали, осадок растворяли в 2 мл среды М199 c добавлением 10 % сыворотки плодов коровы и антибиотика. Цикл выделения повторяли 3 раза и растворенный осадок накапливали в отдельной пробирке.

Для оценки жизнеспособности клеток из 6 мл накопленных клеток отбирали аликвоту в 2 мл, к ней добавляли трипановый синий (в соотношении 1:1) и производили подсчет клеток с помощью гемоцитометра (камера Горяева).

Выделение первичной культуры проводили на чашках Петри (Sarstedt), обработанных раствором фибриногена (Gibco), последующее культивирование проводили во флаконах с обработанной поверхностью объемом 50 мл (Sarstedt 25 см2). Клетки выращивали в 5 мл культуральной среды на флакон и в 3 мл

культуральной среды на чашку Петри диаметром 3,5 см, в 1 мл на одну лунку 24 -луночного планшета. Через 5-7 дней первичная культура достигала монослоя и проводилась процедура ее пересеивания по следующей методике: культуральная среда удалялась из чашки Петри (флакона) с помощью стерильной пипетки. Для удаления остатков среды и мертвых клеток проводилась промывка в двух сменах фосфатно-солевого буфера (PBS) без Ca2+ и Mg2+ по 3 мл на чашку Петри и по 5 мл на флакон. Для снятия клеток с подложки использовался раствор версена (Биолот), который добавляли по 500 мкл на чашку Петри и по 1 мл на флакон, время действия 3-5 мин при температуре 37°С. Открепление клеток контролировали под микроскопом. Для блокирования ферментативной реакции добавляли культуральную среду по 3 мл на чашку Петри и по 5 мл на флакон. Затем суспензию клеток центрифугировали 5 мин при 1G. Этот пассаж считали нулевым. Посевная концентрация составляла примерно 3х105 клеток на флакон 50 мл. Пассирование производили через 3 дня на 4-й, когда культура достигала состояние монослоя. Клетки культивировали до 3 и 10 пассажа.

Приложение Б. Характеристика нормальной культуры миокарда линии

Girardi Heart

Происхождение: человек, клетки предсердия.

Морфология: эпителиоподобная.

Способ культивирования: монослойный.

Условия культивирования:

o среда - ЕМЕМ (Eagle's minimal essential medium); o сыворотка - эмбриональная бычья 10 %; o др. компоненты - NEAA 1 % (Essential Amino Acids Amount); o процедура пересева - снятие клеток, используя трипсин 0.25 %: версен

0.02 % (1:3), кратность рассева 1:5; o криоконсервация - ростовая среда, 5% DMSO (Dimethyl sulfoxide), 1.0х106 клеток/мл в ампуле.

Жизнеспособность после криоконсервации: 85 % (окраска трипановым синим на нулевом пассаже).

Контроль контаминации: бактерии, грибы и микоплазма не обнаружены.

Контроль видовой идентичности: кариологический анализ.

Кариология: 2n=46, пределы изменчивости по числу хромосом 60-73, модальное число хромосом 69, количество маркеров 2 (рутинная окраска, ATCC), количество полиплоидных клеток - 12,8 %.

Эффективность клонирования: 60 % (АТСС).

Туморогенность: продукция опухолей в защечных мешках сирийского хомячка.

Другие характеристики:

o чувствительность к вирусам: полиовирус 1, 3; аденовирус 3, 4, 7; o везикулярный стоматит (штамм Индиана); o Коксаки А11, 13, 15, 18, Коксаки В; o вирус ЕСНО; ЕСМ;

о вирус Ньюкастлской болезни; о саркомы Рауса, свинка, вирус парагриппа 2; о герпес, коровья оспа.

о Изоэнзимы Г6ФДГ, А. Линия возможно контаминирована клетками ИеЬа.

Коллекции: АТСС С^ 27; ИНЦ РАН

Приложение В. Характериатика антител, используемых при

проведении исследования

Иммуноцитохимическое исследование

Для иммуноцитохимического исследования культур и буккального эпителия использовали следующие первичные моноклональные антитела (таблица 3):

Таблица 3 - Антитела, используемые для иммуноцитохимии культур кардиомиоцитов

Антитела Фирма Разведение

Сиртуин-1 Бако 1:75

Сиртуин-2 Бако 1:100

Сиртуин-3 Бако 1:50

Сиртуин-6 Бако 1:100

Мелатонин АЬеаш 1:120

Рецептор к мелатонину МТ1 АЬеаш 1:50

Рецептор к мелатонину МТ2 АЬсаш 1:100

р16 АЬсаш 1:100

р21 АЬсаш 1:50

ВАХ АЬсаш 1:100

Иммунофлуоресцентная конфокальная микроскопия

Для иммуноцитохимического исследования буккального эпителия и клеточных культур миокарда использовали следующие первичные моноклональные антитела (Таблица 4):

Таблица 4 - Первичные моноклональные антитела

Антитела

Фирма Разведение

Сиртуин-1 Бако 1:75

Сиртуин-2 Бако 1:100

Сиртуин-3 Бако 1:50

Сиртуин-6 Бако 1:100

Мелатонин АЬеаш 1:120

Рецептор к мелатонину МТ1 АЬеаш 1:50

Рецептор к мелатонину МТ2 АЬсаш 1:100

р16 АЬсаш 1:100

р21 АЬсаш 1:50

ВАХ АЬсаш 1:100

Приложение Г. Алгоритм проведения исследования.

Стандартный протокол проведения иммуноцитохимического окрашивания БЭ с использованием вторичных антител, конъюгированных с флуорохромом

1. Фиксация клеток в 4% параформальдегиде («Sigma», США) на фосфатно-солевом буфере (PBS) - 15 мин.

2. Промывка в PBS 3 раза по 5 минут.

3. Пермеабилизация клеток 0,1 % раствором TritonX-100 («Биолот», Россия) -15 мин.

4. Промывка в трех сменах PBS (по 5 мин.).

5. Инкубация в 1 % бычьем сывороточном альбумине («Биолот», Россия) - 30 минут.

6. Инкубация с первичными антителами - 1 час.

7. Промывка в трех сменах PBS (по 5 мин.).

8. Инкубация с вторичными антителами, конъюгированными с флуорофором Alexa Fluor 567 (1:1000, «Abcam», США), либо с флуорофором Alexa Fluor 488 (1:1000, «Abcam», США), либо с флуорофором Alexa Fluor 555 - 30 минут при комнатной температуре, в темноте.

9. Промывка в трех сменах PBS 3 раза по 5 минут;

10. Докрашивание ядер клеток реактивом «Hoechst 33258» («Sigma», США) - 1 мин;

11. Промывка в PBS (по 5 мин.).

12. Заключение препаратов под покровные стекла с использованием монтирующей среды Dako Fluorescent Mounting Medium («Dako», США).

Стандартный протокол проведения иммуноцитохимического окрашивания

клеточной культуры

Окрашивание проводилось по стандартному протоколу: 1. Удаление среды из 24-луночного планшета с культурой.

2. Промывка буферным раствором (фосфатно-солевой буфер, PBS, рН=7.2) в течение 3 мин.

3. Фиксация клеток в 4% параформальдегиде (Sigma, США) на PBS 15 мин.

4. Промывка в трех сменах PBS (по 5 мин.).

5. Пермеабилизация клеток 0,1% Triton X-100 (Биолот, РФ) в течение 15 мин.

6. Промывка в трех сменах PBS (по 5 мин.).

7. Инкубация в 1 % бычьем сывороточном альбумине (Биолот, РФ) в течение 30 мин для блокировки неспецифического связывания.

8. Инкубация с первичными антителами (разведение см. в табл.1) 60 мин.

9. Промывка в трех сменах PBS (по 5 мин.).

10. Инкубация с вторичными антителами, конъюгированными с флуорохромом Alexa Fluor 567 (1:1000, Abcam) 30 мин при комнатной температуре, в темноте (красное свечение), либо с флуорохромом Alexa Fluor 488 (1:1000, Abcam) 30 мин при комнатной температуре, в темноте (зеленое свечение).

11. Промывка в трех сменах PBS (по 5мин.).

12. Докрашивание ядер клеток Hoechst 33258 (Sigma, США) в течение 1 мин (синее свечение).

13. Промывка в PBS 5 мин.

14. Готовые препараты заключали под покровные стекла в монтирующую среду Dako Fluorescent Mounting Medium (Dako, США).

Морфометрические исследования и компьютерный анализ микроскопических

изображений

Для оценки результатов иммуноцитохимического окрашивания проводили морфометрическое исследование с использованием системы компьютерного анализа микроскопических изображений, состоящей из микроскопа Olympus BX40, цифровой камеры Olympus, персонального компьютера на базе Intel Pentium 5 и программного обеспечения «Vidеotest Morphology 5.2». В каждом случае анализировали 5 полей зрения при х200.

Проводилось измерение площади экспрессии. Площадь экспрессии рассчитывалась как отношение площади, занимаемой иммунопозитивными клетками, к общей площади клеток в поле зрения и выражалась в процентах для маркеров с цитоплазматическим окрашиванием и как отношение площади, занимаемой иммунопозитивными ядрами к общей площади ядер в поле зрения для маркеров с ядерной экспрессией.