Биотехнологические методы интенсификации воспроизводства маточного стада в мясном скотоводстве тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 06.02.06, доктор ветеринарных наук Байтлесов, Ербулат Упиевич

• Байтлесов, Ербулат Упиевич
• доктор ветеринарных наук
• 2011

Оглавление диссертации доктор ветеринарных наук Байтлесов, Ербулат Упиевич

ГЛАВА 1. ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 2. АНАЛИЗ ЛИТЕРАТУРЫ И ОБОСНОВАНИЕ

ВЫБРАННОГО НАУЧНОГО ИССЛЕДОВАНИЯ

Раздел 2.1. Регуляторные механизмы овариальной функции у животных.

Раздел 2.2. Биорегуляторы репродуктивной функции животных.

Раздел 2.3. Механизмы регуляции репродуктивной функции животных.

Раздел 2.4. Трансплантация эмбрионов крупного рогатого скота и перспективы ее применения в скотоводстве.

Раздел 2.5. Биофизические приемы регуляции репродуктивной функции животных.

ГЛАВА 3. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

3.1. Материал и условия проведения опытов

3.2. Методика- исследований гормональной регуляции половой функции животных

3.3. Методика исследований по трансплантации эмбрионов.

3.4. Методика изучения влияния биофизических средств на воспроизводительную функцию животных.:.

ГЛАВА 4: РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.

Раздел 4.1. Биотехнологические приемы управления воспроизвдства маточного стада в мясном скотоводстве.

Раздел 4.2. Применение метода трансплантации эмбрионов в мясном скотоводстве.

4.2.1.Характеристика жизнеспособности эмбрионов в зависимости от физиологического статуса коров

4.2.2. Влияние скорости охлаждения и оттаивания на жизнеспособность и приживляемость эмбрионов

4.2.3. Биологические факторы, влияющие на жизнеспособность эмбрионов при замораживании и оттаивании

4.2.4 Результаты нехирургической пересадки эмбрионов с целью получения двойнёвых отелов

Раздел 4.3. Изучение влияния электромагнитного излучения крайне высокой частоты мм-диапазона на воспроизводительную функцию животных.

4.3.1. Влияние ЭМИ КВЧ воздействия аппаратом «Орбита» на организм животных

4.3.2. Влияние электромагнитного излучения крайне высокой частоты мм-диапазона на поведение эритроцитарных мембран и морфологический состав крови

4.3.3. Влияние ЭМИ КВЧ воздействия - аппаратом «Орбита» на метаболический профиль крови

4.3.4. Уровень половых гормонов при ЭМИ КВЧ воздействии аппаратом «Орбита.».;.

4.3.5. Изучение влияния электромагнитного излучения на становление репродуктивной функции коров в послеродовой период

413-6. Сравнительное изучение оплодотворяемости коров с использованием электромагнитного воздействия аппаратом; «Орбита» на пояснично-крестцовую рефлексогенную зону при искусственном осеменении коров . 174 Раздел 4.4. Изучение влияния магнитно-инфракрасно-лазерного излучения на; воспроизводительную функцию животных

4.4.1. Влияние низкоинтенсивного магнитно-инфрокрасно-лазерного воздейтсвия аппаратом «РИКТА MB» на организм животных.

4.4.2. Воздействие низкоинтенсивного магнитно-инфрокрасно-лазерного излучения на морфобиохимический состав крови

4.4.3. Уровень половых гормонов при воздействии низкоинтенсивным магнитно-инфрокрасно-лазерным излучением.

4.4.4. Сравнительное изучение оплодотворяемости коров с использованием низкоинтенсивного магнитно-инфрокрасно-лазерного излучения при искусственном осеменении коров

Раздел 4.5. Изучение влияния динамической электронейростимуляции на воспроизводительную функцию животных

4.5.1. Влияние динамической электронейростимуляции аппаратом «ЗооДиаДЭНС» на воспроизводительную функцию животных.

4.5.2. Влияние динамической электронейростимуляции на морфобиохимический состав крови

4.5.3. Уровень половых гормонов при воздействии динамической электронейростимуляции

4.5.4. Изучение влияния динамической электронейростимуляции на становление репродуктивной функции коров в послеродовой период

4.5.5. Применение динамической электронейростимуляции при различных способах осеменения коров

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Биотехнологические методы интенсификации воспроизводства маточного стада в мясном скотоводстве»

ГЛАВА 1. ВВЕДЕНИЕ 1.1 Актуальность темы. В программах биотехнологической коррекции репродуктивной: функции у животных выделяют три' физиологических периода: дородовой, послеродовой, раздоя и осеменения;

В дородовый период биотехнический контроль направлен; на нормализацию иммунного статуса и метаболического профиля; в послеродовой период - на ускорение подготовки органов репродуктивной системы к очередному циклу воспроизведения путем инициации циклической активности яичников. В период раздоя и осеменения биотехнический контроль играет роль устранителя дисфункции яичников, коррекции сроков осеменения и повышениям оплодотворяемости. Эти мероприятия базируются на систематическом клинико-гинекологическом обследовании «проблемных» коров; для обнаружения патологии и идентификации дисфункционального состояния яичников, что обеспечивает, целесообразное применение биотехнических средств.

Биотехнология воспроизводства;, является? эффективным инструментом селекции. Она,охватывает все этапы воспроизводства животных: : от отёла, до отёла, включая в себя подготовку коров к осеменению; и отёлу, учёт приплода, стимуляцию половой функции^ процесс осеменения; пересадки эмбрионов^ охрану стельности, гинекологическое обследование, борьбу с бесплодием и другие [5, 164].

Реализация данной программы' на-; основе имеющегося уровня знаний прогнозирует достижение оплодотворяемости 80% коров в первые 60 дней после отела, равномерное распределение отелов в течение года, получение не менее 90 телят на 100 голов коров, снижение в 3.5 раз,выбраковки из-за бесплодия [8,46, 167]:, Тем не менее, реализация достижений в области биотехнологии воспроизводства встречает затруднение не только в условиях практического скотоводства, но и на предприятиях сферы научно-исследовательских институтов [47,, 165]. Широко известные методы гормональной регуляции половой функции зачастую ориентированы на проведение обработок животных без учета функционального исходного состояния организма, определяемого конкретными факторами окружающей среды. Ряд исследователей находят такой подход малоэффективным. Необходимо принимать во внимание, что многие схемы и режимы применения биотехнических регуляторов половой функции разработаны в странах с высокоразвитым скотоводством и адаптированы для применения на фермах предприятий европейского уровня. Доказывают,, что механический перенос их в условия хозяйств Российской Федерации не всегда может быть оправдан [48,49].

Мощным средством интенсификации воспроизводства служит метод трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота, основным назначением которого является« генетическое улучшение животных. Трансплантация эмбрионов используется для интенсивного получения потомства от ценных в генетическом отношении самок. Большие преимущества метод даёт для импорта и экспорта сельскохозяйственных животных. Трансплантация эмбрионов, в; ряде случаев, оказывается более эффективной, чем перевозка спермы. Эмбрионы можно хранить при определённых условиях in vitro от 4 до 48 часов. Разработанный метод криоконсервации эмбрионов даёт возможность продлить «хранение генов» практически неограниченно, что обеспечивает реализацию долгосрочных генетических программ благодаря воспроизводству нужного генофонда в любое время. Получение двоен от каждой самки, с помощью метода трансплантации, открывает широкие возможности для увеличения продуктивности и генетических исследований.

Выявление нежелательных рецессивных генов при трансплантации становится более доступным, и не будет требовать большого времени. Всё это приведёт к возможности элиминации нежелательных генов из популяции сельскохозяйственных животных. На стадии внедрения в практику такие важные приёмы, как определение пола эмбрионов до их трансплантации, т.е. на стадии морулы на основе хромосомного анализа и. выявления H-Y антигена специфическими' антителами.

Разрабатываются методы культивирования ооцитов вне организма и их последующего оплодотворения in vitro в яйцеводе других самок того же самого или другого вида. Особые возможности открываются для получения клонов животных методами генной инженерии и Т-ядер.

Таким образом, эти и другие известные достижения в области трансплантации эмбрионов уже сейчас превзошли ожидаемые эффекты, как в теоретическом, так и в практическом смысле [50].

Направленная регуляция генеративной функции яичников, в т.ч. и как элемент метода трансплантации, на основе применения гормональных средств не дает на практике прогнозируемой эффективности из-за широкого распространения у коров в послеродовой период и период лактации эндометритов. До 70. 80% коров переболевают послеродовыми эндометритами [52]. В этой связи, применение средств локального воздействия на матку, рассматривают как неотъемлемый элемент биотехнических мероприятий.

Широко практикуемые в ветеринарии методики применения антимикробных препаратов, в т.ч. антибиотиков, для проведения биотехнических мероприятий не всегда приемлемы, например, утероинфузии растворов антибиотиков и других антимикробных препаратов в ранний послеродовой* период. Применение большинства антимикробных препаратов на лактирующих коровах влечет за собой экологическую нагрузку на животноводческую пищевую продукцию. Антибиотикотерапия и химиотерапия, используемые при традиционном лечении, экологически небезопасны. При этом ограничивается использование мяса и молока в период лечения и после него. Присутствие ингибиторов в молоке приводит к большим материальным потерям на предприятиях перерабатывающей промышленности вследствие ухудшения его качества, выбраковки сборного молока, потерь при производстве кисломолочной продукции (сыров, творога и т.д.), к снижению сортности молока и, продуктов его переработки. Если сложить перечисленные убытки и ущерб от временного недополучения продукции, расходов на медикаментозные препараты при традиционных методах лечения, то получается значительная сумма потерь [53]. Это диктует необходимость поиска новых экологически безопасных средств [54] .Приемлемое решение этих проблем в животноводстве — применение низкоэнергетического магнитно-инфракрасно-лазерного, электромагнитного излучения и динамической нейроэлектростимуляции. В 90-х годах лазерная техника стала применяться в животноводстве. Существует множество модификаций лазерной аппаратуры, как отечественного, так и зарубежного производства, начиная от терапевтических лазеров для облучения биологически активных точек на теле больных, до хирургических аппаратов, с помощью которых можно коагулировать ткани.

Лазерные терапевтические комплексы «Зорька» и электролазер «Ключ», разработанные в НПО «Петролазер», а также аппараты для проведения квантовой профилактики и терапии, производимые другими фирмами (РИКТА-МВ), (Орбита), (ЗооДиаДЭНС) открывают новые перспективы [55].

Исследования последних лет показали, что при' современных технологиях эксплуатации коров, при« значительно возросшей'их генетически запрограммированной молочной продуктивности, происходит увеличение случаев эмбриональных потерь. Установлено, что от 7,0 до 38,0% потерь стельностей происходит между 28.98-и днями эмбрионального развития [58,59,60,61,62,63].

Вместе с тем, наибольшее число эмбриональных потерь происходит спустя 6.7 дней после осеменения. В этой связи большой объём исследований посвящают изучению причин ранней эмбриональной смертности, происходящей, перед периодом материнского распознавания беременности и несколько меньше современных работ рассматривают, проблему поздней эмбриональной и ранней фетальной гибели. Во многих исследованиях акцентировали внимание на эмбриональной смертности у повторно осеменённых коров; исследованы и описаны потенциальные факторы и возможные причины ранней эмбриональной смертности у субфертильных мясных коров. Целый ряд учёных приходит к выводу, что для выполнения программ по воспроизводству маточного стада главное внимание должно быть сфокусировано на решении задач по проблемам ранней эмбриональной смертности [64,65]. В этом отношении ультрасонография, как новый метод исследований заслуживает самого пристального внимания [66].

Известно, что продуктивные качества животного, в т.ч. и признаки воспроизводительной способности являются результатом взаимодействия генотипа и условий среды. Поскольку наследуется не готовый признак, а уровень реагирования, то проявление хозяйственно-полезных признаков обусловливается в значительной мере окружающей средой, в которой выращивают и содержат животных [67]. Это обстоятельство определяет основополагающий методологический принцип физиологии - неразрывное единство организма и внешней среды.

Следовательно, для повышения! эффективности биотехнологических мероприятий по регуляции репродуктивной функции необходим постоянный учёт состояния воспроизводительной активности маточного стада*.

Установлено, что на каждый период развития отрасли мясного скотоводства, репродуктивный статус и характер причин его снижения не одинаковы. Исследования в этом направлении всегда актуальны и являются первоочередными, т.к. в противном случае разработка и планирование концептуально направленной и физиологически обоснованной работы по оптимизации репродуктивной активности маточного стада не представляется возможной [68]. Для мясного скотоводства являются актуальными исследования, которые направлены одновременно, как на совершенствование норм кормления, содержания и эксплуатации коров, так и на совершенствование воздействий биологически активными веществами, гормональными регуляторами и биофизическими методами воздействия с целью профилактики и нормализации нарушений обменных процессов и репродуктивной функции.

Причём, особую актуальность приобретают вопросы разработки и производства новых комплексных препаратов, биотехнических средств и методик их применения в послеродовой период при параллельном проведении исследований эндокринологии нормы и патологии воспроизводительного статуса, а также изучение влияния факторов внешней среды на получаемые в ходе исследований показатели.

Следует констатировать, что до настоящего времени, несмотря на многочисленные исследования, наука не дает всеобъемлющих ответов на вопросы о нарушениях репродуктивной функции. Лишь в комплексе с исследованиями этих факторов возможно основательное изучение механизмов такого сложного биологического явления как бесплодие, разработка методов, его устранения, их физиологическое обоснование и практическая реализация1 полученных знаний через повышение эффективности традиционного метода воспроизводства — искусственного осеменения и нового биотехнического метода — трансплантации эмбрионов.

Дальнейшее усовершенствование существующих и разработка новых теоретических и практических подходов к решению < проблемы интенсификации воспроизводства животных, применения высокоэффективных биологически активных препаратов и биотехнических методов позволит достичь необходимых результатов по восстановлению количества и качественного состава маточного стада мясных коров. 1.2 Цель и задачи исследования. Изучить эндокринные механизмы регуляции полового цикла и отработать схемы применения гормональных препаратов для стимуляции фолликулогенеза, трансплантации эмбрионов, а также разработать биотехнические методы повышения воспроизводства маточного стада крупного рогатого скота в мясном скотоводстве.

При этом были поставлены и решены следующие задачи:

- изучить эндокринные аспекты, лежащие в основе биотехнических методов воспроизводства маточного стада в мясном скотоводстве;

- оценить, с учётом этиологии1 и патогенеза, эффективность методов нормализации фолликулогенеза при нарушениях функции яичников у коров;

-определить биотехнологические параметры получения, криоконсервации, хранения, размораживания и трансплантации эмбрионов у мясных коров; изучить эффективность методов применения биофизических воздействий для нормализации процессов в эндометрии при проведении биотехнологических мероприятий;

- определить влияние низкоинтенсивного магнитно-инфракрасно -лазерного и электромагнитного излучения, динамической электронейростимуляции на физиологический, иммунобиологический) и гормональный статус организма коров;

- изучить возможности и целесообразность направленной стимуляции возобновления овариальной цикличности у коров в послеотёльный период с использованием низкоинтенсивного магнитно-инфракрасно-лазерного и электромагнитного излучения и динамической электронейростимуляции. 1

1.3. Научная новизна:

- дана характеристика воспроизводительного1 статуса поголовья мясных коров ряда сельхозпредприятий в условиях различных регионов РФ, а также Республики Казахстан;

- определены эндокринные профили у коров при различном функциональном состоянии яичников на протяжении спонтанного и индуцированного полового цикла, а так же эндокринный статус при гипофункции яичников;

- доказаны с применением ультрасонографии морфо-функциональные предпосылки, определяющие эффективность воздействий гормональными препаратами при использовании биотехнических методов воспроизводства проблемных коров на основе детальной дифференциации нарушений половой функции;

- определена^ методическая основа устранения различных форм нарушений фолликулогенеза и; исследованы биотехнологические параметры; получения, криоконсервации, хранения;, размораживания и трансплантации эмбрионов мясных коров; - обоснована необходимость комплексного подхода к методам управления репродуктивной функцией коров при её нарушениях путём одновременного воздействия гормональными регуляторами' и методами квантовых излучений (аппараты «Орбита», «РИКТА МВ» и «ЗооДиаДЭНС») для интенсификации воспроизводства маточного стада в мясном скотоводстве;

- выявлены параметры; биохимических показателей' крови после применения-, электромагнитного излучения;; крайне высоких частот мм-диапазона, магнитно-инфракрасно-лазерного излучения! и динамической электронейростимуляции которые подтверждают безопасность и; позитивные биологические: свойства квантовых методов и, таким образом, физиологически обосновано его; применение как элемента биотехнологии регуляции репродуктивной функции.

1.4. Теоретическая ^практическая значимость работы:

- определены факторы, лежащие в основе эффективного применения биорегуляторов с целью интенсификации репродуктивной активности мясных коров;

- выявлены параметры получения, криоконсервации и трансплантации эмбрионов у мясных коров в усовиях резко-континетального климата Западного региона Республики Казахстан;

- обоснована необходимость использования электромагнитного излучения крайне' высоких частот мм-диапазона, низкоинтенсивного магнитно-инфракрасно-лазерного излучения, динамической электронейростимуляции для коррекции репродуктивной функции;., как элемента биотехнологии воспроизводства, в т.ч. и при активизации овариальнойь функции* в послеродовой период, что значительно повышает эффективность биотехнологии воспроизводства;

- внедрены методы и пути снижения эмбриональных потерь у мясного* скота.

Внедрение в производство полученных материалов исследований снижают стоимость и значительно повышают экономическую эффективность биотехнических мероприятий при ведении мясного скотоводства Республики Казахстан. Достигаемое при этом снижение уровня выбраковки высокопродуктивных коров вследствие потери плодовитости и интенсификация репродуктивной активности, в свою очередь, значительно ускоряют накопление и реализацию ценного селекционно-генетического потенциала коров мясных пород.

Материалы диссертации нашли применение при чтении лекций и проведении практических занятий в ФГОУ ВПО «Саратовский ГА У им. Н.И. Вавилова», РГП «Западно-Казахстанский аграрно-технический университет им. Жангир хана», ЗКИТУ «Западно-Казахстанский инженерно?. -гуманитарный университет».

1.5. Апробация и реализация результатов исследований; Результаты исследований, отраженные в>;диссертации внедрены в племенных хозяйствах Западно-Казахстанской области (ТОО Племзавод «Чапаевский», ТОО «Изденис», К/Х «Шунайбекова»), а также племзаводе «Сычевский», КФХ «Новоузенский» Российской;Федерации.

Основные результаты диссертационной работы доложены и одобрены на: ежегодных научно-практических конференциях профессорско-преподавательского состава и аспирантов РГП «Западно-Казахстанский аграрно-технический университет им. Жангир хана» (г. Уральск, 1991-2009 гг.) ФГОУ ВПО «Саратовский ГАУ» (г. Саратов, 2004-2009 гг.); Российской научно-практической конференции: «Современные проблемы ветеринарной медицины, мелких домашних животных» (Саратов, 2007; 2008 гг.); межрегиональной научной конференции молодых ученых и специалистов системы АПК Приволжского федерального округа (Саратов, 2005); XIII Московском международном ветеринарном конгрессе (Москва, 2005-2009 гг.).

1.6. Публикации. По теме диссертации опубликовано 57 работ, а также 6 патентов, в которых отражены основные научные положения. Общий объем публикаций 21,8 печатных листа, из которых 16,3 п.л. принадлежат лично соискателю, в том числе 14 опубликованы в ведущих рецензируемых научных журналах и изданиях, рекомендованных ВАК РФ.

F ЛАВА 2. АНАЛИЗ ЛИТЕРАТУРЫ И ОБОСНОВАНИЕ ВЫБРАННОГО НАУЧНОГО ИССЛЕДОВАНИЯ Раздел 2.1. Регуляторные механизмы овариальной функции у животных

Фолликуло-, овогенетические и эндокринные процессы в яичниках на протяжении половой зрелости самок претерпевают изменения, что находит проявление в половом цикле [4, 12, 38, 166, 211]. Начало полового цикла соответствует дню охоты, обозначаемому нулевым днем цикла. На протяжении цикла яичник имеет последовательный функциональный ритм комплекса явлений: волнообразное развитие и рост популяции антральных фолликулов — созревание доминирующего фолликула последней волны роста популяции — овуляция — образование и развитие желтого тела [73, 92, 164, 182, 119]. В процессе роста фолликулы популяции постоянно изменяют чувствительность к гонадотропным гормонам. Степень чувствительности i каждого фолликула определяется вариациями концентраций гонадотропных рецепторов в клетках их гранулезы [66, 101. 146, 185]. В свою' очередь, концентрация прогестерона, 17-Р-эстрадиола и тестостерона в фолликулярной жидкости, антральных фолликулов зависит от их размеров, приходящихся на каждый конкретный период полового•> цикла [32, 92, 108, 155].

Параллельно этим явлениям в эндометрии функционально и морфологически чередуются пролиферативная и секреторная фазы. При учете поведения самок, как реакции на комплекс внутриовариальных процессов, выделяют эструс, в середине которого происходит овуляция, эструсу предшествует окончание проэструса [77, 95, 146, 189]. После завершения овуляторного процесса и окончания эструса следует метэструс и начало диэструса, продолжительность которого соответствует периоду функциональной активности жёлтого тела [6, 7, 8, 71, 197].

Рост популяции антральных фолликулов на протяжении полового цикла происходит волнообразно. Возможны одна, две, три, либо четыре волны роста популяции фолликулов, каждая из которых сопровождается развитием доминантного фолликула. г 2 со о 0

-ео. и

1 О.

Статическая фаза

Овуляция

• •

Фаза роста • •

• •

• V

1А О о о о

Фаза регрессии о * о „о о о" о о о ° ° о о ° 00 о о о о о О

10

12

14

16

18 20 О

• Первая волна О Вторая волна

Половой ЦИКЛ, ДН.

Рис. 1. Развитие доминантного фолликула при двухволновом росте популяции фолликулов (по О. ОтЛег е1 а1., 12)

У коров с двухволновым ростом популяции продолжительность полового цикла равна в среднем 20 дням. Созревание фолликулов первой волны начинается в день 0 (день овуляции), второй - на 10-й день цикла (рис.1).

Первые клинически выраженные признаки регрессии желтого тела наблюдают на 8. 12 день цикла, в то время как регрессия продолжается до 16,5 дней [46, 69, 91, 153, 197]. У коров с трехволновым ростом популяции продолжительность полового цикла равна в среднем 23 дня, созревание фолликулов первой волны начинается на 0,5 день, второй и третьей — на 9-й и 16-й дни цикла, соответственно. У коров при трехволновом росте популяции первые признаки регрессии желтого тела можно наблюдать на 10.14 день, а в целом развитие и регрессия могут продолжаться до 19,2 дней. Считают, что возникновение третьей волны роста и созревания фолликулов связано с увеличенной продолжительностью лютеальной фазы, причем параллельно лютеолизису доминантный фолликул трансформируется в овуляторный фолликул [11, 197, 208, 209]. Морфо-функциональные закономерности при одно- и четырёхволновом росте малоизучены. Фолликулярный рост последней волны, завершающейся овуляцией фолликула, отмечается на поздней лютеальной фазе цикла. Доминантные фолликулы предшествующих волн на соответствующих стадиях роста подвергаются регрессии и атрезии [8, 139, 181,204].

Растущие под комбинированным воздействием ФСГ и ЛГ фолликулы начинают выделять эстрогены, уровень концентрации которых достигает максимума незадолго до овуляции, непосредственно стимулируемой пиковой концентрацией ЛГ. Временные и количественные параметры пика ЛГ являются главным явлением регуляции функциональной деятельности яичника, т.к. в случае их отклонения от нормы происходит нарушение овуляторного процесса в виде преждевременной или поздней овуляции либо ее отсутствием с последующим перерождением неовулировавшего фолликула. При преждевременной или поздней овуляции происходит выход либо незрелой, либо персистентной яйцеклетки, что исключает возможность оплодотворения и развития зиготы [25, 67, 86,166].

Данные о сроках наступления пубертаты и точно «отрегулированного» чередования половых циклов у телок противоречивы. При этом определенное значение имеет порода животных. У европейских пород скота в возрасте 18.20 и более мес. до 30-40% телок могут оставаться неполовозрелыми, хотя у части телок половые циклы с правильным чередованием устанавливаются с 9. 10 месячного возраста [45, 81, 176, 159]. Тем не менее, принято считать, что средний возраст наступления пубертаты у телок равен 300 дням при достижении живой массы 300 кг. В этих случаях фолликулярную активность регистрируют за 20.40 дней до начала первой овуляции, причем разницы между длительностью первого и второго цикла не наблюдают [75, 161, 195].

Кратко изложенные в общих чертах сведения о механизме развития и временных параметрах полового цикла и его отдельных стадий имеют исключительное значение для технологий его направленной регуляции. Это обусловлено тем, что целесообразная эффективность воздействий гормональными препаратами возможна только на определенных стадиях цикла. При этом данные о продолжительности полового цикла коров весьма противоречивы. Данные отечественной и зарубежной литературы, приведённые в монографии B.C. Шипилова [206] показывают, что половой цикл у коров и телок длится в пределах 14.28 дней. По данным ряда зарубежных специалистов [314, 321, 326]. диапазон колебаний длительности полового цикла - 16.28 дней длится у 5% коров 16 и менее дней, у 60% -17.28 и у 35% — 29 и более дней; [107] утверждает, что у 7,6% он продолжается 27 дней и менее, у 26% - 8-24 дня. У 30% коров половой цикл либо короче, либо продолжительнее диапазона 17.25 дней [58, 148, 183]. Кроме того, для конкретного животного продолжительность цикла -величина непостоянная и может широко- варьировать. Минимальная вариабельность характерна для возраста коровы между 3.5 лактациями в-период оптимума воспроизводительного статуса; когда воспроизводительная функция наиболее «точно отрегулирована». Увеличение степени вариабельности наиболее выражено у молодых и старых животных [156, 200].

Таким образом, фолликулогенез - это постоянно продолжающийся процесс на протяжении продуктивной жизни коровы, который происходит непрерывно до тех пор, пока не истощится запас примордиальных фолликулов. У крупного рогатого скота менее чем 1,0% из примерно 100000 фолликулов, представленных на момент половозрелости, развиваются до полного созревания и овуляции. На протяжении полового цикла в большинстве случаев отмечаются две или три волны роста фолликулов.

Фолликулярная волна начинается с выделения группы (2.6 шт.) антральных фолликулов диаметром 2.5 мм. В течение нескольких последующих дней один из фолликулов этой группы более всех других ускоряет свой рост и становится доминантным. Остальные фолликулы подвергаются атрезии. При наличии достаточного количества рецепторов в клетках теки доминантного фолликула последней волны роста популяции, для восприятия повышенных концентраций ЛГ происходит овуляция. Фолликул, ещё не достигший более 20 мм в диаметре и не имеющий достаточного количества рецепторов для восприятия ЛГ, подвергается атрезии на фоне повышенных концентраций ФСГ и появления новой фолликулярной волны.

Если доминантный фолликул, достигший более 20 мм в диаметре не овулирует, а продолжает расти, то происходит его трансформация в фолликулярную кисту. В среднем, это явление происходит в 10. 15% случаев. Иногда размер такого фолликула может не превышать 20 мм.

Данные относительно вариабельности продолжительности фолликулярной и лютеальной фаз как у коров, так и телок, указывают на более стабильный характер последней. Стабильность продолжительности лютеальной фазы связывают с ее важнейшей ролью в подготовке организма к предстоящей стельности [98,138,187].

Однако на механизм регуляции стабильной продолжительности лютеальной фазы, которым можно было бы полностью объяснить эволюцию желтого тела, единой точки зрения нет. Регуляция, внутриовариальных процессов в значительной степени! автономна, и, тем не менее, нормальная функциональная- деятельность г яичника невозможна без определенного влияния гонадотропных гормонов из-за необходимой степени гипофизарной поддержки функционирования желтого тела. Общепризнанно, что для реализации лютеотропной функции необходимо обязательное присутствие ЛГ, тогда как неясно, способен ли, так называемый, чистый ЛГ играть лютеотропную роль. Установлено, что в эксперименте для этой функции необходимо1 его постоянное введение в составе с пролонгатором (адъювант Фрейда) [191,202].

Цикличность функции яичника регулируется выделением гонад отропинов из гипофиза, деятельность которого осуществляется высшими нервными стимулами в рамках системы положительной обратной связи с гипоталамусом (рис.2).

Основную роль здесь играет реакция гипофиза на гонадолиберин через посредство соотношения концентраций циркулирующих в крови стероидов, что рассматривают как алгебраическую сумму положительных и отрицательных обратных связей, с одной стороны, прогестагенов, с другой -эстрогенов [207]. положительная обратная связь - отрицательная обратная связь

Рис. 2. Механизм «плюс-минус» взаимодействия регуляции полового цикла коров с

На протяжении цикла изменения?функционального состояния яичников отражаются определенными изменениями гормонального статуса. Определяя функциональное' состояние яичников по гормональному статусу, можно эффективно управлять процессами'воспроизведения [207, 221].

В соответствующие периоды цикла имеют место отчетливые различия в изменениях соотношений концентраций ФСГ, ЛГ, прогестерона и эстрадиола. Эта разница может служить оценкой таких важных процессов, как лютеолизис, развитие, созревание и овуляция фолликула, образование, развитие и регрессия желтого тела. Учитывая, что воздействие гормональными препаратами многократно количественно и качественно изменяет спонтанно протекающий процесс [299, 300], для гормональных обработок следует использовать животных, у которых половой процесс нормально функционирует [301].

Ключевым моментом, определяющим успех биотехнических мероприятий, является точная- характеристика функционального* состояния желтого тела. Морфологическим критерием желтого, тела, предполагающим возможность результативного начала«, обработки' с целью- вызвать охоту, является5его размер ( 1,0 х 1,0 см) в>середине полового цикла, определяемый. на1, практике методом ректальной* пальпации*. Однако! оценка воспроизводительного статуса коров- по морфологическому состоянию желтого тела недостаточно точна. Правильный' диагноз проэструса, эструса, метэструса и диэструса составляет 54,2; 60,0; 71,4 и 89,8%, соответственно; и в целом после одной ректальной пальпации не превышает 80% [302, 314].

В этом отношении достаточно точен метод анализа изменений концентрации прогестерона в крови на протяжении полового цикла, который в значительной степени позволяет корректировать ошибки, допускаемые при ректальной диагностике. Функциональное состояние яичников у коров после отела оценивают по профилю прогестерона, который определяют, начиная с Ю дня после отела до осеменения с 5-дневными интервалами [139; 158].

Находят прямую связь между концентрацией прогестерона в крови и способностью коров положительно реагировать на гормональные обработки. Установлена взаимосвязь между концентрацией прогестерона, приходящейся на день начала обработок, проявлением индуцированной охоты и оплодотворяемостью после осеменения [303].

Таким образом, овуляция не просто центральное явление в периодической функциональной деятельности, а играет центральную роль в рамках полового цикла в качестве механизма, дающего пригодную для оплодотворения яйцеклетку и обусловливающего гормональную ситуацию, соответствующую плодотворному осеменению и подготавливающую организм к беременности.

Рис. 3. Фазы морфо-функциональных изменений репродуктивной функции

Учитывая непременное выполнение условия правильного понимания механизмов естественной регуляции репродуктивной функции, для успеха при её направленной корректировке, а также при постановке экспериментов и анализе результатов, получаемых в ходе их проведения, следует учитывать данные литературы поэтому вопросу [292].

Данные относительно вариабельности продолжительности фолликулярной и лютеальной фаз, как у коров, так и телок, указывают на более стабильный характер последней.

Временные и количественные параметры ЛГ являются ключевым явлением регуляции функциональной деятельности яичника, следовательно, их изменение за пределы физиологической нормы исключает возможность нормальной оплодотворяемости яйцеклетки и развития зиготы [215, 316].

Приведенные обобщающие соображения по овогенетическому циклу приводят к выводу, что эффективность гормональной регуляции,, как элемента технологии, нормализации репродуктивной активности, в. первую очередь,, будет зависеть от генетической предрасположенности, конкретное выражение которой, проявляется в биологической-полноценности и размерах популяций антральных фолликулов на протяжении цикла.

Следует учитывать, что эти размеры колеблются как у разных животных, так, и на,протяжении жизни у одного и того же животного. Это и другие положения с учетом- того, что в комплекс обработок с целью регуляции цикла включают препараты гонадолиберина, блокирующего возможные негативные изменения параметров пика ЛГ, позволяют считать современные дозировки и режимы применения биорегуляторов вполне приемлемыми для направленного корректирования воспроизводительной функции.

Раздел 2.2. Биорегуляторы репродуктивной функции животных

Реализация теории М.М. Завадовского [106, 107, 108] в практике животноводства стала возможной благодаря трём наиболее важным обстоятельствам. Первое - американскими исследователями в начале 30-х гг. прошлого столетия было обнаружено наличие в сыворотке, полученной из крови жеребых кобыл, гонадотропинов, способных регулировать рост, созревание и овуляцию фолликулов [238]; второе - открытие в этот же период простагландинов [222] и третье - открытие [311] рилизинг-факторов. В. сравнительно короткий исторический период было освоено промышленное производство и выпуск гонадотропных препаратов, синтетических простагландинов и рилизинг-факторов. С тех пор научными коллективами проведены многочисленные исследования биорегуляторов воспроизводства и накоплен большой объем литературы по регуляции репродуктивной функции крупного рогатого скота на основе их применения. Хотя спектр мнений о степени эффективности биорегуляторов довольно широк и противоречив [47], многолетней практикой подтверждена их безвредность [141].

Известно несколько типов гонадотропных препаратов, из которых наиболее широкое применение в практике скотоводства нашли 3 типа гонадотропинов: сывороточные, гипофизарные и плацентарные. В перечне гонадотропинов (ГСЖК, ФСГ, ХГЧ), используемых для стимуляции фолликулярного развития с целью индуцирования охоты и овуляции, ГСЖК является наиболее популярным [246].

ГСЖК, или гонадотропин из сыворотки крови- жеребых кобыл со сроком жеребости 45-100 дней, выпускают в двух формах: нативная неочищенная сыворотка жеребых кобыл (СЖК) и- очищенный лиофилизированный' препарат. При сравнительной оценке эффективности двух рассматриваемых гонадотропных препаратов, особо отмечают высокую вариабельность реакции яичников на введение нативного препарата СЖК и определенную1 вероятность возникновения анафилактической реакции. Более стабильные результаты получают при- использовании стандартных препаратов СЖК высокой степени очистки [190, 210].

Большая изменчивость реакции яичников коров на сывороточные гонадотропины связана с различной степенью зрелости фолликулов в популяции, приходящейся на момент проведения обработки и необычным гормональным фоном из-за высокой продолжительности срока полураспада препарата в организме обрабатываемых животных. Поэтому регуляция половой функции сывороточными гонадотропинами может привести к нежелательным последствиям [99].

Применяемые в биотехнологии воспроизводства гипофизарные гонадотропины получают из гипофиза свиней. В отличие от сывороточных, они* обладают минимальным побочным действием и обеспечивают более высокую результативность в смысле эффективности [202]. Наиболее широко в отечественной практике используют следующие препараты, различающиеся по соотношению ФСГ к ЛГ: гроффолон, фоллитропин, ФСГ-п и ФСГ-супер [138].

Считают, что колеблющаяся норма соотношения ФСГ/ЛГ в различных гонадотропных препаратах является одной из причин определённой, вариабельности их эффективности. Колебания соотношения в импортных препаратах составляют от 4,4:1,0 до 0,2:1.

Для отечественных гипофизарных гонадотропинов - фоллитропин и гроффолон - характерно соотношение 2-1:1. Редко отмечается5 соотношение ФСГ/ЛГ—1000:1, например; у препарата ФСГ-супер, что связывают с очень высокой степенью очистки [195]. ?

Этот фактор лимитирует использование биотехнически^ методов не только в практическом, но и в экспериментально-теоретическом отношении, так как «расширяет пределы изменчивости высоко ■ вариабельной системы». В ряде публикаций сообщают, что высокое содержание ЛГ в гипофизарных гонадотропинах обусловливает неудовлетворительный овариальный ответ [76, 197]. Доказывают негативное влияние высокого содержания ЛГ в гонадотропных препаратах на процесс фолликулогенеза, что, в конечном счёте, приводит к преждевременным овуляциям [76, 209], нарушению цитоплазматического и ядерного созревания ооцитов [195,196] и преждевременную лютеинизацию клеток гранул ёзы [200]. Инициация перечисленных негативных процессов происходит в результате неадекватных изменений параметров пика ЛГ эндогенного происхождения [68, 69]. Все эти сведения дают основание предполагать, что высоко очищенные препараты с минимальным содержанием ЛГ будут наиболее эффективны [155]. Данное предположение подтверждают опыты, проводимые на лабораторных животных, в которых высокоочищенные гонадотропные препараты достаточно эффективно индуцировали либо moho-, либо суперовуляторный ответ, причём повышение дозы коррелировало с повышением нормы суперовуляции [146]. И в то же время другие опыты не подтвердили негативного влияния повышенных содержаний ЛГ в гонадотропине на овуляторный ответ, как у лабораторных животных, так и у коров [208, 211].

Вариабельность результатов, имеющую место в ряде случаев при работе с гипофизарными гонадотропинами, объясняют изменением эндогенного гормонального профиля, в результате которого возможен преждевременный или запоздалый пик лютеонизирующего гормона при общей секреторной недостаточности. Это приводит к задержке по времени овуляции. В силу этого при одновременно высокой концентрации эстрадиола создаются неблагоприятные условия для оплодотворения яйцеклеток [166]. Однако данную ситуацию компенсируют путем введения в режимы обработок гонадолиберинов, ЛГ либо ХГЧ' [197].

Хориогонический гонадотропин человека (ХГЧ) применяют в практике скотоводства в.виде следующих препаратов: гонадотропин хориогонический, овогест, хорулон, хориогонин.

В опытах по регуляции половой функции с введением хориогонического гонадотропина выраженного лютеолитического действия не обнаружили, в то время как твердо установили его ЛГ-подобное действие. Хорионический гонадотропин показан при кистах яичников, ановуляторных циклах, гипофункции яичников. В целом же разноречивые сообщения о результатах применения ХГЧ не позволяют до сегодняшнего дня дать четкой оценки эффективности всех предлагаемых схем обработок [202], что определяет необходимость проведения испытаний.

Простагландины были открыты в 1930 году [73] в результате обнаружения свойства семенной жидкости человека расслаблять или сокращать миометрий в зависимости, от стадии полового цикла и названы так в результате предположения, что местом их образования является простата. Затем было уточнено и доказано, что местом образования простагландина, содержащегося в сперме, является пузырьковидная железа. В 1937 году простагландины впервые выделили из семенной жидкости в чистом виде и установили их структуру [38, 39, 40]. После химического синтеза в 1966 году и выяснения физиологической роли - вызывать лютеолизис, началось углубленное и интенсивное изучение механизма их действия и возможностей применения в биологии. Оказалось, что простагландины синтезируются в клеточных мембранах почти всех органов и тканей в моменты физиологической потребности и имеют очень короткий период полураспада. По химической структуре это ненасыщенные жирные карбоновые кислоты с 20 атомами углерода, в основе которых лежит протопоидная кислота с циклопентановым ядром и двумя боковыми цепями.

В настоящее время из различных тканей организма человека и животных выделены 14 соединений, относящихся к простагландинам, объединённым в 6 классов и, согласно интернациональной номенклатуре, обозначаемых буквами латинского алфавита. Наиболее распространёнными» являются А, В; Е, Б, которые различают по строению циклопентанового ядра. Классы, в свою очередь, различают по числу связей в боковых цепях и обозначают цифрами - 1, 2, 3, а по конфигурации 9-й гидроксильной группы—а и (3.

Известно, что к 15. 17 дню полового цикла коров и тёлок в клеточных мембранах эндометральных желёз идёт интенсивное образование маточного простагландина преимущественно из арахидоновой и линолиевой кислот. После накопления до определённой степени в эндометрии, простагландин диффундирует в маточную вену, яичниковую артерию и, таким образом, благодаря локальной гуморальной связи, достигает яичника и жёлтого тела. Кроме того, доказана возможность противоточного переноса простагландина из венозных и лимфатических сосудов* в маточную артерию [74, 75, 77].

Считают, что простагландин воздействует на вазоконстрикторы артерий яичников, нарушает трофику лютеальной ткани. Кроме того, он оказывает непосредственное действие на лютеоциты - крупные (гранулёза) и мелкие (тека). Последние претерпевают старение и дегенерацию, происходит снижение числа митозов, увеличивается число клеток с пикнотическими ядрами, происходит накопление большого числа липидных капель в цитоплазме, усиливается рыхлость и васкуляризация соединительной ткани. Дегенеративные изменения отмечают и на ультраструктурном уровне.

Эстрадиол усиливает дегенеративные процессы. В итоге происходит окончательное расплавление лютеальной ткани протеолитическими ферментами лейкоцитов и её окончательное рассасывание. Определённая часть простагландина, не подвергнутая метаболическому разрушению, выводится благодаря лёгочному обмену [78], другая часть подвергается в организме метаболизму и в виде двух основным метаболитов -тригидропростановой и тригидротетрапростановой кислот выводятся с мочой [79].

Для регуляции воспроизводительной функции коров и телок - наибольший, интерес представляет Р^2а, применяемый* в скотоводстве в виде синтетических аналогов, который< намного активнее естественного Р§Б2 а, и в терапевтических дозах не обладает побочным действием*[43].

Препараты простагландина широко используют для« подготовки животных с целью проведения туровых осеменений. Доза введения препарата для взрослого животного эквивалентна 500 мкг клопростенола. Через 12 часов после введения простагландина происходит лизис желтого тела, концентрация прогестерона снижается (в среднем с 4,0 до 1,5 нг/мл). Одновременные признаки охоты наблюдаются в течение вторых - четвертых суток после обработки [49].

Общий пик реактивности генеративных структур яичников к биологически активным веществам, регулирующим фолликулогенез, приходится на середину лютеальной фазы полового цикла. Из этого следует, что данный временной отрезок полового цикла (9.12 дни) является оптимальным для стимуляции фолликулогенеза. У коров циторецепторная чувствительность яичников к препаратам простагландина а отмечается в промежутке между 6. 16 днями после овуляции, то есть при наличии функционально активного желтого тела. В другие фазы полового цикла структура лютеальной ткани к ним малочувствительна либо рефрактерна, поэтому, нет оснований рассчитывать на получение лютеолитического эффекта, а, следовательно, и эффекта, стимулирующего рост, созревание и овуляцию фолликула.

Известно, многообразие фирменных названий PgF2a: в России -С-ПГФ2а, С-ПГФ2-ТС, анипрост, суперфан, эстуфалан, клатрапростин и другие; в США - динопрост, динолитик, лютализ и др.; в Великобритании -клопростенол, эструмат; в Японии - панацелян; в Венгрии, - энзапрост; в Чехии - эстрофан, ремофан и др., и количество этих названий, растет с каждыми годом, приближаясь к 20 — ЗО синонимам - фирменным названиям каждого - препарата. Считают, что назрела необходимость принять, единые правила, наименования препаратов, например; ПГФ-2-альфа фирмы Апджон США (содержащий- динопрост и названный динолитик™ или лутализ1М, •являющийся торговой маркой, опустить; это повысило бы ответственность фирм за качество препаратов) или аналогично: ПГФ-2-альфа фирмы.Мосбио, Россия-(содержащий раствор Д-клопростенола и названный-суперфан) [80].

Использование различных препаратов простагландина в дозе 500 мкг (действующего вещества по клопростенолу), как правило, не влияет на эффективность лизиса желтого тела, синхронность проявления охоты и оплодотворяемость. Увеличение дозы или кратности обработок не дают повышения эффективности. Предпринимаются попытки улучшить лютеолитические свойства простагландинов, используя их аналоги с пролонгированным действием (прозольвин, фенпростален). И хотя период полураспада таких препаратов достигает 15 часов (у обычных препаратов — 3 часа), они не имеют выраженного преимущества [12].

В системе обратной отрицательной связи механизма регуляции половой функции гипоталамус является , определяющим органом. Нейропептид^ называемый гонадотропин - рилизинг фактором, или гонадолиберином, и целесообразно выделяемый гипотоламусом, в ответ на центростремительные импульсы, в минимальных концентрациях регулирует инкреторную активность гипофиза относительно гонадотропинов [82, 42, 83].

Экзогеннный гонадолиберин, получаемый путем синтеза, по химической природе представляет собой декапептид с молекулярной массой 1181. Он не обладает видовой специфичностью, т.к. при парэнтеральном введении способен активизировать секрецию гонадотропинов; у всех видов млекопитающих. Известные синтетические аналоги гонадолиберина обладают в несколько раз более сильным действием, чем нативный препарат.

Синтетический аналог гонадотропного рилизинг-гормона, отечественный препарат сурфагон, обладая высокой биологической, активностью, при парэнтеральном введении животным стимулирует секрецию ФСГ и ЛГ, что обеспечивает нормальное функционирование яичников и создание в организме самки необходимого .эстрогенного. фона, способствующее, в, свою очередь,, ускорению овуляции и формированию полноценного желтого тела. Данное положение, аргументируют исследования^ которыми; установлено, что уже через 20 минут после введения коровам препарата, начинается стойкое повышение концентрации ЛГ, достигающее пиковых значений ко второму часу [17, 84].

Наставление по применению сурфагона не регламентирует срок его применения по отношению к началу полового цикла. Между тем утверждают, что сурфагон, как и его зарубежные аналоги, вызывает овуляцию незрелых фолликулов с последующим формированием гипопластического желтого тела. Этим положением аргументируют целесообразность применения сурфагона для стимуляции фолликулогенеза и овуляторной функции яичников в конце предтечковой фазы, характеризующейся^ наличием предовуляторных фолликулов [85].

В связи с этим представляет актуальность изучение сравнительной эффективности влияния отечественных синтетических гонадолиберинов на оплодотворяемость коров в спонтанную и индуцированную охоту.

На восьмой день после овуляции желтое тело достигает зрелости, характеризующейся предельной толщиной зернистого слоя с вакуолизацией его клеток и одновременной инволюцией текальных клеток. Для этого периода предложено название прогестативное тело (а для желтого тела беременности — гестативное желтое тело). На этот период приходится начало его максимальной секреторной активности, что находит проявление в повышении концентрации прогестерона в крови половозрелых самок. Прогестерон образуется также плацентой и надпочечниками. Имея самостоятельное физиологическое значение, является важным промежуточным продуктом при синтезе других стероидных гормонов [87].

В основе естественных прогестагенов находится ядро прегнена с 21 атомом углерода. С количественной и функциональных точек зрения наиболее важным является.прогестерон: 4-прегнен-3,20-дион - обязательный продукт в процессе синтеза всех стероидных гормонов. Прогестерон, как и. !

4 I

17р-эстрадиол, синтезируется в яичнике из, холестерола: холестерол-прегненолон-прогестерон.' Синтез происходит под контролем двух систем: ЛГ-цАМФ и Са~ -полифосфоинозитолциклическая протеинкиназа, которые действуют различно на разные типы клеток желтого тела, причем механизм действия окончательно не выяснен. Прегненолон и прогестерон в результате гидроксилирования превращаются в андрогены, часть которых через яичниковую вену либо базальную мембрану проникают внутрь фолликула, где в гранулезных клетках под влиянием ФСГ превращаются в эстрогены.

Прогестерон действует на яичники как ингибитор овуляции: косвенно -путем блокады производства гипоталамусом Гн-Рф, и непосредственно -замедляя фолликулярный рост и разрыв зрелого фолликула. Кроме того, прогестерон определяет структурные изменения слизистой и тонус мускулатуры яйцепроводов и матки, создавая оптимальные условия для оплодотворения и начала беременности, а в комплексе с эстрогенами способствует завершению эволюции молочных желез.

В крови; прогестерон связан с сывороточными глобулинами. Имеет период полураспада 4.6 часов. Прогестерон метаболизируется в печени в препандиол, который в конъюгированном виде выделяется мочой [3, 80, 87, 89, 90]. Синтез и секреция прогестерона контролируется ЛГ гипофиза и хориогоническим гонадотропином. Его уровень в крови зависит от стадии полового цикла, а также от стадии беременности.

Синтетические прогестагены - это продукты, располагающие гормональной активностью и способные вызывать на уровне слизистой оболочки матки эффекты, похожие на эффекты естественного прогестерона. С 193 8 года, когда* получили первый прогестаген- - ангидрокси-прогестерон, создан -целый ряд соединений с прогестагенной. активностью. Производные, получаемые путем эстерификации СЩСООН радикала а-гидроксил от Сп являются основой почтт всех имеющихся?, в- наличиш прогестативных препаратов: медроксипрогестерон, . мегестрол, хлормадинон; ацетат мегестрола, метрогестон [87].

Биологическое значение препаратовшрогестагенового ряда-определяют их двумя1 противоположными свойствами:: блокировать активность фолликулогенеза и активизировать воспроизводительную функцию. Второе свойство • обусловлено тем, что после прекращения- действия; экзогенных, прогестагенов, проявляется, так. называемый; ребоундгэффект, то- есть инверсия* ответа при прекращении стимула; что характеризуется целесообразной^ оптимизацией^ выброса гипофизом гонадотропных гормонов. В рамках биотехнических . мероприятий, благодаря эффекту ребоунда, прогестагены потенцируют эффективность гонадотропных препаратов и гонадолиберинов [91, 92]. Имеющиеся препараты прогестагенового ряда (прогестерон; меленгестрол ацетат, ацетат мегестрола, амол, диамол, СЬгопо-Сеэ!, РЯШ, 81псЬо-Ма1е В) предназначены для орального или парэнтерального введения в виде инъекций, вагинальных пессариев и подкожных силиконовых имплантантов [42, 93, 94].

Основными недостатками применения! прогестагенов являются: трудоемкость, обусловленная необходимостью многократных инъекций или дачей дозированного вещества с кормом, проблематичность точных дозировок (при введении с кормом), низкая оплодотворяемость животных по причине старения яйцеклеток в персистирующих фолликулах, неудовлетворительные свойства среды во время синхронизированной течки и преждевременное поступление яйцеклеток из яйцепроводов в матку.

Раздел 2.3. Механизмы регуляции репродуктивной функции животных

Кроме прогестерона, в жёлтом теле синтезируются два полипептидных гормона: релаксин и окситоцин, а также простагландины и простациклин. Гранулёзные клетки преовуляторного фолликула вырабатывают большие количества простагландинов Е2, (ГШЕ2), Ф-2-альфа (ПГФ-2-a) [14, 27].

Hansel W., Dowd J.P. [266] выявили лютеотропическую роль простациклина (ПГ1-2)-эпопростенола или циклопростина, который в больших количествах синтезируется на ранних стадиях развития жёлтого тела при участии фермента простациклин-синтетазы. В их, опытах через 15 минут после инъекции эпопростенола в жёлтом теле значительно увеличивалась концентрация прогестерона в крови, а при инъекциях индометацина (ингибитора ПГ1-2)-укорачивался цикл жёлтого тела [42].

Релаксин является полипептидом, состоящим из 48 аминокислотных остатков, организованных в две цепи (А и В), связанных между собой дисульфидными мостиками через цистеин. Он вырабатывается в жёлтом теле, а на более поздних стадиях беременности-и в плаценте и вызывает размягчение, расслабление связочного аппарата таза, лизиз хряща лонного сращения, превращение обычного таза самки в «родовой», когда все связки таза становятся рыхлыми, их длина увеличивается на 1/3 или 1/4, т.е. он подготавливает материнский организм к родовому акту [6].

Окситоцин-октапептид, состоящий из девяти аминокислот с цистеиновыми остатками в положениях 1 и 6, связанными дисульфидным мостиком, что формирует структуру кольца и боковой цепи из остатков трёх аминокислот.

Окситоцин обнаружен в жёлтом теле овцы и человека, но физиологическое значение его в жёлтом теле до сих пор не ясно. У овец под влиянием ПГФ-2-альфа, выделяемого маткой, происходит выброс окситоцина из жёлтого тела. Аналогично при введении клопростенола (аналога ПГФ-2-альфа) секреция окситоцина в яичниках быстро повышалась, и он обнаруживался в крови, оттекающей от яичника, при этом в крови яремной вены концентрация окситоцина не повышалась, что свидетельствует об отсутствии заметной секреции его в гипофизе (рис.4).

Рис. 4. Динамика развития фолликулов на протяжении эстрального цикла

Поскольку окситоцин снижает секрецию стероидов в культуре изолированных лютеальных клеток, возможно, что он опосредует или усиливает лютеолитическое действие ПГФ-2-альфа [67].

Таким образом, жёлтое тело в яичнике является железой внутренней секреции, производящей большое количество гормонов и биологически активных веществ, преобразующих эндометрий в прегравидное состояние, создающее условия для развития зародыша и формирования плаценты.

Рассмотрим динамику развития фолликулов на протяжении нормального эстрального цикла.

В процессе фолликулогенеза и формирования яйцеклеток выделяют три периода: первый характеризуется ростом фолликулов от стадии примординальных до стадии предполостных, в которых происходит увеличение размеров ооцитов; второй — ростом фолликулов со стадии крупных преантральных до предовуляторных, когда ооцит достигает дефинитивных размеров; третий — овуляцией« фолликула и формированием 1 желтого^тела [ 100; 10 Г, 141, 224].

Растущий фолликул постоянно изменяет чувствительность к гонадотропным гормонам, которая определяется вариациями концентраций гонадотропных рецепторов в клетках гранулезы. В свою очередь, концентрация прогестерона, 17-Р-эстрадиола и тестостерона в фолликулярной жидкости антральных фолликулов зависит от их размеров и дня полового цикла [159].

Овогенетические и эндокринные процессы в яичниках на протяжении половой зрелости самок находят проявление в половом цикле, начало которого соответствует дню охоты, обозначаемому нулевым днем цикла. Яичник имеет строго последовательный циклический ритм: волнообразное развитие и рост популяции антральных фолликулов - созревание доминирующего фолликула последней волны роста популяции - овуляция -образование и развитие желтого тела [141, 208].

При этом центральным явлением периодичности половых процессов в яичниках является овуляция, которая разделяет фолликулярную и лютеальную фазы морфологических изменений. В' эндометрии этому соответствует пролиферативная и секреторная фазы. При преждевременной или поздней овуляции происходит выход либо незрелой, либо состарившейся яйцеклетки, что исключает возможность оплодотворяемости и развития зиготы [208, 225].

Сведения о механизме развития и временных параметрах полового цикла и его отдельных стадий имеют исключительное значение для технологий его направленной регуляции. Это обусловлено тем, что целесообразная эффективность воздействий гормональными препаратами возможна только на определенных стадиях цикла и в определенные сроки [117]. Данные о продолжительности полового цикла коров весьма противоречивы [148, 159, 225]. Кроме того, для конкретного животного продолжительность цикла - величина непостоянная и может варьировать в .широких пределах. Минимальная вариабельность, продолжительности цикла характерна для возраста коровы между 3.5 лактациями в период оптимума1 воспроизводительного статуса, когда воспроизводительная функция наиболее- «точно отрегулирована». Увеличение степени вариабельности- с преобладанием в сторону уменьшения наиболее выражено у старых животных [149, 159, 197].

При условии обеспечения привесов до 800 г в сутки возможно добиваться у телок швицкой породы нормальной половой цикличности в возрасте 12.14 мес. В случаях осеменения продуктивность отелившихся в раннем возрасте животных практически не отличалась от продуктивности первотелок более позднего возраста [119].

Период формирования половой функции у телок подразделяют на три стадии: 1) первичное появление половых рефлексов; 2) формирование полового цикла; 3) наступление половой зрелости.

Таким образом, появление первичных половых рефлексов опережает наступление таких, феноменов, как течка и овуляция. Половая зрелость, под . которой* понимают способность производить полноценные яйцеклетки, наступает у телок в возрасте 9:.15 мес. [13]. У алатауских телок горных районов Средней Азии средний возраст при первой овуляции - 12. 15 мсс. [25, 46].

Независимо от породы механизм полового созревания у телок сводится к следующему: в период, предшествующий половому созреванию, активизируется образование гонадотропинов гипофизом, что приводит к росту фолликулов и продукции ими эстрогенов, которые накапливаются^ в крови, тормозя продукцию гонадотропинов, что блокирует продолжение роста фолликулов: Поэтому для: этой стадии характерна систематическая персистенция фолликулов; У телок перед половым; созреванием; в течение 1.2-х месяцев обнаруживают в яичниках; тонкостенные фолликулы величиной с горошину. Однако* желтых тел: в таких, яичниках не обнаруживают. С возрастом обмен эстрогенов; нормализуется. Становится адекватной гипоталамо-гипофизарная реакция на1 эстрогены^, что приводит к оптимальной динамике секреции гонадотропинов- с преовуляторным пиком ЛГ7, предполагающим нормальную овуляцию [25].

Непременным условием« нормальной продолжительности цикла; а следовательно с и оплодотворения- и эмбриогенеза оплодотворенной яйцеклетки является активное функционирование маточных желез и других гистохимических. элементов эндометрия, равно как, и, морфологических и топографических параметров- матки. Коренным образом измененные в результате стельности и родов указанные параметры приходят к небеременному состоянию перманентно и в определенной последовательности. Структуры, обеспечивавшие прошлую1 беременность (маточные железы, покровный эпителий и эндометрий) отмирают, отторгаются и вместе с лохиями элиминируются из организма: Регенерация покровного эпителия и зарождение новых, маточных желез происходит через

3.4 недели после отела. Еще 2.3 недели требуется для того, чтобы началось их нормальное функционирование и выработка эмбриотрофа. Полное освобождение матки от микробов происходит лишь к концу 2 месяца после отела, ко времени 2-ой или 3-ей течки [30].

Фолликулярная функция яичников после отела возобновляется быстрее: первые фолликулы созревают через 3.4 недели (что инициирует течку и половое возбуждение), происходит первая овуляция. В случае осеменения плодотворные яйцеклетки погибают, т.к. не находят в матке необходимых условий для развития [139]. Это объясняет сообщения, согласно которым лишь 17,8% коров из числа осемененных в первые 30'дней после отела становятся стельными, в то время как результативность осеменений возрастает по мере отсрочки осеменения после отела- с оптимальным сроком первого осемененияна 45-60 день [166, 138].

Решение проблемы раннего плодотворного осеменения, связано с увеличением эффективности реализации генетически детерминированных репродуктивных возможностей, что* сопряжено, во-первых, с детализацией причин, вызывающих снижение оплодотворяемости, во-вторых, с выявлением возможностей" целенаправленных воздействий на эти механизмы с помощью биологически активных веществ и, таким образом, с разработкой высокоэффективной' биотехнологии интенсивного воспроизводства сельскохозяйственных животных.

Раздел 2.4. Трансплантация эмбрионов крупного рогатого скота и перспективы ее применения в скотоводстве

В мясном скотоводстве исключительное значение имеет экономически обоснованная эффективность воспроизводства поголовья маточного стада. В настоящее время; несмотря на бесспорные достижения в области репродуктивной физиологии, эффективность воспроизводства имеет неуклонную тенденцию к снижению [4, 98, 188, 213]. В этом смысле эмбриональную смертность считают главным фактором низкой репродуктивной активности поголовья, приводящим к значительным экономическим издержкам [265]. Современные методы искусственного осеменения могут оказывать негативное влияние на показатели репродуктивного статуса поголовья. Однако считают, что если эти методы выполняют правильно, то это влияние не существенно. Следовательно, для выполнения программ по воспроизводству основное внимание необходимо уделять увеличению плодотворности осеменений путём минимизации эмбриональных потерь [149, 211, 266].

При существующих методах осеменения в скотоводстве оплодотворяемость яйцеклеток коров достигает, в среднем, 87%, с колебаниями от 60 до 100%. При этих показателях лишь 45% плодотворно осеменённых (после однократного осеменения) коров приносят телят. С учётом этого, уровень стельностей, зафиксированный через три месяца после однократного осеменения, достигающий 55%, считают очень хорошим показателем [153, 267, 268, 269].

В 20-24% случаев, прерывание стельности происходит в первые 15 дней после осеменения в результате ранней эмбриональной-смертности, до наступления наивысшей' циторецепторной чувствительности жёлтого тела беременности, меньше — в<3-8% случаев, происходит поздняя эмбриональная смертность, в промежутке от 15 до 42 дня беременности в период наивысшей циторецепторной активности жёлтого тела. В фетальный период развития, т.е. после 42 дня эмбриогенеза, длящийся до рождения, потери стельности минимальны - 3-4%, преждевременные роды составляют — 1-2% [4, 156, 258].

Эмбриональная смертность обусловлена большим количеством внутренних и внешних факторов, которые можно разделить на 2 группы. К первой следует отнести факторы, негативно влияющие на процесс роста и созревания ооцитов. Произошедшие в результате этого морфо-функциональные отклонения зрелых ооцитов после оплодотворения неизбежно приводят к утрате жизнеспособности зародыша на определённом периоде эмбриогенеза [269, 270]. Доля эмбриональных потерь вследствие влияния негативных^факторов этой группы может составлять 20,5 - 50% от общего уровня, эмбриональной смертности. В этих случаях предотвращение эмбриональной смертности является проблематичной задачей и в; настоящее время практических рекомендаций и методов профилактики эмбриональных потерь, обусловленных нарушенным оогенезом, не разработано.

Актуальность исследований, направленных на изучение факторов первой группы, лежащих в основе причин эмбриональной смертности определяет следующее обстоятельство. Являясь фундаментальным разделом современной биологии, исследования по экспериментальной физиологии и патофизиологии: эмбрионального развития млекопитающих обусловлены не; только, научным, но и практическим интересом [271].

Углубление поиска в этой; области знаний предполагает развитие и внедрение результатов таких перспективных направлений сельскохозяйственной биотехнологии! как клонирование, получение трансгенных животныху ; элиминация нежелательных генов, исследований проблем- эмбриональной смертности. Изучение физиологии эмбрионального развития сопряжены с исследованиями по разработке и совершенствованию методов V криоконсервации эмбрионов, являющихся важнейшим элементом технологии эмбриотрансплантации. Актуальность, этого раздела определяет возможность значительного- упрощения межгосударственного; обмена генетическим материалом, лимитируемого' жесткими условиями экспорта и импорта животных, что снижает интенсивность селекционно-генетического прогресса в скотоводстве: Использование метода криоконсервации даёт возможность сохранять эмбрионы от выдающихся животных, а также накапливать генофонд локальных, исчезающих пород. В» исторической перспективе это может быть использовано для восстановления некоторых качеств,.неизбежно теряющихся породами в процессе интенсивной селекции. Применение данного элемента; технологии! эмбриотрансплантации позволяет решать вопросы; акклиматизации пород и получения гибридов, путём создания адаптированных популяций в регионах с экстремальными климатическими условиями [186, 197,271, 272,273, 274, 268, 275]. В этом смысле работы, направленные на совершенствование новейших биотехнических методов управления1 репродуктивной функцией и технологических элементов метода трансплантации эмбрионов, представляют уникальную возможность не только познания закономерностей сложнейших биологических процессов на ультраструктурном уровне, но и реализацию научных достижений в условиях практики [203, 276].

Анализ данных литературы и результатов собственной ? работы в области трансплантации эмбрионов показывает широкую вариабельность показателей жизнеспособности эмбрионов. В: ряде случаев приживляемость эмбрионов, как свежеполученных, так и оттаянных после криоконсервации может достигать 80,0% к числу трансплантированных, но может не превышать 10,0-17,0% [187, 277].

В процессе проведения исследований было выявлено, что эмбрионы, получаемые от здоровых высокопродуктивных и от проблемных коров, независимо от продуктивности, к которым относят животных с функциональными .расстройствами; воспроизводительной системы вследствие хронических стрессовых: воздействий [203,278, 279, 280]1, имеют характерную особенность — низкий процент приживляемости, включая случаи, когда эмбрионы после извлечения были оценены по пятибальной шкале на основании морфологических признаков как хорошие и отличные. Становится очевидным, что физиологический статус коров определяет особенности строения эмбрионов на ультраструктурном; уровне, нефиксируемые оценкой качества по морфологическим признакам методом микроскопии.

Незначительные отклонения в состоянии здоровья! оказывают негативное влияние на оплодотворяемость яйцеклеток и качество эмбрионов [210, 281, 282]. Даже при 100%-ой положительной реакции суперовуляцией у проблемных коров, качество, большинства полученных эмбрионов может

-'■■у- ■ -'■■■•■••. ' ' ■■ 42 оказаться неудовлетворительным при полном отсутствии эмбрионов, пригодных для трансплантации [207, 283]. В целом, лишь 29,0% извлекаемых эмбрионов от перегуливающих коров- являются нормальными, 33% с большой степенью - морфологических отклонений, 38% дегенерированных. При этом как нормальные, так и эмбрионы с морфологическими» отклонениями значительно отстают в развитии. При оценке 7-дневных эмбрионов, получаемых от многократно осеменяемых коров и виргинных телок, выяснили, что от телок получали эмбрионы, как правило, на стадии бластоцисты, в то время как от перегуливающих коров — на стадии морулы.

Таким образом^ замедленная интенсивность развития, иногда с последующей дегенерациеш и-полной резорбцией, является характерной особенностью эмбрионов коров, - имеющих или имевших нарушения репродуктивной системы; [210- 284]. Для дегенерированных эмбрионов свойственношаличие диплоидных и полиплоидных клеток.

Эмбрионы, получаемые, от проблемных коров отстают в накоплении сырой, массы и имеют на-1/3 болыпеаномалы1ых-кариотипов,:чем эмбрионы, получаемые от здоровых телок., Данные факторы неизбежно приводят к ранней эмбриональной смертности-^ [285]-. Ситуация-является производной патологических процессов, воздействующих на обменную и гормональную; активность развивающихся фолликулов; что подтверждают исследованиями; проведенными in vivo;и in vitro.' Следовательно; влияние . репродуктивных нарушений, обусловливающее причину низкого качества яйцеклеток и, как. следствие, низкий процент их окончательного созревания, фертильности, а в случае оплодотворения, нормального эмбриогенеза находит своё проявление на самом раннем этапе генеративного' цикла — оогенезе [286]. При культивировании ооцитов, полученных от проблемных коров отмечают высокий выход яйцеклеток с дегенерацией хромосом при характерном признаке - блоке анафазы [271]. В опытах по культивированию эмбрионов1 in vitro в аналогичных случаях отношение дегенерировавших морул составляло в 3,0 раза больше и бластоцист в 2.5 раза больше, чем при культивировании эмбрионов в контрольных группах, что влияло на увеличение случаев эмбриональных потерь [287].

Большую проблему представляют невыясненные особенности развития эмбрионов, обусловленные высокой молочной продуктивностью коров-доноров [288]. Актуальность решения данной проблемы объясняется задачей получения наибольшего числа эмбрионов от высокопродуктивных коров для обеспечения селекционно-генетического прогресса. В связи с родами и возрастающей лактационной активностью имеет место отрицательный энергетический баланс, возрастает необходимость в поглощении коровами высокопитательных рационов, что, коррелирует, со снижением всех репродуктивных показателей. Свойственная высокопродуктивным1 коровам перегруженность процесса обмена веществ оказывает негативное влияние не только на- эмбриогенез, приводящее к замедлению скорости развития эмбрионов, но и на более раннюю стадию генеративного процесса — оогенез и-оплодотворение. С увеличением, продуктивности от 3000' до 10000 кг молока в год, оплодотворяемость яйцеклеток снижается, в среднем, от 65% до 35% [287,289,290, 314]. - - - .

• Ооциты от телок с высоким генетически прогнозируемым уровнем продуктивности при культивировании in. vitro после оплодотворения характеризуются низкой' интенсивностью ' дробления и формирования бластоцист. В то же время; ооциты от коров с невысоким генетическим потенциалом продуктивности, но оптимальными экстерьерными данными, обладают нормальными морфологическими признаками и после оплодотворения в развитии до • стадии бластоцисты. В результате этих и других исследований был сделан вывод о том, что в первую очередь к общему снижению показателей плодовитости приводят, связанные с метаболическими сдвигами, изменения фолликулярной среды и среды яйцепроводов, оказывающие негативное влияние на рост, созревание ооцитов и оплодотворяемость [289, 291].

Во вторую очередь, снижение показателей плодовитости происходит благодаря изменениям маточной среды [291, 34, 293], негативно влияющих на процесс эмбриогенеза. В исследованиях in vitro культур эндометральных тканей высокопродуктивных коров показано, что изменения в матке градиента рН происходит посредством поляризации клеток и увеличения секреции простагландина F2a, что препятствует развитию эмбриона и, в конечном счете, может обусловить потерю жизнеспособности. В итоге следует обратить внимание на определенную идентичность механизмов снижения жизнеспособности эмбрионов проблемных коров, независимо от продуктивности и здоровых высокопродуктивных коров, причем во всех случаях основной признаю снижения жизнеспособности находит проявление в замедлении скорости развития эмбрионов. Вероятно, данная специфика определяет снижение устойчивости эмбрионов, полученных от проблемных и высокопродуктивных коров к жёстким условиям, которым они могут быть подвержены при определённых технологиях криоконсервации.

В то же время правомочно предположить, что эмбрионы, от здоровых коров-доноров со средней, продуктивностью »должны проявлять одинаковую устойчивость при всех применяемых технологических режимах. Учитывая это обстоятельство, следует считать большим недостатком то, что разработки всех применяемых технологий криоконсервации эмбрионов были проведены без дифференцированного учёта источника эмбрионов, т.е. без учёта физиологического статуса коров-доноров. Это привело к отсутствию сведений и рекомендаций по криоконсервации эмбрионов, получаемых от высокопродуктивных и проблемных коров.

Следует особо обратить внимание на исключительно важный, с нашей точки зрения, аспект. Разработка и совершенствование технологий элементов эмбриотрансплантации даст возможность изучения и уточнения процессов эмбрионального развития.

Вторая^ группа внутренних и внешних факторов приводит к нарушениям эндокринных взаимоотношений «самка-зародыш», вызывающих функциональные и- структурные изменения жизнеспособного зародыша и/или репродуктивной системы самок [230, 293]. В условиях практики негативное влияние этой группы факторов в определённой степени, возможно нивелировать путём проведения соответствующих биотехнических мероприятий.

Расчёты при учёте двух групп факторов, приводящих, к эмбриональной гибели показывают, что на современном уровне развития биотехники воспроизводства реально добиваться снижения эмбриональных потерь на 20-50%. Для оплодотворения и последующего нормального эмбриогенеза необходима взаимосвязь эмбриона с эпителиальными клетками эндометрия, что возможно при соблюдении условий поддержания постоянной оптимальной гистотрофной среды. При этом своевременное начало и оптимальный рост постовуляторной концентрации прогестерона играет важнейшую роль, что доказывает положительная1 корреляция определённых значений концентраций, прогестерона на 4-й день после осеменения с позитивными концентрациями интерферона т на 16-й день.[153, 294] 1

Данное утверждение подтвердили исследования; которые продемонстрировали, что гестагенизация, проведённая, перед 6-м*днём после осеменения лактирующих мясных коров увеличивает нормы сохранения стельности [146]. В* рамках этих исследований проводили испытания ряда прогестагенных препаратов. В испытаниях эффективности их применения на 6-12 дни после осеменения нормы стельности достигали 79%, в то время как в контроле - 56% [143, 295, 286 , 213].

С теоретической точки зрения обработки препаратами, которые способны блокировать или сдерживать регрессию жёлтого тела, препятствуя инкреции Р§Р2а будут способствовать оптимизации гистотрофной среды, и продлевать срок её существования на весь период раннего эмбриогенеза.

Таким образом, введение препаратов НСО (хориогонический гонадотропин человека) или Оп-ЯЬ (гонадолиберин) является альтернативным введению прогестерона [296, 97,, 298].

Учитывая вышеизложенное, в задачу нашей работы входило изучение влияния различных факторов на частоту эмбриональных потерь у коров, оценка возможности • инъекций прогестерона нормализовать гормональный профиль в случае снижения функциональной активности жёлтого тела и сравнительное испытание инъекций прогестерона, гонадолиберина и хориогонина повышать результативность осеменений.

Раздел 2.5. Биофизические приемы регуляции репродуктивной функции животных

Технологические методы поддержания воспроизводительной функции у коров и телок на высоком уровне требуют значительных капитальных затрат, часто эти методы нарушаются, что снижает показатели воспроизводства стада [120, 2].

Стимуляция половой функции гормональными и другими биологически активными препаратами может приводить к нарушению гормонального статуса животных [166, 167], а также снизить качественные показатели молока и мяса. В связи с этим требуются принципиально новые методы стимуляции воспроизводительной функции коров и телок, которые обеспечивали бы высокую эффективность, безвредность, экологическую чистоту, дешевизну и доступность их выполнения [123]. Этим требованиям отвечают физические методы, в том числе традиционные (массаж, тепло, движение, озокеритотерапия и др.) и новые, с использованием различных аппаратов с помощью электрических токов, лазерного излучения, ультразвука, вибромассажа, электропунктуры биологически активных точек и др.

В последние годы в России сложилось новое направление исследований в области повышения воспроизводительной функции животных физическими методами с использованием различных аппаратов и приборов [121, 1]. При этом установлено, что физические воздействия оказывают благоприятное влияние на попс1еу1;о систему животных и организм в целом [32, 35, 194, 102, 160].

Ректальный ручной массаж, матки и яичников усиливает в них кровообращение, лимфооток, улучшает питание тканей, повышает нервномышечный тонус половых органов, активизирует сократительную функцию матки, повышает оплодотворяемость на 7-20 % [3, 171,94].

Для усиления антиперестальтических сокращений матки [206] считает необходимым массажировать матку до введения спермы, а мясным коровам клитор - после осеменения.

М.Н: Демидова [94] новотельным коровам с целью профилактики гинекологических болезней проводила ректальный массаж матки по 5 мин 1 раз, в 48 ч в течение 10 дней, что ускорило инволюционные процессы половой системы коров на 2 дня.

Инструкцией по искусственному осеменению1 коров методическими указаниями ректальный, ручной массаж матки рекомендуется применять при искусственном! осеменении^ терапии субинволюции матки и хронического гнойно-катарального. эндометрита.' Ректальный массаж яичников рекомендован в течение 2-3 мин при*гипофункции яичников и1 персистентном желтом теле.

Орошение влагалища* горячими (45°С) и теплыми (35-40°С) или холодными растворами/ (3-15°С) №С1 и других средств оказывает тоническое, механическое и химическое воздействие на слизистую оболочку влагалища и влагалищной части шейки матки и рефлекторно стимулирует оплодотворяемость и> половую функцию [205]'.

Для повышения оплодотворяемости коров рекомендуется [122], орошать шейку матки и влагалища теплыми растворами сахара (10%), хлористого натрия (1%) или соды (2%). Благоприятно влияют на отделы полового аппарата грязевые процедуры и озокеритотерапия. Использование грязей и озокерита технически более сложное и трудоемкое дело, чем- аппаратные способы и пока не нашло широкого применения' в ветеринарной практике [28; 26].

В последние годы* находят все более широкое применение в животноводстве; и ветеринарии физические процедуры различного характера-с помощью специальных аппаратов [50, 80, 169]. Высокоэффективны способы электростимуляции функции половой системы животных. Для лечения атонии и гипотонии матки, а также для повышения оплодотворяемости предложен способ с использованием фарадического тока с частотой импульсов 20-30 Гц и напряжением 4000 В.

Однако, при положительном эффекте такое воздействие является сильным раздражителем [43, 120]; что приводит иногда к стрессам. ■ Стимулирующий эффект воздействия импульсными токамш частотой 40-120 Гц один раз; в день с помощью приборов 717 и СНИМ-1 отмечал [117, 44, 60]. Разработан один? из видов», электростимуляции - электронейростимуляция [169, 173, 277]. Сущность, этого метода заключается;» в воздействии слабыми импульсными? токами на биологически активные: зоны (БАЗ) половых органов, проекции которых находятся, на поверхности?тела животного; Для электронейростимуляции авторы сконструировали аппарат ЭТНС- 100-1В -генератор с частотой от 5 до 100 Гц: ш амплитудой 10-100 В с двумя электродами на матерчатом поясе. По данным:автора, воздействие аппаратом на: биологически активные зоны повысило оплодотворяемость коров: по сравнению^ контрольными-аналогами на 20 %.

Все более широко изучаются и; применяются способы рефлексотерапии и рефлексостимуляции путем воздействия на биологически активные точки (БАТ) в коже животных, в том числе акупунктура (АП) - иглоукалывание, электроакупунктура (ЭАП) - воздействие на БАТ электрическими импульсами, криопунктура - воздействие на БАТ холодом и др. [127, 128, 132, 130] установили, что при ЭАП-стимуляции трех точек с помощью' аппарата "Рампа" за 15-20 мин до введения спермы оплодотворяемость, коров повышалась, на 5,2-11,7 %. Более высокий эффект получен при использовании этого метода в комплексе с медикаментозными средствами [131].

В опытах [39, 85, 125, 136, 142, 160] установлено высокое стимулирующее воздействие магнитно-инфрокрасно-лазерного воздействия на метаболический профиль крови и структуру мембран эритроцитов. Способы акупунктуры, в том числе ЭАП, применяются для стимуляции оплодотворяемости у коров с эффективностью 80-85 % [123, 44].

Г.В. Казеев с соавт. [131] определил, что в зоне биологически активных точек существуют высокопроницаемые для электротока мембраны и выявил на коже животных свыше 200 БАТ. Восстановление энергетического баланса [7, 54, 55, 115, 141] при воздействии на них является преобладающим фактором Вт механизме действия акупунктуры [20, 31, 129, 140]. Воздействие на БАТ с помощью различной аппаратуры открывает большие возможности использования их в животноводстве с целью стимуляции воспроизводительной функции коров:

- Старейшим методом* аппаратной физиотерапии и физиостимуляции в медицине является лазеротерапия [19, 40, 82, 118, 174, 62], который начал использоваться в конце XX века для лечения многих гинекологических болезней [Л 9, 94, 178', 60, 143', 167].

В настоящее время КВЧ-терапия в медицине применяется при заболеваниях нервной, мочеполовой системы, при сердечно-сосудистой патологии-.

Многие авторы [34, 137, 90, 68, 317], КВЧ-терапию рассматривают как важный метод лечения электромагнитными волнами крайне высокой частоты. В основе механизма лечебного действия физических приемов на организм, в том числе КВЧ-терапия, по мнению [33, 35, 99, 135, 145, 186 ], наряду с местным влиянием лежит рефлекторный ответ организма, реализуемый нейрогуморальным путем.

Электромагнитное излучение крайне высокой частоты мм-диапазона активизирует окислительно-восстановительные процессы в мышцах, что способствует быстрому снятию утомления и восстановлению их работоспособности [2, 56,35].

Электромагнитное воздействие на частотах мм-диапазона вызывает сосудисто-двигательную реакцию [2, 56, 34, 151, 189, 316], что уменьшает воспалительные явления в органах и тканях организма человека.

Человеческое тело можно расценить как гетерогенную систему, состоящую из различных по структуре и функции органов и тканей, которые подобно другим физическим системам передают частоты газов-метаболитов всему организму [90, 136, 150, 236, 255].

Некоторые авторы [136, 212, 314] установили избирательную чувствительность клеток и тканей организма к различным параметрам частот мм-диапазона электромагнитных волн.

Многочисленные исследования .[135, 236] сделали экспериментальное обоснование целесообразности применения КВЧ-терапии при лечении нестабильной стенокардии. В медицинской практике применяется лечение мужского бесплодия методом - КВН-терапии - • [184^ ---315]. Широкое распространение получила КВЧ-терапия при заболеваниях дыхательной системы [51]; заболеваниях печени и желчевыводящих путей-[9].

В животноводстве' и ветеринарии до 90-х гг. XX в. исследования в области применения КВЧ-терапии с целью стимуляции- воспроизводительной функции не развивались.

С 2001 начаты научно-исследовательские работы по изучению электромагнитного излучения мм-диапазона и разработке методик его применения в отраслях ветеринарии и животноводства [56].

Для медицинской практики разработано и широко используется большое число устройств, для КВЧ-терапии. Они различны по назначению, характеру действия на организм, конструктивному выполнению и другим характеристикам.

Многочисленные исследования по использованию ЭМИ КВЧ мм-диапазона, проведенные в ФГОУ ВПО «Саратовский ГАУ», позволили авторам разработать, конструктивные зоотехнические; ветеринарные и технические требования к КВЧ аппаратам [116].

В результате клинических и экспериментальных исследований^ которые проводились в клиниках Москвы и Екатеринбурга, создан аппарат ДиаДЭНС-двухдиапазонный электронейроадаптиный стимулятор [58, 93]. Было установлено, что, воздействуя на биоэнергетические зоны, можно изменить энергетику организма животного и тем самым регулировать в нем жизненные процессы [93]. При правильном воздействии это дает возможность снизить или вовсе исключить применение медикаментов при лечении животных и в результате получать экологически безопасные продукты животноводства.

Отмечено положительное влияние аппарата, ДиаДЭНС для электропунктурного воздействия - как в медицинской практике [58, 277], так и в. ветеринарной гинекологии, при эндометритах, вагинитах коров [59].

Растущий интерес к безмедикаментозному методу лечения и стимуляции половой функции животных объясняется его • безвредностью, относительной простотой исполнения и таким немаловажным фактом, как дешевизна; [15, 17,

Научная разработка и освоение, различных способов и методов интенсификации воспроизводства стада, в том числе применения различных видов аппаратного воздействия: электромагнитного излучения крайне высокой частоты мм—диапазона («Орбита»), магнитно-инфрокрасно-лазерного нискоинтенсивного излучения («РИКТА-МВ»), динамической электронейростимуляции («ДиаДЭНС») для управления процессами воспроизводства в мясном скотоводстве, имеет большое научное и практическое значение:.

ГЛАВА 3. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 3.1. Материал и условия проведения опытов

Экспериментальные исследования проводили в хозяйствах Западно-Казахстанской области Республики Казахстан, а также в регионе Нижнего Поволжья Российской Федерации (Схема исследований).

Исследования проводили в ТОО племзаводе «Чапаевский», учебно-опытном хозяйстве ТОО «Изденис», К/Х «Шунайбекова» Западно-Казахстанской области Республики Казахстан, а также племзаводе «Сычевский», КФХ «Новоузенский» Российской Федерации.

В качестве доноров эмбрионов были использованы 110 чистопородных коров.казахской белоголовой породы класса элита и элита-рекорд в возрасте от 3 до 13 лет.

В качестве реципиентов телок случного возраста (18-20 мес.) и молодых коров (1-3 отелов) казахской белоголовой и в отдельных случаях молочной породы, менее ценные в племенном отношении, клинически здоровые; без -отклонений в репродуктивных органах и нормальной* половой цикликой. Коров-доноров отбирали по племенной ценности, воспроизводительным качествам на основе данных зооветеринарного учета по физиологическому состоянию половых органов.

При проведении опыта максимально учитывали производственные условия и традиционную технологию разведения и содержания мясного скота.

Так, в летнее время животные содержались в летних лагерях на пастбище, а в зимнее время — на стационаре со свободным выходом на выгульный кормовой двор.

Кормление осуществляли с учетом физиологического состояния и продуктивности животных согласно нормам и рационам, установленным в хозяйстве.

Схема исследований

В целом показатели воспроизводительного статуса поголовья оценивали по общепринятым в зоотехнической практике методам. При индивидуальной оценке воспроизводительного статуса анализировали показатели, характеризующие предродовой, родовой и послеродовой периоды: общее состояние здоровья до родов, предрасположение плода в матке, начало и продолжительность проявления предвестников родов, продолжительность периода от раскрытия шейки матки до начала выведения плода, степень необходимости в родовспоможении и его интенсивность, время отделения последа, проявление материнского инстинкта у роженицы, состояние здоровья матери и новорожденного после отела, его живую массу. Учитывали сроки прихода коровы в первую охоту после отела, индекс осеменений, продолжительность сервис-периода.

3.2. Методика исследований гормональной регуляции'половой функции животных

Для* характеристики функциональных нарушений воспроизводительной функции у коров и выяснения эффективности биотехнических методов их устранения применяли комплексный подход согласно «Методических указаний по диагностике; лечению и профилактике акушерско-гинекологических болезней и ветеринарному контролю за воспроизводительной функцией коров» МСХ РФ, - М.:, 2005.

Эффективность воздействия лазером при эндометрите и мастите изучали в сравнительном аспекте с медикаментозными, комбинированными методами по различным схемам.

Индуцирование половых циклов, определение результативности применения разных препаратов, осеменение коров и телок осуществляли по методикам и инструкциям МСХ РФ,- М.:, 1989.

Стимуляцию активности яичников у «проблемных» коров при нарушениях фолликулогенеза проводили на более чем 850 коровах с использованием различных биорегуляторов отечественного производства: ФСГ-супер, ГСЖК в комплексе с прогестагенами, аналогами гонадолиберина, хориогоническим гонадотропином человека, синтетическими простагландинами в различных сочетаниях и дозировках. Эффективность использования лютеостабила в качестве средства, снижающего эмбриональную смертность, испытали более чем на 180 коровах. Применяемые в этом разделы элементы эмбриотрансплантации — индуцирование суперовуляции, извлечение, пересадку и оценку качества эмбрионов осуществляли по инструкциям ВГНИИЖ и согласно ГОСТ [63, 62, 33].

Для целей профилактики и устранения нарушений воспалительного характера при проведении биотехнических мероприятий применяли лазерные аппараты со следующими параметрами работы: мощность от 4,0 до 15,0 Вт, длина волны от 870 до 970 нм, частота модуляции от 50,0 до 5000,0 Гц, экспозиция 1, 2, 5 минут по одному сеансу в. день, курс 8-10 дней. В: том числе применяли аппарат квантовой терапии1 РИКТА-МВ. Использовали накожный метод в режиме 1000 Гц, экспозиция 1-2 мин. ежедневно в течение 5-8 дней. При этой: методике лазерный луч достигает всех дермальных, субдермальных и сосудистых сплетений; а также: мышечных слоев и внутренних органов [94].

Излучатель апплицировали по Г. В. Казееву [66] по секторам расположения корпоральных биологически активных точек (БАТ), которые представляют органы и различные системы организма на: поверхности тела животных. Исследования по влиянию климатических факторов на репродуктивную функцию проводили на протяжении 1999-2004 гг.

Исследования состояли из двух частей. В;первой части оценку влияния сезонности на оплодотворяемость коров при осеменении в спонтанную охоту определяли методом ретроспективного анализа данных зоотехнического учета. Таким образом; проанализировали данные по 560 коровам, содержащимся в различных хозяйствах.

Во второй части опыты по изучению влияния сезона года на плодотворность искусственного осеменения в индуцированную охоту проводили на коровах, по прошествии 60 и больше дней после отела без клинически выраженных признаков нарушения половой функции. В трех сериях экспериментов анализировали степень положительного влияния биорегуляторов полового цикла и физиотерапевтического воздействия на результативность осеменений.

Эффективность воздействий и время реабилитации определяли по показателям восстановления воспроизводительной способности коров. Репродуктивную активность, продолжительность бесплодия; устанавливали по данным зоотехнического учета. Использовали статистические обзоры и отчеты отделов (управлений) животноводства при администрациях областей, краев, республик, районных станций по борьбе с болезнями животных (районных ветеринарных объединений), областных (краевых, республиканских) и районных ветеринарных лабораторий и облстатуправлений ЦСУ РФ, а также материалы' акушерско-: : гинекологических диспансеризаций, экспертных оценок, и верификации клинико-гинекологического состояния крупного рогатого скотам в хозяйствах с различными технологиями и формами собственности. .'

Для сравнительного изучения характера изменений в организме животных в разные физиологические периоды (предродовой, родовой; послеродовой, лактационный периоды, сухостой и т.д.) проводили лабораторные исследования. Концентрацию стероидных гормонов определяли радиоиммунологическим методом. Иммунобиологическое состояние здоровых и больных эндометритом и маститом коров определяли путем проведения гематологических и биохимических исследований проб крови, а- также молока животных с использованием современных методов. Уровень общего белка в сыворотке крови (CK) определяли рефрактометрически (рефрактометр ИРФ-22). Уровень общих иммуноглобулинов — цинк-сульфатным методом по A.D. McEwan,. E.W. Fisher, J.E. Selman, W.R. Penhaie (1970); белковые фракции определяли по

Оллу Маккорду в модификации Карпюка (1962); общие липиды - по А.Ф. Криницкому в' модификации В.И. Волгина (1969), холестерин — по Ильку [И.П. Кондрахин и др., 1985]; гемоглобин - при помощи ФЭК по Г.В. Дервизу и А.И. Воробьеву (1959); бактерицидную активность сывороток крови — по О.В. Смирновой и Т.А. Кузьминой (1966); активность ß-лизинов — по О.В. Бухарину и Н.В. Васильеву (1977); эритроциты - по А.И. Воробьеву (1959); количество лейкоцитов и лейкоцитарную формулу - по A.A. Кудрявцеву и JI.A. Кудрявцевой (1973).

Детально методики ряда опытов сочли целесообразным отразить по ходу изложения.

3.3. Методика исследований по трансплантации эмбрионов (Схема исследований).

После проведения ректального исследования на наличие желтого тела у доноров осуществляли гормональную обработку препаратами ФСГ-Фоллитропин (Литва) в дозе 1200 ИЕ, гроффолон, в дозе 1000 ИЕ, ФСГ-п (США) в дозах 42 и 52 мг, ГСЖК (Чехия) в дозе 3000 ИЕ. Обработку проводили на 8-12 день полового цикла. В исследовании была применена 4-х дневная схема гормональной обработки препаратом ФСГ с двукратным введением простагландина (эстрофан) в дозе 500 мкг ГСЖК вводили на, 9-12 день полового цикла и-на 12-16 день инъецировали простагландин.

Большинство коров-доноров были витаминизированы комплексным препаратом «Тетравит» в дозе 5 и 10 мл на 2-й день эстрального цикла и перед гормональной обработкой.

Искусственное осеменение коров-доноров осуществляли через 18 часов после введения эстрофана двух-и трехкратно с интервалом 8-10 часов двойной дозой свежеполученной разбавленной (1:3 и 1:6), хранившейся при 0°С спермой с активностью 5 баллов и концентрацией более 30 млн/мл сперматозоидов в дозе; а также заморожено-оттаянной спермой быков-улучшателей, оцененных по качеству потомства.

Многоступенчатое насыщение и выведение криопротектора из эмбрионов

Качество и стадия развития эмбрионов до замораживания

Замораживатели

ЗЭМ-4

ЗЭМ-1

Одноступенчатое насыщение и выведение криопротектора из эмбрионов

Газообразный азот

Жизнеспособность и приживляемость замороженно-оттаяных эмбрионов

Факторы, влияющие на жизнеспособность и приживляемость эмбрионов температура стадия качество оттаивания развития эмбрионов время хранения эмбрионов до замораживания транспортировка качество желтого тела сезон года

Схема исследования

Эмбрионы извлекали у коров-доноров нехирургическим методом с использованием резиновых катетеров. Предварительно животное фиксировали в станке, снимали напряжение с прямой кишки и шейки эпидуральной инъекцией 2%-ного раствора новокаина в дозе 5 мл. Строптивым животным дополнительно с целью достижения частичного обездвиживания внутримышечно инъецировали рампунь в дозе 0,5 мл.

После извлечения эмбрионов промывную жидкость переносили в стерильный бокс и оставляли на 20-30 минут при комнатной температуре 20°С для отстоя. Верхнюю часть жидкости удаляли с помощью длинной иглы, соединенной с резиновым шлангом. Оставшуюся (80-100 мл) жидкость переносили в чашки Петри и под бинокулярной лупой проводили поиск. Для определения жизнеспособности зародышей применяли визуальную морфологическую оценку.

Морфологическую оценку жизнеспособности свежеполученных и заморожено-оттаянных эмбрионов проводили по пятибалльной шкале, разработанной в ВИЖе. При возникновении сомнений жизнеспособности заморожено-оттаянных эмбрионов их подвергали кратковременному культивированию 1-2 часа. Для культивирования применяли среды (ФБС + 30% фетальной сыворотки теленка) в термостате при температуре +37°С.

При подготовке эмбрионов к замораживанию клетки зародышей насыщали раствором глицерина концентрацией 1,4 М. Насыщение раствором криопротектора проводили многоступенчато и одноступенчато.

При использовании многоступенчатого метода эмбрионы последовательно выдерживали по 5 минут для уравновешивания осмотического давления в каждой концентрации криопротектора. Растворы готовили в стерильных флаконах, пробирках и часовых стеклах. Все компоненты тщательно перемешивали стеклянной палочкой. Контроль за насыщением эмбрионов выполняли под бинокулярной лупой в стерильном боксе при комнатной температуре. После выдержки в последнем растворе эмбрионы помещали в камеру замораживателя или в гнезда канистры из фторпластового материала для замораживания в жидком азоте. Одноступенчатый метод более простой и удобный при ограниченном времени их хранения. При этом способе эмбрионы сразу помещали: в каплю 1,4 М раствора глицерина на часовом стекле и выдерживали 20 минут, после чего подвергали замораживанию. Для криоконсервирования биоматериала были использованы в качестве контейнеров пластиковые соломинки (паетты). Замораживали эмбрионы на программном замораживателе ЗЭМ-4 и ЗЭМ-1 в газообразном азоте без блока программного управления.

В соответствии с методикой эмбрионы были разделены на 3 группы. Первую группу эмбрионов охлаждали от +20°С до -7°С со скоростью 1°С/мин с автоматической; кристаллизацией, затем со скоростью 0,3°С/мин до -35°С с последующим помещением в жидкий азот. Вторую охлаждали от +20°С до -40°С со скоростью 1,7°С/мин. Третью - от +20°С до; -40°С со скоростью от 1,5°С/мин. Эмбрионы оттаивали в водяной бане при температуре 20-30°С в течение: 10 секунд. Затем переносили в часовое стекло; в растворе криопротектора проверяли ; наличие , эмбриона- под бинокулярной' лупой. Затем выводили криопротектор из клеток эмбриона в обратной последовательности, если насыщение осуществлялось многоступенчато. При одноступенчатом? насыщении отмывание осуществлялось сахарозой в две степени.

После отмывания эмбрионов от раствора» криопротектора'их подвергали морфологической; оценке. Затем с 20%-ной фетальной сывороткой на ФБС,. согласно методике эмбрионы помещали в пайетту и пересаживали реципиентам.

3.4. Методика изучения ¡влияния биофизических, средств на воспроизводительную функцию животных

Нами изучено применение электромагнитного излучения крайне высокой частоты мм - диапазона в научно-хозяйственном, опыте на 90' коровах аппаратом «Орбита» производства ОАО «Ц11ИИИИА» (г. Саратов) (фото 1) с соблюдением инструкции, изложенной в руководстве по* эксплуатации аппарата и в методике по его применению. Для опыта подбирались коровы только после нормального отела, клинически здоровые, не имеющие на месте воздействия генератором аппарата нарушений целостности кожи и патологических очагов.

Фото 1 - аппарат «Орбита»

Воздействие аппаратом «Орбита» проводили по одной процедуре в день (продолжительность 7. 10 мин). Охоту у коров выявляли по данным трехкратного визуального наблюдения и осмотра в течение дня и подтверждали ее появление быком-пробником. В опыте изучали и оценивали три варианта стимуляции охоты: с 1-го по 7-й день после отела, с 7-го по 14-й и с 14-го по 21 -й.

Для характеристики стимулирующего воздействия электромагнитного излучения крайне высокой частоты мм-диапазона, на частоте 129 ГГц, на воспроизводительную функцию коров оценивали появление стадии возбуждения первого полового цикла по появлению первой охоты. В данном опыте изучили и оценили срок наступления первой охоты после отела, оплодотворяемость в первом и последующем половых циклах, продолжительность сервис - периода и индекс осеменения, а также экономическую эффективность использования аппарата «Орбита». Нами проведены исследования о влиянии электромагнитного излучения крайне высокой частоты мм - диапазона (ЭМИ КВЧ) на оплототворяемость животных в трех научно-хозяйственных опытах, проведенных на 228 животных.

В первом опыте изучали сравнительную эффективность стимуляции половых циклов у новотельных коров аппаратом «Орбита» пояснично-крестцовой рефлексогенной зоны в базовом режиме один раз вздень после отела: с 1-го по 7-й день, с 7-го по 14-й и с 14-го по 21-й. Регистрировали и оценивали время появления стадии возбуждения полового цикла после отела, характеристики первого и последующих половых циклов, результаты и эффективность искусственного осеменения.

Во -втором опыте изучали влияние ЭМИ КВЧ мм-диапазона во время феномена охоты стадии возбуждения полового цикла у коров на их ■ физиологическое состояние, основные гематологические1 и биохимические показатели и уровень гормонов» в крови. У опытных и контрольных коров изучали клиническое состояние, температуру тела, частоту пульса и дыхания. Новотельных коров опытной группы с 14-го дня после отела подвергли ЭМИ КВЧ воздействию для проявления полового цикла один раз в день аппаратом «Орбита» в течение 7 дней". Время прихода в охоту после отела определяли методом наблюдений, как минимум, 3 раза в день, стадии половых циклов - по общепринятым методикам.

В третьем научно-хозяйственном опыте изучали эффективность ЭМИ КВЧ воздействия»на оплодотворяемость коров при разных способах введения спермы (ректо-, визо- и маноцервикальном). Время ЭМИ КВЧ воздействия на коров всех трех опытных групп (по 15 коров в каждой) проводили в течение 7-10 мин непосредственно перед введением спермы, контрольных аналогов осеменяли без вибромассажа.

Оценку влияния ЭМИ» КВЧ. воздействия на эффективность искусственного осеменения коров проводили по показателям оплодотворяемости в первую и последующие охоты, индексу осеменения, продолжительности периода от отела до оплодотворения путем наблюдений и данных зоотехнического учета по общепринятым методикам. Искусственное осеменение коров проводили согласно действующей инструкции МСХ РФ, 2004 г.

Мы провели исследования по изучению влияния низкоинтенсивного магнитно-инфракрасного лазерного излучения на сроки инволюции матки у 40 мясных коров казахской белоголовой породы после нормального отела, из которых сформировали одну контрольную и три опытных группы по 10 голов в каждой. Воздействие осуществляли аппаратом «РИКТА - МВ» при устанавлении наиболее оптимального режима.

- Во -втором опыте, также, проведенном на 40-коровах, ставилась задача изучить влияние одинакового режима воздействия (3 мин) аппаратом «РИКТА - МВ», но1 в различные сроки, после отела. Коров 1-й опытной группы обрабатывали низкоинтенсивным магнитно-инфракрасным лазерным лучом через 5 дней после отела, 2-й - через 7дней, 3-й - через 10 дней после отела в течение 5 дней. В контрольной группе аппарат «РИКТА - МВ» не применялся.

Электропунктуру аппаратом «ЗооДиаДЭНС» проводили, воздействуя на зоны расположения 1 точек 30, 31, 32, 33 и 60 по 1, 2, 3 мин на 5-й день после отела при частоте импульсов аппарата 20 Гц. В контрольную группу входили шесть коров-аналогов.

Перед проведением электропунктуры очищали кожу в зоне воздействия и обрабатывали спиртом, так как известно, что влажность и загрязненность кожных покровов приводит к изменению электрического сопротивления и электропунктурное воздействие теряет свои терапевтические свойства.

Во втором опыте на 18 коровах после нормального отела применили третий режим воздействия (3 мин). Задачей исследований явилось определение сроков* инволюции матки у коров при электропунктурном воздействии аппаратом «ЗооДиаДЭНС» в течение 3 мин в разные сроки после отела. На точки акупунктуры 30, 31, 32, 33 и парную точку 60 коров 1-й опытной группы (п = 6) воздействовали аппаратом «ЗооДиаДЭНС» в течение 30 мин через 8 ч после отела. Во 2-й опытной группе электропунктуру на вышеуказанные точки при времени воздействия 3 мин проводили через 3 дня после отела, а через 7 дней - в 3-й опытной группе. Контрольную группу (безэлектропунктуры) составили шесть коров-аналогов.

В третьем опыте на 18 новотельных коровах применены различные режимы частоты аппарата «ЗооДиаДЭНС», при этом проводили электропунктуру по отработанным ранее схемам - т.е. через 8 ч после отела в течение 3 минут, но при различной частоте работы аппарата: 10 ± 2 (минимальная частота), 20 ± 2; 60 ± 2 Гц. Электропунктурное воздействие аппаратом-«ЗооДиаДЭНС» проводили на точки 30, 31, 32, 33 и 60i Мощность (Р) воздействия аппаратом подбирали для каждого животного индивидуально допроявлениябеспокойства.

Изучению влияния применениям электропунктуры на эффективность оплодотворения после искусственного осеменения коров сформировали три контрольных и три опытных группы по 6 голов в каждой: Электропунктуру проводили через 15 мин после введения спермы, воздействуя на точки акупунктуры 30, 31, 32, 33, 60 в течение З'мин при частоте работы аппарата 10 Гц.

Клинические и морфологические, биохимические и эндокринные показатели коров (температура, пульс, дыхание) при изучении биофизических средств определяли по принятым в физиологии и клинической диагностике методикам.

Статистическую обработку экспериментального материала проводили на персональном компьютере с использованием программы Microsoft Excel.

ГЛАВА 4. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ Раздел 4.1. Биотехнологические приемы управления воспроизводством маточного стада в мясном скотоводстве.

С целью детализации' временных параметров продолжительности полового цикла, прихода коров в охоту, овуляции и динамики развития фолликулов были проведены собственные исследования на животных без клинически выраженной патологии репродуктивной системы. У 23 коров инъекцией эстрофана (500 мкг), при наличии хорошо выраженного жёлтого тела в одном из яичников, индуцировали охоту. Типичные клинические признаки охоты, в среднем через 34,3 часа после инъекции, проявила 21 корова, у которых исследовали динамику роста фолликулов от 1-й до 2-й овуляции (таблица 1).

Таблица 1- Сроки прихода коров в охоту, овуляция, динамика развития и размер фолликулов

Число коров, п 23

Число животных, проявивших охоту и овуляцию в индуцированную охоту, п 21

Интервал времени между инъекцией эстрофана и появлением признаков охоты, час 34,3±1,03*

Продолжительность цикла, дней 21,7±0,91*

Количество животных (п-%) с двумя волнами роста популяции фолликулов тремя волнами роста популяции фолликулов 16(76,1) 5 (23,9)

Срок появления второй волны роста фолликулов, дней 11,3±0,69

Срок появления третьей волны роста фолликулов, дней 16,3±1,09**

Продолжительность доминирования фолликула, дней 6,1±1,79*

Диаметр доминантного фолликула перед овуляцией, мм 15,8±0,02***

Интервал времени от начала эструса до овуляции, час 26,1±1,71*

Примечание: здесь и далее: *Р<0,05; **Р<0,01; ***Р<0,001 , г

66

Продолжительность цикла, в среднем, составила 21,7±0,91 дней. Большинство животных на протяжении цикла имело 2 волны роста фолликулов (76,1% против 23,9%). При этом продолжительность существования доминантного фолликула, как при двух-, так и при трёхволновом росте популяций составляла 6,1 ±1,79 дней. И при двух- , и при трёхволновом росте популяций размеры доминантного фолликула составили, в среднем, 15,8±0,02 мм в диаметре.

Интервал времени от первых признаков охоты до овуляции составил 26,1±1,71 часа. У животных с двухволновым типом роста фолликулов (16 гол.) доминантный фолликул (ДФ) первой волны роста достигал максимума на 8-й день, второй волны - на 21-й день (16,5.17,0 мм); на 22-ой день у большинства коров была зафиксирована овуляция. У животных с трёхволновым типом роста фолликулов (5 гол.) доминантный фолликул первой волны имел максимальный диаметр на 9. 10 день, второй волны - на 16 день и третьей волны - на 23 день (16,6. 16,7'мм), далее происходила овуляция. Продолжительность полового цикла незначительно различалась между группами животных с различным количеством < волн роста фолликулов, в пределах 2-х дней.

Таким образом, фолликулогенез - это постоянно продолжающийся процесс на протяжении продуктивной жизни коровы, который происходит непрерывно до тех пор, пока не истощится запас примордиальных фолликулов. На протяжении полового цикла в большинстве случаев отмечаются две или три волны роста фолликулов. Фолликулярная волна начинается с выделения группы (2.6 шт.) антральных фолликулов диаметром 2.5 мм. Наиболее высокую концентрацию прогестерона (6, 4 нг/мл) наблюдали на 16-й день у коров с тремя волнами роста, у коров с двумя волнами - на 12-й день (5,9 нг/мл). В то же время, у коров с двумя волнами повышение и снижение концентрации прогестерона носило плавный характер и имело более высокие значения на протяжении всего цикла, исключая 14 и 16-й дни, (рис.5). I

I 6

1 5

4 с.

3 « 2

С 1 О о о 8

10

12 14 16 18 20 22

Количество дней после овуляции У животных с двумя волнами роста фолликулов ■ У животных с тремя волнами роста фолликулов

Рис. 5- Средние значения концентрации прогестерона на протяжении эстрального цикла у коров с двумя и тремя волнами роста фолликулов

Размер жёлтого тела при пиковых значениях прогестерона был несколько большим у животных с тремя волнами роста фолликулов (рис.6). Не было замечено какой-либо корреляции размера жёлтого тела с концентрацией прогестерона в плазме крови между двумя группами животных.

8 6 V со с

V Э 4

0 1

К 2

1 1 п о

4,2

1,8

0 0 гп 5,Р'3

4,1

3,9 3,3,9

1-1-1 - I-1-1-г

2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 Количество дней после овуляции

О У животных с двумя волнами роста фолликулов □ У животных с тремя волнами роста фолликулов

2,8 9

22

Рис. 6- Размер жёлтого тела на протяжении эстрального цикла у коров с двумя и тремя волнами роста фолликулов

Рис. 7- Средние значения концентрации эстрадиола на протяжении эструса

Концентрация эстрадиола в период эструса была также исследована у групп коров, включающих животных с двумя и тремя волнами роста популяции фолликулов, (рис.7). Максимальная концентрация эстрадиола (16,1пкг/мл) наблюдалась, примерно, через 2.4 часа после начала эструса.

Коровы с двумя волнами роста фолликулов Коровы с тремя волнами роста фолликулов

Количество дней после овуляции

Рис. 8- Средние значения концентрации ФСГ на протяжении эстрального цикла у коров с двумя и тремя волнами роста фолликулов.

Пик концентрации ФСГ наблюдался на 11. 12 дни у коров с двумя волнами роста фолликулов и на 4-5-й и 15-16 дни у коров с тремя волнами роста (рис.8).

Учитывая строгую последовательность циклического ритма овариальной функции, волнообразное развитие и рост популяции антральных фолликулов, созревание доминирующего фолликула последней волны роста популяции, овуляция - развитие жёлтого тела, является центральным явлением периодической функциональной деятельности яичника. В связи с периодичностью половых процессов следует детерминировать овуляцию, которая разделяет фолликулярную и прогестативную фазу морфологических изменений. В эндометрии этому соответствуют пролиферативная и секреторная фазы.

Таким образом, овуляция не просто центральное явление в периодической функциональной деятельности, а играет центральную роль в рамках полового цикла в« качестве механизма, дающего пригодную для оплодотворения яйцеклетку и. обусловливающего гормональную ситуацию, соответствующую * плодотворному - осеменению и подготавливающую ■ организм к беременности.

Обобщив большое число данных, полученных в результате собственных исследований, и данных- других авторов можно прийти к выводу, что в среднем продолжительностью полового цикла у коров следует считать 21 день, у тёлок (к периоду случки) - 20 дней. Собственный опыт показывает, что минимальная вариабельность продолжительности цикла встречается в возрасте коровы между 3.5 лактациями, когда воспроизводительная функция наиболее «точно отрегулирована», причем точность растет к пределам оптимума воспроизводительного периода. Увеличение степени вариабельности продолжительности цикла (с преобладанием в сторону уменьшения) наиболее выражено у старых животных.

Нами проведена сравнительная оценка эффективности применения для лизиса жёлтого тела цикла отечественных аналогов простагландина -эстуфалана, анипроста и клатрапростина. В качестве объективного критерия» исследовалась динамика гормонального фона в крови подопытных животных.

Препараты выпускают научно-производственные отделения института органической химии РАН (г.Уфа), с рекомендуемой дозой внутримышечного введения 2 мл, содержащей 500 мкг действующего вещества. В последних сериях лютеолитических агентов - анипроста и клатрапростина, масса активного действующего вещества в дозе препаратов была снижена в 2 и 4 раза, соответственно. По данным* производственных испытаний для получения* синхронизационного эффекта охоты- с использованием этих препаратов необходимо введение- дозы- в 1,5.4,0 раза, больше рекомендуемой. Проведённый анализ динамики гормонального фона показал, что как анипрост, так и клатрапростин в рекомендуемых дозах (2-мл).не обеспечивают полного лизиса ткани жёлтого тела. Изменения уровня- концентрации прогестерона- в. течение 72 часов, после инъекции препаратов составили' лишь 0,2.0*55 нг/мл при исходном значении показателя. 1,7±0,24 нг/мл. Известно, что в- таких случаях большинство животных, вследствие слабой реакции на простагландин в охоту, не приходит или проявляет «тихую охоту», т.е. без клинически выраженных признаков.

Нами была увеличена дозировка анипроста и клатрапростина до 500 мкг действующего вещества (по клопростенолу). Сравнительное испытание провели на трёх группах: первой группе (п=20) вводили эстуфалан, второй (п=27) и третьей (п=27) группам- - анипрост и клатрапростин, соответственно. Исходный уровень стероидных гормонов в группах животных был приблизительно одинаковым. Концентрация прогестерона по группам составляла 1,78±0,33, 1,92±0,76 и 1,90±5,7 нг/мл, а эстрадиола - 29,0±2,34, 25,0±3,7 и 27,0±3,70 нг/мл. Резкое снижение содержание концентрации прогестерона до 0,08±0,02 нг/мл (т.е. до требуемого оптимального уровня во время охоты) после инъекции эстуфалана произошло практически у всех животных через 48 часов. Снижение концентрации прогестерона в крови животных второй и третьей групп происходило асинхронно (таблица 2).

Таблица 2 - Сроки достижения оптимального гормонального профиля

Показатель груп па Интервал между инъекцией и взятием проб крови, (час)

24 48 60 72 84

Число коров со I 1 .10,0 18.90,0 1.10Д - снижением концентрации II 13,7 10.37,1 9.33,3 4.14,8 3.11Д прогестерона до базального

III 1.3,7 9.33,3 10.37,1 2.7,4 5.18,5 уровня

Во всех случаях при аналогичных сроках происходило повышение до максимальных величин концентрации эстрадиола до 31,5±3,5-40,0±5.2 пг/мл, причём совпадало по времени с клинически выраженными признаками охоты.

Таким образом, анализ полученных данных позволяет сделать заключение, что инъекция эстуфалана через 48 часов приводит к синхронному лизису жёлтых тел у большинства коров. Анипрост и клатрапростин также обладают высокой лютеолитической активностью, однако, при низкой синхронности её проявления.

Лютеолитический эффект препаратов ПГФ2 а при полноценном желтом теле повышается от применения их в сочетании с другими биорегуляторами, например, с эстрогенами по следующей схеме: однократно внутримышечно ПГФ2 а (энзапрост-Ф) в дозе 15 мг/гол. или эстрофан - 0,25 мг/гол. с последующей инъекцией эстрадиола дипропионата 0,1% масляного раствора в дозе 2 мг/гол. (20 тыс. ед.). Время восстановления половых циклов составляет 5-10 дней, что увеличивает оплодотворяемость на 8,9 - 19,1%.

Показания к применению синтетических простагландинов могут быть-как биотехнические, связанные с синхронизацией и регулированием процессов размножения; так и терапевтические, при патологиях послеродового периода, расстройствах функции яичников.

Применение всех синтетических простагландинов показало равную эффективность (таблица 3). Доля, как коров, так и тёлок, пришедших в охоту, была довольно высокой при совсем незначительных колебаниях.

Таблица 3- Эффективность применения синтетических простагландинов при введении на 10-12 день спонтанного цикла

Группа Препарат Обработано -животных Пришли в охоту Плодотворно осеменили в индуцированную охоту %, к числу осеменённых в индуцированную охоту всего за две охоты (индуц. и последующую спонтанную) %, к числу обработанных животных п % п % п, % п %

Коровы-

I клатрапростин 30 100,0 27" 90,0 14 51,9 2Ф 80,0

II. эстуфалан 30 100,0' 2& 93,3 14' 50,0 22 73,3

III суперфан 30 100,0 28' 93;9 13' 46,4 24' 80$

IV эстрофан* 30 100,0 28 93 ;3 15 53,6 24 80,0

Телки

I клатрапростин 30 100,0 ■ 27 90,0 14 51,9 25 83,3

II эстуфалан 30 100,0^ 28' 93,з; 15 53;6 26 86,7

III суперфан 30 100,0- 27 90,0 14 51,9 25- 83,3

IV эстрофан 30 100,0 28 93,3 15 53,6 24 80,0

Практически у всех животных охота началась через 48 часов. Коров пришло в охоту от 90,0 до 93,3%. Те же самые показатели и по группам тёлок. Как по группам коров, так и по группам тёлок, были получены удовлетворительные показатели оплодотворяемости после осеменения в индуцированную* охоту. Различия этих показателей по группам, были^ более значительными, чем. показатели прихода в охоту однако также недостоверны.

По группам коров оплодотворяемость в индуцированную охоту колебалась от 46,4 до 53,6, по группам тёлок - от 51,9 до 53,6 (таблица 4). Следует отметить низкую оплодотворяемость коров после применения суперфана -46,4% относительно групп коров, где вводили клатрапростин и эстуфалан. Общее количество осеменённых коров и тёлок в индуцированную и сполнтанную охоту имели довольно высокие показатели по группам при незначительных колебаниях. Причём, в трёх группах коров был равный показатель - 80. По группам тёлок общий процент стельностей составлял 80,0.86,7%. В продолжение экспериментов провели испытание тех же синтетических простагландинов двукратной, с интервалом 11 дней инъекцией. Первую инъекцию (независимо от функционального состояния яичников) провели в период с 6 по 18 день полового цикла.

Таблица 4 -Эффективность первой инъекции синтетических простагландинов 'в период с 6 до 18 день спонтанного полового цикла Группа Препарат Число животных Пришлив охоту Плодотворно осеменили всего,п %лК числу осеменений п % п %

Коровы

I клатрапростин 30 100;0 16 53,3 • 8 50,0 >

II эстуфалан 30' 100,0 14 46,7 7 50,0

III суперфан 30 100,0 15 50,0 7 46,7

IV эстрофан 30 100,0 15 50,0 7 46,7

Телки

I клатрапростин 30» 100,0 16 53,3 8 50,0

II эстуфалан 30« 100,0 17 56,7 9 52,9

III суперфан 30 100,0 16 53;3 9 56,3

IV эстрофан 30 100,0 16 53,3 8 50,0

Как и в первом эксперименте, после первого введения во всех группах коров и тёлок были получены, с недостоверной разницей, приблизительно одинаковые результаты. Индуцированную охоту зафиксировали по группам коров при применении суперфана и эстрофана у половины обработанных животных, при введении клатрапростина у 53,3%, а при введении эстуфалана

- у 46,7%. В то же время, по группам тёлок при введении эстуфалана процент пришедших в охоту был наивысшим - 56,7%, а в других трёх группах равным, 53,3% (таблица 5). Оплодотворяемость в индуцированную охоту по группам коров была от 46,7 до 50,0%, по группам тёлок от 50,0 до 52,9% при недостоверной разнице. Несколько выше была оплодотворяемость при введении суперфана - 56,3%.

Таблица 5 -Эффективность второй инъекции синтетических простагландинов животным, не пришедшим в охоту после первой инъекции

Плодотворно осеменили

Группа Препарат Число животных Пришли в охоту в индуцированную охоту %, к числу осеменённых в индуцированную охоту всего %, к числу обработанных животных п % п % п % п %

Коровы

I клатрапростин 14 100,0 11 78,6 6 54,5 10 76,9

II эстуфалан 16 100,0- 10 62,5 5 50,0 9 75,0

III суперфан 15 100,0 10 66,7 5 50,0 8 66,7

IV эстрофан 15 100,0 9 60,0 5 55,6 9 75,0

Телки

I клатрапростин 14 100,0 11 78,6 5 45,6 10 76,9

II эстуфалан 13 100,0 9 69,2 5 55,6 9 75,0

III суперфан 14 100,0 10 71,4 5 50,0 10 76,9

IV эстрофан 14 100,0 10 71,4 5 50,0 9 75,0

Через И дней после первой инъекции простагландинов коровам и тёлкам, не проявившим признаки индуцированной охоты, провели повторные инъекции. В процентном отношении животных, пришедших в охоту после второй инъекции, было больше, чем после первой инъекции (таблица 6). Разница показателей по группам была недостоверна. В целом по группам был удовлетворительный показатель оплодотворяемости в индуцированную охоту, по группам коров от 50,0 до 55,6%, по группам тёлок от 50,0 до 55,6%.

Таблица 6- Эффективность второй инъекции синтетических простагландинов животным, не пришедшим в охоту после первой инъекции

Группа Препарат Число животных Пришли в охоту Плодотворно осеменили в индуцированную охоту % к числу осеменённых в индуцированную охоту всего % к числу обработанных животных п % п % п % п %

Коровы

I клатрапростин 30 100,0 27 90,0 14 51,9 18 60,0

II эстуфалан 30 100,0 24 80,0 12 50,0 16 53,3

III суперфан 30 100,0 25 83,3 12 48,0 15 50,0

IV эстрофан 30 100,0 24 80,0 14 58,3 16 53,3

Телки

I клатрапростин 30 100,0 27 90,0 13 48,1 18 60,0

II эстуфалан 30 100,0 26 86,7 14 53,8 18 60,0

III суперфан 30 100,0 26 86,7 13 50,0 19 63,3

IV эстрофан 30 100,0 26 86,7 13 50,0 17 56,7

Приблизительно такие же показатели оплодотворяемости в индуцированную охоту были после первой инъекции. В дальнейшем животных, не осеменившихся в индуцированную охоту, осеменили ещё раз по мере прихода в спонтанную охоту. Учитывая число плодотворных осеменений после второй обработки в индуцированную и спонтанную охоту вместе, вывели общие показатели оплодотворяемости.

Они были достаточно высокими, хотя и ниже, чем в первом эксперименте. По результативности двух инъекций простагландинов проанализировали общую объективность обработок относительно общего числа животных, пришедших в охоту и оплодотворяемых в индуцированную

1 ! I

76 1 охоту и индуцированную и последующую спонтанную охоту вместе относительно общего числа обработанных животных, причём по каждой группе (препарату) отдельно (таблица 7).

Таблица 7- Влияние интервала от аппликации простагландина до начала охоты на результаты осеменения (при двукратном, с интервалом 11 дней введении)

Группа Препарат Осеменено животных после прихода в охоту через 24 часа через 48 часа через 72 часа всего стало стельны ми всего стало стельны ми всего стало стельны ми п % п % п % п % п % п %

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14

Первая инъекция коровы

I клатрапрос тин 3 100 1 33,3 10' 100 6 60,0 3 ЮОг 1 33,3

II эстуфалан 2 100 2 100 9 100 4 44,4 3 100 1 33,3

III суперфан 3 100 1 33,3 10 100 5 50,0- 2 100-' 1. 50,0

IV эстрофан 3 100 1 33,3 9 100' 4 55,6 2 100 -

Всего по четырём группам 11 100 5 45,5 38 100 20 52,6 10 100 3 37,5 телки

I клатрапрос тин 4 100 1 25,0^ 11 100 7 54,5 1 100 -

II эстуфалан! 4 100 1 25,0 11 100 7 63,2 2 100 1 50,0

III суперфан 2 100 1 50,0 9 100 7 66,6 5 100' 1 20,0

IV эстрофан 5 100 1 20,0 10 100 7 70,0 1 100 -

Всего по четырём группам 15 100 4 26,7 41 100 28 68,3 9 100 2 22,2

Вторая инъекция коровы

I клатрапрос тин 2 100 2 100 8 100 4 62,5 1 100 -

II эстуфалан, 1 100 - - 8 100 5 75,0 1 100 -

III суперфан 2 100 - - 8 100 5 62,5 - 100 -

IV эстрофан 1 100 - - 6 100 6 100 2 100 1 50,0

Всего по четырём группам 6 100 2 33,3 30 100 20 66,6 4 100' 1 25,0

Продолжение таблицы 7. телки

I клатрапрост ин 2 100 2 100 8 100 5 62,5 1 100 - и. эстуфалан 1 100 1 100 8 100 5 62,5 - 100 -

III суперфан 2 100 1 50,0 6 100 3 50,7 2 100 1 50,0

IV эстрофан 3 100 1 33,3 6 100 4 66,7 1 100 -

Всего по четырём группам 8 100 5 25,0 28 100 17 60,7 4 100 1 25,0

Общее число пришедших в индуцированную охоту животных по группам имело незначительные колебания от 80,0 до 93,3% по группам коров и от 86,7 до 90% по группам тёлок. В целом, оплодотворяемость в индуцированную охоту составила от 50,0 до 58,3%, а индуцированную и последующую спонтанную - 50,0-63,3%.

Проанализированы показатели оплодотворяемости в индуцированную охоту начавшуюся после' первой и второй инъекции через 24, 48 и 72 часа (таблица 8). В целом, приемлемые показатели 45,5% и 26,7% соответственно у коров и тёлок констатировали в охоту начавшуюся через, 24 часа после обработок.

Аналогичные показатели • в охоту через 48 часов были существенно выше - 52,6 и 37,5%. После второй обработки прослеживали аналогичную зависимость - наилучшая результативность осеменения, была в, индуцированную охоту через 48 часов после инъекции, при общем показателе оплодотворяемости у коров и тёлок, соответственно, 60,6 и 60,7%. В охоту, наступившую через 24 и 72 часа аналогичные показатели были меньше на 33,3.35,7% и на 41,6.35,7%, соответственно. Можно утверждать, что аналогичная тенденция прослеживается по каждой группе коров и тёлок.

Различная реакция животных при синхронизации половых циклов'на простагландин зависит от целого ряда факторов. Считают, что реакция зависит от дня обработки и сезона года.

Таблица 8 - Эффективность комбинированного с гонадотропинами применения простагландинов для синхронизации охоты у коров при фронтальной обработке

Показатель клатрапростин эстуфалан суперфан всего по трём группам п % п % п % п %

ГСЖК (500 И Е)

Число обработанных животных 40 100,0 40 100,0 40 100,0 120 100,0

Пришли в охоту в т.ч. через: 36 90,0 35 37,5 32 80,0 103 85,8

24 часа 6 15,0 4 10,0 5 12,5 15 12,5

48 часов 28 70,0 29 72,5 24 60,0 81 67,5

72 часа 2 5,0 2 4,9 3 7,5 7 5,8

Не проявили признаки охоты 4 10,0 5 12,5 8 20,0 17 14,2

Оплодотворяемость в индуцированную охоту 25 69,4 25 71,4 23 71,9 73 70,9 с эоллитропин (ЗОО ед)

Число обработанных животных 40 100,0 40 100,0 ,40 100,0 120 100,0

Пришли в охоту в т.ч. через: 36, 90,0 37 92,5 37 92,5 110 91,7

24 часа 5 12,5 4 10,0 5 12,5 14 11,7

48 часов 29 72,5 ' 32 80,0 31 77,5 92 76,7

72 часа 2 5,0 1 2,5 1 2,5 4 3,3

Не проявили признаки охоты 4 10,0 3 7,5 4 10,0 11 9,2

Оплодотворяемость в индуцированную охоту 26 72,2 26 70,3 27 72,9 78 70,9

Комбинированное введение простагландинов и ГСЖК по данным ряда исследователей эффективно при проведении обработок на 8.12 дни полового цикла, причём хорошие показатели могут быть получены при обработках животных на 11. .12 дни полового цикла при наличии в яичниках типичного жёлтого тела.

В своих исследованиях мы испытали эффективность комбинированного введения ГСЖК в дозе 500 ИЕ или фоллитропина в дозе 300 ед. с простагландинами для синхронизации охоты у коров фронтально. Не было выявлено существенных различий между группами коров, в которых применяли клатрапростин, эстуфалан, суперфан и эстрофан (таблица 8). В то же время необходимо отметить, что при введении в схему обработок фоллитропина по сравнению с ГСЖК (таблица 9) даёт несколько лучшие показатели относительно общего числа коров с индуцированной охотой - 91,7 против 85,8, число приходящих в охоту через 48 - часовой интервал после обработки - 76,7 против 67,5, меньше животных приходит в охоту через 72 часа - 3,3 против 5,8. Тем не менее, общие показатели оплодотворяемости после осеменения в индуцированную охоту оказались, равными (70,9%). ,

Учитывая данные литературы о том, что доля стельностей в индуцированную охоту может увеличиваться до 90% при дополнительной аппликации Оп-Ш1 и, что данные по этому вопросу не однозначны, мы провели сравнительные исследования эффективности введения перед осеменением синтетических гонадолиберинов - диригестрана в дозе 5,0 (производство фирма «Лечава». Чехия) и отечественных - сурфагона в дозе 5,0 мл или ХГЧ 1000 ИЕ. Препараты вводили коровам и тёлкам- в охоту, индуцированную как только простагландинами, так и комбинированными методами - простагландинами в сочетании с ГСЖК или фоллитропином. Различия по группам показателей были незначительными и недостоверными (таблица 9).

Введение как диригестрана, так и сурфагона увеличивало процент плодотворных осеменений до 80.85% и у коров, и у тёлок. Введение хориогонина дало во всех случаях стабильно одинаковый результат - 80,0% стельностей от числа осеменений.

Таблица 9 - Эффективность осеменения коров и тёлок в индуцированную охоту при аппликации перед осеменением препаратов гонадолиберина или ХГЧ

Синтетический гонадолиберин ХГЧ Общая эффективность

Показатель диригестран сурфагон (хориогонин) осеменения число получено число получено число получено число получено осемененных стельностеи осемененных стельностей осемененных стельностей осемененных стельностеи животных животных животных животных п % п % п % п % п % п % п % п %

Коровы простагландин 20 100,0 16 80,0 20 100,0 17 85,0 ■ 20 100,0 16 80,0 60 100,0 49 81,7 простагландин+ 20 100,0 17 85,0 20 100,0 17 85,0 20 100,0 16 80,0 60 100,0 50 83,3

ГСЖК простагландин+ 20 100,0 16 80,0 20 100,0 16 80,0 20 100,0 16 80,0 60 100,0 48 80,0 фоллитропин

Тёлки простагландин 20 100,0 17 85,0 20 100,0 16 80,0 20 100,0 16 80,0 60 100,0 49 81,7 простагландин+ 20 100,0 16 80,0 20 100,0 17 85,0 20 100,0 16 80,0 60 100,0 49 81,7

ГСЖК простагландин+ 20 100,0 17 85,0 20 100,0 17 85,0 20 100,0 16 80,0 60 100,0 50 83,3 фоллитропин

Общая эффективность стабилизации овуляции гонадолиберинами и ХГЧ при всех трёх применяемых методах синхронизации охоты у коров и тёлок колебалась от 80 до 83,3%.

Опыты других исследователей по синхронизации охоты простагландином с дополнительным введением хориогонического гонадотропина подтвердили его лютеотропное ЛГ-действие, которое, не способно предотвращать регрессию жёлтого тела, вызванную простагландином. Введение в обработки с целью синхронизации охоты синтетических гонадолиберинов (таблица 10) даёт положительные результаты более стабильно. В синхронизированную охоту отчётливо улучшалась оплодотворяемость до 80.90% при стабилизации сроков наступления и продолжительности охоты. Точности синхронного проявления охоты у коров, возможно при включении в обработку инъекции эстрадиола бензоата через 48 часов после инъекции простагландина.

Таблица 10 — Эффективность введения синхронизации охоты1 простагландинами при различных дозах ХГЧ и эстрадиола

Показатель Число коров Интервал до начала эструса, час. Лимиты, час. Число коров с ЖТ на 10 день Число коров с кистозными яичниками

I группа (ХГЧ-1250 ИЕ эстрадиол-5 мг) 12 34±6,3 24.38 8 4

II группа (ХГЧ-750 ИЕ эстрадиол-3 мг) 12 35,5±2,4 30.40 12

Отрицательной стороной при этом считается вероятность образования у определённого числа коров овариальных кист, однако этот негативный фактор можно нивелировать за счёт введения ХГЧ.

В этой связи нами были проведены испытания обработок простагландином с комплексом ХГЧ-эстрадиол бензоата через 12 часов после инъекции простагландина, т.е. тогда, когда регрессия жёлтого тела ещё не завершилась. Исследование состояло из 2-х последовательных частей. В 1 части испытывали эффективность различных дозировок. Во 2-ой; части; определяли репродуктивные показатели- после обработок при пальпаторно-зафиксированном жёлтом теле, но без предварительного выявления охоты. Исследования проводили на здоровых коровах, по З-ей-4-ой лактации, через 2-3 месяца после отёла.

Заключение диссертации по теме «Ветеринарное акушерство и биотехника репродукции животных», Байтлесов, Ербулат Упиевич

ГЛАВА 6. ВЫВОДЫ

1. В условиях сельхозпредприятий Республики Казахстан, не зависимо от форм собственности и технологий содержания, кормления и эксплуатации; нарушения функции органов репродуктивной системы регистрируют, в среднем, у 20,2-22,7% мясных коров; в структуре репродуктивных нарушений преобладают гипофункциональное состояние яичников, которые периодически в отдельных хозяйствах регистрируют у 20,8-90,1% лактирующих коров.

2. Одним из основных сезонных факторов, снижающих репродуктивную активность мясных коров, является термальный стресс, приводящий в пастбищный период к нарушению гормонального статуса организма. Проведение биотехнических мероприятий, активизирующих репродуктивную функцию с включением в схемы обработок, средств, потенцирующих функцию желтого тела, а также метафилактического воздействия' на. матку позволяет нивелировать сезонное снижение показателей оплодотворяемости коров; в т.ч. и за счёт снижения: эмбриональных потерь. Многочисленные варианты предовуляторного; гормонального дисбаланса, приводящего5 к: нарушениюшроцесса::Спонтанно№ и индуцированной] овуляции; сводятся; в конечном счёте, к сдвигу пика ЛГ во, временных и/или количественных параметрах. Введение в режимы, обработок с целью регуляции репродуктивной; функции-; синтетического аналога гонадолиберина приводит к оптимизации ; параметров . пика ЛГ.

3. Рассеивание сроков начала индуцированной охоты является основным фактором, негативно влияющим на результаты синхронизации. Степень! рассеивания зависит от морфо-функционального состояния яичников коров, которое определяется реакционной способностью жёлтого тела и возрастом растущего межэстрального фолликула. Введение в: схему обработок препаратов гонадотропина и гонадолиберина унифицирует овариальные процессы, стабилизирует сроки; начала охоты, что-повышает результативность осеменений при проведении биотехнических мероприятий:

4. Полученные данные обосновывают необходимость при определении способа регуляции функциональной активности яичников учитывать уровень концентрации прогестерона. Индуцирование охоты у здоровых коров эффективно при концентрациях от 3,7 до 4,7 нг/мл. Использование фоллимага и магэстрофана при гипофункциональном состоянии яичников эффективно при значениях не ниже 0,5 нг/мл. При более низких концентрациях в схему обработок целесообразно включать сурфагон в дозе 10,0 мл.

5. В хозяйствах 37,8% мясных коров имеют задержку возобновления овариальной активности после отёла. При этом, пролонгирование лютеальной фазы и задержку первой овуляции регистрировали наиболее часто, что и являлось основной причиной задержки возобновления нормальной овариальной цикличности. В свою очередь, причинами пролонгации лютеальной фазы и задержки первой1 овуляции является задержка инволюции матки в течение 35' дней. Восстановление нормофункциональной циклической активности- яичников1 у коров после 1 отёла завершается быстрее, чем восстановительные процессы в эндометрии и . маточной среде; достигаемая за счёт овариостимуляции' стабилизация; функциональной: деятельности яичников ускоряет завершение - восстановительных процессов в матке.

• 6. Исследованиями по овариостимуляции в послеродовой период установлено, что для этой цели наиболее эффективен комплекс препаратов: прогестерона, простагландина, гонадотропина и гонадолиберина. С одинаковой эффективностью для этой цели можно применять как отечественные, так и импортные препараты. Регламентировать режимы обработок следует таким образом, чтобы первая овуляция произошла не ранее 21 дня после отёла. Выясненная возможность взаимонаправленности патогенетического процесса матка-яичники диктует необходимость комплексных методов лечения и профилактики.

7. Особенностью эмбриогенеза здоровых и проблемных высокопродуктивных коров является снижение скорости развития эмбрионов' - как ранних, так и поздних морул и бластоцист. Замедленное развитие эмбрионов сопровождается нарушениями на ультраструктурном уровне, косвенно определяемыми методом культивирования. Морфологические изменения эмбрионов на ультраструктурном уровне и скрытые морфо-функциональные нарушения в эндометрии, способствующие нецелесообразному выбросу маточного простагландина, приводят к эмбриональной гибели. Введение прогестагенных препаратов мясным коровам на 6-8 день после осеменения повышает нормы стельности, благодаря снижению эмбриональных потерь. С равной- долей успеха для снижения эмбриональной смертности коровам можно вводить сурфагон или ХГЧ наЛО-11-й день после осеменения.

8. Проведение воздействий низкоинтенсивным электромагнитным излучением КВЧ мм-диапазоном (частота 129 ГГц), магнитно-инфракрасно-лазерным и динамической электронейростимуляцией на биологически активные точки для профилактики, и нормализации- оворальных нарушений в комплексе с биорегуляторами нового'поколения, повышает эффективность биотехнических мероприятий- по регуляции репродуктивной функции мясных коров. Низкоинтенсивное электромагнитное воздействие КВЧ ммт диапазона, магнитно-ифракрасно-лазерным излучением, а^ также динамической электронейростимуляцией в рекомендуемых параметрах нормализует и повышает иммунобиологический, статус животного, не оказывая негативного влияния на экологическую чистоту получаемой продукции.

9. Квантовое воздействие на зоны точек 30, 31, 32, 33 и 60 аппаратами «Орбита», «РИКТА МВ» и «ЗооДиаДЭНС» в течение 5 дней по 1, 2, 3 мин на 5-й день после отела в базовом режиме оказало положительное влияние на послеродовые инволюционные процессы половой системы коров. Несмотря на различный временной режим воздействия, срок инволюции тела и рогов матки во всех опытных группах был достоверно короче и составил 23,16 ± 0,61; 22,5 ± 0,78; 18,96 ± 0,42 дня в опытных группах и 28,74 ± 0,58 дня - в контрольной.

10. При режиме воздействия аппаратами «Орбита», «РИКТА МВ» и «ЗооДиаДЭНС» 3 мин через 8 ч после отела биохимические показатели крови на начало и конец опыта находились в пределах физиологической нормы. Уровень общего белка в сыворотке крови коров опытных групп на начало опыта составлял от 8,0 ± 0,25 до 8,4 ± 0,9 г%. Резервная щелочность крови коров опытных групп на начало опыта колебалась от 32,8 ± 2,7до 38,9 ± 2,4 об/% С02. Показатели каротина в сыворотке крови в опытных группах на начало опыта составляли от 0,1 ± 0,8 до 0,4 ± 0,07 мг%, в контрольной группе - 0,2 ± 0,1, т.е у всех животных они были ниже физиологической нормы, что типично для конца зимнего стойлового периода в Западном Казахстане. Данные биохимического и морфологического состава крови свидетельствуют

I ' о безвредности воздействия аппаратами «Орбита», «РИКТА-МВ» и «ЗооДиаДЭНС» на организм животных.

11. При различных сроках воздействия аппаратами «Орбита», «РИКТА МВ» и «ЗооДиаДЭНС» в течение 3 мин (через 8 ч после отела, через 3 и 7 дней после отела) восстановление репродуктивной функции - коров во всех -опытных группах было достоверно короче, чем в контрольной. Так, наступление охоты у мясных коров было достоверно короче на 8,37 и 5,87 дня, чем во 2-й и 3-й опытных группах, и составило 28 ± 1,02 дня (р>0,05). В контрольной группе охота наступила на 9,37 дня позже, чем в 1-й опытной. Применение различной частоты воздействия не оказало отрицательного влияния на восстановление половой функции коров. Разница показателей в опытных группах не имела достоверных различий, сроки наступления первой охоты колебались от 31,5 ± 1,29 до 33,5 ± 0,84, в контрольной группе коров первая охота наступила на 39,8 ± 0,87 дня.

ГЛАВА 7. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Биотехнические мероприятия по повышению показателей воспроизводительной активности высокопродуктивных мясных коров следует проводить в комплексе с электромагнитным излучением крайне высоких частот мм-диапазона, низкоинтенсивным магнитно-инфракрасно-лазерным и динамической электронейростимуляцией на матку и яичники, что обеспечит максимальную эффективность, не оказывая при этом негативного влияния на экологическую безопасность получаемой продукции.

2. С целью профилактики и улучшения», общепринятых показателей плодовитости коровам после отёла следует проводить стимулирование овариальной активности введением комплекса препаратов: сурфагон, прогестерон, простагландин, ГСЖК " в- ~ общепринятых дозировках и дозированием применением' аппаратов «Орбита», «РИКТА МВ» и «ЗооДиаДЭНС».

3. Для устранения гипофункции яичников у коров при уровне концентрации прогестерона^ в крови более 0,5 нг/мл рекомендуется использовать фоллимаг (1'200-ИЕ) в сочетании-с магэстрофаном (500 мкг). При снижении содержания гормона ниже 0,5, нг/мл следует проводить комплексное лечение животных гестагенами, ГСЖК и ПГФ2а в общепринятых дозировках. —

4. Для снижения эмбриональных потерь и выравнивания сезонных показателей плодовитости коров целесообразно, в пастбищный период на 811 день после искусственного осеменения как в спонтанную, так и индуцированную охоту вводить гонадолиберины, ХГЧ на фоне предварительной'гестагенизации при сочетанном применении КВЧ, МИЛ и ДЭНС терапии органов репродуктивной системы.

5. В практике биотехнологии воспроизводства мясного скота рекомендуется использовать следующие аппараты: «Орбита», «РИКТА — МВ, «ЗооДиаДЭНС», для нормализации и стимуляции репродуктивной функции.

Список литературы диссертационного исследования доктор ветеринарных наук Байтлесов, Ербулат Упиевич, 2011 год

1. Абдулкеримов X. Т. Патогенетическое обоснование применения Скэнар-терапии / X. Т. Абдулкеримов, Л. Л. Стародумова, Л. Н. Суворкина // Уральское медицинское обозрение. 2001. - № 2. — С. 3335.

2. Амарбаев Ш. М. Биотехническая стимуляция репродуктивности коров / Ш.' М. Амарбаев // Животноводство. 1987. - № 9. - С. 17-19.

3. Синхронизация стадий полового цикла у коров-доноров« и реципиентов при пересадке эмбрионов / Ш. М. Амарбаев, Б. X. Аббасов, Г. Г. Герасимов, И. Ю. Бабаев // Изв. АН Каз. ССР. Сер. биол. — 1988. -№ 3. — С. 78-82.

4. Анзоров В. Л. Влияние факторов внешней среды на репродуктивную функцию коров / В. Л. Анзоров, О. А. Зейналов, С. Н. Хилькевич // Квантовая терапия в ветеринарии: сб. тр. — М.: 2003. — С. 128-136.

5. Антонов В. Ф. Липиды и ионная проницаемость мембран / В. Ф. Антонов. -М.: Наука, 1982. 150 с.

6. Антонюк В. С. Применение овогена и эстрофана для стимуляции исинхронизации охоты у мясных коров / В. С. Антошок, В. В. Жаркий, Ю. А. Горбунов // Вестн. АН БССР. 1983. - № 2. - С. 91-93.

7. Аппараты для КВЧ-терапии «Электроника СВЧ» / О. И. Писанко, Ю. Н. Муськин, О. Б. Хатнюк, В. А. Гайдук // 10 Российский симпозиум с международным участием. «Миллиметровые волны в биологии и медицине». Москва, 1995.-С. 181-183.

8. Артюх В. М. Сроки осеменения высокопродуктивных коров после отела / В. М. Артюх, А. М. Чомоев, М. В. Варенников // Зоотехния. -2004.-№6.-С. 24-27.

9. Ахмадеев А. Н. Гинекологическая диспансеризация коров при поточно-цеховой системе производства молока / А. Н. Ахмадеев, М. Г. Миролюбов, О. Н. Преображенский // Ветеринария. — 1986. — № 12. — С. 12-14.

10. Бавильский В. Ф. Скэнар-терапия в комплексном лечении эректильной дисфункции / В. Ф. Бавильский, А. В. Суворов, А. С. Матыгин //Андрология и генитальная хирургия: тез. науч. тр. — М., 2001.-С. 26-28.

11. Багманов М. А. Лечебно-профилактическое воздействие Хорио-фага / М. А. Багманов // Вестн. РАСХН. 1997. - № 3. - С.58-59.

12. Багманов М. А. Морфологические изменения в гениталиях коров в послеродовой период / М. А. Багманов // Материалы научно-производственной конференции по актуальным'вопросам ветеринарии и зоотехнии. Казань, 2001. — С. 10-11.

13. Балковой И. И. Квантовая профилактика послеродового эндометрита / И. И. Балковой, В. В. Бауков, Д. В. Михайлов // Квантовая медицинаи новые медицинские технологии: материалы I Междунар. симпозиума (Словения). Блед, 2001. - С. 246-247.

14. Балковой И. И. Квантовая профилактика послеродового эндометрита у коров / И. И. Балковой, В. В. Бауков, Д. В. Михайлов // Квантовая терапия в ветеринарии. М., 2003. - С. 100-102.

15. Балковой И. И. Лазерная терапия в ветеринарной акушерской практике / И. И. Балковой, В. П. Иноземцев // Ветеринария. — 1999. — № 2. С. 33-34.

16. Балковой И. И. Лазерная терапия при лечении домашних животных / И. И. Балковой, В. П. Иноземцев // Ветеринария. 1997. - № 6. - С. 5355.

17. Балковой И. И. МИЛ-терапия мастита у коров / И. И. Балковой и др. // Ветеринария. 1997. - № 3. - С. 46-47.

18. Балковой И. И. Монолазерная профилактика задержания последа у коров / И. И. Балковой, В. В. Бауков, С. С. Макаримов // Ветеринария. -2001.-№ 9.-С. 34-35.

19. Барабаш В. И. Акупунктурная коррекция половой системы и вымени коров / В. И. Барабаш, Л. В: Тихонова // Ветеринария. 2001. - № 5. -С. 37-39.

20. Батраков А. Я. Разработка и совершенствование профилактических и лечебных мероприятий при воспроизводстве крупного рогатого скота с высокой молочной продуктивностью: автореф. дис. . д-ра. вет. Наук /А. Я. Батраков. — Воронеж, 1991. — 52 с.

21. Бахтина Л. Г. ДЭНАС-терапия в практике районного онколога / Л. Г. Бахтина // Динамическая электронейростимулирующая терапия. Новые рубежи и итоги эмпирического этапа развития: материалы междунар. юбил. симпоз. — Екатеринбург, 2003. — С. 106-111.

22. Безбородин В: В. Организация воспроизводства крупного рогатого скота и акушерско-гинекологических мероприятий; в новых условиях хозяйствования / В. В. Безбородин. Волгоград, 1997. - 220 с.

23. Белобороденко А. М. Влияние гиподинамии на половой аппарат коров и их репродуктивную активность / А. М. Белобороденко // Морфология. -1996.-№2.-С. 34-37.

24. Белобороденко А. М. Профилактика климатического и симптоматического бесплодия у коров в условиях Западной Сибири: автореф. дис. д-ра вет. наук /А. М. Белобороденко. Воронеж, 1990. -38 с.

25. Белов А. Д. Физиотерапия и физиопрофилактика болезней;животных /А. Д. Белов, И; М. Беляков, В: А. Лукьяновский. — М.: Колос, 1983. -154 с.

26. Белов А. Д. Определение тирсоидных гормонов радиоиммунологическим анализом у коров при дисфункции яичников / А.'Д. Белов; Е. В: Шарлей^ // Тезисы; докладов- 3-й; Всесоюзной! конференции? по сельскохозяйственной радиологии. Обнинск, 1990;.— С1 79-80:

27. Березов Т. Т. Биологическая химия / Т. Т. Березов, Б. Ф. Коровин;,— М.: Медицина,. 1998. -704 с. . .,

28. Бецкий О. В. Миллиметровые волны и перспективные области их применения; / О. В. Бецкий, Ю. Г. Яременко // Зарубежная радиоэлектроника. — 2002. — № 5. — С. 42-50. .

29. Бецкий, О.-.В:. Современные представления о механизмах воздействия низкоинтенсивных, миллиметровых волн на биологические объекты / О. В. Бецкий; Н. Н. Лебедева // Миллиметровые волны в биологии-и медицине.-2001.-№ 3 (23). С. 5-19.

30. Бецкий; О. В. Лечение электромагнитными полями / О. В. Бецкий, Н. Д. Девятков, Н. Н: Лебедева // Биомедицинская радиоэлектроника. -2000.-№7.-С. 3-7.

31. Бецкий. О. В. Миллиметровые волны и перспективные области их применения / О. В. Бецкий, Ю. Г. Яременко // Зарубежная радиоэлектроника 2000. - № 5. - С. 42-50.

32. Боголюбов В. М. Проблема оптимизации воздействий лечебными физическими факторами / В. М. Боголюбов // Вопр. курортологии, физиотерапии и лечеб. и физ. культуры. 1982. — № 3. - С. 1-6.

33. Богомолов Ю. В. Воспроизводительные функции коров / Ю. В.1

34. Богомолов, X. В. Загитов // Науч.-техн. бюл. / ВАСХНИЛ, Сиб. отд-ние. СибНИПТИЖ. Новосибирск, 1978, вып. 24. - С. 45-47.

35. Богомолов Ю. В. Организационно-хозяйственные меры и применение биогенных стимуляторов для повышения плодовитости коров на промышленных фермах: автореф. дис. . канд. вет. наук / Ю. В. Богомолов. Новосибирск, 1989. - 19 с.

36. Болис Я. Мембраны и болезни / Я. Болис, Д. Ф. Хоффман, А. Леаф. — М., Медицина, 1980. 408 с.40: Буйлин В. А. Низкоинтенсивная лазерная терапия в гинекологии / В. А. Буйлин. М.: Аспект Пресс, 1995. - 60 с.

37. Буйлин В.А. Низкоинтенсивная лазерная терапия с применением матричных импульсных лазеров / В.А. Буйлин // Информ.-метод. сб.; под ред. О.' К. Скобелина. — М: Техника, 2000. — 124' с.

38. Буйлин В. А: Применение низкоинтенсивных лазеров в экстремальной медицине / В. А. Буйлин. — М.: Техника, 2000. -С. 16-17.

39. Буланкин А. Л. Разработка и применение новых лечебных препаратов при эндометритах, маститах коров и желудочно-кишечных заболеваниях телят: дис. . д-ра вет. наук в виде науч. докл. / А. Л. Буланкин. Краснодар, 1996. - 47 с.

40. Бурдов Г. Н. Низкоинтенсивный лазер для лечения и профилактики гинекологических заболеваний свиней / Г. Н. Бурдов // Ветеринария. — 2002. -№ 1.-С. 35-37.

41. Буянов А. А. О гормональном статусе у коров при фолликулярных кистах яичников / А. А. Буянов // Акушерство,, гинекология, искусственное осеменение и биология молочной железы сельскохозяйственных животных. Л;, 1976. - С. 190-193 :

42. Буянов А. А. О значении гонадотропных гормонов в развитии желтых тел беременности и полового цикла у коров / А. А. Буянов // Физиология, морфология и болезни животных: материалы 17-й науч. конф. Л, 1971. - С. 95-96.

43. Быховский В. М; О сущности и значении бальнеологических реакций / В. М. Быховский, Р. О; Хамзамулин // Вопр. курортологии, физиологии и лечеб. и физ. культуры. 1985. - № А. — С. 51-54. •

44. Варганов А. И. Дифференцированное, осеменение коров / А. И: Варганов // Ветеринария. 1993. - № 8. - С. 41-43.

45. Великанов В. И; Влияние селенопирана на восстановление . воспроизводительной системы коров после .отела / В. И. Великанов,

46. М. С. Лодяной // Новые фармакологические средства в ветеринарии: материалы 15-й междунар. науч.-практ. конф. — СПб., 2003. С. 10-11.

47. Визнер Э. Кормление и плодовитость сельскохозяйственных животных / Э. Визнер. М.: Колос, 1976. — 221 с.53: Винокуров А. В: Предупреждение бесплодия у коров / А. В: Винокуров // Ветеринария: 1972. 8. - С. 46-48.

48. Витвицкий В. М. Регуляция гликолиза в эритроцитах человека. Механизм стабилизации концентрации АТФ: дис. к. ф. м. н. — Пущино, 1981.-98 с.

49. Владимиров Ю. А. Перекисное окисление липидов в* биологических мембранах / Ю. А. Владимиров, А. И. Аргаков. М.: Наука, 1972. — 256 с.

50. Влияние ЭМИ КВЧ МСПИ О2 на функциональное состояние крови животных invitro / В. С. Авдеенко, И. И. Калюжный, Ю. О. Золотарь, А. П. Креницкий, А. В. Майбородин, В. Д. Тупикин // Миллиметровые волны в биологии и медицине. 2003. - № 3 (31). — С. 11-21.

51. Волков Е. С. Физиотерапия и санитарно-курортное лечение половых расстройств / Е. С. Волков. — Киев, 1985. 173 с.

52. Гавриш В. Г. Лазерная акупунктура при заболевании коров эндометритами / В. Г. Гавриш, А. В. Егунова, Д. В. Михайлов // Квантовая терапия в ветеринарии: сб. науч. тр. М., 2003. — С. 59.

53. Гавриш- В. Г. Лазерная аурокулопунктура при заболевании коров эндометритом / В'. Г. Гавриш, А. В. Егунова, Д. В. Михайлов // Шестая Международная научно-практическая конференция по квантовой медицине: тез. докл. М., 2000. — С. 237-238.

54. Гавриш В. Г. Профилактика послеродовых заболеваний репродуктивных органов коров / В. Г. Гавриш, А. В. Егунова, В. А.

55. Сидоркин // Современное развитие АПК: региональный опыт, проблемы и перспективы. Ч. 4/5. — Ульяновск, 2005. С. 361-363;

56. Гамарник Н. Г. Интенсификация, производства5 говядины / Н. Г. Гамарник, М. Ф. Кобцев, А. Н. Жуков. Новосибирск: Зап.-Сиб. кн. изд-во, 1979.-150 с.

57. Гамарник Н: Г. Способы содержания и воспроизводительная функция животных / Н. Г. Гамарник, В. Ф. Петров, В. А. Тараненко // Ветеринария. 1983. - № 12. - С. 50-51.

58. Гарабина И. А. ДЭНС-терапия в практике лор-врача / И. А. Гарабина // Мед. вестн. Екатеринбург - 2002. - Т. 1, вып. 2. - С. 53-56.

59. Гончаров В. П. Профилактика и лечение гинекологических заболеваний коров / В. П. Гончаров, В; А. Карпов. М1: Росагропромиздат, 1991. - 189 с.

60. Гончарова Е. Биотехнические средства при дисфункции яичников коров / Е.Гончарова // Главный зоотехник. — 2004. № 6. - С. 43-44.

61. Гордон А. Контроль воспроизводства сельскохозяйственных животных / А. Гордон. М.: Агропромиздат, 1988. — 414 с.

62. Горев Э. Л. Некоторые аспекты гормональной регуляции полового! цикла у коров / Э. Л. Горев // Ветеринария. 1968. - № 8. - С. 79-82.

63. Горлов И. Ф. Зависимость воспроизводительных качеств ремонтных телок от способа их содержания / И. Ф. Горлов // Животноводство. -1978; — № 12. С. 57-58.

64. Гормональная регуляция размножения у млекопитающих: пер. с англ. Под ред. К. Остина и Р. Шорта. М.: Мир, 1987. - 305 с.

65. Гормональный профиль у коровшри суперовуляции;/С. Н:,Хилькевич, .Е. А. Тяпугии, А. Г. Самоделкин и др. // Доклады РАСХН.- 1995.3.-С. 38-39. '

66. Грига Э. Н. Биологически активные вещества и: моцион в • профилактике акушерско-гинекологической патологии / Э. Н. Грига,

67. О. Э. Грига, Э. Э. Грига // Вестн: ветеринарии. 2005.-№ 35. -С. 57-60.

68. Грига Э. Н. Диспансеризация коров после отела / Э. Н. Грига //Зоотехния. 2003.-№ 5.- С. 27-28.

69. Грига Э: Н. Предупреждение бесплодия коров / Э. Н. Грига // Молоч. и мясн. скотоводство. 2003. - № 2. - С. 26-27.

70. Григорьева Г. С. Применение ДЭНС-терапии в комплексном лечении опорно-двигательного аппарата / Г. С. Григорьева. Екатеринбург, 2002. - Т. 1, вып. 3. - С. 52-55.

71. Григорьева М. Ю. Гормональная характеристика полового цикла у телок / М. Ю. Григорьева // Бюл. науч. работ ВНИИ животноводства. -1981.-№64.-С. 25-28

72. Григорьева Т. Е. Профилактика алиментарного и симптоматического бесплодия у коров, обусловленного минеральной недостаточностью: автореф. дис. . д-ра вет. наук / Т. Е. Григорьева. Воронеж, 1994. — 46 с.

73. Даровских В. Е. Рекомендации по нормализации функции размножения у коров / В. Е. Даровски-. -Дубровицы, 1989. 17 с.

74. Дашукаева К. Г. Повышение оплодотворяемости и профилактика перинатальной патологии у коров / К. Г. Дашукаева // Ветеринария. — 1996.-№7.-С. 41-43.

75. Девятков Н. Д. Миллиметровые волны и их роль в процессах жизнедеятельности / Н. Д. Девятков, М. Б. Галант, О. В. Бецкий. — М.: Радио и связь, 1991. 169 с.

76. Девятков. Н. Д. Влияние электромагнитного излучения миллиметрового диапазона длин волн на биологические объекты // Успехи физических наук. 1973. — Т. 110, вып. 3. - С.453 -454.

77. Дедов Ю. М. Сравнительное действие простагландинов Е. и Ф2 альфа на синхронизацию охоты у коров / М. Ю. Дедов, А. Чомаев // Молочное и мясное скотоводство. 1988. - № 3. - С.27-28.

78. Демидова Л. Д. Применение лазерного ветеринарного аппарата "Вега-МВ" при мастите коров / Л. Д. Демидова // Ветеринария. — 1996. — № 5. -С.-9-12.

79. Димов В. Метаболизм простагландина Р2а у овец. Идентификация на основе метаболитов / В. Димов // Животноводческая наука. 1987. -№ 6. - С.79-84.

80. Дмитриев В. Б. Применение эндокринологических методов в < зоотехнии / В. Б. Дмитриев //Животноводство. 1985. - № 5. - С.22-24.

81. Дьяконов Е. Ф.Содержание гонадотропных гормонов в сыворотке крови коров в течение полового цикла после обработки СЖК и электростимуляции: автореф. дис. канд. биол. наук/Е. Ф. Дьяконов. -Пушкин, 1967.-21 с.

82. Дюльгер Г. Н. Ультразвуковая диагностика ранних сроков беременности и бесплодия у коров / Г. Н. Дюльгер, И. В. Огородникова, П. А. Елкин // Ветеринария. 2003. - № 3. - С. 14-17.

83. Жаркий А. Ф. Рефлексотерапия в акушерстве и гинекологии /А. Ф. Жаркий, Н. А. Жаркий. Л.: Медицина, 1988. - 160 с.

84. Желайтис В. Индуцирование коровам полноценного полового цикла / В. Желайтис, Е. Анюлис // Материалы Всероссийской научной и учебно-методической конференции по акушерству, гинекологии и биотехнике размножения животных. Воронеж, 1994. - С. 52-53.

85. Жирков О. Г. Диагностика эструса и повышение оплодотворяемости коров / О. Г. Жирков // Биотехнология размножения сельскохозяйственных животных. Дубровицы, 1989. — Вып. 95. -С. 26-27.

86. Жуков П. Влияние экологических факторов на воспроизводство крупного рогатого скота / П. Жуков, В. А. Кленов //Актуальные проблемы и достижения в области репродукции и биотехнологии размножения животных. — Ставрополь, 1998. С. 188190.

87. Завадовский Б. М. Зоотехническая эндокринология в СССР. Проблемы зоотехнической экспериментальной эндокринологии / Б. М. Завадовский. -М, 1934. -Т. 1. С. 7-24.

88. Завадовский М. М. Теория и практика гормонального метода стимуляции многоплодия с.-х. животных / М. М. Завадовский. — М.: Колос, 1963.-677 с.

89. Завадовский М. М. Регулирование женского полового цикла у коров. Труды по динамике развития / М. М., Завадовский, Н. А. Эскин, Г. Ф. Овсянников. М, 1936. - Т. 9. - С. 95-98.

90. Заверюха? А. X. Пути интенсификации мясного скотоводства / А. X. Заверюха // Зоотехния; 1999. — №*5. — С. 2-6.,

91. Земсков В. Mi Фагоцитоз: физиологические и молекулярные аспекты / В. М. Земсков // Успехи совр. биол. 1984. - Т. 98, вып: 2(5). -С. 219-234.

92. Ы1.3ухрабов М. Метод контроля за воспроизводством стада / М. Зухрабов, О. Преображенский, Д. Ошкин // Молочное и мясное скотоводство. 2004. - № 8. - С. 19-20.

93. Иваницкий Г. Р. Биофизика на пороге нового тысячелетия: перфторуглеродные среды и газотранспортные кровезаменители / Г. Р. Иваницкий // Биофизика 2001. — Т. 46, вып.1. -С. 5-33.

94. Иванников А. А. Электропунктурная рефлексотерапия у коров при задержании последа / А. А. Иванникова. Воронеж, 1998. - 14 с.

95. Иванов Г. И. Влияние внесения азотсодержащих удобрений на воспроизводительную функцию коров и сохранность приплода / Г. И. Иванов // Гигиена, ветеринария и экология животноводства.

96. Чебоксары, 1994.-С. 159-160.

97. Ивенс И. Механика и динамика биологических мембран / И. Ивенс, Р. Скейлак. М.: Мир, 1982. - 304 с.

98. Илюшин В. М. Лазерный свет и живой организм / В. М. Инюшин. — Алма-Ата, 1970. 46 с.

99. Индукция . охоты и овуляции эстрофаном-и сурфагоном у коров / Л. И. Арджаев, П. И. Христиановский, С. В. Селин, Т. М. Кожанова, И. А. Авдеева // Зоотехния. 1990. —№ 5. - G.71-73.

100. Иноземцев В. П. Квантовая терапия коров при воспалительных заболеваниях матки и молочной железы: автореф. дисс. на соис. уч. степени док. вет. Наук. — Санкт-Петербург, 1999. 47 с.

101. Иноземцев В. П. Лазерное излучение как диагностика скрытого эндометрита у коров / В. П. Иноземцев, И. И. Балковой, Я. С. Стравский // Шестая Международная научно-практическая конференция по квантовой медицине: сб. науч. тр. М., 2000. — С. 239242.

102. Иноземцев В. П. Организация ветеринарного контроля за воспроизводством стада / В. П. Иноземцев, Б. Г. Таллер // Ветеринария. — 1993. -№ 2. С. 12-15.

103. Интенсивная технология воспроизводства стада / А. А. Шубин, Н. М. Писакова, Л. А. Шубина и др. // Зоотехния. 1993. - № 3. - С. 21-24.

104. Инюшин В. М. Биостимуляция лучом лазера и биоплазма / В. М. Инюшин. Алма-Ата: Казахстан, 1975. - 120 с.

105. Искусственное регулирование половой функции у высокопродуктивных коров / Г. Ф. Медведев, Е. Д. Голубева, Н. В. Медведева, М. А. Тейнена // Повышение эффективности производства молока и говядины. Горки, 1989. - С. 12-16.

106. Казеев Г. В Гомеопунктура при терапии акушерско-гинекологических заболеваний коров / Г. В. Казеев, Д. Д. Смирнов; А. В. Казеева // Материалы XII Московской международной гомеопатической конференции. М., 2002. - С. 120-122.

107. Казеев Г. В. Ветеринарная акупунктура: науч.-практ. руководство / Г. В. Казеев. М., 2000. - 398 с.

108. Казеев Г. В. Геопатогенные зоны и здоровье животных / Г. В. Казеев, А. В. Казеева // Акупунктура, биоэнергетика и нетрадиционные методы лечения животных: материалы науч.-практ. конф. М., 2005. -С. 40-42.

109. Казеев Г. В. Применение МИЛ-пунктуры и МИЛ-терапии в ветеринарной практике / Г. В. Казеев, А. В. Казеева, М. В. Чалая // Квантовая электроника в медицине и биологии: материалы второй Всерос. науч.-практ. конф.* по МИЛ-терапии. М., 1996. - С. 116-122.

110. Казеев Г. В. Стимуляция охоты у коров методом электропунктуры / Г. В. Казеев, Е. В. Варламов, А. В. Старченкова // Искусственное осеменение и профилактика бесплодия сельскохозяйственных животных. Ставрополь, 1988. - С. 21-24.

111. Казеев Г. В. Стимуляция охоты у коров методом электропунктуры / Г. В. Казеев, Е. В. Варламов // Ветеринария. 1988. - № 4. - С. 12- 14.

112. Квазиоптический КВЧ-генератор молекулярных спектров излучения атмосферных газов / А. В. Майбородин, А. П. Креницкий, В. Д. Тупикин, О. Ф. Трошин // Электронная промышленность. 200. - № 1. -С. 3-5.

113. Киричук В. Ф. Влияния электромагнитного излучения крайне высокой частоты на реологические показатели крови у больных стабильной стенокардией: материалы Росс. нац. конгресса кардиологов. М.: 2001. - С. 241.

114. Киякин А. Б. Исследование регуляции мембранных процессов в эритроцитах и их связи с жизнедеятельностью: дис: к. ф.-м. н. — М., 1986.- 153 с.

115. Кобыленков Н. М. Стимуляция и синхронизация охоты у тёлок / Н. М. Кобыленков, Ю. Д. Клинский // Ветеринария. 1986. - № 8.1. С. 59-60.

116. Козинец Г. И. Исследование системы крови в клинической практике / Г. И. Козинец, В. А. Макаров. М.: Триада-Х, 1997. - 480 с.

117. Котик А. Мембранный транспорт / А. Котик, К. Яначек. — М.: Мир, 1980.-338 с.

118. Кузник Б. Н. О влиянии разрушенных эритроцитов человека на свертываемость крови / Б. Н. Кузник // Физиологический журнал СССР. 1982. - Т. 48. - С. 11.

119. Лабораторные методы исследования в клинике: справочник / под. ред. В. В. Меньшикова. М.: Медицина, 1987. - 368 с.

120. Мадисон В. Синхронизация охоты крупного рогатого скота простагландинами ПГФ2а // Молочное и мясное скотоводство. — 2000. — № 7. С.9-14.

121. Мадисон В. В. Трансплантация эмбрионов в практике разведения молочного скота / В. В. Мадисон, ВI Л. Мадисон. М.: Агропромиздат, 1988.- 128 с.

122. Майбородин А. В. Электродинамическая модель взаимодействия КВЧ-волн и атмосферного воздуха в дыхательной системе / А. В. Майбородин, А. П. Крёницкий, О. В. Бецкий // Биомедицинские технологии и радиоэлектроника. 2002. - № 5-6. - С. 91-98.

123. Мандельштам А. Э;. Семиотика и диагностика женских болезней7 А. Э. Мандельштам. JI.: ЛО Медгиз, 1959. — 691 с.

124. Медведев F. Ф. Эффективность применения простагландинов тёлкам в зависимости от их. экстерьерных и интёрьерных признаков / F. Ф. Медведев, Н. В. Медведева // Биологически- активные вещества в животноводстве. -М., 1988. С. 73-77.

125. Медведев Г. Ф. Повышение эффективности применения простагландинов тёлкам с целью синхронизации полового цикла и оплодотворения / Г. Ф. Медведев, Д. Самба // Пути увеличение производства молока и говядины. — Горки, 1987! — С. 33-36.

126. Мингазов Т. А. Оплодотворяемость коров при использовании гормональных препаратов / Т. А. Мингазов, JI. В. Бабышева // Зоотехния. 1994. - № 5. - С. 29-30.

127. Миненков А. А. Низкоэнергетическое лазерное излучение красного инфракрасного диапазона и его использование в сочетанных методах физиотерапии: автореф. дис. . д-ра мед. наук / А. А. Миненков. -М, 1989.

128. Мифтахов М. С. Новые синтетические аналоги простогландинов / М. С. Мифтахов, И. X. Хабибулин // Зоотехния. 1990. - № 3. -С.59-61.

129. Михайлов Д. В. Лазерная терапия «в ветеринарной гинекологии / Д.В. Михайлов, В. П. Жирохов // Седьмая Международная научно-практическая конференция по квантовой медицине: сб. тр. конф. М., 2001.-С. 263-266.

130. Налбандов А. Сравнительные аспекты функции-желтого тела / А. Налбандов // Сельское хозяйство за рубежом. 1971. — № 10. — С. 2226. .

131. Нежданов А. Г. Влияние теплового стресса на функциональную активность яичников и фитоплацентарную систему у коров / А. Г. Нежданов, К. Г. Дашукаева // Ветеринария. 1995. - № 6. - С. 26-28.

132. Нежданов А. Г. Физиологические основы профилактики бесплодия коров: автореф. дис. д-ра вет. наук / А. Г. Нежданов. — Воронеж, 1987. -30 с.

133. Нежданов А. Г. Стероидопродуцирующая функция яичников коров при воздействии гормональных препаратов / А. Г. Нежданов, Н. А. Соловьев // Сельскохозяйственная биология. 1990. - № 4. - С. 75-84.

134. О регуляторных механизмах развития фолликулов и овуляции у крупного рогатого скота / Р. Б. Шириева, В. М. Шириев, С. Н. Хилькевич и др. // Сельскохозяйственная биология. — 2000. — № 2. — С. 56-59.

135. Околелов В. И. Электронейростимуляция коров в послеродовой период / В. И. Околелов // Ветеринария. 1992. - № 12. - С. 35-37.

136. Особая роль системы «миллиметровые волны водная среда» в природе / Н. И. Синицын, В. И. Петросян, В.' А. Ёлкин, Н. Д. Девятков, Ю. В. Гуляев, О. В. Бецкий // Биомедицинская радиоэлектроника. — 1999.-№ 1.-С. 3-21.

137. Панова Е. Г. Изменение гормонального статуса коров при его оценке радиоиммунологическим методом / Е. Г. Панова, Ю. С. Бенемецкий, П. Hi Никоноров // Сельскохозяйственная радиология: тез. докл. 3-й, Всесоюз. конф. Т. 3. Обнинск, 1990. - С. 89.

138. Победимский Н. М. Применение лазеров в акушерстве и гинекологии / Н. М. Побединский, В. М. Зуев, М. Ковалев // Лазеры в медицинской практике. М., 1992. - С. 196.

139. Полянцев Н. И. Применение биорегуляторов половой функции коров / Н. И. Полянцев // Зоотехния. 1999. - № 6. - С.29-30.

140. Преображенский О. Н. Стресс и патология размножения сельскохозяйственных животных /О.Н. Преображенский // Ветеринария. 1993.-№ 4.-С. 38-41.

141. Применение лазера в ветеринарии / И. С. Панько и др.. Киев: Урожай, 1987. - 88 с.

142. Прокофьев М. И. Лечение гипофункции яичников / М. И.,Прокофьев //Ветинформ. 1999. - № 1. - С. 3.180: Прокофьев М. И. Организация воспроизводства скота в' новых хозяйственных условиях / М. И. Прокофьев // Зоотехния. — 1991. — № 12. С.46-48.

143. Прокофьев М. И. Регуляция размножения сельскохозяйственных животных / М. И: Прокофьев. Л.: Наука, 1983. - 263 с.

144. Простагландин Р2а и воспроизводство стада / Б. Н. Ермолов, Г. Е. Пономарёв, Ю. Э: Лилм, А. О. Мянник, Н. Э. Самель // Ветеринария. — 1985. — № 2. С.51-60.

145. Рассадников С. А. Клиническое проявление эструса у коров и тёлок при введении эстрофана / С. А. Рассадников // Современные проблемы профилактики и терапии незаразных болезней сельскохозяйственных животных. Л 1984. - С. 66-68.

146. Резонанс молекулярной системы как термодинамическое фазовое состояние / В. И. Петросян, Ю. В. Гуляев, Э. А. Житенева, Н. И. Синицын // Радиотехника и электроника 1998. - Т. 43. — № 7. — С. 868-871.

147. Родштат И. В. Новые физиологические подходы к оценке КВЧ-воздействия на биологические объекты / И. В. Роштат // Биомедицинская радиоэлектроника. — 1998. — № 3. —G. 11-16.

148. Середин В. А. Биологическая система стимуляции воспроизводства в. скотоводстве / В:, А. Середин // Вестник ветеринарии. 1997. - № 2. — С. 10-20.

149. Середин В. А. О желтом теле, его персистентности и оплодотворяемости / В. А. Середин // Вестник ветеринарии. 1998. — № 9. - С.72-80.

150. Середин В. А. Цикл воспроизводства в скотоводстве и концепция уровней регуляции репродуктивной функции / В. А. Середин // Аграрная Россия. 2006. - № 4. - С. 7-17.

151. Синяев В. А. Лазерное излучение: понятие свойства, история изучения и использования / В. А. Синяев // Нижегородский ветеринарный вестник. 1996. - № 2. - С. 32-35.

152. Хилькевич С. Н. Синхронизация половых циклов в программе трансплантации эмбрионов / С. Н. Хилькевич, Е. А. Тяпугин, А. Г. Самоделкин // Зоотехния. 1993. - № 4. - С. 24-25.

153. Храмцов В. В. Влияние сезонных факторов на воспроизводительные функции и продуктивность коров / В. В. Храмцов, Р. А. Шундулаев, Н. А. Савченко // Ветеринария. 2004. -№ 11.-С. 13-15.

154. Черемисинов Г. А. Отечественные простогландиновые препараты в акушерской и гинекологической практике / Г. А.

155. Черемисинов, А. А. Карамышев, В. Н. Карышов // Сб. науч. тр. ВИИНБЖ.-Воронеж, 1990.-С. 111-115.

156. Черницкий Е. А. Структура и функции эритроцитарных мембран / Е. А. Черницкий, А. В. Воробей. Минск: Наука и техника, 1981. — 242 с.

157. Чернышова М. Применение гонадотропина СЖК и простагландина Р2 альфа для молочного скота / М. Чернышева // Молочное и мясное скотоводство. — 1997. № 2. - С. 34-36.

158. Ширисв В. М. Применение препаратов; отечественного производства для стимуляции охоты у коров. РНТИК; / В. М. Шириев, А. Г. Самоделкин. Информлисток № 06-081-99. — Уфа, 1999. - 4 с.

159. Шириев В. М. Роль фолликулогенеза при вызывании суперовуляции / В. М. Шириев, А. Г. Самоделкин, С. Н. Хилькевич // Зоотехния. -2001. № 10; - С. 26-27.

160. Щеглова Н. Н. Синхронизация половой охоты у коров / Н. Н.

161. Щеглова, Е. Ф. Дьяконов // Воспроизводство с.-х. животных и криоконсервация гамет и эмбрионов. Л., 1986. - С. 20-21.

162. Эрнст JI. К. Трансплантация эмбрионов сельскохозяйственных животных / JL К. Эрнст, Н. JI. Сергеев. М.: Агропромиздат, 1989. — 300 с.

163. Эрнст Л. К. Результаты применения простагландина для синхронизации охоты у коров-доноров и тёлок-реципиентов / Л. К. Эрнст, Н. И. Сергеев // Молочное и мясное скотоводство. 1984. - № 3. - С. 29-32.

164. Abecia J. Jugular and-ovarian venous profiles of progesterone and. associated endometrial progesterone concentrations in pregnant' and nonpregnant ewes / J. Abecia, S. Rhind, P: Goddard // Anim. Sci. - 1996. - V. 63. -P: 229-234.

165. Archbold- Z. F. Fucidence and treatment of abnormal postpartum ovarian function in dairy cows. Terogenology / Z. F. Archbold, S. N. Norman

166. E.I. -Bliss, 1990. Vol. 34. - № 2. - P. 283-290.

167. Armstrong D. T. Superovulation of immature rats by continuous infusion of folliclestimulating hormone / D. T. Armstrong, M. A. Opavsky // Biol. Reprod. 1988. -V. 39. -P.511-518.

168. AsianS.Veteriner do gum vet jenekolojide akupunktur / S. Asian, C. Kilicogu // Ancara Univ. Veter. Fak. Derg. 1993. - Vol. 40. - P. 38.

169. Assesment of the postpartum reproductive performance of the Icelandic dairy cow duriug u 3 yeur period / J. Elsdon, T. Olafsson // Postpartum Reprod. Peraorm Isel. Dairy Cow Uppsala. - 1988. -P. 1-15.

170. Bachler J. Exemen des cas de sterite de la vaute de Z Urinersite de Berhe, Schweis. Arch. Tierhein. / J. Bachler. 1990. - Vol. 102. - № 7. - P. 407512.

171. Bentele W. Vergleich verschiedener Behandlunsmethoden mit einem Prostaglandinanalog bei amöstrischen Rindern / W. Bentele, R. Humke // Tierärstl. Umschr. 1982. - V. 37. - № 2. - S. 243.

172. Berger G. Zur Häfigheit und Therepie von Ovarialzysten'beim RindErgebnisse aus der zuchthygienischen Betreung einer grossen Milchirehherde / G. Berger // Mh.Vet.Med. 1985. - V. 40. - S. 433-436.

173. Bergstom S. The isolation of prostaglandin / S. Bergstom // Acta Chem. Scand. 1957. - V. 11. - P. 1086.

174. Borjunovie S. Sinhronizadiucija estrusakrava I junica (na1 individualuom sektoru) primenom prostaglaudina F2-Alpha-"Dinolytic" / S. Borjunovie, O. Danicic, D. Vukovic // Vet. Grasnik. 1986. - V. 40. - № 2-3.-P. 165-169.

175. Botella Llusia J. Endocrinoljgy. Saunders Co., Philadelphia -London. - Toronto, 1973. — 516 p.

176. Boyd H; Progesterone assays and rectal palpation in preservise management of a dairy herd / H: Boyd, C. Munro // Vet,. Ree. 1979; -№ 104.-P. 341-343.

177. Britt J. Influence of nutrition and weight loss on reproduction and early embrionic death in cattle / J. Britt // Proc. XVIIWorld Buiatrics Congr. 1992.-V. 2.-P. 143-149.

178. Britt J. Ovulation, estrus and endocrine response after GnRn in early p-p cattle / J. Britt, R. Kittok, D. Harisson // J. Anim. Sei. 1974. - V. 39. -P. 915.

179. Brunner M. A. Exogenous hormones and luteal function in hysterectomies and intact heifers / M. A. Brunner, L. E. Donaldson, W. Hansel // J. Dairy Sei.- 1969. №52. - P. 1849-1854.

180. Burell W. New technology in estrous synchronization sides producers. /.W. Burell //Utah Farmer-Stockman. 1998. - V. 108. -№ 5. -P. 9.

181. Burfenig R. Synchronization of estrus with Pg F2a in beef cattle / R.r Burfenig // Anim Sei. 1978. - V 47.-№ 10. - P. 999-1003:

182. Busch W. Untersuchungen zur Anwendung von Gn-Rh zur Ovulationsynchronization' bei Färsen / W. Busch, F. Siebeckr //. Mh.Vet.-Med. 1984. -№ 12. - S. 397-399.

183. Callesen H. Premature ovulation in superovulated cattle /H: Gallesen, T. Greve, P. I-Iyttel // Theriogenology. 1987. - № 28. - P. 155-166.

184. Chupin D, Cognie J., Combarnous Y. Effect of purified LH and FSH on ovulation in the cow and ewe. In.: Roche J.F. and O'Callaghan D:0.eds.) Follicular Grows and Ovulation in Farm Animals. Martinus Nijhoff Publisheres. The Hague, 1987. P. 63-72.

185. Control of the bovine estrous cycle with melengestrol acetate (MGA): A review / D. Patterson, G; Kiracofe, J. Stevenson, L. Corah // J. Anim.Sci. 1989.-V, 67.-№8.-P. 1895-1906.

186. Cooper M. Control of estrous cycles of heifers with a synthetic Prostaglandine analogue / M. Cooper // Vet. Ree. 1974. - № 95. - P.200-203.

187. Dailey R. Synchronization of estrus in dairy heifers with prostaglandin F2a with or without estradiol benzoate / R. Dailey, R. James, E. Inskeep et al. //J. Dairy Sei.- 1983.-№60.-P. 881-886.

188. Daily R. Use of prostaglandin F2 or gonadotropin releasing hormone in treating problem breeding cows / R. Daily, E. Inskeep, SR. Washburg et al. //Jj Dairy Sei. — 1983. — № 66. — P: 1721-1727.

189. Dial G.D. and Bevier G.W. Pharmacologic control of estrus and ovulation in? the pig. In: Morrow D.A. (ed). Current Therapy in Theriogenology 2. W.B. Saunders Co., Philadelphia, 1986. P.912-914.

190. Die Anwendung von Prostaglandin F2 zur Brunstsynchronisation bei Färsen / W. Busch, K. Fulenberger, S. Bach, M. Müller, R. Slucka // Mh. Vet.-Meg. 1980. -№ 11. - S. 411-414.

191. Donaldson L. Embryo production in superovulation cows: transferable embryos correlated with total embryo / L. Donaldson // Theriogenology. -1984.- № 21. P. 517-524.

192. Donaldson L. Effect of LH on embryo production in superovulated cows / L. Donaldson, D. Ward // Vet. Ree. 1986. - № 119. - P. 625-626.

193. Ein Bertrag zur Estrumate-Behandlung stillbrünstiger Kühe / G. Duz, Grunert, W. Rietbrock, H. Dehoust // Zuchthygiene.- 1977. № 13. - P.49.

194. Eley R. Luteolytic effect of cestrone sulphate on cyclic beef heifers / R. Eley, W. Thatcher, F. Bazer // J.Reprod. Fertil. 1979. - № 55. -P. 191-193.

195. Elliasson K. Studies on prostaglandin: Oceurence, formation and biological actions / K. Elliasson // Acta Physiol. Scand. 1959. - V. 46. -Suppl.158. - P. 1-73.

196. Erprobung des Gonadotropin-Releasing hormones Gn-Rh vet "Berlin-Ghemie" zur Auwendung in der Tierproduktion/J.Klinskij, G.Shirkow, N.Konovalov et al. // Mn. Vet.-Med. 1984. - № 2. - P. 177-179.

197. Euler von U. Zur Kenntnis der pharmakologischen Wirkungen von natiosekreten und extrakten männlicher accessorischer Geschlechtedruren // Arch Exp. Path. Pharmach. 1935. - V. 17. - S. 5-78.

198. Fontaubert Y. Synchronisation des chaleurs chez la vahe laitiere: bilan de l'utilisation du Synchro-Mate B pendant cinq annees successives / Y. Fontaubert, J. Cochaud, M. Terqui // Prod. anim. 1989. - V. 2. - № 5. -S. 317-323.

199. Foutaubert Y. La maitrise des cycle sexuel chez les bovines. Le point en 1988 / Y. Foutaubert//Prod. anim. 1988. -№ 3. - P. 179-187.

200. Gesprach C. Role of the anitibody Fe in the immunoclearance / C. Gesprach, S. Abita // Mol. Farmacol. 1982. - Vol. 21. - P. 78.

201. Ginther O. Composition and characteristics of follicular waves during the bovine estrous cycle / O. Ginther, J. Kastelic, Z. Knopf // Anim.Reprod.Sci. 1989. - V. 20. - P. 187-200.

202. Gjaz A. Treatment and control of cystic ovarian disease in dairy cattle: a review / A. Gjaz, M. Fahning, R. Zemjanie // Br. Vet. J. 1987. - № 43. -P. 226-237.

203. Godfrey R. Evaluation of luteolysis and estrous synchronization by prostaglandin analog (luprostinol) in Brahman cows and heifers / R. Godfrey, M. Guthrie, D. Neuendorf// J.Anim. Sci. 1989. - V. 67. - № 8. -P. 2067-2074.

204. Godke R. Plasma progesterone levels for diagnosis of anestrous beef cattle prior to PgF2 treatment / R. Godke, R. Jugraham, L. Archibald // Theriogenology. — 1979. V. 11. -№ 1. -P. 98.

205. Greenstein J., Murray R., Foley R. Effect of exogenour hormones on the reproductive processes of the cycling dairy heifers//J.Dairy Sci.-1958.-N.41.-P.1834.

206. Greve T., Cellesen H:, Hyttel P. Charakterization of plazma LH profiles in superovulated dairy cows"// Theriogenology. — 1984. V. 21. - P. 237.

207. Griinert E. Female genital system / E. Griinert // Clinical Examination of Cattle. Verlag Paul Parey, Berlin and'Hamburg, 1979. P. 323-340.

208. Hamilton S. Characterization of ovarian follicular cysts and associated endocrine profiles in dairy cows / S. Hamilton S, H. Garverick, D. Keisler et all. // Biol. Reprod. 1995. - V. 53. - P. 890-898.

209. Hansel W. New concepts of the control of corpus luteum function / W. Hansel, J. P. Dowd // J. Reprod. Fertil. 1986. - V. 78.- P.755-768.

210. Harrison L. Cloprostenol induced luteal regression in the beef cow. 1. Ovarian response and endocrine changes / L. Harrison, R. Randel, D. Forrest et al. // Theriogenology. 1985. - № 23. - P. 511-521.

211. Herzog H. Vermehrte Kenntnisse über den Brunstzyklus / H. Herzog // Schweiz.Braunvick. 1989. -V. 1. - S. 14-17.

212. Hodges R. A randomized clinical trial of the effect of the time of administration of cloprostenol on detection of estrous in dairy cattle / R. Hodges, M. White, C. Guard // Can.Vet.J. 1988. - V. 29. - № 4. - P. 343345.

213. Hormonuntersuchungen bei Superovulation an Kühen / M. Kitzig, E. Kanitz, G. Blödow et al. // Mh. Vet.-Med. 1984. - V. 39. -N 6. - S. 585591.

214. Humphrey W. Effects of FSH/LH ratio on ovulatory response / W. Humphrey, B. Murphey, D. Rieger et al. // Theriogenology. 1979. - № 11.-P. 109.

215. Johnson C. Time the onset of estrus after the injection.of heifers with cloprostenol / C. Johnson // Vet. Ree. 1978. - № 103. - P. 204-206.

216. Kesler D. Ovarian cysts in -dairy cattle: a review / D. Kesler, H. Garverick // J. Anim. Sei. 1982. - V. 55. - P. 1147-1159.

217. King M. Effect of stage of the estrous cycle on interval to estrus after PG-F2 in beef cattle / M. King, G. Kiracof, J. Stevenson et al. // Theriogenology. 1982. - № 18. - P. 191-200.

218. Knutson R. Influence of nutrition on serum concentrations of progesterone, luteinizing hormone and estrous behavior in dairy heifers / R. Knutson, R. Allrich // J.Anim. Sei. 1988. - V. 66. - № 1. - S. 90-97.

219. Kothbaner O. Uber die Acupunctur and Neuraltherapie bie Fruchbarkeisstorungen des weiblichen Riudes, Diagnose and Therapie / O. Kothbaner // Tierarzie. Umsehe- 1990. Vol. 45. - № 4. - S. 225-237.

220. Kurzrok A. Biochemical studies on human semen / A. Kurzrok, C. Lieb//Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 1930.-V. 123.-№4.-P. 355.

221. La transplantation des embryons dans le cadre de meda-test Perrin J. Reprod. bovines anoestrus post-partum, transplant. Embryonaire // C. r. journees inf. UNCEJA-ITER, mars, 1982. Paris, 1983. - P. 121-125.

222. Lerner S. Age, dose of FSH and other factors affecting superovulation in Holstein cows / S. Lerner, W. Thayne, R. Baker et al.,// J. Anim. Sei. -1986.-№63.-P. 176-183.

223. Lewis P. Indomethacin inhibits estrogen induced luteolysis in heifers / P. Lewis, J. Wassen // J. Anim. Sei. 1974. - № 39. - P. 992.

224. Lindseil C. Variability in FSH: LH rations among batches of commercially available gonadotropins / C. Lindsell, K. Rajkumar, A. Manning // Theriogenology. 1986. - № 25. - P. 167.

225. Litch S., Condon W. // Mol. and Cell. Endocrinol. 1988. - V. 57. -№. 1-2.-P. 81-85.

226. Louis T. Intrauterine administration of prostaglandin F2 in cows. 2. Progesterone, estrogen, LH, estrus and ovulation / T. Louis, ,H. Hefs, D. Morrow // J.Anim.Sci. 1974. - № 38. - P. 347-353.

227. Macmillan K. Prostaglandin responses in dairy herd breedingprogrammers / K. Macmillan//N.Z. Vet J. 1983.-№ 31.-P. 110-113.

228. Macmillan K. Effects of supplemental progesterone on pregnancy rates in cattle / K. Macmillan, V. Taufa, A. Day et al. // J. Reprod. Fertil. -1991. — № 43. — P. 304-306.

229. Markusfeld O. Body condition score, nealth, yirld and fertility in dairy cow / O. Markusfeld, N. Golon, E. Ezra // Voter. Res. 1997. - Vol. 141. - № 3. - P. 67-72.

230. Mishell D. — In vol: The year book of obstestrics and gynecology 1974. Year Book Medical Publ. - Chicago, 1974. - P. 250-265.

231. Monniaux D. Action of PMSG on follicular populations in the heifer / D. Monniaux, M. Danielle, W. Gibson // J. Reprod. Fertil. 1984. - № 10. -P. 243-253.

232. Moor R. Intraovarian control of folliculogenesis: limits to superovulation / R. Moor, Th. Kruip, D. Green // Theriogenology. — № 21. — P. 103-115.

233. Moor R. Gonadotrophin induced abnormalities in sheep oocytes after superovulation / R. Moor R., J. Osborn, J. Crosby // J. Reprod; Fertil. -1985.-№74.-P. 167-172.

234. Murphy B. Variability in gonadotropin preparation as a factor in superovulatory response / B. Murphy, R. Mapletoft, J. Manns et al. // Theriogenology. 1984. - № 21. - P. 117-125.

235. Nash J. Effects of reproductive performance on administration of GnRH to early postpartum dairy cows / J. Nash, L. Ball, J. Olson // J. Anim. Sei.-1980.-№50.-P. 1017-1021.

236. Nazar L. Ification of parturinion in cattle effect of Triamenolone pretreatment on the incindence of retained placenta / L. Nazar at al. // Canad. Veter. J. 1994. - Vol. 35. -№ 8. - P. 491-496.

237. Newcomb R. Conception rate after uterine transfer of cow eggs in relation to synchronization of oestrus and age of eggs / R. Newcomb, L. E. Rowson // J/Reprod.Fertil. 1975. - V. 43. - P. 539-541.

238. Ngujen Van Quan. Acupuncture chinoise, pratique / Ngujen Van Quan-P, 1930.

239. Odde K. A review of synchronization of estrous in postpartum cattle / K. Odde // J. Anim.Sci. 1990. - V. 68. - № 3. - P. 817-830:

240. Opavsky M. Effects of luteinizing hormone on superovulatory and steroidogenic response of rat ovaries to infusion of follicle stimulating hormone / M. Opavsky, D. Armstrong // Biol. Reprod. 1989. - № 40. -P. 15-25.

241. Paisley L. Mechanisms of therapy for retained fetal membrane and uterine infections of cows: A Review / L. Paisley // Theriogenology. — 1986. -V. 25.-P. 31.

242. Peters J. Synchronisation of estrus in beef cattle with PF2a and estradiole benzoate / J. Peters, J. Welch, J. Lauderdale et al. // J. Anim. Sei.-1977. -№'45. -P. 230-235.

243. Plasma oestrogen and progesterone in relation to superovulation and egg recovery in- the cow „ / W. D. Booth, R. Newcomb, H7 Strange, L.

244. Rowson // Vet. Ree. 1975. - № 97. - P. 366-369. '305. --- Pierson R. Ultrasonography of the bovine ovary / R. Pierson, O. Ginther // Theriogenology. 1984. - V. 21. - P. 495-504.

245. Plunkett S. Prostaglandin F2a for lactaning dairy cows with a palpable corpus luteum but unobserved estrus / S. Plunkett, J. Stevenson, E. Call // J. DairySci. 1984. - № 67. - P. 380-387.

246. Roberts S. Veterinary Obstetrics and Genital Diseases / S. Roberts // Theriogenology. Published by the author: Woodstock, Vermont, 1986. -483 p.

247. Robinson N. Effect of treatment with progesterone on pregnancy rate and plasma concentrations of progesterone in Holstein cows / N. Robinson, K. Leslie, J. Walton // J. Dairy Sei. 1989. - № 72. - P. 202-207.

248. Rowson L. The use of 297 Prostaglandine for synchronization of oestrus in cattle / L. Rowson, R. Terwit, A. Brand // J. Reprod. Fert.1972.- № l.-P. 145-150.

249. Schally A. The hypotalamus and reproduction / A. Schally, A. Arimura // Am. J. Obstet. Gyn. 1972. - V. 114. - P. 423-442.

250. Schally A. Usolation and progerties of the FSH and LH releasing hormone / A. Schally, A. Arimura, J. Babu // Biochem. Biophys. Res. Com. -1971.-№43.-P. 383-399.

251. Schneebeli J. Die Bedentung der Interostrrusfollikel bei der Zyklus Steuerung mittels Prostaglandin beim Rind / J. Schneebeli, R. Dobeli // Zuchtgiene. 1987. - V. 22. - № 3. - S. 123.

252. Segal A.W. Kinetics of oxugen consumption by phagocytosig human neutrophils / A. W. Segal, S. B. Coade // Bioclem. Biophys. Res. Commun. 1978. - Vol. 84, №3. - P. 611-617.

253. Stevenson J. Sage of estrous cycle, time of insemination, and seasonal effects on estrous and fertility of Holstein heifers after prostaglandin F2a / J. Stevenson, M. Schmidt, E. Call //J.Dairy Sei. 1984. - V. 67. - № 8. -P. 1798-1805.

254. Superanalog LOH-RH (D-Tle6-Pro-NH-Et9) LH-RH. 7. Lecbä syndromu ovari/älnich cyst /Sebläk Libor. Oicha Josef, Strakovä Jana, Picmausova Dagmar, Olsa Tomas, Minarik Pavel // Biol, a . chem. zivoc. Vyroby. Vet. 1990. - 26. -№ 1. - S. 67-77.

255. Szenci O. Evaluation offaice ultrasonographic diagnoses in cows by measuring plasma levels of bovine pregnancy-associated glycoprotein J / O.

256. Szenci, M.A.M. Taveme, J.F. Beckers et al. // Voter. Rec. 1998. - Vol. 142. -№ 12.-P. 304-306.

257. Tanabe T. Synchronized estrus and subsequent conception in1 dairy heifers treated with prostaglandin F2. 1. Influence of stage of cycle at treatment / T. Tanabe, R. Hann //J.Anim. Sci. 1984. - № 58. - P. 805-811.

258. Trounson A. Effect of delayed insemination of in vitro fertilization culture and transfer of human embryos / A. Trounson, L. Mohr, C. Wood et al. // J. Reprod. 1988. - № 64. - P. 285-294.

259. Villabez-Martinez J. Effect of actinomycin L on the pituitary respons to LH-RH / J. Villabez-Martinez, A. Arimura, A. Schally // Acta enuocrinol.- 1976. -V. 81. -P. 73-81.

260. Welch J. Control of estrus in lactating beef cows with prostaglandin F2a and estradiol benzoate / J. Welch, A. Hackett, C. Cunningham // J.

261. Anim. Sci. 1975. — № 91.-P. 1686-1692.

262. Wenkoff M. Estrus synchronization in cattle. In: Morrow D.A. (ed). Current Therapy in Theriogenology. 2. W.B. Saunders Co., Philadelphia, 1986.-P. 158-162.

263. Wenkoff M. The management of drug-induced manipulation of the estrous-cycle in normal cows and heifers / M. Wenkoff // Cfn.Vet.J. — 1987.- V. 28. -№.6. S. 366-373.

264. Wiltbank J. Effects of various forms and level of estrogen alone or. incombinations with gonadotrophins on the estrous cycle of beef heifers / J. Wiltbank, J. Ingall, W. Rowden // J. Anim. Sei. 1960. - № 20. -P. 341-346.

265. Youngquist R. Cystic follicular degeneration in the cow. In: Morrow DA (ed.), Current Therapy in Theriogenology. WB Saunders / R. Youngquist. Philadelphia, 1986. - P. 349-354.

266. Zaoral J. Improvement of the fertility of cows inseminated in synchronized estrus / J. Zaoral, J. Kvapilik, B. Krnaver // Sei. agr. bohemoslov. 1988. - V. 20. - № 3. - P. 175-180.