Биосинтез терепеноидов в культуре клеток ментолсинтезирующих мят тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.12, кандидат биологических наук Родов, Виктор Семенович

• Родов, Виктор Семенович
• кандидат биологических наук
• 1984

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Родов, Виктор Семенович

ВВЕДЕНИЕ.

Глава I. ОСОБЕННОСТИ БИОСИНТЕЗА КОМПОНЕНТОВ ЭФИРНОГО МАСЛА

В КУЛЬТУРЕ КЛЕТОК РАСТЕНИЙ (Обзор литературы)

1.1. Эфирные масла и особенности их биосинтеза у мяты

1.2. Основные черты метаболизма растительных клеток в культуре.

1.3^ Эфирные масла в культурах тканей и клеток растений. Культура тканей мяты.

1.4. Факторы, влияющие на маслообразовательный процесс в условиях in vitro

1.5. Трансформация терпенов и их предшественников в культурах клеток растений

Глава 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДА ИССЛЕДОВАНИЙ.

Глава 3. ИССЛЕДОВАНИЕ НАКОПЛЕНИЯ ТЕРПЕНОВДОВ В КУЛЬТУРЕ

ТКАНЕЙ И МЕТОК РАЗЛИЧНЫХ ВВДОВ МЯТЫ.

3.1. Инициация суспензионных культур.

3.1 Л. Получение суспензионной культурыМ.piperita

3.1.2. Получение суспензионной культуры М. canadensis ;

3.1.3. Влияние регуляторов роста на инициацию суспензионных культур.

3.2. Динамика клеточной популяции суспензионной культуры мяты

3.3. Накопление эфирного масла в каллусных тканях мяты

3.4. Накопление эфирного масла в суспензионной культуре мяты

Глава 4. БИОТРАНСФОРМАЦИЯ МОНОТЕРПЕНОВ В КУЛЬТУРЕ КЛЕТОК

МЯН. НО

4.1. Общие закономерности процесса . ПО

4.2. Результаты би о трансформации ментона.

4.3. Результаты биотрансформации иэоментона, пи-перитона и пулегона

Глава 5. СТЕТКТУИЮ-ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ И ГЕНЕТИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ БИОСИНТЕЗА ТЕРПЕНОИДОВ В КУЛЬТУРЕ КЛЕТОК МЯТЫ (Обсуждение результатов)

5.1. Биосинтез эфирного масла in vitro и in vivo : сходство и различия.

5.2. Генетический контроль биогенеза терпеноидов в культуре клеток мяты

ВЫВОДЫ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Биосинтез терепеноидов в культуре клеток ментолсинтезирующих мят»

Актуальность проблемы. Документами ХХУ1 съезда партии и последующих пленумов ЦК КПСС предусматривается активное привлечение достижений фундаментальной науки для решения прикладных задач сельского хозяйства, в частности, генетики и селекции культурных растений /1,2/. На это указывает также постановление ЦК КПСС и Совета Министров СССР "О дальнейшем развитии физико-химической биологии и биотехнологии и использовании их достижений в медицине, сельском хозяйстве и промышленности /3/.

Одной из групп растений, прогресс в селекции которых тесно связан с развитием новых биологических подходов, являются эфиро-масличные культуры, в том числе мята. Использование мятного эфирного масла в медицине, пищевой и парфюмерно-косметической промышленности определяется присутствием в его составе наиболее ценного терпенового компонента - ментола. Возделываемые в настоящее время в производстве сорта мяты характеризуются относительно невысоким накоплением ментола в эфирном масле, что обусловливает необходимость селекции данной культуры на этот признак. Особенно актуальной эта задача становится в связи с активным вовлечением в селекционный процесс обладающих широким адаптивным потенциалом дикорастущих нементольных видов мяты /46,54,69/.

Теоретической основой селекции мяты на повышенное содержание ментола в эфирном масле являются представления о путях биосинтеза этого компонента и их генетической регуляции.Несмотря на значительный объем проведенных к настоящему времени исследований, результатом которых явилось создание ряда биогенетических схем /136, 146,155,167,194/, многое в биосинтезе ментола остается пока неясным.

Используемые для исследования этих вопросов генетические и биохимические методы не всегда дают однозначно интерпретируемую информацию и нередко отличаются трудоемкостью и сложностью. В связи с этим представляется целесообразным расширение методических подходов к данной проблеме за счет использования новых модельных объектов, в частности, культур изолированных клеток, сочетающих простоту организации и доступность экспериментальным воздействиям с сохранением геномной структуры исходных организмов.

Кроме того, изучение способности изолированных клеток эфиро-масличных растений, в том числе мяты, продуцировать и трансформировать терпеноидные компоненты эфирных масел представляет значительный интерес в связи с оценкой перспектив биотехнологического получения этих ценных вторичных соединений.

Исследование образования эфирных масел в условиях культуры in vitro позволяет также рассмотреть ряд теоретических аспектов регуляции вторичного метаболизма в растительных клетках и связи этого процесса с уровнем дифференцировки системы и условиями ее функционирования.

Цель и задачи исследований. Целью работы является изучение возможности использования культуры клеток генетически различных форм мяты как модельного объекта для уточнения некоторых закономерностей биосинтеза терпеноидных соединений, в частности, ментола, и выявления генетических и биохимических механизмов накопления повышенных количеств этого компонента.

Для реализации поставленной цели было необходимо решить следующие задачи.

1. Получить клеточные культуры из листьев ментолсинтезирую-щих форм мяты, оптимизировать условия их выращивания и дать мор-фо-физиологическую характеристику объектов.

2. Оценить биосинтетическую способность полученных клеточных культур и факторы, влияющие на ее реализацию.

3. Исследовать процесс трансформации экзогенных монотерпенов изолированными клетками мяты и рассмотреть превращения основных предшественников ментола в клеточных культурах различного генетического происхождения.

Научная новизна. Впервые получены и исследованы клеточные культуры, происходящие из листьев возделываемых ментолсинтезирующих видов MflTHlMentha piperita(4n), Mrcanadensis (4n) и межвидовых гибридов с участием второго вида. Показана способность данных культур к образованию свободных и гликозидносвязанных монотерпенов и изучена изменчивость каллусных штаммов различного происхождения. Выделены штаммы, накапливающие ментол в качестве основного терпенового компонента. Определены факторы, нормализующие состав эфирного масла в культуре in vitro.

Исследован процесс трансформации экзогенных монотерпеновых кетонов в клеточных культурах различных видов мяты и выявлены системы (штамм - трансформируемый компонент), обеспечивающие высокий уровень накопления ментола в составе продуктов биотрансформации.

Выявлены генетически обусловленные биохимические механизмы повышенного накопления ментола у вида М. canadensis , связанные с активацией дополнительных путей биосинтеза. Предложена уточненная схема биогенеза ментола у мяты.

На основе полученных экспериментальных данных разработан косвенный метод оценки геномной структуры различных форм мяты по генам, контролирующим биосинтез основных терпеновых соединений.

Теоретическое и практическое значение. Существенно уточнены теоретические представления о путях биосинтеза ментола. Выявленные механизмы повышенного накопления ментола могут служить основой для селекции мяты на качество эфирного масла. Разработанный косвенный метод оценки геномной структуры может быть использован для ускоренного подбора перспективных гибридных комбинаций в селекции мяты.

Выделенные каллусные штаммы мяты, продуцирующие ментол в качестве преобладающего компонента эфирного масла и осуществляющие биотрансформацию его основных предшественников, а также способы стимулирования образования названного соединения в культуре in vitro могут быть использованы при разработке биотехнологических методов получения указанного вещества. Предложен микрометод выявления клеточных линий для биотехнологии, обладающих необходимым направлением биотрансформации.

Основные положения, вынесенные на защиту.

- Клетки ментолсинтезирующих форм мяты могут культивироваться in vitro в жидкой питательной среде Лина и Стабы в виде мелко-агрегированных суспензионных культур.

- Изолированные ткани и клетки мяты сохраняют способность к биосинтезу монотерпенов, в том числе основного компонента эфирного масла исходных растений - ментола.

- Степень реализации биосинтетических потенций тканевых и клеточных культур зависит от ряда генетических, эпигеномных и физиологических факторов (генотип исходных растений, штаммовые особенности, уровень морфологической дифференцировки, состав питательной среды, освещенность и др.). Оптимальное сочетание этих факторов позволяет получить в культуре in vitro эфирное масло, соответствующее по составу интактным растениям.

- Культуры клеток мяты способны осуществлять трансформацию экзогенных монотерпеновых кетонов с образованием ментола в качестве одного из основных продуктов реакции. Процесс биотрансформации осуществляется на генетической основе и может быть использован для исследования биогенетических взаимоотношений монотерпенов и анализа геномной структуры исходных растений по генам, контролирующим биосинтез эфирного масла.

- Существуют три биогенетических пути образования непосредственного предшественника (-) ментола - (-) ментона: через (+) пулегон, (+) пиперитон и (+) изоментон. Клетки высокоментольного вида м. canadensis реализуют все указанные биогенетические возможности. Клетки М. piperita , отличающейся более низким уровнем накопления ментола, эффективно включают в биосинтез данного вещества лишь один из перечисленных предшественников - (+) пулегон.

Работа выполнена в лаборатории экспериментальной биологии ВНИИ эфиромасличных культур в 1979-83 г. по теме 01.29. "Исследовать закономерности биосинтеза эфирного масла с целью создания моделей оптимальных сортов эфиромасличных культур (мята, роза, лаванда, шалфей, герань) и совершенствования технологических приемов переработки сырья" (№ государственной регистрации 0184007560

Хромато-масс-спектрометрический анализ эфирного масла был выполнен в Институте физиологии растений им. К.А.Тимирязева АН СССР ст.научным сотрудником, канд.хим.наук Пауковым В.Н., которому автор выражает сердечную благодарность.

Автор глубоко признателен своему научному руководителю доктору биол.наук, профессору Резниковой С.А. за постоянную помощь и внимание, а также А.Х.Липскому, канд.хим.наук В.Н.Мельникову и кандидатам биол.наук П.С.Бугорскому и Л.А.Бугаенко, ценные консультации которых способствовали выполнению различных этапов настоящей работы.

Заключение диссертации по теме «Физиология и биохимия растений», Родов, Виктор Семенович

157 ВЫВОДЫ

1. Получены пассируемые каллусные и суспензионные культуры четырех видов и двух межвидовых гибридов мяты, которые могут длительно поддерживаться на питательной среде Лина и Стабы при стандартных условиях.

2. Морфо-фиэиологические параметры клеточных культур зависят от способа их выращивания и состава питательной среды.

3. Изолированные ткани различных форм мяты сохраняют способность к биосинтезу свободных и связанных монотерпенов. Однако количество эфирного масла, накапливающегося в них, существенно (на 1-2 порядка) ниже, чем в интактных растениях.

4. Морфогенетические изменения в культивируемых тканях, сопровождающиеся появлением модифицированных эпидермальных структур, аналогичных элементам секреторного аппарата целых растений, как правило, положительно влияют на накопление эфирного масла в культуре

5. Состав про;пуцируемого in vitro эфирного масла зависит от генотипа исходных растений, штаммовых особенностей-, возраста штамма, уровня морфологической дифференцировки культуры и условий культивирования. При оптимальном сочетании указанных факторов удается приблизить соотношение синтезируемых изолированными клетками монотерпенов к показателям эфирного масла целых растений .

6. Перевод тканей в суспензионную культуру стимулирует биосинтетическую активность изолированных клеток и несколько приближает состав эфирного масла, образующегося in vitro , к составу эфирного масла интактных растений.

7. Основная масса монотерпеновых спиртов (свободных и глико-зидносвязанных) накапливается в культуре клеток в стационарной фазе роста.

8. Культуры клеток изученных форм мяты способны к биотрансформации экзогенных монотерпеновых кетонов (ментона, изоментона, пиперитона и пулегона) с образованием в качестве одного из продуктов ментола, а также его изомеров.

9. Как компоненты эндогенного эфирного масла, так и продукты биотрансформации частично секретируются клетками в жидкую питательную среду. Существенную часть секретируемых соединений составляют гликозидносвязанные монотерпены.

10. Изучение процесса биотрансформации монотерпенов позволило установить наличие трех независимых путей биосинтеза ментола у мяты: через (+)пулегон, (н-)пиперитон и (+) изоментон.

11. Биотрансформирующая способность изолированных клеток различных форм мяты зависит от их генотипа. Более полная реализация биогенетических потенций в клетках м. canadensis по сравнению с М. piperita определяет повышенное накопление ментола у первого вида, in situ •

12. На основе обнаруженной видоспецифичности процесса биотрансформации разработан метод анализа геномной структуры мяты по основным генам, контролирующим биосинтез эфирного масла.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. В селекции мяты на высокое содержание ментола в эфирном масле использовать для предварительного анализа геномной структуры образцов и подбора перспективных комбинаций разработанный нами косвенный метод (см. приложение 2).

2. При разработке биотехнологических способов получения ментола для выявления объектов с высокой биохимической активностью применять предложенный хроматографический метод оценки трансформирующей способности.

В качестве исходного материала для отбора таких объектов использовать культуры тканей и клеток межвидовых гибридов мяты, отличающихся повышенным уровнем накопления эфирного масла и высоким содержанием в нем ментола.

3. Для индукции органогенеза в недифференцированных тканях мяты в ходе работы по размножению и оздоровлению данной культуры использовать питательную среду Лина и Стабы, содержащую высокий

- уровень б-бензиламинопурина (2 мг/л) и пониженную до 0,1 мг/л концентрацию веществ с ауксиновой активностью (2,4-Д, ИУК).

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Родов, Виктор Семенович, 1984 год

1. Материалы ХХУ1 съезда КПСС. - М.: Политиздат, 1981. -223 с.

2. Асланянц Л.К., Маршавина З.В. Об эфирном масле, синтезируемом культурой ткани ириса Iris sibirica. Прикл.биохимия и микробиол., 1979, т.15, вып.5, с. 769-774.

3. Богонина 3., Николаев А., Гоголь 0., Кубрак М. О хемора-сах у растений рода мяты. В кн.: 1У Межд.конгресс по эфирным маслам. Тбилиси, 1968, т.2. - М.: Питц.промышленность, 1972, с.15-17.

4. Бугорский П.С. Метаболизм основных компонентов эфирного масла в лепестках розы. Дис. . канд.биол.наук. - Симферополь, 1980.- 158 с.

5. Бугорский П.С., Резникова С.А., Запрометов М.Н. 0 взаимосвязи глюкозидносвязанных и свободных спиртов в процессе образования эфирного масла в лепестках розы. Биохимия,1979, т.44, вып.6, с.1068-1073.

6. Е!утенко Р.Г. Культура изолированных тканей и физиология морфогенеза растений.- М.: Наука, 1964. 272 с.

7. Е!утенко Р.Г. Экспериментальный морфогенез и дифференциация в культуре клеток растений. М.: Наука, 1975. - 51 с.12. ^утенко Р.Г. Культура клеток растений. Вестн. АН СССР,, 1975, № II, с. 92-101.

8. Цутенко Р.Г. Рост и дифференциация в культуре клеток и тканей. В кн.: Рост растений и природные регуляторы. М.: Наука, 1977, с.6-21.

9. V 14. Бутенко Р.Г. Выращивание клеток высших растений в суспензионной культуре. Изв. АН СССР, серия биол., 1977, № 5, с. 697709.

10. Бутенко Р.Г. Физиология клеточных культур, состояние и перспективы. Физиология растений, 1978, т.25, вып.5, с. 10091024.

11. Бутенко Р.Г. Использование культуры тканей растений в сельскохозяйственной науке и практике. Сельскохозяйств. биология, 1979, т.14, № 3, с.306-315.

12. Бутенко Р.Г. Технология in vitro в сельском хозяйстве. Сельскохозяйств. биология, 1983, № 5, с. 3-7.

13. Быченкова Э.А. Влияние ацетона и ацетата натрия на рост и биосинтетическую способность каллусных тканей Pinus sylvest -ris L. , культивируемых in vitro . В кн.: Лесная геоботаника и биология древесных растений. Вып. 3. Брянск, 1975,с.26-30.

14. Васильев А.Е. Функциональная морфология секреторных клеток растений. Л.: Наука, 1977. - 208 с.

15. Викторова Н.В. Кинетика популяции клеток высших растенийв суспензионной культуре. В кн.: Культура клеток растений. Киев: Наукова думка, 1978, с. 12-15.

16. Володарский А.Д. Изучение специфики белкового обмена в процессе цитодифференцировок в культуре тканей растений. В кн.: Рост и клеточная дифференцировка растений. М.: Наука, 1967, с.168-178.

17. Володарский А.Д. Иммунохимический анализ цитодифференцировок в культуре тканей растений. Автореф. дис. . канд. биол. наук. М., 1968. - 17 с.

18. Гамбург К.З., Варакина И.Н., Маркович В.Н. и др. Строение и состав каллусной ткани табака в зависимости от присутствия сб-нафтилуксусной кислоты в среде. В кн.: Рост и клеточная дифференцировка растений. М.: Наука, 1967, с. 129-139.

19. Геворкян Д.А., Инджикян С.М. Эфирное масло каллусной культуры розовой герани. В кн.: Ш Всесоюз. конференция по культуре клеток растений: Тез. докладов. Абовян, 1979, с. 76-77.

20. Глущенко И.Е., Чельцова Л.П. Физиологические изменения клеток при образовании каллуса у томата и капусты. Докл. ВАСХНИЛ. 1975, № 10, с. 7-8.

21. Горяев М., Плива И. Методы исследования эфирных масел.-Алма-Ата: изд-во АН КазССР, 1962. 751 с.

22. Горяну Г.М., Крохмалюк В.В., Кинтя П.К. Стероидные гли-козиды. ХУ1. Строение аспарагозидов С и Е из Asparagus offi -cinalis . Химия природных соединений, 1976, № 6, с. 823-824.

23. Гурвич Н.Л. Опыт классификации эфирномасличных растений.-В кн.: Растительное сырье: Труды Бот. инст. им.В.Л.Комарова АН СССР, сер.5, М.-Л.: изд. АН СССР, I960, вып.6, с. 7-126.

24. Давыдова И.М. Липиды и жирные кислоты в органах и недифференцированных каллусных тканях льна: Автореф. дис. . канд. биол. наук. Киев, 1978. - 24 с.

25. Далматов К.Р. О путях совершенствования производства розового масла. Маслобойно-жировая промышленность, 1953, № I, с. 19-21.

26. Дмитриева Н.Н. Индукция клеточных делений в сердцевинной паренхиме стебля табака: Автореф. дис. . канд.биол. наук, М.,1972. 27 с.

27. Дмитриева Н.Н., Бутенко Р.Г. Синтез белка при переходе к каллусообразованию в сердцевинной паренхиме стебля табака. -Физиология растений, 1970, т.17, вып.2, с. 330-336.

28. Долгих Ю.И., Шамина З.Б. Фракционирование клеточной суспензии диоскореи. Физиология растений, 1978, т. 25, вып.6, с. 1237-1243.

29. Дэгли С., Никольсон Д. Метаболические пути. М.: Мир,1973. 310 с.

30. Замуреенко В.А., Клюев Н.А., Дмитриев Л.Б., Грандберг И.И. Изучение состава эфирного масла мяты перечной ( Mentha pi -perita ) с использованием хромато-масс-спектрометрии. Изв. ТСХА, 1980, № I, с. 169-172.

31. Запрометов М.Н. Вторичный метаболизм и его регуляция в культурах клеток и тканей растений. В кн.: Культура клеток растений. М.: Наука, 1981, с. 37-50.

32. Кагановская М.И., Вишневская Г.И., Яворский Д.Ф., Шело-бенко В.А. Восстановление ментона в ментол в отходах производстваментола. Мед.промышленность СССР, 1962, № 8, с. 36-37.

33. Каладжян H.JI., Арутгонян Р.Ш., Чайлахян М.Х. Получение каллусов и клеточных суспензий корней бобовых растений и их влияние на рост клубеньковых бактерий. В кн.: Ш Всесоюз.конференция по культуре клеток растений: Тез. докладов. Абовян, 1979, с. 4344.

34. Калинин Ф.Л., Сарнацкая В.В., Полищук В.Е. Методы культуры тканей в физиологии и биохимии растений. Киев: Наук, думка, 1980т - 488 с.

35. Капелев И.Г., Акимов Ю.А. Внутривидовая химическая изменчивость Mentha longifolia L. Раст.ресурсы, 1980, т.16, вып. 3, с. 436-441.

36. Курсанов A.JI. Ученый и аудитория. М.: Наука, 1982.272 с.

37. Курсанов А.Л., Дубинина И.М., Кудрявцева Л.Ф., Бурахано-ва Е.А. Некоторые особенности углеводного обмена в культурах де-дифференцированных тканей сахарной свеклы. Физиология растений, 1976, т. 23, вып.6, с. III9-II27.

38. Лакин Г.Ф. Биометрия. 3-е изд., перераб. и доп. - М.: Высш. школа, 1980. - 293 с.

39. Липский А.Х. Глубинное культивирование клеток высших растений. В кн.: Культура клеток растений. М.: Наука, 1981, с. 51-68.

40. Лукнер М. Вторичный метаболизм у микроорганизмов, растений и животных. М.: Мир, 1979. - 550 с.

41. Лутков А.Н., Беляева Р.Г., Шугаева Е.В. и др. Аллопо-липлоидия и межвидовая гибридизация в селекции ментольной мяты.-В кн.: 1У Межд. конгресс по эфирным маслам. Тбилиси, 1968, т.2-М.: Пищ.промышленность, 1972, с. 94-97.

42. Макаров В.В. Дикорастущие мяты СССР: Автореф. дис. . канд.биол. наук. М., 1972. - 36 с.

43. Макаров В.В., Резникова С.А. 0 числах хромосом рода Mentha . Бюлл.МОИП, 1972, т. 77, вып. 4, с. I33-I4I.

44. Мак-Нейр Г., Бонелли Э. Введение в газовую хроматографию. М.: Мир, 1970. - 278 с.

45. Максимов В.Н., Федоров В.Д. Применение методов математического планирования экмперимента. М.: Изд.МГУ, 1969. -126 с.

46. Мельников В.Н., Хендрикс X., Бос Р., Бугаенко Л.А. Химический состав эфирных масел Mentha spicata L. . Раст. ресурсы, 1984, т. 20, вып.1, с. I3I-I36.

47. Мишарин С.И., Моэгова Е.А., Монастырева Л.Е. и др. Сохранение специфических спектров белков в каллусных культурах кукурузы. Докл. АН СССР, 1977, т. 236, № 5, с. 1273-1276.

48. Никитин В.М. Химия терпенов и смоляных кислот. М.- Л.: Гослесбумиздат, 1952. - 348 с.

49. Николаева Д.А., Николаев А.Г. Пути создания высокомен-тольных мят. В кн.: 1У Межд. конгресс по эфирным маслам. Тбилиси, 1968, т. 2. - М.: Пищ. промышленность, 1972, с. 136-138.

50. Николас Г. Биогенез терпенов в растениях. В кн.: Биогенез природных соединений. М.: Мир, 1965, с. 549-593.

51. Оголевец И.В. Изучение закаливания изолированной каллус-ной ткани древесных растений с разной морозостойкостью. Физиология растений, 1976, т. 23, вып. I, с. 139-145.

52. Перт С.Д. Основы культивирования микроорганизмов и клеток. М.: Мир, 1978. - 331 с.

53. Петрова Л.Н., Зеленецкая А.А., Скворцова А.Б. Анализ синтетических душистых веществ и эфирных масел. М.: Пищ. промышленность, 1972. - 334 с.

54. Погорельская А.Н., Цугорский П.С., Резникова С.А. Динамика эфирного масла и глюкозидов монотерпеновых спиртов и

55. Ji-фенилэтилового спирта в процессе маслообразования у розы. -Физиол. и биохим. культурных растений, 1979, т. II, вып. I, с. 84-88.

56. Резникова С.А., Лиштванова Л.Н., Макаров В.В. К ресин-тезу мяты перечной. В кн.: Актуальные проблемы изучения эфирномасличных растений и эфирных масел. Кишинев, 1970, с. 26-27.

57. Nj 76. Резникова С.А., Киреева С.А., Е^горский П.С. и др. Особенности накопления эфирных масел в каллусных тканях мяты и розы. В кн.: Ш Всесоюз. конф. по культуре клеток растений: Тезисы докладов. Абовян, 1979, с.78-79.

58. Резникова С.А., Бугаенко Л.А. Генетический метод в селекции мяты на содержание и состав эфирного масла. Труды ВНИИ эфиромасличных культур, 1982, т.14, с. 65-71.

59. Резникова С.А., Родов B.C., Бугорский П.С. Структурно-функциональные зависимости биосинтеза эфирного масла in vitro

60. Рокицкий П.Ф. Биологическая статистика, 3-е изд., испр. - Минск: Вышэйшая школа, 1973. - 320 с.

61. Сёке Е., Верзар-Петри Г., Кузовкина И.Н. и др. Образование эфирных масел в каллусной культуре ромашки лекарственной. -Физиология растений, 1978, т. 25, вып.1, с. I78-I8I.

62. Сёке Е., Шаварда А.Л. Биосинтез эфирного масла в культуре изолированных корней, каллусных тканей и клеток ромашки лекарственной. В кн.: Ш Всесоюз. конф. по культуре клеток растений: Тез. докладов. Абовян, 1979, с. 74-75.

63. Селекция эфиромасличных культур: Методические указания Под ред. А.И. Аринштейн. Симферополь, 1977. - 150 с.

64. Теплицкая Л.М. Особенности морфологии и дифференцировки железистого аппарата мяты в связи с интенсивностью и направленноотью маслообразовательного процесса: Автореф. дис. . канд. •биол. наук. Кишинев, 1982. - 25 с.

65. Урманцева В.В., Пауков В.Н., Холодова В.П., Дутенко Р.Г. Штаммовые различия культуры тканей сахарной свеклы. Докл. АН СССР, 1977, т. 232, № 3, с. 724-727.

66. Хримлян А.И., Макаров В.В. Хемотипы дикорастущих видов мяты флоры СССР. Раст. ресурсы, 1971, т. 7, вып. I, с. 24-30.

67. Ширяева Г.А., Гутман Т.С. Некоторые анатомические осо -бенности тканей плодов цитрусовых в культуре Вкн.: Ш Всесоюз. конф. по культуре клеток растений: Тез. докладов. Абовян, 1979, с. 133-134.

68. У99. Al-Abta S., Galpin I.J., Collin H.A. Flavour compounds in tissue cultures of celery. Plant Sci. Lett., 1979» vol. 16, N 2-3, 129-134.

69. Ambid C., Moisseeff M., Fallot J. Biogenesis of monoter-penes. Bioconversion of citral Ъу a cell suspension culture of Muscat grapes. Plant Cell Reports, 1982, vol. I, N I, p. 91-93.

70. Ambid 0., Moisseeff M., Fallot J. Interconversion dest taldehydes et des alcools monoterpeniques par aes cellules de Ra-i t tisin Muscat cultivees in vitro. Physiologie vegetale, 1983»vol. 21, N I, p. 87-92.

71. Banthorpe D.V., Long D.R.S., Pink C.R. Biosynthesis of geraniol and related monoterpenes in Pelargonium graveolens. -Phytochemistry, 1985, vol. 22, N II, p. 2459-2465.

72. Banthorpe D.V., V/irz-Justice A. Terpene biosynthesis. IV. Monoterpenes and carotenoids from tissue cultures of Tanacetum vulgare. J. Chem. Soc. Perkin Trans., 1972, part I, N 14, p. 1769-1772.

73. Baquar S.R., Reese G. Cytotaxonomische und gaschroma: -tographische Untersuchungen an norddeutschen Mentha-Formen. -Pharmazie, 1965, Bd 20, H. 5, s. 159-168, 214-220.

74. Barz W. Catabolism of endogenous and exogenous compo -unds by plant cell cultures. In: Plant tissue culture and its bio-technological application /Ed. by W.Barz et al. - Berlin e.a.j

75. Springer, 1977, P. I53-I7I.

76. Battaile J., Burbott A.J., Loomis W.D. Monoterpene in -terconversions: metabolism of pulegone by a cell-free system from Mentha piperita. Phytochemistry, 1968, vol. 7, N 7, p. 11591169.

77. III. Becker H. Untersuchungen zur Frage der Bildung fluchti-ger Stoffwechselprodukte in Calluskulturen. Biochem. Physiol. Pflanz., 1970, Bd. 161, H. 5, S. 425-441.

78. Burbott A.J., Loomis W.D. Evidence for metabolic turnover of monoterpenes in peppermint. Plant Physiol., 1969, vol. 44, N I, p. 173-179.

79. Chlyah H. Inter-tissue correlations in organ fragments. Organogenetic capacity of tissues excised from stem segments of Torenia foumieri Lind cultured separately in vitro. Plant Physiol. , 1974, vol. 54, N 3, p. 341-548.

80. Codaccioni M. Influence de la temperature et de la nuttrition carbonee sur la resistance an froid de meristemes du Mentha viridis cultives in vitro. In: C. r. 94 congr. nat. Soc. savantes. Sect. sci., Pau, 1969 - Paris, 1971, vol. 5, p. 233-244.

81. Coffin R., Taper C.D., Chong C. Sorbitol and sucrose as carbon source for callus culture of some species of the Rosaceae. Can. J. Bot., 1976, vol. 54, N 7, p. 547-551.

82. Cori 0. Terpene biosynthesis: utilisation of neryl pyrophosphate by an enzyme system from Pinus radiata seedlings. Biochemistry and Biophysies, 1969, vol. 135» P« 318-327.

83. Cori 0., Cardemil E., Chayet L. et al. Biosintesis de isoprenoids en plantas. Mecanismos de condensacion у ciclacion. -Cienc. einvest., 1974, vol. 30, N 3-4, p. 95-99.

84. Croteau R., Pelton M. Conversion of I G - I/fC geranyl pyrophosphate to cyclic monoterpenes without loss of tritium. - Arch. Biochem. and Biophys., 1981, vol. 207, N 2, p. 460464.

85. Croteau R., Hooper C.L. Metabolism of monoterpenes. Acetilation of (-)menthol by a soluble enzyme preparation from pe -ppermint (Mentha piperita) leaves. Plant Physiol., 1978, vol. 61, N 5, p. 737-742.

86. Dell B. Conversion of mevalonic acid by tissue cultures and leaves of Eremophila fraseri F. Muell. (Myoporaceae)» Aus -tral. J. Bot., 1978, vol. 26, N I, p. 1-7.

87. Demarly Y., Petiard V. Mise en evidence de glucosides1et d'alcaloides dans les cultures de tissus vegetaux. Aim. Ame-lior. PIantes, 1972, vol. 22, N 4, p. 361-374.

88. J 142. Downing M.R., Mitchell E.D. Mevalonate-activiting enzymes in callus culture cells from Nepeta cataria. Phytochemistry,1975, vol. 14, N 2, p. J68-37I.

89. Dofferstein R.H., Staba E.J. Chlorophyll production in Japanese mint suspension cultures. Lloydia, 1966, vol. 29, N I, p. 50-57.

90. Gautheret R.J. Factors affecting differentiation of plant tissues grown in vitro. In: Cell differentiation and morphogenesis / Ed. W. Beerman. - Amsterdam: North - Holl. publ., 1966, p.55.95.t » 1 1

91. Hefen&ehl F.V/., Murray M.J. Relation Between biogenesis and genetic data of essential oils in genus Mentha. Riv. ital. essence, 1973, vol. 55, N II, p. 791-796.

92. Hefendehl F.W., Underhill E.W., Rudloff E. von. The biosynthesis of the oxygenated monoterpenes in mint. Phytochemis -try, 1967, vol. 6, N 5, p. 823-835.

93. Hendriks H., van Os. F.H.L. The heredity of the essen -tial oil composition in artificial hybrids between Mentha rotun -difolia and Mentha longifolia. Planta med., 1972, vol. 21, N 4, p. 421-425.

94. Hirata T., Hamada H., Aoki T., Suga T. Stereoselectivity of the reduction of carvone and dihydrocarvone by suspension cells of Nicotiana tobacum. Phytochemistry, 1982, vol. 21, N 9, p. 2209-2212.

95. Inouye H,, Ueda S., Uesato S., Kobayashi K. Biosynthesis of iridoid glucosides in cultured cells of Gardenia jasmino -ides f. grandiflora. In: 21 th Symp. Chem. Natur. Prod., Sapporo, 1978, p. 347-354.

96. Itokawa H., Takeya K., Mihashi S. Biotransformation of cannabinoid precursors and related alcohols by suspension cultures of callus iuduced from Cannabis sativa L. Chem. Pharm.Bull.,1977, vol. 25, N Ю, p. 1941-1946.

97. Jones L.H. Plant cell culture and biochemistry: studies for improved vegetable oil production. In: Industrial Aspects of Biochemistry, vol. 50, pt II, N. Y., 1974, p. 815-855.

98. Karasawa D. Triterpene acids in Mentha callus tissue. -Agr. Biol. Chem., 1980, vol. 44, N 5, p. 1205-1205.

99. Khavkin E.E, Sukhorzhevskaia T.B. Maintenance of isoenzyme spectra in callus and suspension cultures derived from in -ternodes of maize (Zea mays L.). Biochem. Physiol. Pflanz., 1979i Bd. 174, H. 5-6, S. 431-457.

100. Lawrence B.M. A study of monoterpene interrelationships in the genus Mentha with special reference to the origin of pu -legone and menthofuran. Doctoral thesis. - Eijksuniversiteit te Groningen, Netherlands, 1973.? - 302 p.

101. Lawrence B.M. Mentha biosynthesis. A fresh look at the biosynthetic pathways for most compounds found in Mentha oils. -In: VII Inst. Gongr. Essential Oils, Kyoto, 1977, Kyoto, 1979, p. I21-126.

102. Lee Y.S., Hirata Т., Suga T. Biotransformation of 1-ace-toxy-p-menth-4(8)-ene with a suspension of cultured cells of Nico-tiana tabacum. J. Ghem. Soc. Perkin Trans., 1983, Pt I, N 10,p. 2475-2478.

103. Lin M.L., Staba E.J. Peppermint and spearmint tissue cultures. I. Callus formation ana submerged cultures. Lloydia, 1961, vol. 24, N 3, p. 139-145.

104. Mackie H., Overton K.H. Hydrolysis and isomerisation of trans, trans-farnesyl diphosphate by Andrographis tissue culture enzymes. Eur. J. Biochem., 1977, vol. 77, К I, p. I0I-I06.

105. Martinkus C. Croteau E. Metabolism of monoterpenes. Evidence for compartmentation of 1-menthone metabolism in peppermint (Mentha piperita) leaves. Plant Physiol., 1981, vol. 68, N I,p. 99-106.

106. McChesney J.D. Stimulation of in vitro growth of plant tissue by dl-mevalonic acid. Can. J. Bot., 1970, vol. 48, IT 12, p. 2357-2359.

107. Nagel M., Reinhard E. Das atherische Ol der Calluskultu-ren von Ruta graveolens.2. Physiologie zur Bildung des atherischen Dies. PIanta med., 1975, Bd. 27, H. 3, S. 264-271.

108. Nicolaev A.G. Inheritance of terpenoids in hybrids of mint. In: VII Int. Congr. Essential Oils, Kyoto, 1977. - Kyoto, 1979, P. 121.

109. Overton K.H. Biosynthesis of mevalonoid-derived Compo -unds in cell cultures. In: Plant tissue culture and its biotech-nol. application /Ed. W. Barz et al. - Berlin e.a.: Springer-Verl., 1977, P. 66-75.

110. Paris R. Chimiotaxonomie et biogenese des huiles essen-tielles. Parfums, Cosmetiques, Aromes, 1976, N 12, p. 65-66, 69-71.

111. J 187. Purohit P.V,, Khanna P. Production of essential oil from callus cultures of Ocimum basilicum L. In: Plant Cell Cult. Crop Improv.: Proc. Int. Symp., Calcutta, 1981. - N.Y., London, 1983, p. 377-380.

112. Sakata I., Mitsui T. Isolation and identification of 1-menthyl-ji-D-glucoside from Shubi. Agr. Biol. Chem., 1975, vol. 39, N 6, p. 1329-1330.

113. Spiteberg V., Coscia C.J., Krueger E.J. Characterisation of monoterpene hydroxylase from cell suspension cultures of Catharanthus roseus (L.) G. Don. Plant Cell Eeports, 1981, vol. I, N 2, p. 43-47.

114. Staba E.J., Laursen P., Buchner S.A. Medicinal plant tissue culture. In: Plant Tissue Culture / American Inst, of biol. sci., Washington, 1965, p. 19^.

115. Steward F.C., Ammirato P.V., Mapes M.O. Growth and development of totipotent cell:some problems, procedures and per -spective. Aim. Bot., 1970, vol. 34, N 137, p. 761-787.

116. Street H.E. Applications of cell suspension cultures. -In: Applied and fundamental aspects of plant cell, tissue and organ culture / Ed. J. Reinert, Y.P.S. Bajaj. Berlin e.a.: Springer-'Verl., 1977, p. 649-r667.

117. Street H.E. Cell (Suspension) culture techniques. In: Plant tissuee and cell cult. / Ed. H.E. Street. - Oxford e.a.: Blacnell Sci. Publ., 1973, p. 59-99.

118. Suga Т., Aoki T., Hirata T. et al. Biotransformation of foreign substrates with callus tissues. Transformation of terpi -neols with tobacco suspension cells. Chem. Lett., 1980, IT 2,p. 229-250.

119. Suga Т., Hirata Т., Hirano Y., Ito T. Biotransformation of monoterpenes by tobacco tissue cultures. Selective hydroxyla -tion of trans-methyl group in isopropylidene group. Chem. Lett., 1976, N II,'p. I245-I248.

120. Suga T., Hirata T., Hamada H. et al. The bioconversion of monoterpenoids with the plant cultured cells. The possibility for use of the cultured cells as a bioreactor. In: IXth Int. Congr. of Essential. Oils, Singapore, I985, p. 65.

121. Suga Т., Hirata Т., Tange K. Biosynthesis of isoprenoid from amino acid in higher plant. Incorporation of L-leucine and1.valine into geraniol and citronellol. Chem. Lett., 1975, N 2,, p. 245-246.

122. Suga T., Hirata T., Yamamoto Y. Lipid constituents of callus tissues of Mentha spicata. Agric. Biol. Chem., I9S0, vol. 44, N 8, p. I8I7-I820.

123. Suga Т., Shishibori Т., Morinaka H. Preferential participation of linaloyl pyrophosphate rather than neryl pyrophosphate in biosynthesis of cyclic monoterpenoids in higher plants. -J. Chem. Soc. Chem. Commun., 1980, N 4, p. 167-168.

124. Chem., 1976, vol. 40, N I, p. 231-232.»j 223» Szoke E., Shavarda A.L., Verzar-Petri G., Kuzovkina I.N.

125. Novekedest serkento anyagok hs a feny hatasa a kamilla-szovetten-1 tyeszetek illoolaj-szintezisere. Herba Hung., 1979, 18, N 2, p. 719.

126. V 228. Ueda S., Kobayashi K., Muramatsu Т., Inouye H. Studies on monoterpene glucosides and related natural products. Part XV. Iridoid glucosides of cultured cells of Gardenia jasminoides f. grandiflora. Planta med., 1981, vol. 41, N 2, p. I86-I9I.

127. J 231. Wickham K., Rodriguez E., Arditti J. Comparative phytochemistry of Parthenium hysterophorus L. (Compositae) tissue cultures. Bot. Ges., 1980, vol. 141, N 4, p. 435-439.