Биологические свойства вируса гриппа свиней типа A и усовершенствование методов серологической диагностики тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.02.02, кандидат наук Ремыга, Степан Геннадьевич

• Ремыга, Степан Геннадьевич
• кандидат наук
• 2013

Оглавление диссертации кандидат наук Ремыга, Степан Геннадьевич

Оглавление

1. ВВЕДЕНИЕ

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

2.1 Классификация вируса гриппа

2.2 Морфологический и химический состав вируса гриппа свиней и устойчивость к физико-химическим факторам

2.3 Репликация вируса

2.4 Патогенез

2.5 Клинические признаки

2.6 Патологоанатомические и гистологические изменения

2.7 Клинико-эпизоотологическая характеристика гриппа свиней

2.8 Иммунитет и профилактика заболевания

2.9 Диагностика

2.9.1. Серологическая диагностика

2.9.2 Реакция нейтрализации

2.9.3 Иммуноферментный анализ

2.9.4 Полимеразная цепная реакция

2.9.5 Заключение по обзору литературы

3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

3.1. Материалы

3.1.2. Вирусы

3.1.3. Эмбрионы кур

3.1.4 Культуры клеток

371757 Животные. 77.7

3.1.10. Получение нормальной сыворотки крови животных

3.1.11. Получение специфической к типу А подтипа H1N1 сыворотки крови животных

животных

3.1.13 Получение эритроцитов животных

40

3.1.14. Подготовка сывороток крови свиней и кроликов к исследованиям

3.1.15. Химреактивы и растворы

3.1.15.1 Приготовление поддерживающей питательные среды

3.1.15.2 Приготовление физиологического раствора

3.1.15.3 Приготовление консерванта Мигулиной

3.1.15.4 Приготовление раствора цитрата натрия

3.1.16. Оборудование

3.2. Методы исследования

3.2.1. Культивирование ВГС типа А подтипа H1N1 на куриных СПФ эмбрионах

3.2.2. Получение ВГС А подтипа H3N2 на куриных СПФ эмбрионах

3.2.3 Получение вируса гриппа свиней типа А подтипа H1N1 на перевиваемой культуре клеток MDCK

3.2.4. Получение ВГС типа А подтипа H3N2 на перевиваемой культуре клеток MDCK

3.2.5. Определение стерильности матровой расплодки ВГС

3.2.6. Молекулярно-генетические методы исследований

3.2.7. Определение инфекционной активности ВГС

3.2.8. Экспериментальное заражение лабораторных животных ВГС типа А подтипа H3N2

3.2.9. Определение гемагглютинирующей активности ВГС типа А

3.2.10. Инактивация ВГС типа А

3.2.11. Очистка и концентрирование вируса гриппа свиней типа А

"3.2.12. Лйофйлизация 1штйгена~и сывороток

3.2.13. Определение титра антител к ВГС типа А в реакции торможения гемагглютинации

3.2.14. Интерпретация результатов РТГА

3.2.15. Постановка реакции микронейтрализации (РМН) для выявления антител к ВГС типа А подтипа H1N1 в сыворотках крови свиней

3.2.16. Постановка ИФА для выявления антител к ВГС типа А подтипа H1N1 и

H3N2

3.2.17. Статистическая обработка результатов исследований

4. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

4.1. Оценка серологических исследований по гриппу свиней типа А подтипа H1N1, проведенного в 2009-2010

4.2. Разработка набора для определения уровня антител к ВГС типа А подтипа H1N1 в реакции торможения гемагглютинации

4.3. Подбор эритроцитов крови при определении гемагглютинирующей активности ВГС типа А подтипа H1N1

4.4. Получение эмбрионального препарата антигена ВГС типа А подтипа H1N1 для использования в серологических реакциях

4.4.1. Культивирование ВГС типа А подтипа H1N1 в куриных эмбрионах62

4.5. Получение культурального ВГС типа А подтипа H1N1 для использования в серологических реакциях

4.5.1. Культивирование ВГС в перевиваемой культуре клеток

4.6. Инактивация ВГС А подтипа H1N1

4.6.1. Получение лиофильно высушенного инактивированного антигена ВГС типа А подтипа H1N1

4.7. Оптимизация параметров обработки нативных сывороток перед использованием их в РТГА

4.8. Получение лиофильно высушенной положительной вирусспецифической и нормальной сывороток крови свиней

4.9. Разработка реакции торможения гемагглютинации для выявления антител к

Büpycy гриппа свиней типа А подтипа H3N2

4.9.1. Подбор эритроцитов крови при постановки РГА и РТГА

4.9.2 Изучение биологических свойств изолята вируса гриппа свиней

«А/свинья/Владимирское/2010/H3N2»

4.9.2.1 Получение эмбрионального препарата антигена ВГС типа А подтипа

H3N2 для использования в серологических реакциях

4.9.2.2. Культивирование ВГС типа А подтипа H3N2 в куриных эмбрионах

4.9.2.3. Экспериментальное заражение лабораторных животных ВГС типа А

подтипа НЗШ

4.9.3. Получение культурального вируса гриппа свиней типа А подтипа НЗШ

для использования в серологических реакциях

4.9.3.1. Культивирование вируса гриппа свиней в культуре клеток

4.10. Инактивация изолята ВГС А/свинья/Владимирское/2010/НЗЫ2

4.11. Оптимизация параметров обработки нативных сывороток перед

использованием их в РТГА

4.11.1. Получение специфической к изоляту ВГС

«А/свинья/Владимирское/2010/НЗN2» и нормальной сывороток крови свиней с дальнейшей лиофилизацией

4.12. Разработка реакции микронейтрализации для выявления антител против ВГС типа подтипа Н1Ш

4.13. Сравнительные исследования сывороток крови свиней на наличие антител к ВГС в РТГА, РМН и ИФА

4.14. Воспроизводимость результатов РТГА в зависимости от времени и условий постановки реакции

4.15. Проведение серологических исследований на грипп свиней типа А в свиноводческих хозяйствах России

5. ОБСУЖДЕНИЕ

6. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

7. ВЫВОДЫ

8. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Список-сокращений и условных обозначений .?::

Список терминов

9. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

ПРИЛОЖЕНИЯ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Биологические свойства вируса гриппа свиней типа A и усовершенствование методов серологической диагностики»

1. ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы исследования. Грипп свиней (инфлюэнца свиней, энзоотическая бронхопневмония) - высоко контагиозная, остро протекающая болезнь, характеризующаяся резко выраженной лихорадкой, общей слабостью и поражением органов дыхания, сопровождающимся кашлем, чиханием, и выделением назальной слизи. Вирус гриппа свиней (ВГС) может вызывать заболевание у людей и, наоборот, установлена возможность заражения свиней вирусом гриппа человека [14].

ВГС является широко распространенным и значимым возбудителем респираторного заболевания у свиней [20]. Основные подтипы данного вируса -H1N1, H3N2 и H1N2. Клинические проявления заболевания можно наблюдать в стаде несколько недель, по мере распространения вируса внутри популяции. Основными факторами, влияющими на течение и тяжесть заболевания свиней гриппом являются ко-инфекционные агенты, возраст животных, общее состояние здоровья и иммунного статуса и, потенциально, штамм ВГС [14, 20, 81].

Сложившаяся эпизоотическая ситуация по гриппу свиней имеет большое социальное значение в связи с возможностью вируса к реассортации и возникновению штаммов высоко патогенных для людей.

На протяжении XX в. неоднократно фиксировались пандемии гриппа разной степени тяжести, от легких до катастрофических. Одной из первых можно считать пандемию Испанского гриппа H1N1 («испанки») 1918 года, унесшего по разным данным от 20 до 50 миллионов человеческих жизней по всему миру. В 1957 году (Азиатский грипп) и 1968 году (Гонконгский_грипп) пандемия, повлекла гибель 1 _ и 0,5 миллиона людей по всему миру соответственно [40, 79].

Большую угрозу вызвал высокопатогенный вирус гриппа птиц подтипа H5N1 в Юго-Восточной Азии с дальнейшим распространением в Европу и Африку, в первую очередь из-за высокого уровня смертности людей [153, 42].

Факт инфицирования данным подтипом вируса был выявлен в 1997 году в Китае, во время вспышки на одном из птицеводческих хозяйств [76].

Впоследствии высоко патогенный H5N1 при повторном появлении в 2003 и 2004 гг. получид широкое распространение. В результате проникновения вируса на территорию Европы и Африки миллионы голов домашней птицы были инфицированы. Установлены случаи заражения и смерти людей. Вспышки гриппа среди домашней птицы нанесли серьезный удар по экономике, обеспечению продовольствием и торговле в пострадавших странах[121].

Циркуляция вируса H5N1 среди домашней птицы по-прежнему представляет угрозу общественному здоровью, так как сохраняется возможность инфицирования людей, особенно в период реоссортации вируса, с приобретением способностей передаваться от человека к человеку [45, 146]

Наряд с перечисленными подтипами ВГС среди домашней птицы и животныхциркулируют и другие подтипы, представляя потенциальную угрозу для здоровья населения.

Эпизоотическая ситуация по гриппу обострилась после заболевания и гибели людей от "нового" вируса гриппа свиней типа А, выявленного в апреле 2009 г. в Мексике [14, 79, 114]. Генетический анализ данного вируса показал, что он произошел от комбинированных Североамериканского и Евроазиатского вирусов .гриппа свиней [121, 129, 150].

На данный момент существует ряд методик, которые условно можно разделить на прямые и косвенные, призванных выявлять вирус гриппа в свиноводческих хозяйствах.

К прямым методам выявления ВГС можно отнести выделение вируса в куриных эмбрионах (КЭ), культуре клеток (КК), выявление генома вируса в полимеразной цепной ~ ~ реакции (ПЦР), проведение реакции иммунофлюоресценции, постановка иммуноферментного анализа (ИФА) на антиген и реакции иммуногистохимии (ИГХ).

С развитием заболевания вирус быстро накапливается в легких и носовой слизи, что позволяет выделить его для культивирования и идентификации [23, 33, 56].

При использовании данных методов часто необходимо учитывать такие

аспекты, как пробоподготовка, оптимизация параметров культивирования, выявление генома или антигена ВГС. К тому же вирус можно «потерять» при несоблюдении правил отбора, упаковки или транспортировки патологического материала.

Также при проведении диагностических исследований на грипп свиней используют серологические реакции. Все их можно отнести к косвенным методам определения присутствия вируса гриппа у свиней. В научных работах зарубежных исследователей описываются различные методы диагностики на выявления антител к гриппу свиней. К ним можно отнести: РТГА, РН, ИФА на выявления уровня антител, РТНА и др. В 1995 г. И.Х. Браун с соавторами исследовали сыворотки крови свиней в Великобритании, с использованием реакции торможения гемагглютинации и реакции нейтрализации [141].

Степень разработанности проблемы. С появлением новых подтипов ВГС, а также из-за существования значительной антигенной неоднородности внутри подтипов вируса гриппа и вариационных линий в разных географических районах мира [40], диагностировать данное заболевание становится значительно труднее. Поэтому классические методы диагностики, такие как РТГА или РН требуют усовершенствования, разработки наборов к новым, актуальным штаммам ВГС. Учитывая тот факт, что на территории РФ вакцинация против гриппа свиней не входит в перечень обязательной специфической профилактики заболевания, данные методы диагностики являются первостепенными при проведении скрининговых или мониторинговых исследований на ГС. Выявление в сыворотках крови свиней антител к ГС указывает на возможное присутствие "заболевания. Отсутствие в доступной литературе сведений о наличии отечественных тест-систем для выявления антител к ВГС, свидетельствует о необходимости и своевременности их разработки.

Цель и задачи исследований. Целью работы явилось изучение биологических свойств ВГС типа А и усовершенствование методов серологической диагностики гриппа свиней типа А подтипа НШ1 и Н3№ в реакциях торможения гемагглютинации (РТГА) и микронейтрализации (РМН).

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

определить условия культивирования ВГС типа А подтипов H1N1 и H3N2 в куриных эмбрионах (КЭ), в первичной и перевиваемых культурах клеток с целью выделения, адаптации ВГС и получения вируссодержащего материала; изучить гемагглютинирующие свойства ВГС, подобрав необходимые эритроциты от разных видов животных и параметры постановки РГА и РТГА;

изучить чувствительность лабораторных животных к ВГС типа А подтипа H3N2;

подобрать инактивант и режим инактивации ВГС типа А подтипов H1N1 и H3N2, с целью получения антигенов, обладающих выраженной антигенной и гемагглютинирующей активностью;

получить вирусоспецифические сыворотки крови свиней к ВГС типа А подтипов H1N1 и H3N2; оптимизировать условия очистки нативных сывороток крови свиней от термостабильных и термолабильных ингибиторов;

установить условия лиофильного высушивания иммуноспецифических компонентов набора РТГА для выявления антител к ВГС типа А подтипа H1N1 (антиген, положительные и нормальные сыворотки крови свиней);

разработать нормативную документацию на набор РТГА для выявления антител к ВГС типа А подтипа H1N1, а также методические рекомендации для выявления антител к ВГС типа А подтип H3N2 в РТГА и H1N1 в РМН. Научная новизна результатов исследований.

Впервые в России разработана технология изготовления компонентов РТГА ^цля вШвленйяантителк ВГС типа А подтипа H1N1. Подобраны оптимальные параметры культивирования ВГС типа А подтипов H1N1 в КЭ и перевиваемой культуре клеток. Изучены биологические свойства изолята ВГС А/свинья/Владимирское/2010/ H3N2, при культивировании его в КЭ, перевиваемой и первичной культурах клеток. Определена его гемагглютинирующая, инфекционная и антигенная активности. Установлены основные параметры инактивации ВГС типа А подтипов H1N1 и H3N2 при

сохранении их основных антигенных и гемагглютинирующих свойств.

Теоретическая и практическая значимость работы. На основании проведенных исследований изучены биологические свойства полученного изолята и штаммов ВГС типа А подтипов H1N1 и H3N2. Выявлены основные параметры их культивирования на культурах клеток и куриных эмбрионах. Установлены параметры инактивации ВГС, а также приготовления и хранения иммуноспецифических компонентов ВГС типа А. Определена корреляционная зависимость полученных результатов исследований в разработанных тест-системах с коммерческими наборами ИФА.

По результатам проведенных исследований разработан и утвержден пакет научно-технической документации:

- Набор и инструкция для выявления антител к вирусу гриппа свиней типа А подтипа H1N1 в реакции торможения гемагглютинации (СТО 00495527-0189 -2012), утвержденные Россельхознадзором в 2012 году;

- Промышленный регламент на изготовление и контроль «Набора для серодиагностики гриппа свиней типа А подтипа H1N1 в реакции торможения гемагглютинации», утвержденный директором ФГБУ «ВНИИЗЖ» в 2011 году;

Предложены, комиссионно проверены, одобрены ученым советом и утверждены директором ФГБУ «ВНИИЗЖ» следующие методические указания:

- «Методические указания по выявлению антител к вирусу гриппа свиней типа А в реакции торможения гемагглютинации» в 2010 году;

- «Методические указания по выявлению антител к вирусу гриппа свиней типа А в реакции микронейтрализации» в 2011 году;

-^«Методические указания по выявлению антител к вирусу гриппа свиней типа А подтипа H3N2 в реакции торможения гемагглютинации» в 2013 году.

Методология и методы исследования. Для достижения поставленной цели диссертационной работы были использованы экспериментальные методы исследования, включающие в себя прямые и косвенные методы лабораторной диагностики. Прямые методы были задействованы при вирусологических исследованиях, а именно выделение и наработка ВГС типа А в куриных

эмбрионах и культуре клеток. В качестве косвенных методов лабораторной диагностики применяли серологические исследования (РТГА, РМН, ИФА) для выявления антител к вирусу гриппа свиней.

Основные положения диссертационной работы, выносимые на защиту:

1. биологические свойства ВГС типа А;

2. подбор оптимальных условий культивирования ВГС типа А в КЭ и КК;

3. гемагглютинирующая, инфекционная и антигенная активность ВГС типа А;

4. технология получения иммуноспецифических компонентов РТГА для выявления ВГС типа А.

Исследования по диссертационной работе выполнены в 2010-2013гг. в Федеральном государственном бюджетном учреждении «ФГБУ ВНИИЗЖ».

Соответствие диссертации паспорту научной специальности. В соответствии с шифром специальности 03.02.02 «Вирусология», охватывает проблемы инфекционности вирусов, разработки мер и средств диагностики вызываемых вирусами заболеваний, включая области исследований: взаимодействие между вирусами, эпидемиологии и путей распространения, и передачи вирусных инфекций, выявление естественных носителей, разработку мер диагностики вирусных заболеваний, совершенствование лабораторных диагностических систем. В диссертационной работе проведены исследования по разработке методов культивирования вируса гриппа свиней типа А подтипа H1N1 и H3N2 в КЭ и перевиваемой, и первичной культурах клеток, инактивации и хранения полученного вирусного материала, получение иммуноспецифических компонентов, подбору эритроцитов, очистке нативных сывороток от термостабильных и термолабильных ингибиторов.

Результаты научного исследования соответствуют пунктам паспорта специальности 2, 3, 6, 7, 10.

Степень достоверности и апробация результатов. Результаты проведенных исследований получены с использованием большого объема экспериментального материала, данные опытов обработаны статистическими методами, что подтверждает их достоверность. Материалы диссертационной работы доложены и

обсуждены на заседаниях учёного совета «ФГБУ ВНИИЗЖ» в 2010-2012 годах, на Международной научной конференции «Достижение молодых ученых в ветеринарную практику» (Владимир, 2010 г.), на Всероссийской научной конференции «Актуальные проблемы биологии» (г. Чебоксары 2011 г.).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 4 научных работы, две из них - в изданиях по перечню ВАК Министерства образования и науки РФ для докторских и кандидатских диссертаций.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 143 страницах компьютерного текста и содержит следующие разделы: введение, обзор литературы, результаты собственных исследований и их обсуждение, заключение, выводы, практические предложения, приложения; иллюстрирована 32 таблицами и 10 рисунками. Список использованной литературы включает 166 источников, из них 135 на иностранном языке. В приложении представлены копии титульных листов документов, подтверждающих достоверность результатов работы, ее научную новизну и практическую значимость.

Личный вклад автора в выполнение работы. Диссертационная работа выполнена автором самостоятельно. Автор выражает искреннюю благодарность сотрудникам ФГБУ «ВНИИЗЖ»: к.в.н. Долгановой Е.К., к.б.н. Баборенко Е.П., к.в.н. Пузанковой О.С., к.в.н. Шевцову A.A., к.в.н. Чвале И.А., а также Горюшеву О.Ю. за помощь в проведении отдельных этапов работы.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

2.1 Классификация вируса гриппа

Согласно формулировке международного комитета по таксономии вирусов семейство Orthomyxoviridae (от греч, orthos - правильный, прямой, и тухо -слизь), включает в себя пять родов РНК-содержащих вирусов: Influenzavirus А, Influenzavirys В, Influenzavirus С, Thogotovirus и Isavirus.

Первые три рода вызывают заболевание гриппом у позвоночных, в том числе у птиц и млекопитающих, например, свиней и людей. Род Isavirus поражает рыб семейства лососевых, Thogotovirus способен заражать как позвоночных, так и беспозвоночных животных, таких как комары и морские вши [31; 7; 96; 98;].

Три рода: Influenzavirus А, Influenzavirus В, Influenzavirus С. включают в себя только по одному типу вируса гриппа: А, В и С соответственно.

Вирус гриппа типа А, поражает широкий диапазон видов птиц и млекопитающих, в последнюю группу включены человек, свиньи, лошади и водные млекопитающие [42; 62; 146]. Вирус гриппа типа А поделен на подтипы на основе антигенной природы их поверхностных гликопротеинов -гемагглютинина (НА) и нейраминидазы (NA). До настоящего времени было идентифицировано 17 различных НА (от Н1 до Н17) и 10 NA (от N1 до N10) среди всех вирусов гриппа [77, 90, 163].

Вирус гриппа В, как правило, встречается только у человека, хотя выявлены случаи заболевания тюленей. Данный тип гриппа способен вызывать эпидемию,

________ но не влечет-за собой-пандемии-среди-людей—Вирус гриппа В не^разделяют на

подтипы. [131,85,97, 99, 110].

Вирус гриппа типа С вызывает легкую форму заболевания у людей, и не приводят к эпидемиям и пандемиям [62].

2.2 Морфологический и химический состав вируса гриппа свиней и устойчивость к физико-химическим факторам

В научной литературе подробно описаны антигенные, генетические, структурные и биологические характеристики вируса гриппа А [99; 111]. Вирион ВГС имеет сферическую или нитевидную морфологию и средний размер, в диаметре от 80 до 120 нм (Рисунок 1).

,NP (nucleocapsid protein)

Lipid bilayer

PB1.PB2, PA (polymerase)

M2 (Ion channel)

NA

(neuraminidase)

(matrix protein)

HA

(hemagglutinin)

NS1A (infected cell protein)

Рисунок 1 - Схематическое представление вируса гриппа А

На рисунке 1 представлены 9 белков вириона, вирусной оболочки и восемь сегментов вирусной РНК. Белок NS1A встречается только в инфицированных клетках, а не в вирионе [116].

Вирус заключен в оболочку, липидная мембрана вириона развивается из клетки-хозяина, в которой вирус реплицировался. От поверхности оболочки отпочковываются два трансмембранных гликопротеина НА и NA, которые принято называть «шипами» (рисунок 2). Третий трансмембранный белок, матричный белок М2, также существует, но в количестве всего 20-60 молекул на вирион. Матричный белок М1 формирует слой под оболочкой, таким образом,

дает структуру вирусу и заключает в капсид рибонуклеопротеиновый (РНП) комплекс. РНП комплексы состоят из рибонуклеиновой кислоты (РНК), ассоциированной с нуклеопротеином (НП), также как и с полимеразами РА, PB 1 и РВ2, отвечающими за репликацию и транскрипцию РНК. С вирусом также ассоциируются два неструктурных белка: NS2 обнаружен в вирионе, в то время как NS1 обнаруживается только в инфицированных клетках. Каждая нить РНК кодирует только один белок, исключение составляют нити 7 и 8, кодирующие два белка (Таблица 1) [98, 151].

Таблица 1 - Восемь сегментов, кодируемых 11 белками, их длина и

функции

РНК сегмент Нуклеотиды Белок Функции

1 2341 полимераза РВ2 транскриптаза: связывание cap участка

2 2341 полимераза РВ1 транскриптаза: удлинение

PB1-F2 вирулентность

3 2233 полимераза РА транскриптаза: активность протеаз

4 1778 гемагглютинин НА сСвязывание вируса к клетке-хозяину

5 1565 нуклеопротеин NP связывания РНК, часть комплекса транскриптазы

6 1413 нейраминидаза N А выпуск зрелых вирионов из клетки-хозяина

7 1027 матричный белок М1 компонент вирусной оболочки

матричный белок М2 интегральный мембранный белок: ионный канал

8 890 неструктурный белок NS1 счетчики интерферона, продукт иммунной системы хозяина

неструктурный белок NS2 влияние на транспорт клеточной РНК из ядра клетки-хозяина в цитоплазму, сплайсинга, перевод

Из таблицы 1 видно, что геном вируса гриппа состоит из восьми уникальных сегментов однонитевой РНК, имеющих отрицательную полярность. Сохранение

------BFC b окружающей среде зависит от температуры, рН, минерализации и наличия

органического материала. Несмотря на то, что вирус гриппа имеет оболочку, некторые из них, по наблюдениям, могут пребывать в окружающей среде длительное время, особенно при низкой температуре. Вирус гриппа млекопитающих более лабильный, но и он может сохраняться in vivo в течение нескольких часов в сухой слизи [140].

При низких температурах в лиофилизированном состоянии вирус сохраняется

до двух лет. При температуре 55°С инактивируется за 1 ч, при 60 °С - за 10 минут, при 65-75°С - за 2-5 мин. Также вирус утрачивает инфекционную активность под воздействием формальдегида, едких щелочей, 70-% этанола, кислот (pH < 2), хлорсодержащих и других соединений [2].

2.3 Репликация вируса

Цикл репликации вируса гриппа начинается с расщепления НА на НА1 и НА2 ферментами, присутствующими в респираторном тракте хозяина, наряду с этим ферменты могут быть продуцированы бактериями микрофлоры хозяина, которые, таким образом, могут вызвать заражение гриппом. Вирус, культивируемый в клетках, которым недостает расщепляющих ферментов, может быть активирован трипсином. После расщепления НА, рецептор-связывающий сайт НА1 может прикрепиться к терминальному остатку сиаловой кислоты рецептора клеточной поверхности; прикрепившись к клетке-хозяину, вирус эндоцитируется (опосредуемый рецепторами эндоцитоз) (рисунок 2). NA функционирует как рецептор-разрушающий фермент, отщепляя терминальные остатки сиаловой кислоты от рецептора. Таким образом, NA высвобождает вирионы-потомки из клетки-хозяина, в которой они появились, и способствует распространению вируса. Вирионы-потомки могут инфицировать другие клетки или передаваться другому хозяину.

Рисунок 2 - Репликационный цикл вируса гриппа |114).

2.4 Патогенез

Заражение ВГС, как правило, происходит через респираторный тракт, репликация вируса доказана в эпителиальных клетках слизистой оболочки носа, миндалинах, трахеи, легких и в трахеобронхиальных лимфатических узлах [124, 83]. Очистка вируса в организме происходит достаточно быстро. В большинстве экспериментальных исследований выделение вируса из носа начинается на 1 день после заражения и прекращается в течение 7 дней. Через неделю ВГС не выделяется из тканей легких или из других тканей дыхательных путей [124, 46.] Легкие, очевидно, являются основным органом-мишенью. Титр вируса в легких

о

может быть> 10 ЭИД50 на грамм ткани [82, 155]. Реакции иммунофлюоресценции (РИФ) и иммуногистохимии демонстрируют весьма специфический тропизм вируса к эпителию бронхов [48; 124; 82; 155]. До 100% от эпителиальной выстилки бронхов/бронхиол и большое количество альвеолярных эпителиальных клеток может иметь положительное окрашивание в РИФ. Как правило, бронхи и бронхиолы содержат экссудат с дегенеративными и отделяющимися клетками

слизистой оболочки и нейтрофилы. Тем не менее, на 2-3 день после заражения, титр вируса в легких начинает снижаться.

Заражение ВГС может быть легко воссоздано экспериментально, путем интраназального, аэрозольного или интратрахеального метода заражения. Однако воспроизведения характерных клинических признаков и патологических изменений при ГС можно добиться путем заражения высокими дозами вируса интратрахеально (>107'5 ЭИД50) [102].

Непосредственное повреждение клеток вирусом гриппа сравнивалось с апоптозом, индуцированным нейраминедазой (КА) и/или белками РВ1Р2 [148; 133; 134]. Тем не менее, провоспалительные цитокины, продуцируемые хозяином во время острой стадии инфекции, вероятно, играют важную роль в развитии заболевания. Подтверждение этому находят при исследовании легких свиней, подвергшихся заражению вирусом гриппа, по выявлению интерферона-а (ИФН а), фактора некроза опухоли- а (ФНОа), интерлейкина-1 (ИЛ-1) и интерлейкина-6 (ИЛ-6) [155, 158]. Перечисленные выше цитокины, как известно, вызывают дисфункцию легких и воспаление, лихорадку, общее недомогание, потерю аппетита и действуют друг на друга в качестве энхансеров.

Таким образом, количество вируса в нижних дыхательных путях определяет степень производства цитокинов в легких, что в свою очередь характеризует тяжесть заболевания. Многие цитокины, тем не менее, обладают противовирусным и иммуностимулирующим эффектами и, следовательно, могут способствовать нейтрализации вируса в организме.

_ 2.5 Клинические нризнаки______________

Инфекция вируса гриппа типа А, как правило - стадное заболевание, связанное с быстрым распространением вируса среди восприимчивых животных. Заболевания, вызванные вирусом гриппа подтипа НШ1, НШ2 и НЗК2, по клиническим проявлениям очень схожи между собой, и все три подтипа связаны с острыми респираторными случаями у свиней в большинстве Европейских стран и США [45, 96, 159, 74; 76]. Наблюдается внезапное начало заболевания после

инкубационного периода в 1 -3 дня. Типичные признаки заболевания проявляются у большого числа животных не зависимо от возраста внутри стада или эпидемиологической единицы.

Перечень признаков, описаных в 1920-х, по сути, не претерпели существенных изменений [61; 104; 137]. До настоящего времени симптомокомплекс заболевания у свиней включает в себя: лихорадку, отказ от корма, пассивность, скучивание, прострацию, задержку в росте и потерю веса. Также наблюдаются конъюнктивиты, риниты, чихание и кашель. При прогрессировании болезни наблюдается одышка, дыхание с открытым ртом при передвижении животных. Заболеваемость свиней ГС высокая (около 100%), но смертность обычно низкая (менее 1 %) в том случае, если нет хронических заболеваний, вторичных инфекций. Обычно выздоровление наступает на 5-7 сутки после начала заболевания. Острые вспышки ГС с типичной клиникой, как правило, возникают среди серонегативных поросят из группы доращивания или взрослых свиней из группы откорма. Например, в Европе повторное появление гриппа на временно серонегативных производственно-откормочных фермах часто связано с заболеванием среди свиней весом 50 кг и более [67].

С другой стороны, у животных на доращивании наблюдался приобретенный активный иммунитет, как рреакция на предыдущее заболевание, а их потомство, с колостральным иммунитетом, в основном остается здоровым [105, 106,107].

Доказано субклиническое проявление инфекции с высоким уровнем серопревалентности подтипов вируса гриппа у свиней на стадии откорма в отсутствие существенного респираторного заболевания и выделения вируса от "свиней" без "признаков заболевания [78].

Тем не менее, ряд факторов, таких как возраст животного, прогрессирование инфекции, климатические условия, содержание животных, могут повлиять на клиническое проявление и исход ВГС. Вторичные инфекции, вызванные бактериальными патогенами, например, Actinobacillus pleuropneumonia, Pasteurella multocida, Мусорlamsa hyopneumoniae, и др., в значительной степени усугубляют течение инфекции ВГС.

До 50% вспышек гриппа у свиней на промышленных свиноводческих комплексах осложняются вышеуказанными бактериальными инфекциями [67].

Литературные данные свидетельствуют, что в естественных условиях в качестве осложняющих грипп агентов могут выступать возбудители респираторного коронавируса свиней (РКВС) или вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней (РРСС) [87; 101; 157]. Экспериментально установлено, что проявление лихорадки, респираторного синдрома, а также замедление в росте были более тяжелыми и длительными при ассоциированных инфекциях относительно заражения свиней одним только вирусом гриппа [157; 156, 158]. В последствии, после вспышки гриппа в стаде, ветеринары сообщали о эпизодических случаях возникновения у свиноматок патологий репродукции, с увеличением числа прохолостов, абортов, малоплодности, мертворождений и получения нежизнеспособных поросят.

2.6 Патологоанатомические и гистологические изменения

Патологоанатомические изменения обнаруживаются в основном при легкой форме вирусной пневмонии ГС. Чаще всего поражаются апикальная и сердечная доли легкого. До 50% поражения легких происходит на 4-5 сутки после инфицирования [48; 122]. Как правило, образуется четкая демаркационная линия между пораженными и нормальными тканями легких, при этом пораженная область приобретает большую плотность и фиолетовый оттенок. Часто обнаруживают междольковые отеки. Дыхательные пути заполнены кровянистым фибринозным экссудатом, а связанные с ним бронхи и средостенные лимфоузлы,

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Ремыга, Степан Геннадьевич, 2013 год

Список терминов

Вирусные болезни: группа инфекционных болезней человека, животных, растений и насекомых, вызываемых вирусами.

Вирусологические методы исследования: методы изучения биологии вируса и их идентефикации.

Гемагглютинация: склеивание и выпадение в осадок эритроцитов под воздействием бактерий, вирусов, токсинов и др., способных адсорбироваться на поверхности эритроцитов, а также гемагглютининов.

Лиофилизация: лиофильная сушка, сублимационная сушка, метод высушивания биологических объектов и пищевых продуктов в замороженном состоянии под вакуумом.

Титр вируса: количество вируса в единице объема.

Реассортация: построение генома дочернего вируса из фрагментов геномов разных родителей.

Антитело: белок, синтезированный лимфоцитами крови в ответ на вторжение «посторонних» веществ или организмов (антигенов).

Антиген: высокомолекулярное соединение, способное специфически стимулировать иммунокомпетентные лимфоидные клетки и обеспечивать тем самым развитие иммунного ответа организма.

Секундарная инфекция: инфекция, которая развивается на фоне какой-либо первичной (основной) инфекции и осложняет ее.

Антигенный дрейф: эволюционные изменения в молекулярной структуре ДНК/РНК у микроорганизмов при их переходе от одного хозяина к другому.

Изменения возможны в результате рекомбинации, делеции или инсерции генов, точечных мутаций или их сочетания.

9. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Ашмарин И.П., Воробьев A.A. Статистические методы в микробиологических исследованиях. - Л.: Медгиз, 1962. - 180 с.

2. Белоусова Р.В., Преображенская Э.А., Третьякова И.В. Ветеринарная вируслогия. - М.: КолосС, 2007. - 424 с.

3. Биотехнология / И. В. Тихонов, Е. А. Рубан, Т. Н. Грязнева [и др.]. -СПб.: ГИОРД, 2005. - 792 с.

4. Болезни домашних и сельскохозяйственных птиц / под ред Б. У. Кэлнека. - М.: АКВАРИУМ БУК, 2003. - 1232 с.

5. Болезни сельскохозяйственных птиц / А. А. Лимаренко, И. С. Дубров, А. А. Таймасуков, С. Н. Забашта. - СПб: Лань, 2005. - 448 с.

6. Вероятность и математическая статистика: энциклопедия. - М.: Большая Российская энциклопедия, 1999. - 911 с.

7. Вирусные болезни животных / В.Н. Сюрин, А. Я. Самуйленко, Б. В. Соловьев, Н. В. Фомина. - М: ВНИТИБП, 1998. - 928 с.

8. Виткова О. Н. Эпизоотическая ситуация по гриппу птиц и лабораторная диагностика гриппа птиц // Актуальные проблемы промышленного птицеводства - грипп птиц. СПб.: ЛЕНЭКСПО, 2005. - С. 17-19.

9. Выделение вирусов гриппа в клеточной структуре MDCK / А. А. Соминина, А. О. Монаенков, О. М. Литвинова [и др.]. - СПб.: Научно-исследовательский институт гриппа, 1999. -12 с.

1 ОГ ГайдышеЁГ И. Аналйз и Ъбработка данных: спец. справочник. - СПб: Питер, 2001.-748 с.

И. Гайтамонова С.А., Ковалев H.A. Применение реакций гемагглютинации и торможения гемагглютинации для выявления антигена и антител при парвовирусной болезни свиней // Ветеринарная наука - межвед. сб. -Минск, 1989. - Вып. 27. - С. 6 - 9.

12. Гендон Ю. 3. Культуральные гриппозные вакцины // Вопр. вирусологии. -

2002. - №6.-С. 4-1.

П.Госманов Р. Г., Колычев Н. М. Ветеринарная вируслогия. - М.: Колос, 2006. - 304 с.

14. Грипп свиней (эпизоотология, диагностика, меры борьбы и профилактики) / С.А. Кукушкин, Т. 3. Байбиков, А. В. Каньшина, М.В. Челышева // Ветеринария. - 2009. - № 9. - С. 3.

15. Дубнер П.Н. Справочник по статистическим распределениям. - 2000. -URL: http://algolist.manual.ru/maths/matstat/index.ph- Р.

16. Жданов В. М. Эволюция вирусов - М.: Медицина, 1990. - С 153 - 167.

17. Иванов Ю.И., Погорелюк О.Н. Статистическая обработка результатов медико-биологических исследований. - М.: Медицина, 1990. - 100 с.

18. Иммунологическая диагностика вирусных инфекций / под ред Т.В. Перадзе. - М.: Медицина, 1985. - 302 с.

19. Инфекционная патология животных / А .Я. Самуйленко, Б.В. Соловьёв, Е.А. Непоклонов, Е.С. Воронин. - Т. 1. -М.: Академкнига, 2006. - 1911 с.

20. Каверин Н.В., Смирнов Ю.Л. Межвидовая трансмиссия вирусов гриппа А и проблема пандемий // Вопр. вирусологии. - 2003. - №3. -С. 4-12.

21.Кошелева Л.В. Использование РТГА для диагностики парвовирусной инфекции свиней // Бюл. ВИЭВ. - М. 1985. - Вып. 60. - С. 20 - 22.

22. Крамер Г. Математические методы статистики. - М.: Мир, 1975. - 648 с.

23. Методические указания по обнаружению вируса гриппа свиней типа А методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени / A.B. Щербаков, М. В. Челышева, А.М. Тимина; ФГУ "ВНИИЗЖ". -Владимир, 2009. - 8 с.

24. Орлов А.И. Прикладная статистика: учебник. - М.: Экзамен. 2004. - 656 с.

25. Плохинский H.A. Биометрия - М.: Изд-во Моск. ун-та, 1970. - 367с.

26. Садовский Н.В. Константные методы математической обработки количественных показателей // Ветеринария. - 1987. - № 5. - С. 42-46.

27. Сергеев В.А., Непоклонов Е.А., Алипер Т.И. Вирусы и вирусные вакцины. - М.: Библионика, 2007. - С. 206-223.

28. Смородинцев А.А. Грипп и его профилактика. - М.: Медицина, 1984. -383 с.

29. Стратегия и тактика борьбы с гриппом на различных этапах эпидемиологического процесса / С.С. Ямникова, О.Н. Виткова, М.В. Калмыков, Н.А. Власов // Ветеринарная медицина: м1жвщ. тем. наук. зб. -Вип. 87. - Харюв, 2006. - С. 307-312.

30. Сюрин В.Н., Белоусова Р.В., Фомина Н.В. Ветеринарная вирусология. -М.: Агропромиздат, 1991.-338с.

31. Сюрин В.Н., Белоусова Р.В., Фомина Н.В. Диагностика вирусных болезней животных: справочник. - М: Агропромиздат, 1991. - 296 с.

32. Троценко Н.И., Белоусова Р.В., Преображенская Э.А. Практикум по ветеринарной вирусологии. - 2-е изд., перераб. и доп. - М.: Колос, 1999. -271 с.

33. A comparison of diagnostic assays for the detection of type A swine influenza virus from nasal swabs and lungs / S.L. Swenson, L.L. Vincent, B.M. Lute [et al.] //J. Vet. Diag. Invest. - 2001. - Vol. 13. - P. 36-42.

34. A distinct lineage of influenza A virus from bats / S. Tong, Y. Li, - P. Rivailler [et al.] // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 2012. - Vol. 13. - P. 4269^1274.

35. Adaptation and limitations of established hemagglutination inhibition assays for the detection of porcine anti-swine influenza virus HIN2 antibodies / B.C. Long, T.L. Goldberg, S.L. Swenson [et al.] // J. Vet. Diagn. Invest. - 2004. -Vol. 16. - P. 264-270.

36. Amino acid residues contributing to the substrate specificity of the influenza A virus neuraminidase / D. Kobasa, S. Kodihalli, M. Luo, M.R. Castrucci [et al.] J. of Virol. - 1999 -Vol. 73.-P. 6743-6751.

37. Antigenic and genetic analyses of H1N1 influenza A viruses from European pigs / I.H. Brown, S. Ludwig, C.W. Olsen [et al.] // J. Gen. Virol. -1997. - Vol.

78. - P. 553-562.

38. Antigenic and genetic characteristics of swine-origin 2009 A (H1N1) influenza viruses circulating in humans / R.J. Garten, C.T. Davis, C.A. Russell [et al.] // Science. - 2009. - № 325. - P. 197-201.

39. Antigenic categorization of contemporary H3N2 swine influenza virus isolates using a high-throughput serum neutralization assay / B. M. Hause, T.A. Oleson, R.F. Bey [et al.] // J. Vet. Invest. - 2010. - Vol. 22. - - P. 352-359.

40. Antigenic drift in swine influenza H3 haemagglutinins with implications for vaccination policy / J.C. de Jong, A.- P. van Nieuwstadt, T.G. Kimman [et al.] //Vaccine. - 1999.-Vol. 17. - P.1321-1328.

41. Antigenic variant of swine influenza virus causing proliferative and necrotizing pneumonia in pigs / S. Dea, R. Bilodeau, R. Sauvageau [et al.] // J. Vet. Diagn. Invest. - 1991. - Vol. 4. - P. 380-392.

42. Avian Influenza (Bird Flu). Centers for Disease Control and Prevention. -2007.

43. Barbe F. Novel insights in the serodiagnosis and pathogenesis of swine influenza: Thesis for obtaining the degree of Doctor in Veterinary Sciences (Ph.D.). - 2009. - P. 39-63.

44. Brown I.H. Influenza A viruses in pigs in Europe // Trends in Emerging Viral Infections of Swine / ed. A. Morilla, K-J Yoon, J.J. Zimmerman. -Ames, Iowa, 2002. - P. 29-36.

45. Brown I.H. The epidemiology and evolution of influenza viruses in pigs // Vet. Microbiol. - 2000. - Vol. 74. - P. 29-46.

-46. Choi Y7K.7G0yal~S.M7, Joo H:S7 Evaluation of transmissionof swineinfluenza type A subtype HIN2 virus in seropositive pigs // Am. J. Vet. Res. - 2004. -Vol. 65. - P. 303-306.

47. Class specific antibody response to influenza A H1N1 infection in swine / B.W. Lee, R.F. Bey, M.J. Baarsch, M.E. Larson // Vet. Microbiol. -1995. -Vol. 43,--P. 241-250.

48. Comparative pathogenicity of atypical and typical swine influenza viruses / B.

Born, L.Vincent, B. Janke, - P. Paul // 29th Proc. Annu. Meet. Am. Assoc. Swine Pract. -1998. - P. 63-66.

49. Comparison of embryonated chicken eggs with MDCK cell culture for the isolation of swine influenza virus / A. Clavijo, D.B. Tresnan, R. Jolie, E.M. Zhou // Can. J. Vet. Res. - 2002. - Vol. 66. - P. 117-121.

50. Comparison of Madin-Darby canine kidney cells (MDCK) with a green monkey continuous cell line (Vero) and human lung embryonated cells (MRC-5) in the isolation of influenza A virus from nasopharyngeal aspirates by shell vial culture / J. Reina, V. Fernandez-Baca, I. Blanco, M. Munar // J. Clin. Microbiol. - 1997. - Vol. 35. - P. 1900-1901.

51. Comparison of the pathogenesis of two genetically different H3N2 influenza A viruses in pigs / G.A. Landolt, A.I. Karasin, L. Phillips, C.W. Olsen // J. Clin. Microbiol. - 2003. - Vol. 41. - P. 1936-1941.

52. Comparison of three serological assays to determine the cross reactivity of antibodies from eight genetically diverse U.S. swine influenza viruses / B. Leuwerke, - P. Kitikoon, R. Evans [et al.] // J. Vet. Diagn. Invest. - 2008. - Vol. 20.-P. 426-432.

53. Cottey R., Rowe C.A., Bender B.S. - Influenza virus // Curr. Protoc. Immunol. -2001.-Vol. 19. - P. 1-32.

54. Cox N.J., Subbarao K. Global epidemiology of influenza: past and present // Annu. Rev. Med. - 2000. Vol. 51. - P. 407^121.

55. Cunliffe H.R. Inactivation of foot-and-mouth disease virus with ethylenimine // Appl. Microbiol. - 1973. - Vol. 26. - P. 747-750.

56. Detection and subtyping of swine influenza H1N1, H1N2 and H3N2 viruses in clinical samples using two multiplex RT-PCR assays / Choi Y.K., Goyal S.M., Kang S.W. [et al.] // J. Virol. Methods. - 2002. - Vol. 102. - P. 53-59.

57. Detection rates of porcine reproductive and respiratory syndrome virus, porcine circovirus type 2, and swine influenza virus in porcine proliferative and necrotizing pneumonia / R. Drolet, R. Larochelle, M. Morin [et al.] // Vet.

Pathol. -2003. - Vol. 40. - P. 143-148.

58.Detmer S.E. Influenza Surveillance: antibody detection methods // Flu News. -2010.-Vol. 2, Issue 1. - P. 1-4.

59. Development of a high-throughput Alamar blue assye for the deter-mination of influenza virus infectious dose, serum antivirus neutralization titer and virus cats phenotype / C. Mo, R. Yamagata, A. Pan [et al.] // J. Virol. Methods. -2008.-Vol. 150.-P. 63-69.

60. Diseases of Swine / B. E. Straw [et al.]. - 9th ed. - Ames, Iowa: Blackwell Publ., 2006. - - P. 469.

61. Dorset M., McBryde C.N., Niles W.B. Remarks on "hog flu" // J. Am. Vet. Med. Assoc. -1922. - Vol. 62. - P. 162-171.

62. E.G. Rendell. Influenza virus types, subtypes, and strains // The Pennsylvania Pandemic Influenza Preparedness Planning Summit. - 2006.

63. Easterday B.C. Animal influenza. // The Influenza Viruses and Influenza / ed. E.D. Kilbourne. - Orlando. -1975. - P. 449-481.

64. Easterday B.C. Animals in the influenza world // Phil. Trans. Royal. Soc. (London). - 1980. - Vol. 288. - P. 433-437.

65. Easterday B.C. Influenza virus infection of the suckling pig //Acta Vet. -1971. -№ 2 (Suppl.). - P. 33-42.

66. Easterday B.C., Van Reeth K. Swine influenza // Diseases of Swine. - 8th / ed. B.E. Straw [et al.]. - Ames, Iowa, 1999. - P. 277-290.

67. Effect of maternally derived antibodies on the clinical signs and immune response in pigs after primary and secondary infection with an influenza H1N1

--virus-/-WtL. Loeffen; - P^P._Heinen, A:T. Biancht [eral.] 7/~Vet7lmmunol7

Immunopathol. -2003. - Vol. 92. - P. 23-35.

68. Efficacy and safety of Maxivac-M+, a combination swine influenza vaccine, killed virus—Mycoplasma hyopneumoniae bacterin / Rapp-Gabrielson V.J., Gergen L.R., Eddy B.A. [et al.] // Proc. Am. Assoc. Swine. Pract. -2000. - P. 201-205.

69.Emergence of a New Swine H3N2 and Pandemic (H1N1) 2009 Influenza A

virus reassortant in two Canadian animal populations, mink and swine / D. Tremblay, V. Allard, J. Doyon, C. Bellehumeur [et al.] // J. of Clin. Microbiol. -2011.-Vol. 49. -P. 4386-4390. '

70.Emergence of novel reassortant H3N2 swine influenza viruses with the 2009 pandemic H1N1 genes in the United States / Q. Liu, J. Ma, H. Liu, W. Qi [et al.] // Archives of Virology. - 2012. - Vol. 157. - P. 555-562.

71. Epizootics of respiratory tract disease in swine in Belgium due to H3N2 influenza virus and experimental reproduction of disease / F. Haesebrouck, - P. Biont, M.R. Pensaert, J. Leuven // Am. J. Vet. Res. -1985. - Vol. 46. - P. 19261928.

72. Establishment and characterization of two new pig cell lines for use in virological diagnostic laboratories / M. Ferrari, A. Scalvini, M.N. Losio [et al.] // J. Virol. Methods. - 2003. - Vol. 107. - P. 205-212.

73. Gaush C.R., Smith T.F. Replication and plaque assay of influenza virus in an established line of canine kidney cells // Appl. Microbiol. -1968. -Vol. 16. - P. 588-594.

74. Genetic characterization of HIN2 influenza A viruses isolated from pigs throughout the United States / A.I. Karasin, J.G. Landgraf, S.L Swenson. [et al.] // J. Clin. Microbiol. -2002. - Vol. 40. - P. 1073-1079.

75. Genetic characterization of H3N2 influenza viruses isolated from pigs in North America, 1977-1999: Evidence for wholly human and reassortant virus genotypes / A.I. Karasin, M.M. Schutten, L.A. Cooper [et al.] // Virus Res. -2000.-Vol. 68.--P. 71-85.

~76: Genetkr reassortment of avian; swine;-and human" influenza" A viruses" in American pigs / N.N. Zhou, D.A. Senne, J.S. Landgraf [et al.] //J. Virol. -1999. -Vol. 73. - P. 8851-8856.

77. Genetic relationships, serological cross-reaction and cross-protection between influenza A virus subtypes endemic in European pigs / K. Van Reeth, I. Brown, S. Essen, M. Pensaert // Virus Res. - 2004. - Vol. 103. - P. 115-124.

78. Genomic reassortment of influenza A virus in North American swine, 1998-

2011 / M. Nelson, S.E. Detmer, D.E. Wentworth, Y. Tan [et al.] // J. of Gen. Virology. - 2012. - Vol. 93. - P. 2584-2589.

79. Gibbs A.J., Armstrong J.S., Downie J.C. From where did the 2009 'swine-origin' influenza A virus (H1N1) emergen // Virol. J. -2009. - Vol. 6. - P. 207.

80. Girard C., Morin M., Elazhary Y. Experimentally induced porcine proliferative and necrotising pneumonia with an influenza A virus // Vet. Rec. - 1992. - Vol. 130. - P. 206-207.

81. Global patterns of influenza a virus in wild birds / B. Olsen, J.V. Munster, A. Vallensten [et al.] // Science. - 2006. - Vol. 312, № 5772. - P. 384-388.

82. Haesebrouck F., Pensaert M. Effect of intratracheal challenge of fattening pigs previously immunized with an inactivated influenza H1N1 vaccine // Vet. Microbiol. -1986. - Vol. 11. - P. 239-249.

83. Heinen P.P., de Boer-Luijtze E.A., Bianchi A.T. Analysis of the quality of protection induced by a porcine influenza A vaccine to challenge with an H3N2 virus // Vet. Immunol. Immunopathol. - 2001. - Vol. 82. - P. 39-56.

84. Heinen P.P., de Boer-Luijtze E.A., Bianchi A.T. Respiratory and systemic humoral and cellular immune responses of pigs to a heterosubtypic influenza A virus infection // J. Gen. Virol. -2001. - Vol. 82. - P. 2697-2707.

85. Herller G., Hausmann J., Klenk H.D. Sialic, acid a receptor determinant of ortho- and paramyxoviruses // ed. A. Roseberg // Biology of the Sialic Acids. -New York, - 1995. -P. 315-336.

86. Hinshaw V.S., Bean W.J., Webster R.G., Easterday B.C. The prevalence of influenza viruses in swine and the antigenic and genetic relatedness of influenza

~ viruses from man~andswine7/~ Virology."-1978:- Vol. 84~~P:51-62:

87. Houben S., Van Reeth K., Pensaert M.B. Pattern of infection with the porcine reproductive and respiratory syndrome virus on swine farms in Belgium // J. Vet. Med. -1995. - Vol. 42. - - P. 209-215.

88. Immunization of pigs with a particle-mediated DNA vaccine to influenza A virus protects against challenge with homologous virus / M.D. Macklin, D. McCabe, M.W. McGregor [et al.] // J. Virol. - 1998. - Vol. 72. - - P. 1491-

89. Influenza B virus in seals / A. Osterhaus, G. Rimmelzwaan, B. Martina [et al.] // Science. - 2000. - Vol. 288, № 5468. - P. 1051-1053.

90. Influenza Type A Viruses and Subtypes. - URL:

http://www.cdc.gov/flu/avianflu/influenza-a-virus-subtypes.htm. 91.Isolation of swine influenza virus in Oklahoma / L.N.D. Potgeiter, E.L. Stair, R.J. Morton, D.L. Whitenack // J. Am. Vet. Med. Assoc. - 1977. - Vol. 171. - P. 758-760.

92. Isolation of two HIN2 influenza viruses from swine in France / J.M. Gourreau, C. Kaiser, M. Valette [et al.] // Arch. Virol. -1994. -Vol. 135. - P. 365-382.

93. Ito T. Interspecies transmission and receptor recognition of influenza A viruses // Microbiol. Immunol. - 2000. - Vol. 44. - P. 423-430.

94. Janke B.H. Diagnosis of swine influenza // Swine Health Prod. - 2000. - Vol. 8.

- P. 79-84.

95. Jones L.D., Patricia A. Non-viraemic transmission of Thogoto virus: influence of time and distance // Trans. R. Soc. Tro- P. Med. Hyg. - 1989. - Vol. 83, № 5. --P. 712-714.

96. Karasin A.I., Anderson G.A., Olsen C.W. Genetic characterization of an HIN2 influenza virus isolated from a pig in Indiana // J. Clin. Microbiol. - 2000. -Vol. 38. -P. 2453-2456.

97. Kilbourne E.D. Influenza. - New York: Springer, 1987. - P. 382.

98. Lamb R.A., Choppin - P.W. The gene structure and replication of influenza virus // Annu. Rev. Biochem. - 1983. - Vol. 52. - P. 467-506.

-99t Lamb-R.A-.T-Krug-R-.M. Orthomyxoviridae: the-viruses-and their replication-//- -Fields Virology / ed. B.N. Fields [et al.] - 3rd ed. - Philadelphia, LippincottRaven, 1996. - P. 1353-1445.

100. Lanza I., Brown I.H., Paton D.J. Pathogenicity of concurrent infection of pigs with porcine respiratory coronavirus and swine influenza virus // Res. Vet. Sci.

- 1992.-Vol. 53. - P. 309-314.

101. Les syndromes grippaux en porcherie d'engraissement: enquete "flash"

realisee en Bretagne / F. Madec, C. Kaiser, A. Jestin [et al.] // Courte Commun. Le Point Veterinaire. - 1987. - Vol. 19. -P. 654-659.

102. Maes L., Haesebrouck F., Pensaert M. Experimental reproduction of clinical disease by intratracheal inoculation of fattening pigs with swine influenza virus isolates // Proc. Cong. Int. Pig. Vet. Soc. -1984. - P. 60.

103. Maternal immunity to H1N1 and H3N2 swine influenza viruses fails to protect against the novel HIN2 subtype / G. Labarque, F. Barbe, M. Pensaert, K. Van Reeth. // Proc. Congr. Int. Pig. Vet. Soc. - 2004. - Vol. 1. - - P. 83.

104. McBryde C.N. Some observations on "hog flu" and its seasonal prevalence in Iowa // J. Am. Vet. Med. Assoc. -1927. - Vol. 71. - P. 368-377.

105. Mensik J. Formation of antibodies in swine influenza. Colostral immunity and inhibition of antibody formation // Ved. Pr. Ustav. Vet. -1963. - Vol. 3. — P.141-149.

106. Mensik J. Production and behavior of swine influenza antibodies. 1. Influence of colostral antibodies on immunity in piglets during early life // Sb. Cesk. Akad. Zemed. Ved. - 1960. - Vol. 5. - P. 599-619.

107. Mensik J. The formation and dynamism of antibodies in swine influenza. 5. A long-term depression of the antibody formation in the progeny of hyperimmune mothers // Vet. Med. (Prague). - 1966. - Vol. 11. - P. 589-595.

108. Mink lung epithelial cells: Unique cell line that supports influenza A and B virus replication / S. Schultz-Cherry, N. Dybdahl-Sissoko, M. McGregor, V.S. Hinshaw // J. Clin. Microbiol. - 1998. - Vol. 36. - P. 3718-3720.

109. Molecular basis for the generation in pigs of influenza A viruses with pandemic potential7 Ito T., Couceiro J.N.S.S^Kelm S. [et alT]"7/~JT Virol. -1998.-Vol. 72. - P. 7367-7373.

110. Murphy B.R., Webster E.G. Influenza viruses // Fields Virology / ed. D.N. Knipe, P.M. Howley. - New York, 1985. - - P. 1179-1240.

111. Murphy B.R., Webster R.G. Orthomyxoviruses // Fields Virology / ed. B. N. Fields [et al.]. - Lippincott-Raven, Philadelphia, 1996. - P. 1353-1445.

112. Myers K.P., Olsen C.W., Gray G.C. Cases of swine influenza in humans: a

review of the literature // Clin. Infect. Dis. - 2007.- Vol. 44. - P. 1084-1088.

113. Neumann G., Kawaoka Y. The first influenza pandemic of the New Millennium // Influenza Other Respi. Viruses. - 2011. - Vol. 5, № 3. - P. 157— 166.

114. Neumann G., Noda T., Kawaoka Y. Emergence and pandemic potential of swine-origin H1N1 influenza virus // Nature. -2009. - Vol. 459. - P. 931-939.

115. New approaches to swine influenza virus isolation / G.A. Erickson, S. Krauss, J.G. Landgraf [et. al.] // Proc. 42nd Ann. Meet. Am. Assoc. Vet. Lab. Diagnos. -1999. -P.45.

116. Noah D.L., Krug R.M. Influenza virus virulence and its molecular determinants // Advances Virus Res. - 2005. - Vol. 65. - P. 121-145.

117. OIE. Chap. - 2.8.8. Swine influenza. - Paris. - 2012. - P. 1127-1137.

118. OIE. Manual of Standards for Diagnostic Tests and Vaccines. - 4th ed. - Paris. -2000.-P. 957.

119. Olsen C.W. Emergence of novel strains of swine influenza virus in North America // Trends in Emerging Viral Infections of Swine. / ed. A. Morilla, K.J. Yoon, J.J. Zimmerman, eds. - Ames, Iowa, 2002. - P. 37-43.

120. Olsen C.W. The emergence of novel swine influenza viruses in North America // Virus Res. - 2002. - Vol. 85. - P. 199-210.

121. Origins and evolutionary genomics of the 2009 swine-origin H1N1 influenza A epidemic / G.J. Smith, D. Vijaykrishna, J. Bahl [et al.] // Nature. - 2009. -Vol. 459, № 7250. - - P. 1122-1125.

122. Pathogenic and antigenic properties of phylogenetically distinct reassortant H3N2 swine influenza viruses cocirculâtinglnlhë United~Statës 7"J:ArRrcht, ~ K.M. Lager, B.H. Janke [et al.] // J. Clin. Microbiol. - 2003. - Vol. 41. - P. 3198-3205.

123. Pathogenicity and transmission in pigs of the novel A (H3N2) influenza virus isolated from humans and characterization of swine H3N2 viruses isolated in 2010-2011 / P. Kitikoon, A.L. Vincent, P.C. Gauger, S.N. Schlink [et al.] // J. of Virol. - 2012. - Vol. 86. - P. 6804-6814.

124. Pathogenicity of a swine influenza H1N1 virus antigenically distinguishable from classical and European strains / I.H. Brown, S.H. Done, Y.I. Spencer [et al] // Vet. Rec. - 1993. - Vol. 132. - P. 598-602.

125. Pathologic consequences of a severe influenza outbreak (swine virus A/H1N1) under natural conditions in the non-immune sow at the beginning of gestation / F. Madec, C. Kaiser, J.M. Gourreau, F. Martinat-Botte // Com- P. Immunol. Microbiol. Infect. Dis. - 1989. - Vol. 12. - P. 17-27.

126. Plaque assay and primary isolation of influenza A viruses in an established line of canine kidney cells (MDCK) in the presence of trypsin / K. Tobita, A. Sugiura, C. Enomote, M. Furuyama // Med. Microbiol. Immunol. - 1975. - Vol. 162. - P. 9-14.

127. Protection against a European HIN2 swine influenza virus in pigs previously infected with H1N1 and/or H3N2 subtypes / K. Van Reeth, V. Gregory, A. Hay, M. Pensaert // Vaccine. - 2003. - Vol. 21. - P. 1375-1381.

128. Raynard R.S., Murray A.G., Gregory A. Infectious salmon anaemia virus in wild fish from Scotland // Dis. Aquat. Org. -2001. - Vol. 46 № 2. - P. 93-100.

129. Reassorted pandemic (H1N1) 2009 influenza A virus discovered from pigs in Germany / E. Starick, E. Lange, S. Fereidouni, C. Bunzenthal [et al.] // J. of Gen. Virol.-2011.-Vol. 92.-P. 1184^1188.

130. Renshaw H.W. Influence of antibody-mediated immune suppression on clinical, viral, and immune responses to swine influenza infection // Am. J. Vet. Res. -1975. - Vol. 36. - P. 5-13.

131.Reperant L.A., Kuiken T., Osterhaus A.D. Adaptive pathways of zoqnotic influenza viruses: from exposure to establishment in humans //'VaccineT - ~ 2012. - Vol. 30. - P. 4419-4434.

132. Replication of influenza A viruses in a green monkey kidney continuous cell line (Vero) / E.A. Govorkova, N.V.Kaverin, L.V. Gubareva [et al.] // J. Infect. Dis. -1995. - Vol. 172. - P. 250-253.

133. Role of neuraminidase in influenza virus-induced apoptosis / S.J. Morris, G.E. Price, J.M. Barnett [et al.] //J. Gen. Virol. - 1999. - Vol. 80. - P. 137-146.

134. Schultz-Cherry S., Hinshaw V.S. Influenza virus neuraminidase activates latent transforming growth factor // J. Virol. - 1996. - Vol. 70. - P. 8624-8629.

135. Seroprevalence of H1N1, H3N2 and H1N2 influenza viruses in pigs in seven European countries in 2002-2003 / K. Van Reeth, I.H. Brown, R. Diirrwald [et al.] // Influenza Other Respi. Viruses. - 2008. - Vol. 2, № 3. - P. 99-105.

136. Severe proliferative and necrotizing pneumonia in pigs: A newly recognized disease / M. Morin, C. Girard, Y. Elazhary [et al.] // Can. Vet. J. - 1990. - Vol. 3. - P.12.

137. Shope R.E. Swine influenza. Filtration experiments and etiology // J. Ex- P. Med. - 1931. -Vol. 54.--P. 373-385.

138. Shope R.E. The swine lungworm as a reservoir and intermediate host for swine influenza virus. 2. The transmission of swine influenza virus by the swine lungworm // J. Ex- P. Med. - 1941. - Vol. 74. - P. 49-68.

139. Skibbe D., Zhou En-Min, Janke B.H. Comparison of a commercial enzyme-linked immunosorbent assay with hemagglutination inhibition assay for serodiagnosis of swine influenza virus (H1N1) infection // J. Vet. Diagn. Inves. -2004. - Vol. 16.- P. 86-89.

140. Swine influenza // OIE. Manual of Diagnostic Tests and Vaccines for Terrestrial Animals. -5th ed. - Paris, 2004. - Vol. 2, chap. 2.10.11. - P. 1 lll-ll 19.

141. Swine influenza and interstitial pneumonias in the United Kingdom (19851995) / S.H. Done, I.H. Brown, - P. Harris [et al.] // Eur. J. Vet. Pathol. - 1996. -Vol. 2.-P. 73-81.

142. Swine influenza H1N1 virus induces acute inflammatory immune "responses in pig lungs: a potential animal model for human H1N1 influenza virus / M. Khatri, V. Dwivedi, S. Krakowka, C. Manickam [et al.] // J. of Virol. - 2010. -Vol. 84.-P. 11210-11218.

143. Swine influenza virus strains recognize sialylsugar chains containing the molecular species of sialic acid predominantly present in the swine tracheal epithelium / T. Suzuki, G. Horiike, Y. Yamazaki [et al.] // FEBS Letters. -1997.

-Vol.404. - P. 192-196.

144. Systemic and mucosal immune responses to H1N1 influenza virus infection in pigs / D.L. Larsen, A. Karasin, F. Zuckermann, C.W. Olsen // Vet. Microbiol. - 2000. - Vol.74. - P. 117-131.

145. Systemic and mucosal isotype-specific antibody responses in pigs to experimental influenza virus infection / P.P. Heinen, A. P. van Nieuwstadt, J.M. Pol [et al.] // Viral Immunol. -2000. - Vol. 13. - P. 237-247.

146. The evolution of human influenza viruses / A. Hay, V. Gregory, A. Douglas, Y. Lin // Philos. Trans. R. Soc. Lond. B. Biol. Sci. -2001. -Vol. 356, № 1416. -P. 1861-1870.

147. The immune response and maternal antibody interference to a heterologous H1N1 swine influenza virus infection following vaccination / P. Kitikoon, D. Nilubol, B.J. Erickson, B.H. Janke [et al.] // Vet. Immun.and Immunopath. -2006.-Vol. 112.-P. 117-128.

148. The influenza A virus PB1-F2 protein targets the inner mitochondrial membrane via a predicted basic amphipathic helix that disrupts mitochondrial function / J.S. Gibbs, D. Malide, F. Hornung [et al.] // J. Virol. - 2003. - Vol. 77. - P. 7214-7224.

149. The M segment of the 2009 new pandemic H1N1 influenza virus is critical for its high transmission efficiency in the guinea pig mode / Y. Chou, R.A. Albrecht, N. Pica, A.C. Lowen [et al.] // J. of Virol. - 2011. - Vol. 85. - P. 11235-11241.

150. Trifonov V., Khiabanian H., Rabadan R. Geographic dependence, surveillance, and origins of the 2009 influenza A (H1N1) virus // NrEngl7~J.~ Med. - 2009. - Vol. 361, №2. - P. 115-119.

151. Unseasonal transmission of H3N2 influenza A virus during the swine-origin H1N1 pandemic / E. Ghedin, D.E. Wentworth, R.A. Halpin [et al.] // J. Virol. -2010. - Vol. 84, № 11. - P. 5715-5718.

152. Vaccination of influenza a virus decreases transmission rates in pigs / A. Romagosa, M. Allerson, M. Gramer, H.S. Joo [et al.] // Veterinary Research. -

2011.-Vol. 42.-P. 120.

153. Van Reeth K. Avian and swine influenza viruses: our current understanding of the zoonotic risk // Vet. Res. - 2007. - Vol. 38. - P. 243-260.

154. Van Reeth K., De Clercq S., Pensaert M. The significance of antigenic evolution for vaccine efficacy: Learning from vaccination-challenge studies in pigs // Proc. of the Symp. on Emerg. and Control of Zoonotic Ortho- and Paramyxovirus Diseases / ed. B. Dodet, M. Vicari - Paris, 2000. - P. 99-106.

155. Van Reeth K., Nauwynck H., Pensaert M. Bronchoalveolar interferona, tumor necrosis factor-a, nterleukin-1 and inflammation during acute influenza in pigs: A possible model for humans // J. Infect. Dis. - 1998. - Vol. 177. - P. 10761079.

156. Van Reeth K., Nauwynck H., Pensaert M. Dual infections of feeder pigs with porcine reproductive and respiratory syndrome virus followed by porcine respiratory coronavirus or swine influenza virus: a clinical and virological study // Vet. Microbiol. - 1996. - Vol. 48. - P. 325-335.

157. Van Reeth K., Pensaert M.B. Porcine respiratory coronavirus- mediated interference against influenza virus replication in the respiratory tract of feeder pigs//Am. J. Vet. Res. - 1994. - Vol. 55. - P. 1275-1281.

158. Van Reeth K., Van Gucht S., Pensaert M. Correlations between lung proinflammatory cytokine levels, virus replication and disease after swine influenza virus challenge of vaccination- immune pigs // Viral. Immunol. -2002.-Vol. 15. - P. 583-594.

159. Virologic and serologic surveillance for human, swine and avian influenza virus infections among pigs in the north-central United States / C.W. Olsen 'ST Carey, L. Hinshaw, A.I. Karasin //Arch. Virol. - 2000. - Vol. 145. - P. 13991419.

160. White D.O., Fenner F.J. Orthomyxoviridae // Medical Virology / ed. D.O. White, F.J. Fenner. - San Diego, 1994. - P. 489-499.

161. Woods G.T., Mansfield M.E. Transplacental migration of swine influenza virus in gilts exposed experimentally // Res. Commun. Chem. Pathol.

Pharmacol. - 1974. - Vol. 7. - P. 629-632.

162. Wright P.F., Neumann G., Kawaoka Y. Orthomyxoviruses / ed. D.N. Knipe, P.M. Howley // Fields Virology. -5th ed., Chap. 48. - Philadelphia, PA, 2007. -Vol 2. - P. 1691-1740.

163. Yoon K.J., Janke B.H. Swine influenza virus: evolution, epidemiology and diagnosis // Trends in Emerging Viral Infections of Swine / ed. A. Morilla [et al.], Ames, IOWA. - 2002. - P. 23-28.

164. Young G.A., Underdahl N.A. Swine influenza as a possible factor in suckling pig mortalities. I. Seasonal occurrence in adult swine as indicated by hemagglutinin inhibitors in serum // Cornell Vet. - 1949. - Vol. 39. - P. 105119.

165. Zamarin D., Ortigoza M.B., Palese P. Influenza A virus PB1-F2 protein contributes to viral pathogenesis in mice // J. of Virol. - 2006. - Vol. 80. - P. 7976-7983.

166. Zhou E.M., Ramirez M. Swine influenza (SIV): hemagglutination inhibition (HI) assay for the detection of antibodies to SIV. Ames, IA // N. Engl. J. Med. -2000. - Vol. 361. -P. 1945-1952.

РОС'С'ЕЛЬХОЗН АД ЮР

ФЕДЕРАЛЬНОЙ ГОСУДАРСТВЕННОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ «ВСЕРОССИЙСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ ЦЕНТР КАЧЕСТВА И СТАНДАРТИЗАЦИИ

О ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ ДЛЯ ЖИВОТНЫХ И КОРМОВ»

(ФГУ «ВГНКИ»)

Ц1 МП'НС I МИРНОМ ОР! \ИИЗ\ЦИИ *ДР \HOO\P\lll ИИЯ ЖИН(>1 НЫ\(М Л>) НО ИИ1Ц1 ноиы ЮПЛСНОС III [ИМ НОС П1К1 ИЬОРЬЫ С ЬОЛ1 ЗНЯМИ ЖПИ( > 111ЫХ ДЛЯ ( Н'ММЮС ЮЧНОИ I ВРОПЫ ЩШРЛЛЫЮИ ЧЗИИ 11 ПКЧВКЧЗЬЯ

123022. г. Москва, Д-22 Звенигородское шоссе. 5 тел/факс [phone] ИНН 7703056867 E-mail: [e-mail] €>J OF IV tC № на № _от

Федеральному институту промышленной собственности «Роспатент» Россия, 121853, Москва, Бережковская набережная, 30

СПРАВКА

да»

о депонировании производственного контрольного штамма А/свинья/К*алифорния/07/2009 H1N1 (A/California/07/2009 H1N1) вируса гриппа свиней

Авторы: Луницин A.B.1, Цыбанов С.Ж..1, Долганова Е.К.2, Шевцов A.A.2, Живодеров С.П.1, Малоголовкин A.C.1, Малоголовкина Н.В.1, Бобровская Н.К.1, Николаев A.B.1, Бурмакина Г.С Горюшев О.Ю.2, Баборенко Е.П.2, Ремыга С.Г.2, Чвала И.А.2

1 (Россия, 601120, Владимирская область, Петушинский район, г. Покров, ГНУ «Всероссийский научно исследовательский институт ветеринарной вирусологии и микробиологии Россельхозакадемии»- ГНУ «ВНИИВВиМ»).

2 (Россия, 600901, г. Владимир, мкрн. Юрьевец, ФГУ «Федеральный центр охраны здоровья животных» - ФГУ «ВНИИЗЖ»).

Штамм «А/свинья/Калифорния/07/2009 H1N1» вируса гриппа свиней выделен в 2009 году от свиньи в ГНУ «ВНИИВВиМ» и адаптирован к развивающимся СПФ-эмбрионам кур 9-11-суточного возраста.

Штамм отнесен к семейству Orthomyxoviridae род Influenzavirus А и предложен в качестве производственного для изготовления инактивированной вакцины против гриппа свиней и диагностических препаратов.

Дата депонирования: 30 июля 2010 г.

Регистрационный номер - штамм «А/свинья/Калифорния/07/2009Н1Ы1 №132-ДЕП» вируса гриппа свиней во Всероссийской государственной коллекции штаммов микроорганизмов, используемых в ветеринарии и животноводстве (Россия, 123022, г. МоскваГЗвёнигородское шоссе, 5~ ФГУ~«ВГНКИ»). - ~~ ~ —

Местом хранения штамма вируса гриппа свиней определена Коллекция экзотических типов вируса ящура и других патогенов животных ФГУ «Федерального центра охраны здоровья животных».

Директор института, доктор ветеринарных наук профессор, академик РАСХН

Зав. лаб. депонирования, учёта и хранения производственных штаммов микроорганизмов, канд. вет. наук

Панин

Козырев 1Я BEPffÄ

4*.ЧЫЙ СЕКРЕТАРЬ

йшшзж»

г. РУСАЛЕЕВ

Федеральная служба по ветеринарному и фитосанитарному надзору Федеральное государственное учреждение «Федеральный центр охраны здоровья животных» (ФГУ «ВНИИЗЖ»)

СОГЛАСОВАНО

Зам.дирек] по НИР

ниторингу В.В. Борисов М, 20 /0 г.

ЗЖ»

елик 20 /О г.

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

по выявлению антител к вирусу гриппа свиней типа А в реакции торможения гемагглютинации

Авторы:

Долганова Е.К. Ремыга С.Г. Горюшев О.Ю. Чвала И.А. Баборенко Е.П. Шевцов А.А.

Рассмотрено и одобрено методкомиссией протокол № ¿у от " ¿V 20/^ г.

Рассмотрено и утверждено ученым советом протокол № //

20/Р

БЕ РИА

СЕКРЕТАРЬ

ВНИИЗЖ» Е С. РУСАЛЕЕВ

Федеральная служба по ветеринарному и фитосанитарному надзору

Федеральное государственное бюджетное учреждение «Федеральный центр охраны здоровья животных» (ФГБУ «ВНИИЗЖ»)

ПРОМЫШЛЕННЫЙ РЕГЛАМЕНТ

на производство «Набора для серодиагностики гриппа свиней типа А подтипа Н1Ы1 в реакции торможения гемагглютинации»

РАССМОТРЕНО И ОДОБРЕНО методической комиссией

РАССМОТРЕНО Ученым советом и РЕКОМЕНДОВАНО к утверждению

Протокол № Ь

Протокол № [

« !р » 20 II г.

«Л_» окг^ЬрЛ

20 Ч г.

Федеральная служба по ветеринарному и фитосаннтарному надзору федеральное государственное бюджетное учреяздение «Федеральный центр охраны здоровья животных» (ФГБУ «ВНИИЗЖ»)

СОГЛАСОВАНО

Зам. директора по НИР и развитию

В.В. Дрыгин '/Л- 2011 г.

качеству

С.К. Старов 2011г.

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ВЫЯВЛЕНИЮ АНТИТЕЛ К ВИРУСУ ГРИППА СВИНЕЙ ТИПА А В РЕАКЦИИ МИКРОНЕЙТРАЛИЗАЦИИ

Авторы: Ремыга С.Г.

Пузанкова О.С. Горюшев О.Ю. Гаврилова В. Л. Шевцов A.A.

Рассмотрено и одобрено методкомиссией протокол № 8 от «/Л» 2011 г.

Рассмотрено и рекомендовано к утверждению ученым советом протокол № -¿О

2011г.

СЕКРЕТАРЬ

ВНИИЗЖ» B.C. РУСАЛЕЕВ

ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ «ФЕДЕРАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ОХРАНЫ ЗДОРОВЬЯ ЖИВОТНЫХ»

(ФГБУ «ВНИИЗЖ»)

СОГЛАСОВАНО Директор ФГБУ «Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных-окормов» (ФГБУ «В^ШИ^ (председатель ТК 454.

анин

■К г.

УТВЕРЖДАЮ

Заместитель директора

«ВНИИЗЖ»

С.К. Старое

СТАНДАРТ ФГБУ «ВНИИЗЖ»

НАБОР ДЛЯ СЕРОДИАГНОСТИКИ

ГРИППА СВИНЕЙ ТИПА А ПОДТИПА Н1Ы1 В РЕАКЦИИ ТОРМОЖЕНИЯ ГЕМАГГЛЮТИНАЦИИ

СТО 00495527-0189-2012

Технические условия

/

г & т

- ■ ий--*-

Владимир - 2012

ВЕРНА

СЕКРЕТАРЬ

гязж»

РУСАЛЕЕВ

СОГЛАСОВАНО

Директор ФГБУ «Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» (ФГБУ^|^Н^^Др^дседатель ТК 454

Панин : ЙУг г.

УТВЕРЖДАЮ

Заместитель директора по jíЗ*íSSR»£&ГБУ «ВНИИЗЖ»

тж

К. Старов 20^¿г.

ИНСТРУКЦИЯ

по применению набора для серодиагностики гриппа свиней типа А подтипа Н1Ы1 в реакции торможения гемагглютинации

(Организация-производитель: ФГБУ «ВНИЙЗ^К», г. Владимир, мкр. Юрьевец)

I. ОБЩИЕ СВЕДЕНИЯ

1. Набор для серодиагностики гриппа свиней типа А подтипа Н1Ы1 в реакции торможения гемагглютинации.

2. В состав набора входят иммунологические и химические компоненты.

Иммунологические компоненты:

№1 - инактивированный антиген вируса гриппа свиней (штамм А/свинья/Калифорния/07/2009, Н11Ч1), объем 2,0 см3 - 3 флакона;

№2 - специфическая (положительная) сыворотка крови свиней, содержащая антитела к вирусу гриппа свиней (штамм А/свинья/Калифорния/07/2009, Н1М), лиофилизированная или нативная, объем 1,0 см3 - 1 флакон;

№3 - нормальная сыворотка крови свиней, не содержащая антитела к вирусу гриппа свиней (штамм А/свинья/Калифорния/07/2009, Н1Ж), лиофилизированная, объем 1,0 см3 - 1 флакон.

Химические компоненты:

~№4- ^рйй'хпористьТй (ЫаС1), порошок, масса 9,0 г - 1 флакон;

№5 - натрий лимоннокислый (ЫазСбНбОу), порошок, масса 3,0 г -1 флакон.

Набор укомплектован 96-луночными круглодонными полистироловыми панелями для иммунологических реакций (3 шт.).

3. По внешнему виду антиген п редста в л яет^ощий^ухук пористую массу белого или светло-желтого цвета. Специфичен лиофилизированном виде представляют собой желтого или светло-коричневого цвета, в нати желтого или красноватого цвета.

сыворотки в

су беловато-

ную жидкость ВЕРЯА

СЕКРЕТАРЬ

ВНЙЙЗЖ» В С РУСАЛЕЕВ

Федеральная служба по ветеринарному и фитосанитарному надзору федеральное государственное бюджетное учреждение «Федеральный центр охраны здоровья животных» (ФГБУ «ВНИИЗЖ»)

СОГЛАСОВАНО

Зам. директора по НИР ^развитию

В.В. Дрыгин 2013г.

качеству . Старов

2013г.

Ьс-оЪУс

^»■галпай^

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ВЫЯВЛЕНИЮ АНТИТЕЛ К ВИРУСУ ГРИППА СВИНЕЙ ТИПА А ПОДТИПА НЗИ2 В РЕАКЦИИ ТОРМОЖЕНИЯ ГЕМАГГЛЮТИНАЦИИ

Авторы:

Ремыга С.Г. Долганова Е.К. Баборенко Е.П.

Рассмотрено и одобрено методкомиссией Протокол № В от 2013г.

Рассмотрено и рекомендовано к утверждению ученым советом Протокол №

2013 г.

_

'ОКЙЯ ВЕРНА :р етарь

•вниязж»

В С. РУСАЛЕЕВ