Биологические свойства штаммов ВИЧ-1, циркулирующих на территории Москвы и Московской области тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.02.02, кандидат биологических наук Хаметова, Кизхалум Маликовна

• Хаметова, Кизхалум Маликовна
• кандидат биологических наук
• 2012

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Хаметова, Кизхалум Маликовна

ОГЛАВЛЕНИЕ

Список сокращений

ВВЕДЕНИЕ

Глава 1. Обзор литературы

1.1. Организация вириона

1.2. Геномная организация ВИЧ-1

1.3. Репликативный цикл ВИЧ-1

1.4. Роль CD4 - рецептора в проникновении ВИЧ в клетку-

мишень

1.5. Вторичные рецепторы для ВИЧ-инфицирования

1.6. Фенотипические свойства различных вариантов ВИЧ-1

1.7. Различия в биологических свойствах изолятов ВИЧ по разнообразию инфицируемых клеток хозяина

1.8. АЗТ-резистентность

1.9. Эпидемия ВИЧ/СПИД в Российской Федерации

Глава 2. Материалы и методы

2.1. Сыворотки

2.2. Клеточные культуры

2.3. Вирусы

2.4. Тест нейтрализации

2.5. Клинические изоляты

2.6. Определение инфекционной активности 50%- инфекционной дозы (TCID50)

2.7.Методы детекции антигенов ВИЧ-1

2.7.1 .Иммуноферментный анализ (ИФА, ELISA) для определения Аг ВИЧ-1

2.7.2. Иммуноферментный анализ для выявления антител ВИЧ-1

2.7.3. Определение антител ВИЧ-1 с помощью иммуноблоттинга

2.8,Определение биологического фенотипа изолята ВИЧ-1

2.9. Определение тропизма к корецепторам

2.10. Изучение способности вирусных штаммов к

синцитийобразованию

2.11.Изучение резистентности вирусных штаммов к ингибиторам обратной транскриптазы

2.12.Получение и определение нуклеотидных последовательностей

2.12.1. Изоляция РНК ВИЧ-1 из клинических образцов

2.12.2.Получение вирусспецифической ДНК из РНК

2.12.3.Амплификация нуклеотидных последовательностей генома ВИЧ-1

2.12.4.Горизонтальный электрофорез

2.12.5.Выделение и очистка ДНК из агарозного геля

2.12.6.0пределение нуклеотидных последовательностей

2.12.7. Использование полученных ранее генетических последовательностей

2.13. Методы филогенетического анализа

2.13.1 .Подготовка последовательностей для анализа

2.13.2.0пределение эволюционных дистанций и построение филогенетических деревьев

2.13.3.Статистическая обработка экспериментальных данных

Глава 3. Результаты и их обсуждение

3.1. Анализ эпидемиологических данных ВИЧ-инфицированных пациентов в Москве и Московской области

3.2. Исследование ВИЧ-позитивных сывороток на содержание количества

и спектра специфических антител

3.3. Определение нейтрализующей анти-ВИЧ-1 активности сывороток от ВИЧ-инфицированных пациентов

3.4. Генетический анализ штаммов ВИЧ-1, циркулирующих в Москве и Московской области

3.5. Изоляция и изучение биологических свойств актуальных штаммов ВИЧ-1, циркулирующих на территории Москвы и Московской

области

3.6. Определение биологического фенотипа первичного изолята ВИЧ-

1

3.7.0пределение инфекционной активности первичных изолятов и референс-штаммов ВИЧ-1 путем титрования по ТСШ 50

3.7.1. Определение ТСГО50 клинических изолятов

3.7.2.0пределение ТСГО50 референс-штаммов

3.8.Сравнительное изучение репродуктивной активности первичных изолятов и референс-штаммов ВИЧ-1 в различных клеточных

линиях

3.9.Тропизм первичных изолятов ВИЧ-1/СК-8 и ШВ-А-07 к корецепторам ССЯ5 и 0X014

З.Ю.Изучение способности изолятов ВИЧ-1 к

синцитийобразованию

3.11.Изучение чувствительности российских клинических изолятов ВИЧ-1 к азидотимидину

3.12.Определение генетической принадлежности первичного

изолята

Заключение

Выводы

Список литературы

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

АРВТ - антиретровирусная терапия

ВИЧ-1 - вирус иммунодефицита человека 1-го типа

ГС - гетеросексуальный

ГЭБ - гемато-энцефалический барьер

ДК - дендритные клетки

ЖКТ - желудочно-кишечный тракт

ЗППП - заболевания, передающиеся половым путем

ИЛ-2 - интерлейкин-2

ИППП - инфекции, передающиеся половым путем

ЛЖВ - люди, живущие с ВИЧ

JITC - лимфоидная ткань слизистых оболочек

МПК - мононуклеарные клетки периферической крови

МСМ - мужчины, имеющие секс с мужчинами

ОТ - обратная транскриптаза

PC - ростовая среда

СК - сероконвертр

СПИД - синдром приобретенного иммунодефицита ФГА - фитогемагглютинин СА - Capsid

ED50 - 50% эффективная доза

HIV-1 - Human Immunodeficiency Virus Type

IN - Integrase

LTR - Long Terminal Repeat MA - Matrix

mAbs - monoclonal antibodies

MHC - major histocompatibility complex

N1 - Neutralization Index

NC - Nucleocapsid

NSI - несинцитийобразующий

РВМС - peripheral blood mononuclear cell

PR - protease

R/h - rapid/high

RT - reverse transcriptase

SIV - simian immunodeficiency virus (вирус иммунодефицита

обезьян)

S/1 - Slow/low

SI- синцитийобразующий

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Биологические свойства штаммов ВИЧ-1, циркулирующих на территории Москвы и Московской области»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы.

В 1983 году одновременно французским исследователем Люком Монтенье из Института Пастера в Париже и Робертом Гало из Американских национальных институтов здоровья был идентифицирован вирус, относящийся к числу так называемых человеческих ретровирусов, вызывающих синдром приобретенного иммунодефицита (СПИД). Оба автора в последующем получили Нобелевские премии за то, что заложили начало целой отрасли естествознания - ретровирусологии. Однако, даже тогда мало кто осознавал, что речь идет о вирусе, который стал виновником колоссальной пандемии, которая только за 25 лет унесет около 25 миллионов жизней. Пандемия вируса иммунодефицита человека (ВИЧ) привела к серьезному социально-экономическому кризису во многих странах. Сегодня ВИЧ/СПИД входит в четверку лидирующих причин смертности, занимая первое место среди всех инфекционных болезней в Африке. По имеющимся в настоящее время данным 10 тыс. человек ежедневно заражаются ВИЧ, что составляет 3 млн. в год, включая 500 тыс. детей моложе 15 лет, при этом 95% из них живут в слабо развитых странах.

На начало 2012, года по данным ВОЗ, общее число взрослых и детей, живущих с ВИЧ/СПИД, достигло 33 млн., при этом количество умирающих ежегодно от ВИЧ-инфекции составляет 2,4 млн. человек. Самая тяжелая эпидемическая ситуация сложилась в африканских странах, находящихся южнее Сахары: число ВИЧ-инфицированных достигает 25 млн., что составляет около 60% от общего числа, живущих с ВИЧ-инфекцией в мире, при этом причиной 77% смертей является СПИД. Основной путь распространения инфекции в этом регионе гетеросексуальная трансмиссия вируса. Во многих африканских странах ВИЧ-инфекция господствует над всеми прочими заболеваниями, достигая 10%, а в некоторых регионах 38,8%. В ЮАР насчитывается почти 6 млн.

инфицированных, 30% из их числа составляют молодые люди в возрасте 21-29 лет, главным образом женщины.

Серьезной проблемой в борьбе с эпидемией СПИДа является то, что в ближайшее время значительное число людей будет нуждаться в специфическом лечении, стоимость которого составляет в год от 5,5 до 10 тысяч долларов США. Если данную цифру помножить на число больных, речь пойдет о миллионах долларах, необходимых на лечение больных.

Еще одной проблемой является лекарственная устойчивость вируса ВИЧ, который благодаря достаточно простой молекулярной структуре, склонен к спонтанным мутациям. На сегодня разработано около 20 антивирусных препаратов, которые достаточно быстро теряют противовирусную специфичность ввиду того, что вирус быстро мутирует и приобретает устойчивость. Вирусы адаптируются и легко приспосабливаются в различных вариациях по всему миру, и они воспроизводятся внутри клеток иммунной системы инфицированных людей. Таким образом, сбор полной информации о вирусе и формирование коллекции вирусов является обязательным инструментом в развитии терапии ВИЧ-инфекции. Применение антиретровирусной терапии приводит к появлению новых вариантов ВИЧ-1, устойчивых к использованию лечения лекарственными препаратами. Чтобы иметь представления о вирусах, которые определяют развитие эпидемии ВИЧ в данном регионе на сегодняшний день, очень важным является получение вирусных образцов, выделенных на ранних сроках развития инфекции от пациентов, не получавших специфической терапии. Эти образцы представляют собой актуальные штаммы, против которых должна создаваться эффективная вакцина и разрабатываться новые лекарственные анти-ВИЧ препараты.

Цели и задачи исследования.

Целью исследования - выделить штаммы ВИЧ-1, актуальные для российской эпидемии, и изучить их биологические свойства.

В соответствии с целями были поставлены задачи:

• собрать репрезентативную коллекцию сывороток ВИЧ-положительных людей из Москвы и Московской области, не получавших антиретровирусной терапии (АРВТ);

• исследовать сыворотки собранной коллекции по содержанию и спектру специфических антител и способности нейтрализовать экспериментральную ВИЧ-инфекцию;

• провести анализ эпидемиологических данных и составить портрет ВИЧ-эпидемии в регионах Москвы и Московской области в период 2008-2009 гг.;

• определить субтипическую принадлежность вариантов ВИЧ-1, циркулирующих в Москве и Московской области;

• изолировать штаммы ВИЧ-1 от пациентов с ранней инфекцией.

• изучить биологические свойства первичных (клинических) изолятов ВИЧ-1 по скорости репродукции, синцитийобразующей активности, тропизму к корецепторам СС115 и СХСЯ4;

• изучить АЗТ-чувствительность российских изолятов ВИЧ-1;

Научная новизна работы.

Создана коллекция актуальных штаммов ВИЧ-1, циркулирующих на территории Москвы и Московской области; изучен портрет эпидемий (пол, возраст, путь передачи инфекции) ВИЧ-1 на основе репрезентативной коллекции актуальных штаммов вируса. С использованием методов ИФА и анализа нуклеотидной последовательности отдельных участков генома вируса были определены генетические варианты ВИЧ-1, циркулирующих на территории Москвы и Московской области. Получены изоляты ВИЧ-1 от пациентов с ранней ВИЧ-инфекцией, не получавших лечения.

В данной работе проанализирована взаимосвязь между скоростью и уровнем репродукции первичных изолятов ВИЧ-1 в различных клеточных культурах. Проведено сравнение биологических свойств полученных первичных изолятов ВИЧ-1 с биологическими свойствами референс-штаммов.

Исследовалось влияние АЗТ (азитотимидина) на уровень репродукции первичных изолятов ВИЧ-1 в мононуклеарах переферической крови человека (МПК).

Практическая ценность работы.

Информация о вариантах ВИЧ-1, характерных для Российской Федерации, может быть использована при разработке стратегии создания потенциальных лекарственных средств, а также при оценке эффективности российской анти-ВИЧ-вакцины.

Штамм ВИЧ-1 (первичный изолят ВИЧ-1/СК-8), полученный и охарактеризованный в нашей лаборатории поставлен на депонирование в коллекцию музея ФГБУ НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского Минздравсоцразвития Российской Федерации.

Положения, выносимые на защиту.

1. Составлен портрет эпидемии ВИЧ-инфекции в Москве и Московской области за период 2008-2009 гг.

2. Выделен штамм ВИЧ-1 (ВИЧ-1/СК-8) от ранних сероконверторов и изучены его биологические свойства.

3. Изучение биологических и фенотипических свойств двух российских клинических изолятов ВИЧ-1 показало, что для них характерна слабовыраженная синцитийобразующая активность, они обладают двойным тропизмом к корецепторам CCR5 и CXCR4 (Я5/Я4-фенотип) и оба относятся к slow/low фенотипу.

4. Изучение влияния ингибиторов обратной транскриптазы (азидотимидина) на активность репликации клинических изолятов ВИЧ-1 в

мононуклеарах периферической крови здорового донора показало, что один клинический изолят обладает выраженной чувствительностью к АЗТ, тогда как другой - высокой устойчивостью.

5. Установлено, что оба клинических изолята относятся к субтипу А, превалирующему в российской эпидемии ВИЧ-инфекции.

Публикации по теме диссертации

1. Зебницкая И.С., Гарманова A.B., Алексеева Л.П., Зенин П.В., Крыжановская O.A., Хаметова K.M., Корнилаева Г.В., Гудима Г.О., Карамов Э.В., Сидорович И.Г. Двойная инфекция ВИЧ/туберкулез: серологические исследования. Российский аллергологический журнал, 2009, №3, пр.1, с.219-220.

2. Гилязова A.B., Зенин П.В., Пронин А.Ю., Серков И.Л., Хаметова K.M., Орлова-Морозова Е.А., Жукова Е.В., Корнилаева Г.В., Пастернак А.О., Лукашов В.В., Карамов Э.В. Молекулярная эпидемиология ВИЧ-1 в Московской области. Вопросы вирусологии, 2010, №5, с. 25-29.

3. Корнилаева Г.В., Перминова И.В„ Гилязова A.B., Хаметова K.M., Карамов Э.В. Гуминовые вещества как перспективные соединения для создания микробицидных препаратов. Российский иммунологический журнал, 2010, том 4(13), №3, с. 255-260.

4. A.B. Гилязова, Г.В. Корнилаева, K.M. Хаметова, Ш.И. Салихов, С.М. Мавлянов, Э.В. Карамов. Сравнительный анализ активности растительных полифенолов по ингибированию ВИЧ-инфекции в Т-лимфобластоидной клеточной линии и мононуклеарах переферической крови. Иммунология № 1, 2011, Т. 32, N 1. - С. 4-6.

5. Пронин А.Ю., Гарманова A.B., Серков И.Л., Зенин П.В., Крыжановская O.A., Жукова Е.В., Орлова-Морозова Е.А., Хаметова K.M., Корнилаева Г.В., Карамов Э.В. Мониторинг ВИЧ-инфекции в Московском регионе. Теоретические и практические аспекты современной эпидемиологии: материалы научно-

практической конференции, посвященной 75-й годовщине со дня рождения, акад. РАМН Б.Л. Черкасского (Москва, 28 января 2009 г.)/ Моск.мед.акад. им. И.М. Сеченова [под общ.ред. Н.Н.Филатова, И.В. Михеевой], М.: Санэпидмедиа, 2009, с. 104-105.

6. Karamov Е., Pronin A., Kornilaeva G., Serkov I., Zenin P., Zhukova E., Garmanova A., Orlova-Morozova E., Khametova K., Lukashov V. Genetic variability of HIV in Russia. 5th European Conference on Clinical and Social Research on AIDS and Drugs, Vilnius, Lithuania (28-30 April 2009), Abstract book, p.53.

7. Карамов Э.В., Пронин А.Ю., Лукашов B.B., Серков И.Л., Гарманова А.В., Зенин П.В., Жукова Е.В., Крыжановская О.А., Орлова-Морозова Е.А., Хаметова К.М., Павлова Т.В., Корнилаева Г.В. Молекулярная эпидемиология ВИЧ/СПИД в России. Актуальные вопросы инфекционной патологии. Сборник докладов научно-практической конференции, посвященной 100-летию Ростовского НИИ микробиологии и паразитологии (23-24 сентября 2009 г., г. Ростов-на-Дону), изд-во НМЦ Логос, 2009, с.370-376.

8. Зебницкая И.С., Гарманова А.В., Алексеева Л.П., Зенин П.В., Крыжановская О.А., Хаметова К.М., Корнилаева Г.В., Карамов Э.В. Характеристика сывороток пациентов с двойной инфекцией ВИЧ/туберкулез. Актуальные вопросы инфекционной патологии. Сборник докладов научно-практической конференции, посвященной 100-летию Ростовского НИИ микробиологии и паразитологии (23-24 сентября 2009 г., г. Ростов-на-Дону), изд-во НМЦ Логос, 2009, с.416-420.

9. Gilyazova A., Zenin P., Serkov I., Pronto A., Khametova К., Kryzhanovskaya О., Orlova-Morozova Е., Zhukova Е., Kornilaeva G., Lukashov V., Karamov E. Monitoring of HIV-1 infection in Moscow and Moscow region. 3th Eastern Europe and Central Asia AIDS Conference EECAAC, US-Russia HIV Prevention Science Workshop (October 28-30, 2009, Moscow), Abstract book, vol.2, p.28.

lO.Karamov E., Zaytsev I., Zenin P., Meshandin A., Gilyazova A., Zebnickaya I., Kornilaeva G., Alekseeva L., Khametova K. Kryzhanovskaya O. Analysis of sera from patients coinfected with HIV and ТВ. 3th Eastern Europe and Central Asia AIDS Conference EECAAC, US-Russia HIV Prevention Science Workshop (October 28-30, 2009, Moscow), Abstract book, vol.2, p.34.

Объем и структура диссертации.

Диссертация изложена на 118 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, результатов собственных исследований, обсуждения полученных данных и выводов. Библиографический указатель включает 103 источников, в том числе 10 отечественных и 93 зарубежных. Диссертация содержит 38 таблиц и 16 рисунков.

Заключение диссертации по теме «Вирусология», Хаметова, Кизхалум Маликовна

Выводы.

1. Собрана актуальная коллекция сывороток из 360 образцов от ВИЧ-инфицированных пациентов, не получавших ранее лечения, обратившихся в Московский областной Центр СПИДа в 2008-2009 гг. Сыворотки коллекции изучены по содержанию и спектру специфических антител и способности нейтрализовать экспериментальную ВИЧ-инфекцию: а. По содержанию суммарных антител (титр антител, установленный методом ИФА) выделены 4 группы сывороток: «слабые» с титром от 1:160 до 1:64 составляют 13,8%; «средние» с тиром от 1:1280 до 1:2560 составляют 21,8%; «сильные» с тиром от 1:5000 до 1:40000 составляют 56,3%; «сверхсильные» с титром от 1:80000 до 1:160000 составляют 5,7%. б. Анализ профиля антител с помощью иммуноблотинга показал, что все исследованые сыворотки содержат антитела к белкам вирусной оболочки Env - gpl60, gp 110/120, gp41 и белкам гена gag-pol, р68/66, р55, р52/51, р34/31, р24/25. У 27% сывороток не обнаруживаются антитела к матриксному белку - pi8/17 и у 50% сывороток отсутствуют антитела к р40. в. Три из 48 исследованных сывороток (6,25%) обнаружили способность эффективно нейтрализовать экспериментальную ВИЧ-инфекцию: индексы нейтрализации составляли - 93,2%, 96,3% и 99,6%.

2. Статистический анализ эпидемиологических данных позволил составить портрет эпидемии в регионах Москвы и Московской области на период 2008-2009 гг. Установлено, что заболеваемость среди мужчин и женщин примерно одинакова и составляет 51,2% для мужчин и 48,8% для женщин. При этом у мужчин преобладает парентеральный путь заражения (55,1%), тогда как у женщин - гетеросексуальный (77,5%). Наибольшее число зарегестрированных новых случаев заражения отмечено в возрастной группе от 25 до 30 лет, как у мужчин, так и у женщин.

5. Исследование субтипической принадлежности вариантов ВИЧ-1, присутствующих в плазме крови пациентов, путем секвенирования фрагментов генов Env, включая область V3 (270 н.о.,) и Gag, включая полноразмерную последовательность белка р17 и частичную последовательность белка р24 (729 н.о.), показало циркуляцию двух субтипов - А (93.2%) и В (6.8%). Полученные данные указывают на сохранение тенденции преобладания субтипа А в регионах Москвы и Московской области.

4. С целью получения актуальных штаммов ВИЧ-1 от ранних сероконверторов были изолированы МПК от 13 пациентов с ранней ВИЧ-инфекцией, не получавших лечения и имеющих различную вирусную нагрузку. Показано, что в 69,2% случаев МПК-ассоциированный вирус пациентов не способен заражать донорские МПК, в 23,1% случаев репликативная активность ограничена одним пассажем и в 7,7% случаев изолируется вирусный штамм, активно реплицирующийся в серийных пассажах в МПК.

5. Показано, что высокая вирусная нагрузка - 2,3- 2,5« 105 РНК-копий/мл (как и низкая - < 104 РНК-копий/мл), не обеспечивает успешную изоляцию вирусного штамма. Отсутствие корреляции между уровнем вирусной нагрузки и эффективностью изоляции вируса, указывает на то, что фенотипические особенности вируса имеют первостепенное значение для положительного результата изоляции.

6. Выделен новый штамм российского изолята ВИЧ-1 от пациента с ранней ВИЧ-инфекцией, не получавшего специфического лечения - ВИЧ-1/СК-8.

7. Изучены биологические свойства двух российских клинических изолятов ВИЧ-1/СК-8 и ВИЧ- 1/RiB-А/07, циркулирующих на территории Москвы и Московской области. Показано, что штаммы различаются по инфекционной активности и спектру чувствительных клеток: ВИЧ-1ШВ-А/07 имел титр по TCID50 в 10 раз выше и активно репродуцировался в МПК и трех перевиваемых клеточных линиях (МТ-4, CEMSS, U937), тогда как репродукция ВИЧ-1/СК-8 наблюдалась только в МПК и МТ4. Сходство изолятов проявлялось в двойном тропизме к корецепторам

Сходство изолятов проявлялось в двойном тропизме к корецепторам (R5/X4 -фенотип) и слабовыраженной синцитийобразующей активности. Полученные данные позволяют отнести изолят ВИЧ-1/СК-8 к slow/low фенотипу подтип 2, тогда как изолят ВИЧ-IRiB-А/07 - к slow/low фенотипу подтип 3, в соответсвии с классификацией Е.-М. Fenio.

8. Показано, что клинический изолят ВИЧ-1/СК-8 обладает выраженной чувствительностью к АЗТ (ED50 0,034 мкМ), тогда как, изолят ВИЧ-1/ RiB-A/07 характеризуется высокой АЗТ-устойчивостью (ED50 >100мкМ).

9. Путем секвенирования фрагментов генов Env (участок петли V3; 270 н.о) и Gag (участок р17/р24; 729 н.о.) установлена принадлежность российского изолята к субтипу А.

Заключение.

Четверть века прошло с тех пор, как человечество узнало о СПИДе -первом эпидемическом заболевании человека, вызванном ретровирусом, которое и сегодня неотвратимо ведет к смерти. СПИД встал вровень с многими другими распространенными причинами смерти - инфарктом, туберкулезом, инсультом и автокатастрофами. С момента первого диагностирования СПИДа в 1981 г. и до 2004 г. от этой болезни в мире умерло в два раза больше людей, чем погибло в Первой мировой войне -более 20 млн. человек из свыше 60 млн. инфицированных ВИЧ за этот период. Эпидемия ВИЧ уже унесла и продолжает уносить миллионы человеческих жизней, разрушает семьи, оставляет миллионы человеческих жизней, разрушает семьи, оставляет миллионы детей сиротами. Сегодняшний ее уровень уже угрожает социальной и экономической структуре многих стран.

Сегодня для всех абсолютно ясно, что только ученые-биологи совместно с врачами способны в будущем решить существующую проблему. И государства, и общественность должны обеспечить для этого моральную поддержку и солидную материально-техническую базу.

Применение специфической антиретровирусной терапии приводит к появлению новых вариантов ВИЧ, устойчивых к использованию лечения лекарственными препаратами. Чтобы иметь представления о вирусах, которые определяли развитие эпидемии ВИЧ в данном регионе на сегодняшний день, очень важным является получение вирусных образцов, выделенных на ранних сроках развития инфекции от пациентов, не получавших специфической терапии. Эти образцы представляют собой актуальные штаммы, против которых должна создаваться эффективная вакцина.

В связи с этим, нами была собрана актуальная коллекция сывороток от ВИЧ-инфицированных лиц Москвы и Московской области. На основе этой коллекции был составлен портрет эпидемии в Москве и Московской области в 2008-2099 гг. В результате нашего исследования можно сделать вывод о том, что сохраняется тенденция превалирования субтипа А в российской ВИЧ эпидемии: анализ нуклеотидных последовательностей по обеим областям генома env и gag показал наличие двух субтипов - А (93,4%) и В (6,6%).

Был изолирован первичный изолят ВИЧ-1 от пациента с ранней ВИЧ-инфекцией. Было проведено сравнительное изучение биологических свойств первичного изолята, выделенного в 2008 году и российского клинического изолята, изолированного в лаборатории Иммунохимии в 2007 году с референс-штаммами ВИЧ-1.

Было установлено, что клинические изоляты (ВИЧ-1/ СК-8 и ВИЧ-1 RiB-A/07), циркулирующие на территории Москвы и Московской области, характеризуются как slow/low фенотипы 2-й и 3-й группы, они обладают двойным тропизмом (R5/X4) и слабовыраженной синцитийобразующей активностью.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Хаметова, Кизхалум Маликовна, 2012 год

Список литературы.

1. Ашмарин Игорь Петрович, Васильев Николай Николаевич, Амбросов Валерий Антонович. Быстрые методы статистической обработки и планирование экспериментов // Изд-е 2, испр. Выходные данные: Д.: Изд-во Ленинградского ун-та, 1975.

2. Гилязова A.B., Зенин П.В., Пронин А.Ю., Серков И.Л., Хаметова K.M. и др. Молекулярная эпидемиология ВИЧ-1 в Московской области // Вопр. вирусол. 2010. №5. С. 25-29.

3. Э.В.Карамов, И.Г.Сидорович, Р.М.Хаитов «Новая вакцинология: вакцины против ВИЧ/СПИДа», 2008 стр.46-56.

4. Казеннова Е.В., Бронникова A.B., Кузин С.Н., Кириллова И.Л., Ершова О.Н. и др. Молекулярно-генетическая характеристика вариантов ВИЧ-1, циркулирующих в Череповце Вологодской области: второй случай эпидемической вспышки, вызванной рекомбинантом gagAenvB // Вопр. вирусол. - 2008. - №5. - С. 23-27.

5. Леви Джей Э. «ВИЧ и патогенез СПИДа»// Научный мир, 2010 г., 736 стр.

6. Лукашов В.В. Эволюционный анализ вирусов семейств Retroviridae, Parvoviridae и Astroviridae : дис. на соиск. учен. степ. докт. мед. наук: 03.00.06 / Лукашов В. В. - Москва, 2003. - 227 с.

7. Сайт базы данных ВИЧ Национальной Лаборатории Лос Аламоса, США [Электронный ресурс]. - М., 2010. - Режим доступа: http://hiv-web.lanl.gov/, свободный. - Загл. с экрана.

8. Сайт международной генетической базы данных ГенБанк [Электронный ресурс]. - М., 2010. - Режим доступа: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/, свободный. - Загл. с экрана.

9. Сайт программы Entrez [Электронный ресурс]. - М., 2010. - Режим доступа: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/Entrez, свободный. - Загл. с экрана.

10. Сайт программы Basic Local Alignment Search Tool (BLAST) [Электронный ресурс]. - M., 2010. - Режим доступа: http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi, свободный. - Загл. с экрана.

11. Шарман А. Синдром приобретенного иммунодефицита: Академия профилактической медицины.// NeiroNex, Bethesda, MD, USA; 2006 - 303 стр.

12. Asjo В., Morfeldt-Manson L., Albert J., Biberfeld G., Karlsson A., Lidman K., Fenyo E.-M. Replicative capacity of human immunodeficiency virus from patients with varying severity of HIV infection.// The Lancet, 1986, 660662.

13. Asjo В., Morfeldt-Manson L., Albert J., Biberfeld G., Karlsson A., Lidman K., Fenyo E.-M. // Improved tissue culter technique for production of poorly replicating human immonodeficiency virus strains. The Lancet,1986, 660-662.

14. Ashorn PA, Berger EA, Moss B. Human immunodeficiency virus envelope glycoprotein/CD4-mediated fusion of nonprimate cells with human cells. // J Virol 1990 May;64(5):2149-56.

15. Ashish, Juncadella IJ, Garg R, Boone CD, Anguita J, Krueger Ж. Conformational rearrangement within the soluble domains of the CD4 receptor is ligand-specific.// J Biol Chem. 2008 Feb l;283(5):2761-72. Epub 2007 Nov 28.

16. Ashorn P., Berger EA, Moss B. Elimination of infectious human immunodeficiency virus from human T-cell cultures by synergistic action jf CD4-Pseudomonas exotoxin and reverse transcriptase ingibitors. Oroc. Natl. Acad.Sci. USA 87:8889-8893.

17. Albini A, Ferrini S, Benelli R, Sforzini S, Giunciuglio D, Aluigi MG, Proudfoot AE, Alouani S, Wells TN, Mariani G, Rabin RL, Farber JM, Noonan DM. HIV-l Tat protein mimicry of chemokines.// Proc Natl Acad Sci USA. 1998 Oct 27;95(22):13153-8.

18. Adjorlolo-Johnson G, De Cock KM, Ekpini E, Vetter KM, Sibailly T, Brattegaard K, Yavo D, Doorly R, Whitaker JP, Kestens L, et al. // Prospective comparison of mother-to-child transmission of HIV-l and HTV-2 in Abidjan, Ivory Coast. JAMA 1994 Aug 10;272(6):462-6.

19. Aschacher T, Sampl S, Käser L, Bernhard D, Spittler A, Holzmann K, Bergmann M. The combined use of known antiviral reverse transcriptase inhibitors AZT and DDI induce anticancer effects at low concentrations.// Neoplasia. 2012 Jan;14(l):44-53.

20. Avila M.M., Pando M.A., Carrion G. et al. Two HIV-1 epidemics in Argentina: different genetic subtypes associated with different risk groups // J. Acquir. Immune. Defic. Syndr. 2002. Vol. 29. № 4. P. 422-426.

21. Bobkov AF, Kazennova EV, Selimova LM, Khanina TA, Ryabov GS, Bobkova MR, Sukhanova AL, Kravchenko AV, Ladnava NN, Weber JN, Pokrovsky W. Temporal trends in the HIV-1 epidemic in Russia: predominance of subtype AM J Med Virol. 2004 Oct;74(2):191-6.

22. Burda ST., Konings F.A., Williams C.A. et al. HIV-1 CRF09_cpx circulates in the North West Province of Cameroon where CRF02 AG infections predominate and recombinant strains are common // AIDS Res. Hum. Retroviruses. 2004. Vol. 20. № 12. P. 1358-1363.

23. Bushman B., Fujiwara T., Cragle R. Retroviral DNA integration directed by HIV integration protein in vitro // Science. 1990. Vol. 249. P. 15551558.

24. Boucher C.A., Tersmette M., Darby G. et al. High-level resistance to (-) enantiomeric 2 5, 0- deoxy-3 5, 0-thiacytidine in vitro is due to one amino acid substitution in the catalitic site of human immunodeficiency virus type 1 reverse transcriptase. // Antimicrob. Agents Chemother. - 1993. - V.37, p. 2231-2234.

25. Bakri Y, Mannioui A, Ylisastigui L, Sanchez F, Gluckman JC, Benjouad A CD40-activated macrophages become highly susceptible to X4 strains of human immunodeficiency virus type 1. AIDS Res Hum Retroviruses. 2002 Jan 20; 18(2): 103-13.

26. Betts, M. R. et al. HIV nonprogressors preferentially maintain highly functional HIV-specific CDS' T cells. Blood 107. 2006,4781-4789.

27. Buranapraditkun S, Hempel U, Pitakpolrat P, Allgaier RL, Thantivorasit P, Lorenzen SI, Sirivichayakul S, Hildebrand WH, Altfeld M,

Brander C, Walker BD, Phanuphak P, Hansasuta P, Rowland-Jones SL, Allen TM, Ruxrungtham K. A novel immunodominant CD8+ T cell response restricted by a common HLA-C allele targets a conserved region of Gag HIV-1 clade CRF01AE infected Thais.// PLoS One. 2011;6(8):e23603. Epub 2011 Aug 22.

28. Brehm JH, Scott Y, Koontz DL, Perry S, Hammer S, Katzenstein D, Mellors JW, Sluis-Cremer N; AIDS Clinical Trials Group Study 175 Protocol Team. Zidovudine (AZT) monotherapy selects for the A360V mutation in the connection domain of HIV-1 reverse transcriptase. PLoS One. 2012;7(2):e31558. Epub 2012 Feb 21.

29. Chesebro B, Buller R, Portis J, Wehrly K. Failure of human immunodeficiency virus entry and infection in CD4-positive human brain and skin cells.// J Virol 1990 Jan;64(l):215-21.

30. Cecilia D, Kulkarni SS, Tripathy SP, Gangakhedkar RR, Paranjape RS, Gadkari DA. Absence of coreceptor switch with disease progression in human immunodeficiency virus infections in India. // Virology 2000 Jun 5;271(2):253-8.

31. Cornelissen M., Mulder-Kampinga G., Veenstra J., Zorgdrager F., Kuiken C., Hartman S., Dekker J., van der Hoek L., Sol C., Coutinho R., Goudsmit J. Syncytium-inducing (SI) phenotype suppression at seroconversion after intramuscular inoculation of a non-syncytium-inducing/SI phenotypically mixed human immunodeficiency virus population. // Journal of Virology, 1995, 69,1810-1818.

32. Carrillo, A., and L. Ratner. Human immunodeficiency virus type 1 tropism for T-lymphoid cell lines: role of the V3 loop and C4 envelope determinants. //1996. J. Virol. 70:1301-1309.

33. Cozzi-Lepri A, French MA, Baxter J, Okhuysen P, Plana M, Neuhaus J, Landay A; INSIGHT SMART study group. Resumption of HIV replication is associated with monocyte/macrophage derived cytokine and chemokine changes: results from a large international clinical trial, AIDS. 2011 Jun 1;25(9):1207-17.

34. Cole DK, Gallagher K, Lemercier B, Holland CJ, Junaid S, Hindley JP, Wynn KK, Gostick E, Sewell AK, Gallimore AM, Ladell K, Price DA, Gougeon ML, Godkin A. Modification of the carboxy-terminal flanking region of a universal influenza epitope alters CD4+ T-cell repertoire selection. Nat Commun. 2012 Feb 7;3:665.

35. Curriu M, Fausther-Bovendo H, Pernas M, Massanella M, Carrillo J, Cabrera C, Lopez-Galindez C, Clotet B, Debre P, Vieillard V, Blanco J. Viremic HIV Infected Individuals with High CD4 T Cells and Functional Envelope Proteins Show Anti-gp41 Antibodies with Unique Specificity and Function.// PLoS One. 2012;7(2):e30330. Epub 2012 Feb 1.

36. Centlivre, M., P.Sommer M. Michel, R. Ho Tsong Fang, S. Dofflo, J. Valladeau, N. Schmitt, S. Wain-Hobson, and M. Sala. 2005. The HIV-1 clade promoters strongly influence spatial and temporal dynamics of viral replication in vivo. J. Clin. Investig. 115: 348-358.

37. Cohen E., Terwilliger E., Jalinoos Y. et al. Identification of HIV-1 vpr product and function // J. Acad. Imm. Def. Syn. 1990. Vol. 3. P. 11-18.

38. Corvasce S., Mazzucchilli R., cozziOLepri A., Rezza G., Fiorini C. Role of CCR5-32, CCR-641 and SDFl-3'A alleles in population of HIV-1 patients with known date of seroconversion. XIV International AIDS Conference, Barcelona, Spain, July 7-12,2002.

39. Cheng-Mayer C, Lannello P., Shaw K. et al. Differentional effects of nef on HIV replica implications for viral pathogenesis in the host // Science. 1989. Vol. 246. P. 1629-16.

40. Cummins NW, Klicpera A, Sainski AM, Bren GD, Khosla S, Westendorf JJ, Badley AD. Human immunodeficiency virus envelope protein Gpl20 induces proliferation but not apoptosis in osteoblasts at physiologic concentrations.// PLoS One. Epub 2011 Sep 12.

41. de Roda Husman, A. M., R. P. van Rij, H. Blaak, S. Broersen, and H. Schuitemaker. Adaptation to promiscuous usage of chemokine receptors is not a prerequisite for human immunodeficiency virus type 1 disease progression, 1999. //J. Infect. Dis. 180:1106-1115.

42. Daugherty MD, Liu B, Frankel AD. Structural basis for cooperative RNA binding and export complex assembly by HIV Rev.// Nat Struct Mol Biol. 2010 Nov; 17(11): 1337-42. Epub 2010 Oct 17.

43. Das AT, Harwig A, Berkhout B. The HIV-1 Tat protein has a versatile role in activating viral transcription.// J Virol. 2011 Sep;85(18):9506-16. Epub 2011 Jul 13.

44. Dogo-Isonagie C, Lam S, Gustchina E, Acharya P, Yang Y, Shahzad-Ul-Hussan S, Clore GM, Kwong PD, Bewley CA. Peptides from the second extracellular loop of the C-C chemokine receptor type 5 (CCR5) inhibit diverse strains of HIV-1.// J Biol Chem. 2012 Mar 8.

45. Fenyo EM. Biological phenotype and coreceptor usage of human immunodeficiency virus // Acta Microbiol Immunol Hung 2000;47(2-3):131-42.

46. Fauci, A. S 25 years of HIV. Nature 453. 2008, 289-290.

47. Freed, E.O. 2002. Viral late domains, J. Virol. 76: 4679-4687.

48. Frankel F.R., Hegde S., Lieberman J., Paterson Y. Induction of cellmediated immune responses to human immunodeficiency virus type 1 Gag protein by using Listeria monocytogenes as a live vaccine vector //. Immunol. 1995. Vol. 155. P. 4775-4778.

49. Fouchier R. A. M., Schuitemaker H. Molecular determinants of human immunodeficiency virus type I phenotype variability. // European Journal of Clinical Investigation,1996,26,175-185.

50. Fanibunda SE, Modi DN, Gokral JS, Bandivdekar AH. HIV gpl20 binds to mannose receptor on vaginal epithelial cells and induces production of matrix metalloproteinases.// PLoS One. 2011;6(1 l):e28014. Epub 2011 Nov 22.

51. Fogarty KH, Zhang W, Grigsby IF, Johnson JL, Chen Y, Mueller JD, Mansky LM. New insights into HTLV-1 particle structure, assembly, and GagGag interactions in living cells.// Viruses. 2011 Jun;3(6):770-93. Epub 2011 Jun 14.

52. Gao F, Yue L, Robertson DL, Hill SC, Hui H, Biggar RJ, Neequaye AE, Whelan TM, Ho DD, Shaw GM, et al. // Genetic diversity of human

immunodeficiency virus type 2: evidence for distinct sequence subtypes with differences in virus biology. J Virol 1994 Nov;68(l l):7433-47.

53. Haseltine W.A. Molecular biology of the human immunodeficiency virus type 1 // FA J. 1991. Vol. 5. № 10. P. 2349-2360. 7.

54. Hong F, Saiman Y, Si C, Mosoian A, Bansal MB. X4 Human Immunodeficiency Virus Type 1 gpl20 Promotes Human Hepatic Stellate Cell Activation and Collagen I Expression through Interactions with CXCR4.// PLoS One. 2012;7(3):e33659. Epub 2012 Mar 27.

55. Kuznetsov YG, Victoria JG, Low A, Robinson WE Jr, Fan H, McPherson A. Atomic force microscopy imaging of retroviruses: human immunodeficiency virus and murine leukemia virus.//2004 Sep0ct;26(5):209-16.

56. Kimura M. Estimation of evolutionary distances between homologous nucleotide sequences // Proc. Natl. Acad. Sei. USA. - 1981. Vol. 78. P. 454458.

57. Kumar S., Tamura K., Nei M. Molecular evolutionary genetics analysis (MEGA) // Institute of Molecular Evolutionary Genetics, Pennsylvania State University, University Park, Pennsylvania, USA. 1993.

58. Kiepiela, P. et al. Dominant influence of HLA-B in mediating the potential co-evolution of HIV and HLA. Nature 432. 2004, 769-775.

59. Koot M., van Leeuwen R., de Goede R. E., Danner S., Eeftinck Schattenkerk J. K., Reiss P., Tersmette M., Lange J. M., Schuitemaker H. Conversion rate towards a syncytium-inducing (SI) phenotype during different stages of human immunodeficiency virus type 1 infection and prognostic value of SI phenotype for survival after AIDS diagnosis.// Journal of Infectious Diseases,1999,179,254-258.

60. Kogan M, Rappaport J. HIV-1 accessoiy protein Vpr: relevance in the pathogenesis of HIV and potential for therapeutic intervention.// Retrovirology. 2011 Apr 13;8:25.

61. Li, S., J. Juarez, M. Alali, D. Dwyer, R. Collman, A. Cunningham, and H. M. Naif. Persistent CCR5 utilization and enhanced macrophage tropism

by primary blood human immunodeficiency virus type 1 isolates from advanced stages of disease and comparison to tissue-derived isolates, 1999. // J. Virol. 73:9741-9755.

62. Lagenaur LA, Villarroel VA, Bundoc V, Dey B, Berger EA. sCD4-17b bifunctional protein: extremely broad and potent neutralization of HIV-1 Env pseudotyped viruses from genetically diverse primary isolates.// Retrovirology. 2010 Feb 16;7:11.

63. Lai R.B., Chakrabarti S., Yang C Impact of genetic diversity of HIV-1 on diagnosis, antiretroviral therapy & vaccine development // Indian J. Med. Res. 2005. Vol. 121. № 4. P. 287-314.

64. Langlois A.J., Weinhold K.J., Matthews T.J., Bolognesi D.P. In vitro assays for detecting neutralizing and fusion-inhibiting antibodies to SIVMAC251 // AIDS Res. Hum. Retroviruses. 1991. Vol. 7. P. 713-720.

65. Learmont J.C., Geezy A.F., Mills J. et al. Immunologic and virologic status after 14 to 1 years of infection with an attenuated strain of HIV-1. A report from the Sydney Blood Bank Cohort // N. Engl. J. Med. 1999. Vol. 340. P. 1715-1722.

66. Luciw P.A., Pratt-Lowe E., Shaw K.E. et al. Persistent infection of rhesus macaque T-cell-line-tropic and macrophage-tropic clones of simian/human immunoc viruses (SHIV) // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1995. Vol. 92. P. 7490-7494.

67. Letvin N.L., Barouch D.H., Montefiori D.C. Prospects for vaccine protection against HIV-1 infection and AIDS // Annu. Rev. Immunol. 2002. Vol. 20. P. 73-99.

68. Lukashov V.V., Goudsmit J. HIV heterogeneity and disease progression in AIDS: a model of continuous virus adaption // AIDS. 1998. Vol. 12. Suppl. A. P. 43-52.

69. Lyles CM., Graham N.M., Astemborski J. et al. Cell-associated infectious HIV-1 viral load as a predictor of clinical progression and survival among HIV-1 infected injection drug users and homosexual men // Eur. J. Epidemiol. 1999. Vol. 15. № 2. P. 99-108.

70. McDougal JS, Nicholson JK, Cross GD, Cort SP, Kennedy MS, Mawle AC. Binding of the human retrovirus HTLV-III/LAV/ARV/fflV to the CD4 (T4) molecule: conformation dependence, epitope mapping, antibody inhibition, and potential for idiotypic mimicry.// J Immunol. 1986 Nov l;137(9):2937-44.

71. Michael J Endres, Paul R Clapham, Mark Marsh, Ména Ahuja, Julie Davis Turner, Aine McKnight, Jill F Thomas, Beth Stoebenau-Haggarty, Sunny Choe, Patricia J Vance, Timothy N.C Wells, Christine A Power, Shaheen S Sutterwala, Robert W Doms, Nathaniel R Landau and James A Hoxie. CD4-independent infection by fflV-2 is mediated by fusin/CXCR4. Cell. 1996 Nov 15;87(4):745-56.

72. Moebius U, Clayton LK, Abraham S, Harrison SC, Reinherz EL. The human immunodeficiency virus gpl20 binding site on CD4: delineation by quantitative equilibrium and kinetic binding studies of mutants in conjunction with a high-resolution CD4 atomic structure.// J Exp Med. 1992 Aug 1;176(2):507~17.

73. Muriuki JK, Ngeranwa J, Mwangi JM, Orinda G, Lwembe R, Khamadi SA. Isolation and Biological Characterization of Non B HIV-1 from Kenya.// AIDS Res Hum Retroviruses. 2011 Nov 14. P. 54.

74. Mbisa JL, Martin SA, Cane PA. Patterns of resistance development with integrase inhibitors in HIV.// Infect Drug Resist. 2011;4:65-76. Epub 2011 Feb 22.

75. Pandit A, Sinha S. Differential trends in the codon usage patterns in HIV-1 genes.// PLoS One. 201 l;6(12):e28889. Epub 2011 Dec 22.

76. Reeves JD, Gallo SA, Ahmad N, Miamidian JL, Harvey PE, Sharron M, Pohlmann S, Sfakianos JN, Derdeyn CA, Blumenthal R, Hunter E, Doms RW. Sensitivity of HIV-1 to entry inhibitors correlates with envelope/coreceptor affinity, receptor density, and fusion kinetics. Proc Natl Acad Sci USA. 2002 Dec 10;99(25): 16249-54.

77. Richman D.D. Drag resistance in relation to pathogenesis.// AIDS -1995. - V.9 (suppl A), p.49-53.

78. Srivastava I.K., Van Dorsten K., Vojtech L. et al. Changes in the immunogen of soluble gpl40 human immunodeficiency virus envelope constructs upon pa of the second hypervariable region // J. Virol. 2003. Vol. 77. P. 2310-2320.

79. Schuitemaker H., Kootstra N. A., Groenink M., de Goede R. E. Y., Miedema F., Tersmette M. Differential tropism of clinical HIV-1 isolates for primary monocytes and promonocytic cell lines. // AIDS Research and Human Retroviruses, 1992, 8,1679-1682.

80. Schuitemaker H., Koot M., Kootstra N. A., Dercksen M. W., de Goede R. E. Y., van Steenwijk R. P., Lange J. M. A., Eeftinck Schattenkerk J. K. M., Miedema F., Tersmette M. Biological phenotype of human immunodeficiency virus type 1 clones at different stages of infection: progression of disease is associated with a shift from monocytotropic to T-cell-tropic virus population.// Journal of Virology, 1992, 66,1354-1360.

81. Sacha JB, Buechler MB, Newman LP, Reed J, Wallace LT, Loffredo JT, Wilson NA, Watkins DI. Simian immunodeficiency virus-specific CD8+ T cells recognize Vpr- and Rev-derived epitopes early after infection.// J Virol. 2010 Oct;84(20): 10907-12. Epub 2010 Aug 4.

82. Sun G, Li H, Wu X, Covarrabias M, Scherer L, Meinking K, Luk B, Chomchan P, Alluin J, Gombart AF, Rossi JJ. Interplay between HIV-1 infection and host microRNAs.// Nucleic Acids Res. 2012 Mar l;40(5):2181-96. Epub 2011 Nov 10.

83. Sourisseau M, Sol-Foulon N, Porrot F, Blanchet F, Schwartz O. Inefficient human immunodeficiency virus replication in mobile lymphocytes.// J Virol. 2007 Jan;81(2):1000-12. Epub 2006 Nov 1.

84. Starska K, Giowacka E, Kulig A, Lewy-Trenda I, Brys M, Lewkowicz P. Prognostic value of the immunological phenomena and relationship with clinicopathological characteristics of the tumor - the expression of the early CD69(+), CD71(+)and the late CD25(+), CD26(+), HLA/DR (+) activation markers on T CD4(+) and CD8(+) lymphocytes in squamous cell laryngeal carcinoma. Part II.// Folia Histochem Cytobiol. 2011;49(4):593-603.

85. Trushin SA, Bren GD, Badley AD. CD4 T Cells Treated with gpl20 Acquire a CD45R0+/CD45RA+ Phenotype.// Open Virol J. 2009 Apr l;3:21-5.

86. Virology Methods Manual. Edited by Mahy B. and Kangro H.O. // Academic Press. 1996. P. 374.

87. Van !t Wout A. B., Kootstra N. A., Mulder-Kampinga G. A., Albrecht-van Lent N. A., Scherpbier H. J., Veenstra J., Boer K., Coutinho R. A., Miedema F., Schuitemaker H. acrophage-tropic variants initiate human immunodeficiency virus type 1 infection after sexual, parenteral, and vertical transmission. // Journal of Clinical Investigation, 1994,94,2060-2067.

88. Vernazza P., Eron J.J., Cohen M.S., van der Horst C.M., Troiani L. et al. Detection of biologic characterization of infectious HIV-1 in semen of seropositive men // AIDS. - 1994. - Vol. 8. - P. 1325-1329.

89. Weng J, Krementsov DN, Khurana S, Roy NH, Thali M. Formation of syncytia is repressed by tetraspanins in human immunodeficiency virus type 1-producing cells.// J Virol. 2009 Aug;83(15):7467-74. Epub 2009 May 20.

90. WHO-UNAIDS Guidelines for Standard HIV Isolation and Characterization Procedures // WHO-UNAIDS HIV Vaccine Initiative, Initiative for Vaccine Reasearch, Health Research Technology and Pharmaceuticals, World Health Organization. 2002. P. 140.

91. Wyatt, R. et al. The antigenic structure of the HIV gpl20 envelope glycoprotein Nature 393. 1998,705-711.

92. Xiong J, Kashiwada Y, Chen CH, Qian K, Morris-Natschke SL, Lee KH, Takaishi Y. Conjugates of betulin derivatives with AZT as potent anti-HIV agents.// Bioorg Med Chem. 2010 Sep l;18(17):6451-69.

93. Xiongying Tu,l,2,5 Kalyan Das, 1,2,5 Qianwei Han,2 Joseph D Bauman,l,2 Arthur D Clark, Jr,l,2 Xiaorong Hou,2 Yulia V Frenkel,l,2 Barbara L Gaffney,2 Roger A Jones,2 Paul L Boyer,3 Stephen H Hughes,3 Stefan G Sarafianos,l,2,4 and Eddy Arnoldl,2. Structural basis of HIV-1 resistance to AZT by excision//Nat Struct Mol Biol. 2010 October; 17(10): 1202-1209.

94. Walker C.M., Moody D.J., Stites D.P., Levy J.A. CD8 lymphocytes can control HIV infection in vitro by supressing virus replication. // Science -1986. - V.234, p. 1563-1566.

95. Walker C.M., Thomson-Honnenbier G.A., Hsueh F.C. et al. CD8 T-cell from HIV-infected individuals inhibit acute infection by human and primate immunodeficiency virus. // Cell Immunol. -1991.- V.137, p. 420-428.

96. Walker C.M., Levy J.A. A diffusible lymphokine produced by CD8 T-lymphocytes supresses HIV replication. // Immunology - 1991. V.66, p. 628630.

97. Wehbie R., Wahlberg J., Unlen et al. Kinetic characteristics of inhibitor A77003. // Abstracts of the Second International Workshop on HIV drug resistance. Noorwijk, The Netherlands, p. 20.

98. Weinhold K.J., Lyerly H.K., Stanley S.D. et al. HIV-1 gpl20 -mediated immune supression and lymphocyte destruction in the absence of viral infection. //J. Immunol. - 1989. - V.142, p. 3091-3097.

99. Willey R.L., Rutledge R.A., Dias S. et al. // Identification of conserved and divergent domains within the envelope gene of the acquired immunodeficiency syndrome retrovirus. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA - 1986. - V.83, p. 5038-5042.

100. Yanehara S., Ishii A., Yonehara M. A cell-killing monoclonal antibody (anti-Fas) to a cell surface antigen co-downregulated with the receptor of tumor necrosis factor. // J. Exp. Med. - 1989- V.164, p. 1747.

101. Yolov A.A., Kozlova A.V., Yaroslavtseva N.G., et al.Quantitative PCR as a method for monitoring retroviral infection on the gene level. // Virus Genes - 1995. - V.10, N1, p. 45-51.

102. Young R.C. Drug resistance: the clinical problem in cancer therapy. //Boston, 1989.-p. 1-12.

103. Zhang D., Tsoukas C., Ho D.D. et al. Resistance to 2 5, 0,3 5, 0-dideoxycytidine conferred by a mutation in codon 65 of the human immunodeficiency virus type 1 reverse transcriptase. // Antimicrob.Agents Chemother. -1994. - V.38, p. 282-287.