Микробициды с анти-ВИЧ-активностью тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.03.09, кандидат биологических наук Гилязова, Алла Владимировна

• Гилязова, Алла Владимировна
• кандидат биологических наук
• 2010

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Гилязова, Алла Владимировна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Микробициды с анти-ВИЧ-активностью»

Передача ВИЧ-инфекции через слизистые оболочки.16

Рациональность использования микробицидов.20

Механизмы действия микробицидов.22

Энхансеры защиты вагинальной слизистой.22

Поверхностно-активные вещества (ПАВ).24

Ингибиторы проникновения/фузии.26

Ингибиторы репликации.30

Экспериментальные системы для оценки эффективности микробицидов

32

Клеточные модели.35

Тканевые экспланты.38

Животные модели.43

Доклинические и клинические испытания микробицидов с анти-ВИЧактивностью.46

Доклинические исследования.47

Клинические исследования.50

Будущие направления разработки микробицидов.56

Заключение.57

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.58

Сыворотки.58

Клеточные культуры.58

Культивирование суспензионных лимфобластоидных клеточных линий. 58

Криоконсервация суспензионных клеточных культур.59

Культуры донорских МПК.59

Вирусы.60

Соединения.61

Растительные полифенолы.61

Гуминовые вещества.63

Наночастицы кристаллического кремния.65

Наночастицы пористого кремния.65

Аддукты нанокластеров углерода.65

Получение и определение нуклеотидных последовательностей.66

Изоляция РНК ВИЧ-1 из клинических образцов.66

Получение вирусспецифической ДНК из РНК.67

Амплификация нуклеотидных последовательностей генома ВИЧ-1.68

Анализ препаратов ДНК.69

Определение нуклеотидных последовательностей.70

Поиск и использование полученных ранее генетических последовательностей.70

Методы филогенетического анализа.71

Подготовка последовательностей для анализа.71

Определение эволюционных дистанций и построение филогенетических деревьев.71

Определение 50%-ной инфекционной дозы (ТСГО50).72

Изучение цитотоксических свойств соединений.72

Исследование антивирусной активности соединений.74

Исследование вирулицидного действия соединений.75

ИММУНОФЕРМЕНТНЫЙ АНАЛИЗ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИГЕНОВ ВИЧ-1.75

Методы статистического анализа.76

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.77 1

Молекулярная эпидемиология ВИЧ-инфекции в Московской области.77

Анализ эпидемиологических данных.77

Молекулярно-генетическая структура штаммов ВИЧ-1, циркулирующих е

Московской области.79

Филогенетический анализ.81

Изоляция штаммов ВИЧ-1.84

Определение 50%-ной инфекционной дозы (ТСГО50).86

Поиск анти-ВИЧ-соединений в ряду полифенолов растений.88

Изучение цитотоксичности и антивирусной активности гуминовых веществ.95

Изучение цитотоксических, антивирусных и вирулицидных свойств кремниевых наночастиц.101

Исследование цитотоксичности, антивирусной активности и вирулицидного эффекта углеродных нанокластеров.103

Поиск эффективных в отношении ВИЧ-инфекции комбинаций соединений.107

ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.116

Молекулярная эпидемиология вариантов ВИЧ-1, циркулирующих в

Московской области.116

Изоляция актуальных штаммов ВИЧ-1.119

Цитотоксичность и антивирусная активность соединений, относящихся к различным химическим классам.121

ЗАКЛЮЧЕНИЕ.126

ВЫВОДЫ.128

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ.129

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

АНКУ - аддукты нанокластеров углерода

ВИЧ-1 - вирус иммунодефицита человека 1-го типа

ВПГ — вирус простого герпеса

ВПЧ - вирус папилломы человека

ВТП - высокотемпературный пек

ГК - гуминовые кислоты

ДК - дендритные клетки

ЗППП - заболевания, передающиеся половым путем ИЛ-2 - интерлейкин-2

И1 JUL ill - инфекции, передающиеся половым путем

JITC - лимфоидная ткань слизистых оболочек

МПК — мононуклеарные клетки периферической крови

МСМ - мужчины, имеющие секс с мужчинами

ОТ - обратная транскриптаза

ПАВ - поверхностно-активное вещество

ПФ - полифенол

СПИД - синдром приобретенного иммунодефицита СТП - среднетемпературный пек ТИ - терапевтический индекс (индекс селективности) ФГА - фитогемагглютинин

CTL — cytotoxic Т- lymphocyte (цитотоксические Т-лимфоциты) DC-SIGN - dendritic cell-specific ICAM-grabbing non-integrin ED50 - 50% эффективная доза HIV-1 - Human Immunodeficiency Virus Type 1

HSV-2 - herpes simples virus type 2 (вирус простого герпеса 2-го типа) ÎS - индекс селективности mAbs - monoclonal antibodies

MTT - [l-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-3,5-diphenylformazan] PBMC - peripheral blood mononuclear cell PMPA - 9-[2-(phosphonomethoxy)propyl]adenine

SIV - simian immunodeficiency virus (вирус иммунодефицита обезьян) TD50 - 50% цитотоксическая доза

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы

Пандемия ВИЧ/СПИДа продолжает оставаться одной из основных проблем здравоохранения во всем мире, несмотря на все усилия по предотвращению и контролю ВИЧ-инфекции. В настоящее время более 33 млн. людей живут с ВИЧ-инфекцией. По данным ИМАГО Б за 2009 год зарегистрировано 2,5 млн. смертей и около 2,7 млн. новых случаев ВИЧ-инфекции, большинство из них среди женщин [105]. В России в период до 2001 г. среди выявленных случаев преобладали мужчины (75-88%). Но уже к 2006 г. доля ВИЧ-позитивных женщин составила 44% и продолжает расти. Увеличивается и число детей, инфицированных ВИЧ-позитивными матерями. Такое тендерное распределение ставит обязательным вопрос о разработке эффективных способов предотвращения передачи ВИЧ женщинам и блокирования половой передачи ВИЧ.

Поиск новых перспективных соединений, предотвращающих передачу ВИЧ-инфекции, является одной из актуальных задач здравоохранения, поскольку существуют трудности в разработке вакцин, отсутствие средств специфической профилактики, а также появление вариантов ВИЧ-1, обладающих лекарственной устойчивостью [59]. Частью комплексного подхода в системе профилактических мер против распространения ВИЧ/СПИДа является разработка и применение микробицидов.

Микробициды - это препараты, гелевые или мазевые композиции, содержащие активные составляющие, способные предотвращать половую передачу ВИЧ и других заболеваний, передающихся половым путем (гонорея, хламидиозы, генитальный герпес). Такие продукты предназначены, прежде всего, для женщин, которые могут пользоваться данным средством профилактики независимо от полового партнера.

Многие микробициды успешно прошли доклинические испытания, но их безопасность для человека и эффективность остаются нерешенной проблемой. Важность клинических испытаний была проиллюстрирована исследованиями ноноксинола-9, который вызывал физические повреждения слизистой оболочки, что повышало риск ВИЧ-инфицирования. Такой опыт способствовал разработке критериев, которые должны быть использованы в качестве стандартов при проведении клинических испытаний [82].

Согласно последним публикациям около 70 новых соединений находятся на стадии подготовки к исследованиям как спермициды и/или микробициды местного действия и 7 препаратов в настоящее время проходят клинические испытания. Они включают в себя поверхностно-активные вещества (ПАВ), анионные полимеры, ингибиторы; проникновения ВИЧ в клетку, ингибиторы обратной транскриптазы. Предполагается, что применение препарата даже с эффективностью 60% за 3 года предотвратит 2,5 млн. случаев ВИЧ-инфекции, если он будет использован 20% женщин в 50% небезопасных половых, актов [59].'Идеальные микробициды представляют собой безопасное, действенное и недорогое средство защиты от ВИЧ-инфекции, других ИППП и даже от нежелательной беременности [104].

Для создания компонентов вакцин и микробицидов, направленных против актуальных вариантов ВИЧ, циркулирующих на определенной территории, а также для того, чтобы понять эпидемиологию и происхождение ВИЧ-1, необходим постоянный мониторинг распространения ВИЧ-эпидемии. ВИЧ-инфекция на территории России и бывшего СССР в основном вызвана двумя субтипами А и В, а также рекомбинантным субтипом А/В. Генетический анализ определил субтип А как доминирующий в большинстве регионов. В то же время в Калининграде и в Череповце выявлен мозаичный вариант А/В. Кроме того, исследования, проведенные различными группами авторов, выявили появление других субтипов ВИЧ, которые способны вызвать новые вспышки эпидемии [1]. Таким образом, обнаружение новых вариантов вируса и прогноз развития эпидемии являются важными аспектами в разработке профилактических средств против ВИЧ.

Целью данной работы был поиск соединений, подавляющих репликацию ВИЧ-1 в различных вирус-клеточных системах, а также определение молекулярно-генетической структуры вариантов ВИЧ-1, циркулирующих в Московской области.

Для достижения цели были поставлены следующие задачи:

1. Изучение молекулярно-генетической структуры вариантов ВИЧ-1, циркулирующих в Московской области.

2. Изоляция актуальных штаммов ВИЧ-1 от ВИЧ-инфицированных лиц с ранней инфекцией.

3. Исследование цитотоксических свойств потенциальных микробицидов, относящихся к различным классам химических веществ (растительные полифенолы, гумиыовые вещества, кремниевые наночастицы и аддукты нанокластеров углерода).

4. Оценка антивирусной активности соединений различной природы in vitro с использованием референс-штамма и первичного изолята ВИЧ-1.

5. Поиск комбинаций препаратов, проявляющих синергизм при ингибировании ВИЧ-инфекции in vitro.

Научная новизна работы Получены новые данные по молекулярно-генетической структуре вариантов ВИЧ-1, циркулирующих в Московской области. Результаты свидетельствуют об увеличении эволюционной дистанции между циркулирующими вариантами ВИЧ по сравнению с данными, полученными на более ранних этапах развития эпидемии.

Получены клинические изоляты ВИЧ-1, представляющие собой актуальные штаммы, которые вызывают инфекцию на территории Московской области.

Впервые исследованы индивидуальные соединения класса полифенолов, выделенные и очищенные из растений семейства Euphorbiaceae, на цитотоксичность и эффективность в отношении ВИЧ-инфекции in vitro.

Впервые проведен анализ гуминовых веществ как соединений, перспективных для разработки микробицидов.

Впервые изучены цитотоксические, антивирусные и вирулицидные свойства кремниевых наночастиц и аддуктов нанокластеров углерода на модели ВИЧ-инфекции in vitro. Впервые показана возможность комбинированного использования этих препаратов в комплексе с другими анти-ВИЧ-соединениями.

Найдены эффективные соединения с высокими индексами селективности, которые могут стать основой для разработки специфических анти-ВИЧ-микробицидов.

Научно-практическая значимость работы

Разработка эффективных микробицидных препаратов позволит снизить распространение ВИЧ/СПИД половым путем. В данной работе изучена анти-ВИЧ-активность соединений, принадлежащих к различным классам химических веществ (растительные полифенолы, гуминовые вещества, кремниевые наночастицы, аддукты нанокластеров углерода).

Цитотоксичность препаратов, их антивирусное и вирулицидное действие были проверены с использованием стандартных методик, что позволяет сравнивать результаты с последующими исследованиями, а также с литературными данными. В результате такого сравнения возможен отбор наиболее эффективных соединений в отношении ВИЧ-инфекции in vitro.

Полученные клинические изоляты представляют собой актуальные штаммы ВИЧ, циркулирующие в Московской области в настоящее время. Данные первичные штаммы могут быть использованы для оценки эффективности потенциальных кандидатных микробицидов и компонентов анти-ВИЧ-вакцин.

В результате исследований выявлены наиболее активные соединения, перспективные для создания нового типа микробицидных препаратов, которые позволят быстро и эффективно предотвратить передачу ВИЧ-инфекции половым путем. Обнаружение комбинаций препаратов, подавляющих ВИЧ-инфекцию in vitro, делает возможным использование активных соединений в более низких концентрациях, что уменьшит цитотоксичность.

Выявление малой токсичности для клеток препаратов наночастиц кристаллического и пористого кремния, а также аддуктов нанокластеров углерода открывает возможность изучения этих образцов в качестве систем доставки анти-ВИЧ-микробицидов.

Данные по молекулярной эпидемиологии ВИЧ-инфекции в Московской области, описанные в настоящей работе, могут быть использованы для разработки региональных вакцин. На основании полученных результатов можно судить о путях и источниках распространения эпидемии и проводить профилактическую работу значительно эффективнее.

Публикации по теме диссертации

1. Карамов Э.В., Гарманова A.B., Хаитов P.M. Мукозный иммунитет и его особенности. Иммунология, 2008, т.29, №6, с.377-384.

2. Зебницкая И.С., Гарманова A.B., Алексеева Л.П., Зенин П.В., Крыжановская O.A., Хаметова K.M., Корнилаева Г.В., Гудима Г.О., Карамов Э.В., Сидорович И.Г. Двойная инфекция ВИЧ/туберкулез: серологические исследования. Российский аллергологический журнал, 2009, №3,пр.1,с.219-220.

3. Гилязова A.B., Зенин П.В., Пронин А.Ю., Серков И.Л., Хаметова K.M., Орлова-Морозова Е.А., Жукова Е.В., Корнилаева Г.В., Пастернак А.О.,

Лукашов В.В., Карамов Э.В. Молекулярная эпидемиология ВИЧ-1 в Московской области. Вопросы вирусологии, 2010, №5, с. 25-29.

4. Корнилаева Г.В., Перминова И.В., Гилязова A.B., Хаметова K.M., Карамов Э.В. Гуминовые вещества как перспективные соединения для создания микробицидных препаратов. Российский иммунологический журнал, в печати.

5. Гилязова A.B., Корнилаева Г.В., Пономарев А.Н., Черешнев В.А., Карамов Э.В. Микробициды с анти-ВИЧ-активностью на основе аддуктов углеродных нанокластеров. Российский иммунологический журнал, в печати.

6. Пронин А.Ю., Гарманова A.B., Серков И.Л., Зенин П.В., Крыжановская O.A., Жукова Е.В., Орлова-Морозова Е.А., Хаметова K.M., Корнилаева Г.В., Карамов Э.В. Мониторинг ВИЧ-инфекции в Московском регионе. Теоретические и практические аспекты современной эпидемиологии: материалы научно-практической-конференции, посвященной 75-й годовщине со дня рождения, акад. РАМН Б.Л. Черкасского (Москва, 28 января 2009 г.)/ Моск.мед.акад. им. И.М. Сеченова [под общ.ред. Н.Н.Филатова, И.В. Михеевой], М.: Санэпидмедиа, 2009, с. 104-105.

7. Karamov Е., Pronin А., Kornilaeva G., Serkov I., Zenin P., Zhukova E., Garmanova A., Orlova-Morozova E., Khametova K., Lukashov V. Genetic variability of HIV in Russia. 5th European Conference on Clinical and Social Research on AIDS and Drugs, Vilnius, Lithuania (28-30 April 2009), Abstract book, p.53.

8. Карамов Э.В., Пронин А.Ю., Лукашов B.B., Серков И.Л., Гарманова A.B., Зенин П.В., Жукова Е.В., Крыжановская O.A., Орлова-Морозова Е.А., Хаметова K.M., Павлова Т.В., Корнилаева Г.В. Молекулярная эпидемиология ВИЧ/СПИД в России. Актуальные вопросы инфекционной патологии. Сборник докладов научнопрактической конференции, посвящённой 100-летию Ростовского НИИ микробиологии и паразитологии (23-24 сентября 2009 г., г. Ростов-на-Дону), изд-во НМЦ Логос, 2009, с.З70-376.

9. Зебницкая И.С., Гарманова А.В., Алексеева Л.П., Зенин П.В., Крыжановская О.А., Хаметова К.М., Корнилаева F.B., Карамов Э.В. Характеристика сывороток пациентов с двойной инфекцией ВИЧ/туберкулез. Актуальные вопросы инфекционной патологии. Сборник докладов научно-практической конференции, посвященной 100-летию Ростовского НИИ микробиологии и паразитологии (23-24 сентября 2009 г., г. Ростов-на-Дону), изд-во НМЦ Логос, 2009, с.416-420.

10.Karamov Е., Zaycev I., Zenin P., Meshandin A., Zebnickaya I., Gilyazova A., Alekseeva L., Kornilaeva K., Sidorovich I., Demikhova O. HIV-1/AIDS-TB crisis in Russia. Keystone Symposia Meeting «Overcoming the Crisis of ТВ and AIDS», 20-25 October, 2009, Arusha, Tanzania, Abstract Book, p.85.

11.Gilyazova A., Zenin P., Serkov I., Pronin A., Khametova' K.,

Kryzhanovskaya O., Orlova-Morozova E., Zhukova E., Kornilaeva G.,

Lukashov V., Karamov E. Monitoring of HIV-l infection in Moscow and th

Moscow region. 3 Eastern Europe and Central Asia AIDS Conference EECAAC, US-Russia HIV Prevention Science Workshop (October 28-30, 2009, Moscow), Abstract book, vol.2, p.28.

12.Karamov E., Zaytsev I., Zenin P., Meshandin A., Gilyazova A., Zebnickaya I., Kornilaeva G., Alekseeva L., Khametova K. Kryzhanovskaya O. Analysis of tVi sera from patients coinfected with HIV and ТВ. 3 Eastern Europe and Central Asia AIDS Conference EECAAC, US-Russia HIV Prevention Science Workshop (October 28-30, 2009, Moscow), Abstract book, vol.2, p.34.

13.Kornilaeva G.V., Pavlova T.V., Kukhanova M.K., Gilyazova A.V., Zenin P.V., Khaitov M.R., Karamov E.V. New stable nucleoside analogs as tVi microbicides. 3 Eastern Europe and Central Asia AIDS Conference

EECAAC, US-Russia HIV Prevention Science Workshop (October 28-30, 2009, Moscow), Abstract book, vol.2, p.217.

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 143 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, результатов собственных исследований, обсуждения полученных данных и выводов. Библиографический указатель включает 130 источников, в том числе 10 отечественных и 120 зарубежных. Диссертация содержит 40 таблиц и 32 рисунка.

Заключение диссертации по теме «Клиническая иммунология, аллергология», Гилязова, Алла Владимировна

ВЫВОДЫ

1. Определена первичная структура участков генов env и gag вариантов ВИЧ-1, циркулирующих в Московской области. Доминирующим является субтип А (93,4%), доля субтипа В составляет 6,6%.

2. Среди исследованных вариантов ВИЧ-1 не было обнаружено кластрирования и корреляции между полом пациента или путем передачи инфекции и субтипом вируса.

3. Изолировано два актуальных штамма ВИЧ-1, циркулирующих на территории Московской области.

4. Показана низкая цитотоксичность в клетках Т-лимфобластоидной линии СЕМ SS ив мононуклеарах периферической крови ряда соединений, принадлежащих к различным классам химических веществ: растительные полифенолы, гуминовые вещества, кремниевые наночастицы и аддукты углеродных нанокластеров.

5. Выявлена высокая антивирусная активность гуминовых веществ и двух соединений из класса растительных полифенолов в различных вирус-клеточных моделях, в том числе с использованием актуального штамма ВИЧ-1.

6. Обнаружен синергидный эффект ингибирования ВИЧ-инфекции in vitro при комбинировании аддуктов нанокластеров углерода с азидотимидином, растительными полифенолами и гуминовыми кислотами.

7. Отобраны соединения с наибольшими индексами селективности, низкой цитотоксичностью и высокой антивирусной активностью, которые могут быть кандидатными микробицидами.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Микробициды представляют собой препараты нового поколения, созданные на основе веществ с антивирусной активностью, способных ингибировать различные стадии репликации ВИЧ. Разработка микробицидных препаратов является важной и крайне актуальной задачей.

В соответствии с целями и задачами работы был проведен поиск новых эффективных анти-ВИЧ-препаратов среди различных классов химических соединений: растительные полифенолы, гуминовые вещества, наночастицы кристаллического и пористого кремния, аддукты нанокластеров углерода и их комбинации с природными соединениями.

Для изоляции актуальных штаммов ВИЧ-1, циркулирующих в настоящее время в Московской области, была исследована когорта из 360 ВИЧ-инфицированных лиц, не получавших антиретровирусной. терапии. В процессе выполнения работы была изучена молекулярная эпидемиология ВИЧ-инфекции в Московской области. В результате нашего исследования можно сделать вывод о том, что сохраняется тенденция превалирования субтипа А в российской ВИЧ эпидемии: анализ нуклеотидных последовательностей по обеим областям генома env и gag показал наличие двух субтипов - А (93,4%) и В (6,6%).

Нами получено 2 штамма от лиц с ранней ВИЧ-инфекцией (до 12 месяцев), не получавших антиретровирусной терапии, один из которых был использования для тестирования соединений с наибольшими индексами селективности.

В данной работе исследованы 12 соединений класса полифенолов, выделенных из растений сем. Euphorbiaceae. Установлено, что все исследованные растительные полифенолы обладают низкой цитотоксичностью для клеток Т-лимфобластоидной линии. Показано, что для МПК здоровых доноров токсическая доза выше, чем для клеток СЕМ SS. Наиболее эффективные в отношении референс-штамма соединения (№1, 2, 5 и 12) обнаружили также значительную активность в отношении первичного изолята.

Изучена анти-ВИЧ-активность 12 соединений класса гуматов. Установлено, что все исследованные соединения являются малотоксичными и обладают достаточно высоким антивирусным эффектом. Определение химиотерапевтического индекса для некоторых из исследованных соединений было затруднено, так как для них не удалось обнаружить 50%-ную токсическую концентрацию в связи с малой цитотоксичностью. Однако даже приблизительный расчет показывает, что эта величина достаточно высока. Эти характеристики, а также огромные запасы этих природных веществ, указывают на перспективность разработки недорогих микробицидных препаратов.

Исследованы цитотоксические, антивирусные и вирулицидные свойства кремниевых наночастиц и аддуктов нанокластеров углерода. Было показано, что два препарата наночастиц кремния обладают низкой токсичностью, не подавляют вирусную репродукцию, но проявляют заметный вирулицидный эффект. Тогда как водорастворимые аддукты нанокластеров углерода проявляют и вирулицидное, и антивирусное действие. При совместном использовании АНКУ с АЗТ, растительными полифенолами или гуминовыми кислотами обнаружен синергидный эффект.

128

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Гилязова, Алла Владимировна, 2010 год

1. Гилязова A.B., Зенин П.В., Пронин А.Ю., Серков И.Л., Хаметова K.M. и др. Молекулярная эпидемиология ВИЧ-1 в Московской области // Вопр. вирусол. 2010. - №5. - С. 25-29.

2. Лукашов В.В. Эволюционный анализ вирусов семейств Retroviridae, Parvoviridae и Astroviridae : дис. на соиск. учен. степ. докт. мед. наук: 03.00.06 / Лукашов В. В. Москва, 2003. - 227 с.

3. Орлов Д.С. Гумусовые кислоты почв и общая теория гумификации. -М.: Изд-во Моск. Ун-та, 1990. 325 с.

4. Пономарев А.Н. Нанобетон: концепция и проблемы. Синергизм наноструктурирования цементных вяжущих и армирующих фибры // Строительные материалы. 2007. - Т.6. — С. 69-71.

5. Сайт базы данных ВИЧ Национальной Лаборатории Лос Аламоса, США Электронный ресурс. М., 2010. - Режим доступа: http://hiv-web.lanl.gov/, свободный. - Загл. с экрана.

6. Сайт международной генетической базы данных ГенБанк Электронный ресурс. М., 2010. - Режим доступа: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/., свободный. - Загл. с экрана.

7. Сайт Научно-Технического Центра Прикладных Нанотехнологий Электронный ресурс. М., 2010. - Режим доступа: http://www.nanoteh.ru/, свободный. - Загл. с экрана.

8. Сайт программы Entrez Электронный ресурс. М., 2010. - Режим доступа: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/Entrez, свободный. - Загл. с экрана.

9. Сайт программы Basic Local Alignment Search Tool (BLAST) Электронный ресурс. M., 2010. - Режим доступа: http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi, свободный. - Загл. с экрана.

10. Сайт Федерального научно-методического Центра по профилактике и борьбе со СПИДом Электронный ресурс. М., 2010. - Режим доступа: http://www.hivrussia.org/, свободный. — Загл. с экрана.

11. Суханова А.Л., Казеннова Е.В, Бобкова М.Р., Кравченко А.В., Селимова Л.М. и др. Варианты вируса иммунодефицита человека типа 1, обнаруживаемые в России среди инфицированных половым путем // Вопр. вирусол. 2004. - № 1. - С. 4-7.

12. Тимошенко В.Ю., Кудрявцев А.А., Осминкина Л.А., Воронцов А.С., Рябчиков Ю.В. и др. Кремниевые нанокристаллы как фотосенсибилизаторы активного кислорода для биомедицинских исследований // Письма в ЖЭТФ. 2006. - Т. 83 (9). - С.492-295.

13. Ханина Т.А., Селимова Л.М., Казеннова Е.В, Бобков А.Ф., Бобкова М.Р. и др. Биологические свойства вариантов ВИЧ-1, циркулирующих среди наркоманов на территории России // Вопр. вирусол. 2005. - №4. -С. 24-28.

14. Abner S.R., Guenthner Р.С., Guarner J., Hancock K.A., Cummins, Jr. J.E. et al. A human colorectal explant culture to evaluate topical microbicides for the prevention of HIV infection // J. Infect. Diseases. 2005. - Vol. 192. -P. 1545-1556.

15. Abdel-Rahman A. A. Synthesis of some 2-methylthiouracil nucleosides and its 5-halo analogues of 2-acetamido-2-deoxy-D-glucose // Pharmazie. 2001. -Vol. 56, N 10.-P. 773-776.

16. Bakry R., Valiant R.M., Najam-ul-Haq M., Rainer M., Szabo Z. et al. Medicinal applications of fullerenes // Int. J. Nanomedicine. 2007. -Vol. 2(4).-P. 639-649.

17. Bobkov A.F., Kazennova E.V., Selimova L.M., Khanina T.A., Ryabov G.S., et al. Temporal trends in the HIV-1 epidemic in Russia: predominance of subtype A // J. Med. Virol. 2004. - Vol. 74, N 2. - P. 191-196.

18. Bomsel M. Transcytosis of infectious human immunodeficiency virus across a tight human epithelial cell line barrier // Nature Med. 1997. - Vol. 3. -P. 42-47.

19. Boom R., Sol C. J., Salimans M. M., Jansen C.L., Wertheim-van Dillen P.M. et al. Rapid and simple method for purification of nucleic acids // J. Clin. Microbiol. 1990. - Vol. 28. - P. 495-503.

20. Buck C.B., Thompson C.D., Roberts J.N., Mueller M., Lowry D. R. et al. Carrageenan is a potent inhibitor of papillomavirus infection // PLoS Pathogens. 2006. - Vol. 2, N 7. - P. e6.

21. Buffa V., Stieh D., Mamhood N., Hu Q., Fletcher P. et al. Cyanovirin-N potently inhibits human immunodeficiency virus type 1 infection in cellular and cervical explant models // J. Gen. Virol. 2009. - Vol. 90. - P. 234-243.

22. Catalone B.J., Kish-Catalone T.M., Neely E.B., Budgeon L.R., Ferguson M. et al. Comparative safety evaluation of the candidate vaginal microbicide C31G // Antimicrob. Agents Chemother. 2005. - Vol. 49, N 4. -P. 1509-1520.

23. Centers of Disease control and Prevention: CDC statement on study results of product containing nonoxynol-9// JAMA. 2000. - Vol. 284. - P. 1376.

24. Collins K.B., Patterson B.K., Naus.G.J., Landers D.V., Gupta P. Development of an in vitro organ culture model to study transmission of HIV-1 in the female genital tract // Nature Medicine. 2000. - Vol. 6, N 4. - P. 475-479.

25. Corey L., Wald A., Celum C.L., Quinn T.C. The effects of herpes simplex virus-2 on HIV-1 acquisition and transmission: a review of two overlapping epidemics // J. Acquir. Immune Defic. Syndr. 2004. - Vol. 35, N 5. -P. 435-445.

26. Cranage M., Sharpe S., Herrera C., Cope A., Dennis M. et al. Prevention of SIV rectal transmission and priming of T cell responses in macaques after local pre-exposure application of tenofovir gel // PLoS Med. 2008. - Vol. 5. -P. el57.

27. Cummins J.E., Dezzutti C.S. Sexual HIV-1 transmission and mucosal defense mechanisms // AIDS Rev. 2000. - Vol. 2. - P. 144-154.

28. Dezzutti C.S., James V.N., Ramos A., Sullivan S.T., Siddig A. et al. In vitro comparison of topical microbicides for prevention of human immunodeficiency virus type 1 transmission // Antimicrob. Agents Chemother. 2004. - Vol. 48, N 10. - P. 3834-3844.

29. Di Fabio S., Van Roey J., Giannini G., van den Mooter G., Spada M. et al. Inhibition of vaginal transmission of HTV-1 in hu-SCID mice by the non-nucleoside reverse transcriptase inhibitor TMC120 in a gel formulation //

30. AIDS.-2003.-Vol. 17, N 11. P. 1597-1604.

31. Duerr A., Wasserheit J.N., Corey L. HIV vaccines: new frontiers in vaccine development // Clin. Infect. Dis. 2006. - Vol. 43, N 4. - P. 500-511.

32. Eckstein P., Jackson M.C., Millman N., Sobrero A. J. Comparison of vaginal tolerance tests of spermicidal preparations in rabbits and monkeys // J. Reprod. Fertil. 1969. - Vol. 20. - P. 85-93.

33. Fantini J., Hammache D., Delezay O., Pieroni G., Tamalet C. et al. Sulfatide inhibits HIV-1 entry into CD42/CXCR41 cells // Virology. 1998. - Vol. 246.-P. 211-220.

34. Feldblum P.J., Adeiga A., Bakare R., Wevill S., Lendvay A. et al. SAVVY vaginal gel (C31G) for prevention of HIV infection: a randomized controlled trial in Nigeria // PLoS One. 2008. - Vol. 3, N 1. - P. el474.

35. Fichorova R. N., Bajpai M., Chandra N., Hsiu J.G., Spangler M. et al. Interleukin (IL)-l, IL-6, and IL-8 predict mucosal toxicity of vaginal microbicidal contraceptives // Biol. Reprod. 2004. - Vol. 71. - P. 761-769.

36. Fletcher P.S., Elliott J., Grivel J.-C., Margolis L., Anton P. et al. Ex vivo culture of human colorectal tissue for the evaluation of candidate microbicides // AIDS. 2006. - Vol. 20. - P. 1237-1245.

37. Fletcher P.S., Harman S.J., Boothe A.R., Doncel G.F., Shattock RJ.

38. Preclinical evaluation of lime juice as a topical microbicide candidate //

39. Retrovirology. 2008. - Vol. 5. - P. 3.i'

40. Garg S., Anderson R. A., Chany C. J., Waller D.P., Diao X.H. et al. Properties of a new acid-buffering bioadhesive vaginal formulation (ACIDFORM) // Contraception. 2001. -Vol. 64, N 1. - P. 67-75.

41. Gosselin E., Howell A.L., Schwarz L., Prabhala R., Rossoll R. et al. Infectivity by HIV-1 of human uterine endometrial carcinoma cells // Adv. Exp. Med. Biol. 1995. - Vol. 371B. -P. 1003-1006.

42. Greenhead P., Hayes P., Watts P. S., Laing K. G., Griffin G. E. et al. Parameters of human immunodeficiency virus infection of human cervical tissue and inhibition by vaginal virucides // J. Virol. 2000. - Vol. 74, N 12. -P. 5577-5586.

43. Haghighi D.B., Lashner B.A. Left-sided ulcerative colitis // Gastroenterol. Clin. North. Am. 2004. - Vol. 33, N 2. - P. 271e84. Ix.

44. Haineault C., Gourde P., Perron S., Desormeaux A., Piret J. et al. Thermoreversible gel formulation containing sodium lauryl sulfate as a potential contraceptive device // Biol. Reprod. 2003. - Vol. 69, N 2. — P. 687-694.

45. Harman S., Fletcher P., Shattock R.J., Boothe A., Doncel G.F. Preclinical evaluation of lime juice as a potential microbicide // Microbicides, Cape Town, South Africa. 2006. - Abstract PA30.

46. Hemmerling A., Walsh J., Young Holt B., Whaley K., Potts M. The safety of lime juice used vaginally // Microbicides, Cape Town, South Africa. 2006. - Abstract PB28.

47. Hillier S.L., Moench T., Shattock R., Black R., Reichelderfer P. et al. In vitro and in vivo: the story of nonoxynol 9 // J. Acquir. Immune Defic. Syndr.2005.-Vol. 39, N 1. P. 1-8.

48. Hillier S.L. Safety and acceptability of coitally dependant use of 1% tenofovir over six months of use // Microbicides 2008. New Delhi, India. - Abst 655.

49. HIV Tools Research Group, http://www.hivtools.lshtm.ac.uk/.

50. Howell A., Edkins R.D., Rier S.E., Yeaman G.R., Stern J.E. et al. Human immunodeficiency virus type 1 infection of cells and tissues from the upper and lower human female reproductive tract // J. Virol. — 1997. Vol. 71. — P. 3498-3506.

51. Hu J., Gardner M.B., Miller C.J. Simian immunodeficiency virus rapidly penetrates the cervicovaginal mucosa after intravaginal inoculation and infects intraepithelial dendritic cells // J. Virol. 2000. - Vol. 74 , N 13. -P. 6087-6095.

52. Hughes L.M., Griffith R., Aitken R.J. The search for a topical dual action spermicide/microbicides // Curr. Med. Chem. 2007. - Vol. 14, N 7. -P. 775-786.

53. Kimura M. Estimation of evolutionary distances between homologous nucleotide sequences // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1981. - Vol. 78. -P. 454-458.

54. Kumar S., Tamura K., Nei M. Molecular evolutionary genetics analysis (MEGA) // Institute of Molecular Evolutionary Genetics, Pennsylvania State University, University Park, Pennsylvania, USA. — 1993.

55. Lackman-Smith C., Snyder B., Luckenbaugh K. Preclinical evaluations of lemon and lime juice as microbicide candidates // Microbicides, Cape Town, South Africa. 2006. - Abstract PA93.

56. Lederman M. M., Veazey R. S., Offord R., Mosier D.E., Dufour J. et al. Prevention of vaginal SHIV transmission in rhesus macaques through inhibition of CCR5 // Science. 2004. - Vol. 306, N 5695. - P. 485-487.

57. Lederman M.M., Offord R.E., Hartley O. Microbicides and other topical strategies to prevent vaginal transmission of HIV // Nat. Rev. Immunol. -2006. Vol. 6, N 5. - P. 371-382.

58. Lobritz M.A., Marozsan A.J., Troyer R.M., Arts EJ. Natural variation in the V3 crown of human immunodeficiency virus type 1 affects replicative fitness and entry inhibitor sensitivity // J. Virol. 2007. - Vol. 81. - P. 8258-8269.

59. Lukashov V.V., Karamov E.V., Eremin V.F., Titov L.P., Goudsmit J. Exrteme founder effect in an HIV type 1 subtype A epidemic among drug users in Svetlogorsk, Belarus. // AIDS Res. Hum. Retroviruses. 1998. -Vol. 14.-P. 1299-1303.

60. Maher D., Wu X., Schacker T., Horbul J., Southern P. HIV binding,i penetration, and primary infection in human cervicovaginal tissue // PNAS. -2005.-Vol. 102, N32.-P. 11504-11509.

61. Martin K.W., Ernst E. Antiviral agents from plants and herbs: a systematic review // Antivir Ther. 2003. - Vol. 8. - P. 77-90.

62. Mauck C. K., Ballagh S., Creinin M., Weiner D. B., Schwartz T. et al. 6-day safety trial of intravaginal lime juice (in three concentrations) vs. water, applied twice daily // Microbicides, Cape Town, South Africa. 2006. -Abstract OB3.

63. Mayer K.H., Maslankowski L.A., Gai F., El-Sadr W.M., Justman J. et al. Safety and tolerability of tenofovir vaginal gel in abstinent and sexually active HIV-infected and uninfected women // AIDS. 2006. - Vol. 20. -P. 543-551.

64. McGowan I. Microbicide: A new frontier of HIV prevention // Biologicals.ii

65. J 2006. Vol. 34, N 4. - P. 241-255.i

66. Moscicki A.B. Vaginal microbicides: where are we and where are we going? // J. Infect. Chemother. 2008. - Vol. 14, N5.-P: 337-341.

67. Mosmann T. Rapid colorimetric assay for cellular growth and survival: application to proliferation and cytotoxicity assays // J. Immunol. Methods. — 1983. Vol. 65, N 1-2. - P. 55-63.

68. Myer L., Denny L., Telerant R., Souza M., Wright Jr. T. C. et al. Bacterial vaginosis and susceptibility to HIV infection in South African women: a nested case-control study // J. Infect. Dis. 2005. - Vol. 192, N 8. - P. 13721380.

69. Nahar M., Dutta T., Murugesan S., Asthana A., Mishra D. et al. Functional polymeric nanoparticles: an efficient and promising tool for active delivery of bioactives // Crit. Rev. Ther. Drug Carrier Syst. 2006. - Vol. 23, N 4. -P. 259-318.

70. Nair M.P., Kandaswami C., Mahajan S., Nair H.N., Chawda R. et al. Grape seed extract proanthocyanidins downregulate HIV-1 entry coreceptors,

71. CCR2b, CCR3 and CCR5 gene expression by normal peripheral blood mononuclear cells // Biol. Res. 2002. - Vol. 35. - P. 421-431.

72. Neurath A.R., Strick N., Li Y.Y. Anti-HTV-1 activity of anionic polymers: a comparative study of candidate microbicides // BMC Infect. Dis. 2002. — Vol. 2. - P. 27.

73. Padian N.S., Shiboski S.C., Glass S.O., Vittinghoff E. Heterosexual transmission of human immunodeficiency virus (HIV) in northern California: results from a ten-year study // Am. J. Epidemiol. 1997. - Vol. 146. -P. 350-357.

74. Park J.H., Gu L., von Maltzahn G., Ruoslahti E., Bhatia S.N. et al. Biodegradable luminescent porous silicon nanoparticles for in vivo applications // Nat. Mater. 2009. - Vol. 8, N 4. - P. 331-336.

75. Partha R., Conyers J.L. Biomedical applications of functionalized fullerene-based nanomaterials // Int. J. Nanomedicine. 2009. - Vol. 4. - P. 261-275.

76. Pastore C., Picchio G. R., Galimi F., Fish R., Hartley O. et al. Two mechanisms for human immunodeficiency virus type 1 inhibition by N-terminal modifications of RANTES // Antimicrob. Agents Chemother. -2003. Vol. 47. - P. 509-517.

77. Patton D.L., Sweeney Y.T., Antonio M.A., Rabe L.K., Hillier S.L. Lactobacillus crispatus capsules: single-use safety study in the Macaca nemestrina model // Sex. Transm. Dis. - 2003. - Vol. 30, N 7. - P. 568-570.

78. Patton D.L., Sweeney Y.T., Balkus J.E., Hillier S.L. Vaginal and rectal topical microbicide development: safety and efficacy of 1.0% Savvy (C31G) in the pigtailed macaque // Sex. Transm. Dis. 2006. - Vol. 33, N 11. -P. 691-695.

79. Perry C.M. Maraviroc: a review of its use in the management of CCR5-tropic HIV-1 infection//Drugs-2010.-Vol. 70, N 9.-P. 1189-1213.

80. Piret J., Desormeaux A., Bergeron M.G. Sodium lauryl sulfate, a microbicides effective against enveloped and nonenveloped viruses // Curr. Drug Targets. -2002. Vol. 3, N 1. - P. 17-30.

81. Quinn, T.C., Overbaugh J. HIV/AIDS in women: an expanding epidemic // Science. 2005. - Vol. 308. - P. 1582-1583.

82. Ramjee G., Doncel G.F., Mehendale S., Tolley E.E., Dickson K. Microbicides 2008 conference: From discovery to advocacy // AIDS Research and Therapy. -2008.-Vol. 5.-P. 19.

83. Rohan L.C., Moncla BJ., Kunjara Na Ayudhya R.P., Cost M. et al. In vitro and ex vivo testing of tenofovir shows it is effective as an HIV-1 microbicide // PLoS ONE. 2010. - Vol. 5, N 2. - P. e9310.

84. Rumyantseva O.A., Olkhovskiy I.A., Malysheva M. A., Ruzaeva L.A., Vasiliev A.V. et al. Epidemiological networks and drug resistance of HIV type 1 in Krasnoyarsk region, Russia // AIDS Res. Hum. Retroviruses. -2009. Vol. 25, N 9. - P. 931 -936.

85. Sexton A., Drake P.M., Mahmood N., Harman S.J., Shattock R.J. et al. Transgenic plant production of Cyanovirin-N, an HIV microbicide // FASEB J. 2006. - Vol. 20, N 2. - P. 356-358.

86. Shattock R.J. Protection of macaques against rectal SIV challenge by mucosally-applied PMPA // Microbicides, Cape Town, South Africa. 2006.- Abstract OA15.

87. Shattock R.J., Moore J.P. Inhibiting sexual transmission of HIV-1 infection // Nat. Rev. Microbiol. 2003. - Vol. 1, N 1. - P. 25-34.

88. Smith R.J., Bodine E.N., Wilson D. P., Blower S. M. Evaluating the potential impact of vaginal microbicides to reduce the risk of acquiring HIV in female sex workers // AIDS. 2005. - Vol. 19, N 4. - P. 413-421.

89. Short R.V. New ways of preventing HIV infection: thinking simply, simply thinking // Philos. Trans. R. Soc. Lond. B Biol. Sci. 2006. - Vol. 361, N 1469.-P. 811-820.

90. Stone A., Harrison P.F. Microbicides ways forward // Alliance for Microbicide Development: Silver Spring, MD, USA. - 2010. - P. 52.

91. Tan X., Pearce-Pratt R., Phillips D.M. Productive infection of a cervical epithelial cell line with human immunodeficiency virus: Implications for sexual transmission // J. Virol. 1993. - Vol. 67. - P. 6447-6452.

92. Timoshenko V.Yu., Osminkina L.A., Vorontsov A.S., Ryabchikov Yu.V., Gongalsky M.B. et al. Silicon nanocrystals as efficient photosensitizer of singlet oxygen for biomedical applications // JETP Letters. 2006. - Vol. 83, N9.-P. 423-426.

93. Tsai C.C., Emau P., Jiang Y., Tian B., Morton W.R. et al. Cyanovirin-N gel as a topical microbicide prevents rectal transmission of SHIV89.6P in macaques // AIDS Res. Hum. Retroviruses. 2003. - Vol. 19, N 7. -P. 535-541.

94. Tsai C.C., Emau P., Jiang Y., Agy M.B., Shattock R.J. et al. Cyanovirin-N inhibits AIDS virus infections in vaginal transmission models // AIDS Res. Hum. Retroviruses. 2004. - Vol. 20, N l.-P. 11-18.

95. Vallet-Regi M. Nanostructured mesoporous silica matrices in nanomedicine // J. Intern. Med. 2010. - Vol. 267, N 1. - P. 22-431

96. Van Damme L., Ramjee G., Alary M., Vuylsteke B., Chandeying V. et al. Effectiveness of COL-1492, a nonoxynol-9 vaginal gel, on HIV-1 transmission in female sex workers: a randomised controlled trial // Lancet. -2002. Vol. 360, N 9338. - P. 971-977.

97. Veazey R.S., Klasse P.J., Schader S.M., Hu Q., Ketas T.J. et al. Protection of macaques from vaginal SHIV challenge by vaginally delivered inhibitors of virus-cell fusion // Nature. 2005. - Vol. 438, N 7064. - P. 99-102.

98. Vernazza P., Eron J.J., Cohen M.S., van der Horst C.M., Troiani L. et al. Detection of biologic characterization of infectious HIV-1 in semen of seropositive men // AIDS. 1994. - Vol. 8. - P. 1325-1329.

99. Virology Methods Manual. Edited by Mahy B. and Kangro H.O. // Academic Press.-1996.-P. 374.

100. Watson K., Gooderham N.J., Davies D.S., Edwards R.J. Interaction of the transactivating protein HIV-1 tat with sulphated polysaccharides // Biochem. Pharmacol. 1999. - Vol. 57, N 7. - P. 775-783.

101. Watts C., Zimmerman C. Violence against women: global scope and magnitude // Lancet. 2002. - Vol. 359. - P. 1232-1237.

102. WHO-UNAIDS Guidelines for Standard HIV Isolation and Characterization Procedures // WHO-UNAIDS HIV Vaccine Initiative, Initiative for Vaccine Reasearch, Health Research Technology and Pharmaceuticals, World Health Organization. 2002. - P. 140.

103. Yang H., Parniak M.A., Isaacs C.E., Hillier S.L., Rohan L.C. Characterization of cyclodextrin inclusion complexes of the anti-HIV non-nucleoside reverse transcriptase inhibitor UC781 // AAPS J. 2008. - Vol.10, N 4. - P. 606-613.

104. Zeitlin L., Hoen T.E., Achilles S.L., Hegarty T.A., Jerse A.E. et al. Tests of Buffergel for contraception and prevention of sexually transmitted diseases in animal models // Sex. Transm. Dis. 2001. - Vol. 28, N 7. - P. 417-423.