Биологические особенности популяции и совершенствование методов индикации Ornithobacterium rhinotracheale в объектах птицеводства тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 16.00.06, кандидат биологических наук Шурахова, Юлия Николаевна

• Шурахова, Юлия Николаевна
• кандидат биологических наук
• 2009

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Шурахова, Юлия Николаевна

Список сокращений.

Введение.

1. Обзор литературы.

1.1 Роль Ornithobacterium rhinotracheale (ORT) в инфекционной патологии птиц.

1.2 Распространенность возбудителя орнитобактериоза.

1.3 Орнитобактериоз.

1.3.1. Способы распространения. Клинические признаки и патологоанатомические изменения.

1.3.2. Краткая характеристика биологических свойств ORT.

1.4 Экспериментальное воспроизведение инфекции.

1.5 Диагностика орнитобактериоза птиц.

1.5.1 Бактериологическая диагностика орнитобактериоза.

1.5.2 Серологическая диагностика орнитобактериоза.

1.5.3 Диагностика орнитобактериоза с использованием иммуноферментного анализа.

1.5.4 Молекулярно-генетические методы в диагностике орнитобактериоза.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Биологические особенности популяции и совершенствование методов индикации Ornithobacterium rhinotracheale в объектах птицеводства»

Актуальность темы. Орнитобактериоз - бактериальное, высоко- контагиозное заболевание птиц, широко распространенное в странах с промышленно развитым птицеводством. Возбудитель орнитобактериоза - Ornithobacterium rhinotracheale циркулирует не только в птицеводческих предприятиях различных стран мира, но и среди диких птиц.

Первые упоминания об орнитобактерии датируются 1981 годом, когда Ornithobacterium rhinotracheale была впервые выделена в Германии от 5-недельных индюшат с признаками поражения органов дыхания, но способность Ornithobacterium rhinotracheale вызывать инфекцию подтверждена только в начале 90-х годов. В настоящее время заболевание, вызываемое Ornithobacterium rhinotracheale, зарегистрировано в Южной Африке, Германии, Нидерландах, Франции, США, Израиле, Англии, Бельгии и других странах [124].

Особенности, характеризующие болезнь, вызываемую орнитобактериями, включают относительно слабые респираторные симптомы у молодых птиц, которые начинаются с чихания и исчезают через 1-2 недели. У погибшей птицы наиболее часто регистрируют аэросаккулиты, одно - или двухсторонние пневмонии, пенистые скопления жидкости в грудной полости, анемичность, перикардиты и перитониты.

Заболевание, вызываемое орнитобактериями, может принести значительный экономический ущерб за счет увеличения процента смертности, снижения яйценоскости, снижения вывода птенцов, повышения процента выбраковки и низкого показателя прироста.

Диагностика инфекций, вызванных Ornithobacterium rhinotracheale, затруднена, так как клинические симптомы и посмертные изменения не специфичны и вызывают трудности дифференциации от других инфекций. Проблема заключается в том, что Ornithobacterium rhinotracheale может быть изолирована из биологического материала путем бактериологического анализа только на ранней стадии заболевания. Выделение Ornithobacterium rhinotracheale из патологического материала в соответствии с классическими процедурами бактериологического анализа занимает длительное время и достаточно трудоемко, так как колонии медленнорастущей Ornithobacterium rhinotracheale очень мелкие и их рост не всегда заметен при более быстром росте других видов бактерий.

Наиболее перспективными в плане индикации Ornithobacterium rhinotracheale являются методы, основанные на обнаружении их генетического материала в пробе.

Целенаправленных исследований в данном направлении отечественные исследователи не проводили, отсутствуют сведения о распространенности Ornithobacterium rhinotracheale в Российской Федерации. В связи с изложенным, актуальным является усовершенствование методов индикации и идентификации Ornithobacterium rhinotracheale при проведении лабораторных исследований, изучение распространения Ornithobacterium rhinotracheale в птицеводческих хозяйствах Российской Федерации, изучение биологических особенностей популяций Ornithobacterium rhinotracheale.

Цель и задачи исследования. Изучить биологические особенности и усовершенствовать методы индикации и идентификации Ornithobacterium rhinotracheale при проведении лабораторных исследований биологических материалов от птиц и с объектов птицеводства.

Для достижения поставленной цели нами определены следующие задачи:

- изучить распространение Ornithobacterium rhinotracheale в птицеводческих хозяйствах РФ; изучить культуральные и биохимические свойства Ornithobacterium rhinotracheale;

- определить особенности морфологического строения популяции Ornithobacterium rhinotracheale;

- подобрать дифференциально-диагностические среды и условия культивирования Ornithobacterium rhinotracheale; подобрать праймеры и оптимизировать параметры постановки ПЦР в целях совершенствования индикации Ornithobacterium rhinotracheale; провести серологический мониторинг среди птицеводческих хозяйств на наличие антител к Ornithobacterium rhinotracheale; разработать методические рекомендации по индикации Ornithobacterium rhinotracheale в объектах птицеводческих хозяйств.

Научная новизна

Впервые определена распространенность Ornithobacterium rhinotracheale (ОРТ) в птицеводческих хозяйствах на территории РФ.

Изучены культуральные и биохимические свойства Ornithobacterium rhinotracheale, определены оптимальные условия культивирования на питательных средах.

Впервые изучены морфологические особенности роста и развития популяций Ornithobacterium rhinotracheale, а также выявлен гетероморфизм с проявлением L-трансформации с помощью метода сканирующей электронной микроскопии.

Установлена патогенность Ornithobacterium rhino-tracheale для птиц путем воспроизведения экспериментальной инфекции.

Подобрана специфическая пара праймеров и оптимизированы параметры процесса амплификации для постановки ПЦР (полимеразной цепной реакции).

Определена эффективность использования метода генетической диагностики (ПЦР) при обнаружении ДНК Ornithobacterium rhinotracheale, позволяющего установить наличие возбудителя орнитобактериоза при его содержании в пробе 100 микробных клеток (м.к.) и значительно сократить срок проведения исследования.

Практическая ценность работы Разработаны и предложены ветеринарной практике «Методические рекомендации по индикации Ornithobacterium rhinotracheale методом полимеразной цепной реакции» (утверждены Отделением ветеринарной медицины РАСХН 27.03.2009г), которые находятся на апробации для внедрения в учебный процесс курсов дополнительного образования для ветеринарных специалистов ветлабораторий РФ на базе ФГУ ЦНМВЛ.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены и обсуждены на:

• заседаниях учёного совета ГНУ ВНИИВСГЭ (2007,2008 гг);

• Международной научно-практической конференции « Молекулярная диагностика», Москва (2007);

• расширенном совещание сотрудников лаборатории санитарной микробиологии ГНУ ВНИИВСГЭ (2009г.)

Публикации. Материалы диссертации отражены в четырех научных статьях, в том числе одна в журнале, рекомендованном ВАК РФ («Ветеринарная патология»). Основные положения, выносимые на защиту:

• Результаты комплексного изучения биологических свойств О. rhinotracheale.

• Широта распространения О .rhinotracheale в птицеводческих хозяйствах РФ на основании серологических исследований.

• Результаты подбора специфических праймеров для молекулярно-генетической диагностики орнитобактериоза.

• Экспериментальные данные по разработке метода обнаружения ДНК О. rhinotracheale с помощью ПЦР.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение диссертации по теме «Ветеринарная санитария, экология, зоогигиена и ветеринарно-санитарная экспертиза», Шурахова, Юлия Николаевна

Выводы

1. Установлено, что оптимальной средой для культивирования Ornithobacterium rhinotracheale является 5%-й кровяной агар (овечий). Бактерия трудно культивируемая, медленно растущая, представлена мелкими прозрачными колониями, рост которых часто подавляется посторонней микрофлорой.

2. Минимальный набор признаков для дифференциации О .rhinotracheale включает: мелкий размер колоний, отсутствие капсулы и жгутиков, каталаза «-», оксидаза «-», уреаза «-» , В-галактозидаза «+», аргининдегидролаза «+», индол «-», рост на среде Эндо «-», лизиндекарбоксилаза «-»> орнитиндекарбоксилаза «-», ферментация Сахаров: фруктоза «+», лактоза «+», мальтоза «+», галактоза «+».

3. Впервые изучены морфологические особенности роста и развития популяций О. rhinotracheale методом сканирующей электронной микроскопии. Популяция О. rhinotracheale представлена упорядоченными плотно упакованными, мелкими, слегка изогнутыми клетками палочковидной формы. Нередко образуются короткие цепочки из клеток, что обусловлено процессом их незавершенного деления и разделения. По периферии колоний отмечается гетероморфизм с различными проявлениями L- трансформации.

4. Установлено широкое распространение О. rhinotracheale в птицеводческих хозяйствах РФ. Специфические антитела обнаружены в 83% сывороток крови птиц, исследованных на ОРТ, из них 13% - сыворотки с высоким уровнем и 70% - с низким уровнем антител к ОРТ.

5. На основе ПЦР разработан высокоспецифичный метод индикации орнитобактерий в патологическом материале, смывах с объектов окружающей среды, кормах. Чувствительность метода составляет 100 микробных клеток в пробе.

6. Экспериментально установлена способность орнитобактерий вызывать у цыплят заболевание в моноинфекции без ярко выраженных клинических признаков, при этом возбудитель обнаруживается в патологическом материале методом ДНК-диагностики.

7. Высокая чувствительность (обнаружение 100 микробных клеток) и специфичность в присутствии посторонней микрофлоры, значительное сокращение срока исследования позволяют применять разработанный метод на основе ПЦР Для проведения скрининга на присутствие О. rhinotracheale в патологическом материале птиц и объектах окружающей среды.

Практические предложения

Для практического применения предложены «Методические рекомендации по индикации О. rhinotracheale методом полиме-разной цепной реакции», утвержденные Отделением ветеринарной медицины РАСХН 27.03.2009г. Рекомендации могут быть использованы в научно-исследовательских учреждениях при подготовке ветеринарных специалистов.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Шурахова, Юлия Николаевна, 2009 год

1. Антонов А.С. Молекулярные основы геносистематики// Изд. МГУ, М., 1980, стр. 24-31.

2. Аксенов М.Ю., Гинцбург А.Л. Диагностика инфекционных заболеваний с помощью метода полимеразной цепной реакции// Молекул.генетика. 1993.-№4.-стр. 3-9.

3. Борисенкова А.Н. Особенности проблемы бактериальных болезней птиц в современных условиях промышленного птицеводства.//Мат. Международной юбилейной научно-практической конференции, СПб,2004, стр. 108-117.

4. Борисов Л.Б., Смирнов A.M. Медицинская микробиология, вирусология, иммунологии// Москва, 1994.

5. Борисенкова А.Н., Новикова А.Ф., Рождественская Т.Н. Диагностика бактериальных болезней птиц при смешанном течении пастереллез, гемофилез, колибактериоз// Мат. Международной юбилейной научно-практической конференции, СПб,2004.

6. Виткова О.Н. Заболевание птиц, вызываемое орнитобактериями// Ветеринарная жизнь, 2004, №21.

7. Глотова Т.И., Тугунова Т.Б., Русских В.В., Нефедченко А.В., Глотов А.Г. Применение ПЦР для диагностики инфекционных болезней мелких домашних животных.// Материалы Всероссийской науч-прак конф. «Молекулярная диагностика», М., 2007, т.2, стр 87.

8. Глик Б., Пастернак Дж. Молекулярная биотехнология. Принципы и применение// Пер. с англ. — М.: Мир, 2002. — стр.589.

9. Гинцбург A.JI. Генодиагностика инфекционных заболеваний// Журнал микробиологии, эпизоотологии и иммунологии, 1998, №3, стр.86-95.

10. Гинцбург A.JL Современное состояние и перспективы молекулярно-генетических методов и решение задач медицинской микробиологии// Журнал микробиологии, эпизоотологии и иммунологии, 1999, №5, стр.22 26.

11. Гинцбург А.Л., Романова Ю.М. Некультивируемые формы бактерий и их роль в сохранении возбудителей сапронозов во внешней среде// Журнал микробиологии, эпизоотологии и иммунологии, 1997, №3, стрЛ 16 121.

12. Гребенникова Т.В., Забережный А.Д., Непоклонов Е.А., Разработка тест-система на основе ПЦР для определения и дифференциации вирусов лейкоза птиц различных подтипов// Меж.юбилейная науч-прак конференция, СПб, 2004,стр. 66-68.

13. Турина С.В., Соколова И.П. Микробиология //СПб,2000 г.

14. Гусев А.А, Русалеев B.C., Дрыгин В.В., ПрунтоваО.В. и др.// Методические указания по определению антител к бактериям Pasterella multocida в сыворотках крови птиц иммуноферментным методом.

15. Дрыгин В.В., Гу сев А.А., Панин А.Н. Иммуноферментный анализ в диагностике инфекционных заболеваний животных, М.,2006.

16. Дрыгин В.В., Гусев А.А., Панин А.Н., Методические рекомендации по проведению работ в диагностических лабораториях, использующих иммуноферментный метод. Общие положения, М.,2003.

17. Денисова Е.А. Разработка метода дифференциального определения вегетативных и L-форм бактерий в объектах ветеринарно-санитарного контроля и окружающей среды с использованием ДНК-гибридизации// Труды ВНИИВСГЭ, 2001, томЗ,стр. 110.

18. Забережный А.Д., Алипер Т.И. Применение молекулярных методов в диагностике и профилактике вирусных болезней свиней// Ветеринарная жизнь, 2004,№22,стр. 6

19. Калмыкова М.С., Калмыков М.В., Венчакова А.А. Организация молекулярной диагностики инфекционных болезней животных и птиц в ветеринарных лабораториях РФ// Материалы Всероссийской науч-прак конф. «Молекулярная диагноста», М.: 2007, т.2,стр 100.

20. Куликовский А.В., Павлова И.Б., Айвазян М.А., Дроздова Т.Д. Поведение микробной популяции во внешней среде // Вестник сельскохозяйственной науки.-1990.-№12.-стр. 101-104.

21. Лопухов Л.В., Эйдельштейн Н.В. Клин, микробиология и антимикробная химиотерапия// 2000,стр.96—106.

22. Махмутова Л.Р., Макаров М.М., Ornithobacterium rhinotracheale: бактериология, патология, эпизоотология// Ветеринарная патология, 2006, №4,стр. 3.

23. Маккреди Б.Д., Чимера Д.А. Обнаружение и идентификация патогенных микроорганизмов молекулярными методами // В кн. Молекулярная клиническая диагностика, М., изд. «Мир», 1999, стр. 496-506.

24. Маниатис Т., Фритч Э., Сэмбрук Дж. Методы генетической инженерии. Молекулярное клонирование // М., изд. «Мир»., 1994, стр.159-172.

25. Момыналиев К.Т., Говорун В.М. Клиническая лабораторная диагностика// 2000,стр. 25—33.

26. Новикова О.Б., Микрофлора трахеи птиц// Мат. Международной юб.науч-практ.конференции, СПб,2004, стр.118.

27. Павлова И.Б. Морфология колоний бактерий в процессе развития в среде обитания (электронно-микроскопические исследования)// Тезисы доклада МГАВМиБ им. К.И.Скрябина.-М.,-1999.

28. Павлова И.Б, Куликовский А.В. Электронно-микроскопические исследования бактерий в колониях. Гетероморфный рост бактерий в процессе естественного развития популяции// М., 1990.

29. Павлова И.Б, Ленченко Е.М., Банникова Д.А. Атлас морфологии популяции патогенных бактерий// М.: Колос, 2007.

30. Патрушев Л. И. Искусственные генетические системы // М.: Наука, 2005 — В 2 т.

31. Перадзе Т.В., Халонен П. Иммунологическая диагностика вирусных инфекций.// М., Медицина, 1985.

32. Платонов А.Е., Г.А.Шипулин, Е.Н.Тютюнник, О.В.Платонова Генодиагностика бактериальных менингитов и генотипирование их возбудителей.// Пособие для врачей, ФГУН «Центральный НИИ Эпидемиологии» Роспотребнадзора, г. Москва, 2001 г.

33. Поздеев O.K. под ред. Покровского В.И., «Медицинская микробиология»// Москва, 2002 г.

34. Поляк М.С., Сухаревич В.И., Сухаревич М.Э. Питательные среды для медицинской микробиологии// 2002.

35. Прозоркина Н.В., Рубашкина Л.А., «Основы микробиологии, вирусологии и иммунологии»// Ростов-на-Дону,-2002г.

36. Разорвина А.С., Молофеева Н.И., Курьянова Н.Х., Васильев Д.А. Тинкториальные и биологические свойства Ornithobacterium rhinotracheale, используемые для идентификации// Межд.научно-прак конфе., Ульяновск, 2008, том 4.,стр". 86-88.

37. Рубченков П.Н., Хафизов Д.Ф. К вопросу отбора и подготовки проб бактериальных аэрозолей для электронно-микроскопического ананлиза.//Труды ВНИИВСГЭ.-М.,-1989- стр.93-95

38. Светличкин О.В., Белоусов В.И., Кононенко А.Б., Светличкин

39. B.В. Индикация и идентификация иерсиний в объектах ветеринарно-санитарного контроля// В сб. докладов Международной конференции молодых ученых «Научные основы производства ветенинарных биологических препаратов», Щелково,2001, стр. 191197.

40. Сыбатуллов С.С., Прунтова О.В., Ручнова О.И., Хрульнова

41. C.А. Получение, определение активности и специфичности компонентов для диагностики возбудителя Ornithobacterium rhinotracheale в серологических реакциях// Ветеринарная патология, 2007, №4, стр.38.

42. Светличкин В.В. Дифференциальное определение вегетативных и L-форм бактерий в объектах ветеринарно-санитарного контроля с использованием генных зондов// Ветеринария,2007, №7, стр.45-47.

43. Таланов Г.А., Светличкин В.В., Долгов В.А., Лавина С.А., Григанова Н.В. Разработка седств и тест-систем ветеринарной биотехнологии// Достижения науки и техники АПК,2001, стр. 64-68.

44. Татарчук О.П Орнитобактериоз и борьба с ним в бройлерном птицеводстве// Российский вет.журнал. Сельскохозяйственные животные, 2007.-№ 4.-С 37-38.

45. Херрингтон С., Макги Дж. Гинцбург A.JI. Микробиология, иммунология и вирусология// 1999, стр.22—26.

46. Организация лаборатории и правила работы в лабораториях, использующих метод полимеразной цепной реакции: Метод, рекомендации МЗ РФ/Разработчик ЦНИИ Э и М МЗ РФ; сост. Т.А. Бектимиров, В.В.Блоха. —М., 1995.

47. Методические указания по диагностике заболеваний сельскохозяйственных животных иммуноферментным методом, под редакцией А.А.Гусева и А.Н. Панина, Владимир, 1998.

48. Медицинская микробиология Под ред. В.И.Покровского, О.К.Поздеева. // М.: ГЭОТАР Медицина, 1998. 1200 стр.

49. Методические рекомендации по проведению работ в диагностических лабораториях, использующих метод полимеразной цепной реакции. / Разработчики: Покровский В.В. Федоров H.JI. Шипулин Г.А. и др. // ГКСЭН РФ, Москва 1995.

50. Практическое руководство по биологической безопасности в лабораторных условиях. // Женева, ВОЗ, 1994.

51. Наставление по применению тест-системы «МИК-КОМ» для диагностики микоплазмоза методом полимеразной цепной реакции, утв. Заместителем руководителя депар.ветеринарии, 1998г.

52. Amonsin A., Wellenhan L., Li L-L., Vandamme P., Lindeman, C.Edman, M.Robinson, R.& Kapur, V. Molecular epidemiology of Ornithobacterium rhinotracheale// Journal of Clinical Microbiology, 1997, 35, p. 2894-2898.

53. Anonymous Ornithobacterium rhinotracheale in ostrich// Khangela Quarterly Report on Animal Disease Surveillance, South Africa, 1995, January-March, p.ll.

54. Back A., Rajashekara G., Jeremiah R., Halvorson D and Nagaraja K. Tissue distribution of Ornithobacterium rhinotracheale in experimentally infected turkeys// The Veterinary Record, 1998, p. 143.

55. Back A., Gireesh R., Halvorson D. & Nagaraja K. Experimentalstudies of Ornithobacterium rhinotracheale (ORT) infection//th

56. Proceedings of the 46 Western Poultry Disease Conference, Sacramento, 1996, p.7-8.

57. Blackall P.J., and Yamamoto Whole-cell protein profiles of Haemopilus paragallinarum as detected by polyacrylamide gel electrophoresis// Avian Dis., 1989, 33:168-173.

58. Bragg R., Greyling J & Verschoor J. Isolation and identification of NAD-infection bacteria from chikens with symptoms of infectious coryza// Avian pathology, 1997, 26, p. 595-606.

59. Buys S. Ornithobacterium rhinotracheale an emerging disease in South Africa// Aerosols, Newsletter of the World Veterinary Poultry Association, 1996, p.8-10.

60. Coura R, Prolla JC, Meurer L, Ashton-Prolla P. An alternative protocol for DNA extraction from formalin fixed and paraffin wax embedded tissue. // J. Clin. Pathol., 2005, Aug; v58, N8, p 894-895.

61. De Rosa M., R.Droual, R.P.Chin, H.P. Shivaprasad and R.L. Walker. Ornithobacterium rhinotracheale infection in turkey breeders// Avian Dis., 1996, 40:865-874.

62. Devriese L., HommezJ., Vandamme P., Kersters, К & Haesebrouck F. In vitro antibiotic sensitivity of Ornithobacterium rhinotracheale strains from poultry and wild birds// Veterinary Records, 1995, 137, p.435-436.

63. Franz G., Hein R., Bricker J., Wall P., Odor E., Salem M &

64. SampleT B. Experimental studies in broilers with a Delmarvat h

65. Ornithobacterium rhinotracheale isolates// In Proceedings of the 46 Western Poultry Disease Conference, Sacremento, 1997, pp.46-48.

66. Charlton B.R., Channing-Santiago S.E., Bickford A.A., et al. Preliminary characterization of a pleomorphic gram-negative rod associated with avian respiratory disease// J. Vet. Diagn. Invest., 1993, 5:47-51.

67. Chin R.P., Droual R. Ornithobacterium rhinotracheale infection// In: Diseases of Poultry, 1997, pp. 1012-1013.

68. Ghosh S., Jaraczewski J. W., Klobutcher L. A., Jahn C. L. Characterization of transcription, translation, and poly (A)addition sitesin the gene-sized macronuclear DNA molecules ofEuplotes//Nucl. Acids Res. 1994, 22 : 214—221.

69. Guatelli J.C., Whitfield K.M., Kwoh D.Y., et al. Isothermal, in vitro amplification of nucleic acids by multienzyme reaction modeled after retroviral replication// Proc. Natl. Acad. Sci., 1990,V.87.,p. 18741878.

70. Van Empel P., van den Bosch H., Goovaerts D. and Storm P. Experimental infection in turkeys and chickens with Ornithobacterium rhinotracheale II Avian Diseases,40,1996.

71. Van Empel P., van den Bosch H., Loeffen P. and Storm P. Identification and serotyping of Ornithobacterium rhinotracheale //Journal of Clinical Microbiology, 1997, 35.

72. Van Empel P., van den Bosch H. Vaccination of chickens against Ornithobacterium rhinotracheale infection// Avian Diseases, 1998, p.42.

73. Van Empel P., Vrijenhoek M., Goovaerts D. van den Bosch H. Immuno-histochemical and serological investigation о experimental Ornithobacterium rhinotracheale infection in chikens// Avian Pathology, 1999, p. 28.

74. Van Empel P. and Hafez H. Ornithobacterium rhinotracheale: a review// Avian Pathology, 1999, p.28.

75. Divriese L.A., J. Hommez, P.Vandamme, K.Kersters and F.Haesebrouck in vitro antibiotic sensivity of Ornithobacterium rhinotracheale strains from poultry and wild birds// Vet.rec. 1995, 137 .•435-436.

76. Hafez H. Current status on the role of Ornithobacterium rhinotracheale (ORT) in respiratory disease complexes in poultry// Arch. Geflugelk, 1996, p.60.

77. Hafez H., and W.Beyer Preliminary investigation on Ornithobacterium rhinotracheale «ORT» isolates using PCR-fingerprintings.// In: Proc.ll th Internation Congress of the World Veterinary Poultry Association, Budapest, Hungary. 1997, p.51.

78. Hafez H., and M.Hess Modern Techniques in diagnosis of poultry diseases: review//Arch. Geflue gelkd. 1999, 63:237-245.

79. Hafez H., and R.Sting. Investigation on different Ornithobacterium rhinotracheale «ORT» isolates // Avian Dis.,1999, 43:1-7.

80. Hafez H.M. Respiratory diseases in turkey: Serological Surveillance for Antibodies Against Ornithobacterium rhinotracheale „ (ORT) and Turkey Rhinotracheatis ( TRT) //Proceeding of the XX Worlds Poultry Congress, 1996.

81. Hafez H.M., R. Sting. Serological surveillance on Ornithobacterium rhinotracheale "ORT" in broiler breeder flocks// In Proceedings of the XI th Internation congress of the World Veterinary Poultry Association, Budapest, 1997, p.331.

82. Hafez H.M., R. Sting Serological surveillance on

83. Ornithobacterium rhinotracheale in poultry flocks using self-madet h

84. ELISA// Proceeding of the 45 Western Poultry Disease Conference, 1996.

85. Hemmer W. Foods Derived from Genetically Modified Organisms and Detection Methods. // Biosafety Research and Assessment of Technology Impacts of the Swiss Priority Program Biotechnology -Report, 1997, N2, v97, p 61.

86. Higuchi R., Dollinger G., Walsh P.S., and Griffith R. Simultaneous amplification and detection of specific DNA sequences. // Biotechnology, 1992, N10, p 413-417.

87. Hinz K.-H. & Hafez H.M., The early history of Ornithobacterium rhinotracheale (ORT)// Archiv fur Geflugelkunde, 1997,61, p.95-96.

88. Hinz K.-H., C. Blome, M. Ryll Acute exudative pneumonia and airsacculitis associated with Ornithobacterium rhinotracheale in turkey// Vet. Rec., 1994, 135, p. 233-234.

89. Holland P., Abramson R.D., Watson R. and Gelfand D.H. Detection of specific polymerase chain reaction products by utilizing the 5'-3' exonuclease activity of thermos acuaticus// Proc.Natl.Acad.Sci. USA, 1991, Vol.88, p.7276-7280.

90. Hunter P.R., and M.A.Gaston Numerical index of the discriminatory ability of typing systems: an application of Simpsons index of diversity// J.Clin Microbiol.,1998, 26:2465-2466.

91. Hung A., and A.Alvarado Characterization and serotyping. of Ornithobacterium rhinotracheale isolates associated with respiratory disease in domestic poultry in Peru// Abstract: 12 th World Poultry Congress, Montreal, Canada.p.2000.

92. Kapur V., W.M. Sischo, R.S. Greer, T.S. Whittam and J.M. Mussers Molecular population genetic analysis of Staphylococcus aureus recovered from cows// J.Clin.Microbiol., 1995,33:376-380.

93. Koziel M.G. Field performance of elite transgenic maize plants expressing an insecticidal protein derived from Bacillus thuringiensis. //BIO/Technology, 1993, vll,p 194-200.

94. Laemmli U.K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of the bacteriophage// Nature (Lond.), 1970, T4, 227:680-685.

95. Leorat J., J.Dudouyt, C.Dore, and Y.Gardi. ORT: une nouvelle raison de tousser// Filieres Avicoles, 1994, 559:69-70.

96. Leonard P. Inrage analysis for all// Nature, 1990, 347:103-104.

97. Lie Y. S., and Petropoulos C. J. Advances in quantitative PCR technology: 5' nuclease assays// Current Opinion Biotechnol, 1998, N9, p 43-48.

98. Lipski J.R. Molecular epidemiology and its clinical application. JAMA, 1993,270:1363-1364.

99. Lipski J.R., and G.M. Weinstock Short, interspersed repetitive DNA sequences in prokaryotic genomes// J.Bacteriol., 1992, 174:42254529.

100. Maiden M.C., Bygraves J.A., Feil E., et al. Multilocus sequence typing: a portable approach to the "identification of clones within populations of pathogenic microorganisms // Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 1998. - Vol.95. - P.3140-3145.

101. Pages. A., A.Foix, R.March, and C.Artigas Estudio bacretiologico de una agente asociado a problemas respiratorios en aves de produccino Ornithobacterium rhinotracheale!I Med.Vet., 1995, 12:585-588.

102. Relman D.A. Universal bacterial 16S rDNA amplification and sequencing// Diagnostic MOLECULAR MICROBIOLOGY., 1993, p. 489-495.

103. Ryll M., K.-H. Hinz, H.Salisch and W.Kruse Pathogenicity of Ornithobacterium rhinotracheale for turkey poults under experimental condition. Vet.rec., 1996,139:19.

104. Selander R.K., D.A.Caugant, H.Ochman, J.M.Musser, M.N.Gilmour and T.S.Whittam. Methods of multilocus enzyme electroforesis for bacterial population genetics and systematics// Appl.environ.microbiol., 1986, 51:873-884.

105. Selander R.K and J.M. Musser. Population genetics of bacterial pathogenesis// Molecular basis of bacterial pathogenesis, 1990, p. 11-36.

106. Schiffner L.A, Bajda E. J, Prinz M., Sebestyen J.,

107. Shaler R., Caragine T.A. Optimization of a simple, automatable extraction method to recover sufficient DNA from low copy number DNA samples for generation of short tandem repeat profiles. // Croat Med J., 2005, Aug, v 46, N 4, p 578-586.

108. Spratt B.G., Maiden M.C. Bacterial population genetics, evolution and epidemiology // Phil. Trans. R. Soc. Lond. B. 1999. -Vol.354. - P.701-710.

109. Susan W.J., Dobson M.E., Francesconi S.C., et al.: DNA assays for detection, identification, and individualization of select agent microorganisms// Croat Med. J., 2005, 46:522-529.

110. Swaminathan B. and G.M. Matar. Molecular typing methods/ Diagnostic molecular microbiology:principls and applications, 1993, p. 26-50.

111. Travers A.F. Concomitant Ornithobacterium rhinotracheale and New-castle disease infection in broilers in South Africa// Avian dis., 1996,40:488-490.

112. Van Empel P.H., Van Den Bosch, P.Loeffen, and P.Storm. Identefication and serotyping of Ornithobacterium rhinotracheale// J. CLIN. MICROBIOL., 1997, 35:418-421.

113. Van Beek, P.P.van Empel, H. van den Bosch, P.Storm, J.Bongers, and J. du Preez. Ademhaligs problemen, groeivertraging en gewrichtsontsteking bij kalkoenen en Vleeskuikens door een

114. Pasteurella-achtige bacterie Ornithobacteriumrhinotracheale "Taxon 28"// Tijdschr.Diergeneeakd, 1994,119:99-101.

115. Versalovic J., T. Koeuth and J.R. Lupski Disribution of repectitive DNA sequences in eubacteria and application to fingerprinting of bacterial genomes// Nucleic acids rec., 1991, 19:6823683 1.

116. Woods C.R., J. Versalovic, T. Koeuth, and J.R. Lipski. Wholecell repetitive element sequence-based polymerase chain reaction allows rapid assessment of clonal relationships of bacterial isolates// J. clin. Microbial. 1993, 31:1927-1931.

117. Van Empel P. and Hafez H.M. Ornithobacterium rhinotracheale: a review// Avian pathology, 1999, 28:217-227.

118. Instructions "Test for detection of Ornithobacterium rhinotracheale by enzymatic gene amplification (PCR TEST)", ADIAVET ORT,2006.