Биологическая активность антимикробных пептидов из яда паука Lachesana tarabaevi на модели инфекции Chlamydia trachomatis тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.04, кандидат наук ПОЛИНА НАДЕЖДА ФЕДОРОВНА

• ПОЛИНА НАДЕЖДА ФЕДОРОВНА
• кандидат наук
• 2015

Оглавление диссертации кандидат наук ПОЛИНА НАДЕЖДА ФЕДОРОВНА

ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Антимикробные пептиды (АМП)

1.1.1. Классификация АМП

1.1.2. Механизм действия АМП

1.1.3. Механизмы возникновения резистентности микроорганизмов к АМП

1.1.4. Терапевтическое применение АМП

1.1.5. АМП из яда паука Lachesana tarabaevi

1.1.5.1. Латарцины

1.1.5.2. Цито-инсектотоксины

1.2. Системы регуляции экспрессии генов

1.2.1. Молекулярные механизмы тетрациклин-зависимой системы регуляции экспрессии

1.2.2. Фармакология доксициклина

1.3. Особенности жизненного цикла Chlamydia trachomatis

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Материалы

2.1.1. Штаммы E. coli

2.1.2. Плазмидные векторы

2.1.3. Реактивы и антибактериальные препараты

2.2. Методы

2.2.1. Реакция рестрикции

2.2.2. Полимеразная цепная реакция (ПЦР)

2.2.3. Выделение фрагментов ДНК из агарозного геля

2.2.4. Реакция лигирования

2.2.5. Конструирование векторов

2.2.6. Культивирование клеток E. coli

2.2.7. Трансформация клеток E.coli плазмидной ДНК

2.2.8. Выделение плазмидной ДНК методом кипячения

2.2.9. Выделение плазмидной ДНК методом щелочного лизиса

2.2.10. Определение нуклеотидной последовательности фрагментов ДНК

2.2.11. Препаративное выделение плазмидной ДНК

2.2.12. Химический синтез пептидов. Определение концентрации полипептидов. УФ-спектрофотометрия

2.2.13. Тестирование антимикробной активности пептидов на E.coli

2.2.14. Культивирование линий клеток млекопитающих

2.2.15. Культивирование штамма C. trachomatis

2.2.16. Определение антихламидийной активности пептидов из яда паука Lachesana tarabaevi

2.2.17. Определение минимальной ингибирующей концентрации (МИК) доксициклина на C. trachomatis

2.2.18. Трансфекция клеток линии HEK293

2.2.19. Заражение линии клеток HEK293 C. trachomatis

2.2.20. Выявление включений C. trachomatis

2.2.21. Конфокальная микроскопия

2.2.22. Определение титра C. trachomatis

2.2.23. Анализ жизнеспособности клеток

2.2.24. Выделение суммарной РНК из линии клеток HEK293, зараженной C. trachomatis

2.2.25. Реакция обратной транскрипции

2.2.26. Транскрипционный анализ

2.2.27. Протеомный анализ

2.2.28. Дополнительное программное обеспечение

2.2.29. Статистика

3. РЕЗУЛЬТАТЫ

3.1. Антимикробные пептиды из яда паука Lachesana tarabaevi

3.2. Антибактериальная активность пептидов из яда паука Lachesana tarabaevi на E.

coli in vitro

3.3. Антимикробный эффект латарцинов и цито-инсектотоксина CITla на C. trachomatis

3.4. Получение плазмидных конструкций, экспрессирующих гены латарцинов и цито-инсектотоксина CITla из яда паука Lachesana tarabaevi

3.5. Регуляция экспрессии генов, кодирующих латарцины и цито-инсектотоксин CITla, в клетках млекопитающих

3.6. Антихламидийная активность латарцинов и цито-инсектотоксина CITla из яда пауков при экспрессии кодирующих их генов в клетках линии HEK293

3.7. Транскриптомный анализ клеток линии HEK293 при экспрессии гена цито-инсектотоксина citla

3.8. Протеомный анализ линии клеток HEK293 при экспрессии гена, кодирующего цито-инсектотоксин CITla

3.9. Влияние экспрессии гена цито-инсектотоксина citla на ингибирование инфекции C. trachomatis на разных фазах жизненного цикла

4. ОБСУЖДЕНИЕ

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

Список сокращений

Список литературы

ВВЕДЕНИЕ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Биологическая активность антимикробных пептидов из яда паука Lachesana tarabaevi на модели инфекции Chlamydia trachomatis»

Актуальность темы и степень ее разработанности

В настоящее время повсеместно наблюдается рост устойчивых к действию антибиотиков возбудителей инфекционных заболеваний. Возникновение таких микроорганизмов, наряду с широкоим и неправильным использованием антибиотиков, приводит к снижению эффективности лечения социально значимых инфекционных заболеваний. В этой связи актуальной задачей является поиск новых альтернативных подходов к лечению инфекционных заболеваний. В качестве нового поколения лекарственных средств против инфекционных заболеваний могут выступать антимикробные пептиды (АМП).

АМП являются основными компонентами системы врожденного иммунитета и представляют собой крайне разнообразную группу соединений. За последние годы изучено большое количество АМП, охарактеризованы их свойства и функции. На данный момент описано более 2000 АМП (aps.unmc.edu/AP/main.php), обнаруженных у самых разнообразных организмов. Так, АМП были выделены из растений, грибов, животных, включая человека (Tossi & а1, 2000). Они обладают широким спектром действия и проявляют свою активность по отношению как к грам-отрицательным, так и к грам-положительным микроорганизмам. Также в литературе были описаны противовирусная и противогрибковая активности АМП.

По сравнению с антибиотиками АМП обладают рядом преимуществ, а именно:

- действием в микромолярных концентрациях,

- более широким спектром бактерицидной активности,

- низкой вероятностью возникновения резистентности к ним со стороны возбудителей инфекции.

Высокая антимикробная активность пептидов обусловлена механизмом их действия. При взаимодействии АМП с клеткой-мишенью происходит образование поры в мембране клетки, что, в конечном счете, приводит к нарушению ее целостности и последующему лизису клетки. Такая низкая специфичность действия делает возникновение резистентности к АМП маловероятным событием. Исходя из этого, АМП являются крайне перспективными агентами в борьбе с возбудителями инфекционных заболеваний.

Известно, что АМП могут оказывать цитотоксическое действие на клетки высших эукариот, что ограничивает использование АМП в ветеринарной и медицинской практике. Одним из решений данной проблемы является исследование антибактериального действия пептидов при экспрессии кодирующих их генов в инфицированной клетке. Уменьшения цитотоксического эффекта, вероятно, можно достичь благодаря использованию системы регулирования экспрессии генов, кодирующих эти пептиды.

Среди всего многообразия АМП особое внимание привлекают пептиды из ядов членистоногих. В ходе длительной эволюции членистоногие выработали уникальные средства атаки и защиты, представляющие собой многокомпонентную смесь веществ, в состав которой входят цитолитические пептиды с антимикробной активностью. В нашей работе мы остановили свой выбор на новых уникальных классах пептидов из яда среднеазиатского паука Lachesana tarabaevi, а именно на латарцинах и цито-инсектотоксине CIT1a. Это линейные, катионные и амфифильные пептиды. В водном растворе они имеют неупорядоченную структуру, а в мембранном окружении склонны к образованию а-спиралей.

В качестве мишени для применения АМП из яда паука Lachesana tarabaevi нами были выбраны бактерии из рода Chlamydia. Хламидии остаются одними из самых распространенных бактериальных агентов, передающихся половым путем, в том числе и в России. Хламидии вызывают такие заболевания человека как воспаления органов малого таза, непроходимость маточных труб, патологии беременности и родов, снижение фертильности у мужчин. Более того, для Chlamydia характерно развитие персистенции в организме человека.

Цель и задачи работы

Целью настоящей работы являлось изучение действия антимикробных пептидов из яда среднеазиатского паука Lachesana tarabaevi на развитие инфекции, вызванной Chlamydia trachomatis. Были поставлены следующие задачи:

1. Определить антимикробную активность химически синтезированных латарцинов Ltc1, Ltc2, Ltc3a, Ltc4b, Ltc5 и цито-инсектотоксина CIT1a из яда паука L. tarabaevi в отношении C. trachomatis.

2. Исследовать эффективность подавления развития хламидийной инфекции при экспрессии генов, кодирующих латарцины и цито-инсектотоксин CIT1a в клетках линии HEK293.

3. Изучить ингибирующее действие цито-инсектотоксина CIT1a при экспрессии кодирующего его гена в клетках линии HEK293 на развитие C. trachomatis на разных фазах жизненного цикла патогена.

Научная новизна

В настоящей работе впервые исследована активность АМП из яда паука Lachesana tarabaevi в отношении инфекции Chlamydia trachomatis. Антихламидийная активность показана как для химически синтезированных АМП, так и при контролируемой экспрессии кодирующих их генов непосредственно в инфицированной клетке. Для этого получены плазмидные векторы, экспрессирующие гены, которые кодируют АМП из яда паука L. tarabaevi. Данные векторы

позволяют точно регулировать экспрессию исследуемых генов АМП, что явлется необходимым условием для снижения токсического эффекта продуктов экспрессии.

Впервые при экспрессии гена, кодирующего цито-инсектотоксин CIT1a из яда паука L. tarabaevi, показано изменение в транскрипции и трансляции генов, продукты которых вовлечены в функционирование актинового цитоскелета и аппарата Гольджи в клетках, экспрессирующих ген цито-инсектотоксина, что приводит к нарушению развития C. trachomatis. Также впервые изучено влияние экпрессии гена, кодирующего цито-инсектотоксина CIT1a из яда паука L. tarabaevi на различных стадиях жизненного цикла хламидий.

Теоретическая и практическая значимость

Данная работа демонстрирует возможность использования латарцинов и цито-инсектотоксина в качестве новых антихламидийных агентов, а именно при экспрессии кодирующих их генов в инфицированной клетке. Разработанная система регулируемой экспрессии генов позволяет избежать токсического эффекта на клетки эукариот. Данные, полученные при анализе транскриптома и протеома клеток, экспрессирующих ген цито-инсектотоксина CIT1a, позволяют более полно объяснить механизмы антихламидийного действия этого пептида.

Методология и методы исследования

В диссертации использованы современные бактериологические методы (культивирование клеток E. coli штамм DH5a и их трансформация, культивирование и определение титра C. trachomatis, определение МИК), генно-инженерные методы (выделение аналитических и препаративных количеств плазмидной ДНК, методы рестрикционного анализа, отбор рекомбинантных клонов и другие методы молекулярного клонирования), методы работы с линиями клеток млекопитающих (культивирование, трансфекция, анализ жизнеспососбности клеток), методы протеомного и транскриптомного анализов и биоинформатические методы.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту

1. Продемонстрирована антимикробная активность химически синтезированных латарцинов Ltc1, Ltc2, Ltc3a, Ltc4b, Ltc5 и цито-инсектотоксина CIT1a из яда паука Lachesana tarabaevi в отношении C. trachomatis.

2. Показано, что экспрессия генов, кодирующих латарцины и цито-инсектотоксин CIT1a, в клетках линии HEK293 вызывает подавление развития хламидийных включений. Эффективность подавления инфекции составляла 60-85 %.

3. Установлено, при индукции экспрессии гена, кодирующего цито-инсектотоксин CIT1a, наиболее эффективное подавление развития C. trachomatis в клетках линии HEK293 происходит на ранних стадиях инфекции, т.е. стадии образования незрелого включения.

Степень достоверности и апробация результатов

Для решения поставленных задач в работе использовались современные инструментальные методы. Обсуждение результатов проведено с учетом современных данных медицинской и биологической науки. Научные положения и выводы, изложенные в диссертации, обоснованы и подтверждены фактическим материалом.

Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на расширенном межлабораторном заседании Отдела молекулярной биологии и генетики ФГБУН НИИ ФХМ ФМБА России (Москва, 16 июня 2015 г.), а также в ходе ряда конференций: "Клеточные взаимоотношения патоген-хозяин" (Амстердам, Нидерланды, 2010), Международная научная конференция студентов, аспирантов и молодых учёных «Ломоносов-2012» (Москва, Россия, 2012), 1-ый Международный симпозиум по Ядам «ЯДЫ 2012» (Оксфорд, Великобритания, 2012), Постгеномные методы анализа в биологии, лабораторной и клинической медицине III международная научно-практическая конференция (Казань Россия, 2012).

Публикации

По теме диссертации опубликовано 9 работ, из которых 4 статьи в рецензируемых научных журналах и 4 публикации в трудах конференций.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 1.1. Антимикробные пептиды (АМП)

Антимикробные пептиды являются наиболее древними компонентами защитных систем организма. Впервые АМП были получены Hultmark с соавт. из гемолимфы шелкопряда Hyalophora cecropia (Hultmark et al., 1980). Эти пептиды, названные цекропинами P9A и P9B, были активны по отношению к Escherichia coli и другим грам-отрицательным бактериям. Аминокислотные последовательности двух пептидов имели высокую степень гомологии между собой, различаясь в содержании остатков метионина и глутаминовой кислоты.

Weiss с коллегами получили и исследовали антимикробные пептиды из полиморфонуклеарных лейкоцитов человека — бактерицидные пептиды, увеличивающие проницаемость мембраны (BPI). Пептиды были активны против Escherichia coli и Salmonella typhimurium(Weiss et al., 1978). В то же время были выделены из нейтрофилов и исследованы дефензины человека (HNP1,2,3) (Selsted et al., 1985). Zasloff описал семейство АМП, присутствующих в коже Xenopus laevis (Zasloff, 1987), им были подробно исследованы свойства магаинина и его антибактериальная активность.

Структура и функции различных АМП активно изучаются последние десятилетия. На сегодняшний день описано более 2000 АМП (aps.unmc.edu/AP/main.php). Пептиды выделены из самых разнообразных источников: бактерий, грибов, растений, позвоночных и беспозвоночных животных (da Costa et al., 2015, Tossi et al., 2000). Они имеют широкий спектр действия, активны как против грам-положительных, так и против грам-отрицательных бактерий, также действуют на вирусы и грибы (Yount and Yeaman, 2013). Помимо этого АМП обладают и иммуностимулирующей функцией, они усиливают фагоцитоз, способствуют накоплению клеток иммунной системы в местах воспаления (Brown and Hancock, 2006, Choi et al., 2012, Suarez-Carmona et al., 2015).

1.1.1. Классификация АМП

В основе различных классификаций АМП лежат физико-химические характеристики, такие как особенности структуры пептидов, механизм действия, источник происхождения и т.п. Остановимся подробнее на классификации, основанной на особенностях первичной и вторичной структуры пептидов.

Первую группу представляют анионные антимикробные пептиды. Для проявления их активности необходимо присутствие ионов цинка (Zn2), выступающих в роли кофактора. Это небольшие пептиды, их масса составляет 720-820 Да (Brogden et al., 1996). Структура анионных АМП имеет сходство со структурой пропептидов сериновых протеаз группы 1. Помимо

антимикробной активности, анионные АМП могут выполнять регуляторные функции в легочном метаболизме за счет регуляции по типу отрицательной обратной связи (Brogden et al., 1997). Механизм действия анионных АМП неизвестен. Предполагается, что образование комплекса с ионами Zn2+ (LaForce and Boose, 1984) помогает присоединиться к отрицательно-заряженной поверхности бактериальной клетки. Свою антимикробную активность данные пептиды проявляют как против грам-положительных, так и против грам-отрицательных бактерий. Так, анионные АМП, обнаруженные в легочном сурфактанте овец, были активны по отношению к Mannheimia haemolytica, Escherichia coli и Klebsiella pneumonia (Brogden, 1992). Представителями этой группы являются также максимин H5 из амфибий (Lai et al., 2002), дермцидин человека (Burian and Schittek, 2015, Schittek et al., 2001). Максимин содержит три остатка аспарагиновой кислоты и не содержит основных аминокислотных остатков (Lai et al., 2002). Дермцидин образуется в потовых железах человека, состоит из 47 аминокислотных остатков. Он так же, как и максимин, имеет отрицательный заряд при нейтральном значении pH (Burian and Schittek, 2015).

Следующую обширную и разнообразную группу составляют катионные АМП. Среди них можно выделить линейные катионные пептиды, формирующие а-спираль. Это наиболее хорошо изученная группа АМП. Она включает в себя пептиды, состоящие из 20-40 аминокислотных остатков (рисунок 1), не содержащие остатков цистеина. В водной среде они имеют неупорядоченную структуру, но в присутствии таких соединений, как додецилсульфат натрия, трифторэтанол (ТФЭ), фосфолипидные везикулы и липосомы, пептиды принимают конформацию a-спирали (Gennaro and Zanetti, 2000).

К этой группе относятся такие пептиды как цекропины, кателицидины, дермасептины, магаинины. Цекропины, выделенные из гемолимфы двукрылых насекомых, имеют основный N-концевой участок, отделенный от более гидрофобного C-терминального участка эластичной гибкой петлей (Hultmark et al., 1980, Pinheiro da Silva and Machado, 2012, Steiner et al., 1981). Они активны, главным образом, против грам-отрицательных бактерий, но, в некоторых случаях, наблюдается и действие против грам-положительных бактерий.

Мелиттин, полученный из пчелиного яда, состоит из 26 аминокислотных остатков. Его третичная структура представляет собой два спиральных участка, разделенных петлей, причем, в отличие от цекропина, N-концевой участок является более гидрофобным (Dempsey, 1990).

У млекопитающих пептидами, образующими a-спираль, являются представители семейства кателицидинов. Так, у человека присутствует только один представитель этого семейства, hCAP18/LL37. LL37 (его предшественником является катионный антимикробный пептид человека-18 кДа или hCAP-18) состоит из 37 аминокислотных остатков, в числе которых два лейцина (рисунок 1). Он вырабатывается нейтрофилами, а также эпителиальными

клетками органов дыхательной, пищеварительной и репродуктивной систем (Pinheiro da Silva and Machado, 2012, Vandamme et al2012, Wassing et al2015, Zanetti, 2005). LL37 проявляет антимикробную и антимикотическую активности.

Рисунок 1. Вторичные структуры основных представителей различных классов антимикробных пептидов.

А - ЬЬ-37, б - магаинин, в - индолицидин, г - а-дефензин человека 1 (ИЫР-1), д - 0-дефензин, е - тритрптицин. Красным цветом окрашены гидрофильные а.о., синим - гидрофобные а.о., желтым выделены остатки цистеина.

Следующая большая группа пептидов - это пептиды, образующие ß-складчатую структуру, стабилизированную одной или несколькими дисульфидными связями. Как правило, это пептиды размером от 16 до 40 аминокислотных остатков, и среди них можно выделить несколько подгрупп. К ним относятся a-, ß- и 0-дефензины (рисунок 1). Подобно кателецидинам, дефензины проявляют антибактериальную и антивирусную активности (Suarez-Carmona et al., 2015).

У человека a-дефензины присутствуют в нейтрофилах (human neutrophil peptide 1-4, human defensin 1-4), клетках Панета (в тонком кишечнике) и эпителиальных клетках урогенитального тракта женщин (human defensins 5,6) (Beisswenger and Bals, 2005, Kim, 2014, Pinheiro da Silva and Machado, 2012), в их составе 29-35 аминокислотных остатков. a-дефензины содержат 6 остатков цистеина, образующих три дисульфидные связи между следующими остатками цистеина: C1^C6, C2^C4 и C3^C5 (рисунок 2). В структуре ß-дефензинов также обнаружено три дисульфидных связи. Их положение в молекуле отличается от положения в a-дефензинах, что и образует основное различие между этими подгруппами. Дисульфидные связи образуются между C1^C5, C2^C4 и C3^C6 (Beisswenger and Bals, 2005). Длина ß-дефензинов составляет 34-47 аминокислотных остатков. ß-дефензины 1-4 (HBD1-4) обнаружены в

нейтрофилах и эпителиальных клетках. Они способствуют переходу гистамина в свободное состояние, образованию простагландина и также действуют как антимикробные агенты. 0 -дефензины обнаружены в лейкоцитах и костном мозге макаки-резус (Tang et al., 1999). У человека эти пептиды не вырабатываются из-за мутации в сигнальной последовательности, где образуется стоп-кодон (Kim, 2014, Nguyen et al., 2003). 0-дефензин - это циклический пептид, состоящий из 18 аминокислотных остатков и имеющий три дисульфидные связи. Антимикробные свойства этого пептида проявляются при микромолярных концентрациях (Tang et al, 1999).

Рисунок 2 Расположение дисульфидных связей в структуре дефензинов. А - а-дефензины, Б - Р-дефензины.

Другая группа пептидов - это пептиды, обогащенные определенными аминокислотами, такими как пролин, аргинин, триптофан. Они линейны и не содержат в своем составе остатков цистеина. К ним относятся индолицидин (рисунок 1), бактеницин, гистатин, тритрптицин (Nguyen et al., 2011). Индолицидин, выделенный из нейтрофилов быка, состоит из 13 аминокислотных остатков, 5 из которых - это триптофан и 3 - пролин. Его С-конец амидирован (Selsted et al., 1992). Тритрптицин впервые был обнаружен у свиней в нейтрофильных гранулах. Он также состоит из 13 аминокислотных остатков, 3 из которых -триптофан (чем и обусловлено его название) и 4 - аргинин, обеспечивающие положительный заряд молекулы (Lawyer et al., 1996). Он активен против грам-положительных, грам-отрицательных бактерий, а также против грибов. К числу триптофан-богатых пептидов относится также пуроиндолин, выделенный из эндосперма пшеницы (Blochet et al., 1993). Другим представителем этой группы является гистатин, гистидин-богатый пептид, секретируемый слюнными железами человека (da Costa et al., 2015, Tsai and Bobek, 1998). Из 25 аминокислотных остатков, 7 составляют остатки гистидина. Гистатин 5 наиболее активен против Candida ablicans. Большое содержание пролина (19 из 39 аминокислотных остатков) и аргинина (8 из 39) наблюдается в пептиде PR-39, выделенном из тонкого кишечника свиней. Этот пептид многофункционален: он является хемоаттрактантом нейтрофилов (Huang et al.,

1997), ингибирует активность протеасом (Gaczynska et al, 2003), а также способен вызывать подавление апоптоза (Nguyen et al., 2011, Ramanathan et al., 2004). Бактенецины, полученные из нейтрофилов быка, овцы, содержат около 45% пролина и 23% аргинина (Frank et al., 1990).

Основные характеристики антимикробных пептидов различных классов представлены в таблице 1.

Таблица 1.

Основные характеристики некоторых представителей АМП.

Название АМП Аминокислотная последовательность Организм Активность Заряд % гидрофобных аминокислотных остатков Место образования

Максимин ILGPVLGLVSDTLDDVLGIL амфибии грам+ -3 55 кожа

(Maximin H5) Bombina maxima

Дермцидин SSLLEKGLDGAKKAVGGLGKLGKDA человек грам+ -2 38 потовые железы

(human Dermcidin) VEDLESVGKGAVHDVKDVLDSV грам-грибы

Мелиттин GIGAVLKVLTTGLPALISWIKRKRQQ медоносная пчела грам+ 5 46 яд

(Melittin) Apis mellifera грам- грибы вирусы опухолевые клетки клетки млекопитающих

LL-37 LLGDFFRKSKEKIGKEFKRIVQRIKDF LRNLVPRTES человек грам+ грам-грибы вирусы клетки млекопитающих 6 35 нейтрофилы

Магаинин 2 GIGKFLHSAKKFGKAFVGEIMNS африканская грам+ 3 43 кожа

(Magainin 2) шпорцевая лягушка, Xenopus laevis грам-грибы опухолевые клетки

а-дефензин человека 1 (human alpha Defensin HNP-1 ACYCRIPACIAGERRYGTCIYQGRLW AFCC человек грам+ грам-грибы 3 53 нейтрофилы

human neutrophil вирусы

peptide-1, HNP1) опухолевые клетки

-дефензин человека 4(Human beta FELDRICGYGTARCRKKCRSQEYRIG RCPNTYACCLRKWDESLLNRTKP человек грам+ грам- 7 32 нейтрофилы, эпителиальные

defensin 4 HBD-4) клетки

-дефензин человека DHYNCVSSGGQCLYSACPIFTKIQGTC человек грам+ 4 36 нейтрофилы,

1 (Human beta YRGKAKCCK грам- эпителиальные

defensin 1 HBD-1) клетки

0-дефензин (Monkey RTD-1 rhesus theta-defensin-1) GFCRCLCRRGVCRCICTR макак-резус грам+ грам-вирусы грибы 5 55 лейкоциты

Индолицидин (Indolicidin) ILPWKWPWWPWRR нейтрофилы быка Bos taurus грам+ грам-грибы вирусы клетки млекопитающих 3 53 нейтрофилы

Бактеницин (Bactenicin 5) RFRPPIRRPPIRPPFYPPFRPPIRPPIFPPI RPPFRPPLGPFP нейтрофилы быка Bos taurus грам- 9 27 нейтрофилы

Гистатин (Histatin 5) DSHAKRHHGYKRKFHEKHHSHRGY человек грам+ грам-грибы 5 8 слюна

Тритрптицин (Tritrpticin) VRRFPWWWPFLRR синтетический, производный кателецидина свиньи грам+ грам-грибы клетки млекопитающих 4 53 нейтрофилы

PR-39 RRRPRPPYLPRPRPPPFFPPRLPPRIPPG FPPRFPPRFP свинья грам+ грам- опухолевые клетки 10 20 эпителий тонкого кишечника

1.1.2. Механизм действия АМП

На сегодняшний день считается, что нет единого для всех АМП механизма, объясняющего их действие на про- или эукариотическую клетку. В настоящий момент существует несколько моделей, демонстрирующих возможные варианты взаимодействия пептидов с клетками.

Контакт пептида с клеткой начинается с электростатического взаимодействия пептида и отрицательно заряженной мембраной клетки. В случае грам-отрицательных бактерий, молекуле пептида необходимо преодолеть дополнительную наружную мембрану, несущую отрицательный заряд, обусловленный наличием липополисахаридов в ее составе. А в случае грам-положительных бактерий, на пути к цитоплазматической мембране барьером служит клеточная стенка, состоящая из тейхоевых и липотейхоевых кислот, также имеющих отрицательный заряд. Положительно заряженные пептиды имеют высокое сродство к

липополисахаридам (ЛПС) внешней мембраны. Это сродство выше, чем к ионам магния (Mg )

2+

и кальция

(Ca ) (Hancock and Chapple, 1999), поэтому в результате взаимодействия АМП с мембраной из последней происходит вытеснение двухвалентных ионов, что ведет к нарушению целостности наружной мембраны. Далее, достигнув цитоплазматической мембраны, пептиды при невысоком молярном соотношении пептид/липид, за счет электростатических взаимодействий выравниваются параллельно поверхности мембраны (Yang et al., 2001). Как только это соотношение возрастает, они начинают ориентироваться перпендикулярно бислою мембраны. При высоком молярном соотношении пептид/липид, молекулы пептида ориентируются перпендикулярно и встраиваются в мембрану. Причем критическая концентрация, необходимая для проникновения, различна для разных пептидов, а также зависит от типа липидов, входящих в мембрану (Yount and Yeaman, 2005). Дальнейшее развитие событий может происходить несколькими путями. Существует три модели, объясняющих, каким образом происходит разрушение мембраны - это модель «ковра», модель тороидальных пор и модель «доска-бочка» (da Costa et al, 2015) (рисунок 3).

Согласно модели «доска-бочка» (рисунок 3Б), а-спирали пептида формируют трансмембранную пору путем образования узелков с люменом так, что гидрофобная поверхность пептида взаимодействует с гидрофобными липидами бислоя, а гидрофильная -образует внутреннюю часть поры (da Costa et al, 2015, Nguyen et al, 2011, Yang et al, 2001). При этом пору можно сравнить с бочонком, а молекулы пептида с досками в бочонке. Такой механизм действия обнаружен у аламетицина, при действии которого на клетку пору

формируют от 3 до 11 молекул пептида (Не & а/., 1995, Брааг & а/., 2004). Внутренний и внешний диаметры поры составляют ~1.8 нм и ~4.0 нм, соответственно.

А Б В

Рисунок 3. Различные механизмы действия АМП.

А — модель тороидальных пор; Б — модель «доска-бочка»; В — модель «ковра». Гидрофильные участки выделены красным, гидрофобные — синим. Адаптировано из (Jenssen et al, 2006).

В модели «ковра» (рисунок 3В) пептиды аккумулируются на поверхности бислоя (da Costa et al, 2015, Nguyen et al, 2011, Shai, 1999). Они располагаются параллельно бислою мембраны за счет электростатических взаимодействий с отрицательно заряженной поверхностью мембраны. Молекулы пептида выстилаются подобно ковру так, что гидрофильная составляющая пептида взаимодействует с гидрофильными участками липидов. Это, в свою очередь, при высокой концентрации пептида, вызывает изменение ориентации гидрофильной и гидрофобной частей липидного бислоя относительно друг друга. В конечном счете, происходит нарушение кривизны бислоя и разрушение мембраны. Таким образом действуют, например, овиспирин (Brogden, 2005), магаинин, дермасептин, цекропин.

Согласно модели тороидальных пор (рисунок 3А), в образовании поры участвуют как молекулы пептида, так и липиды мембраны. Пептид, встраиваясь в мембрану, вызывает

искривление бислоя так, что полярная часть пептида и полярные части липидов, взаимодействуя, образуют пору (da Costa et al., 2015, Nguyen et al., 2011, Yamaguchi et al., 2002). В этой модели пептиды всегда связаны с липидами бислоя в отличие от модели «доска-бочка» (Yang et al., 2001). По механизму образования тороидальных пор действуют протегрин, мелиттин, магаинин (Matsuzaki et al., 1996, Yamaguchi et al., 2002, Yang et al., 2001). Размеры пор, образованных согласно этой модели, больше размеров пор, формирующихся по модели «доска-бочка». Внутренний диаметр поры, образованной магаинином, составляет от 3 до 5 нм, внешний - от 7 до 8 нм. В ее образовании участвуют от 4 до 7 молекул пептида и около 90 липидных молекул (Matsuzaki et al., 1998, Yang et al., 2001).

Большинство пептидов действуют по описанным выше механизмам. Но известны случаи, когда пептиды проникают через мембрану, не вызывая ее лизиса. Их действие направлено на различные внутриклеточные мишени (рисунок 4), что приводит к ингибированию синтеза клеточной стенки бактерии, подавлению биосинтеза нуклеиновых кислот и белков, либо ингибированию активности ферментов (Nguyen et al., 2011).

Также мишенями для АМП могут служить аутолизин бактерий и фосфолипазы эукариот, которые активируются ими. В присутствии тейхоевых и липотейхоевых кислот аутолизин находится в неактивном состоянии. При этом у Staphylococcus simulans аутолизин реактивируется при добавлении пептида Pep5 (Bierbaum and Sahl, 1987). Секретируемая фосфолипаза А2 также активируется в присутствии магаинина 2, индолицидина (Zhao and Kinnunen, 2003).

Другой АМП, буфорин, проникает через цитоплазматическую мембрану в клетку и аккумулируется в цитоплазме (Park et al., 2000). Затем происходит его связывание с нуклеиновыми кислотами, что приводит к гибели клетки (Park et al., 1998).

Пролин-богатый пептид PR-39 вызывает филаментацию Salmonella enterica серовара Typhimurium (S. typhimurium), а индолицидин приводит к филаментации E. coli (Shi et al., 1996, Subbalakshmi and Sitaram, 1998). Это может происходить по нескольким причинам: либо из-за нарушения репликации ДНК, либо из-за подавления активности ферментов, участвующих в образовании оболочки клетки. PR-39 блокирует синтез белка, приводит к деградации белков, необходимых для репликации ДНК (Boman et al., 1993). Индолицидин подавляет синтез ДНК и РНК (Subbalakshmi and Sitaram, 1998).

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук ПОЛИНА НАДЕЖДА ФЕДОРОВНА, 2015 год

Список литературы

1. Abachin, E., Poyart, C., Pellegrini, E., Milohanic, E., Fiedler, F., Berche, P., and Trieu-Cuot, P. Formation of d-alanyl-lipoteichoic acid is required for adhesion and virulence of Listeria monocytogenes // Mol Microbiol. 2002. Vol. 43. № 1. P. 1-14.

2. Abdelrahman, Y. M. and Belland, R. J. The chlamydial developmental cycle // FEMS Microbiol Rev. 2005. Vol. 29. № 5. P. 949-959.

3. Abromaitis, S. and Stephens, R. S. Attachment and entry of Chlamydia have distinct requirements for host protein disulfide isomerase // PLoS Pathog. 2009. Vol. 5. № 4. e1000357.

4. Agwuh, K. N. and MacGowan, A. Pharmacokinetics and pharmacodynamics of the tetracyclines including glycylcyclines // J Antimicrob Chemother. 2006. Vol. 58. № 2. P. 256-265.

5. Auricchio, A., Rivera, V. M., Clackson, T., O'Connor, E. E., Maguire, A. M., Tolentino, M. J., Bennett, J., and Wilson, J. M. Pharmacological regulation of protein expression from adeno-associated viral vectors in the eye // Mol Ther. 2002. Vol. 6. № 2. P. 238-242.

6. Bastidas, R. J., Elwell, C. A., Engel, J. N., and Valdivia, R. H. Chlamydial intracellular survival strategies // Cold Spring Harb Perspect Med. 2013. Vol. 3. № 5. P. a010256.

7. Beisswenger, C. and Bals, R. Functions of antimicrobial peptides in host defense and immunity // Curr Protein Pept Sci. 2005. Vol. 6. № 3. P. 255-264.

8. Bellefroid, E. J., Poncelet, D. A., Lecocq, P. J., Revelant, O., and Martial, J. A. The evolutionarily conserved kruppel-associated box domain defines a subfamily of eukaryotic multifingered proteins // Proc Natl Acad Sci U S A. 1991. Vol. 88. № 9. P. 3608-3612.

9. Berman, B., Perez, O. A., and Zell, D. Update on rosacea and anti-inflammatory-dose doxycycline // Drugs Today (Barc). 2007. Vol. 43. № 1. P. 27-34.

10. Beven, L., Castano, S., Dufourcq, J., Wieslander, A., and Wroblewski, H. The antibiotic activity of cationic linear amphipathic peptides: Lessons from the action of leucine/lysine copolymers on bacteria of the class Mollicutes // Eur J Biochem. 2003. Vol. 270. № 10. P. 2207-2217.

11. Beven, L. and Wroblewski, H. Effect of natural amphipathic peptides on viability, membrane potential, cell shape and motility of mollicutes // Res Microbiol. 1997. Vol. 148. № 2. P. 163-175.

12. Bierbaum, G. and Sahl, H. G. Autolytic system of Staphylococcus simulans 22: Influence of cationic peptides on activity of n-acetylmuramoyl-l-alanine amidase // J Bacteriol. 1987. Vol. 169. № 12. P. 5452-5458.

13. Blochet, J. E., Chevalier, C., Forest, E., Pebay-Peyroula, E., Gautier, M. F., Joudrier, P., Pezolet, M., and Marion, D. Complete amino acid sequence of puroindoline, a new basic and cystine-rich protein with a unique tryptophan-rich domain, isolated from wheat endosperm by triton x-114 phase partitioning // FEBS Lett. 1993. Vol. 329. № 3. P. 336-340.

14. Boman, H. G., Agerberth, B., and Boman, A. Mechanisms of action on Escherichia coli of cecropin P1 and PR-39, two antibacterial peptides from pig intestine // Infect Immun. 1993. Vol. 61. № 7. P. 2978-2984.

15. Brogden, K. A. Antimicrobial peptides: Pore formers or metabolic inhibitors in bacteria? // Nat Rev Microbiol. 2005. Vol. 3. № 3. P. 238-250.

16. Brogden, K. A. Ovine pulmonary surfactant induces killing of Pasteurella haemolytica, Escherichia coli, and Klebsiella pneumoniae by normal serum // Infect Immun. 1992. Vol. 60. № 12. P. 5182-5189.

17. Brogden, K. A., Ackermann, M., and Huttner, K. M. Small, anionic, and charge-neutralizing propeptide fragments of zymogens are antimicrobial // Antimicrob Agents Chemother. 1997. Vol. 41. № 7. P. 1615-1617.

18. Brogden, K. A., De Lucca, A. J., Bland, J., and Elliott, S. Isolation of an ovine pulmonary surfactant-associated anionic peptide bactericidal for Pasteurella haemolytica // Proc Natl Acad Sci U S A. 1996. Vol. 93. № 1. P. 412-416.

19. Brown, K. L. and Hancock, R. E. Cationic host defense (antimicrobial) peptides // Curr Opin Immunol. 2006. Vol. 18. № 1. P. 24-30.

20. Burian, M. and Schittek, B. The secrets of dermcidin action // Int J Med Microbiol. 2015. Vol. 305. № 2. P. 283-286.

21. Campopiano, D. J., Clarke, D. J., Polfer, N. C., Barran, P. E., Langley, R. J., Govan, J. R., Maxwell, A., and Dorin, J. R. Structure-activity relationships in defensin dimers: A novel link between beta-defensin tertiary structure and antimicrobial activity // J Biol Chem. 2004. Vol. 279. № 47. P. 48671-48679.

22. Carabeo, R. A., Mead, D. J., and Hackstadt, T. Golgi-dependent transport of cholesterol to the Chlamydia trachomatis inclusion // Proc Natl Acad Sci U S A. 2003. Vol. 100. № 11. P. 67716776.

23. Chan, W. C. and White, P. D. Fmoc solid phase peptide synthesis: A practical approach // The practical approach series New York: Oxford University Press, 2000, xxiv, 346 p.

24. Chertov, O., Michiel, D. F., Xu, L., Wang, J. M., Tani, K., Murphy, W. J., Longo, D. L., Taub, D. D., and Oppenheim, J. J. Identification of defensin-1, defensin-2, and CAP37/azurocidin as T-cell chemoattractant proteins released from interleukin-8-stimulated neutrophils // J Biol Chem. 1996. Vol. 271. № 6. P. 2935-2940.

25. Choi, K. Y., Chow, L. N., and Mookherjee, N. Cationic host defence peptides: Multifaceted role in immune modulation and inflammation // J Innate Immun. 2012. Vol. 4. № 4. P. 361-370.

26. Chong-Cerrillo, C., Selsted, M. E., Peterson, E. M., and de la Maza, L. M. Susceptibility of human and murine Chlamydia trachomatis serovars to granulocyte- and epithelium-derived antimicrobial peptides // J Pept Res. 2003. Vol. 61. № 5. P. 237-242.

27. Corzo, G. and Escoubas, P. Pharmacologically active spider peptide toxins // Cell Mol Life Sci. 2003. Vol. 60. № 11. P. 2409-2426.

28. da Costa, J. P., Cova, M., Ferreira, R., and Vitorino, R. Antimicrobial peptides: An alternative for innovative medicines? // Appl Microbiol Biotechnol. 2015. Vol. 99. № 5 P. 2023-2040.

29. Davis, C. H., Raulston, J. E., and Wyrick, P. B. Protein disulfide isomerase, a component of the estrogen receptor complex, is associated with Chlamydia trachomatis serovar E attached to human endometrial epithelial cells // Infect Immun. 2002. Vol. 70. № 7. P. 3413-3418.

30. De, Y., Chen, Q., Schmidt, A. P., Anderson, G. M., Wang, J. M., Wooters, J., Oppenheim, J. J., and Chertov, O. LL-37, the neutrophil granule- and epithelial cell-derived cathelicidin, utilizes formyl peptide receptor-like 1 (Fprl1) as a receptor to chemoattract human peripheral blood neutrophils, monocytes, and T cells // J Exp Med. 2000. Vol. 192. № 7. P. 1069-1074.

31. Dempsey, C. E. The actions of melittin on membranes // Biochim Biophys Acta. 1990. Vol. 1031. № 2. P. 143-161.

32. Deuschle, U., Meyer, W. K., and Thiesen, H. J. Tetracycline-reversible silencing of eukaryotic promoters // Mol Cell Biol. 1995. Vol. 15. № 4. P. 1907-1914.

33. Douglas, S. E., Gallant, J. W., Liebscher, R. S., Dacanay, A., and Tsoi, S. C. Identification and expression analysis of hepcidin-like antimicrobial peptides in bony fish // Dev Comp Immunol. 2003. Vol. 27. № 6-7. P. 589-601.

34. Eger, K., Hermes, M., Uhlemann, K., Rodewald, S., Ortwein, J., Brulport, M., Bauer, A. W., Schormann, W., Lupatsch, F., Schiffer, I. B., Heimerdinger, C. K., Gebhard, S., Spangenberg, C., Prawitt, D., Trost, T., Zabel, B., Sauer, C., Tanner, B., Kolbl, H., Krugel, U., Franke, H., Illes, P., Madaj-Sterba, P., Bockamp, E. O., Beckers, T., and Hengstler, J. G. 4-epidoxycycline: An alternative to doxycycline to control gene expression in conditional mouse models // Biochem Biophys Res Commun. 2004. Vol. 323. № 3. P. 979-986.

35. Estrada, G., Villegas, E., and Corzo, G. Spider venoms: A rich source of acylpolyamines and peptides as new leads for CNS drugs // Nat Prod Rep. 2007. Vol. 24. № 1. P. 145-161.

36. Everett, K. D., Bush, R. M., and Andersen, A. A. Emended description of the order Chlamydiales, proposal of Parachlamydiaceae fam. nov. and Simkaniaceae fam. nov., each containing one

monotypic genus, revised taxonomy of the family Chlamydiaceae, including a new genus and five new species, and standards for the identification of organisms // Int J Syst Bacteriol. 1999. Vol. 49 Pt 2. P. 415-440.

37. Fan, T., Lu, H., Hu, H., Shi, L., McClarty, G. A., Nance, D. M., Greenberg, A. H., and Zhong, G. Inhibition of apoptosis in chlamydia-infected cells: Blockade of mitochondrial cytochrome c release and caspase activation // J Exp Med. 1998. Vol. 187. № 4. P. 487-496.

38. Favre, D., Provost, N., Blouin, V., Blancho, G., Cherel, Y., Salvetti, A., and Moullier, P. Immediate and long-term safety of recombinant adeno-associated virus injection into the nonhuman primate muscle // Mol Ther. 2001. Vol. 4. № 6. P. 559-566.

39. Fitzsimons, H. L., McKenzie, J. M., and During, M. J. Insulators coupled to a minimal bidirectional tet cassette for tight regulation of rAAV-mediated gene transfer in the mammalian brain // Gene Ther. 2001. Vol. 8. № 22. P. 1675-1681.

40. Fjell, C. D., Hiss, J. A., Hancock, R. E., and Schneider, G. Designing antimicrobial peptides: Form follows function // Nat Rev Drug Discov. 2012. Vol. 11. № 1. P. 37-51.

41. Fox, J. L. Antimicrobial peptides stage a comeback // Nat Biotechnol. 2013. Vol. 31. № 5. P. 379382.

42. Frank, R. W., Gennaro, R., Schneider, K., Przybylski, M., and Romeo, D. Amino acid sequences of two proline-rich bactenecins. Antimicrobial peptides of bovine neutrophils // J Biol Chem. 1990. Vol. 265. № 31. P. 18871-18874.

43. Frick, I. M., Akesson, P., Rasmussen, M., Schmidtchen, A., and Bjorck, L. SIC, a secreted protein of Streptococcus pyogenes that inactivates antibacterial peptides // J Biol Chem. 2003. Vol. 278. № 19. P. 16561-16566.

44. Gaczynska, M., Osmulski, P. A., Gao, Y., Post, M. J., and Simons, M. Proline- and arginine-rich peptides constitute a novel class of allosteric inhibitors of proteasome activity // Biochemistry. 2003. Vol. 42. № 29. P. 8663-8670.

45. Gennaro, R. and Zanetti, M. Structural features and biological activities of the cathelicidin-derived antimicrobial peptides // Biopolymers. 2000. Vol. 55. № 1. P. 31-49.

46. Giles, F. J., Rodriguez, R., Weisdorf, D., Wingard, J. R., Martin, P. J., Fleming, T. R., Goldberg, S. L., Anaissie, E. J., Bolwell, B. J., Chao, N. J., Shea, T. C., Brunvand, M. M., Vaughan, W., Petersen, F., Schubert, M., Lazarus, H. M., Maziarz, R. T., Silverman, M., Beveridge, R. A., Redman, R., Pulliam, J. G., Devitt-Risse, P., Fuchs, H. J., and Hurd, D. D. A phase III, randomized, double-blind, placebo-controlled, study of iseganan for the reduction of stomatitis in patients receiving stomatotoxic chemotherapy // Leuk Res. 2004. Vol. 28. № 6. P. 559-565.

47. Gordon, Y. J., Romanowski, E. G., and McDermott, A. M. A review of antimicrobial peptides and their therapeutic potential as anti-infective drugs // Curr Eye Res. 2005. Vol. 30. № 7. P. 505-515.

48. Gossen, M. and Bujard, H. Tight control of gene expression in mammalian cells by tetracycline-responsive promoters // Proc Natl Acad Sci U S A. 1992. Vol. 89. № 12. P. 5547-5551.

49. Gossen, M., Freundlieb, S., Bender, G., Muller, G., Hillen, W., and Bujard, H. Transcriptional activation by tetracyclines in mammalian cells // Science. 1995. Vol. 268. № 5218. P. 1766-1769.

50. Gould, D. J., Berenstein, M., Dreja, H., Ledda, F., Podhajcer, O. L., and Chernajovsky, Y. A novel doxycycline inducible autoregulatory plasmid which displays "on"/"off" regulation suited to gene therapy applications // Gene Ther. 2000. Vol. 7. № 24. P. 2061-2070.

51. Grieshaber, S. S., Grieshaber, N. A., and Hackstadt, T. Chlamydia trachomatis uses host cell dynein to traffic to the microtubule-organizing center in a p50 dynamitin-independent process // J Cell Sci. 2003. Vol. 116. № Pt 18. P. 3793-3802.

52. Grieshaber, S. S., Grieshaber, N. A., Miller, N., and Hackstadt, T. Chlamydia trachomatis causes centrosomal defects resulting in chromosomal segregation abnormalities // Traffic. 2006. Vol. 7. № 8. P. 940-949.

53. Guina, T., Yi, E. C., Wang, H., Hackett, M., and Miller, S. I. A PhoP-regulated outer membrane protease of Salmonella enterica serovar typhimurium promotes resistance to alpha-helical antimicrobial peptides // J Bacteriol. 2000. Vol. 182. № 14. P. 4077-4086.

54. Guo, L., Lim, K. B., Poduje, C. M., Daniel, M., Gunn, J. S., Hackett, M., and Miller, S. I. Lipid A acylation and bacterial resistance against vertebrate antimicrobial peptides // Cell. 1998. Vol. 95. № 2. P. 189-198.

55. Haberman, R. P., McCown, T. J., and Samulski, R. J. Inducible long-term gene expression in brain with adeno-associated virus gene transfer // Gene Ther. 1998. Vol. 5. № 12. P. 1604-1611.

56. Hanahan, D. Studies on transformation of Escherichia coli with plasmids // J Mol Biol. 1983. Vol. 166. № 4. P. 557-580.

57. Hancock, R. E. and Chapple, D. S. Peptide antibiotics // Antimicrob Agents Chemother. 1999. Vol. 43. № 6. P. 1317-1323.

58. Hatch, T. P., Allan, I., and Pearce, J. H. Structural and polypeptide differences between envelopes of infective and reproductive life cycle forms of Chlamydia spp // J Bacteriol. 1984. Vol. 157. № 1. P. 13-20.

59. He, K., Ludtke, S. J., Huang, H. W., and Worcester, D. L. Antimicrobial peptide pores in membranes detected by neutron in-plane scattering // Biochemistry. 1995. Vol. 34. № 48. P. 15614-15618.

60. Heuer, D., Rejman Lipinski, A., Machuy, N., Karlas, A., Wehrens, A., Siedler, F., Brinkmann, V., and Meyer, T. F. Chlamydia causes fragmentation of the Golgi compartment to ensure reproduction // Nature. 2009. Vol. 457. № 7230. P. 731-735.

61. Hornef, M. W., Putsep, K., Karlsson, J., Refai, E., and Andersson, M. Increased diversity of intestinal antimicrobial peptides by covalent dimer formation // Nat Immunol. 2004. Vol. 5. № 8. P. 836-843.

62. Huang, H. J., Ross, C. R., and Blecha, F. Chemoattractant properties of PR-39, a neutrophil antibacterial peptide // J Leukoc Biol. 1997. Vol. 61. № 5. P. 624-629.

63. Hultmark, D., Steiner, H., Rasmuson, T., and Boman, H. G. Insect immunity. Purification and properties of three inducible bactericidal proteins from hemolymph of immunized pupae of Hyalophora cecropia // Eur J Biochem. 1980. Vol. 106. № 1. P. 7-16.

64. Jenssen, H., Hamill, P., and Hancock, R. E. Peptide antimicrobial agents // Clin Microbiol Rev. 2006. Vol. 19. № 3. P. 491-511.

65. Jin, T., Bokarewa, M., Foster, T., Mitchell, J., Higgins, J., and Tarkowski, A. Staphylococcus aureus resists human defensins by production of staphylokinase, a novel bacterial evasion mechanism // J Immunol. 2004. Vol. 172. № 2. P. 1169-1176.

66. Jones, R. B., Van der Pol, B., Martin, D. H., and Shepard, M. K. Partial characterization of Chlamydia trachomatis isolates resistant to multiple antibiotics // J Infect Dis. 1990. Vol. 162. № 6. P. 1309-1315.

67. Kang, S. J., Park, S. J., Mishig-Ochir, T., and Lee, B. J. Antimicrobial peptides: Therapeutic potentials // Expert Rev Anti Infect Ther. 2014. Vol. 12. № 12. P. 1477-1486.

68. Karns, L. R., Kisielewski, A., Gulding, K. M., Seraj, J. M., and Theodorescu, D. Manipulation of gene expression by an ecdysone-inducible gene switch in tumor xenografts // BMC Biotechnol. 2001. Vol. 1. P. 11.

69. Kavanagh, K. and Dowd, S. Histatins: Antimicrobial peptides with therapeutic potential // J Pharm Pharmacol. 2004. Vol. 56. № 3. P. 285-289.

70. Kawasaki, H. and Iwamuro, S. Potential roles of histones in host defense as antimicrobial agents // Infect Disord Drug Targets. 2008. Vol. 8. № 3. P. 195-205.

71. Kim, J. M. Antimicrobial proteins in intestine and inflammatory bowel diseases // Intest Res. 2014. Vol. 12. № 1. P. 20-33.

72. Kolls, J. K., McCray, P. B., Jr., and Chan, Y. R. Cytokine-mediated regulation of antimicrobial proteins // Nat Rev Immunol. 2008. Vol. 8. № 11. P. 829-835.

73. Kozlov, S. A., Vassilevski, A. A., Feofanov, A. V., Surovoy, A. Y., Karpunin, D. V., and Grishin, E. V. Latarcins, antimicrobial and cytolytic peptides from the venom of the spider Lachesana tarabaevi (Zodariidae) that exemplify biomolecular diversity // J Biol Chem. 2006. Vol. 281. № 30. P. 20983-20992.

74. Kumar, Y. and Valdivia, R. H. Actin and intermediate filaments stabilize the Chlamydia trachomatis vacuole by forming dynamic structural scaffolds // Cell Host Microbe. 2008. Vol. 4. № 2. P. 159-169.

75. Kuwano, K., Tanaka, N., Shimizu, T., and Kida, Y. Antimicrobial activity of inducible human beta defensin-2 against Mycoplasma pneumoniae // Curr Microbiol. 2006. Vol. 52. № 6. P. 435438.

76. LaForce, F. M. and Boose, D. S. Effect of zinc and phosphate on an antibacterial peptide isolated from lung lavage // Infect Immun. 1984. Vol. 45. № 3. P. 692-696.

77. Lai, R., Liu, H., Hui Lee, W., and Zhang, Y. An anionic antimicrobial peptide from toad Bombina maxima // Biochem Biophys Res Commun. 2002. Vol. 295. № 4. P. 796-799.

78. Lamb, H. M. and Wiseman, L. R. Pexiganan acetate // Drugs. 1998. Vol. 56. № 6. P. 1047-1052; discussion 1053-1044.

79. Latta-Mahieu, M., Rolland, M., Caillet, C., Wang, M., Kennel, P., Mahfouz, I., Loquet, I., Dedieu, J. F., Mahfoudi, A., Trannoy, E., and Thuillier, V. Gene transfer of a chimeric trans-activator is immunogenic and results in short-lived transgene expression // Hum Gene Ther. 2002. Vol. 13. № 13. P.1611-1620.

80. Lawyer, C., Pai, S., Watabe, M., Borgia, P., Mashimo, T., Eagleton, L., and Watabe, K. Antimicrobial activity of a 13 amino acid tryptophan-rich peptide derived from a putative porcine precursor protein of a novel family of antibacterial peptides // FEBS Lett. 1996. Vol. 390. № 1. P. 95-98.

81. Lazarev, V. N., Parfenova, T. M., Gularyan, S. K., Misyurina, O. Y., Akopian, T. A., and Govorun, V. M. Induced expression of melittin, an antimicrobial peptide, inhibits infection by Chlamydia trachomatis and Mycoplasma hominis in a HeLa cell line // Int J Antimicrob Agents. 2002. Vol. 19. № 2. P. 133-137.

82. Lazarev, V. N., Shkarupeta, M. M., Titova, G. A., Kostrjukova, E. S., Akopian, T. A., and Govorun, V. M. Effect of induced expression of an antimicrobial peptide melittin on Chlamydia trachomatis and Mycoplasma hominis infections in vivo // Biochem Biophys Res Commun. 2005. Vol. 338. № 2. P. 946-950.

83. Lebherz, C., Auricchio, A., Maguire, A. M., Rivera, V. M., Tang, W., Grant, R. L., Clackson, T., Bennett, J., and Wilson, J. M. Long-term inducible gene expression in the eye via adeno-associated virus gene transfer in nonhuman primates // Hum Gene Ther. 2005. Vol. 16. № 2. P. 178-186.

84. Lee, D. Y., Huang, C. M., Nakatsuji, T., Thiboutot, D., Kang, S. A., Monestier, M., and Gallo, R. L. Histone H4 is a major component of the antimicrobial action of human sebocytes // J Invest Dermatol. 2009. Vol. 129. № 10. P. 2489-2496.

85. Levin, M., Quint, P. A., Goldstein, B., Barton, P., Bradley, J. S., Shemie, S. D., Yeh, T., Kim, S. S., Cafaro, D. P., Scannon, P. J., and Giroir, B. P. Recombinant bactericidal/permeability-increasing protein (rBPI21) as adjunctive treatment for children with severe meningococcal sepsis: a randomised trial. rBPI21 meningococcal sepsis study group // Lancet. 2000. Vol. 356. № 9234. P. 961-967.

86. Lin, P. C. and Xu, R. M. Structure and assembly of the SF3a splicing factor complex of U2 snRNP // EMBO J. 2012. Vol. 31. № 6. P. 1579-1590.

87. Ljostad, U., Skogvoll, E., Eikeland, R., Midgard, R., Skarpaas, T., Berg, A., and Mygland, A. Oral doxycycline versus intravenous ceftriaxone for European Lyme neuroborreliosis: A multicentre, non-inferiority, double-blind, randomised trial // Lancet Neurol. 2008. Vol. 7. № 8. P. 690-695.

88. Maemoto, A., Qu, X., Rosengren, K. J., Tanabe, H., Henschen-Edman, A., Craik, D. J., and Ouellette, A. J. Functional analysis of the alpha-defensin disulfide array in mouse cryptdin-4 // J Biol Chem. 2004. Vol. 279. № 42. P. 44188-44196.

89. Margolin, J. F., Friedman, J. R., Meyer, W. K., Vissing, H., Thiesen, H. J., and Rauscher, F. J., 3rd Kruppel-associated boxes are potent transcriptional repression domains // Proc Natl Acad Sci U S A. 1994. Vol. 91. № 10. P. 4509-4513.

90. Markusic, D., Oude-Elferink, R., Das, A. T., Berkhout, B., and Seppen, J. Comparison of single regulated lentiviral vectors with rtTA expression driven by an autoregulatory loop or a constitutive promoter // Nucleic Acids Res. 2005. Vol. 33. № 6. P. e63.

91. Matsuda, E., Agata, Y., Sugai, M., Katakai, T., Gonda, H., and Shimizu, A. Targeting of kruppelassociated box-containing zinc finger proteins to centromeric heterochromatin. Implication for the gene silencing mechanisms // J Biol Chem. 2001. Vol. 276. № 17. P. 14222-14229.

92. Matsuzaki, K., Murase, O., Fujii, N., and Miyajima, K. An antimicrobial peptide, magainin 2, induced rapid flip-flop of phospholipids coupled with pore formation and peptide translocation // Biochemistry. 1996. Vol. 35. № 35. P. 11361-11368.

93. Matsuzaki, K., Sugishita, K., Ishibe, N., Ueha, M., Nakata, S., Miyajima, K., and Epand, R. M. Relationship of membrane curvature to the formation of pores by magainin 2 // Biochemistry. 1998. Vol. 37. № 34. P. 11856-11863.

94. Mebs, D. Venomous and poisonous animals : A handbook for biologists, and toxicologists and toxinologists, physicians and pharmacists // Boca Raton, Fla.: CRC Press, 2002, ix, 339 p.

95. Miller, S. I., Ernst, R. K., and Bader, M. W. LPS, TLR4 and infectious disease diversity // Nat Rev Microbiol. 2005. Vol. 3. № 1. P. 36-46.

96. Miyairi, I. and Byrne, G. I. Chlamydia and programmed cell death // Curr Opin Microbiol. 2006. Vol. 9. № 1. P. 102-108.

97. Moore, E. R., Mead, D. J., Dooley, C. A., Sager, J., and Hackstadt, T. The trans-Golgi SNARE syntaxin 6 is recruited to the chlamydial inclusion membrane // Microbiology. 2011. Vol. 157. № Pt 3. P. 830-838.

98. Mourad, A., Sweet, R. L., Sugg, N., and Schachter, J. Relative resistance to erythromycin in Chlamydia trachomatis // Antimicrob Agents Chemother. 1980. Vol. 18. № 5. P. 696-698.

99. Newhall, W. J. and Jones, R. B. Disulfide-linked oligomers of the major outer membrane protein of Chlamydiae // J Bacteriol. 1983. Vol. 154. № 2. P. 998-1001.

100. Newhall, W. J. t. Biosynthesis and disulfide cross-linking of outer membrane components during the growth cycle of Chlamydia trachomatis // Infect Immun. 1987. Vol. 55. № 1. P. 162-168.

101. Nguyen, L. T., Haney, E. F., and Vogel, H. J. The expanding scope of antimicrobial peptide structures and their modes of action // Trends Biotechnol. 2011. Vol. 29. № 9. P. 464-472.

102. Nguyen, T. X., Cole, A. M., and Lehrer, R. I. Evolution of primate theta-defensins: A serpentine path to a sweet tooth // Peptides. 2003. Vol. 24. № 11. P. 1647-1654.

103. Nosten, F., McGready, R., d'Alessandro, U., Bonell, A., Verhoeff, F., Menendez, C., Mutabingwa, T., and Brabin, B. Antimalarial drugs in pregnancy: A review // Curr Drug Saf. 2006. Vol. 1. № 1. P. 1-15.

104.Nyberg, P., Rasmussen, M., and Bjorck, L. Alpha2-macroglobulin-proteinase complexes protect Streptococcus pyogenes from killing by the antimicrobial peptide LL-37 // J Biol Chem. 2004. Vol. 279. № 51. P. 52820-52823.

105. Orth, P., Cordes, F., Schnappinger, D., Hillen, W., Saenger, W., and Hinrichs, W. Conformational changes of the Tet repressor induced by tetracycline trapping // J Mol Biol. 1998. Vol. 279. № 2. P. 439-447.

106. Otvos, L., Jr., O, I., Rogers, M. E., Consolvo, P. J., Condie, B. A., Lovas, S., Bulet, P., and Blaszczyk-Thurin, M. Interaction between heat shock proteins and antimicrobial peptides // Biochemistry. 2000. Vol. 39. № 46. P. 14150-14159.

107. Ouellette, A. J. and Selsted, M. E. Paneth cell defensins: Endogenous peptide components of intestinal host defense // FASEB J. 1996. Vol. 10. № 11. P. 1280-1289.

108. Palli, S. R., Kapitskaya, M. Z., Kumar, M. B., and Cress, D. E. Improved ecdysone receptor-based inducible gene regulation system // Eur J Biochem. 2003. Vol. 270. № 6. P. 1308-1315.

109. Park, C. B., Kim, H. S., and Kim, S. C. Mechanism of action of the antimicrobial peptide buforin II: Buforin II kills microorganisms by penetrating the cell membrane and inhibiting cellular functions // Biochem Biophys Res Commun. 1998. Vol. 244. № 1. P. 253-257.

110. Park, C. B., Yi, K. S., Matsuzaki, K., Kim, M. S., and Kim, S. C. Structure-activity analysis of buforin II, a histone H2A-derived antimicrobial peptide: The proline hinge is responsible for the cell-penetrating ability of buforin II // Proc Natl Acad Sci U S A. 2000. Vol. 97. № 15. P. 82458250.

111. Park, C. H., Valore, E. V., Waring, A. J., and Ganz, T. Hepcidin, a urinary antimicrobial peptide synthesized in the liver // J Biol Chem. 2001. Vol. 276. № 11. P. 7806-7810.

112. Patat, S. A., Carnegie, R. B., Kingsbury, C., Gross, P. S., Chapman, R., and Schey, K. L. Antimicrobial activity of histones from hemocytes of the pacific white shrimp // Eur J Biochem. 2004. Vol. 271. № 23-24. P. 4825-4833.

113. Pennini, M. E., Perrinet, S., Dautry-Varsat, A., and Subtil, A. Histone methylation by NUE, a novel nuclear effector of the intracellular pathogen Chlamydia trachomatis // PLoS Pathog. 2010. Vol. 6. № 7. P. e1000995.

114. Peschel, A., Jack, R. W., Otto, M., Collins, L. V., Staubitz, P., Nicholson, G., Kalbacher, H., Nieuwenhuizen, W. F., Jung, G., Tarkowski, A., van Kessel, K. P., and van Strijp, J. A. Staphylococcus aureus resistance to human defensins and evasion of neutrophil killing via the novel virulence factor Mprf is based on modification of membrane lipids with L-lysine // J Exp Med. 2001. Vol. 193. № 9. P. 1067-1076.

115. Peschel, A., Otto, M., Jack, R. W., Kalbacher, H., Jung, G., and Gotz, F. Inactivation of the dlt operon in Staphylococcus aureus confers sensitivity to defensins, protegrins, and other antimicrobial peptides // J Biol Chem. 1999. Vol. 274. № 13. P. 8405-8410.

116. Peschel, A. and Sahl, H. G. The co-evolution of host cationic antimicrobial peptides and microbial resistance // Nat Rev Microbiol. 2006. Vol. 4. № 7. P. 529-536.

117. Pinheiro da Silva, F. and Machado, M. C. Antimicrobial peptides: Clinical relevance and therapeutic implications // Peptides. 2012. Vol. 36. № 2. P. 308-314.

118. Powell, J. P. and Wenzel, R. P. Antibiotic options for treating community-acquired MRSA // Expert Rev Anti Infect Ther. 2008. Vol. 6. № 3. P. 299-307.

119. Poyart, C., Pellegrini, E., Marceau, M., Baptista, M., Jaubert, F., Lamy, M. C., and Trieu-Cuot, P. Attenuated virulence of Streptococcus agalactiae deficient in D-alanyl-lipoteichoic acid is due to an increased susceptibility to defensins and phagocytic cells // Mol Microbiol. 2003. Vol. 49. № 6. P. 1615-1625.

120. Qu, X. D., Harwig, S. S., Oren, A. M., Shafer, W. M., and Lehrer, R. I. Susceptibility of Neisseria gonorrhoeae to protegrins // Infect Immun. 1996. Vol. 64. № 4. P. 1240-1245.

121. Ramanathan, B., Wu, H., Ross, C. R., and Blecha, F. PR-39, a porcine antimicrobial peptide, inhibits apoptosis: Involvement of caspase-3 // Dev Comp Immunol. 2004. Vol. 28. № 2. P. 163169.

122. Rivera, V. M., Clackson, T., Natesan, S., Pollock, R., Amara, J. F., Keenan, T., Magari, S. R., Phillips, T., Courage, N. L., Cerasoli, F., Jr., Holt, D. A., and Gilman, M. A humanized system for pharmacologic control of gene expression // Nat Med. 1996. Vol. 2. № 9. P. 1028-1032.

123. Rivera, V. M., Gao, G. P., Grant, R. L., Schnell, M. A., Zoltick, P. W., Rozamus, L. W., Clackson, T., and Wilson, J. M. Long-term pharmacologically regulated expression of erythropoietin in primates following AAV-mediated gene transfer // Blood. 2005. Vol. 105. № 4. P. 1424-1430.

124. Roscilli, G., Rinaudo, C. D., Cimino, M., Sporeno, E., Lamartina, S., Ciliberto, G., and Toniatti, C. Long-term and tight control of gene expression in mouse skeletal muscle by a new hybrid human transcription factor // Mol Ther. 2002. Vol. 6. № 5. P. 653-663.

125. Rossi, C., Gibellini, D., Barbanti-Brodano, G., Betti, M., Boarini, C., Pengue, G., Lania, L., and Caputo, A. Transiently transfected and stably integrated HIV-1 LTR responds differentially to the silencing activity of the Kruppel-associated box (KRAB) transcriptional repressor domain // J Med Virol. 1999. Vol. 58. № 3. P. 264-272.

126. Sambri, V., Marangoni, A., Giacani, L., Gennaro, R., Murgia, R., Cevenini, R., and Cinco, M. Comparative in vitro activity of five cathelicidin-derived synthetic peptides against Leptospira, Borrelia and Treponema pallidum // J Antimicrob Chemother. 2002. Vol. 50. № 6. P. 895-902.

127. Schachter, J. and Wyrick, P. B. Culture and isolation of Chlamydia trachomatis // Methods Enzymol. 1994. Vol. 236. P. 377-390.

128. Schittek, B., Hipfel, R., Sauer, B., Bauer, J., Kalbacher, H., Stevanovic, S., Schirle, M., Schroeder, K., Blin, N., Meier, F., Rassner, G., and Garbe, C. Dermcidin: A novel human antibiotic peptide secreted by sweat glands // Nat Immunol. 2001. Vol. 2. № 12. P. 1133-1137.

129. Schmidtchen, A., Frick, I. M., Andersson, E., Tapper, H., and Bjorck, L. Proteinases of common pathogenic bacteria degrade and inactivate the antibacterial peptide LL-37 // Mol Microbiol. 2002. Vol. 46. № 1. P. 157-168.

130. Schultz, D. C., Friedman, J. R., and Rauscher, F. J., 3rd Targeting histone deacetylase complexes via KRAB-zinc finger proteins: The PHD and bromodomains of KAP-1 form a cooperative unit that recruits a novel isoform of the Mi-2alpha subunit of NuRD // Genes Dev. 2001. Vol. 15. № 4. P. 428-443.

131. Scidmore, M. A. Recent advances in Chlamydia subversion of host cytoskeletal and membrane trafficking pathways // Microbes Infect. 2011. Vol. 13. № 6. P. 527-535.

132. Scidmore, M. A. and Hackstadt, T. Mammalian 14-3-3beta associates with the Chlamydia trachomatis inclusion membrane via its interaction with IncG // Mol Microbiol. 2001. Vol. 39. № 6. P. 1638-1650.

133. Selsted, M. E., Harwig, S. S., Ganz, T., Schilling, J. W., and Lehrer, R. I. Primary structures of three human neutrophil defensins // J Clin Invest. 1985. Vol. 76. № 4. P. 1436-1439.

134. Selsted, M. E., Novotny, M. J., Morris, W. L., Tang, Y. Q., Smith, W., and Cullor, J. S. Indolicidin, a novel bactericidal tridecapeptide amide from neutrophils // J Biol Chem. 1992. Vol. 267. № 7. P. 4292-4295.

135. Shafer, W. M., Qu, X., Waring, A. J., and Lehrer, R. I. Modulation of Neisseria gonorrhoeae susceptibility to vertebrate antibacterial peptides due to a member of the resistance/nodulation/division efflux pump family // Proc Natl Acad Sci U S A. 1998. Vol. 95. № 4. P. 1829-1833.

136. Shai, Y. Mechanism of the binding, insertion and destabilization of phospholipid bilayer membranes by alpha-helical antimicrobial and cell non-selective membrane-lytic peptides // Biochim Biophys Acta. 1999. Vol. 1462. № 1-2. P. 55-70.

137. Shi, J., Ross, C. R., Chengappa, M. M., Sylte, M. J., McVey, D. S., and Blecha, F. Antibacterial activity of a synthetic peptide (PR-26) derived from PR-39, a proline-arginine-rich neutrophil antimicrobial peptide // Antimicrob Agents Chemother. 1996. Vol. 40. № 1. P. 115-121.

138. Shlyapnikov, Y. M., Andreev, Y. A., Kozlov, S. A., Vassilevski, A. A., and Grishin, E. V. Bacterial production of latarcin 2a, a potent antimicrobial peptide from spider venom // Protein Expr Purif. 2008. Vol. 60. № 1. P. 89-95.

139. Sieprawska-Lupa, M., Mydel, P., Krawczyk, K., Wojcik, K., Puklo, M., Lupa, B., Suder, P., Silberring, J., Reed, M., Pohl, J., Shafer, W., McAleese, F., Foster, T., Travis, J., and Potempa, J. Degradation of human antimicrobial peptide LL-37 by Staphylococcus aureus-derived proteinases // Antimicrob Agents Chemother. 2004. Vol. 48. № 12. P. 4673-4679.

140. Somani, J., Bhullar, V. B., Workowski, K. A., Farshy, C. E., and Black, C. M. Multiple drug-resistant Chlamydia trachomatis associated with clinical treatment failure // J Infect Dis. 2000. Vol. 181. № 4. P. 1421-1427.

141. Spaar, A., Munster, C., and Salditt, T. Conformation of peptides in lipid membranes studied by x-ray grazing incidence scattering // Biophys J. 2004. Vol. 87. № 1. P. 396-407.

142. Sripathy, S. P., Stevens, J., and Schultz, D. C. The KAP1 corepressor functions to coordinate the assembly of de novo HP1-demarcated microenvironments of heterochromatin required for KRAB zinc finger protein-mediated transcriptional repression // Mol Cell Biol. 2006. Vol. 26. № 22. P. 8623-8638.

143. Steiner, H., Hultmark, D., Engstrom, A., Bennich, H., and Boman, H. G. Sequence and specificity of two antibacterial proteins involved in insect immunity // Nature. 1981. Vol. 292. № 5820. P. 246-248.

144. Stieger, K., Belbellaa, B., Le Guiner, C., Moullier, P., and Rolling, F. In vivo gene regulation using tetracycline-regulatable systems // Adv Drug Deliv Rev. 2009. Vol. 61. № 7-8. P. 527-541.

145. Stieger, K., Mendes-Madeira, A., Meur, G. L., Weber, M., Deschamps, J. Y., Nivard, D., Provost, N., Moullier, P., and Rolling, F. Oral administration of doxycycline allows tight control of transgene expression: A key step towards gene therapy of retinal diseases // Gene Ther. 2007. Vol. 14. № 23. P. 1668-1673.

146. Suarez-Carmona, M., Hubert, P., Delvenne, P., and Herfs, M. Defensins: "Simple" antimicrobial peptides or broad-spectrum molecules? // Cytokine Growth Factor Rev. 2015. Vol. 26. № 3. P. 361-370

147. Subbalakshmi, C. and Sitaram, N. Mechanism of antimicrobial action of indolicidin // FEMS Microbiol Lett. 1998. Vol. 160. № 1. P. 91-96.

148. Takenaka, K., Nakagawa, H., Miyamoto, S., and Miki, H. The pre-mRNA-splicing factor SF3a66 functions as a microtubule-binding and -bundling protein // Biochem J. 2004. Vol. 382. № Pt 1. P. 223-230.

149. Tan, H. H. Topical antibacterial treatments for acne vulgaris: Comparative review and guide to selection // Am J Clin Dermatol. 2004. Vol. 5. № 2. P. 79-84.

150. Tang, Y. Q., Yuan, J., Osapay, G., Osapay, K., Tran, D., Miller, C. J., Ouellette, A. J., and Selsted, M. E. A cyclic antimicrobial peptide produced in primate leukocytes by the ligation of two truncated alpha-defensins // Science. 1999. Vol. 286. № 5439. P. 498-502.

151. Toniatti, C., Bujard, H., Cortese, R., and Ciliberto, G. Gene therapy progress and prospects: Transcription regulatory systems // Gene Ther. 2004. Vol. 11. № 8. P. 649-657.

152. Tossi, A., Sandri, L., and Giangaspero, A. Amphipathic, alpha-helical antimicrobial peptides // Biopolymers. 2000. Vol. 55. № 1. P. 4-30.

153. Tsai, H. and Bobek, L. A. Human salivary histatins: Promising anti-fungal therapeutic agents // Crit Rev Oral Biol Med. 1998. Vol. 9. № 4. P. 480-497.

154. Tsao, H. S., Spinella, S. A., Lee, A. T., and Elmore, D. E. Design of novel histone-derived antimicrobial peptides // Peptides. 2009. Vol. 30. № 12. P. 2168-2173.

155. Tzeng, Y. L., Ambrose, K. D., Zughaier, S., Zhou, X., Miller, Y. K., Shafer, W. M., and Stephens, D. S. Cationic antimicrobial peptide resistance in Neisseria meningitidis // J Bacteriol. 2005. Vol. 187. № 15. P. 5387-5396.

156. Urlinger, S., Baron, U., Thellmann, M., Hasan, M. T., Bujard, H., and Hillen, W. Exploring the sequence space for tetracycline-dependent transcriptional activators: Novel mutations yield expanded range and sensitivity // Proc Natl Acad Sci U S A. 2000. Vol. 97. № 14. P. 7963-7968.

157. Vandamme, D., Landuyt, B., Luyten, W., and Schoofs, L. A comprehensive summary of LL-37, the factotum human cathelicidin peptide // Cell Immunol. 2012. Vol. 280. № 1. P. 22-35.

158. Vassilevski, A. A., Kozlov, S. A., and Grishin, E. V. Molecular diversity of spider venom // Biochemistry (Mosc). 2009. Vol. 74. № 13. P. 1505-1534.

159. Vassilevski, A. A., Kozlov, S. A., Samsonova, O. V., Egorova, N. S., Karpunin, D. V., Pluzhnikov, K. A., Feofanov, A. V., and Grishin, E. V. Cyto-insectotoxins, a novel class of cytolytic and insecticidal peptides from spider venom // Biochem J. 2008. Vol. 411. № 3. P. 687696.

160. Vegeto, E., Allan, G. F., Schrader, W. T., Tsai, M. J., McDonnell, D. P., and OMalley, B. W. The mechanism of RU486 antagonism is dependent on the conformation of the carboxy-terminal tail of the human progesterone receptor // Cell. 1992. Vol. 69. № 4. P. 703-713.

161. Verbeke, P., Welter-Stahl, L., Ying, S., Hansen, J., Hacker, G., Darville, T., and Ojcius, D. M. Recruitment of BAD by the Chlamydia trachomatis vacuole correlates with host-cell survival // PLoS Pathog. 2006. Vol. 2. № 5. P. e45.

162. Wassing, G. M., Bergman, P., Lindbom, L., and van der Does, A. M. Complexity of antimicrobial peptide regulation during pathogen-host interactions // Int J Antimicrob Agents. 2015. Vol. 45. № 5. P. 447-454.

163. Weiss, J., Elsbach, P., Olsson, I., and Odeberg, H. Purification and characterization of a potent bactericidal and membrane active protein from the granules of human polymorphonuclear leukocytes // J Biol Chem. 1978. Vol. 253. № 8. P. 2664-2672.

164. Wiegand, I., Hilpert, K., and Hancock, R. E. Agar and broth dilution methods to determine the minimal inhibitory concentration (MIC) of antimicrobial substances // Nat Protoc. 2008. Vol. 3. № 2. P. 163-175.

165. Wissmann, A., Meier, I., Wray, L. V., Jr., Geissendorfer, M., and Hillen, W. Tn10 tet operator mutations affecting Tet repressor recognition // Nucleic Acids Res. 1986. Vol. 14. № 10. P. 42534266.

166. Wiznerowicz, M. and Trono, D. Conditional suppression of cellular genes: lentivirus vector-mediated drug-inducible RNA interference // J Virol. 2003. Vol. 77. № 16. P. 8957-8961.

167. Yamaguchi, S., Hong, T., Waring, A., Lehrer, R. I., and Hong, M. Solid-state NMR investigations of peptide-lipid interaction and orientation of a beta-sheet antimicrobial peptide, protegrin // Biochemistry. 2002. Vol. 41. № 31. P. 9852-9862.

168. Yang, L., Harroun, T. A., Weiss, T. M., Ding, L., and Huang, H. W. Barrel-stave model or toroidal model? A case study on melittin pores // Biophys J. 2001. Vol. 81. № 3. P. 1475-1485.

169. Yasin, B., Harwig, S. S., Lehrer, R. I., and Wagar, E. A. Susceptibility of Chlamydia trachomatis to protegrins and defensins // Infect Immun. 1996. Vol. 64. № 3. P. 709-713.

170. Yasin, B., Pang, M., and Wagar, E. A. A cumulative experience examining the effect of natural and synthetic antimicrobial peptides vs. Chlamydia trachomatis // J Pept Res. 2004. Vol. 64. № 2. P. 65-71.

171. Yount, N. Y. and Yeaman, M. R. Immunocontinuum: Perspectives in antimicrobial peptide mechanisms of action and resistance // Protein Pept Lett. 2005. Vol. 12. № 1. P. 49-67.

172. Yount, N. Y. and Yeaman, M. R. Peptide antimicrobials: Cell wall as a bacterial target // Ann N Y Acad Sci. 2013. Vol. 1277. P. 127-138.

173. Zanetti, M. The role of cathelicidins in the innate host defenses of mammals // Curr Issues Mol Biol. 2005. Vol. 7. № 2. P. 179-196.

174. Zasloff, M. Magainins, a class of antimicrobial peptides from Xenopus skin: Isolation, characterization of two active forms, and partial cDNA sequence of a precursor // Proc Natl Acad Sci U S A. 1987. Vol. 84. № 15. P. 5449-5453.

175. Zhang, B., Kirov, S., and Snoddy, J. Webgestalt: An integrated system for exploring gene sets in various biological contexts // Nucleic Acids Res. 2005. Vol. 33. № Web Server issue. P. W741-748.

176. Zhao, H. and Kinnunen, P. K. Modulation of the activity of secretory phospholipase A2 by antimicrobial peptides // Antimicrob Agents Chemother. 2003. Vol. 47. № 3. P. 965-971.