Биохимические и иммунологические механизмы нарушений при злокачественных лимфомах кожи тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.04, кандидат биологических наук Савватеева, Мария Владимировна

• Савватеева, Мария Владимировна
• кандидат биологических наук
• 2003

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Савватеева, Мария Владимировна

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА I. Обзор литературы

1.1. Этиология, патогенез и классификация злокачественных лимфом кожи.

1.2. Ферменты нуклеинового обмена и их роль в дифференцировке и пролиферации Т клеток.

1.3. Роль иммунологических маркеров и цитокинов в норме и при опухолевом росте.

1.3.1. Участие цитокинов в процессах воспаления в норме и при злокачественных лимфомах кожи.

1.3.2. Значение синтеза основных популяций цитокинов Т хелперами обоих классов при злокачественных лимфомах кожи.

1.3.3. Ростовые факторы при злокачественных лимфомах кожи.

1.4. Роль Т клеточных рецепторов в патогенезе злокачественных лимфомах кожи.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Биохимические и иммунологические механизмы нарушений при злокачественных лимфомах кожи»

Актуальность проблемы. Изучение особенностей течения и механизмов регуляции злокачественных процессов является на сегодняшний день одной из ключевых проблем медицинской биохимии. Известно, что кожа относится к органам иммунной системы, являясь местом внетимусной дифференцировки Т-лимфоцитов и продукции, регуляторных цитокинов, способствующих их созреванию [Cerroni, Kerl, 1992; Goldsby et al, 2002].

Злокачественные лимфомы кожи (ЗЛК) представляют собой частный случай системного опухолевого процесса лимфоидной ткани. Грибовидный микоз (ГМ) относится к одной из самых обширных морфологических групп Т - клеточных лимфом кожи [Гостева, 1995; Вавилов, Лезвинская, 1997; Lee et al, 1999]. В основе злокачественных лимфом кожи лежит неопластическая пролиферация клонов аномальных Т-лимфоцитов, B-лимфоцитов и/или их предшественников [Забанова, 1986; Приколаб, 1989; Процента, 1991; Лезвинская, 1997; Соколовский, 2000].

В последние годы немало работ направлено на изучение этиологии и патогенеза ЗЛК, однако до сегодняшнего дня не существует единой общепризнанной концепции причины возникновения данного заболевания [Скрипкин, 1995; Вавилов, 1996, 1999]. Рассматривается ряд таких факторов, как канцерогенное действие УФ излучения на кожу, различные производственные вредности, инфекционные агенты, генетические факторы и вирусная природа возникновения данной патологии [КатусевичД989; Фараджев,1990; Королькова,1996; Shupp, Winkermann, 1985; Peterman et al, 1986; Hall et al, 1991; Pusicku, Peter, 1992].

Научные открытия последних лет позволили по-новому рассмотреть патогенез ЗЛК с позиции нарушений различных звеньев иммунной системы кожи, в частности ее противоопухолевых реакций

Трофимова,1994; Tom et al, 1974; Streilein, 1978; Bahler et al, 1992; Edelson, 1983; Shimiry et al, 1992; Nikoloff, Turka, 1994.]. Появляется все больше данных о роли иммунных нарушений в возникновении опухолевых заболеваний. Утрата механизмов иммунного контроля способствует формированию неконтролируемых очагов роста моноклональных клеток. Работами последних лет показано, что у больных ЗЛК имеются изменения как в клеточном, так и в гуморальном звеньях иммунитета [Зарецкая, 1983; Мотевич, 2000; Аравийская, 1994;Аверина, 1995; Королькова, 1996].

Одним из специфических признаков действия опухоли на организм является вызываемое, ею состояние иммунодепрессии. Установлено, что в основе поражений иммунной системы лежат нарушения метаболизма пуриновых нуклеозидов и нуклеотидов, а также изменение активности ключевых ферментов пуринового обмена, главным образом аденозиндезаминазы (АДА) и пуриннуклеозидфосфорилазы (ПНФ) [Потапова, Храмцова, 1993]. В настоящее время активно развиваются исследования ферментов пуринового обмена при лимфопролиферативных заболеваниях [Ананьев, Акопян, 1989; Филоновская, 1993]. Продемонстрировано, что высокая активность АДА характеризует наименее зрелые Т-лимфоциты, что свидетельствует о ключевой роли фермента на ранних стадиях их дифференцировки [Shore et al, 1981]. Активность ПНФ увеличивается по мере дифференцировки Т-лимфоцитов, таким образом, в отличие от АДА, наиболее высокая активность характеризует зрелые лимфоциты [Kizaki et al, 1983]. Предполагается, что в некоторых случаях АДА может функционировать независимо от своих каталитических функций в качестве регуляторной и костимуляторной молекулы в Т клетках и регулировать аденозин-зависимое ингибирование пролиферации [Ruers et al, 1987; De Meester et al, 1994; Dong et al, 1996; Dong et al, 1997]. По некоторым данным в комплексе со своим рецептором АДА может регулировать синтез ИЛ2, ИЛ6, ИЛ 1(5 и, возможно, запускать передачу сигнала через комплекс Т клеточный рецептор (ТкР)/СДЗ [Schoen et al, 1987; Ansorge et al, 1987; Tanaka et al, 1993; Reinhold et al, 1993; Tanaka et al, 1994; Reinhold et al, 1994]. Нарушение функционирования данной цепочки может приводить к тяжелым иммунным заболеваниям и требует тщательного изучения.

Развитие локальных воспалительных реакций вокруг очагов поражения в коже опосредовано функционированием цитокинового каскада. Нарушение продукции цитокинов, возникающее при опухолевом росте иммунокомпетентных клеток, приводит к нарушению цитокиновой регуляции иммунной системы у онкологических больных.

Гены цитокинов сопряженно активируются с онкогенами при хромосомных аберрациях и других нарушениях работы генетического аппарата клетки, вследствие этого опухолевые клетки продуцируют цитокины, стимулирующие пролиферацию неопластических иммунокомпетентных клеток [Baker, Reddy, 1998].

В настоящее время в литературе широко обсуждается изменение соотношения уровней синтеза цитокинов Т хелперами обоих классов на последней стадии ЗЛК и при синдроме Сезари, показанное на системах in vitro, в частности ИЛ2, ИЛ4, ИФНу [Siegel et al, 2000]. Установлено, что при преимущественном синтезе цитокинов Т хелперами 2 класса, заболевание приобретает более агрессивные формы и увеличивается синтез провоспалительных цитокинов клетками микроокружения опухоли. В связи с тем, что заболевание сопровождается нарушением роста и дифференцировки Т лимфоцитов, можно предположить изменение пути передачи сигнала от Т клеток к их микроокружению.

Основной путь передачи сигнала в Т клетке проходит через молекулярный комплекс ТкР/СДЗ, который значительно зависит от адекватного функционирования АДА, и вызывает каскад киназных реакций с последующим синтезом различных цитокинов [Gorrell et al, 2001]. Установлено, что у больных ЗЛК нарушается механизм соматической рекомбинации функциональных генов ТкР, что определенным образом сказывается на функционировании Т клеток. В результате происходит экспансия моноклональных Т клеток, и производятся многочисленные копии одного и того же гена ТкР дочерними клетками в эпидермисе [Ройт, Бростофф, 2000].

Возможность выявления этих клонов методом полимеразной цепной реакции представляет удобный способ ранней диагностики данного заболевания. Отсутствие на сегодняшний день адекватных способов ранней диагностики и высокая чувствительность метода значительно увеличивают его практическую ценность.

Особенность злокачественной лимфомы кожи связана с тем, что обычные онкологические процессы не так зависимы от местных воспалительных реакций клеток окружения, как внутрикожная патология. Эпидермальные клетки микроокружения опухоли экспрессируют специфические для эпидермиса маркеры, роль которых при заболевании до конца не ясна. Ранее установлено, что клетки микроокружения опухоли повышенно экспрессируют рецептор к ЭФР, важный для клеточной пролиферации, опухолевой прогрессии, клеточной адгезии, клеточного движения, выживания и для ангиогенеза [Rosen and Goldberg 1989, Price et al., 1996, Shibata et al.,1996]. В связи с этим, исследование роли ЭФР может быть актуально в случае лимфоидной опухоли.

Комплексное изучение нарушения геномных перестроек ТкР, активности ферментов АДА и ПНФ в пораженных тканях, а также влияние цитокинов и ростовых факторов на опухолевые процессы позволит наиболее полно охарактеризовать разные стадии ЗЛК. Будет также предложен новый способ диагностики ЗЛК, позволяющий обнаружить заболевание уже на ранних стадиях.

Цель работы. Изучить механизмы регуляции биохимических, иммунологических и генетических нарушений в норме и при злокачественных лимфомах кожи на различном биологическом материале.

Задачи исследования.

1. Определить активность ферментов пуринового обмена аденозиндезаминазы (АДА) и пуриннуклеозидфосфорилазы (ПНФ) в различных тканях в зависимости от стадии ЗЛК.

2. Провести сравнительный анализ основных цитокинов (ИЛ2, ИЛ4, ИЛ 1(3) в лимфоцитах и сыворотке крови в норме и при ЗЛК.

3. Оценить концентрацию эпидермальных ростовых и воспалительных факторов (ЭФР и ФИО - альфа) для изучения их влияния на опухолевой процесс.

4. Оптимизировать и оценить эффективность методики ранней диагностики нарушений генетической перестройки у цепи Т клеточного рецептора при злокачественных лимфомах кожи в коже и лимфоцитах периферической крови на основе полимеразной цепной реакции.

Научная новизна исследования.

Впервые у больных злокачественной лимфомой кожи изучена активность ферментов нуклеинового обмена в различных тканях в зависимости от стадии заболевания. Наиболее эффективным и прогностически значимым критерием для оценки тяжести заболевания является определение активности АДА в коже и лимфоцитах. Изменение активности данного фермента в этих тканях в дальнейшем поможет глубже изучить механизмы активации сигнальных молекул в опухолевых Т лимфоцитах.

Впервые проведено сравнительное исследование активности пуринуклеозидфосфорилазы (ПНФ) в различных тканях при злокачественных лимфомах кожи на разных стадиях заболевания. Полученные данные показывают, что, несмотря на то, что в сыворотке крови наблюдался пониженный уровень активности на всех стадиях, в целом изменение активности фермента, вероятно, не может служить информативным критерием для оценки тяжести заболевания.

Впервые было продемонстрировано, что in vivo уже на ранних стадиях ЗЛК наблюдается тенденция к изменению баланса синтеза цитокинов Т хелперами класса 1 и 2. Исследования проводились не только в сыворотке, но и в лимфоцитах периферической крови.

Впервые определен сравнительный уровень эпидермального ростового фактора в коже и сыворотке крови при ЗЛК, и оценена информативность данных показателей.

Проведен сравнительный анализ ТкР в коже и лимфоцитах периферической крови при злокачественных лимфомах кожи и обнаружено, что их нуклеогидные последовательности в некоторых случаях не совпадают. Практическая значимость работы.

Оптимизирована и предложена в клиническую практику современная методика ранней диагностики ЗЛК методом полимеразной цепной реакции.

Разработаны и апробированы дифференциальные лабораторные методы оценки тяжести злокачественных лимфом кожи в сыворотке крови, лимфоцитах периферической крови, эритроцитах и биоптатах кожи из очагов поражения.

Результаты проведенного исследования используются в курсе лекций и практических занятий врачей-ординаторов ГУ ЦНИКВИ МЗ РФ.

Апробация работы.

Результаты работы были доложены и обсуждены на:

1. 8-ой Международной конференции "СПИД, рак и родственные проблемы", 19-24 мая 2000г, Санкт-Петербург

2. 9-ой Международной конференции "СПИД, рак и родственные проблемы", 27 мая - 1 июня 2001 г, Санкт-Петербург

3. 8-ом Всероссийском съезде дерматовенерологов, 20 июня 2001 г., Москва

4. 10th Congress of European Academy of Dermatology and Venereology, 10-14 октября 2001г., Мюнхен, Германия.

5. 20th World Congress of Dermatology, 1-6 июля, 2002 г., Париж, Франция

6. Национальных днях лабораторной медицины России-2001, 8-11 октября, Москва

7. Национальных днях лабораторной медицины России-2002, 7-10 октября, Москва

8. Научно-практической конференции ГУ ЦНИКВИ МЗ РФ, 25 октября, 2002 г., Москва

9. 13-ой зимней международной молодежной школе "Перспективные направления физико-химической биологии и биотехнологии", 7-9 февраля 2001 г., Москва

Публикации:

По теме диссертации опубликовано 12 печатных работ.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту

1. Активность аденозиндезаминазы при злокачественных лимфомах кожи в сыворотке крови, лимфоцитах периферической крови и коже изменяется в зависимости от стадии заболевания.

Заключение диссертации по теме «Биохимия», Савватеева, Мария Владимировна

ВЫВОДЫ

1. Установлено, что активность аденозиндезаминазы в коже, сыворотке крови и лимфоцитах периферической крови при злокачественной лимфоме кожи изменяется в зависимости от стадии заболевания. В лимфоцитах активность АДА на второй и третьей стадии заболевания понижена (28,5±5 нмоль/ч*10А6 клеток, 36,2+0,8 нмоль/ч*10А6 клеток при норме 102,5±12 нмоль/ч*10А6 клеток). В коже активность фермента повышена на всех стадиях заболевания с тенденцией к снижению на третьей стадии (218,5±21,5 нмоль/ч*мг ткани, 151,6+24 нмоль/ч*мг ткани, 110,6±18 нмоль/ч*мг ткани при норме 50,7+3,2 нмоль/ч*мг ткани). В сыворотке крови активность АДА была достоверно ниже нормы на всех стадиях заболевания (37,2+9 нмоль/ч*мг белка, 34,5±11 нмоль/ч*мг белка, 10,5±3 нмоль/ч*мг белка при норме 98,1±10 нмоль/ч*мг белка).

2. Активность пуриннуклеозидфосфорилазы не является информативным критерием для оценки тяжести заболевания в коже, лимфоцитах и эритроцитах.

3. Обнаружено, что в лимфоцитах периферической крови уровень ИЛ2 на 1-ой и 3-й стадиях достоверно ниже нормы в 2-3 раза (2,8±0,3 МЕ/10А6 клеток и 2,4±0,9 МЕ/1СГ6 клеток при норме 7,9±05 МЕ/10А6 клеток). Концентрация ИЛ4 в лимфоцитах периферической крови достоверно повышается на 3-й и на 1-й стадиях (21+1,3 МЕ/10А6 клеток и 12,2±1,5 МЕ/10А6 клеток при норме 3,9±0,6 МЕ/10А6 клеток). Вероятно, уже на второй и третьей стадиях ЗЛК изменяется баланс синтеза ИЛ2 и ИЛ4 Т хелперами первого и второго классов.

4. В коже из очагов поражения на первой стадии злокачественной лимфомы кожи уровень эпидермального ростового фактора

96 достоверно уменьшается по сравнению с нормой, на второй стадии уровень эпидермального ростового фактора не отличается от нормы и достоверно увеличивается на третьей стадии злокачественной лимфомы кожи (6,8±1,4 пкг/мг.ткани, 26,7±5,1 пкг/мг.ткани, 39,3±2,1 пкг/мг.ткани при норме 25,7+1,7 пкг/мг.ткани). Уровень фактора некроза опухоли а в коже достоверно увеличивается на второй и третьей стадии злокачественной лимфомы кожи (8,7±1,8 пкг/мг.ткани, 6,8+0,9 пкг/мг.ткани при норме 4,7+0,3 пкг/мг.ткани).

5. Методика, основанная на определении нарушения перестройки V районов у цепи Т клеточного рецептора методомполимеразной цепной реакции, может быть использована для ранней диагностики злокачественной лимфомы кожи. Чувствительность методики составляет от 0,1% до 5% неопластических клеток в зависимости от вида соматической перестройки и исследуемого материала.

6. Проведен сравнительный анализ Т клеточных рецепторов в коже и лимфоцитах периферической крови при злокачественных лимфомах кожи и обнаружено, что их нуклеотидные последовательности в некоторых случаях несовпадают.

БЛАГОДАРНОСТИ

Выражаю глубокую благодарность своему научному руководителю профессору Марине Ивановне Савиной за постоянное внимание, научные консультации и содействие в работе.

Выражаю сердечную благодарность заведующему кафедрой лабораторной диагностики профессору Руслану Тимофеевичу Тогузову за всестороннюю помощь, за постоянное внимание и всем сотрудникам кафедры за помощь в работе.

Сердечно благодарю заведующую отделением биохимии д.б.н. Людмилу Игоревну Маркушеву и всех сотрудников отделения биохимии ГУ ЦНИКВИ Минздрава России за помощь в выполнении экспериментальных исследований и помощь в процессе написания данной работы.

Выражаю глубокую благодарность сотрудникам отделения клинической дерматологии ГУ ЦНИКВИ Минздрава России под руководством профессора Владимира Александровича Самсонова за неоценимую помощь в диагностике и сборе клинического материала, особую признательность выражаю ведущему научному сотруднику, к.м.н. Инне Александровне Чистяковой.

Искренне благодарна всем сотрудникам лаборатории Молекулярной биологии развития ИМБ РАН под руководством д.б.н. Белявского за предоставленную возможность фрагмента работы на базе лаборатории.

Огромное спасибо моей семье и друзьям за оказанную поддержку.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Первичные злокачественные лимфомы кожи это гетерогенная группа заболеваний опухолевой природы с неизвестной этиологией и не выявленным патогенезом. Заболевание характеризуется миграцией злокачественных Т клеток в эпидермис, возникновением там опухоли и последующим взаимодействием опухолевых клеток с эпидермальными. Лимфоциты, рециркулирующие в коже и постоянно присутствующие в эпидермисе, взаимодействуют с эпителиальными клетками.

Основной функцией эпидермальных клеток является индукция пролиферации и дифференцировки Т лимфоцитов посредством секреции иммунорегуляторных цитокинов и ростовых факторов. Изучение нарушений секреции основных цитокинов и их влияния на опухолевый рост представляет собой один из важных моментов изучения патогенеза ЗЖ.

Развитие локальных воспалительных реакций вокруг очагов поражения в коже опосредованно функционированием цжгокинового каскада. Нарушение продукции цитокинов, возникающее при опухолевом росте иммунокомпетентных клеток, приводит к нарушению цитокиновой регуляции иммунной системы у онкологических больных.

Анализ уровня провоспалительных цитокинов в сыворотке крови в норме и при злокачественных лимфомах кожи выявил, что концентрация ИЛ 1(3 в сыворотке больных ЗЛК на первой стадии заболевания достоверно не отличалась от нормы, достоверно снижалась на второй стадии и достоверно повышалась на третьей по сравнению с нормой (68,7±5Д пкг/мл, 26,9+3,2 пкг/мл, 86,8±9,0 пкг/мл при норме 56,4±8,0 пкг/мл).

Нами выявлено достоверное увеличение концентрации ФНО-а в сыворотке и коже на второй и третьей стадиях заболевания ЗЛК по мере утяжеления патологического процесса по сравнению с нормой сыворотка - 122,8+15,0 пкг/мл, 142,5±15,0 пкг/мл при норме 57,1±5,8 пкг/мл; кожа - 8,7+1,8 пкг/мг.ткани, 6,8±0,9 пкг/мг .ткани при норме 4,7±0,3 пкг/мг.ткани).

В сыворотке крови уровень ИЛ6 индивидуально варьировал в широких пределах, не выявляя статистически значимого отличия от нормы и от стадии заболевания. Однако наблюдалась тенденция, при которой повышенная концентрация этого цитокина соответствовала наиболее тяжелым формам заболевания ЗЛК

Многочисленные исследования in vitro показали, что на поздних стадиях заболевания, а также при синдроме Сезари происходит смена субпопуляций Т хелперов с класса Тх1 на класс Тх2, и в связи с этим наблюдаются изменения в синтезе ряда основных цитокинов, таких как ИФНу, ИЛ2, ИЛ4 и т.д. Возможной причиной такого изменения, вероятно, могут являться нарушения функционирования основных сигнальных путей, проходящих через комплекс ТкР/СДЗ и напрямую связанных с синтезом ИЛ2/ИЛ2Р. В любом случае необходимо изучить данное нарушение на системе in vivo и на ранних стадиях заболевания злокачественными лимфомами кожи.

Нами было показано, что в лимфоцитах периферической крови уровень Ш12 на 1-ой и 3-й стадиях был достоверно ниже нормы в 2-3 раза (2,8±0,3 МЕ/10Л6 клеток и 2,4±0,9 МЕ/10Л6 клеток). На второй стадии заболевания концентрация ИЛ2 не отличалась от нормы (7,5±0,2 МЕ/10А6 клеток при норме - 7,9+0,5 МЕ/10А6 клеток). Концентрация ИЛ4 в лимфоцитах периферической крови достоверно повышалась на 3-й и на 1-й стадиях (21±1,3 МЕ/10А6 клеток и 12,2±1,5 МЕ/10А6 клеток при норме 3,9±0,6 МЕ/10А6 клеток).

Наши данные позволяют продемонстрировать, что и in vivo при более легких формах ЗЛК имеется тенденция к изменению баланса синтеза цитокинов обоих классов, достоверно выявляясь, вероятно, уже на второй стадии ЗЛК при первичном образовании опухоли. Высокий уровень ИЛ4 на первой стадии заболевания, вероятно, может свидетельствовать о повышенной продукции антител на начальных этапах заболевания

В связи с тем, что основной зоной локализации опухоли является эпидермис, ростовые факторы, характеризующие функционирование данной ткани, представляют особенный интерес.

В результате проведенных исследований нами было показано, что уровень эпидермального ростового фактора в коже из очагов поражения на начальных стадиях заболевания достоверно уменьшался по сравнению с нормой (6,8±1,4 пкг/мг.ткани).

На второй стадии заболевания уровень ЭФР не отличался от нормы (26,7±5,1 пкг/мг.ткани при норме 25,7+1,7 пкг/мг.ткани), и достоверно увеличивался на третьей стадии (39,3+2,1 пкг/мг.ткани).

Было показано, что большинство солидных опухолей, экспрессируют рецептор к эпидермальному ростовому фактору на повышенном уровне, а собственно эпидермальный ростовой фактор нарушает механизмы естественной клеточной гибели. Изучение влияния эпидермального ростового фактора на функционирование лимфоидной опухоли, вероятно, сможет значительно помочь в исследовании этиологии данного заболевания.

Нами выявлено достоверное увеличение концентрации ФНО-а в коже на второй и третьей стадиях заболевания ЗЛК по мере утяжеления патологического процесса по сравнению с нормой (8,7±1,8 пкг/мг.ткани и 6,8+0,9 пкг/мг.ткани при норме 4,7±0,3 пкг/мг.ткани) (рис. 1).

Небольшие различия в тенденциях изменения концентрации ФНО-а в сыворотке крови и эпидермисе, вероятно, отражают вклад различных клеток микроокружения опухоли в развитие воспалительного процесса.

Рисунок 1. Сравнительная оценка концентраций ФНО-а и ЭФР в коже при ТЗЛК.

Известно, что в культурах фибробластов и кератиноцитов ФНО-а инициирует каскад синтеза эпидерм альных цитокинов и регулирует их роль при воспалительных реакциях [Wood et al, 1994]. Можно предположить, что повышенная продукция ЭФР в коже при 3JIK может быть вызвана повышением уровня эпидермального ФНОа.

В основе поражений иммунной системы, проявляющихся в тяжелой иммунной недостаточности, лежат нарушения метаболизма пуриновых нуклеозидов и нуьслеотидов. Снижение активности ключевых ферментов пуринового обмена, главным образом аденозиндезаминазы (АДА), и следующие за этим многочисленные изменения, являющиеся результатом накопления в клетке значительных концентраций дезоксиаденозина и аденозина, приводят в конечном итоге к остановке биосинтеза РНК и ДНК, повреждениям в структуре молекулы ДНК и клеточной гибели [Martin, Gelfand, 19811.

В цитозоли лимфоцитов на начальных стадиях заболевания (1 стадия грибовидного микоза, пойкилодермическая форма) показатели активности АДА достоверно не отличались от нормы (98,3±19 нмоль/ч*10А6 клеток при норме 102,5±12 нмоль/ч* 10А6 клеток).

На второй стадии заболевания наблюдалось достоверное снижение активности АДА приблизительно в 3 раза по сравнению с нормой, которое достоверно не изменялось на опухолевой стадии заболевания (28,5±5 нмоль/ч*10Л6 клеток, 36,2±08 нмоль/ч*10А6 клеток). В свободном состоянии АДА метаболизирует внеклеточный аденозин, дозозависимо регулируя, таким образом, пролиферацию Т клеток. При связывании со своим мембранным рецептором СД26 и локализации на поверхности Т клеток фермент уменьшает способность дезаминировать аденозин. Образовавшийся комплекс АДА/СД26 по результатам опытов in vitro способен заменять комплекс ТкР/СДЗ и служить достаточным фактором для начала передачи сигнала на ИЛ2/ИЛ2Р. В связи с тем, что при злокачественных лимфомах кожи было обнаружено отсутствие на поверхности Т клеток экспрессии молекулы СДЗ, потенциальная способность АДА/С Д26 функционировать, как сигнальные молекулы в интерлейкиновом каскаде требует длительного изучения.

Результаты определения активности ПНФ в эритроцитах при ЗЛК выявили, что на начальных стадиях заболевания, активность ПНФ достоверно не отличалась от нормы и была достоверно выше нормы на третьей стадии ЗЛК (137,2±16 нмоль/ч*мг бежа, 143,1±21 нмоль/ч*мг белка, 252,6±19 нмоль/ч*мг белка при норме 152,8±12 нмоль/ч*мг белка). Обнаруженное нами изменение активности фермента в эритроцитах является отражением метаболических процессов, происходящих в организме по мере развития опухоли, то есть ослабление функций иммунной системы, нарушение синтетических функций клеток и нехватки основных субстратов.

ПНФ является важной и неотъемлемой частью пуринового метаболизма и регулирует начальные этапы Т клеточной дифференцировки. Наиболее важным свойством фермента является индукция супрессорной активности Т лимфоцитов. Использование данного свойства позволяет при подавлении активности ПНФ производить селективную деструкцию Т клеток при лимфопролиферативных заболеваниях. Погибают только пролиферационно-зависимые Т супрессоры, а другие клетки и клеточные функции сохраняются.

Активность ПНФ на всех стадиях ЗЛК в лимфоцитах периферической крови достоверно не отличалась от нормы (181,9±28 нмоль/ч*10А6 клеток, 150,5±2,7 нмоль/ч*10л6 клеток, 130,3±19 нмоль/ч*10А6 клеток при норме 165,3±13 нмоль/ч*10А6 клеток). Тем, что большинство опухолевых лимфоцитов завершило свою дифференцировку, можно объяснить неизменность активности ПНФ в лимфоцитах на всех стадиях заболевания.

Специфическое распознавание антигена лимфоцитами - это центральный момент запуска и регуляции эффективного иммунного ответа. Располагающийся на клеточной поверхности комплекс ТкР/СДЗ является основным путем активации иммунного ответа. Было показано, что при злокачественных лимфомах кожи происходит нарушение процесса перестройки генов ТкР и экспансия моноклональных Т клеток, производятся многочисленные копии одного и того же гена ТкР дочерними клетками в эпидермисе. Т клетки несущие моноклональные ТкР начинают неограниченно делиться и составляют 90% опухолевых клеток в очаге поражения. Клетки, несущие данную мутацию в ТкР не поддаются культивированию и теряют моноклональный признак в культуре в течение несколько пассажей. В связи с этим, in vitro исследования данной проблематики весьма затруднены.

Было установлено, что при ЗЛК в очаге поражения и в лимфоцитах периферической крови могут встречаться моноклональные популяции ТкР как с одинаковыми, так и с различными V районами. Зависимость между степенью заболевания и идентичностью нуклеотидных последовательностей Т клеточных моноклонов кожи и лимфоцитов периферической крови у больных ЗЛК не была обнаружена.

Отсутствие единой системы классификации злокачественных лимфом кожи является следствием отсутствия адекватных средств ранней диагностики данного заболевания. Обнаруженное нарушение в генетической перестройке у цепи Т клеточных рецепторов дало замечательную возможность разработать быструю и эффективную методику диагностики. Методом полимеразной цепной реакции можно оценить наличие или отсутствие моноклональной популяции ТкР как в коже, так и в лимфоцитах периферической крови уже на начальных стадиях заболевания. Молекулярно-биологические методы диагностики совместно с классическими морфологическими и гистологическими исследованиями помогут унифицировать систему оценки злокачественных лимфом кожи.

Проведенные исследования выявили, что при злокачественных лимфомах кожи на первой стадии заболевания моноклональная популяция Т клеток выявляется в 62% случаев при исследовании ДНК из биоптатов кожи и в 12% при исследовании ДНК из лимфоцитов периферической крови.

На второй стадии ЗЛК в ДНК из кожи и лимфоцитов отмечалось нарушение геномной перестройки у-цепи ТкР в 77% и 45% случаев, соответственно.

Анализ полученных результатов на третьей стадии ЗЛК показал, что моноклональная популяция ТкР выявляется в биоптатах кожи в 100% случаев, а в лимфоцитах - в 70%.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Савватеева, Мария Владимировна, 2003 год

1. Аверина J1.B. Применение гаммаферона в терапии больных грибовидным микозом на основании изучения патогенетического значения цитокинов: Автореф. дис. . канд. мед. наук. - М., - 1995.-16с.

2. Ананьев A.B., Акопян Ж.И. Значение пуриннуклеозидфосфорилазы при патологиях / / Эксперим. и клин, мед.- 1989,- Т.29, № 3. С.266-271.

3. Аравийская Е.Р., Разнатовский И.М., Рыбакова М.Г. Влияние проспидина на клетки эффекторы иммунной системы в очаге опухоли у больных пойкилодермической лимфомой кожи. // Дермато - венерол. и косметол. - 1994. - №1. - С. 1821.

4. Бейум А. Выделение лимфоцитов, гранулоцитов и макрофагов. // Лимфоциты: выделение, фракционирование и характеристика. -М: Медицина, 1980 С.9-19.

5. Борзенко Б.Г. Возрастные особенности метаболизма предшественников ДНК в организме здоровых женщин, больных мастопатией и раком молочной железы. / / Вопросы мед. химии,- 1990. -Т.36, №5 . С.58-61.

6. Вавилов А.М., Лезвинская Е.М. Первичные лимфомы кожи, Фенотипическая характеристика основных клинических форм. Классификации // Архив патологии. 1997. - N6.

7. Вавилов А.М., Самсонов В.А., Чистякова И.А., Проценко В. Д. Перспективы использования морфометрического анализа гистологических препаратов у больных злокачественными лимфомами кожи. // Сб. научн. трудов ЦКВИ. М, - 1996. - С.29-33.

8. Вавилов A.M., Проценко В.Д., Самсонов В.А., Васина Н.И., Лукьянова Е.А, Морфологический мониторинг мазков крови из очагов поражения у больных злокачественными лимфомами кожи // Вести, дерматол. и венерол. -1999.-№5.-с.7-11.

9. Васина Н.И. "Фотохимиотерапия и лейкинферон в комплексном лечении больных злокачественными лимфомами кожи (клинико-морфологическое исследование). -Дис. . канд. мед. наук-М.- 1999.-235.С.

10. Гостева И.В. Фотоферез в комплексной терапии Т-ютеточных злокачественных лимфом кожи: Автореф. Дис.,. канд. мед. наук, М„ -1995,- с.26.

11. Забанова Е.В. Клинико морфологические особенности злокачественных лимфом кожи (грибовидного микоза, первичного ретикулезаи ретикулосаркоматоза): Автореф. дис. . канд. мед. наук. -М., - 1986.-е.18.

12. Зимина И.В., Лопухин Ю.М., Арион В .Я.// Иммунология. -1994.-Ш.-С.8-13.

13. Зарецкая Ю.М. Клиническая иммуногенетика. М., - 1983.

14. Казаков Д.В. Новые критерии дифференциальной диагностики ранних форм лимфом кожи и бляшечного парапсориаза: Автореф. дис. . канд. мед. наук.- СПб.,-1999.-24.с.

15. Королькова Т.Н. Иммунный надзор и опухолевая прогрессия при лимфомах кожи низкой степени злокачественности: Автореф. дисс. . д-ра. мед. наук. -СПб.,-1996,- З5.с.

16. Ковальчук Л.В., Ганковская Э.И., Рубакова Э.И. Система цитокинов,- М.: РГМУ, 1999,- 77с.

17. Кутасевич.Ф.Я. Особенности патогенеза нней диагностики и рациональной терапии грибовидного микоза: Автореф. дис. . д-ра мед. наук. -М,- 1989.-c.32.

18. Кашкин К.П. Цитокины иммунной системы: основные свойства и иммунобиологическая активность. // Клин. лаб. диагн,- 1998.-№.11 С.21-31.

19. Кетлинский С.А., Калинина Н.М. Цитокины мононуклеарных фагоцитов в регуляции реакции воспаления ииммунитета.// Иммунология. 1995. -№.3,- С.30-44.

20. Ковальчук Л.В., Ганковская Л.В. Иммуноцитокины и локальная иммунокоррекция. // Иммунология,- 1995. №1.- С. 4-7.

21. Ламоткин И.А. Поражения кожи при злокачественных лимфопролиферативных заболеваниях. Автореф. дис. . д-ра мед.наук.- СПб.,2001- 40.с.

22. Лезвинская Е.М. Некоторые иммунологические показатели у больных гемодермиями: Автореф. дис. . канд. мед. наук, -М., 1973.

23. Мотевич В.М. Особенности клинического течения, диагностики, лечения, функционального состояния иммунной системы и диспансеризации больных лимфомами кожи в республике Беларусь: Автореф. дис.канд. мед. наук, Минск, 1994.-2 I.e.

24. Олисова О.Ю. Псевдолимфомы кожи ( этиология, клиника, диагностика и лечение ) Автореф. дис. . д-ра мед.наук,-М.,2002- 58.с.

25. Персина И.С. Клиническая морфология злокачественных лимфом кожи: Автореф. дис. . д-ра мед. наук. М., - 1989.30 с.

26. Потапова Г.И., Храмцова С.Н., Сухова Т.П. Мухоян И.А. Биохимические механизмы нарушений функционирования лимфоцитов и макрофагов при злокачественном росте / / Вестн. РАМН.- 1993. № 4. - С.3-7.

27. Приколаб И.П. Т клеточные лимфомы кожи ( клиника, морфология, лечение ): Автореф. дис. .канд. мед. наук. - М., - 1989.-16 с.

28. Проценко Т.В. Индивидуальное прогнозирование и дифференциальный подход к лечению при злокачественных лимфомах кожи на основании изучения неспецифической резистентности организма: Автореф. дис. . д-ра мед. наук. -М., 1991.-25с.

29. Робинсон М.В., Труфакин В.А. Ферменты пуринового обмена в жизнедеятельности иммунокомпетентных клеток // Успехи соврем, биологии. 1993- Т. 113.- Вып.1,- С.82-94.

30. Родионов А.Н. Эритродермические лимфомы кожи: Дис. д-ра мед. наук. М., - 1985.-394 с.

31. Ройт А., Бростофф Дж., Мейл Д. Иммунология,- М.: Мир,2000.-581с.

32. Симбирцев A.C. Биология семейства интерлейкина-1 человека. // Иммунология. -1998.-№3.-С. 9-17.

33. Скрипкин Ю.К.- редактор // Кожные и венерические болезни. Руководство- М: Медицина, 1995,- Т.1.- 574 с.

34. Тихонов Ю.В. Метаболизм пуриновых и пиримидиновых соединений и опухолевый рост: Дисс. д-ра биол. наук. -М.-1992.-201.с.

35. Тихонов Ю.В., Маркушева Л.И., Тогузов Р.Т. Метаболизм пуриновых соединений при псориазе // Клиническая лабораторная диагностика. 1998.- № 3.- С.3-6.

36. Трофимова И.Б. Т-клеточные злокачественные лимфомы кожи: иммунологические особенности и терапия: Дис. . д-ра мед. наук. -М.-1994,- 277.с.

37. Фараджев З.Г. Лимфопролиферативные заболевания кожи и саркомы Калоши (патогенез и методы терапии): Автореф. дис. . д-ра мед.наук,- М.,1990- 31.с.

38. Филановская Л.Н., Никитин Д.О., Того A.B. с соавт. Активность ферментов деградации пуриновых нуклеотидов и субпопуляции лимфоидных клеток у детей с синдромом Дайемонда-Блекфэна(СДБ) / / Гематол. и трансфузиол.-1993.-№ 1.-С. 19-22.

39. Храмцова С.Н., Потапова Г.И., Шапот B.C. Изменения пуринового обмена и иммунного ответа в лимфоцитах тимуса и селезенки мышей СЗНА при хроническом гепатоканцерогенезе // Бюлл. экспер. биол. и мед.-1984,-т.97,№8,- с.217-220.

40. Ярилин A.A. Система цитокинов и принципы ее функционирования в норме и при патологии.// Иммунология. 1997,- N.5.- С 7-14

41. Ястребов В.В. Клинико морфологическое обоснование лечения больных лимфомой кожи с медленной опухолевой прогрессией в условиях диспансеризации: Автореф. дис. . канд. мед. наук,- Л.Д990. - 20.с.

42. Ястребов В.В., Разнатовский И.М. // Лимфомы кожи. Урогенитальная герпесвирусная инфекция. Изд. Сотис. -СПб.- 2000.-192 с.

43. Abrams J.T., Ghosh S.K., Defreitas Е. Sezary T-cell activating factor induces functional intedeukin-2 receptors on T-cells derived from pacients with Sezary syndrome // Cancer Res. -1993. - V.15. -N53(22). - P.5501-5506.

44. Ansorge S, SchoE E. Dipeptidyl peptidase IV (DP IV), a functional marker of the T lymphocyte system.// Acta

45. Histochem.- 1987.-V.82,- P.41-4 6.

46. Ansorge S, SchoEn E, Kunz D. Membrane-bound peptidases of lymphocytes: functional implications. // Biomed. Biochim. Acta.-1991.-V.50.- P.799-807.

47. Aragane Y. Transforming growth factor-alpha induces interleukin-6 in the human keratinocyte cell line HaCaT mainly by transcriptional activation / / J. Invest. Dermatol. 1996 .-V.106,N6.-P.l 192-1197.

48. Baadsgaard O., Fisher G.J., Voorhees J.J., Cooper K.D. Interactions of epidermal cells and T cells in inflammatory skin diseases / / J. Am. Acad. Dermatol. 1990. - V.23,N 6. - Pt. 2. -P. 1312-1316; discussion 1316-1317.

49. Bahler D.W, Berry G„ Oksenberg J., Warake R.A. et al. Diversity of T-cell antigens receptor variable genes used by mycosis fungoides ceil // Am.J.Pathol. -1992.-V. 140,N1 .-P. 154. Bakels V, van Oostveen JW, van der Putte SC, Meijer CJ,

50. Willemze R. Eumunophenotyping and gene rearrangement analysis provide additional criteria to differentiate between cutaneous T-cell lymphomas and pseudo-T-cell lymphomas.// Am J Pathol. 1997. - V. 150, N6. - P1941-1949.

51. Baker S.J., Reddy E.P. Modulation of life and death by the TNF receptor superfamily.// Oncogene. -1998 V.-17.-P.-3261-3270.

52. Barna M., Bos J. D., Kapsenberg M. L., Snijdewint F.G. Effect of calcitriol on the production of T-cell-derived cytokines in psoriasis//Br. J. Dermatol. 1997. - V. 136,N4. -P. 536-541.

53. Bednarczyk JL, Carroll SM, Marin C, Mclntyre BW. Triggering of the proteinase dipeptidyl peptidase IV (CD26) amplifies human

54. T lymphocyte proliferation. // J. Cell Biochem.- 1991.-V.-46,-P.206-218.

55. Borish L., Dishuch J., Cox L., Mascali JJ. Sezary syndrome with elevated serum Ig E and hypereosinophilia role of dysregulated cytokine production // J.Allerg.Clin.Imniunol. - 1993. - V.92. -Nl(partl). - P. 123-131.

56. Carpenter G., Cohen S., Epidermal growth factor // Ann. Rev.Biochem.- 1979.- V.48.-P. 193-216.

57. Carson DA, Seegmiller JE. Effect of adenosine deaminase inhibition upon human lymphocyte blastogenesis. // J. Clin. Invest.- 1976.-Y.57.-P.274-282.

58. Cerroni L, Kerl H // Acta Dermatovenerologica a.p.a.,- 1992.- V. l.-P. 13-19.

59. Chan W.C., Hooper C., Wickert R., Ben-son J.M. et al. HTLV-1 sequence in lymphoproliferative disorders // Diagn.Mol.Pathol. -1993. V.2. - N3. - p.192-199/

60. Chin Y.H., Falanga V., Cai J.P. Lymphocyte adhesion to psoriatic dermal endothelium: mechanism and modulation II J. Invest. Dermatol. 1990. - V. 95,N. 5. - P. 29-31.

61. Connors J.M., Hsi E.D., Foss F. M. Lymphoma of the skin. // Hematology. (Am. Soc .Hematol. Educ .Program).-2002.- P.263-282.

62. Cooper K.D. Psoriasis, leukocytes and cytokines. / / Dermatol. Clin. 1990. - V. 8,N. 4. - P.737-745.

63. Cooper K.D. Skin-infiltrating lymphocytes in normal and disordered skin: activation signals and functional roles in psoriasis and mycosis fungoides-type cutaneous T cell lymphoma //J. Dermatol. 1992. - V. 19,N. 11. - P. 731-737.

64. Daddona PE, Kelley WN. Human adenosine deaminase binding protein. Assay, purification, and properties. // J. Biol. Chem.-1978,- V.253.-P.4617-4623.

65. Dalloud A., Laroche I., Bagot M., et al. Interleukin-7 is a growth factor for Sezary lymphoma cells. // J. Clin. Invest.- 1992 .-v.90.-p. 1054-1060.

66. De Meester I, Vanham G, Kestens L et al. Binding of adenosine deaminase to the lymphocyte surface via CD26.// Eur. J. Immunol.- 1994.-V.24.-P.566-570.

67. De Meester IA, Kestens LL, Vanham GL et al. Costimulation of CD41 and CD81 T cells through CD26: the ADA-binding epitope is not essential for complete signaling.//J. Leukoc. Biol.- 1995,-V.58.-P.325-330.

68. Dollapicolla B., Magnari M., Dacha M., Giorgi P. Confirmation of regional assignment of nucleoside phosphorylase to band 14q13 by gene-dosage studies // Human Genet. 1979. -V. 50. - P. 341-343.

69. Dong RP, Kameoka J, Hegen M et al. Characterization of adenosine deaminase binding to human CD26 on T cells and its biologic role in immune response. // J. Immunol.- 1996.-V.156,-P.1349-1355.

70. Dong RP, Tachibana K, Hegen M et al. Determination of adenosine deaminase binding domain on CD26 and its immunoregulatory effect on T cell activation.// J. Immunol.-1997.-V.159.-P.6070-6076.

71. Dosh H.M., Mansour A., Cohen A. Inhibition of supressor T-cell development following deoxyguanosine administration. // Nature. 1980.-V.285.-P. 494-496.

72. Duncan K, Heald P Cutaneous T-cell lymphoma: centuries of controversy.// Semin. Cutan. Med. Surg. 1998. - V. 17, N2 -P133-140.

73. Edelson R.L. Pathogenesis of T-cell lymphoma of skin // J.Amer.Acad.Derm. 1983. - V.9,N6. - P.957-960.

74. Elder J.T. Cytokine and genetic regulation of psoriasis // Advan.in Dermatology.-1995.-V.10- P.99-133.

75. Eriksen KW, Nielsen M, Kaltoft K, Svejgaard A, Nissen MH, Ropke C, Odum N Oligonucleotide fishing for STAT6: cross-talk between IL-4 and chemokines.// Exp. Clin. Immunogenet. -2001,-V. 18, N4. P233-241.

76. Franco R, Valenzuela A, Lluis C, Blanco J. Enzymatic and extraenzymatic role of ecto-adenosine deaminase in lymphocytes.//Immunol. Rev.- 1998.-V.161.-P.27-42.

77. Fraser-Andrews EA, Woolford AJ, Russell-Jones R, Seed PT, Whittaker SJ. Detection of a peripheral blood T cell clone is anindependent prognostic marker in mycosis fiingoides.// J. Invest. Dermatol.- 2000. V. 114, N1- PI 17-121.

78. Goldman B.D., Oh S.K., Davis B.E., Kadin M.E. et al. Serum soluble inter leukin receptor levels in erythrodermic cutaneous T-cell lymphoma correlate with response to photopheresis - based treatment// Arch.Dermatol. - 1993. - V. 129,N9.-P.I 166-1170.

79. Goldsby A, Kindt T, Osborne b, Kuby J Immunology // Freeman Publishing Group, 5th Edition -2003

80. Goldschmidt-Clermont H., Petrini M., Knansari N., Fudenberg H. The role purine nucleoside phosphoiylase enzyme in autologous rosett-fonning cells // Cell Immunol. 1984. - V. 87. - P. 340347.

81. Gorrell M.D., Gysbers V., MCCaughan G.W. CD26:A multifunctional integral membrane and secreted protein of activated lymphocytes.// Scand.J.Immunol.-2001.-N.54.-p.249-264.

82. Grell M., Becke F.M., Wajant H. et. al. // TNF receptor type2 mediates thymocyte proliferation independently of TNF receptor type 1.// Eur. J. of Immunol.-1998.-V. 28.-P.257-263.

83. Grell M., Douni E., Wajant H., et.al. The transmembrane form of tumor necrosis factor in the prime activating ligand of the 80 kDa tumor necrosis factor receptor. // Cell.-1995.-V.83.-P.793-802.

84. Guitart J, Kaul K. A new polymerase chain reaction-based method for the detection of T-cell clonality in patients with possible cutaneous T-cell lymphoma.// Arch. Dermatol. 1999. -V. 5,N2-PI58-162.

85. Hackel P.O., Zwick E., Prenzel N., Ullrich A. Epidermal growth factor receprors: critical mediators of multiple receptor pathways. // Current Opinion in Cell Biology. -1999.-V.-11 .-P.184-189.

86. Haffner AC, Tassis A, Zepter K, Storz M. et al. Expression of cancer/testis antigens in cutaneous T cell lymphomas.// Int. J Cancer.- 2002. -V.97,N5.-P.668-670.

87. Hall W.W, Lin C.R, Schneewind 0. Detected HTLV-1 provirus in blood and cutaneous lesions of patients with mvcosis fungoides // Science. -1991. V.253.-P.317-320.

88. Harwix S, Gunzl HJ, Blaschke V, Zachmann K. et al.Inability to culture the dominant T-cell clone from the skin of primary cutaneous T-cell lymphoma as proven by TCR gamma-chain gene sequencing. //Arch. Dermatol. Res.- 2001.-V.- 293,N3.-P.139-146.

89. Hegen M. CD26 workshop panel report. In: Kishimoto, T, ed. Leucocyte Typing VI. New York: Garland Publishing Inc.- 1997.-P.478-481.

90. Helfand S.C., Jaime F., Modiano P.F., Moore S.A. et al. Functional Interleukin-2 receptors are expressed on natural killer -like leukemic cells from a dog with cutaneous lymphoma // Blood. 1995. - V. 86, N2. - P.636-645.

91. Honegger A.M., Szapary D., Schmidt A. et.al. A mutant epidermal growth factor receptor with defective protein kinase in unable to stimulate protooncogen expression and DNA synthesis // Mol.Cell Biol.- 1987,- N7.-P.4568-4571.

92. Hovi T, Smyth JF, Allison AC, Williams SC. Role of adenosine deaminase in lymphocyte proliferation.// Clin. Exp. Immunol.-1976.-V.23.-P.395-403.

93. Jacobsen S.E., Jacobsen F.W., Fahlman C., Rusten L.S. TNF-alfa, the great imitator: role of p55 and p75 TNF receptors in hematopoiesis. // Stem CeUs.-1994.-V.12,- P. 111-126.

94. Jacow C.M., Cather J.C., Heme Y.et al. Association of eiythrodermic cutaneous T-cell lymphoma, superantigen-positive Staphylococcus aurens, and oligjclonal T-cell receptor V-beta gene expansion.// Blood.-1997.-V.89.-P.32-40.

95. Janeway C., Travers I. Immunobiology: the immune system in health and disease.-NY USA.: Current Biology Ltd.,1996,

96. Jones D, Dang NH, Duvic M, Washington LT, Huh YO. Absence of CD26 expression is a useful marker for diagnosis of T-cell lymphoma in peripheral blood.// Am. J. Clin. Pathol.- 2001,-V.115,N.6.-P.885-892.

97. Kameoka J, Tanaka T, Nojima Y, Schlossman SF, Morimoto C. Direct association of adenosine deaminase with a T cell activation antigen, CD26.// Science.- 1993.-V.-261.-P.466-469.

98. Kashigara Sawami., Morris D.A. The state of differentiation of cultured human keratinocytes determines the level of intercellularadhesion molecule -1(ICAM 1) expression by interferon I I J.Invest.Dermatol. - 1992. - V.98. - P.741-747.

99. Kashigara Sawami., Morris D.A. The state of differentiation of cultured human keratinocytes determines the level of intercellular adhesion molecule -1(ICAM - 1) expression by interferon // J.Invest.Dermatol. -1992. - V.98. - P.741-747.

100. Kapur S, Menke MA, Tiemann M, Schubert C, Parwaresch R Early mycosis fimgoides: molecular analysis for its diagnosis and the absence of p53 gene mutations in cases with progression.// J. Dermatol. Sci. 2001. - V. 26, N1. - P36-45.

101. Keri H., Cerrony L., Burg G. The morphologic spectrum of tissues lymphomas of the skin is a proposal for new classification If Semin. Diagn. Pathol. -1991.-V.8.-P.55-61.

102. Kizaki H., Habu S., Ohsaka F., Sakurada T. Purine nucleoside metabolizing enzyme activities in mouse thymocytes at different stages of differentiation ann maturation / / Cell Immunol. 1983.-V. 82, N 2.-P. 343-351.

103. Koizumi H., Ohkawara A. Adenosine deaminase activity in sera of patients with psoriasis, mycosis fimgoides and adult Tcell leukemia//Acta. Derm. Yenereol.-1992.-V.72,N6. P.410-412.

104. Kulik G., Klippel A.Weber M.J. Antiapoptotic signalling by insulin-like growth factor 1 receptor, phosphatidylinositol 3-kinase,and Akt.// Mol. Cell. Biol.-1997.- V.17.- p. 1595-1606.

105. Leninger A, Nelson D, Cox M Principles of biochemistry // Worth Publishing, 2nd Edition 1994.

106. Lessin S.R., Vowels B.R., Rook A.H. Retroviruses and cutaneous T-cell lymphoma. //Dematol. Clin.- 1994,- V.12.-P.243-253.

107. Limon J., Nedoszytko B., Brozek I., et. al. Chromosome abberations, spontaneous SCE, and growth kinetic in PHAstimulated lymphocytes of five cases with Sezary syndrome.// Cancer Genet. Cytogenet.- 1995.-V.83.-P.75-81.

108. Maas-Szabowski N., Stark H.-J., Fusenig E. Keratinocyte growth regulation in defined organotypic cultures through IL-1 -induced keratinocyte growth factor expression in resting fibroblasts.// J. Invest. Dermatol.-2000.-V.-114.-P.1075-1084.

109. Martin D. and Gelfand E. Biochemistry of diseases of immunodevelopment / / Ann. Rev. Biochem. 1981,- V.50. -P.845-877.

110. Martin M, Huguet J, Centelles JJ, Franco R. Expression of ecto-adenosine deaminase and CD26 in human T Cells triggered by the TCR-CD3 complex ± possible role of adenosine deaminase as costimulatory molecule.// J. Immunol- 1995.-V.155.-P .46304643.

111. Moolenar W.H., Bierman A.J., Tilly B.C., A point mutation at the ATP binding site of the EGF -receptor abolishes signal transduction. / / EMBO J. - 1988,- N7. - P. 707-710.

112. Morimoto C, Schlossman SF. The structure and function of CD26 in the T cell immune response.// Immunol. Rev.- 1998.-V.161,-P.55-70.

113. Morrison ME, Vijayasaradhi S, Engelstein D, Albino AP, Houghton AN. A marker for neoplastic progression of human melanocytes is a cell surface ectopeptidase.// J. Exp. Med.- 1993,-V.177.-P.1135-1143.

114. Moghal N., Sternberg P.W. Multiple positive and nerative regulators of signaling by the EGF-receptor. // Current Opinion in Cell Biology. -1999.-V.-11.-P.190-196.

115. Mozzanica N., Cattaneo A., Trabattoni D.et.al. Production of type-1 and type-2 cytokines by peripheral blood mononuclearcells of psoriatic patients / / Immunology. 1995. - V. 86,N 3. -P. 422-426.

116. Muche JM, Lukowsky A, Heim J, Friedrich M, Audring H, Sterry W. Demonstration of frequent occurrence of clonal T cells in the peripheral blood but not in the skin of patients with small plaque parapsoriasis.// Blood.- 1999- V94, N4-P1409-1417.

117. Nerri A., Fracchiolla N.S., Roscetti E., et. al. Molecular analysis of cutaneous B- and T-cell lymphomas. // Blood.-1995.-V.86.-P.3160-3172.

118. Nickoloff B.J., Turka D.A. Keratinocytes: key immunocytes of the integument// Fm.J.Pathol. -1994. V.143. -NI. - P.325-331.

119. Nielsen M, Nissen MH, Gerwien J, Zocca MB, et al Spontaneous interleukin-5 production in cutaneous T-cell lymphoma lines is mediated by constitutively activated Stat3.// Blood.- 2002. V.-99,N3.-P.973-977.

120. Pan L, Peng H High-resolution silver staining-based PCR-single strand conformational polymorphism (SSCP) analysis // Gene Cloning and Analysis: Current Innovations 1997- Horizon Scientific Press, P 191-202.

121. Perry J.E., Grossmann M.E., Tindall D. Epidermal growth factor induces cyclin D in human prostate cancer cell line. // Prostate.-1998.- V.35.- P.117-124.

122. Peterman A., Jerdan M., Staal S., Bender B. et al. Evidence for HTLV-1 associated with mycosis fungoides and B-cell chronic lymphocytes leukemia // Arch.Dermatol. -1986. V.122, N5. -P.568-571.

123. Plana M, De Vinas O, De-la-Calle-Martin O et al. Induction of interleukin 2 (IL 2) and interferon-gamma and enhancement of IL 2 receptor expression by a CD26 monoclonal antibody. // Eur. J. Immunol.- 1991.-V.21.-P.1085-1088.

124. Price J.T., Wilson H. M., Haites N. E. Epidermal growth factor (EGF) increases the in vitro invasion, motility and adhesion interactions of the primary renal carcinoma cell line, A704. // Eur. J. Cancer. 1996.-V. 32A.-P. 1977-1982.

125. Qin JZ, Zhang CL, Kamarashev J, Dummer R et al. Interleukin-7 and interleukin-15 regulate the expression of the bcl-2 and c-myb genes in cutaneous T- cell lymphoma cells. // Blood. 2001.- V.-98, N9.-P.2778-2783.

126. Reinhold D, Bank U, BuEhling F et al. Inhibitors of dipeptidyl peptidase IV (DP IV, CD26) specifically suppress proliferation and modulate cytokine production of strongly CD26 expressing U937 cells. //Immunobiology.- 1994.-V.192.-P. 121-136.

127. Rich B.E., Campos-Torres J., Tepper R.I., et al. Cutaneous lymphoproliferation and lymphomas on mterleukin 7 transgenic mice. //J. Exp.Med. -1993.-V.177.-P.305-316.

128. Rook A.H., Heald P. The immunopathogenesis of cutaneous T-cell lymphoma. // Hematol. Oncol. Clin. North. Am.-1995.-V.9.-P.997-1010.

129. Rosen E.M. and Golberg I.D. Protein factors which regulate cell motility. // In vitro cell Dev. Biol.-1989.-V.25.-P.1079-1089.

130. Saed G., Fivenson D.P., Naidu V. et al. Mycosis fungoides exhibits a Th-I type cell mediated cytokine profile whereas Sezary syndrome expresses a Th - 2 type profile /'/ J.Invest.Dermatol. - 1994. - V.l(03), N1. -P.29-33.

131. Salomon D.S., Brandt R., Ciardiello F., Normanno N. Epidermal growth factor-related peptides and their receptors in human malignancies // Crit.Rev. Oncol./Haematol. -1995.- V.19.- P. 183232 .

132. Sauder D.N. The role epidermal cytokines in inflammatory skin desease // J.mvest.Dermatol. 1990. - V.95,N3. - P.278-288.

133. Schuurman H.J., van Laarnoven J.P., Broekhuizen R. Lymphocyte maturation in the human thymus. Relevance of purine nucleotide metabolism for intrathymyc T cell function. // Scand J.Immunol. 1983. - V. 18. - P. 593-549.

134. Shibata T.5 Kawano T., Nagayasu H., Okumura K. Enhancing effects of epidermal growth factor on human squamous cell carcinoma motility and matrix degradation but not growth. // Tumor Biol.- 1996.- V.17.- P.168-175.

135. Shimakage M., Sasagawa T., Kawahara K., Yutsudo M., et al. Expression of Epstein-Barr virus in cutaneous T-cell lymphomaincluding mycosis fungoides.// Int. J. Cancer. 2001.- V. 92,N2. - P.226-231.

136. Shimiry J., Nenman W., Tanaka V. Lymphocyte interactions with endothelial cells II Immunology. 1992. - V.I 3. - P. 106-112.

137. Shore A., Dosh H.H., Gelfand E.W. Role of adenosine deaminase in the early stages of precursor T-cell maturation / / Clin. Exp. Immunol. 1981. -V.44, N 1. -P. 152-155.

138. Shupp D.L., Winkermann P-R. Patch teste in Sezary syndrome and mycosis fungoides // Contact. Dermat. 1985. - V.13. - N3. -P.180-185.

139. Siegal R.S., Pandolfino T., Guitart J., Rosen S., Kuzel T.M. Primary cutaneous T-cell lymphoma: review and current concepts. II Journal of Clinical 0ncology.-2000.- V. 18, N 15,- P. 2908-2925.

140. Smith C.A., Farrah T., Goodwin R.G. The TNF receptor superfamily of cellular and viral proteins: activation, costimulation and death. // Cell. 1994.-V.76.- P.959-962.11

141. Staal FJ, Weerkamp F, Langerak AW, Hendriks RW, Clevers HC. Transcriptional control of T lymphocyte differentiation //Stem Cells 2001- V.19, N 3.-P.165-79

142. Stoscheck C.M., King L.E. Functional and structural characteristics of EGF and its receptor and their relationship to transforming proteins. II J. Cell. Biochem. -1986. V.31.- P. 135152.

143. Streilein G.W. Lymphocyte traffic, T-cell maligmancies and the skin//J. Invest. Dermatol. 1978. - V.71,N3. - P.157-171.

144. Tanaka T, Duke-Cohan JS, Kameoka J et al. Enhancement of antigen-induced T-cell proliferation by soluble CD26/dipeptidyl peptidase IV.// Proc. Natl. Acad. Sci. USA -1994.-V.91.-P.3082-3086.

145. Tanaka T, Kameoka J, Yaron A, Schlossman SF, Morimoto C. The costimulatory activity of the CD26 antigen requires dipeptidyl peptidase IV enzymatic activity. //Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1993.-V.90-P.4586-4590.

146. Thangavelu M., Finn W. G., Yelevarthi K.K., at al. Recurring structural chromosome abnormalities in peripheral blood lymphocytes of patients with mycosis fungoides/Sezary syndrome.//Blood.- 1997.-V.-89,- P. 3371-3377.

147. Tokkura V., Heald P.W, Shy L.V., Edeison R.L. Stimulation of T-cell lymphoma cells with superantigenic staphy locoeel toxins // J. Invest. Dermatol. -1992.-V.98,Nl.-P.33-37.

148. Treyp E., Birgoyne A. A case control study of possible causative factors in mycosis fungoides I I Arch.Dermatol. - 1987. - V.123, N2.-P. 196-200.

149. Turkeiy L.,N., Erton M.,L., Cevik I., Akdas A. Impact of the expression of epidermal growth factor, transforming growth factoralpha, and epidermal grow factor receptor on theprognosis of superficial bladder cancer.// Urology.-1998-V.51.-P.645-649.

150. Van der Weyden MB, Kelley WN. Adenosine deaminase and immune function.//Br. J. Haematol.- 1976.-V.34.-P. 159-165.

151. Whittemore A, Holly E, Lee I, Abel E, Adams K, Nickoloff B, Bley L, Peters J, Gibney C. Mycosis fungoides in relation to environment exposure and immune response: a case-control study. // J.Natl.Cancer.Inst 1989- V18, N81(20) - P 1560-1567

152. Willemze R., Beljaards R.C., Meijer C.J.L.M. Classification of primary cutaneous T-cell lymphomas // Histopathology. 1994- -V.24, N5. - P.405-415.

153. Wood L.C., Elias P.M., Sequeira-Martin S.M. Occlusion lower cytokin mRNA levels in essential fatty acid-deficient and normal