Закономерности удерживания цефалоспориновых антибиотиков в условиях высокоэффективной жидкостной хроматографии с обращенными фазами тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 02.00.04, кандидат химических наук Оксененко, Ольга Ивановна

• Оксененко, Ольга Ивановна
• кандидат химических наук
• 1999

Оглавление диссертации кандидат химических наук Оксененко, Ольга Ивановна

ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Обоснование выбора метода ВЭЖХ с обращенными фазами для анализа цефалоспориновых антибиотиков в биоматериале

1.2. Основы теории обращенно-фазовой хроматографии

1.3. Роль ионных равновесий в сорбции цефалоспоринов

1.4. Влияние концентрации органического модификатора на удерживание сорбатов

1.5. Влияние структурных характеристик сорбатов на удерживание

1.6. Прикладная ВЭЖХ цефалоспориновых антибиотиков

2. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

2.1. Аппаратура и колонки

2.2. Препараты и реактивы

2.3. Условия хроматографирования

2.4. Измерение коэффициентов емкости

2.5. Обработка результатов анализов

3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

3.1. Влияние значений рН и ионной силы подвижной фазы на удерживание цефалоспориновых антибиотиков

3.2. Механизм удерживания цефалоспоринов

3.3. Зависимость удерживания цефалоспориновых антибиотиков от концентрации органического модификатора в подвижной фазе

3.4. Зависимость удерживания цефалоспоринов от строения

3.4.1. Связь коэффициентов емкости цефалоспориновых антибиотиков с коэффициентами распределения в системе октанол-вода

3.4.2. Связь коэффициента емкости цефалоспориновых антибиотиков с упрощенным критерием гидрофобности

3.5. Модели удерживания цефалоспориновых антибиотиков95

3.6. Построение математической модели удерживания цефалоспоринов методом многофакторного анализа

4. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЦЕФАЛОСПОРИНОВЫХ АНТИБИОТИКОВ В БИОЖИДКОСТЯХ МЕТОДОМ ВЭЖХ С ОБРАЩЕННЫМИ

ФАЗАМИ

4.1. Подготовка биопроб к анализу

4.2. Выбор оптимальных условий хроматографирования

4.3. Анализ цефалоспориновых антибиотиков в биопробах

4.4. Общая схема выбора условий анализа цефалоспориновых антибиотиков

ВЫВОДЫ...,

ЛИТЕРАТУРА

ПРИЛОЖЕНИЯ

Список использованных в работе сокращений

и обозначений

ВЭЖХ - высокоэффективная жидкостная хроматография

ПФ - подвижная фаза

АА - ацетат аммония

АБ - ацетатный буфер

МЕ - метанол

ТБАГС - гидросульфат тетрабутиламмония

КФ - фосфат калия

В - вода

ТБАФ - фосфат тетрабутиламмония

АН - ацетонитрил

ФБ - фосфатный буфер

УК - уксусная кислота

ТЭА - триэтиламин

НДДС - додекансульфонат натрия

АДГФ - дигидрофосфат аммония

Э - этанол

НФ - фосфат натрия

АК - карбонат аммония

НГПС - гептилсульфонат натрия

КХ - хлорид калия

ЦБ - цитратный буфер

ТБАБ - тетрабутиламмония бромид

ГДТАБ - гексадецилтриметиламмония бромид

НДГФ - дигидрофосфат натрия

ТМАХ - триалкиламмония хлорид

7-АЦК - 7-аминоцефалоспорановая кислота

7-АДЦК - 7-аминодеацетоксицефалоспорановая кислота

I - ионная сила

с - концентрация органического модификатора,

об%

С - концентрация органического модификатора,

моль/л

и - среднее квадратическое отклонение экспе-

риментальных значений от расчетных р' - параметр полярности подвижной фазы

г - коэффициент корреляции

Б - Б-критерий

р - уровень значимости

Р - доверительная вероятность

вг - относительное стандартное отклонение

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Закономерности удерживания цефалоспориновых антибиотиков в условиях высокоэффективной жидкостной хроматографии с обращенными фазами»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. Цефалоспориновые антибиотики, относящиеся к группе |3-лактамных соединений, широко применяются в медицинской практике. Одной из важных задач современной химии является их количественное определение в биожидкостях с целью подбора оптимального дозирования и терапевтического мониторинга в процессе лечения. Необходимость проведения таких комплексных определений вытекает из различия фармакодинамики и фармакоки-нетики лекарственных средств у разных индивидов.

Из существующих методов анализа цефалоспориновых антибиотиков в биожидкостях (микробиологические, спектральные, электрохимические) многие исследователи отдают предпочтение высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с обращенными фазами (приблизительно 2/3 от общего количества методов определений).

В то же время следует отметить недостаточность знаний в области физико-химических закономерностей хроматографического поведения данного класса соединений. Закономерности сорбции цефалоспориновых антибиотиков изучены лишь фрагментарно, при этом отсутствует ясность, в какой степени общетеоретические представления обращенно-фазовой хроматографии применимы к данному классу веществ. Недостаточное развитие теории имеет также отрицательные последствия. Так, выбор условий хроматографии цефалоспориновых антибиотиков осуществляется чаще всего методом проб и ошибок. Результаты такого подхода зачастую далеки от оптимальных. Поэтому на данном этапе актуальным и закономерным является развитие полуэмпирической модели для цефалоспориновых антибио-

тиков, которая позволяет приблизиться к решению основной задачи теории удерживания - развитию теоретических представлений, позволяющих рассчитывать величины удерживания исследуемых соединений, исходя из их строения и условий проведения хроматогра-фического эксперимента.

Целью данной работы явилось исследование закономерностей хроматографического поведения цефалоспориновых антибиотиков в режиме обращенно-фазовой ВЭЖХ и создание на базе этих закономерностей рациональной схемы выбора условий их анализа.

В соответствии с целью работы были поставлены следующие задачи:

1. Изучить зависимость удерживания цефалоспориновых антибиотиков от композиционных факторов подвижной фазы (количественных и качественных).

2. Исследовать корреляционные зависимости характера удерживания от структурных параметров сорбатов.

3. На основании полученных закономерностей разработать модель удерживания цефалоспориновых антибиотиков в условиях ВЭЖХ с обращенными фазами, связывающую строение исследуемых соединений, условия эксперимента и величины удерживания.

4. Разработать методики определения изученного ряда соединений в биообъектах.

Научная новизна работы. Впервые проведено систематическое исследование хроматографического поведения цефалоспориновых антибиотиков в режиме обращенно-фазовой ВЭЖХ. Показано, что на октадецильных сорбентах существует линейная зависимость логарифма коэффициента емкости сорбата от логарифмов параметров состава подвижной фазы. Установлено существование зависимости значений хроматографического удерживания цефалоспориновых антибиотиков от их строения. Предложен модифицированный крите-

рий для априорной оценки гидрофобности, достоинством которого является простота и универсальность. Получен ряд линейных уравнений регрессии, позволяющих прогнозировать хроматографическое поведение цефалоспориновых антибиотиков и определять оптимальные условия их анализа в сложных объектах биологического происхождения.

Практическая значимость работы. Предложены модели хро-матографического поведения цефалоспориновых антибиотиков в условиях ВЭЖХ с обращенными фазами на октадецильных сорбентах. Данные модели позволяют выбирать оптимальные условия хромато-графического анализа цефалоспоринов и совместно со спектральными характеристиками проводить их предварительную идентификацию.

Сформулирована общая схема выбора условий определения изученный антибиотиков в биожидкостях.

Подготовлены методические рекомендации по использованию полученных моделей , предназначенные для аналитических и клинических лабораторий.

Разработаны методики определения цефалоспориновых антибиотиков в биообъектах.

Работа является самостоятельным фрагментом комплексной научно-исследовательской тематики Курского государственного медицинского университета по проблеме "Фармация".

Внедрение результатов работы. На основании проведенных исследований совместно с кафедрой кожных и венерических болезней опубликованы и внедрены методические рекомендации по количественному определению препарата "Роцефин" (цефтриаксон) в плазме крови и моче методом ВЭЖХ с обращенными фазами .

Апробация работы. Материалы диссертации докладывались на: - Юбилейной конференции, посвященной 60-летию КГМУ (Курск,

1995); - межобластной научной конференции "Актуальные вопросы научно-практической медицины" (Орел, 1997); - 62-й итоговой научной конференции молодых ученых и студентов КГМУ (Курск, 1997); - IV Российском национальном конгрессе "Человек и лекарство" (Москва, 1997); - 63-й итоговой научной конференции молодых ученых и студентов КГМУ (Курск, 1998).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 10 научных работ, в том числе:

- методические рекомендации для студентов к лабораторным работам по дисциплине "Биофарманализ";

- методические рекомендации по определению цефтриаксона в биологических жидкостях методом ВЭЖХ для исследовательских лабораторий.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части, главы обсуждения результатов, выводов, списка литературы, включающего 155 источников, в том числе 121 зарубежных авторов, приложений. Работа изложена на 142 страницах машинописного текста, иллюстрирована 28 рисунками и 47 таблицами.

Личный вклад автора. Диссертантом выполнен весь объем экспериментальных исследований; проведены необходимые расчеты, обработка результатов и их анализ; сформулированы общие положения, выносимые на защиту, выводы и рекомендации.

На защиту выносятся следующие положения:

- - корреляция между параметрами удерживания цефалоспори-новых антибиотиков и содержанием органического модификатора в подвижной фазе;

- способ априорной оценки гидрофобности цефалоспоринов через модифицированный критерий;

- корреляционные зависимости параметров удерживания цефа-лоспориновых антибиотиков с их структурными характеристиками;

- зависимость удерживания сорбатов от рН и ионной силы подвижной фазы;

- модели удерживания цефалоспориновых антибиотиков в условиях ВЭЖХ с обращенными фазами;

- методики определения цефалоспориновых антибиотиков в биообъектах (плазма крови, моча).

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Обоснование выбора метода ВЭЖХ с обращенными фазами для анализа цефалоспориновых антибиотиков в

биоматериале

В выборе метода анализа главную роль играют строение и физико-химические свойства изучаемых соединений.

К группе цефалоспоринов относится ряд природных антибиотиков и многочисленные полусинтетические препараты, полученные на основе 7-аминоцефалоспорановой (7-АЦК) и 7-аминодеадетоксицефалоспорановой (7-АДЦК) кислот [8, 20].

8

СООН

7-АЦК

Б

СООН

7-АДЦК

Структурную основу цефалоспориновых антибиотиков составляет конденсированная система, включающая дигидротиази-новый и р-лактамный циклы:

Введение различных ацильных заместителей в N1^- группу в положении 7 и разнообразных замещающих групп в положении 3 дает большой ряд полусинтетических производных, отличающихся по гидрофобно-гидрофильным свойствам. Предполагают, что высокая химическая реактивность и антибиотическая реактивность цефалоспоринов обусловлена наличием р-лактамного цикла, индуктивным эффектом ацильного заместителя и стерическим эффектом молекулы [69, 88, 118, 146].

Константа диссоциации (рКа) С4-СООН имеет значение 1,72,6 [151], свидетельствующее о достаточно сильной кислотности карбоксильной группы. Происходит это вследствие наличия соседних электроотрицательных групп. Атом азота р-лактамного кольца характеризуется слабыми основными свойствами (рКа < -5) [118]. Присутствующая в различных боковых ациламидных цепочках а-аминогруппа имеет значение рКа в ряду 7,0-7,4 [88, 57].

Характерный ультрафиолетовый спектр цефалоспориновых антибиотиков имеет максимум поглощения около 260 нм, что вызвано наличием структуры: О = С8 - N - С4 = С3 [88]. С раскрытием р-лактамного цикла поглощение исчезает. Кроме того болыиин-

3

соон

ство р-лактамных антибиотиков содержат поглощающие УФ-излучение заместители [2, 13, 27].

При выборе метода анализа возникает и вопрос об устойчивости изучаемого класса соединений в различных средах. Этот вопрос для ряда цефалоспоринов хорошо освещен в публикациях [3, 10, 17, 18, 21, 30, 31, 68, 81]. Установлено, что цефалоспорины, содержащие а-аминогруппу, обладают максимальной устойчивостью при значении рН 4-5, соответствующем изоэлектрической точке цефалоспоринов. Для других антибиотиков это наблюдается при рН 6-7. В кислых и щелочных средах наблюдается гидролиз р-лактамного кольца, причем скорости щелочного гидролиза значительно выше, чем кислотного. При рН около 1 С3-ацетокси группа гидролизуется в 8 раз быстрее, чем р-лактамное кольцо [51, 151]. В нейтральной и щелочной среде а-амино группа сильно уменьшает устойчивость цефалоспоринов (при рН = 8 в 10 раз) [151, 152].

Цефалоспориновые антибиотики, изученные в работе [151], можно представить в порядке увеличения стабильности в щелочной среде следующим образом: цефалоридин< цефалотин= цефа-логлицин= цефазолин< цефалексин= цефрадин. Для цефалогли-цина при рН 7,4 и 35° С 5 часов. Это обстоятельство следует учитывать в процессе приготовления и хранения растворов изучаемых антибиотиков.

В статье [98] изучена стабильность растворов цефалоспоринов в рабочих клинических образцах, в замороженной плазме и моче. В частности показано, что стабильность растворов цефалоспоринов зависит от рН и температуры раствора. Например, создав с помощью буфера рН = 5 и заморозив образец плазмы, содержащий цефсулодин, можно добиться стабильности образца в течение 3 месяцев. Максимально допустимое время хранения образцов (деградация не более 5%) представлено в табл. 1.

Таблица 1

Максимально допустимое время хранения образцов

Препарат Калибровочный р-р при 5° С (дней) Рабочий клинический образец Замороже проба (щ нная био-эи -20°С)

плазма (часов) моча (часов) плазма (мес.) моча (мес.)

Цефсулодин 7 4 10 1,5 >8

Цефотиам 14 5 5 >9 >9

Цефуроксим 14 >5 >5 >3 >2

Цефотаксим 14 >5 >5 >3 >3

Дезацетил-цефотаксим 14 >5 >5

Цефроксадин 21 >6 12 9 3

Цефалексин 21 >6 >6 9 3

Количественное и качественное определение цефалоспори-новых антибиотиков в биологических матрицах чаще всего проводят в биофармацевтических целях (изучение распределения антибиотиков в жидкостях и тканях организма). Вследствие низкой токсичности цефалоспоринов их терапевтический мониторинг проводят значительно реже. Исключение составляют больные с нарушениями функции почек [128]. Следует отметить, что проводимые аналитические исследования обычно не требуют максимально чувствительных методов анализа, так как вводимые дозы исследуемых антибиотиков имеют достаточно большие значения: уровень концентрации в крови часто находится в пределах 0,1 - 10 мкг/ мл.

Определение цефалоспоринов в биологических объектах сопряжено также с рядом трудностей: у них отсутствует собственная флуоресценция и поглощение света в видимой области спектра.

Флуоресцирующими свойствами обладают производные цефалоспо-ринов, полученные в результате нагревания в кислой и щелочной средах. Причем такое свойство имеют только те антибиотики, которые содержат а- аминогруппу в положении С7 (цефалексин, цефра-дин и др.) [36, 155]. Спектры поглощения в УФ-области содержат полосы, характерные также и для компонентов биологических объектов. Цефалоспорины являются термолабильными, нестойкими соединениями. Еще одной трудностью при определении антибиотиков в биообъектах является ограниченное в большинстве случаев количество биоматериала, используемого для проведения анализа. Метод анализа должен учитывать все эти обстоятельства, а в идеале должен обладать следующим набором труднодостижимых свойств [32].

1. Достаточная чувствительность.

2. Возможность работы с малыми объемами проб.

3. Большая специфичность, избирательность.

4. Быстрота выполнения анализа.

5. Простота подготовки (обработки) проб перед анализом.

6. Дешевизна и легкость обслуживания аналитического прибора.

7. Надежность и воспроизводимость метода.

8. Возможность автоматизации процесса анализа.

9. Большая производительность метода (малая трудоемкость).

10. Универсальность (пригодность для анализа многих лекарственных препаратов)

В конечном итоге выбор того или иного метода зависит от доступности оборудования, наличия персонала, знающего данное оборудование, частоты, с которой делаются анализы, степени точности и других характеристик.

Количественное определение цефалоспориновых антибиотиков в биоматериале может быть осуществлено спектрофотометриче-ским методом после экстракции этилацетатом из подкисленной системы [62], методами вольтамперометрии [38, 39, 133], микробиологического анализа [20], хроматографии [35, 50, 58, 117]. Перспективным в анализе биообъектов является метод капиллярной высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектором [131].

Наиболее широкое распространение в нашей стране получили микробиологические методы. Это объясняется их доступностью многим исследовательским лабораториям в виду простоты аппаратурного оформления и малой стоимости анализа. Отмечается хорошее совпадение результатов определения микробиологическими и хроматогра-фическими методами [47, 82, 112], но из-за свойственных микробиологическим методам недостатков, а именно: малой специфичности и сравнительной длительности определения, предпочтение в данное время отдается хроматографическим методам определения цефалос-поринов.

Следует отметить также, что методы хроматографии позволяют проводить анализ многокомпонентных смесей с большой чувствительностью. Немаловажно, что соответствующая аппаратура доступна многим химическим лабораториям.

Из различных видов хроматографии для анализа цефалоспо-ринов в биожидкостях наиболее распространена ВЭЖХ с обращенными фазами. Это объясняется рядом важных преимуществ данного метода, которые заключаются в следующем [22]:

1. Простота пробоподготовки: разбавленная органическим растворителем биожидкость (плазма, сыворотка, моча, цельная кровь, слюна) может быть непосредственно введена в хроматограф

(в отличие от спектрофотометрического метода, где предварительным этапом является более длительный процесс экстракции).

2. Селективность обращенно-фазовой системы почти всегда значительно выше, чем других систем.

3. Обращенно-фазовые колонки с химически связанной ал-кильной неподвижной фазой быстро уравновешиваются, отличаются высокой эффективностью и позволяют получать симметричные пики.

4. Возможность применения водных растворов существенно сокращает общее время анализа и позволяет выбирать в качестве подвижных фаз буферные системы, что может улучшить селективность и эффективность.

5. Универсальность метода в отношении большого числа химических соединений, позволяющая анализировать вещества различной полярности.

В целом для ВЭЖХ отпадают ограничения по термоустойчивости препаратов (характерные, например, для ГЖХ), не существенны проблемы летучести анализируемых веществ, нет необходимости в получении производных. Практически все методы детектирования в ВЭЖХ являются неразрушающими [11]. Это позволяет в случае необходимости сочетать аналитическую и препаративную хроматографию, а также собирать разделенные фракции анализируемых веществ для их последующей идентификации с помощью физико-химических, в частности, спектральных методов. В некоторых случаях возможно проведение спектрального анализа (например, снятие электронных спектров) непосредственно в ячейке детектора (хроматографы "Милихром").

Перечисленные свойства метода ВЭЖХ дают основание считать его на сегодняшний день одним из наиболее подходящих для анализа цефалоспориновых антибиотиков в биообъектах.

1.2. Основы теории обращенно-фазовой хроматографии

Важнейшую роль в понимании механизма удерживания в обращенно-фазовой хроматографии сыграли работы Хорвата и его школы [84-86]. Суть теории Хорвата заключается в следующем. Существует принципиальное различие между процессами сорбции на полярных поверхностях из относительно неполярных растворителей (нормально-фазовый режим) и сорбции из воды либо сильнополярных растворителей на поверхностях неполярных (обращенно-фазовый режим) [34]. В первом случае между молекулами сорбатов и неподвижных фаз образуются ассоциаты за счет кулоновских взаимодействий или водородных связей. Во втором случае причиной ассоциации на поверхности являются так называемые сольвофобные взаимодействия в подвижной фазе. Для полярных подвижных фаз, в особенности содержащих воду, характерно сильное кулоновское взаимодействие и образование водородных связей между молекулами растворителей. Все молекулы в таких растворителях связаны довольно прочно межмолекулярными силами. Для того чтобы поместить в эту среду молекулу сорбата, необходимо образование «полости» между молекулами растворителя. Энергетические затраты на образование такой «полости» лишь частично покрываются за счет взаимодействия полярных групп в молекуле сорбата с полярными молекулами растворителя. В аналогичном положении по отношению к растворителю находятся и неполярные молекулы неподвижной фазы. С энергетической точки зрения более выгодно такое положение, когда поверхность раздела между полярной средой (растворителем) и неполярными фрагментами неподвижной фазы и молекул сорбата минимальна. Уменьшение этой поверхности и достигается при сорбции

(рис. 1). а)

о

О •

tv.V-.iViS

• О

Неполярный фрагмент

поверхность

б)

О •

о

О • о

о

• о •

• О о •-снзон

>—^о

о

о

' • о 0 О •

° о__# 0 . 0 0

о

• ° о 0 .

Рис. 1. К механизму обращенно-фазовой хроматографии: а - сорбат в растворе; б - сорбат на поверхности неподвижной фазы. Молекулы воды и органического растворителя обозначены светлыми и темными кружками, соответственно.

Таким образом, причиной сорбции в обращенно-фазовой хроматографии служит сильное притяжение полярных молекул растворителя одна к другой, как бы «прижимающее» растворенные менее полярные молекулы к неполярной поверхности. Из сказанного следует, что по сравнению с нормально-фазовой хроматографией в обращенно-фазовой роль химической природы неподвижной фазы относительно мала, так как взаимодействие сорбат-сорбент ограничивается слабыми дисперсионными силами [34].

Детальная интерпретация механизма сорбции на неполярных неподвижных фазах выполнена Хорватом [84, 86] на основе сольвофобной теории [134, 135]. В монографии [34] приведены ос-

новные выводы сольвофобной теории обращенно-фазовой хроматографии.

Связь коэффициента емкости с условиями опыта, свойствами компонентов системы выражает следующее уравнение:

КГ КГ 2Я уяЯТ

АЩ | 4,836^(^-1^ | КГ (1.2.1.)

КГ + КГ + ПР0К

где ф- логарифм отношения объемов неподвижной и подвижной фаз; АР„й- изменение свободной энергии при ассоциации компонентов системы, помещенных в газовую фазу; Д^- изменение

свободной энергии при образовании полости в растворителе и заполнении ее молекулой хроматографируемого соединения; N -число Авогадро; я - газовая постоянная; т- температура; р0 - давление в колонке; ¡л, - дипольный момент сорбата; АЛ - изменение величины неполярной поверхности при сорбции; у - поверхностное натяжение подвижной фазы; ке - параметр, учитывающий отличие поверхности полости от плоской поверхности; у3 - объем

молекулы сорбата; V - мольный объем подвижной фазы.

Теория предполагает, что объем ассоциата сорбат-сорбент

у,ь пропорционален объему молекулы сорбата:

(1.2.2.)

где Л - коэффициент.

Параметры Р и О уравнения (1.2.1.) определяются следующими соотношениями:

1

г \

(1-2.3.);

4 7Г£0

V

= (1.2.4.)

где е0 - диэлектрическая проницаемость; а5 - поляризуемость молекулы сорбата.

Уравнение (1.2.1.) выведено с учетом следующих допущений:

- определяется только ван-дер-ваальсовыми взаимодействиями;

- молекулы растворителя, сорбата, неподвижной фазы, а также ассоциаты сорбат-сорбент имеют сферическую форму;

- молекулы растворителя намного меньше молекул неподвижной фазы, а последние намного крупнее молекул сорбатов;

- давление равно 1 атм;

- подвижная фаза несжимаема.

Применительно к некоторым частным случаям уравнение (1.2.1.) может быть представлено в упрощенном виде. Так, для данного сорбата при постоянной температуре зависимость удерживания от состава подвижной фазы выражается уравнением:

1пк' = а + во + сг + о(ке -1 у2//\ +е + \п{ят/р,у) (1.2.5.)

С другой стороны, если состав подвижной фазы и колонка неизменны, коэффициент емкости различных сорбатов может быть найден по уравнению:

1п к' = А' + В'—-1—^ + С'АА (1.2.6.)

2Л V, (\-aJv,)

Из этого краткого изложения теории Хорвата ясно, что, несмотря на достаточно детальное физическое описание процессов, протекающих при обращенно-фазовой хроматографии, полностью

априорный расчет удерживания - конечная цель хроматографиче-ской теории - остается трудноразрешимой задачей. Трудности такого расчета связаны как с неопределенностью некоторых параметров, так и с отклонениями реальных систем от допущений, сделанных при выводе уравнения (1.2.1.). До сих пор неизвестны примеры априорного расчета параметров удерживания исходя из свойств сорбатов и других компонентов системы. В то же время анализ многочисленных экспериментальных закономерностей об-ращенно-фазовой хроматографии демонстрирует правильность основных выводов этой теории.

В работе [84] Хорват показал, что для рядов родственных соединений соблюдается зависимость:

Ык' = А'' + г^АА (1.2.7.)

Из уравнения (1.2.5.) следует, что если мольный объем и параметр ке постоянны, то удерживание данного вещества линейно связано с поверхностным натяжением подвижной фазы:

\пк' = Ат + ву (1.2.8.)

где А'" - сумма членов уравнения (1.2.5.), не зависящих от поверхностного натяжения;

ЛАЛ + 4.836Л^(*' -\У2А (129)

КТ

Установлено [86], что в водных подвижных фазах, где поверхностное натяжение изменяется за счет добавок хлористого калия, уравнение (1.2.8.) также соблюдается удовлетворительно.

Наконец, в наиболее важном с точки зрения практики случае, когда подвижная фаза состоит из воды и органического растворителя (а часто и солей), параметр в" уже не может считаться постоянным. Почленным анализом зависимости компонентов уравнения (1.2.5.) от состава подвижной фазы получена зависи-

мость удерживания от состава бинарной подвижной фазы, близкая к экспериментально наблюдаемой [34].

1.3. Роль ионных равновесий в сорбции цефалоспоринов

Цефалоспориновые антибиотики являются ионогенными соединениями: они обладают по крайней мере одной карбоксильной группой, а некоторые - одной или более аминогруппами.

Физико-химические взаимодействия между сорбатами и неполярной стационарной фазой в таком случае описываются соль-вофобной теорией, но в этом случае необходимо учитывать, что в зависимости от рН среды данные антибиотики могут быть в виде

О и О О 1

недиссоциированнои, анионнои, катионнои, цвиттерионнои форм. Каждой из них соответствует свое значение коэффициента емкости. С изменением рН среды соотношение различных форм в растворе и коэффициент емкости меняются.

Для амфотерных цефалоспоринов, которые могут находиться в растворе в катионной (+Н3№СООН), анионной (Н2МРСОО), или цвиттерионной (+НзКРСОО") формах, уравнения диссоциации и соответствующие им константы можно представить следующим образом [130]:

+н^ирсоон^ нъирсоо~ +н+

Заключение диссертации по теме «Физическая химия», Оксененко, Ольга Ивановна

ВЫВОДЫ

1. Изучен механизм удерживания цефалоспориновых антибиотиков на алкилсиликагелях. В механизме удерживания цефалоспо-ринов на неполярных сорбентах преобладают гидрофобно-дисперсионные взаимодействия, участвуют водородные связи. Установлено, что их элюирование происходит главным образом в порядке увеличения гидрофоб ных свойств.

2. Выявлено наличие линейной связи между коэффициентами емкости цефалоспориновых антибиотиков на алкилсиликагелях в условиях обращенно-фазовой ВЭЖХ и их гидрофобностью.

3. Разработан модифицированный критерий гидрофобности, позволяющий априорно оценивать гидрофобность сорбатов. Критерий основан на оценке числа атомов, повышающих или понижающих гидрофобность молекулы.

4. Установлено существование линейной связи между логарифмами коэффициентов емкости цефалоспориновых антибиотиков и содержанием ацетонитрила. Уравнения связи логарифмов коэффициентов емкости с логарифмами концентрации органического модификатора для различных цефалоспоринов следуют компенсационной закономерности, что указывает на единый механизм сорбции в данных условиях.

5. Доказано, что существование общей точки пересечения прямых - 1 g С (где С - молярная или объемная концентрация ацетонитрила) позволяет прогнозировать удерживание цефалоспоринов при произвольной концентрации органического растворителя, исходя из одного экспериментального значения коэффициента емкости.

6. На основании изучения закономерностей удерживания цефалоспоринов предложена модель, описывающая удерживание, как функцию их гидрофобности и концентрации органического растворителя в подвижной фазе. Модель применима для априорного выбора условий хроматографического анализа и качественной интерпретации результатов хроматографирования.

7. Найдено, что значения рН и ионной силы буферного раствора влияют на удерживание в значительно меньшей степени, чем концентрация органического растворителя. Их оптимизация должна производиться лишь после выбора необходимой концентрации органического растворителя.

8. Установлена целесообразность применения статистического планирования эксперимента для математического описания хроматографического удерживания цефалоспоринов.

9. Предложена схема выбора условий определения цефалоспо-риновых антибиотиков в биообъектах.

10. Разработаны методики анализа ряда цефалоспориновых антибиотиков в биообъектах, характеризующиеся достаточной чувствительностью, экспрессностью, хорошей воспроизводимостью результатов. Подготовлены методические рекомендации по их использованию для клинических и научных исследований.

Список литературы диссертационного исследования кандидат химических наук Оксененко, Ольга Ивановна, 1999 год

ЛИТЕРАТУРА

1. Аналитическая хроматография/ К.И. Сакодынский, В.В. Бражников, С.А. Волков и др.- М.: Химия, 1993,- 464 с.

2. Большаков Г.Ф. и др. Ультрафиолетовые спектры гетеро-органических соединений/ Г.Ф. Большаков, B.C. Ватаго, Ф.Б. Аг-рест,- Л.: Химия, 1969,- 504 с.

3. Булычева М.С. и др. Физико-химические свойства 7-аминоацетоксицефалоспорановой кислоты/ М.С. Булычева, П.С. Ныс, Е.М. Савицкая// Антибиотики,- 1977,- Т. 22, № 12,- С. 1073-1076.

4. Выбор условий элюирования в обращенно-фазовой хроматографии. Зависимость коэффициентов емкости от концентрации органического компонента подвижной фазы/ В.Д. Шатц, О.В. Сахартова, В.А. Беликов и др.// Журнал аналитической химии.-1984,- Т.39, №2,- С. 331-340.

5. Выбор условий элюирования в обращенно-фазовой хроматографии. Индекс связываемости и удерживание углеводородов и простейших кислородсодержащих соединений/ В.Д. Шатц, О.В. Сахартова, Л.А. Бривкалне, В.А. Беликов / / Журнал аналитической химии,- 1984,- Т.39, № 5,- С. 894-902.

6. Гмурман В.Е. Теория вероятностей и математическая статистика: Учеб. пособие,- М: Высш. шк., 1998.- 479 с.

7. Дерффель К. Статистика в аналитической химии,- М.: Мир, 1994,- 268 с.

8. Егоров Н.С. Основы учения об антибиотиках.- М: Изд-во МГУ, 1994.- 512 с.

9. Еремин С.К., Изотов Б. Н. Применение высокоэффективной жидкостной хроматографии в химико-токсикологическом анализе лекарственных соединений// Журнал аналитической химии,- 1988,- Т. 43, №1,- С. 5-19.

10. Закономерности удерживания производных 1,4-дигидропиридина и выбор условий хроматографического анализа

на их основе/ В.Д. Шатц, В.Г. Мухаметшина, Д.Я. Тирзиме и др. / / Химико-фармацевтический журнал.- 1985,- № 4.- С. 482-486.

11. Изучение механизма удерживания 8-оксихинолинатов некоторых металлов в методе обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии/ Е.М. Басова, Т.А. Болыпова, П.Н. Нестеренко и др.// Вестн. Московского университета.-1988,- Т. 29, № 4.- С. 376-380.

12. К вопросу о фармакокинетической интерференции между фуросемидом и цефалоспоринами/ В. П. Яковлев, B.C. Климова, C.B. Эм, Э.А. Рудзит// Антибиотики,- 1981,- Т. 26, № 4,- С. 287-290.

13. Казицына Л.А., Куплетская Н.Б. Применение УФ-, ИК-и ЯМР-спектроскопии в органической химии.- М.: Высшая школа, 1971,- 264 с.

14. Калинина В.Н., Панкин В.Ф. Математическая статистика.- М.: Высшая школа, 1998.- 336 с.

15. Киселев A.B. и др. Молекулярные основы адсорбционной хроматографии/ A.B. Киселев, Д.П. Пошкус, Я.И. Яшин.- М.: Химия, 1986,- 269 с.

16. Киселев A.B. Межмолекулярные взаимодействия в адсорбции и хроматографии.- М.: Высшая школа, 1986.- 360 с.

17. Либинсон Г. С. Проблемы стандартизации антибиотиков. Устойчивость пенициллинов и цефалоспоринов в растворах: [Обзор]// Антибиотики,- 1983,- Т.28, № 2,- С. 56-75.

18. Либинсон Г. С.. Проблемы стандартизации антибиотиков, кислотно-основные свойства, растворимость// Антибиотки.-1982,- Т.27.- С.207-221.

19. Машковский М.Д. Лекарственные средства: Пособие по фармакотерапии для врачей: В 2 ч. ч. 2.- М.: Медицина, 1993.- 688 с.

20. Навашин С.М., Фомина И.П. Рациональная антибиотикоте-рапия: (Справочник): 4-е изд.- М.,1982.- 496 с.

21. Об устойчивости некоторых цефалоспоринов в растворах. Цефазолин, цефазедон, цефаклор/ В.Б. Курочкина, Е.Л. Ларина, Г.С. Либинсон, П.Н. Ныс// Антибиотики и химиотерапия.-

1994,- Т. 39, № 12,- С. 3-8.

22. Оптимизация селективности в хроматографии: Пер. с англ./ Под ред. Даванкова В.А.- М.: Мир, 1989,- 399 с.

23. Практическая химия белка: Пер. с англ./Под ред. А. Дарбре,- М.: Мир, 1989.- 623 с.

24. Розенфельд Г.С, Навашин С.М. Достижения в области получения и изучения новых полусинтетических цефалоспорино-вых антибиотиков. Исследования в области направленного синтеза цефалоспоринов/ / Антибиотики.- 1981.-Т. 26, № 11,- С. 860-874.

25. Рузинов JI. П. Статистические методы оптимизации химических процессов.- М.: Химия, 1972.- 200 с.

26. Сахартова О.В., Шатц В.Д. Выбор условий элюирования в обращенно-фазовой хроматографии. Приближенная оценка удерживания полифункциональных кислородсодержащих соединений/ / Журнал аналитической химии.- 1984.- Т.39, № 8,- С. 14961503.

27. Свердлова О.В. Электронные спектры в органической химии.- JL: Химия, 1973,- 428 с.

28. Современное состояние жидкостной хроматографии: Пер. с англ./ Под ред. Дж. Киркленда.- М.: Мир, 1974,- 325 с.

29. Стыскин и др. Практическая высокоэффективная жидкостная хроматография/ E.JI. Стыскин, Л.Б. Ициксон, Е.В. Брау-де,- М.: Химия, 1986,- 288 с.

30. Устойчивость цефалоспорина С в водных растворах/ O.A. Портной, В. Д. Карцева, Г. С. Либинсон, Н.Г. Кружкова// Антибиотики,- 1980.- Т.25, № 2,- С. 105-107.

31. Физико-химические свойства 7-аминодезацетоксицефало-спорановой кислоты/ П.С. Ныс, Э.В. Кольцова, H.H. Шелленберг и др.// Антибиотики,- 1976.- Т. 21, № 5,- С. 391-394.

32. Холодов Л.Е., Яковлев В.П. Клиническая фармакокине-тика,- М.: Медицина.- 1985.- 464с.

33. Шатц В.Д. Выбор условий элюирования в обращенно-фазовой хроматографии. Общая зависимость удерживания от кон-

центрации органического модификатора подвижной фазы// Журнал физической химии.- 1986,- Т. LX, № 1.- С. 1-8.

34. Шатц В.Д., Сахартова О.В. Высокоэффективная жидкостная хроматография. - Рига.: Зинатне, 1988,- 390 с.

35. Adamovics J. A. Determination of antibiotics and antimicrobial agents in human serum by direct injection into silica liquid chromatographic columns// J. Pharm. and Biomed. Anal.- 1987.-vol. 5, № 3.- P. 267-274.

36. Aikawa R., Nakano M., Arita T. Fluorimetric determination of cephalexin in urine// Chem. Pharm. Bull.-1976,- vol.24, №10.-P.2350-2355.

37. Aldo L., Aldo M., Mauro R. et al. About a fast and reliable method for the determination of cefoxitin in the bile// Ann. chim.-1984,- vol. 74, № 11-12,- P. 769-777.

38. Altinoz S., Temizer A., Beksac S. Determination of ceftriaxone in biological material by differential-pulse adsorptive stripping voltamperometry // Analyst.- 1990,- vol. 115, № 6.- P. 873-874.

39. Altinoz S., Ozer D., Temizer A., et al. Determination of ceftriaxone in aqueous humour and serum samples by differential pulse adsorptive stripping voltamperometry// Analyst.- 1994.- vol. 119, № 7,- P. 1575-1577.

40. Anker L.S. et al. Quantitative structure-retention relationship studies of odor-active aliphatic compounds with oxygen-containing functional groups// Anal. Chem.- 1990.- vol. 62, № 24.-P. 2676-2684.

41. Ascalone V., Dal Bo L.. Determination of ceftriaxone a novel cephalosporin in plasma, urine and saliva by high-performance liquid chromatography on an NH2 bonded-phase// J. Chromatogr.-Biomed. Appl.- 1983,- vol. 273, № 2,- P. 357-366.

42. Ayrton J. Assay of ceftazidime in biological fluids using high-presure liquid chromatography// J. Antimicrob. Chemother.-1981,- vol. 8, Suppl. В.- P. 227-231.

43. Balaban A. T. Steric fit in quantitative - structure activity relations. - Berlin: Springer - Verlag, 1980. - 178p.

44. Bawdon R.E., Hemsel D.L., Hemsel P.G. Serum and pelvic tissue concentrations of ceftriaxone and cefazolin at hysterectomy/ / J. Liquid Chromatogr. - 1984,- vol. 7, № 10,- P. 2011-2020.

45. Bawdon R.E., Leveno K.J., Quirk J.Q. et al. High-pressure liquid chromatographic assay of cefamandole in serum folowing intravenous and intraperitoneal administration// J. Liquid Chromatogr.-1983,- vol. 6, № 14,- P. 2747-2759.

46. Bawdon R.E., Novick W.J., Hemsel D.L. et al. High-pressure liquid chromatographic assay of cefotaxime and desacetylce-fotaxime in human myometrium// J. Liquid Chromatogr.- 1984.-vol. 7, № 12,- P. 2483-2491.

47. Bergan T., Solberg R. Comparison of microbiological and high pressure liquid chromatographic assays of the new cephalosporin cefroxad-ine// Meth. and Find. Exp. and Clin. Pharmacol.- 1981,- vol. 3, № 3,- P. 179-182.

48. Biegonowska M., Soczewinski E. Retention parameters and eluent composition in TL and HPLC of aromatic nitro compounds in RP systems// J. Chromatogr.- 1981,- vol. 205, № 2,- P.451-456.

49. Bij. K.E., Horvath Cs., Melander W.R. Surface silanols in silica-bonded hydrocarbonaceous statuionary phases. II. Irregular retention behaviour and effect of silanol masking/ / J. Chromatogr.-1981,- vol. 203,- P.65-84.

50. Blanchin M.D., Rondot-Dudragne M.L. Determination de la ee-faloglycine et la cefroxadine dans les milieux biologiques pur chromatographic dans les milieux biologiques par chromatographic sur couche mince detection fluorimetrique// J. Chromatogr.-Biomed. Appl.- 1988,- vol. 432. P. 407411.

51. Bonchev P.R., Papazova P. Hydrolysis of cephalosporins in strongly acid medium// Pharmasie.- 1978,- vol. 33.- P. 346-348.

52. Bothwell W. M„ Cathcart K. S„ Bombardt P. A. An online, column-switching high-performance liquid chromatographic procedure for the removal of probenicid from human plasma, serum, or urine in the quantitative determination of cefmetazole or cefoxitin// Pharm. and Biomed. Anal .-1989 .- vol. 7, № 8 .- P. 987-995.

53. Boyd D.B., Lunn W. H. W. Theoretical criteria for predicting biological activity of cephalosporin antibiotics// J. Antibiotics.- 1979.- vol. 31, № 8,- P. 855-856.

54. Boyd D.V. Substituent effect in cephalosporins as assessed by molecular orbital calculation, nuclear magnetic resonance and kinetics// J. Med. Chem.- 1983.- vol. 26.- P. 1010-1013.

55. Braumann T. Determination of hydrophobic parameters by reversed-phase liquid chromatography: theory, experimental techniques, and application in studies on quantitative structure-activity relationships// J. Chromatogr.- 1986,- vol. 373, № 2. P.191-225.

56. Brisson A.M., Fourtillan J.B. Determination of cephalosporins in biological material by reversed-phase liquid column chromatography// J. Chromatogr.- 1981,- vol. 223,- P. 393-399.

57. Bungaard H. Polymerisation of penicilins. Ill: Structural effect influencing rate of dimerisation of aminopenicillins in aqueous solution// Acta. Pharm. Suec.- 1977.- vol. 14,- P. 67-80.

58. Charles B.G., Ravenscroft P.J. Rapid HPLC analysing of cefoxitin in plasma and urine// J. Antimicrob. Chemother.- 1984.-vol. 13, № 3,- P. 291-294.

59. Colin H., Guiochon G. Selectivity for homologous series in reversed-phase liquid chromatography. I. Theory/ / J. Chromatogr. Sci.- 1980.- vol. 18, № 2,- P. 54-63.

60. Crombez E., Van den Bossche W., De Moerloose P. Quantitative high performance liquid chromatography determination of cefatrizine in serum and urine by UV-detection and fluorescence detection after postcol-umn derivatization// Recent. Develop. Chromatogr. and Electrophoresis.-1980,- vol. 10:- P. 261-266.

61. Crombez E., Van Den Bossche W., De Moreloose P. Separation of some cephalosporin derivatives by ion-pair reversed-phase high-performance liquid chromatography / J. Chromatogr.- 1979.-vol. 169,- P. 343-350.

62. Csiba A., Samu A., Graber H. Cefazolin spektrofotometrias meghatarozasa biologiai folyadekokbol// Kiserl. orvostud.- 1981.-vol. 33, № 6,- P. 563-571.

63. Demotes-Mainard F.M., Vincon G.A., Jarry C.H., et al. Micromethod for the determination of cefotaxime and desacetylcefo-taxime in plasma and urine by high-performance liquid chromatography// J. Chromatogr.- 1984,- vol. 336, № 2.- P. 438-445.

64. Egolf L.M. et al Quantitative structure-retention and structure-odor intensity relationships for a diverse group of odor-active compounds// Anal. Chem.- 1993,- vol. 65, № 21.- P. 3119-3126.

65. El Tayar N., De Waterbeemd H.V., Testa B. Lipophilicity measurement of protonated basic compounds by reversed-phase high performance liquid chromatography. II. Procedure for the determination of a lipophilic index measured by reversed-phase high performance liquid chromatography/ / J. Chromatogr.- 1985.- vol. 320, № 2,- P.305-312.

66. Elrod L., White L. B., Wimer D.C., et al. Determination of cefsulodin sodium [D(-)-SCE-129] by high-performance liquid chromatography// J. Chromatogr.- 1982,- vol. 237, № 3,- P. 512-521.

67. Fabre H., Blanchin M.D., Kok W.T. Liquid chromatigraphy with amperometric detection for the determination of cephalosporins in biological fluids// Analyst.- 1988,- vol. 113, № 4,- P. 651-655.

68. Fabre H., Eddine N. H., Berge G. Degradation kinetics in aqueous solution of cefotaxime sodium, a third-generation cephalosporin// J. Pharm. Sci.- 1984,- vol. 73, № 5,- P. 611-618.

69. Flynn E.N. Cephalosporins and Penicillins. Chemistry and Biology.- New York.- 1972,- 470 p.

70. Gaspari F. et al. Correlation between n-octanol/water partition coefficient and liquid chromatographic retention for caffeine and its metabolites, and some structure-pharmacokinetic considerations// J. Pharm. Pharmacol.- 1987,- vol. 39, № 4,- P. 252-260.

71. Georgakopoulos C.G. et al. Quantitative structure-retention relationships in doping control// J. Chromatogr. B. Bio-med. Appl.- 1996,- vol. 687, № 1.- P. 151-156.

72. Goewie C.E. Optimization of mobile phase composition in liquid chromatography - a survey of most commonly used chemomet-ric procedures// J. Liquid Chromatogr.- 1986.- vol. 9, № 7, P. 14311461.

73. Glatz B., Riedman M., Schuster R. Sequencing of HPLC method for monitoring lewels of different drug types in biological fluids/ / "Abstr. Pap. Pitsburg Conf. And Expo. Anal. Chem. And Appl. Spectrosc., Atlantic City. N/J/, March 9-13, 1987". Pitsburg, Pa.-1987.- P. 295.

74. Haddad P.R., Drouen A.C.J.H., Billiet H.A.H. et al. Combined optimization of mobile phase, pH and organic modifier content in the separation of some aromatic acids by reversed-phase highperformance liquid chromatography/ / J. Chromatogr.- 1983,- vol. 282,- P. 71-81.

75. Haebelfinger P. Fluorimetric determination of drugs in biological materials by meane of HPLC// Pract. Aspects Mod. HPLC Prac. Symp.; Berlin (West), Dec. 7-8, 1981., Berlin; New-York, 1983,- P. 335-353.

76. Haginaka J., Nakagawa T.// ByHcsKH KaraKy.- 1986.- vol. 35, № 3,- P.241-244.

77. Haginaka J., Wakai J„ Yasuda H. et al. Direct serum injection with micellar liqud cnromatography: chromatographic behaviour and recovery of cephalosporins// Anal. Chem.- 1987,- vol. 69, № 22,- P. 2732-2734.

78. Hakim L., Bourne D.W.A., Triggs E.J. High-performance liquid chromatographic assay of cefotaxime, desacetylcefotaxime and ceftriaxone in rat plasma// J. Chromatogr.-Biomed. Appl.- 1988.-vol. 424, № 1,- P. 111-117.

79. Hammers W.E., Meurs G.J., De Ligny C.L. Correlations between liquid chromatographic capacity ratio data on Lichrosorb RP-18 and partition coefficients in the octanol-water system// J. Chro-matogr.- 1982,- vol. 241, № l.. p.1-13.

80. Hanch C., Leo A.J. Substituent constants for correlation analysis in chemistry and biology. - New York: Willey, 1979. - p. 106.

81. Hayward D.S., Zimmerman S.R., Dennis R.S. Drug stability testing by monitoring drug and degradate levels by chromatography// J. Chromatogr.- 1989,- vol. 27, № 5,- P. 235-239.

82. Hekster Y.A., Baars A.M., Vree T.B., et al. Comparison of high performance liquid chromatography and microbiological assay in the deter-

mination of plasma cefuroxime concentrations in rabbits/ / J. Antimicrob. Chemother.- 1980.- vol. 6, № 1,- P. 65-71.

83. Hermann R. B. Structure-activity correlations in the cephalosporin series using extended Huckel theory and CNDO/2 //J. Antibiot.- 1973,- vol. 26, № 4,- P.223-227.

84. Horvath Cs., Melander W. Liquid chromatography with hydrocarbonaceous bonded phases; theory and practice of reversed-phase chromatography// J. Chromatogr.- 1977.- vol. 15, № 9,- P. 393-404.

85. Horvath Cs., Melander W., Molnar J. Liquid chromatography of ionogenic substances with nonpolar stationary phases// Anal.Chem.- 1977,- vol. 49, № 1,- P. 142-154.

86. Horvath Cs., Melander W., Molnar J. Solvophobic interactions in liquid chromatography with nonpolar stationary phases/ / J. Chromatogr.- 1976,- vol. 125, № 1,- P. 129-156.

87. Hou J., Xu X. Study on thermodynamic function of cephalosporins and their quantitative structure-activity relationships by high-performance liquid chromatography/ / Fenxi Huaxue.- 1995.-vol. 23, № 5,- P. 497-501.

88. Hou J.P., Poole J.W. Beta-lactam antibiotics their phisico-chemical properties and biological activities in relation to structure// J. Pharm. Sci.- 1971,- vol. 60,- P. 503-532.

89. Hsieh M.M. et al Accurate determination of log k'w in re-versed-phase liquid chromatography. Implications for quantitative structure-retention relationships// J. Chromatogr.- 1993.- vol. 631, № 1-2,- P.63-78.

90. Jehl F., Birckel P., Monteil H. Hospital routine analysis of penicillins, third generation cephalosporins and aztreonam by conventional and high-speed high-performance liquid chromatography// J. Chromatogr.- 1987,- vol. 413,- P. 109-119.

91. Jinno K., Kawasaki K. Correlation between the retention data of polycyclic aromatic hydrocarbons and several descriptions in reversed phase HPLC// Chromatographia. - 1983. - v.17, № 8. - p. 445-449.

92. Jinno K., Kawasaki K. The correlation between molecular

polarizability of PAHs and their retention data on various stationary phases in reversed-phase HPLC / / Chromatographia. - 1984. - v. 18, № 2. - p. 103-105.

93. Kier J.S., Hal L.H., Murray W.J., Randic M. Molecular connectivity. I: relationship to nonspecific local anestesia// J.Pharm.Sci.- 1975.- vol. 64, № 12,- P. 1971-1974,

94. Kier L.B., Hall L.H. Molecular connectivity in chemistry and drug research. New York, San Francisco, London, 1976,- 257 p.

95. La Folette G., Kaubisch S., Gambertoglio J.G. et al. An ion-pairing high-pressure liquid chromatography assay for the determination of cefoperazone in plasma and urine/ / J. Liquid Chroma-togr.- 1988,- vol. 11, № 3,- P. 683-700.

96. Lam S., Malikin G. An improved microscale protein precipitation procedure for HPLC assay of therapeutic drugs in serum/ / J. Liquid Chromatogr.- 1989,- vol. 12, № 10,- P.- 1851-1872.

97. Lebel M., Ericson J.F., Pitkin D.N. Improved highperformance liquid chromatographic (HPLC) assay method for cefti-zoxime// J. Liquid Chromatogr.- 1984,- vol. 7, № 5,- P.961-968.

98. Lecaillon J.B., Rouan M.C., Souppart C. et al. Determination of cefsulodin, cefotiam, cephalexin, cefotaxime, desacetyl-cefotaxime, cefuroxime and cefroxadin in plasma and urine by highperformance liquid chromatography// J. Chromatogr.-Biomed. Appl.-1982,- vol. 228,- P. 257-267.

99. Martin J., Mendez R. HPLC analysis of cefmetozole and nocardicins A and E in human serum and urine using solid-phase extraction// J. Liquid Chromatogr.- 1988,- vol. 11, № 8,- P.1729-1739.

100. Matsubayashi K.Y., Yoshioka M., Tachizawa H. Simple method for determination of the cephalosporin DQ-2556 in biological fluids by high-performance liquid chromatography: [Pap.] Int. Symp. Chromatogr. (CIS'89), Tokyo, Oct. 17-20, 1990// J. Chromatogr.-1990,- vol. 515,- P. 547-554.

101. Mehta A. C. Sample pretreatment in the trace determination of drugs in biological fluids// Talanla.- 1986.- vol. 33, № 1.- P. 67-73.

102. Melander W.R., Chen B.-K., Horvath Cs. Mobile-phase effects in reversed-phase chromatography. I. Concommitant dependence of retention on column temperature and eluent composition// J. Chromatogr.- 1979,- vol. 185, № 1,- P. 99-109.

103. Mills J.D. Recent advances in automatic sample preparation of biological materials for HPLC analysis// Chromatography' 85: Proc. Budapest Chromatogr. Cont., june 11-14, 1985.- Budapest, 1986,- P. 511-523.

104. Miyazaki K., Ohtani K., Sunada K. et al. Determination of ampicillin, amoxicillin, cephalexin and cephradine in plasma by HPLC using fluorimetric detection// J. Chromatogr.- 1983.- vol. 276,- P. 478-482.

105. Morin R.B., Jackson B.G., Muller R.A., et al. Chemistry of cephalosporin antibiotics. XV. Transformation of penicillin sulfoxide. A synthesis of cephalosporin compounds// J. Anal. Chem. Soc.-1969,- vol. 91,- P. 1401-1407.

106. Murakanu F. Retention behaviour of benzene derivatives in bonded reversed-phase columns// J. Chromatogr.- 1979,- vol. 178, № 2,- P. 393-399.

107. Murrau W.J., Hall L.H., Kier L.B. Molecular connectivity. III. Relationship to partition coefficients// J.Pharm. Sci.- 1975.- vol. 64, № 12,- P. 1978-1981.

108. Nacagawa T., Haginaka J., Yamaoka K. et al High-speed liquid chromatographic determination of cephalexin in human plasma and urine// J. Antibiot.- 1978,- vol. 31, № 8,- P.769-775.

109. Nahata C. Determination of cefaclor by high-performance liquid chromatography//J. Chromatogr.-Biomed. Appl.- 1982.- vol. 228,- P. 429-433.

110. Nahata M. C. High-performance liquid chromatographic determination of cephalexin in human plasma, urine and saliva// J. Chromatogr.-Boimed. Appl.- 1981,- vol. 225, № 2,- P. 532-538.

111. Nahata M. C. Measurement of cefixime in serum and cerebrospinal fluid by high-performance liquid chromatography// J. Liquid Chromatogr.- 1991,- vol. 14, № 20,- P. 3755-3759.

112. Nahata M.C. Measurement of cefazolin in plasma and peritoneal dialysis fluid by HPLC// J. Liquid Chromatogr.- 1990,- vol. 13. № 11.-P. 2285-2291.

113. Nahata M.C., Jackson D.S. Liquid chromatographic method for the determination of cefadroxil in its suspension and in serum/ / J. Liquid Chromatogr.- 1990,- vol. 13, № 8.- P. 1651-1656.

114. Nakae A., Kunihiro K. Separation of homologous fatty acid alkanolamides by high-performance liquid chromatography/ / J. Chromatogr.- 1978,- vol. 156, № 1,- P. 167-172.

115. Nichikava J., Tori K. 3-Substituent effect and 3-methylene substituent effect on the structure-reactivity relationship of 7-beta-(acylamido)-3-cephen-4-carboxylic acid derivatives studies by carbon-13 and IR-spectroscopes// J. Med. Chem.- 1984,- vol. 27,- P. 1657-1663.

116. Nygard G., Khalil W.S.K. An isocratic HPLC method for the determination of cephalosporins in plasma// J. Liquid Chromatogr.- 1984,- vol. 7, № 7,- P. 1461-1475.

117. Paap C.M., Nahata M.C. A nowel micromethod for the simultaneous analysis of cefotaxime and desacetylcefotaxime from plasma using ion-pair HPLC// J. Liquid Chromatogr.- 1989,- vol. 12, № 12,- P. 2385-2395.

118. Page M.I. The mechanisms of reactions of beta-lactam antibiotics// Acc. Chem. Res.- 1984,- vol. 17,- P. 144-151.

119. Peng C.T. Retrival of structure information from retention index// J. Chromatogr. A.- 1994,- vol. 678, № 2.- P. 189-200.

120. Phelps R„ Zurliden E„ Conte J., E., et al. Highperformance liquid chromatographic determination of cefonicid in human plasma, serum and urine// J. Chromatogr.- 1986.- vol. 375, № 1,- P. 111-118.

121. Purser C., Baltar A., Kang Ho I. et al. New rapid method of cefoxitine in serum and bone by high performance liquid chromatography// J. Chromatography.- 1984.- vol.311, № 1,- P. 135-140.

122. Radouane A., Pehonrcq F., Tramu G. et al. Influence of lipophilicity on the diffusion of cephalosporins into the cerebrospinal

fluid//Fundam.Clin.Pharmacol.- 1996,- vol. 10, № 3,- P. 309-313.

123. Randic M. On characterization of molecular branching/ / J. Americ. Chem. Soc.- 1975,- vol. 97, № 23,- P. 6009-6015.

124. Reed K. et al. Quantitative relationships between structure and pharmacokinetic parameters using molecular connectivity chi indices I: Substituted 2-sulfapiridines// J. Pharm. Sci.- 1984,- vol. 73, № 2. P. 237-240.

125. Rekker R.F. The hydrophobic fragmentai constant.- Amsterdam etc.: Elsevier, 1977.- 350 p.

126. Rohrschneider L. Solvent characterisation by gas-liquid partition coefficients of selected solutes// Anal. Chem.- 1975.- vol. 45,- P. 1241-1247.

127. Rouan M.C., Abadie F., Leclerc A. et al. Systematic approach to the determination of cephalosporins in biological fluids by reversed phase liquid chromatography// J. Chromatogr.-Biomed. Appl.- 1983,- № 275,- P.133-144.

128. Safran C. Expert report on Claforan, February 28, 1995.

129. Salo M. et al. Structure-retention relationships of steroid hormones in reversed-phase liquid chromatography and micellar elec-trokinetic capillary chromatography/ / J. Chromatogr. A.- 1996.- vol. 728, № 1-2,- P. 83-88.

130. Salto F., Prieto J. G., Alemany M.T. Interactions of cephalosporins and penicillins with nonpolar octadecylsilyl stationary phase// J. Pharm. Sci.- 1980,- Vol. 69, No. 5.- P. 501-506.

131. Sato K., Kobayashi K., Mizuno Y. et al. Analuses of drugs by capillary high-performance liquid chromatography (fast atom bombardment - mass spectrometry) Part III. Identification of some cephalosporins in human plasma// Hochudoku.- 1992,- vol. 10, № 3,- P. 228-235.

132. Schachter S.H., Spino M., Tesoro A. et al. High performance liquid chromatographic analysis of cefoperasone in serum and urine// J. Liquid Chromatogr.- 1984,- vol. 7, № 12,- P. 2421-2429.

133. Schroder B., Voigt R., Patsch R., et al. Pulse-polarographic determination of beta-lactam antibiotica and its clinical applications// Fre-senius' Z Anal Chem.- 1988.- vol. 331, № 5,- P. 529-530.

134. Sinanoglu O. Molecular associations in biology.- New. York: Acad. Press.- 1968,- P. 427-445.

135. Sinanoglu O., Abdulnur S. Effect of water and other solvents on the structure of biopolymers// Fed. Proc.- 1965,- vol. 24, № 2,- P. 12-23.

136. Snyder L.R., Dolan J.W., Gant J.R. Gradient elution in high-performance liquid chromatography. I. Theoretical basis for re-versed-phase systems// J. Chromatogr.- 1979,- vol. 165, № 1,- P. 330.

137. Snyder L.R., Kirkland J.J. Introduction to modern liquid chromatography.- New York: Willey, 1979,- P. 336.

138. Soraino C. et al. Automated analysis of drugs in urine// J. Chromatogr. B. Biomed. Appl.- 1996,- vol. 687, № 1,- P. 183-187.

139. Srivastava A.K. et al. Quantitative structure activity relationship studies on 3-triazines using van der Waal volume and molecular connectivity index// Indian. J. Biochem. Biophys.- 1989.-vol. 26, № 3,- P. 199-200.

140. Steenwyk R. C., Brewer J. E., Rover M. E. et al Re-versed-phase liquid chromatographic determination of cefpodoxime in human plasma// J. Chromatogr.- 1991.- vol. 14, № 20.- P. 36413656.

141. Swindells M.B. et al. Structure prediction and modeling// Curr. Opin. Biotechnol.- 1991,- vol. 2, № 4,- P. 512-519.

142. Tyczkowska K., Aucoin D.P., Richardson D.G. et al. Ion-paired liquid chromatographic determination of cefazolin in canine serum and tissues// J. Liquid Chromatogr.- 1987.- vol. 10, № 12,2613-2624.

143. Vaidya U., Bhave S. et al. Neonatal septicemia: a reappraisal with special reference to the use of cefotaxime// Ind. Pe-diatr.- 1991,- vol. 28, № 11,- P. 1265-1270.

144..Valko K. General approach for the estimation of octanol/water partition coefficients by reversed-phase high performance liquid chromatigraphy/ / J.Liquid Chromatogr.- 1984.- vol. 7, № 7,-P. 1405-1424.

145. Van de Venne J.L., Hendrikx J.L.H.M., Deeider R.S. Retention behaviour of carboxylic acids in reversed-phase column liquid chromatography// J. Chromatogr.- 1978,- vol. 167.- P. 1-16.

146. Van Krimpen P.C., Van Bennekom W.P., Buli A. Penicillins and cephalosporins. Physicochemical properties and analysis in pharmaceutical and biological matrices// Pharmac. Week. Sei. Edit.-1987,- vol. 9,- P. 1-23.

147. Wagner R., Zegelman M., Satter P. Konzentrations bestimmung von cefotaxim in herzmuskel, fett- und muskelgewebe, by-pass-vene sowie aorten- und mitralklappen wahrend herichirur-gischer eingriffe// ZAC: Z. Antimimikrob. Antineo plast. Chemother.-1987.-vol. 5, № 2,- P. 15-18.

148. Walczak B., Lafosse M., Chretien J.R. et al. Factor analysis and experiment design in high-performance liquid chromatography// J. Chromatogr.- 1986,- vol. 369,- P. 27-37.

149. Wiener H. Correlation of heats of isomerization and differences in heat of vaporization of isomers, among the parrafin hydrocarbons// J. Amer. Chem. Soc. - 1947,- v.69.- P.2636-2638.

150. Yamagami C., Ogura T., Takao N. Hydrophobicity parameters determined by reversed-phase liquid chromatography. 1. Relationship between capacity factors and octanol-water partition coefficients for monosubstituted pyrazines and the related pyridines// J. Chromatogr.- 1990,- vol. 514,- P. 123-136.

151. Yamana T., Tsuji A. Comparative stability of cephalosporins in aqueous solution: kinetics and mechanisms of degradation// J. Pharm. Sei.- 1976,- vol. 65,- P. 1563-1574.

152. Yamana T., Tsuji A., Kanayama K. et al. Comparative stabilities of cephalosporins in aqueous solutions// J. Antibiot.-1974.- vol. 27,- P. 1000-1002.

153. Yamana T., Tsuji A., Miyamoto E. et al. Novel method for determination of partition coefficients of penicillins and cephalosporins by high-pressure liquid chromatography// J. Pharm. Sci.-1977,- vol. 66, № 5,- P. 747-749.

154. Yano K. Global structure-acute toxicity relationships for mice using structural parameter ratios: new approach to molecular

design and screening/ / SAR QSAR Environ. Res.- 1995.- vol. 3, № 1,- P.15-26.

155. Yu A.B.C., Nightingale C.H., Flanagan D.R. Rapid sensitive fluorimetric analysis of cephalosporin antibiotics// J. Pharm. Sei.- 1977. vol. 66,- P. 213-216.