Закономерности автоселекции популяций микроорганизмов при длительном непрерывном культивировании тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.02, кандидат физико-математических наук Логинов, Иван Александрович

• Логинов, Иван Александрович
• кандидат физико-математических наук
• 2008

Оглавление диссертации кандидат физико-математических наук Логинов, Иван Александрович

ВВЕДЕНИЕ

Глава 1. ПОПУЛЯЦИОННЫЕ АСПЕКТЫ УПРАВЛЯЕМОГО КУЛЬТИВИРОВАНИЯ РЕКОМБИ НАНТНЫХ ШТАММОВ

МИКРООРГАНИЗМОВ

1Л. Общие закономерности роста и развития популяций микроорганизмов при управляемом культивировании

1.2. Нестабильность генноинженерных штаммов микроорганизмов, содержащих рекомбинантные плазмиды, при длительном непрерывном культивировании

1.3. Особенности развития открытых биологических систем

Глава 2. ОБЪЕКТ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Используемые культуры микроорганизмов

2.2. Методы культивирования

2.3. Питательные среды и их приготовление

2.4. Анализы

2.5. Математическая обработка экспериментальных данных

Глава 3. ТЕОРЕТИЧЕСКОЕ И ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ЗАКОНОМЕРНОСТЕЙ АВТОСЕЛЕКЦИИ МИКРОБНЫХ ПОПУЛЯЦИЙ ПРИ НЕПРЕРЫВНОМ КУЛЬТИВИРОВАНИИ

3.1 Использование непрерывного культивирования для селекции микробных штаммов-деструкторов токсичных поллютантов

3.2 Математическая модель автоселекции генноинженерных штаммов микроорганизмов при непрерывном культивировании 76 3.3. Экспериментальное исследование автоселекции плазмидсодержащего штамма бактерий Е. со/z К

MG1655 при непрерывном культивировании в рН-стате

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Закономерности автоселекции популяций микроорганизмов при длительном непрерывном культивировании»

АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ. Непрерывное культивирование является аналогом большинства природных ситуаций: хемостат аналогичен ситуациям, где встречается лимитирование роста недостатком питательных веществ, элементов или микроэлементов; турбидостат отвечает условиям максимально возможного роста при ограничении плотности популяции. С точки зрения функционирования открытых систем хемостат и турбидостат -это термодинамические системы, способные находиться в устойчивых стационарных состояниях. Причем, в соответствии с классификацией М.Эйгена, хемостат соответствует случаю постоянных потоков, а турбидостат - случаю постоянной организации (или постоянных реакционных сил). Таким образом, в руках экспериментаторов имеются открытые системы двух основных типов развития и для биологии, и для термодинамики. Если в таких системах происходят эволюционные изменения, переход от одного стационарного состояния к другому в результате изменения качественных свойств систем (например, в результате процессов мутирования и отбора), то главные характеристики этих генетических перестроек в популяциях, или шагов эволюции, можно измерить, не теряя общности подхода с точки зрения, как биологии, так и физики. Одним из ярких и наглядных примеров эволюционных переходов в таких открытых системах является микроэволюционная перестройка популяции плазмидосодержащего штамма бактерий при длительном непрерывном культивировании, где имеет место потеря плазмид клетками и автоселекция бесплазмидного штамма, более активного, чем исходная форма. Используя плазмидсодержащие штаммы бактерий как удобный объект для изучения переходов из одного стационарного состояния в другое в результате микроэволюционных перестроек можно получить существенное дополнение термодинамической теории открытых биологических систем с целью дальнейшего изучения общих закономерностей биологического развития.

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ. Целью настоящей работы является изучение общих закономерностей микроэволюции микробных популяций в открытых системах на примере автоселекции плазмидсодержащих штаммов бактерий и фенолразрушающих микроорганизмов при длительном непрерывном культивировании.

ОСНОВНЫЕ ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ

1. Исследовать процесс автоселекции фенолразрушающих микроорганизмов в обоих типах открытых систем при длительном непрерывном культивировании в хемостате и турбидостате (рН-стате).

2. С помощью математической модели проанализировать и сравнить закономерности автоселекции плазмидсодержащих бактерий при непрерывном культивировании при двух режимах: в турбидостате и хемостате.

3. Исследовать в экспериментах процесс автоселекции генноинженерного штамма бактерий E.coli К-12 MG1655, содержащего в составе плазмид клонированные гены зеленого флуоресцентного белка (GFP), при культивировании в рН-стате.

ОСНОВНЫЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ. В работе использовались методы математического моделирования динамики численности микробных популяций, экспериментальные методы периодического и непрерывного культивирования плазмидсодержащих штаммов бактерий и фенолразрушающих микроорганизмов.

ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ

1. Остаточная концентрация субстрата у популяции бесплазмидного штамма, заместившего исходную плазмидсодержащую популяцию в турбидостате возрастает, и таким образом, классический хемостатный критерий микроэволюции и конкурентоспособности популяций, основанный на снижении остаточной концентрации субстрата, не является универсальным и в турбидостате не работает.

2. В экспериментах по автоселекции генноинженерного штамма бактерий E.coli К-12 MG1655, содержащего клонированные гены зеленого флуоресцентного белка (GFP), в рН-стате показано, что в процессе замещения плазмидного штамма бесплазмидным возрастает и остаточная концентрация, и поток энергетического субстрата, использованного популяцией Нисп.

3. Общим критерием микроэволюции микробных популяций в обоих типах открытых биологических систем (в хемостате и в турбидостате) является возрастание потока энергетического субстрата Htlcn, использованного популяцией.

ПРАКТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ РАБОТЫ. Результаты работы могут быть использованы для прогнозирования динамики генно-инженерных штаммов микроорганизмов, содержащих плазмиды, используемых в биотехнологическом производстве. Основываясь на результатах работы можно оценить устойчивость ожидаемых стационарных состояний в непрерывной культуре микроорганизмов при различных ограничениях их роста, наиболее вероятное их направление и скорости автоселекции бесплазмидных вариантов при длительном культивировании микроорганизмов. Результаты работы целесообразно использовать при интенсификации на основе непрерывных культур микроорганизмов процессов микробиологического производства, очистки сточных вод, при разработке эффективных способов селекции новых штаммов, обладающих ценными свойствами, в частности, повышенной экономичностью использования субстратов.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ. Результаты работы докладывались на Международном Байкальском Микробиологическом Симпозиуме IBSM-2003 «Микроорганизмы в экосистемах озер, рек, водохранилищ» (Иркутск, 2003), на Международном симпозиуме COSPAR-2004 (Франция, Париж), на III Съезде биофизиков России (Воронеж, 2004), на конференции молодых ученых Института биофизики СО РАН (Красноярск 2002), на объединенном семинаре лаб. Экологической биофизики, лаб. Экологической биотехнологии и лаб. УБГ, на семинарах лаборатории УБГ.

ПУБЛИКАЦИИ. Список публикаций включает три статьи в журналах (Доклады РАН, Вестник КГУ, серия физика), три статьи в трудах международных конференций и тезисы на конференциях и биофизическом съезде РАН (Воронеж, 2004).

Заключение диссертации по теме «Биофизика», Логинов, Иван Александрович

ОСНОВНЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ И ВЫВОДЫ

1. Показано, что в результате автоселекции при непрерывном культивировании можно получить активные штаммы и сообщества микроорганизмов, использующих токсичные субстраты, двух типов. В хемостате отбираются штаммы с высокой полнотой использования токсичного субстрата до предельно низких концентраций в среде, такие как дрожжи С. tropicalis. При селекции в рН-стате выделены штаммы бактерий Rhodococcus sp. с высокой деградирующей способностью, проявляющейся при высоких концентрациях токсичного субстрата фенола в среде.

2. Построена, и проанализирована математическая модель автоселекции генноинженерных плазмидсодержащих штаммов бактерий при непрерывном культивировании в турбидостате. Анализ математической модели показывает, что остаточная концентрация субстрата у популяции бесплазмидного штамма, заместившего исходную плазмидсодержащую популяцию в турбидостате, может и возрастать, и таким образом, классические хемостатные критерии микроэволюции и конкурентоспособности популяций, основанные на снижении остаточной концентрации субстрата или большем наклоне зависимости |i(S) у победившего вида, не являются универсальными и в турбидостате не работают.

3. В экспериментах по автоселекции генноинженерного штамма бактерий E.coli К-12 MG1655, содержащего клонированные гены зеленого флуоресцентного белка (GFP) в плазмиде pGLO, при культивировании в рН-стате показано, что поток энергетического субстрата, использованного популяцией, возрастает.

4. Результаты проведенных экспериментов и расчетов по математическим моделям подтверждают, что возрастание потока энергетического субстрата, захваченного популяцией, можно считать общим критерием развития обоих типов открытых биологических систем (в хемостате и в турбидостате).

ИСПОЛЬЗОВАННЫЕ ОБОЗНАЧЕНИЯ И СОКРАЩЕНИЯ

X - плотность популяции микроорганизмов Y — экономический коэффициент использования субстрата Yg - истинный" экономический коэффициент

D — удельная скорость протока питательной среды через культиватор Do, к — постоянные коэффициенты в уравнении пропорционального регулятора плотности популяции в турбидостате S — концентрация лимитирующего рост субстрата в культуре S0 — концентрация субстрата подаваемая в культиватор Sqct - остаточная концентрация лимитирующего рост субстрата S - концентрация лимитирующего рост субстрата в точке пересечения зависимостей скоростей роста плазмидной и бесплазмидной популяции микроорганизмов S* - критическая концентрация фенола S3 - энтропия

Нисп - поток энергетического субстрата использованного популяцией

Ks - константа полунасыщения

К; - константа ингибирования

К - предельная емкость среды р, - удельная скорость роста микроорганизмов

М-max — максимальная удельная скорость роста микроорганизмов

X - корни характеристического уравнения g - число генераций tgen — время генерации

GFP — зеленый флуоресцентный белок - величины относятся к плазмидной популяции микроорганизмов ~ - величины относятся к бесплазмидной популяции микроорганизмов ~ - величины относятся к стационарному состоянию

СПИСОК РАБОТ ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Логинов И.А., Брильков А.В. (2004) Математическое моделирование микроэволюции популяций микроорганизмов в открытых биологических системах. Вестник КГУ. Сер. физико-математические науки. 5, 90-98

2. Брильков А.В., Логинов И.А., Морозова Е.В., Печуркин Н.С, (2005) Закономерности микроэволюции микробных популяций в открытых система к. Доклады Академии наук. 404, №5, 690-693.

3. Логинов И.А., Брильков А.В. (2005) Математическое моделирование автоселекции микробных популяций при субстратном ингибировании их роста в непрерывной культуре. Вестник КГУ. Сер. физико-математические науки. 1, 44-49

4. Логинов И. А., Брильков А.В., Печуркин Н.С. (2005) Экспериментальное исследование микроэволюции микробных популяций в двух основных типах открытых биологических систем (хемостат, турбидостат). Международное рабочее совещание «Происхождение и эволюция биосферы», тезисы докладов, Новосибирск, с. 250

5. Логинов И.А. Математическое моделирование популяционной неустойчивости плазмид. В кн.: НКСФ-2000. Сборник тезисов докладов научной конференции студентов физиков. - Красноярск: КГУ, 2000. с.43.

6. I.A.Loginov, A.V.Brilkov. Prospects of using continuous cultivation for rapid selection of microbial strain-destructor of toxic pollutants. In international baikal symposium on microbiology (IBSM-2003) «Microorganisms in ecosystems of lakes, rivers and reservoirs». Irkutsk-Russia. September 8-13, 2003. p. 85-86.

7. Логинов И.А. Брильков А.В. Математическое и экспериментальное моделирование процессов биологического развития на примере микроэволюции рекомбинантных штаммов бактерий при непрерывном культивировании. III Съезд биофизиков России. Тез. Докл. Воронеж 2004. с.354.

8. Brilkov A.V., Loginov I.A., Morozova E.V. Pechurkin N.S. Experimental specification of open systems evolution physical principles. In: COSPAR, 19-21 July 2004, Paris (France). - 1 p

9. Логинов И. А. Особенности энергопотребления открытых биологических систем. Сборник материалов 24 региональной научно-технической конференции «Проблемы строительства и архитектуры». Красноярск 2006, с. 255.

10. Логинов И. А. Математическое моделирование гетерогенности популяций, развивающихся в открытых системах. Сборник материалов 25 региональной научно-технической конференции «Проблемы строительства и архитектуры». Красноярск 2007, с. 426.

Список литературы диссертационного исследования кандидат физико-математических наук Логинов, Иван Александрович, 2008 год

1. Alagappan G and Cowan RM (2001) Biokinetic models for representing the complete inhibition of microbial activity at high substrate concentrations. Biotechnol Bioeng, 75, 393-405.

2. Anderson E.S. (1968) The ecology of transferable drug resistance in the enterobacteria. Ann Rev Microbiol, 22, 131-180.

3. Anderson, R.M. and May, R.M. (1991) Infectious diseases in humans: dynamics and control. Oxford University Press, New York.

4. Awong, J., Bitton, G. and Chaudhry, G.R. (1990) Microcosm for assessing survival of genetically engineered microorganisms in aquatic environments. Appl Environ Microbiol, 56, 977-983.

5. Bailey, J.E., Da Silva, N.A., Peretti, S.W., Seo, J.H. and Srienc, F. (1986) Studies of host-plasmid interactions in recombinant microorganisms. Ann N Y AcadSci, 469, 194-211.

6. Bailey, J.E., Hjortso, M., Lee, S.B. and Srienc, F. (1983) Kinetics of product formation and plasmid segregation in recombinant microbial populations. Annals of the New York Academy of Sciences, 413, 71-87.

7. Bastos AER, Cassidy MB, Trevors JT, Lee H and Rossi A (2001) Introduction of green fluorescent protein gene into phenol-degrading Alcaligenes faecalis cells and their monitoring in phenol-contaminated soil. Appl Microbiol Biotechnol, 56, 255-260

8. Bennett P.M., Richmond M.H. (1978) Plasmids and Their Possible Influence on Bacterial Evolution. Bact Treatise Structure and Function, 6, 1-69.

9. Bentley, W.E., Mirjalili, N., Andersen, D.C., Davis, R.H. and Kompala, D.S. (1990) Plasmid-encoded protein: the principal factor in the metabolic burden associated with recombinant bacteria. Biotechnol Bioeng, 35, 668-81.

10. Boon N, Top EM, Verstraete W and Siciliano SD. (2003) Bioaugmentation as a tool to protect the structure and function af an activated-sludge microbialcommunity against a 3-cloroaniline shock load. Appl Environ Microbio, 69, 15111520.

11. Borighem G, Vereecken J (1981) Model of a chemostat utilizing phenol as inhibitory substrate. Ecol Modelling, 12, 231-243.

12. Brownlie, L., Stephenson, J.R. and Cole, J. A. (1990) Effect of growth rate on plasmid maintenance by Escherichia coli HB101(pAT153). J Gen Microbiol, 136, 2471-80.

13. Chalfie, M., Tu, Y., Euskirchen, G., Ward, W.W. and Prasher, D.C. (1994) Green fluorescent protein as a marker for gene expression. Science, 263, 802-5.

14. Clarke P.H. (1978) Experiments in microbial evolution. Bact. Treatise Structure and Function, 6, 137-218.

15. Davi ML and F Gnudi (1999) Phenolic compounds in surface water. Water Res, 33, 43213-43219.

16. Demma, A. (2001) The Biological Cost of Antibiotic Resistance Plasmids in Natural Populations of Escherichia coli. Biology department. Emory University, Atlanta, p. 62.

17. Der Yang R, Humphrey AE (1975) Dynamic and steady state studies of phenol biodegradation in pure and mixed cultures. Biotechnol Bioeng, 17, 12111235

18. Duetz, W.A. and van Andel, J.G. (1991) Stability of TOL plasmid pWWO in Pseudomonas putida mt-2 under non- selective conditions in continuous culture. J Gen Microbiol, 137, 1369-1374.

19. Dwivedi C.P., ImanakaT., Aiba S. (1982) Instability of Plasmid-Harboring Strains of E.coli in Continuous culturq-Biotechnology and Bioengineering, 24, 1465-1468.

20. Dykhuizen, D.E. and Hartl, D.L. (1983) Selection in chemostats. Microbiol Rev, 47, 150-168.

21. Edwards VH (1970) The influence of high substrate concentrations on microbial kinetics. Biotechnol Bioeng, 12, 679-712.

22. Fieschko J, Humphrey AE (1984) Statistical analysis in the estimation of maintenance and true growth yield coefficients. Biotechnol Bioeng, 26, #4, 394396.

23. Flower R.G. McCinty L., Morteimans K.E. (1979) Spontaneous mutational specifiently of drug resistance plasmid pKMlOl in Escherichia coli. J. BacterioX, 140, 929-937

24. Ganusov V.V., Brilkov A.V. (2002) Estimating the instability parameters of plasmid-bearing cells. I. Chemostat culture. Journal of Theoretical Biology', 219, 193-205.

25. Godwin, D. and Slater, J.H. (1979) The influence of the growth environment on the stability of a drug resistance plasmid in Escherichia coli K12. J Gen Microbiol, 111,201-210.

26. Gottschalk G (1979) Bacterial metabolism. Springer-Verlag, New York.

27. Guzman, L.M., Belin, D., Carson, MJ. and Beckwith, J. (1995) Tight regulation, modulation, and high-level expression by vectors containing the arabinose PBAD promoter. JBacteriol, 177, 4121-4130.

28. Hansen S.R., Hubbell S.P. (1980) Single-nutrient microbial competition: Qualitative agreement between experimental and theoretically forecasted outcomes. Science, 207 #. 4438, 1491-1493.

29. Helling R.B., Kinney Т., Adams J. (1981) The maintenance of plasmid containing organisms in population of E. Coli. J. Gen. Microbiol, 123, 129-141.

30. Herbert D., Elsworth R., Teling R.C. (1956) The continuous culture of bacteria: A theoretical and experimental study. J. Gen. Microbiol, 14, 601-662.

31. Herbert, D., Phipps, P.J. and Tempest, D.W. (1965) The chemostat: design and instrumentation. Lab Pract, 14, 1150-1161.

32. Hill GA, Robinson GW (1975). Substrate inhibition kinetics: Phenol degradation by Pseudomonas putida. Biotechnol Bioeng, 17, 1599-1615.

33. Hsu S.B. Habbell S.P. Waltman P. (1977) A Mathematical theory for single-nutrient competition in continuous culture of microorganisms. SIAMJ. Appl. Math, 32, 366-383.

34. Jensen J (1996). Chlorophenols in the terrestrial environment. Rev. Environ Contam Toxicol, 146, 25-51.

35. Jones GL, Jensen F, Mckay AJ. (1973) Substrate inhibition of the growth of bacterium ncib 8250 by Phenol. J Gen Microbiol, 74, 139-148.

36. Martin GA, Hempfling WPA (1976) A method for the regulation of microbial populations density during continuous culture at high growth rates. Arch Microbiol, 107, 41-47.

37. McAthey P., Kilbey B.J. (1977) Mutation in continuous culture of Schizosaccharomyces pombe. I. Dependence of tht kinetics of mutation accumulation upon the Growth-limitting nutrilite. Mut. Res, 44, 227-234.

38. McClure NC, JC Fry and AJ Weightman (1991) Survival and catabolic activity of natural and genetically engineered bacteria in a laboratory-scale activated sludge unit. Appl Envirion Microbiol 57, 366-373

39. Monod J. (1950) La technique de culture continue. Ann. Inst. Past, 79: 390410.

40. Monod, J. (1949) The growth of bacterial cultures. Annual Review of Microbiology, 3, 371-394.

41. Monteirol AA, Boaventura RA, Rodrigues AE (2000) Phenol biodegradation by Pseudomonas putida DSM 548 in batch reactor. Biochem Eng J Aug 1, 6 (1), 45-49.

42. Moser H. (1958) The dynamics of bacterial populations maintained in the chemostat. Washington: Carnegie Ins. of Wash, 1-136.

43. Neidhardt, F.C. and Curtiss, R. (1996) Escherichia coli and Salmonella : cellular and molecular biology. ASM Press, Washington, D.C.

44. Nguyen, T.N., Phan, Q.G., Duong, L.P., Bertrand, K.P. and Lenski, R.E. (1989) Effects of carriage and expression of the TnlO tetracycline-resistance operon on the fitness of Escherichia coli K12. Mol Biol Evol, 6, 213-25.

45. Noack, D., Roth, M., Geuther, R., Muller, G., Undisz, K., Hoffmeier, C. and Gaspar, S. (1981) Maintenance and genetic stability of vector plasmids pBR322 and pBR325 in Escherichia coli K12 strains grown in a chemostat. Mol Gen Genet, 184, 121-124.

46. Novick, A. and Szilard, L. (1950) Description of the chemostat. Science, 112,715-718.

47. Papadopoulos, D., Schneider, D., Meier-Eiss, J., Arber, W., Lenski, R.E. and Blot, M. (1999) Genomic evolution during a 10,000-generation experiment with bacteria. Proc Natl Acad Sci USA, 96, 3807-3812.

48. Parales RE, Bruce NC, Schmid A and Wackett LP (2002) Biodegradation, biotransformation and biocatalysis (B3). Appl Environ Microbiol, 68, 4699-4709.

49. Pawlowsky U, Howell JA, Chi CT (1973) Mixed culture biooxidation of phenol. III. Existence of multiple steady states in continuous culture with wall growth. Biotechnol Bioeng, 15 #5, 905 916.

50. Pirt, S .J. (1975) Principles of Microbe and Cell Cultivation. Blacbvell Scientific publications, Oxford.

51. Reynolds, M.G. (2000) Compensatory evolution in rifampin-resistant escherichia coli. Genetics, 156, 1471-1481.

52. Rice C.W., Hempfling W.P. (1985) Nutrient-limited continuous culture in the pH-auxostat. Biotechnol. Bioeng, 27, 187-191.

53. Slater J.H., Godwin D. (1980) Microbial adaptation and selection. Con temp. Microb. Ecol., Proc. 2ndIntern.Symp. Coventry.-L. E.a .137-160.

54. Sniegowski, P.D., Gerrish, P.J. and Lenski, R.E. (1997) Evolution of high mutation rates in experimental populations of E.coli. Nature, 387, 703-705.

55. Sobecky, P.A., Schell, M.A., Moran, M.A. and Hodson, R.E. (1992) Adaptation of model genetically engineered microorganisms to lake water: growth rate enhancements and plasmid loss. Appl Environ Microbiol, 58, 3630-3637.

56. Soda S, Ike M, Fujita M (1998) Effects of inoculation of a genetically engineered bacterium on performance and indigenous bacteria of a sequencing batch activated sludge process treating phenol. J Ferment Bioeng, 86, 90-96.

57. Tempest D.W. (1978) Biochemical significance of microbial growth yields: A reassessment? Trends ofBiochem. Sci, 32, 366-383.

58. Tsien, R.Y. (1998) The green fluorescent protein. Annu Rev Biochem, 67, 509-544.

59. Watanabe K, Yamamoto S, Hino S and Harayama S (1998) Population dynamics of phenol-degrading bacteria in activated sludge determined by gyrB-targed PCR. Appl Environ Microbiol, 64, 1203-1209.

60. Watanabe, K., S. Hino, and N. Takahashi (1996) Effect of exogenous phenol-degrading bacteria on performance and ecosystem of activated sludge. J Ferment Bioeng, 82, 291-298.

61. Whiteley, A.S., and M.J. Bailey (2000) Bacterial community structure and physiological state within an industrial phenol bioremediation system. Appl Environ Microbiol, 66, 2400-2407.

62. Wilson, T. and Hastings, J.W. (1998) Bioluminescence. Annu Rev Cell Dev Biol, 14, 197-230.

63. Wouters, J.T., Driehuis, F.L., Polaczek, P.J., van Oppenraay, M.L. and van Andel, J.G. (1980) Persistence of the pBR 322 plasmid in Escherichia coli К 12 grown in chemostat cultures. Anionic Van Leeuwenhoek, 46, 353-362.

64. Wu T.T. (1978) Experimental evolution in bacteria. CRC Crit. Rev. Microbiol, 6,# 1, 33-51.

65. Абросов H.C., Ковров Б.Г. (1977) Анализ видовой структуры трофического уровня одноклеточных. Новосибирск: Наука. Сибирское отд-ние, 190 с.

66. Абросов Н.С., Ковров Б.Г., Черепанов О.А. (1982) Экологические механизмы сосуществования и видовой регуляции. Новосибирск: Наука. Сибирское отд-ие, 301 с.

67. Берг JI.C. (1977) Труды по теории эволюции. JL: Наука Бейли Ж., Оллис Д. (1989) Основы биохимической инженерии. М.:Мир, 1,692 с.

68. Белокрысенко С.С. (1978) Генетическое изучение ассоциированной с плазмидой высокой частоты мутации к стрептомицинрезистентности у Escherichia coli. Генетика. 14 №1, 145-153.

69. Брилъков А.В., Печуркин Н.С. (1979) Ингибирование роста Candida mycoderma фенолом и автоселекция резистентных форм при непрерывном рН-статном культивировании. Микробиология 48 № 4, 715-719 Брода П. (1982) Плазмиды. М.: Мир, 224с.

70. Бельков В.В. (1983) Нестабильность рекомбинантных молекул. Генетика, ,19, №10, 1575-1581.

71. Вольтерра В. (1976) Математическая теория борьбы за существование. М.: Наука, 286 с.

72. Гаузе Г.Ф. (1934) Экспериментальное исследование борьбы за существование между Paramecium caudatum и Paramecium surelia и Stilonychia mutilis. Зоол. Журнал, 13 №1, 1-17.

73. Глотов Н.В., Животовский J1.A., Хованов Н.В., Хромов-Борисов Н.Н. (1982) Биометрия. Ленинградский гос. Ун-т им А.А. Жданова-JI., 264 с.

74. Гуревич Ю.Л. (1966) О сравнении двух типов систем осуществления плотностатного режима культивирования микроорганизмов. Управляемый биосинтез. АН СССР Сиб. отд-ние Ин-т физртки -М.: Наука, 45-50.

75. Гуревич Ю.Л. (1984) Устойчивость и регуляция размножения в микробных популяциях. Новосибирск: Наука, 1-161.

76. Дарвин Ч. (1952) Происхождение видов путем естественного отбора. М.:Сельхозгиз. 483 с.

77. Дегерменджи А.Г. (1981) Проблема сосуществования взаимодействующих проточных популяций. Смешанные проточные культуры микроорганизмов. Новосибирск, 26-106.

78. Егорова Н.С. (1976) Практикум по микробиологии. Издательство Московского университета, 59 — 64

79. Зотин И.А., Зотин А.А. (1999) Направление, скорость и механизмы прогрессивной эволюции. Термодинамические и экспериментальные основы. М.: Наука,. 320 с.

80. Квитко К.В. (1974) Относительная роль мутаций и отбора в микробных популяциях. Успехи современной генетики. М.: Наука, 101-114.

81. Корниш-Боуден Э (1979) Основы ферментативной кинетики. Мир, Москва

82. Кох А. (1983) Измерение роста. Методы общей бактериологии. М.: Мир, 1, 462-511.

83. Лисовский Г.М., Сыпневская Э.К., Ян Н.А. (1969) Экспериментальное моделирование автоселекционных процессов в непрерывной культуре микроводорослей. Биология и культивирование микроорганизмов : Докл. конф. Красноярск, 89-92.

84. Максимов В.Н. (1980) Многофакторный эксперимент в биологии. М.: Изд-во Моск. Ун-та, 280 с.

85. Мейнелл Г. (1976) Бактериальные плазмиды: М.: Мир, 237 с.

86. Миллер Дж. (1976) Эксперименты в молекулярной генетике. М.: Мир,436 с.

87. Перт С.Дж. (1978) Основы культивирования микроорганизмов и клеток. М.: Мир, 1-331.

88. Печуркин Н.С. (1978) Популяционная микробиология. Новосибирск: Наука, 1-207.

89. Печуркин Н.С., Брильков А.В., Марченкова Т.В. (1990) Популяционные аспекты биотехнологии. Новосибирск: Наука, 1-173.

90. Печуркин Н.С., Терсков И.А. (1973) Автоселекционные процессы в непрерывной культуре микроорганизмов. Сиб. отд-ние, Новосибирск, 64 с.

91. Печуркин Н.С., Брильков АВ, Марченкова Т.В. (1990) Популяционные аспекты биотехнологии. Наука Сиб отд-ние, Новосибирск

92. Станиер. (1956) Эволюционная и физиологическая адаптация, или дарвинизм в микробиологии. Адаптация у микроорганизмов. М.: Изд-во иностр. лит., 17-38.

93. Стейниер Р., Эднльберг Э., Ингрем Дж. (1982) Мир микробов. М.:Мир, 1, 320 с.

94. Урбах В.Ю. (1975) Статистический анализ в биологических и медицинских исследованиях. М.: Медицина, 295 с.

95. Химмельблау Д. (1973) Анализ процессов статистическими методами. М: Мир, 957 с.

96. Эйген М. (1976) Самоорганизация материи и эволюция биологических макромолекул. М.: Мир,