Возможности метода определения карбонильных групп белков сыворотки крови для оценки состояния "окислительного стресса" в клинической практике тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.46, кандидат биологических наук Фролова, Милена Юрьевна

• Фролова, Милена Юрьевна
• кандидат биологических наук
• 2003

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Фролова, Милена Юрьевна

СПИСОК СОКРАЩЕНИИ.

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Активные формы кислорода и их влияние на структуру и функцию белка.

1.2. Влияние аминокислотного состава на чувствительность белка к окислению.

1.3. Свободнорадикальное окисление и нативная структура белка.

1.4. Окисление белков, катализируемое металлами.

1.5. Ускоренная деградация молекул белка как следствие окислительной денатурации.

1.6. Взаимодействие белков с продуктами перекисного окисления липидов.

1.7. Неэнзиматическое гликозилирование белков.

1.8. Оценка степени окисления белков в интактных клетках и модельных системах.

1.9. Роль окислительной модификации в регуляции оборота белков

1.10. Окислительная модификация белков как показатель степени оксидативного стресса.

1.11. Влияние АФК на функциональную активность белков плазмы крови.

Глава 2. Материалы и методы.

2.1. Характеристика обследованных больных.

2.2. Характеристика методов исследования.

2.2.1. Исследование окислительной модификации белка в модельных системах.

2.2.2. Методы анализа активных форм кислорода и продуктов окислительной деградации макромолекул.

2.2.3. Методы исследования антиоксидантной системы.

2.2.4. Статистические методы.

2.2.5. Характеристика используемых реактивов и оборудования

Глава 3. Данные модельных опытов и методические аспекты определения карбонильных групп белков сыворотки крови.

3.1. Изучение окислительной модификации белков в модельных опытах.

3.1.1. Дифференциальные спектры динитрофенилгидразонов белков при их окислении в химических системах, генерирующих активные формы кислорода.

3.1.2. Тушение триптофановой флуоресценции и образование битирозина.

3.2. Методические аспекты определения карбонильных групп белков сыворотки крови.

3.2.1. Выявление аналитической надежности метода определения карбонильных групп белков сыворотки крови.

3.2.2. Определение карбонильных групп во фракциях белков сыворотки крови.

Глава 4. Карбонильные группы белков сыворотки крови в оценке окислительного стресса» у пациентов с рассеяным склерозом.

Глава 5. Карбонильные группы белков в оценке «окислительного стресса» при макулодистофии.

Глава 6. Карбонильные группы белков сыворотки крови и оценка окислительного стресса» у пациентов с сердечно-сосудистой патологией.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Возможности метода определения карбонильных групп белков сыворотки крови для оценки состояния "окислительного стресса" в клинической практике»

Актуальность проблемы. Процессы кислородного метаболизма в организме связаны с образованием активных форм кислорода (АФК), обладающих высокой реакционной способностью. Активность АФК связана с участием в метаболизме белков, липидов, нуклеиновых кислот, гликозамингликанов и заключается в способности вызывать окислительную модификацию биомолекул.

Для защиты клеточных компонентов от окисления в процессе эволюции живыми организмами была создана эффективная система антиоксидантной защиты (АОЗ). Она включает в себя ферменты, способные превращать АФК в неактивные метаболиты, металлсвязывающие белки, антиоксиданты, синтезируемые в организме и поступающие в организм с пищей.

Таким образом, степень выраженности окисления зависит от интенсивности генерации свободных радикалов и состояния системы антиоксидантной защиты. Нарушение активности этих систем приводит к интенсификации процессов перекисного окисления липидов, деструкции белков, нуклеиновых кислот и гликозамингликанов.

В настоящее время не вызывает сомнения важная роль АФК в развитии различного рода патологических процессов. Патогенетическая роль АФК выявлена почти для ста заболеваний человека. Их действие наиболее выражено при сердечно-сосудистой патологии, ишемических повреждениях нервной ткани, в развитии атеросклероза, при катаракте и других офтальмологических заболеваниях. Большинству патологических процессов, течение которых усугубляется участием АФК, свойственно так называемое состояние «окислительного стресса», характеризующееся усилением продукции этих субстанций.

В последние годы особенно большое внимание уделяется изучению роли АФК в метаболизме белков. Вызвано это, во-первых, тем, что белки оказались наиболее чувствительными к свободнорадикальному окислению по сравнению с другими биомолекулами, и, как полагают, их окисление является наиболее ранним показателем усиления продукции АФК. Во-вторых, интерес к окислительной модификации белков обусловлен той важной ролью, которую белки играют в живой клетке и в организме.

Влияние свободных радикалов на белки разного типа приводит к сложным модификациям в структуре белковой молекулы и, соответственно, к изменению ее физико-химических и биологических свойств. В зависимости от интенсивности генерации АФК степень окисления может быть различной: от единичных повреждений аминокислотных остатков до агрегации и фрагментации белковых молекул (Berlett B.S., Stadman E.R., 1997). Следствием этого могут стать нарушения в структуре активных центров ферментов, центров связывания белков-переносчиков, изменение антигенных свойств белков. Пути и конечные продукты окислительной модификации белков крайне сложны и многообразны, однако существует ряд характерных химических форм, которые образуются в большинстве случаев. К таким продуктам окисления относятся карбонилпроизводные белков. Было разработано несколько методов для определения содержания карбонильных групп белков (СО-групп), но наиболее чувствительным оказался метод, основанный на взаимодействии карбонильных групп с 2,4-динитрофенилгидразином (Oliver C.N., 1987; Chevion М. et al., 2000). До последнего времени этот метод успешно применялся в научных исследованиях при работе с модельными системами и с изолированными тканями. Эти успехи, естественно, привели к попыткам использовать данный метод для оценки степени окислительной модификации белков и как маркер окислительного стресса в клинической практике. Так как использование тканей в качестве клинического материала невозможно, основным объектом исследования стали сывороточные белки (Chevion М., 2000; Matteucci Е. et al., 2001). За последние годы в этом направлении был достигнут определенный прогресс, и в настоящий момент исследования не прекращаются. Было отмечено повышение уровня карбонильных групп белков в сыворотке крови пациентов с болезнью Альцгеймера (Conrad С.С. et al., 2001), с хронической почечной недостаточностью (Himmelfabr J. et al.,

2000), детей с ювенильным хроническим артритом (Renke J. et al., 2000), у хирургических больных в критических состояниях (Пасечник И.Н. и соавт.,

2001).

Таким образом, полученные данные свидетельствуют о том, что сывороточные белки действительно подвергаются окислительной модификации при различных патологических процессах и степень этой модификации может быть соотнесена с тяжестью заболевания, а также может быть использована в качестве контроля лечения и проведения антиоксидантной терапии.

Однако, несмотря на явный прогресс в этой области, еще остается немало вопросов, касающихся как характеристик самого метода, так и интерпретации полученных результатов.

Цель исследования: Оценить возможности метода определения карбонильных групп белков сыворотки крови для диагностики интенсивности процессов свободнорадикального окисления при различных заболеваниях и в условиях применения антиоксидантной терапии.

Задачи исследования.

1. Исследовать параметры аналитической надежности метода определения карбонильных групп белков сыворотки крови (воспроизводимость, чувствительность, влияние способов хранения биоматериала и условий определения).

2. Выявить динамику образования карбонильных групп белков в опытах in vitro в зависимости от уровня продукции активных форм кислорода в различных химических системах.

3. Исследовать возможность определения карбонильных групп во фракциях альбуминов и глобулинов сыворотки, липопротеидов низкой и очень низкой плотности, иммунных комплексов.

4. Определить содержание карбонильных групп белков сыворотки крови, продуктов перекисного окисления липидов и параметров антиоксидантной системы у пациентов с различными заболеваниями: рассеянным склерозом, сердечно-сосудистой патологией, возрастной макулодистрофией до и после проведения антиоксидантной терапии. Сопоставить полученные данные с глубиной патологического процесса и эффективностью проводимой терапии.

5. Провести анализ значимости определения содержания карбонильных групп белков сыворотки крови в диагностике «окислительного стресса» в сравнении с другими параметрами оценки интенсивности свободнорадикальных процессов.

Научная новизна. В результате работы получены новые данные о диагностической значимости метода определения карбонильных групп белков сыворотки крови для оценки состояния процессов свободнорадикального окисления при различных заболеваниях и в условиях применения антиоксидантной терапии. Впервые определены параметры аналитической надежности данного метода и дана сравнительная характеристика различных маркеров «окислительного стресса». Новизна работы заключается в исследовании окислительного повреждения различных фракций белков сыворотки крови.

Практическая значимость работы. В результате работы разработаны методические рекомендации по определению карбонильных групп белков сыворотки крови в клинической практике. Выработаны рекомендации по интерпретации результатов исследования окислительной модификации белков сыворотки крови при различных заболеваниях.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту:

1. Метод оценки окислительной модификации белков сыворотки крови по уровню карбонильных групп, определяемых по реакции с 2,4-ДНФГ, может быть использован в клинической практике, так как соответствует критериям аналитической надежности. Интерпретация результатов определения карбонильных групп белков сыворотки должна проводиться на основе представлений о зависимости степени окислительной модификации белков от концентрации в среде активных форм кислорода и от типа белка. Гиперпродукция активных форм кислорода, вызывающая более глубокие изменения структуры белковой молекулы, может приводить к снижению выявляемости карбонильных групп белков.

2. Содержание карбонильных групп в белках сыворотки крови проявляет себя как самостоятельный показатель, характеризующий выраженность «окислительного стресса» и глубину окислительного повреждения белков, при различных патологических состояниях (рассеянный склероз, макулодистрофия, сердечно-сосудистая патология).

3. Возрастание карбонильных групп в белках липопротеидов низкой и очень низкой плотности, свидетельствующее об их окислительной модификации, характеризует атерогенные свойства этих липопротеидов, их определение может быть использовано в клинической лабораторной диагностике как дополнительный критерий риска развития атеросклероза.

Апробация работ. Результаты исследования были доложены на XIII научной конференции молодых ученых и специалистов BMA им. Кирова (Санкт-Петербург, 1996), на международной конференции

Свободнорадикальные процессы: экологические, фармакологические и клинические аспекты» (Санкт-Петербург, 1999), на Всероссийской научной конференции «Биохимия - медицине» (Санкт-Петербург, 2002), на III съезде биохимического общества (Санкт-Петербург, 2002), на VI международной конференции «Биоантиоксидант» (Москва, 2002), на Первой Всероссийской научной конференции «Клиническая гемостазиология и гемореология в сердечно-сосудистой хирургии» (Москва, 2002).

По теме диссертации опубликовано 9 печатных работ.

Заключение диссертации по теме «Клиническая лабораторная диагностика», Фролова, Милена Юрьевна

выводы

1. Окислительная модификация бежов при воздействии активных форм кислорода может приводить как к возрастанию содержания карбонильных групп (альбумин), так и к его снижению (лизоцим, трипсин, тромбин). Уменьшение выявляемости карбонильных групп при высокой концентрации активных форм кислорода в среде связано со структурными нарушениями, приводящими к агрегации бежовых молекул,

2. Аналитическая надежность метода определения карбонильных групп бежов, основанного на формировании динитрофенилгидразонов, позволяет использовать его для оценки окислительного повреждения бежов в клинической практике.

3. Метод определения карбонильных групп бежов может быть использован для изучения окислительной модификации в бежах липопротеидов, во фракциях альбуминов и глобулинов сыворотки крови. Карбонильные группы бежов иммунных комплексов не выявляются данным методом. Уровень карбонильных групп белков сыворотки крови может быть использован, как единственный маркер «окислительного стресса», в случае гипербилирубинемии, которая дает интерференцию при определении продуктов перекисного окисления липидов в сыворотке крови (острый гепатит).

4. Высокий уровень окислительной деструкции бежов в сочетании с возрастанием продуктов перекисного окисления липидов на фоне снижения восстановленного глутатиона выявлен у мужчин с диагнозом рассеянный склероз при первично-прогредиентном течении и длительности заболевания не более 10 лет. Уровень карбонильных групп бежов не связан с активностью и тяжестью патологического процесса при рассеянном склерозе.

5. У пациентов с макулодистрофией наиболее высокое содержание белков сыворотки крови выявлено при возрастной макулодистрофии у пациентов с кардиальной патологией. У пациентов более молодого возраста с наследственной формой заболевания их уровень был в пределах нормальных величин. Снижению окислительной деструкции белков способствует лечение препаратом супероксиддисмутазы.

6. У пациентов с патологией сердечно-сосудистой системы без наличия радиационного фактора в анамнезе высокий уровень карбонильных групп сочетался с увеличенной продукцией активных форм кислорода лейкоцитами периферической крови. У "ликвидаторов" последствий аварии на Чернобыльской АЭС максимальная степень продукции супероксид-анион радикала лейкоцитами приводила к снижению содержания карбонильных групп белков, что согласуется с результатами модельных опытов и может быть свидетельством более глубоких окислительных повреждений в белках.

7. У пациентов с сердечно-сосудистой патологией контрольной группы высокая степень окислительного повреждения белков была связана с атерогенными сдвигами показателей липидного обмена. Содержание карбонильных групп белков в ЛПНП и ЛПОНП коррелировало с содержанием общего холестерина, холестерина ЛПНП и продуктами перекисного окисления липидов сыворотки (ТБК-АП), как у ликвидаторов, так и в контрольной группе. Среди пациентов с сердечно-сосудистой патологией самые высокие значения карбонильных групп определялись при кардиальном синдроме X.

8. Анализ данных, полученных при обследовании всех групп пациентов, показал отсутствие устойчивой и достоверной связи между степенью окислительной модификации белков сыворотки крови, определенной по содержанию карбонильных групп, продуктами перекисного окисления липидов и параметрами антиоксидантной системы.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Метод определения карбонильных групп белков сыворотки крови может быть рекомендован для оценки окислительной модификации белков и степени выраженности «окислительного стресса» в клинической практике при заболеваниях сердечно-сосудистой системы, рассеянном склерозе, маку-лодистрофии и в условиях проведения антиоксидантной терапии.

2. При гипербилирубинемии определение карбонильных групп может стать методом выбора для диагностики состояния «окислительного стресса».

3. Определение карбонильных групп белков ЛПНП и ЛПОНП после осаждения липопротеиновых частиц гепарином может быть использовано в качестве дополнительного критерия атерогенных сдвигов метаболизма.

4. При интерпретации данных по изучению окислительной модификации белков необходимо учитывать возможность снижения выявляемостн карбонильных групп в результате воздействия высоких концентраций активных форм кислорода.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Фролова, Милена Юрьевна, 2003 год

1. Болдырев A.A. Карнозин. -М.: Изд-во Моск. ун-та, 1998.-320 с.

2. Владимиров Ю.А., Азизова O.A., Деев А.И., Козлов A.B. и др. Свободные радикалы в живых системах // Итоги науки и техники, Серия Биофизика. 1991. - Т. 29. -249 с.

3. Владимиров Ю.А., Арчаков А.И. Перекисное окисление липидов в биологических мембранах. -М.: "Наука", 1972. 252 с.

4. Гаврилов В.Б., Гаврилова А.Р., Мажуль Л.М. Анализ методов определения продуктов перекисного окисления липидов в сыворотке крови по тесту с тиобарбитуровой кислотой // Вопр. мед. химии. -1987. Т.ЗЗ, № 1. -С. 118-122.

5. Говорова Н.Ю., Шаронов Б.П., Лызлова С.Н. Окислительное повреждение эритроцитов миелопероксидазой. Защитное действие сывороточных белков // Бюл.эксперим.биологии и медицины. -1989. -Т. 107, №4. -С. 428430.

6. Головкин В.И., Давыдова Н.И. Программное назначение отечественных пептидных биорегулирующих препаратов цитаминов при рассеянном склерозе // Terra Medica. -2002. -Т.25, №1. -С. 33-35.

7. Дубинина Е.Е., Бурмистров С.О., Ходов Д.А., Поротов И.С. Окислительная модификация белков сыворотки крови человека. Методы ее определения // Вопр.мед.химии. -1995. -Т.41, №1. -С. 24-26.

8. Дубинина Е.Е., Морозова М.Г., Леонова Р.В. и др. Окислительная модификация белков плазмы крови больных психиатрическими расстройствами (депрессия, деперсонализация) // Вопр. мед. химии. -2000. -Т.46, №4. -С. 398-409.

9. П.Дубинина Е.Е., Коновалов П.Г., Солитернов И.Б. и др. Окислительная модификация белков плазмы крови у пожилых людей с сосудистой деменцией // Укр. Биохим. журн. -2001. -Т.73. -С. 125-132.

10. Дубинина Е.Е., Сальникова Л.А., Ефимова Л.Ф. Активность и изо-ферментный состав супероксиддисмутазы эритроцитов и плазмы крови // Лаб. дело. -1988. № 3. - С. 30-33.

11. Дубинина Е.Е., Соштеркова И.Б., Ковругина C.B., Зыбина H.H. Окислительная модификация белков плазмы крови у больных с сосудистой деменцией // Укр. Биохим. журн. -1999. -Т.71, №6. -С. 41-47.

12. Дубинина Е.Е., Шугалей И.В. Окислительная модификация белков // Успехи соврем, биологии. -1993. -Т.113, вып.1. -С. 71-81.

13. Зубина И.М. Растворимость альбумина сыворотки крови больных хроническим гломерулонефритом в солевых растворах // Материалы Всероссийской конференции по физиологии и патологии почек и водно-солевого обмена / Нефрология. -2001. -Т. 5, №3. -С. 128-129.

14. Зыбина H.H., Лавинская H.H. Модификация метода выделения лейкоцитов из периферической крови // Усовершенствование методов и аппаратуры, применяемых в учебном процессе, медико-лабораторных исследованиях и клинической практике. СПб.: ВМедА, 1994. -С. 40.

15. Зыбина H.H. Проблемы и перспективы исследования процессов свободнорадикального окисления в клинической практике // Проблемы окружающей среды и природных ресурсов. -2001. -М.: ВИНИТИ. -№ 7. -С. 2460.

16. Климов А.Н., Никульчева Н.Г. Обмен липидов и липопротеидов и его нарушения. СПб.: "Питер", 1999. -С. 291-360.

17. Колб В.Г., Камышников B.C. Клиническая биохимия (Пособие для врачей-лаборантов). -Минск, 1976. -311 с.

18. Коркина Л.Г., Величковский Б.Т. Кислородные радикалы в химии, биологии и медицине. -Рига, 1988. -115 с.

19. Кулева Н.В., Залесова З.С. Исследование неэнзиматического глико-зилирования и окислительного повреждения актина in vitro и in vivo // Цитология. -2000. -Т. 42. -С. 66-71.

20. Кулева Н.В., Залесова З.С. Изменение функциональных свойств актина при его гликировании in vitro // Биохимия. -1997. -Т. 62. -С. 1307-1313.

21. Лопухин Ю.М., Добрецов Г.Е. Связь между уровнем альбумина обменом липидов и атеросклерозом // Альбумин сыворотки крови в клинической медицине. -М.: «ГЭОТАР», под ред. Грызунова Ю.А. и Добрецова Г.Е. -С. 55-57.

22. Меньшиков В.В., Делекторская JI.H., Золотницкая Р.П. и др. Лабораторные методы исследования в клинике: Справочник. Под ред. В.В.Меньшикова. -М.: "Медицина", 1987. -368 с.

23. Морозов В.И. Участие активных форм кислорода в регуляторных процессах // Фундаментальные и прикладные аспекты современной биохимии. Труды научной конференции, посвященной 100-летию кафедры биохимии СПбГМУ им. ак. И.П.Павлова.-1998. -С. 398-400.

24. Назаренко В.Г., Бессмертная Е.В., Багрий Е.А. Содержание продуктов ПОЛ в крови у пациентов с рассеянным склерозом // Врачебное дело. -1990. -Т. 4. -С. 93-94.

25. Пасечник И.Н., Азизов Ю.М., Никушкин Е.В. и др. Роль окислительного стресса как компонента критических состояний в генезе нарушений гемостаза // Анестезиол. Реаниматол. -2001. -№3. -С. 41-43.

26. Прайор У. Роль свободнорадикальных реакций в биологических системах // Свободные радикалы в биологии. -М.: "Мир", 1979. С. 13-67.

27. Рагино Ю.И., Душкин М.И. Резистентность к окислению гепарино-сажденных бета-липопротеидов сыворотки крови при ишемической болезни сердца // Клинлабор.диагностика. -1998. №11. -С. 3-5.

28. Рагино Ю.И., Латынцева Л.Д., Иванова М.В., Никитин Ю.П. Влияние диована на резистентность к окислению липопротеинов низкой плотности у больных с мягкой артериальной гипертонией // Клин. лаб. диагностика. -1998.-№9. -С. 28-29.

29. Рябов Г.А., Азизов Ю.М., Дорохов С.И. и др. Окислительная модификация белков плазмы крови у больных в критических состояниях // Ане-стезиол. Реаниматол. -2000. -№2. -С. 72-75.

30. Степуро И.И. Воздействие свободных радикалов на сывороточный альбумин // Альбумин сыворотки крови в клинической медицине. -М.: «ГЭОТАР», под ред. Грызунова Ю.А. и Добрецова Г.Е. -С. 187-201.

31. Титов В.Н. Атеросклероз как патология полиеновых жирных кислот. Биологические основы теории атерогенеза. -М.: Фонд «Клиника XXI века», 2002. -495с.

32. Титов В.Н., Староверов И.И., Амелюшкина В.А. и др. Диагностическое значение транспортных свойств альбумина и содержания в крови тро-понина Т при инфаркте миокарда И Клин. лаб. диагн. -2002. -№1. С. 3-7.

33. Фридович И. Радикалы кислорода, пероксид водорода и токсичность кислорода // Свободные радикалы в биологии. -М. "Мир", 1979. -С. 272-314.

34. Шаталина JI.B., Баллюзек М.Ф., Гуревич B.C. Некоторые показатели перекисного окисления липидов тромбоцитов у больных ИБС // Вопр. мед. химии. -1988. -Т.34, №2. С. 59-62.

35. Янковский О.Ю. Токсичность кислорода и биологические системы // -М.: изд-во «Игра», 2000. -296 с.

36. Ярема Н.И., Коновалова Г.Г., Ланкин В.З. Изменение активности антиоксидантных ферментов у больных гипертонической болезнью // Кардиология. -1992. -Т.32, № з. -с. 46-48.

37. Adams S., Green P., Claxton R. et al. Reactive carbonyl formation by oxidative and non-oxidative pathways // Front Biosci. -2001. -Vol. 6. -P. A17-24.

38. Aebi H. Catalase in vitro // Methods. Enzymol. 1984. - Vol. 2, №9. - P. 673 - 684.

39. Ahmed M.U., Baynes J.W., Thorpe S.R. Identification of N-epsilon car-boxymethyllysine as a degradation product of fructolysine in glycated protein // J. Biol. Chem. -1986. -Vol. 261. -P. 4889-4894.

40. Ahmed M.U., Fiye B., Degerhard T.P. N-epsilon (carboxyethyllysine), a product of the chemical modification of protein by methylglyoxal, increases with age in human lens protein // Biochem. J. -1997. -Vol. 324. -P. 565-570.

41. Ayala A., Cutler R.G. Comparison of 5-hydroxy-2-amino valeric acid with carbonyl group content as a marker of oxidized protein in human and mouse liver tissues // Free Radic. Biol. Med. -1996. -Vol. 21. -P. 551 558.

42. Armstrong D., Slater T.P., Cheeseman K.H. et al. Free radicals in molecular biology, aging and disease. New York: Plenum press, 1984. - 326 p.

43. Baynes J.W., Thorpe S.R. Role of oxidative stress in diabetic complication: a new perspective on old paradigm // Diabetes. -1999. -Vol. 48. -P. 1-9.

44. Beal M.F. Oxidatively modified proteins in aging and disease // Free Radic. Biol. Med. -2002. -Vol. 32. -P. 797-803.

45. Berlett B.S., Stadman E.R. Protein oxidation in aging, disease, and oxidative stress //J. Biol. Chem. -1997. -Vol. 272. -P. 20313-20316.

46. Berliner J.A., Heinecke J.W. The role of oxidized lipoproteins in athero-genesis // Free Radic. Biol. Med. -1996. -Vol. 20. -P.704-727.

47. Blackburn A.C., Doe W.F., Buffinton G.D. Protein carbonyl formation on mucocal proteins in vitro and in dextran sulfate-induced colitis // Free Radic. Biol. Med. -1999. -Vol. 27. -P.262-270.

48. Brown R.K., Kelly F.R. Evidence for increased oxidative damage in patients with cystic fibrosis // Pediatr. Res. -1994. -Vol. 36. -P. 487-93.

49. Burcham P.C., Kuhan Y.T. Introduction of carbonyl groups into proteins by the lipid peroxidation product, malondialdehyde // Biochem. Biophys. Res. Commun. -1996. -Vol. 220. -№ 3. -P. 996-1001.

50. Buss H., Chan T. P., Sluis K. B., Domigan N. M., Winterbourn C. C. Protein carbonyl measurement by a sensitive Elisa method // Free Radic. Biol. Med. -1997. -Vol. 23. -P. 361-366.

51. Cao G., Cutler R.G. Difficulties in measuring reactive protein carbonyls in tissue using // Arch. Biochem. Biophys. -1995. -Vol. 320. -P. 106-114.

52. Cederberg J., Basu S., Eriksson U.J. Increased rate of lipid peroxidation and protein carbonylation in experimental diabetic pregnancy // Diabetologia. -2001. -Vol. 44, №6. -P. 766-774.

53. Chan S.S., Monteiro H.P., Deucher G.P., Abud R.L. Functional activity of blood polyvorphnonuclear leucocytes as an oxidative stress biomarker in human subiects // Free Radic.Biol.Med. -1998. -Vol. 24. -P. 1411-1418.

54. Chevion M., Berenshtein E., Stadman E.R. Human studies related to protein oxidation: protein carbonyl content as a marker of damage // Free Radic. Res. -2000. -Vol. 33. Suppl. -P. 99-108.

55. Chen S.S. Chang L.S., Wei Y.H. Oxidative damage to proteins and decrease of antioxidant capacity in patients with varicocele // Free Radic. Biol. Med. -2001. -Vol. 30. -P. 1328-1334.

56. Climent L., Tsai L., Levine R.L. Derivatization of y -Glutamyl Semialdehyde Residues in Oxidized Proteins by Fluoresceinamine // Anal. Biochem. -1989. -Vol. 182. -P. 226-232.

57. Dalle-Donne I., Rossi R., Giustarini D., Milzani A., Colombo R. Protein carbonyl groups as biomarkers of oxidative stress // Clin. Chim. Acta. -2003. -Vol. 329, № 1-2. -P. 23-38.

58. Davies K.J.A. Delsignore M.E. Protein damage and degradation by oxygen radicals // J. Biol. Chem. -1987. -Vol. 262. -P. 9895-9905.

59. Dean RT., Hant Y.V., Grant A.Y. et al. Free radical damage to proteins: the influence of the relative localization of radical generation, antioxidants and target proteins // Free Radic. Biol. Med. -1991. -Vol.11. -P. 161-163.

60. Dean RT., Fu S., Stocker R. et al. Biochemistry and pathology of radical-mediated protein oxidation // Biochem. J. -1997. -Vol. 324. -P. 1-18.

61. Dean J.T Role of malondialdehyde-acetaldehyde adducts in liver injury// Free Radic. Biol. Med. -2002. -Vol.32. -P. 303-308.

62. DeMaria N., Colantoni A., Fagiuoli S., Guang-Jun Liu et al. Association between reactive oxygen species and disease activity in chronic hepatitis C // Free Radic. Biol. Med. -1996. -Vol. 21. -P. 291-295.

63. Deneke S., Fanburg B.L. Regulation of cellular glutathione // Am J. Pysiol. -1989. -Vol. 257. -P. 1163-1173.

64. Dunlop R.A., Rodgers K.J., Dean R.T. Recent developments in intracellular degradation of oxidized proteins // Free Radic. Biol. Med. -2002. -Vol. 33. -P. 894-906.

65. Elgawish A., Glomb M., Friedlander M. et al. Involment of hydrogen peroxide in collagen cross-linking by high glucose in vitro and in vivo // J. Biol. Chem. -1996. -Vol. 271. -P. 12964-12971.

66. Fliss H. Oxidation of proteins in rat heart and lungs by polymorphonuclear leukocyte oxidants // Mol. Cell Biochem. -1988. -Vol. 84. -P. 177-188.

67. Fridovich I. Superoxide dismutase; defence against endogenous superoxide radical // Ciba Found Symp. -1978. -№ 65. -P. 77-93.

68. Fried R. Enzymatic and non-enzymatic assay of superoxide dismutase // Biochemie. -1975. -Vol. 57. -P. 657-660.

69. Friguet B.L., Szweda L., Stadman E.R. Susceptibility of glucoses-phosphate dehydrogenase modified by 4-hydroxy-2-nonenal and metal-catalyzed oxidation to proteolysis by multicatalytic protease // Arch. Biochem. Biophys. -1994.-Vol. 311.-P. 168-173.

70. Friguet B.L., Bulteau A.L., Chondrogianni N. et al. Protein degradation by the proteosome and its implications in aging // Ann. NY Acad. Sci. -2000. -Vol. 908. -P. 143-154.

71. Frye E. B., Degenhard T.P., Thorpe S.R. Role of Maillard reaction in aging of tissue proteins // J. Biol. Chem. -1998. -Vol. 273. -P. 18714-18719.

72. Fucci L., Oliver C. N., Coon M.J. et al. Inactivation of key metabolic enzymes by mixed-function oxidation reactions: possible implication in protein turnover and aging // Science. -1983. -Vol. 80. -P. 1521-1530.

73. Garibaldi S., Valentini S., Aragno I. et al. Plasma protein oxidation and antioxidant defense during aging // Int. J. Vitam. Nutr. Res. -2001. -Vol. 71, №6. -P. 332-338.

74. Garland D. Role of site-specific, metal-catalysed oxidation in lens-aging and cataract: a hypothesis // Exp. Eye. Res.-1990. -Vol. 50. -P. 677-682.

75. Garisson W.M. Reaction mechanisms in radiolysis of peptides, polypeptides and proteins // Chem. Rev. -1987. -Vol. 87. P.381-398.

76. Gebicki S., Gebicki J. Formation of peroxides in amino acids and proteins exposed to oxygen free radicals // Biochim. J. -1993. -Vol.289. P.743-750.

77. Ghiselli A., Laurenti O. Salicylate hydroxylation as an early marker of in vivo oxydative stress in diabetic patients // Free Radic. Biol. Med. -1992. -Vol.13. -P. 621-627.

78. Girona J., La A.E., Heras M., Olive S., Masana L. Oxidized lipoproteins including HDL and their lipid peroxidation products inhibit TNF-a secretion by THP-1 human macrophages // Free Radic. Biol. Med. -1997. -Vol.23. -P. 658-667.

79. Glavind J. Antioxidants in animal tissue // Acta Chem. Scand. -1963. -Vol. 17, № 13.-P. 1635-1640.

80. Goto S., Takahaschi R., Kumiyama A. et al. Implications of protein degradation in aging // Ann. NY Acad. Sci. -2001. -Vol. 928. -P. 54-64.

81. Gutteridge J.M.C., Tickner T.R. The characterization of thiobarbituric acid reactivity in human plasma and urine // Anal. Biochem. -1978. -Vol. 91. -P. 250-257.

82. Haidari M., Javadi E., Kadkhodaee M., Sanati A. Enhanced susceptibility to oxidation and diminished vitamin E content of LDL from patients with stable coronary artery disease // Clin. Chem. -2001. -Vol. 47. -P. 1234-1240.

83. Halliwell B., Gutleridge J.M.C., Cross C.E. Free radicals, antioxidants and human disease: where are we now // J. Lab. Clin. Med. -1992. -Vol. 119, №6. P. 598-620.

84. Hawkins C.L., Davies M.J. Hypochlorite-induced oxidation of proteins in plasma: formation of chloramines and nitrogen-centered radicals and their role in protein fragmentation // Biochem. J. -1999. -Vol.340. -P. 539-548.

85. Heinecke J.W. Free radical modification of low density lipoproteins // Free Radic. Biol. Med. -1987. -Vol.3. -P. 65-75.

86. Himmelfarb J., McMonagle E., McMenamin E. Plasma protein thiol oxidation and carbonyl formation in chronic renal failure // Kidney Int. -2000. -Vol. 58. -P. 2571-2578.

87. Himmelfarb J., McMonagle E. Albumin is the majior plasma protein target of oxidant stress in uremia // Kidney Int. -2001. Vol. 60. -P. 358-363.

88. Hipkiss A.R. Carnosine and protein carbonyl groups: a possible relationship //Biochemistry. -2000. -Vol. 65. -№ 7. -P. 771-778.

89. Hipkiss A.R., Brownson C. Carnosine reacts with protein carbonyl groups: another possible role for the anti-ageing peptide? // Biogerontology. 2000. -Vol. 1,№3. -P. 217-223.

90. Hipkiss A. R., Chana H. Carnosine protects proteins against methylgly-oxal- mediate modifications // Biochem. Biophys. Res. Commun. -1998. -Vol. 248. -P. 28-32.

91. Huggins T.G., Wells-Knecht M.C, Detorie N.A. et al. Formation of o-tyrosine and dityrosine in proteins during radiolysis and metal-catalyzed oxidation // J. Biol. Chem. -1993. -Vol. 268. -P. 12341-12347.

92. Hunt J.V., Dean R. T., Wolff S.P. Hydroxyl radical production and autoxidative glycosylation // Biochem. J. -1988. -Vol. 256. -P. 205-212.

93. Jana C.K., Das N., Sohall R.S. Specificity of age-related carbonylation of plasma proteins in the mouse and rat // Arch. Biochem. Biophys. -2002. -Vol. 397. -P. 433-439.

94. Jung Y., Song D., Yang S. et al. Protein carbonyl formation in blood plasma by cephalosporins // Arch. Biochem. Biophys. -1997. -Vol. 345. -P. 311317.

95. Kamat J .P., Devasagayam T.P. Nicotinamid (vitamin B3) as an effective antioxidant against oxidative damage in rat brain mitochondria // Redox. Rep. -1999.-Vol. 4.-P. 179-184.

96. Karg E., Klivenyi P., Nemeth I. et al. Nonenzymatic antioxidants of blood in multiple sclerosis // J. Neurol. -1999. -Vol. 246. -P. 533-539.

97. Kashiba-Iwatsuki M., Miyamoto M., Inoual M. Effect of nitric oxide on ligand-binding activity of albumin // Arch. Biochem. Biophys. -1997. -Vol. 345. -P. 237-242.

98. Khalifan R.G., Baynes J. W., Hudson B. G. Amadorins: novel post-amadori inhibitors of advanced glycation reactions // Biochem. Biophys Res. Commun. -1999. -Vol. 257. -P. 251-258.

99. Kono Y., Fridovich I. Superoxide radical inhibits catalase // J. Biol. Chem. -1982. -Vol. 257, №10. -P. 5751-5754.

100. Kurtzke J.F. Rating neurologic impairment in multiple sclerosis: an expanded disability Status scale (EDSS) //Neurology.-1983 .-Vol.33, №.12.1. P. 1444-1452.

101. Lee Y.G., Shaster E. Role of carbohydrates in oxidative modification of fibrinogen and other plasma proteins // Arch Biochem Biophys. -1995. -Vol. 321.-P. 175-81.

102. Lee Kum-Tatt, Tan It-Koon. A new colorimetric method for the determination of glutathione in erythrocytes // Clinica Chimica Acta. -1974. -Vol. 53. -P. 153-161.

103. Lenz A.G., Costabel U., Shaltiel S., Levine R.L. Determination of car-bonyl groups in oxidatively modified proteins by reduction with tritiated sodium borohydride //Anal. Biochem. -1989. -Vol. 177. -P. 419-425.

104. Levine R.L. Oxidative modification of glutamine synthetase // J. Biol. Chem. -1983. -Vol. 258. -P. 11828-11835.

105. Levine R.L., Garland D., Oliver C.N. et all. Determination of carbonyl content in oxidatively modified proteins // Methods Enzymology. -1990. -Vol. 186. -P. 464-478.

106. Levine R.L., Oliver C.N., Fulks R.M., Stadtman E.R. Turnover of bacterial glutamine synthetase: Oxidative inactivation precedes proteolysis // Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. -1981. -Vol. 78. -P. 2120-2124.

107. Levine R.L., Stadtman E.R. Oxidative modification of proteins during aging //Exp. Gerontol. -2001. -Vol. 36, №9. -P. 1495-1502.

108. Levine R.L., Wehr N., Williams J.A., Stadtman E.R., Shacter E. Determination of carbonyl groups in oxidized proteins // Methods Mol. Biol. -2000. -Vol. 99. -P. 15-24.

109. LeVine S.M., Wetzel D.L. Chemical analysis of multiple sclerosis lesions by FT-IR microspectroscopy // Free Radic. Biol. Med. -1998. -Vol.25. -P.33-41.

110. Liggins J., Furth A.J. Role of protein-bound carbonyl groups in the formation of advanced glycation endproducts // Biochim. Biophys. Acta. -1997. -Vol. 1361, №2. -P. 123-130.

111. Livrea M.A., Tesoriere L. Maggio A. et al. Oxidative modification of low-density lipoprotein and atherogenetic risk in thalassemia // Blood. -1998. -Vol. 92, № 10. -P. 3936-3942.

112. Lo T.W.C., Westwood A.C., McLellan A.C. et al. Binding and modification of proteins by methylglyoxal under physiological conditions // J. Biol. Chem. -1994. -Vol. 269. -P. 32299-32305.

113. Matteucci E., Biasci E., Giampietro O. Advanced oxidation protein products in plasma: stability during storage and correlation with other clinical characteristics // Acta Diabetol. -2001. -Vol. 38. -P. 187-189.

114. Mecocci P.G., Fano S., Fülle U. et al. Age-dependent increase in oxidative damage to DNA, lipids and proteins in human skeletal muscle // Free Radical Biol. Med. -1999. -Vol. 26. -P. 303-308.

115. McMurray J., Chopra M., Abdullah I. et al. Evidence of oxidative stress in chronic heart failure in humans // Eur.Heart J. -1993. -Vol.14, № 11. -P. 1493 1498.

116. Mullarkey C. J., Edelstein D., Brownlee M. Free radicals generation by early glycation products: a mechanism for accelerated atherogenesis in diabets // Biochem. Biophys. Res. Commun. -1990. -Vol. 173. -P. 932-939.

117. Nagaraj R.H., Shipanova I.N., Faust F.M. Protein cross-linking by Maillard reaction//J. Biol. Chem. -1996. -Vol. 271. -P. 19338-19345.

118. Nahum A., Wood L.D.H., Sznajder J.I. Measurement of hydrogen peroxide in plasma and blood // Free Radic.Biol.Med. -1989. -Vol. 6. -P. 479-484.

119. Odetti P., Garibaldi S., Noberasco G. et al. Levels of carbonyl groups in plasma proteins of type 2 diabetes mellitus subjects // Acta Diabetol. -1999. -Vol.36. -P. 179-183.

120. Odetti P., Valentini S., Aragno I. Oxidative stress in subjects affected by celiac disease // // Free Radic.Res. -1998. -Vol. 29. -P. 17-24.

121. Ohkawa H., Ohishi N., Yagi K. Assay for lipid peroxides in animal tissue by thiobarbituric acid reaction // Anal. Biochem. -1979. -Vol. 95. -P. 351-358.

122. Oliver C.N., Ahn B.W., Moerman S. et al. Age-related changes in oxidized proteins // J. Biol. Chem. -1987. -Vol. 262. -P. 5488-5491.

123. Ostdal H., Davies M.J., Andersen H.J. Reaction between protein radicals and other biomolecules // Free Radic. Biol. Med. -2002. -Vol. 33. -P. 201209.

124. Pacifici R., Davies J.K.A. Protrein degradation as an index of oxidative stress // Methods Enzymology. -1990. -Vol.186. -P. 485-502.

125. Panda K., Chattopadhyay R., Ghosh M.K. et al. Vitamin C prevent cigarette smoke induced oxidative damage of proteins and increased proteolysis // Free Radie. Biol. Med. -1999. -Vol. 27. -P. 1064-1079.

126. Pansarasa O., Bertorelli L., Vecchiet J. et al. Age-dependent changes of antioxidant activities and markers of free radical damage in human skeletal muscle // Free Radie. Biol. Med. -1999. -Vol. 27. -P. 617-622.

127. Pascal M., Abdallahi O.M., Elwali N.E. et al. Hyaluronate level and markers of oxidative stress in the serum of Sudanese subjects at risk of infection with Schistosoma mansoni // Trans. R. Soc. Trop. Med. Hyd. -2000. -Vol. 94, №1. -P. 66-70.

128. Phillips S.A., Thornalley P.J. The formation of methylglyoxal from triose phosphate. Investigation using a specific assay for methylglyoxal // Eur. J. Biochem. -1993. -Vol. 212. -P. 101-105.

129. Piedimonte G., Guetard D., Magnani M. et al. Oxidative protein damage and degradation in lymphocytes from patients infected with human immuno-deficienty virus // J. Infect Dis. -1997. -Vol. 176, №3. -P. 655-64.

130. Pick A., Keisari Y. Superoxide anion and hydrogen peroxide production by chemically elicited peritoneal macrophages // Cellular Immunol.-1981. -Vol. 59. -P. 301-308.

131. Pigeolet E., Remacle J. Glutatione peroxidase, superoxide dismutase and catalase inactivation by peroxides and oxygen derived free radicals // Mech. Age. Der. -1990. -Vol.51. -P. 283-288.

132. Pigeolet E., Remacle J. Susceptibility of glutation peroxidase to proteo-lisis after oxidative alteration by peroxides and hydroxyl radicals // Free Radical Biol. Med. -1991. -Vol. 11. -P. 191-198.

133. Popadiuk S., Korzon M., Renke J., Wozniak M. Carbonyl groups content on the basis of protein peroxidation analysis with total antioxidant status in blood of children with cancers // Wiad Lek.-1998. -Vol. 51. -Suppl. 14. -P. 107-12.

134. Pryor W. A. Biological effects of cigarette smoke, wood smoke and the smoke from plastics: the use of EPR // Free Radic. Biol. Med. -1992. -Vol. 13. -P. 659-677.

135. Piyor W.A., Godber S.S. Noninvasive measures of oxidative stress status in humans // Free Radic. Biol. Med. -1991. -Vol. 10. -P. 177-184.

136. Puchala M., Szweda-Lewandovska Z. Damage to hemoglobin by radiation-generated serum albumin radicals // Free Radic. Biol. Med. -1999. -Vol. 26. -P. 1284-1291.

137. Quinlan G.J., Evans T.W., Gutterridge J.M. Oxidative damage to plasma proteins in adult respiratory distress syndrome // Free Radic. Res. -1994. -Vol. 20, №5. -P. 289-298.

138. Ravikumar A., Aran P., Devi K.V., Augustine J., Kurup P.A. Isopre-noid pathway and free radical generation and damage in neuropsychiatric disorders // Indian J. Exp. Biol. -2000. -Vol. 38. -P. 438-446.

139. Requena J.R., Chao C.C., Levine R.L., Stadtman E.R. Glutamic and aminoadipic semialdehydes are the main carbonyl products of metal-catalyzed oxidation of proteins // Proc. Nat.l Acad. Sei. USA. -2001.-Vol. 98, №1. -P.69-74.

140. Robinson C.E., Keshavarzian A., Pasco D.S. et al. Determination of protein carbonyl groups by immunoblotting // Anal. Biochem. -1999. -Vol. 266. -№ 1. -P. 48-57.

141. Romero F.J. Antioxidant in peripheral nerve // Free Radic. Biol. Med. -1996. -Vol.20. -P.925-932.

142. Sagara Y., Dargusch R., Chambers D., Davis J. et al. Cellular mech-nisms of resistance to chronic oxidative stress // Free Radic. Biol. Med. -1998. -Vol. 24.-P. 1375-1389.

143. Schwartz R.S., Rybicki A.C., Heath R.H., Lubin B.N. Protein 4.1 in sickle erytrocytes. Evidence for oxidative damage // J. Biol. Chem. -1987. -Vol. 262, №32.-P. 15666-15672.

144. Shacter E., Williams J.A., Lim M., Levine R.L. Differential susceptibility of plasma proteins to oxidative modification: examination by western blot immunoassay // Free Radic. Biol .Med. -1994. -Vol. 17. -P. 429-437.

145. Shigenana M.K. Assays for 8-hydroxy-2'-deoxyguanosine: a biomarker of in vivo oxidative DNA damage // Free Radic. Biol. Med. -1991. -Vol. 11. -P. 211-216.

146. Schock B.C., Young I.S., Brown V., Fitch P.S., Taylor R., Shields M. D., Ennis M. Antioxidants and protein carbonyls in bronchoalveolar lavage fluid of children: normal data// Pediatr. Res. -2001. -Vol. 49. -P. 155-161.

147. Simon D.I., Mullins M.E., Jia L. et al. Polynitrosylated proteins: characterization, bioactivity and functional consequences // Proc. Natl. Acad. Sci. -1996. -Vol. 93. -P. 4736-4741.

148. Smith C. D., Carney J. M., Starke-Reed P. E. et al. Excess brain protein oxidation and enzyme dysfunction in normal aging and Alzheimer disease // Proc. Natl. Acad. Sci. -1991. -Vol. 88. -P. 10540-10543.

149. Soszynsky M., Bartosz G. Decrease in accessible thiols as index of oxidative damage to membrane proteins // Free Radi.l Biol. Med. -1997. -Vol. 23. -P. 463-469.

150. Stadman E.R. Protein oxidation and aging // Science. -1992. -Vol.257. -P. 9965-9971.

151. Stadman E.R. Metall ion-catalyzed oxidation of proteins: biochemical mechanism and biological consequences // Free Radic. Biol. Med. -1990. -Vol. 9. -P. 315-318.

152. Stadman E.R., Levine R.L. Protein oxydation // Ann. NY Acad. Sci. -2000. -Vol. 899. -P. 191-208.

153. Starke-Reed P. E., Oliver C.N. Protein oxidation and proteolysis during aging and oxidative stress // Arch. Biochem. Biophys. -1989. -Vol. 275. -P. 559567.

154. Starke-Reed P. E., Oliver C.N., Stadman E.R. Modification of hepatic proteins in rat exposed to high oxygen concentration // FASEB. -1987. -Vol. 1. -P. 36-39.

155. Swierczynski J., Mayer D. Vitamin E prevents induction of carbonyl group formation in microsomal protein by dehydroepiandrosterone // Nutr. Cancer. -1998. -Vol. 32. -№ 2. -P. 101 106.

156. Szondy E, Horvath M, Mezey Z. et al. Free and complexed anti-lipoprotein antibodies in vascular diseases // Atherosclerosis. -1983. -Vol. 49. -P. 69-77.

157. Talent J. M., Kong Y., Gracy R. W. A double stain for total and oxidized proteins from two-dimensional fingerprints // Anal. Biochem. -1998. -Vol. 263.-P. 31-38.

158. Teal F.W.Y. The ultraviolet fluorescence of proteins in neutral solution // Biochem. J. -1966. -Vol. 76. -P. 381.

159. Toda T. Proteome and proteomics for the research on protein alterations in aging // Ann. NY Acad. Sci. -2001. -Vol. 928. -P. 71-78.

160. Toshniwal P.K., Zarling E.J. Evidence for increased lipid peroxidation in multiple sclerosis //Neurochem. Res. -1992. -Vol.17. -P.205-207.

161. Valentine J.S. Do oxidatively modified proteins cause ASL? // Free Radic. Biol. Med. -2002. -Vol. 33. -P. 1314-1320.

162. Ward P.A., Warren J.S., Johnson K.J. Oxygen radicals, inflammation and tissue injury // Free Radic. Biol. Med. -1988. -Vol. 5. -P. 403-408.

163. Winterboum C.C., Buss H., Chan T.P. et al. Protein carbonyl measurement show evidence of early oxidative stress in critically ill patients // Critical Care Med. -2000. -Vol. 28. -P. 143-149.

164. Wolff S.P., Dean R.T. Fragmentation of protein by free radicals and its effects on their susceptibility to enzymic hydrolysis // Biochem. J. -1986. -Vol. 234, №5. -P .399-403.

165. Wolff S., Dean R.T. Glucose autoxidation and protein modification. The potential role of "autoxidative glycasylation" in diabets // Biochem. J. -1987. -Vol. 245.-P. 243-250.

166. Wolff S., Yiang Z. J., Hunt Y. V. Protein glycation and oxidative stress in diabetes mellitus and aging // Free Radical Biol. Med. -1991. -Vol.10. -P. 339350.

167. Wondrak G.T., Cervantes-Laureant D., Jacobson E. L., Jacobson M. K. Histone carbonylation in vivo and in vitro // Biochem. J. -2000. -Vol. 351. -P. 769-777.

168. Yan L., Orr W.C., Sohal R.S. Identification of oxidized proteins based on sodium dodecyl sulfate polyaciylamid gel electrophoresis, immunochemical detection, isoelectric focusing, and microsequencing // Anal. Biochem. -1998. -Vol. 263. -P. 67-71.

169. Yim M.B., Kang S., Hah Y. et al. Free radical generated during glycation reaction of amino acids by methylglyoxal // J. Biol. Chem. -1995. -Vol. 270 -P. 28228-28233.

170. Yim M.B., Kang S., Chock P.B. Enzyme-like activity of glycated cross-linced protein in free radical generation // Ann. NY Acad. Sci. -2000. -Vol. 899.-P. 168-181.

171. Zs.-Nagy I. On the true role of free radicals in living state, aging and degenerative disorders // Ann. NY Acad. Sci. -2001. -Vol. 928. -P. 187-199.

172. РОССИЙСКАЯ ГОСУДАРСТВЕН ТТЛГ (1. БИБЛИОТЕКА/ "