Влияние производных 6Н-1,3,4-тиадиазинов на агрегационную способность тромбоцитов и некоторые параметры плазменного гемостаза тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.03.06, кандидат наук Логвинова, Юлия Сергеевна

• Логвинова, Юлия Сергеевна
• кандидат наук
• 2013

Оглавление диссертации кандидат наук Логвинова, Юлия Сергеевна

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ. ФАРМАКОЛОГИЧЕСКАЯ МОДУЛЯЦИЯ АГРЕГАЦИОННОЙ АКТИВНОСТИ ТРОМБОЦИТОВ

1.1 Основные группы антиагрегантов, применяемых в клинической

практике, особенности их действия, достоинства и недостатки

1.1.1 Ингибиторы циклооксигеназы-1 тромбоцитов (ацетилсалициловая кислота)

1.1.2. Стимуляторы аденилатциклазы

1.1.3. Антагонисты тромбоцитарныхрецепторов АДФ Р2У12

1.1.4. Ингибиторы фосфодиэстеразы

1.1.5. Антагонисты рецепторов фибриногена ОР ПЫШа

1.2. соединения, являющиеся перспективными в качестве антиагрегантов

1.2.1. Антагонисты рецепторов тромбина

1.2.2. Тиадиазины и их производные

ГЛАВА II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1 Объекты исследования

2.2 Реактивы

2.3 Измерение агрегации тромбоцитов

2.4 Определение числа тромбоцитов

2.5 Определение активированного частичного тромбопластинового времени (АЧТВ)

2.6 Определение протромбиновоего времени

2.7 Определение тромбинового времени

2.8 Определение концентрации фибриногена по Клауссу

2.9 Статистическая обработка результатов

2.10 Исследуемые соединения

ГЛАВА III. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1 влияние контрольных препаратов (ацетилсалициловой кислоты и

клопидогреля) на агрегацию тромбоцитов человека in vitro

3.2 влияние производных класса 1,3,4-тиадиазинов на агрегацию

тромбоцитов человека in vitro

3.2.1 Влияние 5-арил-замещенных-2-циклоалкиламинозамещенных 1,3,4-тиадиазинов на агрегацию тромбоцитов человека in vitro

Влияние 2-циклоалкиламинозамещенных 1,3,4-тиадиазинов,

содержащих фенилы, на агрегацию тромбоцитов in vitro

Влияние 2-циклоалкиламинозамещенных 1,3,4-тиадиазинов,

содержащих гидроксифенилы, на агрегацию тромбоцитов in vitro

Влияние 2-циклоалкиламинозамещенных 1,3,4-тиадиазинов, содержащих дигидрокси- и тригидрокифенилы, на агрегацию

тромбоцитов in vitro

Влияние 2-циклоалкиламинозамещенных 1,3,4-тиадиазинов, содержащих галогены в фенильном кольце, на агрегацию тромбоцитов

in vitro

Влияние 2-циклоалкиламинозамещенных 1,3,4-тиадиазинов, содержащих метокси- и этоксифенилы, на агрегацию тромбоцитов in

vitro

Влияние 2-циклоалкиламинозамещенных 1,3,4-тиадиазинов,

содержащих метилфенилы, на агрегацию тромбоцитов in vitro

Влияние 2-циклоалкиламинозамещенных 1,3,4-тиадиазинов, содержащих остаток тиазола, на агрегацию тромбоцитов in vitro

3.2.2 Влияние 5-тиенилзамещенных-2-циклоалкиламинозамещенных 1,3,4-тиадиазинов на агрегацию тромбоцитов человека in vitro

Влияние 5-(тиенил-2)- замещенных-1,3,4-тиадиазины на агрегацию

тромбоцитов in vitro

Влияние 5-(тиенил-3)- замещенных-1,3,4-тиадиазины на агрегацию тромбоцитов in vitro

3.2.3 Влияние 5-(фурил-2)-замещенных-2-циклоалкиламинозамещенных

1,3,4-тиадиазинов на агрегацию тромбоцитов человека in vitro

3.2.4 Влияние 5-(1-метоксиимино)-замещенных-2-циклоалкиламинозамещенных 1,3,4-тиадиазинов на агрегацию тромбоцитов человека in vitro

3.2.5 Влияние 5-(пиридил-3)-замещенных-2-циклоалкиламинозамещенных

1,3,4-тиадиазинов на агрегацию тромбоцитов человека in vitro

3.3 Влияние класса тиазолов на агрегацию тромбоцитов человека in vitro

3.4 Влияние класса пиразолов на агрегацию тромбоцитов человека in vitro

3.5 Влияние контрольных препаратов (ацетилсалициловой кислоты и

клопидогреля) на агрегацию тромбоцитов ex vivo и некоторые параметры плазменного гемостаза

3.5.1 Влияние ацетилсалициловой кислоты на агрегацию тромбоцитов ех vivo и некоторые параметры плазменного гемостаза

3.5.2 Влияние клопидогреля на агрегацию тромбоцитов ex vivo и некоторые параметры плазменного гемостаза

3.6 Влияние наиболее активных 1,3,4-тиадиазинов на агрегацию

тромбоцитов ex vivo и некоторые параметры плазменного гемостаза.

3.6.1 Влияние 2-циклоалкиламинозамещенных 1,3,4-тиадиазинов, содержащих фенилы, на агрегацию тромбоцитов ex vivo и некоторые параметры плазменного гемостаза

3.6.2 Влияние 2-циклоалкиламинозамещенных 1,3,4-тиадиазинов, содержащих гидроксифенилы, на агрегацию тромбоцитов ex vivo и некоторые параметры плазменного гемостаза

3.6.3 Влияние 2-циклоалкиламинозамещенных 1,3,4-тиадиазинов, содержащих дигидрокси- и тригидроксифенилы, на агрегацию тромбоцитов ex vivo и некоторые параметры плазменного гемостаза

3.6.3 Влияние 2-циклоалкиламинозамещенных 1,3,4-тиадиазинов, содержащих галогены в фенилъном кольце, на агрегацию тромбоцитов ex vivo и некоторые параметры плазменного гемостаза

3.6.4 Влияние 2-циклоалкиламинозамещенных 1,3,4-тиадиазинов, содержащих этоксигруппу в фенилъном кольце, на агрегацию тромбоцитов ex vivo и некоторые параметры плазменного гемостаза

3.6.5 Влияние 5-(тиенил-2)~ замещенных-2-циклоалкиламинозамещенных-1,3,4-тиадиазинов на агрегацию тромбоцитов ex vivo и некоторые

параметры плазменного гемостаза

Влияние тиадиазина Н-29 на агрегацию тромбоцитов ex vivo и

некоторые параметры плазменного гемостаза

Влияние тиадиазина Н-32 на агрегацию тромбоцитов ex vivo и

некоторые параметры плазменного гемостаза

Влияние тиадиазина L-83 на агрегацию тромбоцитов ex vivo и некоторые параметры плазменного гемостаза

ГЛАВА IV. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИЙ

АДФ - аденозиндифосфат

АК - арахидоновая кислота

АСК - ацетилсалициловая кислота

АТФ - аденозинтрифосфат

АЧТВ - активированное частичное тромбопластиновое время

ГДФ - гуанозиндифосфат

ГТФ - гуанозинтрифосфат

жкт - желудочно-кишечный тракт

нгтвс - нестероидные противовоспалительные средства

ТХА2 - тромбоксан А2

цАМФ - циклический аденозинмонофосфат

цГМФ - циклический гуанозинмонофосфат

ЦНС - центральная нервная система

ЦОГ -циклооксигеназа

DAG - диацилглицерол

DTS - плотная тубулярная система

GP - гликопротеин

Ins (1,4,5)РЗ - инозитол 1,4,5 трифосфат

LT - лейкотриен

OCS - открытая канальцевая система

PAR - рецептор к тромбину

PG - простагландин

PGHS - простагландин G/H синтаза

PGI2 - простациклин

PLA2 - фосфолипаза А2

PLC - фосфолипаза С

PRP - богатая тромбоцитами плазма

Р1сИш - фосфатидилинозитол

Р1с11п8 (3,4,)Р2 - фосфатинозитол 3,4 дифосфат

У1^ - фактор Виллебранда

ПЕТЕ - 5,8,10,14-гидроксиэйкозатетраеновая кислота

НРЕТЕ - гидропероксиэйкозатетраеновая кислота

РКС - протеинкиназа С

РН - плектрин гомологичный домен

РРР - бедная тромбоцитами плазма

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Влияние производных 6Н-1,3,4-тиадиазинов на агрегационную способность тромбоцитов и некоторые параметры плазменного гемостаза»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. Агрегация тромбоцитов является важным звеном в физиологии и патологии человека. Агрегированные и адгезированные к сосудистой стенке тромбоциты служат основой для формирования тромба при повреждении сосуда. В то же время агрегация тромбоцитов является важным этиологическим моментом в патогенезе нарушений кровообращения. Это играет ведущую роль в возникновении сердечнососудистых заболеваний (нарушений коронарного и мозгового кровообращения, патологии сосудов конечностей, брюшной полости и др.), в развитии тромбозов после хирургических операций, при нарушении кровообращения на фоне травм и др.

В связи с изложенным, поиск средств, тормозящих агрегацию тромбоцитов, является важной проблемой современной медицины. Разработка эффективных антиагрегантов позволит значительно улучшить лечение инфаркта миокарда, тромботического инсульта (данные заболевания являются ведущей причиной смертности в развитых странах), тромбозов конечностей, послеоперационных тромбозов, нарушений кровообращения глаз и др.

Существует ряд соединений, обладающих антиагрегационным эффектом. Тем не менее, реальный выбор препаратов ограничен сложностями, возникающими при употреблении различных антиагрегантов. Основными проблемами являются низкая избирательность некоторых из них, неоднозначность влияния на способность тромбоцитов к агрегации и антиагрегационную активность стенки сосуда, а также ограничения, обусловленные низкой стабильностью при хранении.

В мире активно разрабатываются антиагреганты нового поколения, обладающие высокой эффективностью и избирательностью действия и способы их целенаправленного химического синтеза.

В последнее время интерес привлекает новый класс веществ, принадлежащих к группе тиадиазинов. Соединения, принадлежащие к классу тиадиазинов, обладают широким спектром фармакологического действия, которое определяется различными радикалами, включенными в структуру этих веществ. В отдельных работах показано эффективное антитромботическое действие тиадиазинов как in vitro, так и in vivo.

Таким образом, работы, специально посвященные изучению фармакологии подобных веществ, являются одними из наиболее перспективных направлений для создания новых противотромботических средств. Однако к настоящему времени влияние этих субстанций на функциональную активность тромбоцитов исследовано недостаточно.

На кафедре органической химии Уральского федерального университета имени первого Президента России Б.Н. Ельцина разработана оригинальная методика синтеза 1,3,4-тиадиазинов, позволяющая получать принципиально новые соединения этого класса. Исследование влияния данных веществ на тромбоцитарную агрегацию ранее не проводилось.

Результаты исследований, изложенные в работе, могут способствовать выяснению связи между химической структурой синтезированных 1,3,4-тиадиазинов и характером и силой их воздействия на тромбоцитарную агрегацию. Чрезвычайно важным представляется выявление веществ, которые обладают наиболее сильным антиагрегационным эффектом, с целью создания на их основе новых отечественных лекарственных препаратов, регулирующих способность тромбоцитов к агрегации.

Цель работы. Целью данного исследования явилось выявление наиболее эффективных соединений среди новых оригинальных 2-циклоалкиламинозамещенных 1,3,4-тиадиазинов, некоторых представителей класса пиразолов и тиазолов.

Задачи работы.

1. Изучение влияния новых оригинальных 2-циклоалкиламинозамещенных 1,3,4-тиадиазинов на агрегационную способность тромбоцитов в экспериментах in vitro. Выявление взаимосвязи «химическая структура соединений - антиагрегационное действие».

2. Исследование влияния предполагаемых метаболитов некоторых 1,3,4-тиадиазинов (класса пиразолов) на агрегацию тромбоцитов в опытах in vitro.

3. Изучение наиболее активных 1,3,4-тиадиазинов на агрегацию тромбоцитов кроликов в экспериментах ex vivo. Выявление взаимосвязи «химическая структура соединений - антиагрегационное действие».

4. Изучение действия наиболее активных 1,3,4-тиадиазинов на показатели плазменного гемостаза.

5. Предполагаемая оптимизация химической структуры 1,3,4-тиадиазинов для улучшения антиагрегационных свойств веществ.

6. Исследование антиагрегационной активности представителей класса тиазолов в экспериментах in vitro.

Научная новизна исследования. В работе впервые установлено наличие антиагрегационного эффекта у новых оригинальных 2-циклоалкиламинозамещенных 1,3,4-тиадиазинов. Выявлена

антиагрегационная активность некоторых предполагаемых метаболитов 1,3,4-тиадиазинов, относящихся к классу пиразолов.

В работе впервые изучено влияние наиболее активных оригинальных 2-циклоалкиламинозамещенных 1,3,4-тиадиазинов на агрегационную способность тромбоцитов кроликов в экспериментах ex vivo и показатели плазменного гемостаза.

Проведен сравнительный анализ эффектов новых 2-циклоалкиламинозамещенных 1,3,4-тиадиазинов и препаратов сравнения (ацетилсалициловой кислоты и клопидогреля).

Показана взаимосвязь между химической структурой соединений и их активностью в области агрегации тромбоцитов. Также предложена оптимизация структуры 1,3,4-тиадиазинов для улучшения их ингибирующих свойств.

Впервые исследована антиагрегационная активность представителей класса тиазолов в экспериментах in vitro и показана взаимосвязь между их химической структурой и способностью ингибировать агрегацию тромбоцитов.

Практическая значимость. В результате проведенных исследований выявлены новые перспективные представители класса 2-циклоалкиламинозамещенных 1,3,4-тиадиазинов, обладающие наиболее выраженным ингибирующим влиянием на агрегационную способность тромбоцитов. Данные соединения могут быть использованы в качестве основы для создания новых лекарственных препаратов, ингибирующих тромбоцитарную агрегацию.

Апробация. Отдельные фрагменты диссертационной работы были представлены на Научно-практической конференции «Тромбозы, кровоточивость, ДВС-синдром: современные подходы к диагностике и лечению», Москва 2009 г.; на Научно-практической конференции «Актуальные проблемы диагностики и лечения венозных и артериальных тромбозов», Санкт-Петербург 2010 г.; на III Сибирской научно-практической конференции гематологов «Баркагановские чтения», Барнаул 2010 г.; на XVII Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство», Москва 2010 г.; на конференции молодых ученых «Проблемы биомедицинской науки третьего тысячелетия», Санкт-Петербург 2010 г.; на IV Съезде фармакологов России «Инновации в современной фармакологии», Казань 2012 г.

Публикации. По теме диссертационной работы опубликовано 9 печатных работ.

Структура и объем диссертации. Диссертационная работа объемом 184 страницы состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, результатов собственных исследований, заключения, выводов. Работа содержит 64 таблицы и 30 рисунок. Список литературы включает 40 отечественных и 130 иностранных работ.

Положения, выносимые на защиту.

1. Изученные новые оригинальные соединения класса 1,3,4-тиадиазинов оказывают антиагрегационное действие в экспериментах in vitro. Наиболее активно ингибируют тромбоцитарную агрегацию вещества, содержащие остаток морфолина во 2-ом положении тиадиазинового и 4-хлорфенил и остаток тиофена в 5-ом положении.

2. Предполагаемые метаболиты тиадиазинов, принадлежащие к классу пиразолов, обладают незначительным антиагрегационным эффектом.

3. В экспериментах на кроликах ex vivo одними из самых сильных ингибиторов агрегации тромбоцитов являются морфолинсодержащие тиадиазины с тиенилом-3 в 5-ом положении тиадиазинового кольца.

4. Наиболее активные тиадиазины не оказывают выраженного действия на показатели плазменного гемостаза.

5. Оптимальными заместителями во 2-ом положении тиадиазинового кольца являются остатки морфолина и тиоморфолина, а в 5-ом положении -тиенил-3 и этоксифенил.

6. Среди тиазолов наилучшими антиагрегационным свойствами обладает соединение с остатком морфолина во 2-ом положении и этоксифенилом в 4-ом положении тиазольного кольца.

ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ. ФАРМАКОЛОГИЧЕСКАЯ МОДУЛЯЦИЯ АГРЕГАЦИОННОЙ АКТИВНОСТИ

ТРОМБОЦИТОВ.

Тромбоцитарное звено гемостаза играет важную роль в патогенезе целого ряда заболеваний (ишемическая болезнь сердца, цереброваскулярные заболевания, некоторые геморрагические диатезы, маточные кровотечения и т.д.) [2, 3, 24, 40]. При действии на тромбоциты различных веществ-агонистов (тромбина, коллагена, АДФ, адреналина и др.), в клетках инициируется цепь последовательных реакций, приводящих к образованию тромбоцитарных агрегатов. Также активированные тромбоциты предоставляют свою поверхность для образования теназного или протромбиназного комплексов, активирующих фактор X и катализирующих превращение протромбина в тромбин. Это опосредует дальнейшую активацию свертывания крови [120].

В a-гранулах тромбоцитов депонируются факторы свертывания V, VIII, XIII, фактор Виллебранда и фибриноген, которые выбрасываются в микросреду при активации тромбоцитов, что повышает их локальную концентрацию. Кроме того, тромбоциты принимают участие в модуляции фибринолиза [45]. Нарушение функций тромбоцитов может быть причиной как кровоточивости, так и повышенного тромбообразования [3, 8, 156].

При ряде сердечно-сосудистых заболеваний (ишемической болезни сердца, атеросклерозе, инфаркте миокарда и т.д.), диабете, хирургических вмешательствах и других случаях именно гиперфункция тромбоцитов, заключающаяся в их повышенной агрегационной активности, нередко становится причиной тромбозов [2, 155]. В связи с этим, соединения, обладающие антиагрегационным действием, привлекают особое внимание.

Основные препараты, снижающие агрегацию тромбоцитов, можно разделить на следующие группы [10, 37]:

- блокаторы циклооксигеназы (ацетилсалициловая кислота);

- антагонисты тромбоцитарных рецепторов АДФ (клопидогрель, тиклопидин);

- антагонисты рецепторов фибриногена ОР ПЬ/Ша (абциксимаб, эптифибатид, тирофибан);

- ингибиторы фосфодиэстеразы (дипиридамол);

- активаторы аденилатциклазы (препараты простагландинов Еь стабильные аналоги простациклина);

- антагонисты рецепторов тромбина (РАЯ-рецепторов).

Помимо этого, антиагрегационным влиянием обладают органические

нитраты и нитросодержащие препараты (нитроглицерин, нитропруссид натрия и др.), блокаторы кальциевых каналов (верапамил, нифедипин, прениламин) [33], хелаторы внутриклеточного кальция, антагонисты кальмодулина, и др [38].

Анализ литературных данных, проведенный по современным доступным источникам, показывает, что современные антиагрегантные препараты обладают рядом побочных эффектов. Также доказана их низкая специфичность по отношению к тромбоцитам. Все эти аспекты ограничивают применение антиагрегантов в клинике [38]. Необходим поиск новых препаратов, обладающих антиагрегантными свойствами, с отсутствием побочных эффектов и более выраженой специфичностью по отношению к тромбоцитам.

1.1 Основные группы антиагрегантов, применяемых в клинической практике, особенности их действия, достоинства и недостатки

1.1.1 Ингибиторы циклооксигеназы-1 тромбоцитов (ацетилсалициловая кислота)

Одним из самых распространенных препаратов, снижающих агрегацию тромбоцитов, является ацетилсалициловая кислота (АСК) (аспирин) (рис. 1). Изначально это простое соединение использовалось в качестве

жаропонижающего и противовоспалительного агента. В 1960 гг. было установлено, что АСК увеличивает время кровотечения и ингибирует агрегацию тромбоцитов [163].

Рис. 1. Химическая формула ацетилсалициловой кислоты.

Превращение арахидоновой кислоты в различные метаболиты регулируется ферментом циклооксигеназой (ЦОГ), существующей в 2 изоформах: ЦОГ-1 и ЦОГ-2. Изоформа ЦОГ-1 является основной изоформой и располагается во всех органах и тканях, в то время как ЦОГ-2 экспрессируется только при воспалении в ответ на появление эндотоксинов, цитокинов и факторов роста.

Аспирин-чувствительный метаболический путь в тромбоцитах начинается с высвобождения арахидоновой кислоты из мембранных фосфолипидов под действием фосфолипазы А2. АСК ингибирует циклооксигеназную активность простагландин G/H синтазы (PGHS) (ЦОГ-1) путем ацетилирования единственного серинового остатка в положении 529 внутри полипептидной цепи ЦОГ-1, образуя ковалентную связь [24]. Рентгеновский кристаллографический анализ показал, что ингибирование ЦОГ-1 АСК происходит в результате блокирования доступа арахидоновой кислоты к каталитическому сайту в центре молекулы фермента через узкий гидрофобный канал [170].

В тромбоцитах человека продуктом действия ЦОГ-1 на арахидоновую кислоту является простагландин Н2 - прямой предшественник простагландинов D2, Е2, F2a, простациклина и тромбоксана А2 (ТХА2) (рис.2). ТХА2 образуется под действием специфической изомеразы тромбоксан А2 -синтазы и действует как тромбоцитарный агонист, вазоконстриктор и митоген сосудистых гладкомышечных клеток [1, 163]. Было показано, что

СНзСОО

СООН

подавление активности тромбоцитарной ЦОГ-1 на 95% ингибирует ТХА2-зависимую агрегацию тромбоцитов и этот эффект достигается малыми дозами АСК [44, 108, 134, 141].

Так как тромбоциты представляют собой безъядерные клетки, они не способны синтезировать белки. Этот факт имеет значение для понимания механизма действия АСК. Необратимое ингибирование ЦОГ-1 и отсутствие возможности компенсировать ее за счет ресинтеза из-за отсутствия ядра приводит к тому, что блокада синтеза тромбоксана при терапии АСК сохраняется на протяжении всей жизни тромбоцитов - в течении 7-10 дней. Это объясняет, каким образом препарат с 20-минутным периодом полужизни в системном кровотоке при однократном приеме в день, ингибирует синтез тромбоксана тромбоцитами [31]. В необратимости ингибирования ЦОГ состоит принципиальное отличие АСК от всех других нестероидных противовоспалительных средств (НГТВС), которые угнетают ЦОГ обратимо [163]. Кроме того, АСК ингибирует ЦОГ-1, расположенную в мегакариоцитах, что приводит к значительному (около 10%) снижению высвобождения тромбоцитов [1, 24, 117].

АСК в 170 раз менее эффективно ингибирует ЦОГ-2 путем ацетилирования серинового остатка в 516 положении. Таким образом, для подавления активности ЦОГ-2 и соответственно образования противовоспалительного эффекта, необходимы большие дозы АСК [163].

АСК быстро адсорбируется в желудке и в верхнем отделе кишечника. Максимальная концентрация в плазме достигается через 30-40 минут после приема, снижение функции тромбоцитов - через 1 час. При использовании таблеток в оболочке действие развивается не ранее чем через 3-4 часа. Биодоступность АСК при пероральном применении составляет 40-50%. Всасываясь в виде сложного эфира, АСК быстро гидролизуется в салицилат в плазме, печени, легких, эритроцитах. Так как тромбоцитарная ЦОГ-1 ацетилируется в большей части в пресистемной циркуляции, то антитромбоцитарный эффект АСК в основном зависит от системной

биодоступности. Во время первого прохождения через печень препарат деацелируется на 50-80% [31].

Фосфолипиды мембран тромбоцитов

Фосфолипазы

Арахидоновая кислота

Липооксигеназа

12-НРЕТЕ

Циклооксигеназа

Пероксидаза

12-НЕТЕ

РвО

Тромбоксан-синтетаза

Рв Н2

ЬТ А4

ТХ А2

ЬТ в.

ЬТ С4 ТХ в2

Простациклин-синтетаза

Рв Ь

б-КеТО-Рв р1а

ЬТ Б4

Рв

Рв Е2 РО Р2а

15-ке+ометаболиты

Рис. 2. Схема метаболизма арахидоновой кислоты

Далее салицилат в основном метаболизируется в салицил-мочевую кислоту (глициновый конъюгат), в простой эфир или феноловый глюкуронид, и в сложный эфир или ацилглюкуронид. Экскретируются салицилаты почками [24].

В последние годы часто обсуждается проблема резистентности к терапии аспирином, под которой понимают неспособность аспирина у некоторых пациентов в должной мере подавлять функцию тромбоцитов,

снижать синтез тромбоксана А2 и/или удлинять время кровотечения. Распространенность резистентности к аспирину, по данным разных исследований, составляет от 10% до 45% [7, 16, 77, 82]. Причины аспиринорезистентности в настоящее время активно исследуются учеными всего мира. Некоторые лекарства конкурируют с аспирином за ЦОГ-1. Самыми распространенными являются нестероидные

противовоспалительные средства, такие как ибупрофен [169]. Небольшие дозы АСК могут гидролизоваться в неактивные формы эстеразами слизистой оболочки желудочно-кишечного тракта. Таким образом, снижается абсорбция активного вещества в ЖКТ [7, 70, 74, 75, 113].

Одной из основных причин резистентности к аспирину являются генетические особенности, такие как полиморфизм гена ЦОГ-1. М. НаМэЬка и соавторы (2003 год) идентифицировали и описали 2 мононуклеатидных полиморфных маркера гена ЦОГ-1 (А842в и С50Т). Они показали, что у гетерозиготных носителей гаплотипа А842С/С50Т наблюдается достоверно более выраженное подавление синтеза простагландина Н2 ацетилсалициловой кислотой (30 мкмоль/л), чем у гомозиготных носителей соответствующих аллелей [87].

Другой важной генетической предрасположенностью к аспиринорезистентности является полиморфизм гена, кодирующего ОРШа. Был описан полиморфный маркер РЦА), кодирующий (3-субъединицу (вРШа) интегринового рецептора тромбоцитов. Этот маркер представляет собой замену тимидина (РЦА1)) на цитозин (РЦА2)), что приводит к конформационным изменениям интегриновой молекулы. У носителей аллели РЦА2) выявляется более выраженная резистентность к аспирину [16].

Несмотря на выраженный антиагрегационный эффект, АСК имеет множество побочных эффектов. Ведущим осложнением при приеме АСК являются кровотечения [15]. В четырех исследованиях, в которых изучали эффекты малых и средних доз АСК (50-325 мг/сут), частота кровотечений варьировалась от 7,2 до 9,3 %. В ряде других исследованиях число

кровотечений было значительно больше при дозе АСК выше 200 и 162 мг/сут [6].

Большие дозы АСК подавляют не только активность циклооксигеназы тромбоцитов, но и сосудов, что приводит к снижению синтеза простациклина - наиболее мощного из всех известных естественных антиагрегантов. Это отрицательное свойство нивелируется его малыми дозами [21].

У больных бронхиальной астмой могут возникнуть реакции повышенной чувствительности (приступы удушья). Также иногда отмечаются желудочно-кишечные нарушения (боль в желудке, микрокровоизлияния, тошнота, рвота, понос) и нарушения функций печени и почек, а также тяжелые формы кожных реакций (вплоть до многоформной экссудативной эритемы). У пациентов с нарушением экскреции мочевой кислоты прием АСК может вызвать обострение подагры. При продолжительном применении могут возникнуть нарушения со стороны ЦНС (головокружение, головная боль, шум в ушах, нарушение зрения, сонливость), а также явления железодефицитной анемии [25, 36].

1.1.2. Стимуляторы аденилатциклазы.

Как было показано ранее, из арахидоновой кислоты под действием различных ферментов образуется множество биологически активных метаболитов. Одним из продуктов метаболизма арахидоновой кислоты является простациклин (РвЬ), который синтезируется преимущественно в эндотелии сосудов, сердечной мышце и ткани матки. Образование простациклина происходит под воздействием фермента простациклинсинтетазы из нестабильного циклического простагландина Н2. Кроме того, РС12 может образовываться из экзогенных РОН2 и РОв2 [14, 56].

Простациклин является самым мощным ингибитором тромбоцитарной агрегации. Ингибирование происходит через активацию аденилатциклазы, которая способствует синтезу циклического аденозинмонофосфата (цАМФ).

Простациклин в 10 раз активнее Р002, в 30 раз активнее РвЕ2 и в 1000 раз активнее своего метаболита б-кето-РОБ],,. Эффект простациклина на тромбоциты усиливается агентами, которые ингибируют расщепление цАМФ [97].

Соотношение ТХА2/Р012 имеет важное значение для организма. Оказалось, что у больных, предрасположенных к тромбозам, повышен уровень ТХА2. Соотношение ТХА2/РС12 важно для нормального функционирования сердечно-сосудистой системы. Нарушение этого равновесия в сторону увеличения синтеза тромбоксана способствует развитию атеросклеротических изменений сосудов. Повышение склонности к тромбообразованию является фактором риска для развития ишемической болезни сердца и может быть причиной возникновения инфаркта миокарда [26].

Несмотря на положительные результаты применения простациклина в качестве антитромбоцитарного средства, его использование затрудняется нестабильностью препарата. Время полураспада молекулы простациклина при температуре 37°С и р№=7.4 приблизительно 2 минуты, а активность препарата при температуре 22°С проявляется через 20 минут. Молекула простациклина обладает большей стабильностью лишь при рН свыше 8,4 [97].

Поэтому для ингибирования агрегации тромбоцитов используются более стабильные синтетические производные РС12 - берапрост натрия, илопрост, ципростен и цикапрост (рис. 3).

Берапрост натрия является химически стабильным аналогом простациклина. Берапрост натрия принимается перорально и обладает множественными эффектами, такими как антиагрегационный, сосудорасширяющий и противовоспалительный, которые улучшают микроциркуляцию. Берапрост натрия в клинике применяется с другими лекарственными средствами, например, с цилостазолом [125].

Берапрост натрия метаболизируется в основном в продукты (3-окисления (2,3-динор-берапрост) и конъюгируется глюкуроновой кислотой. Кроме ферментов Р-окисления, в метаболизме берапроста натрия участвует цитохром Р450 [78].

Другим стабильным аналогом простациклина является илопрост (рис. 3). Ингибируя адгезию и агрегацию тромбоцитов и вызывая расслабление гладкомышечных клеток стенки сосудов, илопрост приводит к выраженному уменьшению периферического сопротивления и восстановлению микроциркуляции. Следует отметить, что действие илопроста сохраняется длительное время. Так, пятидневная инфузия илопроста больным с системным склерозом оказывала благотворный эффект на периферическую микроциркуляцию, который сохранялся на протяжении четырех недель [63]. В ряде исследований показана эффективность ингаляционного использования илопроста [92, 102, 147].

Рис. 3. Химические формулы синтетических аналогов простациклина.

Другой синтетический аналог простациклина ципростен (9р-метил карбациклин) является по своему фармакологическому действию вазодилятатором и ингибитором агрегации тромбоцитов с тромболитическими свойствами [46]. Кроме того, ципростен выраженно ингибирует пролиферацию гладкомышечных клеток сосудов [32].

Аналог РС12 цикапрост обладает высокой стабильностью и био доступностью. Время полужизни молекулы цикапроста после

но

но

Берапрост натрия

ОН

Илопрост

перорального введения составляет 1-2 часа. Цикапрост дает вазодилятаторный и антиагрегационный эффекты. Так, при лечении цикапростом в течение 14 дней наблюдалось значительное ингибирование АДФ- и коллаген-индуцированной агрегации тромбоцитов [51].

Несмотря на положительную динамику применения аналогов простациклина, у них есть существенный недостаток - широкий спектр фармакологического действия. Например, использование в клинике простациклина и его стабильных аналогов ограничивается достаточно частым развитием таких нежелательных последствий как гипотензия, головная боль, диарея [25, 36].

1.1.3. Антагонисты тромбоцитарныхрецепторов АДФ Р2У12.

На поверхности тромбоцитов расположено большое количество семидоменных (змеевидных) рецепторов. К этой группе рецепторов относятся рецепторы АДФ Р2У( и Р2У12, состоящие из одной полипептидной цепи, которая пронизывает клеточную мембрану семь раз. Со стороны внутренней поверхности мембраны с третьей внутренней петлей рецептора связан Огбелок, состоящий из двух субъединиц. В неактивированной клетке с а-субъединицей связана молекула гуанозиндифосфата (ГДФ) (рис. 4.). При взаимодействии рецептора с лигандом изменяется конформация третьего домена рецептора. При этом ГДФ заменяется на гуанозинтрифосфат (ГТФ) и происходит диссоциация а-субъединицы от Ру-субъединицы и миграция ее к аденилатциклазе [91, 152]. а-субъединица непосредственно связывается с аденилатциклазой, таким образом ингибируя ее активность. Это в свою очередь приводит к снижению уровня циклического гуанозинмонофосфата (цГМФ) и увеличению концентрации ионов кальция [53, 61].

° -1*

а Рт

ГДФ

ГДФ

Рис. 4. Схема работы рецепторов, связанных с в-белками [151]

Увеличение кальция в цитоплазме запускает кальций-зависимые процессы, включая активацию протеинкиназы С (РКС), которая фосфорилирует целый ряд белков по сериновым и треониновым остаткам. РКС фосфорилирует в том числе и киназу легких цепей миозина и плекстрин, что приводит к дегрануляции тромбоцитов.

При увеличении цитоплазматического кальция также активируется фосфолипаза А2 (РЬА2), которая расщепляет жирные кислоты, включая фосфатидилхолин и фосфата дилэтанол амин, в результате чего высвобождается арахидоновая кислота (АК). Тромбоксан А2 (ТХА2), образовавшийся из АК, высвобождается из тромбоцитов и активирует другие тромбоциты.

Все вышеперечисленные процессы приводят к активации комплекса вРИЬ/Ша и агрегации тромбоцитов [130].

Тиенопиридины тиклопидин и клопидогрель первого и второго поколений соответственно предупреждают образование тромбов через блокирование Р2У]2 рецепторов, а как следствие и АДФ-зависимой активации тромбоцитов [81, 137]. Данные лекарства широко используются для лечения

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Логвинова, Юлия Сергеевна, 2013 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Алехин Е.К. Аспирин: новая жизнь старого лекарства // Соросовский образовательный журнал. - 1999. - №7. - С. 85-90

2. Андреев Е.П. Гемостаз. Понятие, диагностика, некоторые синдромы и болезни, препараты. Обзор литературных данных. - 2007.

3. Ашмарин А.П., Каразеева Е.П., Карабасова М.А. и др. Патологическая физиология и биохимия. Учебное пособие для ВУЗов. - М.: «Экзамен», 2005. - С. 366-403

4. Васильева Т.М., Макаров В.Д., Чупахин О.Н. и др. Антиагрегационные свойства соединений класса 1,3,4-тиадиазина // Гематология и трансфузиология. - 2008. - Т.53, № 4. - С. 12-15

5. Васильева Т.М., Петрухина Г.Н., Мифтахова Н.Т. и др. Исследование анитагрегационной активности новых производных полиненасыщенных жирных кислот // Тез. докладов 4-ой Международной конференции «Биологические основы индивидуальной чувствительности к психотропным средствам». «Подмосковье» 13-16 марта 2006 г. - С. 18

6. Вышлов Е.В., Панфилова Е.В., Марков В.А. Сравнительная эффективность аспирина, тиклида и их комбинации у больных с острым инфарктом миокарда // Клин. Мед. - 2000. - Т.78, № 1. - С. 1670-1676

7. Гринштейн Ю.И., Шабалин В.В., Гринштейн И.Ю. и др. Резистентность к аспирину: распространенность, известные и предполагаемые причины, принципы диагностики, клинические подходы // Журнал болезни сердца и сосудов (актуальные и спорные вопросы). - 2007. -№ 4. - С. 4-8

8. Дементьева И.И., Еременко A.A., Трекова H.A. и др.

Использование препарата Новосэвен в интра- и послеоперационных

165

периодах у больных с массивными кровотечениями // Проблемы гематологии и переливания крови - 2004. - № 1 - С. 31-37

9. Дугина Т.Н., Киселева Е.В., Чистов И.В. и др. Рецепторы семейства PAR - связующее звено процессов свертывания крови и воспаления // Биохимия. - 2002. - Т. 67, № 1. - С. 77-87

10. Духанин A.C., Губаева Ф.Р. Фармакологическая регуляция активности тромбоцитов // Эксп. и клин, фармакология. - 1998. - Т. 61, №4. -С. 66-71

11. Зубаиров Д.М. Молекулярные основы свертывания крови и тромбообразования. - Казань: Фэн, 2000. - С. 367

12. Карцев В.Г. Кислород- и серусодержащие гетероциклы. - М.: IBS PRESS, 2003. - том 3. - С. 492-496

13. Карцев Г.В., Семенов A.A. Основы химии природных соединений. - М.: МБФНП, 2009. - том 1. - С.489

14. Козинец Г.И., Макаров В.А. Исследование системы крови в клинической практике. - М.: Триада-Х, 1997. - С. 480

15. Кошкин В.М., Стойко Ю.М. Стратегия и тактика консервативной терапии больных хроническим облитерирующими заболеваниями артерий нижних конечностей // Ангиология и сосуд. Хирургия. - 2005. - Т. 11, № 1. -С. 132-135

16. Кудряшова О.Ю., Затейщиков Д. А., Сидоренко Б. А. Генетические основы индивидуальной чувствительности к антиатромбоцитарным препаратам. // Кардиология. - 2005. - № 9. - С. 85-89

17. Логвинова Ю.С., Макаров В. А., Чупахин О.Н. и др. Антиагрегационное действие 2-морфолино-5-(тиенил-2)-6Н-1,3,4-тиадиазин

гидробромида в экспериментах in vitro и ex vivo. // Эксп. и клин, фармакология. - 2013. - Том 76, №2. - С. 13-16.

18. Логвинова Ю.С., Васильева Т.М., Макаров В. А. и др. Антиагрегационное действие 2-циклоалкиламино-5-фенил-1,3,4-6Н(С2Н5)-тиадиазинов в экспериментах in vitro II Гематология и трансфузиология. -2013. - Том 58, №2. - С. 37-40.

19. Логвинова Ю.С., Васильева Т.М., Макаров В.А. и др. Влияние новых соединений класс 1,3,4-тиадиазинов на агрегацию тромбоцитов in vitro и ex vivo II Эксп. и клин, фармакология. - 2010. - Том 73, №8. - С. 21-25.

20. Лакин Г.Ф. Биометрия: Учеб. пособие для биол. спец. вузов. 4-е изд., перераб. и доп. - М.: Высш. шк., 1990. - С. 352

21. Лупинская З.А. Эндотелий сосудов - основной регулятор местного кровотока // Вестник КРСУ - 2003. - № 7. - С. 10-13

22. Мазуров A.B. Антагонисты гликопротеинов Ilb-IIIa при остром коронарном синдроме // Актуальные вопросы болезней сердца и сосудов. -2008. - № 4. - С. 24-30

23. Мазуров A.B. Мембранные гликопротеиды в реакциях адгезии и агрегации тромбоцитов // Дис. докт. мед. наук. - М. - 1998. - С. 216

24. Макацария А.Д., Мищенко А.Л., Бицадзе В.О. и др. Синдром диссеминированного внутрисосудистого свертывания крови в акушерской практики. - Москва.: «Триада-Х», 2002. - С. 448-455

25. Машковский М.Д. Лекарственные средства. - Изд. 13-е. - Т. 1,2. -Торсинг, Харьков. - 1997

26. Мирсаева Г.Х., Фазлыева P.M., Фазлыев М.М. Влияние уровня простаноидов на состояние сосудисто-тромбоцитарного гемостаза при ГЛПС//Паллиатив. мед. и реабил. - 2000. - № 1-2. - С.35

27. Муляр А.Г. Лекарственная регуляция агрегации тромбоцитов // Автореф. дисс. докт. мед.наук, Москва - 1995

28. Николенко Е.Я., Корж А.Н., Лурье С.З. Применение курантила для коррекции реологических нарушений у больных с хронической сердечной недостаточностью.// Юишчш дослщження. Украшський медичний часопис. - 2000. - Т. 16, № 2. - С. 33-45

29. Офозу Ф.А. Тромбоциты как модель регуляции свертывания крови на клеточных мембранах и ее значение // Биохимия. - 2002. - Т. 67, № 1.-С. 56-65

30. Панченко Е.П. Ингибиторы Ilb/IIIa рецепторов тромбоцитов в тромболитической терапии // Терап. архив. - 1997. - Т. 69, № 9. - С. 66-71

31. Панченко Е.П., Добровольский А.Б. Тромбозы в кардиологии. Механизмы развития и возможности терапии. - Москва.: «Спорт и культура», 1999. - С. 277-286

32. Петрухина Г.Н., Макаров В.А. Возможные аспекты применения простациклина, простагландина Ei и их синтетических аналогов в медицинской практике// Эксп. Клин. Фармакол. - 1995. - Т. 58, № 3. - С.70-79

33. Пухальская Т.Г., Колосова О.А., Меньшиков М.Ю., Вейн A.M. Влияние антагонистов кальция на серотонинзависимую агрегацию и транспорт серотонина в тромбоцитах больных с мигренью//Бюл. эксперим. биол. и мед. - 2000. - Т.130, №7. - С. 24-27

34. Самаль А.Б., Черенкевич С.Н., Хмара Н.Ф. Агрегация тромбоцитов: методы изучения и механизмы. Мн.; Университетское, 1990. -С. 101

35. Сидорова Л.П., Перова Н.М., Мочульская H.H., Чупахин О.Н. Новые 1,3,4 - тиадиазиновые системы - биологически активные соединения. Тезисы докладов международной конференции по органической химии «Органическая химия от Бутлерова и Бейлыптейна до современности», г. С.Петербург. - 2006. - С. 446

36. Справочник Видаль. Лекарственные препараты в России. Vidal 2008. Издательство «АстраФармСервис». 2008. - 1632 с.

37. Харкевич Д.А. // Фармакология, Москва: Гэотар Медицина - 1999

38. Шилов A.M., Святов И.С., Санодзе И.Д. Антиагреганты -современное состояние вопроса// Фармакология и фармация. - 2003. - № 3. -С. 45-50

39. Шитикова A.C. Тромбоцитарный гемостаз // СПб.: Изд-во СПбГМУ. - 2000. - С. 222

40. Шитикова A.C. Тромбоцитопатии, врожденые и приобретению // СПб.: ИИЦ BMA. - 2008. - С. 320

41. Aaron J.J., Gaye Seye M.D., Trajkovska S. et al. Bioactive Phenothiazines and benzo[a]phenothiazines: spectroscopic studies, and biological and biomedical properties and applications // Top Heterocycl. Chem. - 2009. - № 16.-P. 153-231

42. Abergel E., Nikolsky E. Ticagrelor: an investigational oral antiplatelet treatment for reduction of major adverse cardiac events in patients with acute coronary syndrome // Vase. Health Risk. Manag. - 2010. - V. 21. - P. 963-977

43. Achar S. Pharmacokinetics, drug metabolism, and safety of prasugrel and clopidogrel // Postgrad. Med. - 2011. - V. 123. - P. 73-79.

44. Akagi Y., Nio Y., Shimada S. et al. Influence of Nonsteroidal Antiinflammatory Drugs on the Antiplatelet Effects of Aspirin in Rats // Biol. Pharm. Bull. - 2011. - V. 34. - P. 233-237

45. Alberio L., Dale G.L. Platelet-collagen interactions: membrane receptors and intercellular signalling pathways// Eur. J. Clin. Invest. - 1999. -V.29, № 12.- P. 1066-1076

46. Allan G., Follenfant M.J., Lidbury P. et al. The cardiovascular and platelet actions of 9[3-methyl carbacyclin (ciprostene), a chemically stable analogue of prostacyclin, in the dog and monkey // Br. J. Pharmacol.- 1985. - № 85. - P. 547-555

47. Almajan G.L., Barbuceanu S.F., Saramet I. et al. New 6-amino-[ 1,2,4]triazolo[3,4-b] [1,3,4]thiadiazines and [ 1,2,4]triazolo[3,4-b] [l,3,4]thiadiazin-6-ones: synthesis, characterization and antibacterial activity evaluation // Eur J Med Chem. - 2010. - V.45, №7. - P.3191-3195

48. Angiolillo D.J., Capodanno D., Goto S. Platelet thrombin receptor antagonism and atherothrombosis // European Heart Journal. - 2010. - № 31. - P. 17-28

49. Angiolillo D.J., Ferreiro J.L. Platelet adenosine diphosphate P2Y12 antagonism: benefits and limitation of current treatment strategies and future directions // Revista Española de Cardiologia. - 2010. - V.63, № 2. - P. 60-76

50. Arranz E, Diaz JA, Vega S. et al. Synthesis and pharmacological evaluation of 2, 3-dihydro-3-oxo-4H-thieno[3,4-e][l,2,4]thiadiazine 1,1-dioxides as voltage-dependent calcium channel blockers. // J Med Chem. - 2000. - V.8, № 43.-P. 1456-66

51. Belch J.J., McLaren M., Lau C.S., et al. Cicaprost, an orally active prostacyclin analogue: its effect on platelet aggregation and skin blood flow in normal volunteers // Br. J. Clin. Pharmacol. - 1993. - V.35, № 6. - P. 643-647

52. Bennet J.S. Structure and function of the platelet integrin alphallbbeta3 // J. Clin. Invest. - 2005. - V. 115, № 12. - P. 3363-3369

53. Bevilacqua M.P., Nelson R.M. Selectins.// J. Clin. Invest. - 1993. -V.91.-P. 379-387

54. Bhat K.S., Poojary B., Prasad D.J. et al. Synthesis and antitumor activity studies of some new fused 1,2,4-triazole derivatives carrying 2,4-dichloro-5-fluorophenyl moiety // Eur. J. Med. Chem. - 2009. - V.44, № 12. - P. 50665070

55. Body C.B. Platelet activation and interactions with the microvasculature // J. Cardivasc. Pharmacol. - 1996. - V.27, Suppl.l. - P. 13-25

56. Born G., Patrono C. Antiplatelet drugs // Br. J. Pharmacol. - 2006. -V.147, № 3. - P. 241-251

57. Born J.V.R. Aggregation of blood platelets by adenosine diphosphate and its reversal // Nature - 1962. - V.194, № 5. - P. 927-929

58. Born J.V.R. Quantitative investigation into the aggregation of blood platelets // J. Physiol. - 1962. - V. 162, № 4. - P. 487-511

59. Bright J.M., Dowers K., Powers B.E. Effects of the glycoprotein Ilb/IIIa antagonist abciximab on thrombus formation and platelet function in cats with arterial injury // Vet. Ther. - 2003. - V.4, № 1. - P. 35-46

60. Campillo N., Goya P., Paez J.A. Novel arylpyrazino[2,3-c][l,2,6]thiadiazine 2,2-dioxides as platelet aggregation inhibitors. 2. Optimization by quantitative structure-activity relationships // J. Med. Chem. - 1999. - V.42, № 17.-P. 3279-3288

61. Casserly I.P., Topol E.J. Glycoprotein Ilb/IIIa antagonists - from bench to practice // Cell. Mol. Life Sci. - 2002. - V.59. - P. 478-500

62. Cattaneo M. New P2Y(12) inhibitors // Circulation. - 2010. - V. 121. -P. 171-179

63. Ceru S., Pancera P., Sansone S., et al. Effect of five day versus one-day infusion of iloprost on peripheral microcirculation in patients with systemic sclerosis// Clin. Exp. Rheumatol. - 1997. - V.15, № 4. - P. 381-385

64. Chung A.W.Y., Jurasz P., Hollrnberg M.D. et al. Mechanisms of action of proteinase-activated receptor agonists on human platelet // Br. J. Pharmacol. - 2002. - V.135, № 5. - P. 1123-1132

65. Coller A.U., Anderson B.S., Weisman H.F. The anti-GPIIb-IIIa agents: Fundamental and clinical aspects // Haemostasis. - 1996. - V.26, Suppl.4. -P. 285-293

66. Coller B.S. Anti-GPIIb/IIIa drugs: current strtegies and future directions// Thromb. Haemost. —2001. -№ 1. - P. 427-423

67. Collis M.G., Keddie J.R., Rouse W. The cardiovascular pharmacology of ICI 170777 ((6RS)-6-methyl-5-(pyrid-4-yl)-3H,6H-l,3,4-thiadiazin-2-one) a novel compound with positive inotropic and vasodilator effects // Br. J. Pharmacol. - 1989. - V.97, № 3. - P. 409-418

68. Colman R.W., Puri R.N., Zhou F. et al. Platelet membrane receptors: molecular biology, immunology, biochemistry, and pathology// Ed. G.A. Jamieson. - 1988. - P. 263-277

69. Damiano B.P., Mitchell J.A., Giardino E., et al. Antiplatelet activity of RWJ-53308, a novel orally agonist // Thromb. Res. - 2001. - V.104, № 2. - P. 113-126

70. Dieter R.S., Lopez J.J., Nanjundappa A. Platelet resistance - much known and much more unknown // J. Invasive Cardiol. - 2011. - V. 23. - P. 14

71. Dogne J-M., De Leval X., Delarge J. et al. Recent advances in antiplatelet agents // Cur. Med. Chem. - 2002. - № 9. - P. 1867-1880

72. El Shehry M.F., Abu-Hashem A.A., El-Telbani E.M. Synthesis of 3-((2,4-dichlorophenoxy)methyl)-1,2,4-triazolo(thiadiazoles and thiadiazines) as anti-inflammatory and molluscicidal agents // Eur. J. Med. Chem. - 2010. - V.45, №5. -P. 1906-1911

73. El-Sayed W.A., Ali O.M., Hathoot M.M. et al. Synthesis and antimicrobial activity of new substituted fused 1,2,4-triazole derivatives // Z Naturforsch C. - 2010. - V.65, № 1. - P. 22-28

74. Feher G., Feher A., Pusch G. et al. Clinical importance of aspirin and Clopidogrel resistance // World J. Cardiol. - 2010. - V. 26. - P. 171-186

75. Ferguson A.D., Dokainish H., Lakkis N. Aspirin and Clopidogrel response variability // Texas Heart Institute Journal. - 2008. - V.35, № 3. - P. 313320

76. Flier A., Sonnenberg A. Function and interactions of integrins.// Cell Tissue Res. - 2001. - № 2. - P. 285-298

77. Freiinger A.L., Furman M.I., Linden M.D. et al. Residual arachidonic acid-induced platelet activation via an adenosine diphosphate-deoendent but cyclooxygenase-1- and cyclooxygenase-2-independent pathway: A 700-patient study of aspirin resistance // Circulation. - 2006. - V.l 13. - P. 2888-2896

78. Fukazawa T., Yajima K., Miyamoto Y. Evaluation of drug-drug interaction potential of beraprost sodium mediated by P450 in vitro // Jpn. J. Clin. Pharmacol. Ther. - 2008. - V.128, № 10. - P. 1459-1465

79. Fukuoka T., Furuya D., Takeda H. et al. Evaluation of Clopidogrel resistance in ischemic stroke patients // Intern. Med. - 2011. - V. 50. - P. 31-35

80. Fung C. Y. E., Cendana C., Farndale R. W. et al. Primary and secondary agonists can use P2X1 receptors as a major pathway to increase intracellular Ca2+ in the human platelet.// Jour, of Throm. and Haem. - 2007. - № 5.- P.910-917

81. Gachet C. Platelet activation by ADP: the role of ADP antagonists // Ann. Med. - 2000. - V. 32, Suppl 1. - P. 15-20

82. Gasparyan A.Y. Aspirin and Clopidogrel resistance: methodological challenges and opportunities // Vase. Health Risk Manag. - 2010. - V. 6. - P. 109112

83. Gassanov N., Caglayan E.,Nia A.M. et al. Platelet inhibition with prasugrel // Dtsch. Med. Wochenschr. - 2010. - V. 135. - P. 1542-1546

84. Greenhalgh J., Bagust A., Boland A. Prasugrel for the treatment of acute coronary artery syndromes with percutaneous coronary intervention // Health Technol. Assess.-2010.-P. 31-38

85. Gregov D., Jenkins A., Duncan E. et al. Dipyridamole: pharmacokinetics and effects on aspects of platelet function in man.// Br. J. clin. Pharmac. - 1987. - № 24. - P. 425-434

86. Grinsberg M.H., Xiaoping D., O'Tool T.E. Platelet integrins // Thromb. Haemost. - 1993. - V.70, № 1. - P. 87-93.

87. Halushka M.R., Walker L.P., Halushka P.V. Genetic variation in cyclooxygenase 1: effects on response to aspirin // Clin. Pharmacol. Ther. - 2003. -V. 73.-P. 122-130

88. Hantgan R.R., Stahle M.C., Jerome W.G., et al. Tirofiban blocks platelet adhesion to fibrin with minimal perturbation of GpIIb/IIIa structure // Thromb. Haemost. - 2002. - V.87, № 5. - P. 910-917

89. Hartwig J.H. The platelet: form and function // Semin. Hematol. -2006.-V.43, Suppl l.-P. 94-100

90. Holmsen H. Activation of human platelets in vitro // Platelets - 1996. -V.7, № 5-6. - P. 336-341

91. Hoylaerts M.F., Oury C., Toth-Zsamboki E. ADP receptors in platelet activation and aggregation // Platelets. - 2000. - V. 11, № 6. - P. 307-309

92. Jaarsama R.L., Mohammad S.F., Burns G.L., Olsen D.B. Alprostadil: an effective antiplatelet agent for calves//Artif. Organs - 1993. - V.17, № 11. - P. 935-939

93. Jackson S.P., Yap C.L., Anderson K.E. Phosphoinositide 3-kinases and the regulation of platelet function.// Bioch. Soc. Trans. - 2004. - № 32. - P. 387-393

94. Jin R.C., Voetsch B., Loscalzo J. Endogenous mechanisms of inhibition of platelet function // Microcirculation. - 2005. - V. 12, № 3. - P. 247258

95. Jurk K., Kehrel B.E. Platelets: physiology and biochemistry // Semin. Thromb. Hemost. -2005. - V. 31, № 4.-P. 381-192

96. Kawabata A., Kuroda R. Protease-Activated Receptor (PAR), a novel family of G protein-coupled seven trans-membrane domain receptors: activation mechanisms and physiological roles // Jpn. J. Pharmacol. - 2000. - № 82.- P. 171174

97. Kelton J.G., Blajchman M.A. Prostaglandin I2 (prostacyclin) // CMA Journal. - 1980. - V.122. - P. 175-179

98. Kim H.H., Liao J.K. Translational Therapeutics of Dipyridamole // Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology.- 2008. - V.28. - P. 39

99. Kim S., Foster C., Lecchi A. et al. Protease-activated receptors 1 and 4 do not stimulate Gj signaling pathways in the absence of secreted ADP and cause human platelet aggregation independently of Gj signaling // Blood. - 2002. - V. 99, № 10.-P. 3629-3636

100. Kliijnen J., Knipscmild P., Ter Riet G. Garlic, onion and cardiovascular risk factors. A review of the evidence from human experiments with emphasis on commercially available preparations.// Br. J. Clin. Pharmac. -1989.-№28.-P. 535-544

101. Konstantopoulos K., Mousa S.A. Antiplatelet therapies: platelet GPIIb/IIIa antagonists and beyond// Curr. Opin. Investig. Drugs. - 2001. - V.2, № 8.-P. 1086-1092

102. Krueger U., Scholz H., Heise M., et al. Effect of intravenous iloprost and alprostalbk (PGE1) on peripheral resistance during femoro-distal reconstrictions// Int. Angiol. - 2000. - V.19, № 4. - P. 358-365

103. Kumar V., Sharma S.K., Singh S. et al. Synthesis and evaluation of novel indolylthiadiazinoazetidinones and indolylthiadiazinothiazolidinones as antimicrobial agents // Arch Pharm (Weinheim). - 2010. - V.343, № 2. - P. 98107

104. Leger A.J., Covic L., Kuliopulos A. Pritease-activated receptors in cardiovascular diseases // Circulation. - 2006. - V.l 14. - P. 1070-1077

105. Leger A.J., Jacques S.L., Badar J. et al. Blocking the protease-activated receptor 1-4 heterodimer in platelet-mediated thrombosis // Circulation. -2006.-V.l 13.-P. 1244-1254

106. Lev E.I., Osende J.I., Richard M.F., et al. Administration of abciximab to patients receiving tirofiban or eptifibatide: effect on platelet function// J. Am. Coll. Cardiol. - 2001. - V.37, № 3. - P. 847-855

107. Liu X., Yan R., Chen N. et al. Regioselective synthesis of novel N(2)-and N(4)-substituted 7-methylpyrazolo[4,5-e][l,2,4]thiadiazines // Molecules. -2006.-V. 11.-P. 827-836

108. Loll P.J., Picot D., Garavito R.M. The structural basis of aspirin activity inferred from the crystal structure of inactivated prostaglandin H2 synthase.// Nat. Struct. Biol. - 1995. - № 2. - P. 367-643

109. Lombo B., Diez J.G. Ticagrelor: the evidence for its clinical potential as an oral antiplatelet treatment for the reduction of major adverse cardiac events in patients with acute coronary syndromes // Core Evid. - 2011. - V. 6. - P. 31-42

110. Ma Y.Q., Qin J., Plow E.F. Platelet integrin alpha(IIb)beta(3): activation mechanisms // J. Thromb. Haemost. - 2007. - V. 5, № 7. - P. 13451352

111. Macfarlane S.R., Seatter M.J., Kanke T. Proteinase-Activated Receptors // Pharmacological Reviews. - 2001. - V. 53. - P. 245-282

112. MansellP., Reckless J. Garlic.//B.M.J.-1991.-№ 17.-P. 112-130

113. Mansour K., Taher A. T., Musallam K.M. et al. Aspirin resistance // Advances in Hematology. - 2009. - P. 1-10

114. Martinez A, Castro A, Gil C. et al. Benzyl derivatives of 2,1,3-benzo-and benzothieno[3,2-a]thiadiazine 2,2-dioxides: first phosphodiesterase 7 inhibitors.// J Med Chem. - 1999. - V. 17, № 42. - P. 3279-88

115. Maruyama H., Takeda H., Dembo T. et al. Clopidogrel Resistance and the Effect of Combination Cilostazol in Patients with Ischemic Stroke or Carotid Artery Stenting Using the VerifyNow P2Y12 Assay // Intern Med. - 2011. - V. 50. - P. 695-698

116. Michelson A.D. P2Yi2 antagonism. Promises and challenges // Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. - 2008. - № 28.- P. 33-38

117. Michibayashi T. Platelet aggregation and vasoconstriction related to platelet cyclooxygenase and 12-lipoxygenase pathways // J. Atheroscler. And Thromb. - 2004. - V. 12, № 3. - P. 154-162

118. Mickelson J.K., Ali M.N., Kleiman N.S., et al. Chimeric 7E3 Fab (ReoPro) decreases detectable CD lib on neutrophils from patients undergoing coronary angioplasty//.!. Am. College Cardiol. - 1999. - V.33, № 1 - P. 97-106

119. Modi N.B., Novotny W., Reimann J.D., et al. Pharmacokinetics and pharmacodinamics of sibrafiban, an orally administered Ilb/IIIa antagonist, in patients with acute coronary syndrome// J. Clin. Pharmacol. - 1999. - V.39, № 7. -P. 675-684

120. Morris A. J., Panchatcharam M., Cheng H.Y. et al. Regulation of blood and vascular cell function by bioactive lysophospholipids // Jour, of Thromb. and Haemostasis. - 2009. - V. 7. - P. 38-43

121. Muelas S., Suârez M., Pérez R. et al. In vitro and in vivo assays of 3,5-disubstituted-tetrahydro-2H-1,3,5-thiadiazin-2-thione derivatives against Trypanosoma cruzi // Mem. Inst. Oswaldo. Cruz. - 2002. - V.97, № 2. - P. 269272

122. Nair S., Ghosh K., Kulkarni B., et al. Glanzmann's thrombasthenia: updated// Platelets. - 2002. - № 4. - P. 387-393

123. Ni H., Freedman J. Platelets in hemostasis and thrombosis: role of integrins and their ligands.// Transf. and Apheresis Science. - 2003. - № 28. - P. 257-264

124. Nicholson N.S., Abood N.A., Panzer-Knodle S.G., et al. Orbofiban: an orally active GPIIb/IIIa platelet receptor antagonist// Med. Res. Rev. - 2001. -Y.21, № 3. - P. 211-216

125. Nishio S., Matsuura H., Kanai N. et al. The in vitro and ex vivo antiplatelet effect of TRK-100, a stable prosta cyclin analog, in several species // Japan. J. Pharmacol. - 1988. - № 47. - P. 1-10

126. Nishiya Y., HagiharaK., Ito T. et al. Mechanism-based of human cytochrome P450 2B6 by ticlopidine, Clopidogrel, and the thiolactone metabolite of prasugrel // Drug Metabolism and Disposition. - 2009. - V.37, № 3. - P. 589593

127. Novikova A.P., Perova N.M., Chupakhin O.N. Synthesis and properties of functional derivates of 1,3,4-thiadiazines and condensed system based on these compounds // Khimiya Geterotsiklicheskikh Soedinenii. - 1991. - № 11.-P. 1159-1172

128. Novokmet S., Jakovljevic V.L., Jankovic S. et al. Human platelet perfusion through isolated guinea-pig heart: the effects on coronary flow and oxidative stress markers // Gen. Physiol. Biophys. - 2009. - V. 28. - P. 98-104

129. Nurden P. GPIIb-IIIa inhibitors // Transfus. Clin. Biol. - 2001. - V. 8, №2.-P. 114-122

130. Offermanns S. The role of heterotrimeric G protein in platelet

activation // Biol. Chem. - 2000. - V. 381, № 5-6. - P. 389-396

179

131. Park J, Vaidyanathan G, Singh B. et al. Identification and biochemical studies on novel non-nucleoside inhibitors of the enzyme adenosine kinase.// Eur J Med Chem. - 2007. - V. 4, № 42. - P. 521-9

132. Plow E.F., Pierschbacher M.D., Ruoslahti E. et al. The effect of Arg-Gly-Asp-containing peptides on fibrinogen and von Willebrand factor binding to platelets // Proc. Natl. Acad. Sci. - 1985. - V. 82. - P. 8057-8061

133. Proimos G. Platelet aggregation Ingibition with GPIIbllla Inhibitors.// Jour. ofThromb. and Thrombol. -2001. -№ 11.-P. 99-110

134. Pyrgakis V.N. Aspirin in primary prevention // Hellenic J. Cardiol. -2009.-V.50.-P. 441-442

135. Quick A.J.J. The prothrombin in hemophilia and obstructive jaundice // J. Biol. Chem. - 1935. - V.109. - P.LXXIII

136. Quinn M.J., Byzova T.V., Qin J., et al. Integrin {alpha}IIb{beta}3 and its antagonism//Arterioscler. Thromb. Vase. Biol. - 2003. - V.23, № 6. - P. 945952

137. Quinn M.J., Fitzgerald D.J. Ticlopidine andclopidogrel // Circulation. - 1999. - V. 100, № 15.-P. 1667-1672

138. Rehmel J.L.F., Eckstein J.A., Farid N.A. et al. Interaction of two major metabolites of prasugrel, a thienopyridine antiplatelet agent, with the cytochromes P450 // Drug Metabolism and Disposition. - 2006. - V.34, № 4,- P. 600-607

139. Rehse K, Briimmer U, Unsold E. 2-Nitrosoimino-3,6-dihydro-2H-1,3,4-thiadiazines with antiplatelet and antithrombotic properties.// Zhongguo Yao Li Xue Bao. - 1997. - V. 2, № 18. - P. 101-104

140. Rehse К., Brtimmer U., Unsold E. 2-Nitrosoimino-3,6-dihydro-2H-1,3,4-thiadiazines with antiplatelet and antithrombotic properties // Pharmazie. -1998. - V.53, № 12. - P. 820-824

141. Reilly I.A., Fitzgerald G.A. Inhibition of thromboxane formation in vivo and ex vivo: implications for therapy with platelet inhibitory drugs // Blood. -1987.-V. 69.-P. 180-186

142. Rendu F., Brohard-Bohn B. The platelet release reaction: granules' constituents, secretion and functions // Platelets. - 2001. - V. 12, № 5. - P. 261273

143. Ruparelia N., Spyrou N. Platelet inhibition with cangrelor // N. Engl. J. Med. - 2010. - V. 362. - P. 1048-1049

144. Sassoli P.M., Emmell e.l., Tam S.H., et al. 7E3 F(ab')2, an effectivve antagonist of rat alphallbbeta3 and alphavbeta3, blocks in vivo thrombus formation and in vitro angiogenesis// Thromb. Haemost. - 2001. - V.85, № 5. - P. 896-902

145. Savi P., Pereillo J.M., Uzabiaga M.F. et al. Indetification and biological activity of the active metabolite of clopidogrel // Thromb. Haemost. -2000. - V. 84, № 1. - P. 345-351

146. Scarborough R.M., Laibelman A.M., Clizbe L.A. Novel tricyclic benzothiazolo[2,3-c]thiadiazine antagonists of the platelet ADP receptor (P2Y(12)) //Bioorg. Med. Chem. Lett.-2001.-V. 11, № 14.-P. 1805-1808

147. Schermuly R.T., Schulz A., Ghofrani H.A., et al. Pharmacokinetics and metabolism of infused versus inhaled iloprost in isolated rabbit lungs// J. Pharmacol. Ther. - 2002. - V.303, № 2. - P. 741-745

148. Schror K., Weber A.A. Comparative pharmacology of GPIIb/IIIa

antagonists.// Jour, of Thrombosis and Thrombolisys. - 2003. - № 15. - P. 71

181

149. Shah I., Khan S.O., Malhotra S. et al. Eptifibatide: The evidence for its role in the management of acute coronary syndromes // Core Evid. - 2010. - V. 15.-P. 49-65

150. Skoumbourdis A.P., LeClair C.A., Stefan E. et al. Exploration and optimization of substituted triazolothiadiazines and triazolopyridazines as PDE4 inhibitors // Bioorg. Med. Chem. Lett. - 2009. - V. 19, № 13. - P. 3686-3692

151. Song S.J., Pagel C., Campbell T. et al. The Role of Protease-Activated Receptor-1 in Bone Healing.// American Journal of Pathology. - 2005. - № 3. - P. 857-868

152. Stassen J.M., Arnout J., Deckmyn H. The Hemostatic System. // Current Med. Chem. - 2004. - V. 11, № 17. - P. 2245-2260

153. Stuart T.H., Bussey H.I. Thrombosis and pharmacology of antithrombotic agents// Ann. Pharmacother. - 1995. - V.29, № 10. - P. 892-905

154. Tagarakis G.I. Ticagrelor and prasugrel: two novel, most-promising antiplatelet agents // Recent Pat. Cardiovasc. Drug Discov. - 2010. - V. 5. - P. 208-211

155. Theroux P. Antiplatelet Therapy in Coronary Disease: What Agent to Use, When, and How?// Jour, of Thrombosis and Thrombolisys. - 1998. - № 5. -P. 143-150

156. Thijs T.,Nuyttens B.P., Deckmyn H. Platelet physiology and antiplatelet agents // Clin. Chem. Lab. Med. - 2010. - V. 48. - P. 3-13

157. Thomas S. Platalet glycoproteins in haemostasis// Clin. Lab. - 2002. -V.48. - P. 247-262

158. Thomas S. Platelet Memrane Glycoproteins in Haemostasis.// Clin. Lab. - 2002. - № 48. - P. 247-262

159. Topol E.J., Byzova T.V., Plow E.F. Platelet GPIIb/IIIa blockers// Lancet. - 1999. - V.353, № 9148. - P. 227-231

160. Topol E.J., Plow E.F. Clinical trials of platelet receptor inhibitors// Thromb. Haemost. - 1993. - V.70, № 1. - P. 94-98

161. Tozkoparan B., Ayta? S.P., Aktay G. Novel 3,6-disubstituted 7H-l,2,4-triazolo[3,4-b][l,3,4]thiadiazines: synthesis, characterization, and evaluation of analgesic/anti-inflammatory, antioxidant activities // Arch. Pharm. (Weinheim). - 2009. - V.342, № 5. - P. 291-298

162. Troxler M., Dickinson K., Homer-Vanniasinkam S. Platelet function and antiplatelet therapy // Br. J. Surg. - 2007. - V. 97, № 6. - P. 674-682

163. Undas A., Brummel-Ziedins K., Mann K. Antithrombotic properties of aspirin and resistance to aspirin: beyond strictly antiplatelet actions.// Blood. -2007. - V. 109, № 6. - P. 2285-2292

164. Varon D., Spectre G. Antiplatelet agents // Hematology. - 2009. - № 4. - P. 267-272

165. Vasil'eva T.M., Makarov V.A., ChupakhinO.N. et al. Antiaggregant properties of new 1,3,4-thiadiazine derivatives // Eksp. Klin. Farmakol. - 2009. -V.72, № 5. - P. 27-30

166. Vestweber D., Blanks J. Mechanisms That Regulate the Function of the Selectins and their ligands.// Physiological Reviews. - 1999. -№ l.-P. 181213

167. Walkowiak B, Michalak E, Koziolkiewicz W. et al. // Rapid photometric method for estimation of platelet count in blood plasma or platelet suspension. Thromb Res. - 1989. - V.15. - P. 763-766

168. Wiviott S.D., Antman E.M., Braunwald E. Prasugrel // Circulation. -2010.-V. 122.-P. 394-403

169. Zimmerman N. Resistance to aspirin.// Circulation. - 2003. - № 108. -P. 542-547

170. Zucker M.B., Nachmias V.T. Platelet activation // Arterioscler. Thromb. Vase. Biol. - 1985. - № 5. - P. 2-18