Влияние нацеленного на митохондрии производного пластохинона на развитие новообразований, показатели биологического возраста и продолжительность жизни у мышей тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.01.12, кандидат биологических наук Юрова, Мария Николаевна

• Юрова, Мария Николаевна
• кандидат биологических наук
• 2011

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Юрова, Мария Николаевна

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Старение и канцерогенез.

1.2. Антиоксиданты.

1.3. Нацеленные на митохондрии антиоксиданты.

1.4. SkQl, старение и продолжительность жизни.

1.5. SkQl и канцерогенез.

1.6. Метформин.

1.7. Тест-системы для изучения геропротекторов.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1. Животные.

2.2. Препараты.

2.2.1. SkQl.

2.2.2. Метформин.

2.3. Схема экспериментов.

2.4. Регистрируемые показатели.

2.5. Статистический анализ.

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.

3.1. Исследование влияния SkQl на старение, продолжительность жизни и спонтанный канцерогенез у мышей SHR.

3.1.1. Возрастная динамика массы тела, потребления корма и жидкости.

3.1.2. Температура тела.

3.1.3. Эстральная функция.

3.1.4. Поведение животных.

3.1.5. Состояние волосяного покрова и скелета.

3.1.6. Выживаемость и продолжительность жизни.

3.1.7. Развитие патологических процессов.

3.1.7.1. Канцерогенез.

3.1.7.2. Неопухолевая патология.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Влияние нацеленного на митохондрии производного пластохинона на развитие новообразований, показатели биологического возраста и продолжительность жизни у мышей»

В связи с глобальным постарением населения и связанным с ним увеличением заболеваемости злокачественными новообразованиями (Напалков Н.П., 2004), ключевое значение имеет проблема профилактики и предупреждения преждевременного старения и развития ассоциированной с возрастом патологии.

Существует много теорий' происхождения рака и* развития возрастных изменений в. организме (Анисимов В.Н., 2008). Согласно свободно-радикальной теории, в, механизмах старения и ассоциированных с ним заболеваний, включая рак, важную роль играет возрастное накопление окислительных повреждений макромолекул свободными радикалами, (НалпапБ., 1956; 1994; Эмануэль Н.М., 1975;СиИег К., 1991; 81%е^а М.К. е1 а1., 1994). Известно, что свободные радикалы, в частности, активные формы кислорода (АФК) образуются и накапливаются преимущественно в митохондриях. Поэтому, перспективным направлением в разработке геропротекторов является- использование антиоксидантов, способных целенаправленно проникать внутрь митохондрий, аккумулироваться, там и снижать уровень свободно-радикальных процессов (Северин С. Е. и др., 1970; МшрЬу М.Р., 2001; БкЫасЬеу У.Р., 2007).

Нацеленные на митохондрии антиоксиданты, такие как МйоС> (на основе убихинона) и МкоУ№ (на основе модифицированного витамина Е), уже в микромолярных концентрациях селективно блокируют окислительные повреждения митохондрий и предотвращают апоптоз, индуцируемый перекисью водорода (ТашкеЬ 1.8., 2007). Однако установлено, что разница между концентрациями данных веществ, оказывающими антиоксидантный и прооксидантный эффект, очень мала (Оои^ап А.К. а1., 2007).

Для снижения риска прооксидантной активности было предложено использовать пластохинон вместо убихинона. Синтезированная молекула 10Е(6'-пластохинонил) децилтрифенилфосфоний получила название SkQl (Skulachev V.P., 2007). Была выявлена хорошая проницаемость SkQl через фосфолипиды мембраны; большая антиоксидантная и меньшая прооксидантная активность, по сравнению с аналогичным препаратом- на основе убихинона (MitoQ). Предполагается, что SkQl, инактивируя АФК внутри митохондрии, может замедлять развитие программы старения* (Skulachev V.P., 2007).

SkQl тормозил проявление признаков старения и увеличивал продолжительность жизни грибов- (Р. anserinä), ракообразных (С. qffinis), насекомых (D. melanogaster) (Анисимов В.Н: и др., 2008), рыб (N.funzeri) и млекопитающих (мутантных по мтДНК мышей, нокаутных р53;/" мышей, крыс OXYS) (Skulachev M.V. et alc., 2011). Поэтому необходимо дальнейшее исследование геропротекторных свойств SkQl в эксперименте.

Старение связано также с возрастными изменениями регуляторных систем организма - нейроэндокринной и- иммунной; Согласно элевационной теории старения В.М. Дильмана (Дильман В.М., 1987), у высших организмов с возрастом повышается* порог чувствительности гипоталамуса к регуляторным гомеостатическим сигналам, что приводит к развитию метаболических нарушений, повышающих вероятность злокачественной трансформации клетки и способствующих возникновению рака.

Этот процесс может тормозиться при введении веществ, способных повышать чувствительность тканей к инсулину, улучшать толерантность к углеводам и снижать уровень липидов. В ряде опытов на различных линиях мышей (SHR, HER-2/neu, NMR Г и др.) было показано, что антидиабетические бигуаниды (метформин, фенформин, буформин) оказывают выраженное геропротекторное действие и тормозят развитие спонтанных опухолей молочной железы (Аш^тоу У.К й а1., 2005; 2008; 2010). Поэтому представляется перспективным исследование сочетанного воздействия препарата БкС)1 и метформина на процессы старения, продолжительность жизни и канцерогенез.

Использование геропротекторов предполагает их длительное введение. В связи с этим, актуальным является всестороннее изучение действия геропротекторных препаратов в эксперименте, позволяющее оценить их безопасность и влияние не только на старение, но и на развитие различных патологических процессов, включая опухоли (Анисимов В.Н., 2008).

В отделе канцерогенеза и онкогеронтологии ФГБУ «НИИ онкологии им. Н.Н. Петрова» Минздравсоцразвития России с этой целью используются аутбредные мыши БНЯ, инбредные мыши 129/8у, а также трансгенные мыши НЕ11-2/пеи. У животных исследуются различные показатели г биологического возраста (масса и температура тела, количество потребляемого корма и воды, эстральный цикл, поведенческие реакции и внешние признаки старения), параметры продолжительности жизни, развитие-опухолевой и неопухолевой патологии (АшБтоу У.К et а1., 2007).

Комплексное исследование показателей старения и канцерогенеза под воздействием направленного на митохондрии антиоксиданта 8кС>1 у аутбредных, инбредных, трансгенных мышей; а также сочетания БкСП с метформином позволит оценить возможный геропротекторный и антиканцерогенный потенциал данного препарата.

Цель и задачи исследования

Цель исследования состояла в изучении действия препарата 8кС>1 в различных дозах, а также его сочетания с метформином на показатели биологического возраста^ продолжительность жизни, развитие опухолевой и неопухолевой патологии у самок мьппей различных линий (8Ш1, 129/8у и НЕК-2/пеи).

В задачи исследования входило:

Г. Оценить влияние 8кС>1 в различных дозах на показатели биологического возраста у мышей аутбредной линии 8НЯ, инбредной 129/8у и трансгенной НЕЫ-2/пеи.

2. Исследовать влияние различных доз БкСН на параметры продолжительности жизни и особенности популяционного старения у мышей трех линий. ' ' .!

3. Исследовать влияние 8к(~)1 на особенности спонтанного канцерогенеза у мышей различных линий.

4. Оценить влияние 8кС>1 на развитие неопухолевой патологии у мышей трех линий.

5. Сравнить эффекты 8кС>1, антидиабетического бигуанида метформина и их сочетания? на старение, продолжительность жизни и развитие новообразований у мышей 8ИК.

Научная новизна исследования

1. Впервые, проведено сравнительное исследование влияния длительного применения препарата 8кС>1 на показатели биологического возраста, продолжительность жизни, развитие спонтанных опухолей и неопухолевых возрастных патологических процессов у мышей различных линий.

2. Впервые проведена сравнительная оценка влияния ЭкСИ, метформина и их сочетания на параметры продолжительности жизни и спонтанного канцерогенеза у самок мышей ЭНН.

3. Впервые установлено наличие потенциального геропротекторного эффекта 8к(^1 у самок мышей БНЫ и отсутствие токсического и канцерогенного эффекта длительного применения 8кС>1 у самок мышей 129/8 v и НЕ11-2/пеш

Научно-практическая ценность работы

Результаты имеют теоретическое и практическое значение. Полученные в результате исследования данные подтверждают представления1 о роли генерируемых в митохондриях свободных радикалов в механизмах канцерогенеза и старения, а также о значении системных изменений в этих процессах.

В практическом- плане получены- данные о безопасности длительного применения нацеленного на митохондрии пластохинона 8кС>1 у мышей и наличии у 8кС>1 геропротекторных свойств, что свидетельствует о перспективности дальнейших предклинических испытаний препарата для оценки его возможного применения с целью предупреждения преждевременного старения и развития ассоциированной с возрастом патологии, включая опухоли.

Основные положения, выносимые на защиту

1. При введении в дозах 0,5-2500 нмоль/кг/сутки 8кС>1 тормозил возрастные изменения основных биомаркеров- старения самок аутбредных мышей 8НЕ1, не влияя- на старение инбредных мышей 129/8у и трансгенных НЕК-2/пеи.

2. Применение 8кС>1 в дозах 0,5-50 нмоль/кг значительно (до 45%) увеличивало продолжительность жизни самок мышей 8НЯ.

3. Длительное введение SkQl в широком диапазоне доз не оказывало влияния на спонтанный канцерогенез у мышей SHR, 129/Sv и HER-2/neu.

4. Введение препарата SkQl мышам SHR сопровождалось значительным снижением смертности от неопухолевой патологии преимущественно инфекционного характера.

5. Не выявлено аддитивного действия метформина при его сочетанном введении с SkQl на параметры; продолжительности жизни, развитие опухолевой и неопухолевой патологии у самок мышей SHR.

Апробация диссертации

Основные результаты работы были представлены на отечественных и международных научных форумах: П международной конференции «Ионы Скулачева», (Суздаль, 2008);: IV, V, VI Российских научных конференциях «Фундаментальная онкология; Петровские чтения» (Санкт-Петербург, 2008, 2009, 2010); II Санкт-Петербургском международном экологическом форуме «Окружающая среда и здоровье человека» (Санкт-Петербург, 2008); II международном форуме по нанотехнологиям «Роснанотех 2009» (Москва, 2009); международной конференции "From. Homo sapiens to Homo sapiens liberates" (Москва; 2010); VII международной конференции по митохондриальной физиологии "The Many Functions of the Organism in our Cells" (Обергугль, Австрия, 2010). Основные результаты и положения диссертационного исследования полностью отражены в публикациях.

Заключение диссертации по теме «Онкология», Юрова, Мария Николаевна

ВЫВОДЫ

1. Длительное введение препарата БкСН в дозах 0,5-2500 нмоль/кг/сУ1*1* существенно не сказывалось на таких показателях биологического возраста, как динамика массы и температуры тела, количество потребляемого кор]У1а и жидкости, у мышей аутбредной вНЯ, инбредной 129/Бу и трансгенной НЕ^ 2/пеи линии, что свидетельствует об отсутствии токсического1 эффекта препарата.

2. Введение 8к(^1 в дозах 0,5-2500« нмоль/кг/сутки замедляло разв#тие возрастных изменений репродуктивной функции, выражавшихся в нарастании длины циклов и увеличении доли мышей с иррегулярными ЦИКЛаГ^СИ' У животных всех исследованных- линий. У мышей. 8НИ. 8кС>1 в доза?с

50 нмоль/кг/сутки существенно угнетал развитие внешних признаков старенИЯ (облысения, потери вибрис, развития кифоза).

31 Применение 8к(21' в дозах 0,5-50 нмоль/кг/сутки значительно ув&11ичи вало выживаемость и параметры продолжительности жизни (ПЖ) мышей: среднюю ПЖ - максимально на 45% (р<0,05); медиану - на- 92/о (р<0,05) при дозе SkQl 5 нмоль/кг/сутки; среднюю ПЖ последний выживших - на 13% (р<0,05); максимальную ПЖ - на 6% при дозе-50 нмоль/кг/сутки. Введение SkQГ не влияло» на параметры выживаемость самок мышей инбредной и трансгенной линии.

4. При- изучении спонтанного канцерогенеза у интактных самок

8Ш1 установлено, что у них развиваются1 преимущественно оиуг:?сОЛИ молочной железы (14%), злокачественные лимфомы (23%) и опухоли л^:ГКИХ

9%). Длительное применение 8кС>1 в дозах 0,5-50 нмоль/кг/сутки нескк^-г1ЬКО не снижало общую частоту (68% и 55-61%, р>0,05) развития опухолей, оказывало влияния на их спектр. У интактных мышей 129/8у спон"^-^13110 возникали, в основном, новообразования матки (80%), яичников (10%), л<

8%) и печени (5%). SkQl дозах 5 и 250 нмоль/кг/сутки не влиял на частоту и спектр развившихся спонтанных новообразований.

5. У трансгенных мышей HER-2/neu спонтанные аденокарциномы молочной железы развивались в 100% случаев, в среднем в возрасте 6-7 мес. Применение SkQl в дозах 5-250 нмоль/кг/сутки существенно не влияло (р>0,05), а в дозе 2500 нмоль/кг/сутки замедляло (р=0,004) динамику развития опухолей молочной железы у трансгенных мышей, несущих онкоген HER-2/neu.

6. Введение SkQl сопровождалось значительным снижением смертности мышей SHR от неопухолевой патологии (пневмония, гепатит, нефропатия, колит и пр.), что проявлялось в уменьшении доли животных, основной причиной гибели которых была неопухолевая патология, на 25-40%, а также увеличении сроков их гибели на 33-56% (р<0,05).

7. При совместном применении SkQl и метформина у мышей SHR не выявлено их аддитивного эффекта в отношении параметров продолжительности жизни и канцерогенеза.

3.4.7. Заключение

Введение SkQl самкам мышей SHR тормозило развитие возрастных нарушений репродуктивной функции, угнетало двигательную активность животных в тесте «открытое поле», не оказывая- существенного влияния на другие маркеры старения, продолжительность жизни и канцерогенез.

Метформин снижал температуру тела, препятствовал возрастному угнетению астральной функции, не влиял на другие биомаркеры старения и несколько увеличивал продолжительность жизни, не оказывая существенного влияния на развитие опухолевой и неопухолевой патологии.

При совместном действии SkQl снижалась температура тела животных, тормозилось развитие возрастных нарушений астральной функции, сохранялась двигательная активность и увеличивалась продолжительность жизни. При этом не было выявлено значительного эффекта совместного применения препаратов на параметры канцерогенеза и развитие неопухолевои патологии.

ГЛАВА4

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ

С возрастом постепенно увеличивается интенсивность продукции АФК в тканях организма (Скулачев В.П., 1997; Ога\уа Т., 1997; Бе ТУ^аШаеэ 1.Р. е1 а1.3 2006), снижается общая антиокислительная защита, и, таким образом, накапливаются продукты окислительного повреждения макромолекул, которые могут способствовать старению и.развитию опухолей (Лю Б.Н:, 2003; Бе М^аШаеБ 1.Р. & а1., 2006). Поэтому обоснованным является предположение, что антиоксидант 8кС>1, проникающий внутрь митохондрий, где генерируются АФК, способен-замедлять развитие программы старения (8ки1ас11еу У.Р., 2007; БкиксЬеу М.У. et а1., 2011).

В, последние годы установлено, что применение БкС)1 в дозах 0,55 - 1000 нмоль/кг/сутки увеличивает продолжительность жизни грибов; насекомых, рыб и мышей (мутантных по мтДНК и нокаутных р53-/-) (Анисимов В.Н. и др., 2008; БкиксЬеу М.У. ег а1., 2011), а также тормозит возникновение и рост опухолей (Агапова Л.С. и др., 2008) (табл. 24). Однако отсутствуют данные о влиянии БкС)1 на старение, продолжительность жизни и канцерогенез у мышей других линий.

Нами было произведено сравнительное исследование показателей гомеостаза и старения, продолжительности жизни и< развития спонтанных опухолей под воздействием 8к(^1 в диапазоне доз 0,5-2500 нмоль/кг/сутки у трех линий мышей-самок: аутбредных 81Ш, инбредных 129/8у и трансгенных НЕЫ-2/пеи (табл. 24).

Данные о влиянии различных доз БкСН на показатели биологического возраста, продолжительность жизни и развитие возрастной патологии у млекопитающих

Животные мыши крысы

Линия 129/8У НЕ11-2/пеи мтДНК1 С57ВЬ/6 р53 БТ2 Вистар ОХУ8

Доза 8кС>1 (нмоль/кг/сутки) 0,5 5 50 .5 250 5 50 250 2500 700-1000 5 5 5 250 250

Масса тела

Потребление корма — — 4 4 = =

Потребление жидкости ' = = = т 1 = = = ■ =

Температура тела = = =" = • = = ■ =. = ' =

Возрастные нарушения астральной функции 1 1 4 = = Т Т 4 4 4

Двигательная активность 1 4 4 4 4 ; Т т

Проявление внешних признаков старения 4 4- = = .4 4

Продолжительность жизни т Т Т 4 — ■ — Т 1

Канцерогенез = = = Т = = = : =- ■ .4. 4 4

Неопухолевая патология 1 4 4- , = = = ■ = = : =

Источник данных наши данные №:с1ег§аагс11. еЫ., 2010 • 8ки1асЬеу М.У. е|: а1.9 2011 Агапова Л.С. и др.,2008 81еГапоуа 1Ч.А. е1 а1., 2010 ю

- мтДНК - мыши с мутацией митохондриальной ДНК 2 - БТ- бестимусные мыши увеличение регистрируемого параметра снижение регистрируемого параметра = -нет существенного эффекта

Изучение процессов старения на протяжении всей жизни животных в хронических экспериментах подразумевает оценку биомаркеров старения.

Подобная оценка позволяет выявить факторы, способствующие преждевременному и/или ускоренному старению (Дильман В.М., 1987; Arking

R., 1991; Белозерова Л.М., 1998; Ingram D.K. et al., 2001; Коркушко О.В. и др., 2002).

Имеются эпидемиологические наблюдения, свидетельствующие об увеличении риска рака и уменьшении продолжительности жизни при-чрезмерно большом весе тела и ожирении (Lee LM. et al., 2001). экспериментах на животных подобная корреляция между весом тела и продолжительностью жизни прослеживается, не всегда, направление корреляции в значительной мере определяется возрастом и генотипом животных (Ingram D.K. et al., 1987; 2001). В наших экспериментах не было выявлено существенного эффекта исследованных доз SkQl на массу тела мышей трех линий (табл. 25). Не было отмечено «влияния, на динамику массы тела и у нацеленного на митохондрии антиоксиданта MitoQ в дозе 5 мг/кг при внутрибрюшинном введении 2 раза в неделю крысам Sprague-Dawley (Chandran К. et al., 2009).

Как известно, ограничение калорийности питания и связанное с ним снижение массы тела животных существенным образом замедляют старение (Walford R.L., 1974; Weindruch R. et al., 1997). Поэтому возрастное изменение потребления корма, так же как и массы тела, может служить значимым критерием старения. В нашей работе, в целом, не обнаружено существенного влияния SkQl' в дозах 0,5-2500 нмоль/кг/сутки на потребление корма у самок мышей исследованных линий. Стоит отметить, что на ранних сроках эксперимента было обнаружено некоторое снижение (на 16%-30%) количества потребляемого корма и соответственное незначительное снижение массы тела (на 3%-12%) под воздействием низких (5 и 50 нмоль/кг/сутки) доз SkQl у мышей трансгенной линии HER-2/neu, но в поздних возрастах данные различия нивелировались, что может свидетельствовать о случайном характере выявленных изменений.

При анализе потребления жидкости не было выявлено значительного влияния 8кС>1 на этот показатель у мышей 81Ж и НЕК-2/пеи, однако у мышей 129/8 v введение БкСН в дозах 5 и 250 нмоль/кг/сутки увеличивало среднесуточное потребление жидкости на протяжении большей части жизни-животных. Подобное явление, возможно связано со спецификой данной линии-животных и требует дальнейшего изучения.

Таким образом, отсутствие значимого влияния исследованных доз 8к()1 на динамику массы тела, потребление корма и жидкости свидетельствует об отсутствии токсического эффекта длительного применения препарата у самок мышей трех линий. Полученные нами данные согласуются с имеющимися литературными'данными. Не удалось также выявить токсического эффекта препарата при» пожизненном^ введении* 8кС>1 мухам, рыбам, беспородным, нокаутным' (р53-/-), мутантным (по мтДНК) мышамг (БкиксЬеу М.У. & а1., 2011).

Одним- из интегральных показателей обменных процессов является температура тела, которая, как показано в ряде опытов на мышах, с возрастом снижается (Попович И.Г. и др., 2004). В наших исследованиях не было выявлено четкого влияния исследованных доз. 8к(^1 на температуру тела мышей трех исследованных линий. В литературе данных по изучению влияния нацеленного на митохондрии антиоксиданта на возрастную динамику температуры тела не представлено.

Важным параметром старения является возрастное изменение состояния репродуктивной системы. При анализе данных о продолжительности жизни и репродуктивной функции у птиц и млекопитающих, живущих в неволе (в условиях зоопарка), была выявлена корреляция между скоростью возрастного снижения фертильности и скоростью соматического старения (Ricklefs R.E. et al., 2003).

У самок грызунов можно отметить две фазы старения репродуктивной функции (Thung P.J. et al., 1956; Holinka C.F. et al., 1977). В первой фазе начинает происходить снижение фертильности у самок, однако регулярность астральных циклов еще не нарушается. Во второй фазе продолжительность циклов увеличивается, и начинают появляться иррегулярные циклы (персистирующий эструс, ложная беременность, анэструс) (Aschheim Р:, 1976; Huang Н.Н. et al., 1975; 1976); В наших экспериментах у контрольных самок мышей аутбредной, инбредной и трансгенной линий с возрастом происходило увеличение-продолжительности астрального цикла, преим)Щ|ественно« за счет увеличения доли длинных (более 7 дней) циклов, и увеличение относительной доли мышей с иррегулярными циклами (табл. 4, 11, 16), что согласуется с данными литературы (Пискунова! T.G и др., 2007; Анисимов В.Н., 2003).

Влияние SkQl на репродуктивную функцию зависело от линии мышей и дозы препарата. SkQl препятствовал развитию возрастных нарушений астральной функции при введении в дозах 0,5 - 250>нмоль/кг/сутки - у самок мышей SHR и 129/Sv и в дозах 250-2500 нмоль/кг/сутки - у самок мышей HER-2/neu. У трансгенной линии мышей, получавших SkQl в дозах 5 и 5 0 нмоль/кг/сутки, отмечено увеличение частоты иррегулярных циклов. Полученные нами данные о торможении возрастного выключения репродуктивной функции под влиянием SkQl согласуются с результатами опытов на мутангных по мтДНК мышах, у которых применение SkQl (7001000 нмоль/кг/сутки) с питьевой водой увеличивало регулярность астральных циклов (Nedergaard J. et al., 2010).

На основании наблюдений в тесте «открытое поле» (в возрасте 12 и 15 мес.) можно сделать заключение, что у контрольных животных SHR и 129/Sv с возрастом двигательная и локомоторная активность уменьшается, что согласуется с литературными данными у крыс Вистар и OXYS (Stefanova N.A. et al., 2010). Под влиянием SkQl (5 и 250 нмоль/кг/сугки) двигательная активность (оцениваемая по количеству пересеченных квадратов поля и выполненных вертикальных стоек) значительно снижалась (на 23% - 61%) по сравнению с контролем у мышей обеих линий. Также обнаружено усиление утомляемости и снижение выносливости 20-мес. мышей SHR в; тесте С подвешиванием на струне. При исследовании в тесте «приподнятый крестообразный, лабиринт» не обнаружено. влияния; SkQl (0,5-;50;нмоль/кгУсугки) на уровень,тревожностшмьшгей^Ш: В'опытах на:крысах OXYS и Вистар при введении SkQl (в дозе 250 нмоль/кг/сугки) в возрасте 3 и 14 мес. уровень локомоторной и исследовательской активности в тесте «открытое поле» увеличивался, а уровень тревожности в тесте «приподнятый крестообразный: лабиринт» снижался, (Stefanova N.A. et al., 20 Ю). Аналогичные данные о повышении уровня двигательной активности получены у мышей C57BL/6 3- й, 24-мес. возраста под; воздействием ненацеленного коэнзима Q10 (Sinatra D.S et al., 2003). Объяснить вышеуказанные различия в результатах можно с нескольких точек зрения. Стоит отметить, что наши эксперименты, в отличие от данных литературы, проводились с меньшей возрастной разницей. Также известно, что различнее линии животных изначально, имеют отличия; в проявлении элементов индивидуального поведения. Само по себе поведение мышей крайне вариабельно и может изменяться под влиянием многих факторов, как-то: возраста, времени суток, степени сытости животных, освещённости в, «открытом поле», уровня шума и т.д. (Михеев. В В. и др., 2009). Всё это свидетельствует о.необходимости продолжения исследования влияния SkQl на поведенческие характеристики различных линий животных.

У самок мышей SHR, получавших SkQl в дозах 0,5- 50 нмоль/кг/сумси, существенно тормозилось развитие таких внешних признаков старения, как облысение, потеря вибрис и возрастные изменения позвоночника.

Аналогичные результаты были получены у мышей, мутантных по мтДНК, при дозе 8к(^1 700-1000 нмоль/кг/сутки (Кесіещаагсі et а1., 2010) и на модели ускоренного старения на мышах С57ВЬ/6 при дозе 8к(^1 5 нмоль/кг (8ки1асЬеу М.У. еі.аі., 2011). В то же время у мышей линии 129/8у в наших опытах не было выявлено действия 8к(-)1 на данные признаки.

Что касае тся других биомаркеров, то в литературе имеются; данные о тормозящем влиянии? 8к(^1 (в дозе 250 нмоль/кг/сутки) на развитие таких признаков; старения; как возрастная инволюция тимуса (ОЬикЬоуа Ь.А. еі аі., 2009); появление катаракты и ретинопатии; карбонилирование белков1 в скелетных мышцах и снижение минерализации костей:- у крыс ОХУ8 (Нероев В:В. и др., 2008).

В наших экспериментах за животными наблюдали до их естественной гибели; что позволило изучить выживаемость и показателш продолжительности жизни. . Средняя- продолжительность жизни; аутбредных мышей 8Н& была значительно- выше (увеличение до 45%) у животных, получавших 8кС)1 в дозах 0,5-50 нмоль/кг/сутки без выраженной связи доза-эффект. Оптимальной оказалась средняя доза (5 нмоль/кг/сутки). Эффект 8кС>1 был наиболее сильно выражен на ранних и средних этапах старения (медиана продолжительности жизни удваивалась), а максимальная' продолжительность жизни, увеличивалась в меньшей степени. Аналогичные тенденции были выявлены, в. опытах на грибах и беспозвоночных (Анисимов В.Н. и др., 2008).

У самок долгоживущей инбредной линии 129/8у доза SkQl 5 нмоль/кг/сутки, наиболее эффективная для аутбредных мышей 8НЯ, несколько уменьшала среднюю продолжительность жизни (на 6%) и продолжительность жизни последних 10% выживших животных (на 4%). Віто же время, большая доза 8к(21 (250 нмоль/кг/сутки) не влияла на исследованные параметры продолжительности жизни мышей 129/8у.

Введение SkQl в дозах 5-2500 нмоль/кг/сутки не влияло на выживаемость и продолжительность жизни мышей HER-2/neu. В отличие от самок SHR, основной причиной гибели мышей 129/Sv и HER-2/neu является развитие новообразований (Пискунова T.G. и др., 2007; Anisimov V.N. et al., 2003): Видимо, препарат должен был бы обладать существенной антиканцерогенной активностью, чтобы значимо увеличить продолжительность жизни мышеи 129/Sv и HER-2/neu. Аналогичные случаи линейных различий в чувствительности мышей к геропротекторам описаны в литературе: Гак, антидиабетический бигуанид метформин существенно (на 38%) увеличивал продолжительность жизни мышей SHR (Anisimov V.N. et al., 2008), но его эффект на продолжительность , жизни самок мышей 129/Sv и HER-2/neu оказался менее значительным (увеличение на 4% и 8%, соответственно) (Anisimov V.N. étal., 2005; 2010). '

В наших опытах не было выявлено связи доза-эффект, при введении

SkQl. 'Гак, с увеличением или снижением; дозы; относительно наиболее оптимальной дозы 5 нмоль/кг/сутки не происходило параллельного усиления или снижения геропротекторного эффекта препарата.; Отсутствие дозозависимого влияния SkQl на продолжительность жизни показано и в опытах с грибами P. anserine (оптимально - 100 нМ) и ракообразными С. qffînis (оптимально - 0,55 нМ) (Анисимов В.Н. и др., 2008). В опытах на мышах (нокаутных р53-/-) эффективной в отношении увеличения продолжительности жизни также была доза SkQl 5 нмоль/кг/сутки (Анисимов В.Н. и др., 2008).

Анализ причин смерти мышей SHR показал, что SkQl продлевал жизнь животных, в основном,- благодаря снижению уровня смертности: от неопухолевой патологии инфекционного характера, таких как пневмония, гепатит, нефрит, колит и др. (до 56% при дозе SkQl 5 нмоль/кг/сутки), что являлось следствием жизни мышей в нестерильных условиях. Можно предполагать, что SkQl частично предотвращал угасание функции иммунном системы с возрастом. Данное предположение согласуется со сведениями ° торможении ассоциированного с возрастом угасания иммунной системы, У мышей и крыс ОХУ8 под воздействием 8кС>1 (ОЬикЬоуа Ь.А. еЬ а!., 2009; ЗЫроипоуа 1.Ы. а1, 2010).

Суммарная частота опухолей не менялась у мышей ЗНЫ, получавших SkQl. Отмечена тенденция к незначительному повышению частоты развития опухолей молочной железы. Возможно, это являлось» следствием; продления регулярности эстральной функции под действием: 8к<31 у- стареющих самок, тогда как в контроле у большинства мышей аденокарциномы молочной железы развивались реже из-за выраженных возрастных нарушений репродуктивной системы при старении (Берштейн Л.М, 2004* 2010). Смертность от прочих новообразований (лимфом, опухолей легких, яичников, печени, кожи) не отличалась в группах мышей 8НК с 8кС>1 и без него.

Возможное влияние 8к(^1 на рост спонтанных опухолей изучалось нами также на мышах трансгенной линии? НЕЯ-2/пеи, основной причиной гибели которых являются; аденокарциномы молочной железы. Ни в одной из исследованных доз 8к(р не влиял на основные параметры канцерогенеза- У самок трансгенных животных. Это может свидетельствовать о том, ^то использованные дозы 8к<51 не ослабляли противораковую защиту организма (Анисимов В;Н. и др., 2008; 8ки1асЬеу М^У. а1., 2011).

Анализ основных причин гибели мышей 129/8у показал, что болыпая часть животных (77%-80%) погибала от опухолевой патологии, ^то соответствует литературньш данньш (Пискунова Т.С. и др., 2007). У мыШеи

• 1 ' • ' •

129/8у обнаруживали опухоли следующих локализаций: матки, яичников, легких, печени, кроветворной системы и надпочечников. При анализе изменений параметров канцерогенеза у мышей 129/8у под влиянием бьгли вьгявлены следующие закономерности: частота развития опухолей не изменялась, однако средний латентный период обнаружения опухолееи незначительно (на 6%), хотя и статистически достоверно, сокращался при дозе 8к(^1 5 нмоль/кг/сутки. При этом частота и сроки обнаружения опухолей отдельных локализаций у мышей, получавших 8кС)1, существенно не отличались от контрольных. Возможно, основная причина отсутствия влияния исследованных доз препарата на продолжительность жизни мышей 129/8у заключается в характеризующей линию высокой частоте развития новообразований, тогда как 8кС>1 оказывает большее влияние на развитие неопухолевой патологии. Так, в хронических опытах добавление в пищу мышам- другой инбредной линии' С57ВЬ/6 ненацеленного на митохондрии коэнзима С>10 в микромолярных концентрациях не влияло на смертность и продолжительность жизни животных (8о11а111.8. ек а1., 2006).

Во второй серии экспериментов нами было сопоставлено влияние наиболее эффективной по результатам- первой серии опытов и литературным данным дозы 8к(^1 (5 нмоль/кг/сутки) (8ки1асЬеу М:У. ек а1., 2011), антидиабетического препарата метформина, а также сочетания этих препаратов.

Один из механизмов действия метформина, как миметика ограниченной по калорийности диеты, состоит в ослаблении интенсивности свободнорадикальных процессов, в частности, замедляется скорость генерации, супероксида и перекиси водорода (Анисимов В.Н., 2007). Вследствие этого было выдвинуто предположение, что действие метформина может усиливать действие нацеленного на митохондрии антиоксиданта 8к(^1.

Как и в первой серии опытов, не было выявлено влияния 8кС>1 на динамику массы тела; количество потребляемого кормами жидкости у мышей 8НК. Не было обнаружено изменений в данных показателях у самок мышей 8НЫ под действием метформина и его сочетания с 8кС>1.

Введение метформина приводило к снижению температуры тела мышей БНЫ, что отразилось и на эффекте сочетанного воздействия препаратов.

При анализе влияния препаратов на репродуктивную функцию, было показано протективное действие БкСН в дозе 5 нмоль/кг/сутки (что соответствует данным, полученным в 1-й серии опытов), метформина и их сочетания. Так, замедлялось возрастное увеличение длительности циклов и доли иррегулярных циклов. Стоит отметить, что не было выявлено усиления эффекта при сочетанном действии двух препаратов.

Полученные нами, результаты* согласуются* с результатами ДРУГИХ экспериментов с введением«метформина> у самок мышей БНЯ (Ашбппоу 2008; 2011).

В тесте «открытое поле» сочетание с метформином нейтрализовало угнетающее действие 8кС>1 на горизонтальную двигательную активность. В ряде работ опубликованы данные о нейропротекторной активности метформина (Анисимов В.Н., 20086).

В отличие от первой« серии, во-второй-не было выявлено действия $кС>1 в дозе 5 нмоль/кг/сутки на параметры продолжительности жизни мышей Анализ причин смерти мышей БНЯ показал, что Бкр1 во 2-й серии опытов не оказывал влияния на смертность от неопухолевой патологии; что, возможно, связано с биологической вариабельностью аутбредных мышей 8НК, отражающейся на их чувствительности к действию геропротекторов. В работах, выполненных в отделе канцерогенеза и старения НИИ'онкологии-им. Н.Н. Петрова в разные годы, показано, что метформин увеличивал продолжительность жизни мышей БНЯ в одном эксперименте на 38% (Ашбипоу У.К е! а1., 2008); тогда как в другом - лишь на-14% (атэтк^ У.И. ега1.',2011).

Также не обнаружено существенного влияния 8к<31, метформина и их сочетания на параметры канцерогенеза у самок мышей 8ЬЖ. Аналогичные данные бьши- получены в других экспериментах с метформином (Ашзшюу У.К ег а!., 2011).

Результаты наших экспериментов свидетельствуют об отсутствии необходимости совместного применения нацеленного на митохондрии антиоксиданта SkQl и антидиабетического бигуанида метформина.

В целом, суммируя собственные и литературные данные об эффекте SkQl (табл. 24), можно прийти к заключению о том, что, судя по большинству исследованных биомаркеров старения, SkQl тормозит этот процесс. Однако корреляции между влияниями SkQl на отдельные биомаркеры установить не. удалось. Не отмечено также: корреляции? между изменениями биомаркеров» и продолжительности жизни; • ,

При изучении влияния5 SkQl на продолжительность- жизни мышей трех линий мы впервые выявили геропротекторную активность препарата SkQl (наиболее выраженную при дозе 5 нмоль/кг/сутки) у самок аутбредной линии мышей SHR и отсутствие у препарата токсичного и канцерогенного эффекта в диапазоне: доз 0,5-2500 нмоль/кг/сутки?при; длительном? применении: Следует отметить,, что модели старения на аутбредных линиях мышей; в отличие от инбредных и генетически модифицированных, вследствие их большей, генетической гетерогенности; наиболее полно соответствуют нормальному старению у человека; что? важно? для? эксраполяции полученных данных на человека (Анисимов В.Н., 2008а).

Наши результаты, согласуются: с большинством» экспериментальных работ, показывающих геропротекторную активность и отсутствие токсичности нацеленного на митохондрии антиоксиданта SkQl. Как отмечено выше, при введении,SkQl в диапазоне доз 0,5-1000 нмоль/кг/сутки показано увеличение продолжительности? жизни ряда, видов, беспозвоночных, а также: млекопитающих - генетически модифицированных мышей (Skulachev 1VI-V. etal., 2011); Геропротекторный эффект SkQl, полученный у мышей, мутантных по мтДНК (Nedergaard J. et al., 2010), и торможение развития признаков старения у крыс OXYS (Obukhova L.A. et al., 2009; StefanovaN.A. et а1., 2010) с повышенным уровнем окислительных повреждений подтверждают представления о важной роли генерируемых в митохондриях свободных радикалов в механизмах старения.

Таким образом, на основании имеющихся экспериментальных данных можно сделать предположение о перспективности дальнейших предклинических испытаний нацеленного на митохондрии пластохинона 5кС>1 для оценки его возможного применения с целью предупреждения преждевременного старения.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Юрова, Мария Николаевна, 2011 год

1. Агапова JI.C., Черняк Б.В., Домнина JI.B. и др. Производное пластохинона, адресованное в митохондрии, как средство, прерывающее программу старения. SkQl подавляет развитие опухолей из р53-дефицитных клеток // Биохимия.- 2008.- Т. 73 (12).- С. 16221640.

2. Алимова И.Н., Анисимов В.Н., Берштейн JI.M., и др. Антидиабетический препарат метформин подавляет рост клеток рака молочной железы человека in vitro // Вопр. онкол.- 2007.- Т. 53 (1).- С. 5, 6.

3. Анисимов В.Н. Средства профилактики преждевременного старения (геропротекторы) // Успехи геронтол.- 2000.- Т. 4.- С. 55-74.

4. Анисимов В.Н. Старение и канцерогенез // Успехи геронтол.- 2002.- Т. 10.- С. 99-125.

5. Анисимов В.Н. Горячие точки современной геронтологии // Природа,-2007.- Т. 2.- С. 52-60.

6. Анисимов В.Н. Можно ли получить однозначный ответ на вопрос: существует ли программа старения? // Росс. хим. ж.- 2009:- T. LUI.- С. 10-20.

7. Анисимов В.Н. Молекулярные и физиологические механизмы старения (Т. 2). СПб: Наука, 2008а.

8. Анисимов В.Н. Роль системы гормон роста-инсулиноподобный фактор роста-1 инсулин в старении и долголетии: эволюционный аспект // Росс, физиол. журн. им. И.М. Сеченова. - 20086.- Т. 92 (12).- С. 10921109.

9. Анисимов В.Н., Арутюнян A.B., Опарина Т.И. и др. Возрастныеизменения активности свободнорадикальных процессов в тканях и сыворотке крови крыс // Росс, физиол. журн. им. И.М. Сеченова.- 1999.Т. 84.- С. 502-507.

10. И Анисимов В.Н., Забежинский М.А., Попович И.Г. Модели и методы изучения геропротекторной активности фармакологических препаратов // Успехи геронтол.- 2009.- Т. 22 (2).- С. 237-2521

11. Анисимов В.Н., Соловьев М.В. Эволюция концепций в геронтологии. СПб: Эскулап, 1999.

12. Антоненко Ю:Н., Аветисян1 A.B., Бакеева JI.E. и др. Производное' пластохинона, адресованное в митохондрии, как средство, прерывающее программу старения И Биохимия-.- 2008.- Т. 73 (12).- С. 1589-1606.

13. Аркадьева A.B., Мамонов A.A., Попович И.Г. и др. Метформин замедляет процессы старения на клеточном уровне у мышей линии SHR //Цитология.- Т. 53 (2).- С. 166-174.

14. Берпггейн Л.М: Бигуаниды: экспансия в онкологическую пра!сгику (прошлое и настоящее). СПб: "Эскулап", 2010.

15. Берштейн Л.М. Эндокринология: традиции, современности» и перспективы. СПб: Наука, 2004.

16. Болдырев A.A. Карнозин. Биологическое значение и возможности применения в медицине. Москва: МГУ, 1998.

17. Буреш Я., Бурешова О., Хьюстон Д.П. Методики и основные эксперименты по изучению мозга и поведения. Москва: "Высшая школа", 1991.

18. Войтенко В.П., Токарь A.B., Полюхов А.М'. Методика определения биологического возраста человека. Геронтология и гериатрия. 1984. Ежегодник. Биологический возраст. Наследственность и старение. Киев, 1984.- С.133-137.

19. Газиев А.И., Подлуцкий А.Я., Бредбери Р. Увеличение с возрастом частоты спонтанных и индуцированных у-радиацией hprt-мутаций в лимфоцитах селезенки мышей // Докл. РАН.- 1994.- Т. 339.- С. 276-278.

20. Газиев А.И., Ушакова, Т.Е., Подлуцкий А.Я. и др. Диетические антиоксиданты увеличивают продолжительность жизни мышей, снижают частоту мутаций и увеличивают экспрессию защитных генов // Успехи геронтол.- 1997.- Т. 1.- С. 80-84.

21. Городецкая Е.А., Каленикова Е.И. Образование гидроксильных радикалов в миокарде крысы после экспериментальной ишемии различной длительности« // Бюл. эксперимен. биологии и медицины.-2001.- Т. 131 (6).- С. 629-632.

22. Гублер Е.В. Вычислительные методы анализа и распознавания патологических процессов. JL: Медицина; 1978.

23. Дильман В.М. Четыре модели медицины. М.: Медицина, 1987.

24. Кабак Я.М. Практикум по эндокринологии: основные методики экспериментально-эндокринологических исследований. М.: МГУ, 1968.

25. Коваленко С.А. Возрастное снижение биоэнергетики тканей и интенсивная перестройка митохондриальной ДНК // Успехи геронтол.1999.-Т. 3.- С. 81-87.

26. Копенкин Е.П., Сотникова Л.Ф., Комаров С.В. и др. Изучение применимости препарата skql в лечении аутоиммунного увеита // Московский международный ветеринарный конгресс. Москва. 2007.

27. Копнин Б.П. Нестабильность генома и онкогенез // Молек. биология.-2007.-Т. 41.- С. 369-380.

28. Коркушко О.В., Хавинсон В.Х., Бутенко Г.М. и др. Пептидные препараты тимуса и эпифиза в профилактике ускоренного старения. СПб: Наука, 2002.

29. Коровина Н.А., Рууге Э.К. Антиоксидантный препарат КУДЕСАН (коэнзим 10 с витамином Е). Применение в кардиологии Часть I.-M-: ИД «Медпрактика-М», 2006.- С.4-8'.

30. Лю Б.Н. Старение, возрастные патологии и канцерогенез (кислородно-перекисная концепция). Алмааты: КазНТУ, 2003'.

31. Медведев О.С., Преображенский Д.В., Павлова А.В. Применение коэнзима Q10 для замедления процесса старения. Consilium medicum. Справочник поликлинического врача. Кардиология, 2005. Т. 4.- С. 4.

32. Михеев1 В.В., Шабанов П. Д. Межполушарная асимметрия индивидуального поведения мышей // Асимметрия.- 2009.- Т. 3 (2)-- С. 32-40.

33. Напалков Н.П. Рак и демографический переход // Вопр. онкол.- 2004.Т. 50 (2).- С. 127-144.

34. Непряхина СКК., Кузнецова А.Ю., Лямзаев К.Г. И др. Активные формы кислорода, генерируемые в митохондриях, индуцируют фрагментацию митохондриальнош ретикулума в клетках HeLa // Доклады Академии наук.- 2008.- Т. 420 (4).- С. 559-561.

35. Пескин A.B. Взаимодействие активного кислорода с ДНК // Биохимия.-1997.-Т. 62.- С. 1571-1578.

36. Пискунова Т.С., Юрова М.Н:,; Семенченко A.B. И др. Особенности спонтанного канцерогенеза и продолжительности жизни у мышей-самок PARP-/- // Вопр. онкол.- 2007.- Т. 53 (1):- С. 66-70.

37. Попович И .Г. Модификация канцерогенеза препаратами, обладающими свойствами; геропротекторов // Автореф. дисс. док. биол. н-к. СПб., 2005.46с.

38. Северин С.Е., Скулачев В.П., Ягужинский JI.C. Возможная роль карнитина в транспорте жирных кислот через митохондриальную мембрану//Биохимия.- 1970,-Т. 35.-С. 1250-1252.

39. Скулачев В.П. Старение организма особая биологическая функция, а не результат поломки сложной системы: биохимическое обоснование концепции Вейсмана // Биохимия.- 1997.- Т. 62.- С. 1369-1399.

40. Скулачев В.П: Феноптоз: запрограммированная смерть организма // Биохимия.- 1999.- С. 1418-1426.

41. Соловьева H.A., Морозкова Т.С., Салганик Р.И. Получение сублинии крыс с признаками наследственной^ галактоземии и исследование их биохимических особенностей//Генетика.- 1975.- Т. 5.- С. 63-71.

42. Хавинсон В.Х. Свободнорадикальное окисление и старение. СПб: Наука, 2003.

43. Хайлова JI.C., Дедехова В.И., Мохова Е.Н. Концентрирующиеся в митохондриях катионы SkQl и MitoQ замедляют открытие индуцированной аскорбатом и FeS04 неспецифической поры во внутренней мембране митохондрий // Биохимия.- 2008.- Т. 73 (10).-С. 1121-1124.

44. Чистяков В.А., Сазыкина М.А., Александрова А.А. и др. Антимутагенная активность производного пластохинона, адресованного в митохондрии // Биохимия.- 2010.- Т. 75 (3).- С. 331-336.

45. Эмануэль Н.М. Некоторые молекулярные механизмы и перспективы профилактики старения // Изв. АН СССР Сер. Биол.- 1975.- Т. 4.- С. 785794.

46. Adlam V.J., Harrison J. С., Porteous С., Mi et al. Targeting ah antioxidant to mitochondria decreases cardiac ishemia-reperfiision injury // FASEB J.-2005.-Vol. 19.-P. 1088-1095.

47. Amstislavskaya T.G., Maslova L.N., Gladkikh D.V. et al. Effects of mitochondria-targeted antioxidant SkQl on sexually motivated behavior in male rats // Pharm. Biochem. Behav. 2010.- Vol. 96 (2).- P. 211-216.

48. Andrews G.R., Sidorenko A., Andrianova L. F. et al. The United Nations agenda on ageing for the 21st century // Успехи геронтол.- 2001.-Vol. 7,- P. 7-25.

49. Anisimov V.N. Age as risk factor in multistage carcinogenesis // Comprehensive Geriatric Oncology / Eds. L. Balducci, G.H. Lyman, W.B. Ershler. Amsterdam: Harwood Acad. Publ. 1998. P. 157 178.

50. Anisimov V.N. Aging and cancer in transgenic and mutant mice // Front Biosci. 2003.- Vol. 8.-P. S883-S902.

51. Anisimov V.N. Carcinogenesis and Aging. Vol. 1, 2. Boca Raton: CRC Press, 1987. 165, 148p.

52. Anisimov V.N., Alimova I.N., Baturin D.A. The effect of melatonin treatment regimen on mammary adenocarcinoma development in HER-2/neu transgenic mice II Int. J. Cancer.- 2003.- Vol. 103.- P. 300-305.

53. Anisimov VN., Alimova I.N;, Baturin D.A. Dose-dependent effect of meliatonin on life spani andf spontaneous tumor incidence m female . SHR inice // Exp. Gerontol.- 2003a.- Vol. 38:- P. 449-461.

54. Anisimov V.N., Berstein L.M., Popovich I.G. et al. If started early in life; metformin treatment increases life span and postpones tumors in femal e SHR mice //Aging (Albany NY). 2011. - Vol. 3 (2). - P. 148-157.

55. Anisimov V.N.,. Popovich I.G., Zabezhinski M.A. Methods of evaluating the effect of pharmacological drugs on aging and life span in mice1. Methods

56. Mol. Biol.- 2007,-Vol. 371.- P. 227-236.

57. Anisimov V.N., Ukraintseva S.V., Yashin A.I. Cancer in rodents: does it tell us about cancer in humans? // Nat. Rev. Cancer.- 2005.- Vol. 5 (10).- P. 807819.

58. Anisimov V.N., Zavarzina N.Y., Zabezhinski M.A. et al. Melatonin increases both life span and tumor incidence in female CBA mice // J. Gerontol: A Biol. Sci. Med. Sci.- 2001.- Vol. 56 (7).- P. 311-323 ;

59. Arking R. Biology ofaging: Observations and Principles. Englewood Gliffs, N.J.: Prentce Hall, Inc. 2001.

60. Armitage P., Doll R. The age distribution of cancer multistage theory of carcinogenesis //Brit. J. Cancer.- 1954.- Vol. 8.- P. 11-12.

61. Baker G.T., Sprott R.L. Biomarkers of aging // Exp. Geront.- 1988.- Vol. 23 P. 223-239.

62. Bartke A. Insulin-like growth factor 1 and mammalian aging// Sci. Aging Knowledge Environ.-20021-Vol. 2002 (16).-P. 4.

63. Bartke A., Chandrashekar V., Dominici F. et al. Insulin-like growth factor 1 (IGF-1) and aging: controversies and new insights // Biogerontology.- 2003.-Vol. 4 (1).- P. 1-8.

64. Bohr V.A., Anson R.M. DNA damage, mutation and fine structure DNA repair in aging // Mutat. Res.- 1995.- Vol. 338.- P. 25-34:

65. Bojkova B., Orendas P., Garajova M. et al. Metformin in; chemically-induced mammary carcinogenesis in rats // Neoplasma.- 2009;- Vol. 56 (3).- P. 269

66. Brunmair B., Staniek K., Gras F. et al. Thiazolidinediones, like metformin, inhibit respiratory complex I: a common mechanism contributing to their antidiabetic actions? // Diabetes.- 2004.- Vol. 53(4).- P. 1052-1059.

67. Burnet F.M. The concept of immunological surveillance // Progr. Exp. Tumor Res.- 1970.-Vol. 13.-P. 1-27.

68. Burns R.J., Smith R., Murphy M.P.f Synthesis and4 characterization of tWobutyltriphenylphosphoniurm bromide, a novel thiol reagent targeted to the mitochondrial matrix //Arch. Biochem. Biophys.- 1995.- Vol. 3221- P. 60-68.

69. Camara A.K., Lesnefsky E J., Stowe D.F. Potential therapeutic benefits of strategies directed to mitochondria //Antiox. Red. Signal.- 2010.- Vol.13 (3).-P.-279-347.

70. Cerda S., Weitzman S.A. Influence of oxygen radical injury on DNA methylation // Mutat. Res.- 1997.- Vol. 386.- P. 141-152.

71. Chandran K., Aggarwal D:, Migiro R.O. et all Doxorubicin inactivates myocardial cytochrome c oxidase in. rats: cardioprotection by Mito-Q H Biophys J.- 2009.- Vol. 96 (4).- P. 1388-1398.

72. Conkin K.A. Cancer chemotherapy and antioxidants // J: Nutr.- 2004.-Vol. 134.-P.3201S-3204S.

73. Cooper J.M., Mann V.M., Schapira A.H. Analysis of mitochondrial respiratory chain function and mitochondrial DNA deletion in human skeletal" muscle. Effect of ageing // J. Neurol. Sei.- 1992.- Vol. 113.- P. 91-98.

74. Corbellini A., Lugaro G., Giannattasio G. et al. Research of the anttamoralactivity of biguanides// Arch. Ital. Patol. Clin. Tumori.- 1964.- Vol. 152.-P. 201-218.

75. Cox D.R., Oakes D. Analysis of Survival Data. London: Chapman and Hall. 1996.

76. Crane F.L., Hatefy Y., Lester R.L. et al. Isolation of a quinone from beef heart mitochondria // Biochem. Biophys. Acta.- 1957.- Vol. 2.- P. 220-221.

77. Cutler R. Human longevity and aging: possible role of reactive oxygen species //Ann. N.Y.Acad. Sci.- 1991.- Vol. 621.- P. 1-28.

78. Cutler R. Oxidative stress: its potential relevance to human disease and longevity determinants //Age.- 1995.- Vol. 18.- P. 91-96.

79. De Lorenzo M.S., Baljinnyam E., Vatner D.E. et al. Caloric restriction reduces growth of mammary tumors and' metastases // Carcinogenesis.-2011.-PMID: 21665891 .

80. De Magalhaes, J. P., Church G.M. Cells discover fire: employing reactive oxygen species in development and consequences for aging // Exp. Gerontol.-2006.-Vol. 41.-P. 1-10.

81. Demianenko I.A., Vasilieva T.V., Domnina L.V. et al. SkQl accelerates dermal wound healing in animals / From Homo Sapiens to Homo Sapiens Liberatus. Moscow.- 2010.- P. 9-10.

82. DePinho R. A. The age of cancer // Nature.- 2000.- Vol. 408.- P. 248-254.

83. Dilman V.M. Development, aging and disease. A new rationale for an intervention'strategy. Chur: Harwood Academic Publ, 1994.

84. Dix Di On the role of gene relative to tHe environment in carcinogenesis // Mech. Ageing Dev.- 2003.- Vol. 1.- P. 323 332.

85. Dix D., Cohen P. On the role of aging in carcinogenesis // Anticancer Res.-1999.- Vol. 19.- P. 723 726.

86. Doughan A.K., Dikalov S.I. Mitochondrial redox cycling of mitoquinone leads to superoxide production and cellular apoptosis // Antioxid. Redox. Signal.- 2007.- Vol. 9 (11).- P. 1825-1836.

87. Emanuel N.M. Kinetics and free-radical mechanisms of aging and carcinogenesis // Age-related factors in Carcinogenesis / Eds. A. J. Lichachev, V. N. Anisimov, & R. Montesano. Lyon: IACR4 Sci Publ.- 2005.- Vol. 58.-P. 127-149!

88. Eurich D.T., Majumdar S.R., McAlister F.A. et al. Improvedi clinical outcomes, associated with metformin» in patients with diabetes and heart failure // Diabetes Care.- 2005.- Vol. 28.- P. 2345-2351.

89. Fletcher R. Practical methods of optimization (Vol. 2). New York: John Wiley & Sonh, 1987.»101» Frei B. Reactive oxygen species and* antioxidant vitamins mechanisms ofaction // Am. J. Med.- 1994.- Vol. 96 (3A).- P. 5-13.

90. Gart J.J., Krewski D., Eee P.N. et al. Statistical methods in cancer research, 1986.

91. Giles G.I. The redox regulation of thiol dependent signaling pathways in cancer// Curr. Pharm. Des.- 2006.- Vol. 12 (34).- P. 4427-4443.

92. Gogvadze V., Orrenius S., Zhivotovsky B: Mitochondria as target for cancer chemotherapy //Apoptosis.- 2009.- Vol. 19.- P. 57-66.

93. Gould T.D. Mood-and anxiety related phenotypes in mice, neuromethods // Humana Press, Vol. 42, DOI 10.1007/978-l-60761-303-9l 2009.

94. Green D: The electromechanochemical model for energy coupling in mitochondria // Biochem. Biophys. Acta.- 1994.- Vol. 346 (1).- P. 27-78.

95. Hagopian K., Chen Y., Simmons D. et al. Caloric restriction influences hydrogen peroxide generation in mitochondrial sub-populations from mouse liver// J. Bioenerg. Biomembr.- 2011.- Vol. 43 (3).- P. 227-236.

96. Harman D. Aging: a theory based on free radical and radiation chemistry // J. Gerontol.- 1956.-Vol. 11 (3).-P. 298-300.

97. Harman D. Extending functional life span // Exp. Gerontol.- 1998.- Vol. 33.-P. 95-112.

98. Harman D. Free radical theory of aging: increasing the functional life span // Ann. N. Y. Acad. Sci.- 1994.- Vol. 717.- P. 257-266.

99. Hayflick L. How.and why we age // Exp. Geronol.- 1998.- Vol. 33.- P. 639653.

100. Holinka C., Finch C. Age-related changes in the decidual response of the C57BL/6J mouse uterus // Biol. Reprod.- 1977.- Vol. 16 (3).- P. 385-393.

101. Hosono K., Endo H., Takahashi H. et al. Metformin suppresses colorectal aberrant crypt foci in1 a short-term clinical trial // Cancer Prev. Res.- 2010.-Vol. 3 (9).- P. 1077-1082.

102. Huang H.H., Marshall S., Meites J; Introduction of estrous cycles in old' noncyclic rats by progesterone, ACTH, ether stress, or L-DOPA // Neuroendocrinology.- 1976.- Vol. 20.- P. 21-34.

103. Huang H.H., Meites J. Reproductive capacity of aging female rats // Neuroendocrinology.- 1975.- Vol. 17.- P. 289-295.

104. Hussain S.P., Hofseth L.J., Harris C.C. Radical causes of cancer // Nat. Rev. Cancer.- 2003.-P. 276-285.

105. Iliopoulos D., Hirsch H.A., Struhl K. Metformin decreases the dose of chemotherapy for prolonging tumor remission in mouse xenografts involving multiple cancer cell types // Cancer Res.- 2011.- Vol. 71 (9):- P. 3196-3201.

106. Ingram D.K., Nakamura E., Smucny D. et al. Strategy for identifying biomarkers of aging in long-lived species // Exp. Geront.- 2001.- Vol. 36.- P. 1025-1034.

107. Ingram D.K., Reynolds M.A. The relationship of body weight to longevity within laboratory rodent species // Basic Life Sci.- 1987.- Vol. 42.- P. 247282.

108. James A.M., Sharpley M.S., Manas A.B. et al. Interaction of the mitochondria-targeted antioxidant MitoQ with phospholipid bilayers and ubiquinone oxidoreductases // J. Biol. Chem.- 2007.- Vol. 282 (20).- P. 14708-14718.

109. Jauslin M.L., Meier T., Smith R.A. et al. Mitochondria-targeted antioxidantstprotect Friedreich Ataxia fibroblasts from endogenous oxidative stress more effectively than untargeted antioxidants // FASEB J.- 2003.- Vol. 17 (13).-P. 1972-1974.

110. Jiralerspong S., Palla S.L., Giordano S.H. et al: Metformin and pathology complete responses to neoadjuvant chemotherapy in diabetic patients with breast cancer // J. Clin. Oncol.- 2009:- Vol: 27 (20).- P. 3297-3302.

111. Kelso G.F., Porteous C.M., Coutler C.V. et al. Selective targeting of a redox-active ubiquinone to mitochondria within cells: antioxidant and antiapoptotic properties //J. Biol. Chem.- 2001.- Vol. 276.- P. 4588-4596.

112. Khailova L.S., Dedukhova V.I., Mokhova E.N. Cations SkQl and MitoQ accumulated in mitochondria delay opening of ascorbate / FeS04-induced nonspecific pore in the inner mitochondrial membrane // Biochem.- 2008.-Vol. 73 (10).-P. 1121-1124.

113. Khrapko K., Nekhaeva E., Kraytsberg Y. et al. Clonal expansion of mitochondrial genomes: implications for, in vivo mutation spectra // Mutat. Res.- 2003.- Vol. 522.- P. 13.

114. Kirkwood T.B: Understanding the odd science of aging // Cell.- 2005.-Vol. 120.- P. 437-447.

115. Koopman W.J., Verkaart S., Visch H.J. et al. Inhibition of complex I of theelectron transport chain causes 02 mediated mitochondrial outgrowth // Am. J. Physiol. Cell. Physiol.- 2005.- Vol. 288.- P. 1440-1450.

116. Kraytsberg Y., Nechaeva E., Bodyak N. et al. Mutation and intracellular clonal expansion of mitochondrial genomes: two synergestic components of the aging process? // Mech. Ageing Dev.- 2003.- Vol. 124.- P. 49-53.

117. Kruk J., Jemiola-Rzeminska M., Strzalka K. Plastoquinol and a-tocopherol quinol are more active than ubiquinol! and a-tocopherol in inhibition of lipid peroxidation // Chem. and Phys. Lipids.- 1997.- Vol: 87.- P. 73-80.

118. Lee C.M., Weindruch R., Aiken J.M. Age-associated alterations of the mitochondrial genome // Free Radical Biol. Med.- 1997.- Vol. 22.- P. 12591269.

119. Lee I.M., Blair S.N., Allison D.B. et al. Epidemiologic data on the relationships of caloric intake; energy balance, and weight" gain over the life span with longevity and morbidity // J. Gerontol. A: Biol; Sci. Med. Sci.-2001.-Vol. 56 (1).-P. 7-19.

120. Liberman E.A., Topali V.P., Tsofina L.M. et al. Mechanism of coupling of oxidative phosphorylation and the membrane potential of mitochondria // Nature.- 1969.- Vol. 222.- P. 1076-1078.

121. Linnane A.W., Kios M., Vitetta L. Coenzyme Q(10)- its role as a prooxidant in the formation of superoxide anion/hydrogen peroxide and the regulation of the metabolome // Mitochondion.- 2007.- Vol. 7.- P. 51-61.

122. Litarru G.P., Tiano L. Bioenergetic and antioxidant properties of coenzyme Q10 recent developments // Mol. Biotechnol.- 2007.- Vol. 37.- P. 31-37.

123. Lugaro G., Giannattasio G. Effect of biguanides on the respiration of tumor cells // Experientia.- 1968.- Vol. 24 (8).- P. 794-795.

124. Ma T.C., Buescher J.L., Oatis B. et al. Metformin therapy in transgenic mouse model of Huntington disease //Neurosci. Lett.- 2007.- Vol. 411.- P. 98

125. Masoro EJ. Caloric restriction and aging: an update // Exp. Gerontol.- 2000.-Vol. 35 (3).- P. 299-305.

126. Mattison J.A., Lane M.A., Roth G.S. et al. Calorie restriction in rhesus monkeys //Exp. Gerontol.- 2003.- Vol. 38 (1-2).- P. 35-46.

127. Mattson M.P., Duan W., Lee J. et al. Progress in the development of caloric restriction mimetic dietary supplements // J. Anti-Aging Med.- 2001.- Vol. 4.-P. 225-232.

128. Maynard S., Schurman S. H., Harboe C. et al. Base excision repair of oxidative DNA damage and association with cancer and aging // Carcinogenesis.- 2009.- Vol. 30 (1).- P. 2-10.

129. McCall M.R., Frei B. Can antioxidant vitamins materially reduce oxidative damage in humans? // Free Radical BioLMed.- 1999.- Vol. 26.- P. 1034-1053.

130. McClearn G.E. Biomarkers of age and aging // Exp. Geront.- 1997.- Vol. 32.-P. 87-94.

131. Medvedev Z.A. Age changes of chromatin // Mech. Ageing. Dev.- 1984.- Vol. 28.-P. 139-154.

132. Melchiori D., Reiter R.J., Sewerynek E. et al. Paraquat toxicity and oxidative damage. Reduction by melatonin // Biochem. Pharmacol.- 1996.- Vol. 51 (8).-P. 1095-1099.

133. Menendez J.A., Cufi S., Oliveras-Ferraros C. et al. Gerosuppressant metformin: less is more //Aging.- 2009.- Vol. 1 (3).- P. 1-15.

134. Miller R. Aging and cancer another perspective // J. Gerontol.- 1993.- Vol. 48.-P.B8-B9.

135. Mitchel R.E., McCann R.A. Skin tumor promotion by vitamin E in mice: amplification by ionizing radiation and vitamin C // Cancer Detect. Prevent.2003.-Vol. 27.-P. 102-108.

136. Muravchick S., Levy R.J. Clinical implication of mitochondrial dysfunction I I Anesthesiology.- 2006.- Vol. 5.- P. 819-837.

137. Murphy M.P. Development of lipophylic cations as therapies for disorders due to mitochondrial dysfunction // Expert Opin. Biol. Hier.- 2001.- Vol. 1 (5).- P. 753-764.

138. Nedergaard J., Shabalina L, Vyssokikh M; et al; Mitochondrial effects of" prolonged treatment of mtDNA mutator mice with SkQl / From? Homo. Sapiens to Homo Sapiens Liberatus. Moscow.- 2010.- P.7-8:

139. Neuzil J., Tomasetti M., Zhao Y. et al. Vitamin E analogs, a novel group of "mitocans", as anticancer agents: the importance of being redox-silent // Mol. Pharmacol.-2007.-Vol. 71.-P. 1185-1199.

140. Nicolson G.L. Metabolic , syndrome and mitochondrial» function: molecular replacement and antioxidant supplements to prevent membrane peroxidation and restore mitochondrial function // J. Cell Biochem.- 2007.- Vol: 100.-P. 1352-1369.

141. O'Malley Y., Fink B.D., Ross N. et all Reactive- oxygen and targeted antioxidant administration in endothelial cell mitochondria // J. Biol. Chem.-2006.- Vol. 281 (52).- P. 39766-39775.

142. Owen M.R., Doran E., Halestrap A.P. Evidence that metformin exerts its antidiabetic affects through inhibition of complex I of the mitochondrial respiratory chain // Biochem. J.- 2000.- Vol. 348.- P. 607-614.

143. Ozawa T. Oxidative damage and fragmentation of mitochondrial DNA in cellular apoptosis: a review // Biosci. Rep.- 1997.- Vol. 17.- R 237-250.

144. Papa S., Skulachev V.P. Reactive oxygen species, mitochondria, apoptosis and aging // Molec. Cell. Biochem.- 1997.- Vol. 174.- P. 305-319.

145. Parkin D. M., Bray F. I., Devesa S. S. Cancer burden in the year 2000. The global picture // Europ. J. Cancer.- 2001.- Vol. 37.- P. S4 -S66.

146. Pehar M., Vargas M.R., Robinson K.M. et all Mitochondrial superoxide production and nuclear factor erythroid 2-related factor 3 activation in p75= neurotrophin receptor-induced motor neuron apoptosis // J. Neurosci.- 2007.-Vol. 27 (29).- P. 7777-7785.

147. Peto R., Doll R. There is no such thing as aging // Brit. J. Med.- 1997.- Vol. 315.-P. 1030-1032.

148. Peto R., Parish S.E., Gray R.G. There is no such thing as ageing and cancer is not related to it // Age-related factors in carcinotgenesis / Eds. R. Peto, S.E. Parish, R.G. Gray, A. Lichachev. Lyon: IARC: LACR Sci. Publ. No.58. 1985

149. Pierpaoli W., Maestroni G.J. Melatonin: a principal neuroimmunoregulatory and antistress-hormone: its antiaging effect // Immunol. Lett.- 1987.- Vol. 16.-P. 355-362.

150. Pletjushkina O.Y., Fetisova E.K., Luamzaev K.G. et al. Long-distance apoptotic killing of cells is mediated by hydrogen peroxide in a mitochondrial ROS dependent fashion // Cell Death Differ.- 2005.- Vol. 12 (11).- P. 14421444.

151. Premkumar V.G., Yuvaraj S., Vijayasarathy K. et al. Effect of coenzyme Q10,riboflavin and niacin on serum CEA and CA 15-3 levels in breast cancer patients undergoing tamoxifen therapy // Biol. Pharm. Bull.- 2007.- Vol. 30 (2).-P. 367-370.

152. Raju T.N. The Nobel chronicles. 1931: Otto Heinrich Warburg (1883-1970). Lancet. Vol. 352. 1998.- P. 2028.

153. Rao V.A., Klein S.R., Bonar S.J. et al. The antioxidant transcription factor Nrf2 negatively regulates autophagy and growth arrest induced by the anticancer redox agent mitoquinone // J. Biol Chem.- 2010.- Vol. 285 (45).- P. 34447-34459.

154. Reddy P.H. Mitochondrial oxidative damage in aging and Alzheimer's, disease: implications for mitochondrially targeted' antioxidant therapeutics // J. Biomed. and Biotech.- 2006.- P. 1-13.

155. Reiter RJ. Interactions of the pineal hormone melatonin with oxygen-centered free.radicals: a brief review // Braz. J. Med. Bioll Res.- 1993.- Vol. 26 (11).-P. 1141-1155.

156. Ricklefs R.E., Scheuerlein A., Cohen A. Age-related patterns of fertility in captive populations of birds and mammals // Exp. Gerontol.- 2003.- Vol. 38.-P. 741-745.

157. Roginsky V., Barsukova T., Loshadkin D. et al. Substituted p-hydroquinones as inhibitors of lipid peroxidation // Chem. Phys. Lipids.- 2003.- Vol. 125.- P. 49-58.

158. Ross M.F., Da Ros T., Blaikie F.H. et al. Accumulation of lipophilic dications by mitochondria and cells // Biochem. J.- 2006.- Vol: 15 (1).- P. 199-208.

159. Roth G.S., Ingram D.K., Cutler R.G. et al. Biological effect of caloric restriction in primates //Adv. Gerontol.- 1999.- Vol. 3.- P. 116-120.

160. Saretzki G., Murphy M.P., von Zglinicki T. MitoQ counteracts telomere shortening and elongates lifespan of fibroblasts under mild oxidative stress //

161. Aging Cell.- 2003.- Vol. 2.- P. 141-143.

162. Scarpelli J.H. Improving survival with metformin: the evidence base today // Diabetes Metab.- 2003.- Vol. 29.- P. 6S36-6S43.

163. Shagieva G.S., Popova E.N., Domnina L.V. et al. The effect of mitochondria-targeted antioxidants on human cervical cancer cells in culture / From Homo Sapiens to Homo Sapiens Liberatus. Moscow, 2010.

164. Shaw R.JL, Bardeesy N., Manning B.D. et al. The LKB1 tumor suppressor, negatively regulates mTOR signaling // Cancer Cell.- 2004.- Vol. 6 (1).- P. 91-99.

165. Shigenaga M.K., Hogen T.M., Ames B.N. Oxidative damage and mitochondrial decay in aging // Proc. Natl. Acad. Sci.- 1994.- Vol. 91.-P. 10771-10778.

166. Sinatra D.S., Sinatra S.T., Heyser C.J. The effects of Coenzyme Q{10} on locomotor and behavioral activity in young and aged C57BL/6 mice // BioFactors.- 2003.- P. 283-287.

167. Skulachev M.V., Antonenko Y.N., Anisimov V.N. et al. Mitochondrial-targeted plastoquinone derivatives. Effect on» senescence and acute age-related* pathologies // Ourr. Drug. Targets.- 2011.- Vol: 12 (6).- P. 800-826.

168. Skulachev V.P. How to clean the dirtiest place in the cell: cationic antioxidants as intramitochondrial ROS scavengers // IUBMBLife.- 2005.-Vol. 57.-P. 305-310.

169. Skulachev V.P. Membrane Bioenergetics. Berlin-Heidelberg: Springer-Verlag,1988.

170. Skulachev V.P. Mitochondria-targeted antioxidants as a tool to prevent aging-related diseases and prolong lifespan // Adv. Geront.- 2007.- Vol. 20 (3).-P. 71.

171. Skulachev V.P. Mitochondria, reactive oxygen species and longevity: some lessons from the Barja group // Aging Cell.- 2004.- Vol. 3 (1).- P. 17-19.

172. Smith R.A., Porteous C.M., Goulter C.V. et al. Selective targeting of an antioxidant to mitochondria,// Eur. J. Biochem.- 1999.- Vol: 263 (3).-P. 709716.

173. Smith-R:A^, Porteous C.Mi,.Gane A.Mi.et ak Delivery of bioactive molecules to mitochondria in vivo//PNAS.- 2003.-Vol. 100 (9).- P. 5407-5412.

174. Sohal R.S., Kamzalôv S., Sumien N. et al. Effect of coenzyme Q10 intake on endogenous coenzyme Q content, mitochondrial electron, transport chain, anioxidâtive defenses; andilifë span of mice // Free Radie. Biol. Med.- 2006.-Vol. 40 (3);- R 480-487.

175. Spindler S.R. Caloric restriction: from soup to nuts // Ageing Res. Rev.-2010.-Vol. 9:-P. 324-353.

176. Stefanova N.A., Fursova A.Z., Kolosova N.G. Behavioral effects induced by mitochondria-targeted antioxidant SkQl in Wistar and senescence-accelerated OXYS rats // J. AlzheimersDis.- 2010.- Vol. 21 (2).- P. 479-491.

177. Stranahan A.M., Cutler R.G., Button C. et al. Diet-induced elevations in serum; cholesterol are associated with alterations in hippocampal lipid metabolism and increased oxidative stress // J. Neurochem.- 2011.1. Vol. 118 (4).-P. 611-615.

178. Suntrez Z.E. Role of antioxidants in paraquat toxicity // Toxicology.- 2002.-Vol. 180(1).-P. 65-77.

179. Szewczyk A., Wojtczak L. Mitochondria as a pharmacological target // Pharmacol. Rev.- 2002.- Vol. 54.- P. 101-127.

180. Tauskela J.S. MitoQ a mitochondria-targeted antioxidant // IDrugs.- 2007.-Vol. 10 (6).- P. 399-412.

181. Thung P.J., Boot L.M., Muhlbock O. Senile change in the estrous cycle and,in ovarian structure in some inbred strains of mice //Acta. Endocrinol.- 1956.-Vol. 23.- P. 8-32.

182. Titova E.V., Ivanova O.Y., Popova E.N. et al. The effect of mitochondria-targeted' antioxidants on normal 4 and transformed cells in culture / From Homo, Sapiens to Homo'Sapiens Liberatus. Moscow.- 2010.

183. Turusov V., Mohr U. Tumours of the Mouse, 2nd Edition, Pathology, of Tumours in Laboratory Animals. Vol. 2. Lyon: IARC: IACR Sci. Publ, 1994.

184. Vijg J. DNA sequence changes in aging: How frequent, how important? //Aging Clin. Exp. Res.- 1990.- Vol. 2.- P. 105-123.

185. Waif A. A., Fiye C.A. The use of elevated plus maze as an assay of anxiety-related behavior in rodents // Nature Protocols.- 2007.- Vol. 2.- P. 322-328.

186. Walford R.L. Immunologic theory of aging // Fed.Proc.- 1974.- Vol. 33.- P. 2020-2027.

187. Wallace D.S. A mitochondrial paradigm of metabolic and degenerative diseases, aging, and cancer: a dawn for evolutionaiy medicine // Ann. Rev. Genet.- 2005.- Vol. 39.- P. 359-407.

188. Weindruch R., Sohal R.S. Seminars in medicine of the Beth Israel Deaconess Medical Center. Caloric intake and aging // N. Engl. J. Med.- 1997.

189. Vol. 337 (14).- P. 986-994.

190. Weindruch R., Walford R. The terardation of aging and disease by dietary restriction. Springfeld, III.: C.C. Thomas. 1988.

191. Wu W.S. The signaling mechanism of ROS in tumor progression // Cancer Metastasis Rev.- 2006.- Vol. 25 (4).- P. 695-705.

192. Zakikhani M., Dowling R., Fantus I.G. et al. Metformin is an AMP kinase-dependent growth inhibitor for breast cancer cells // Cancer res.- 2006.- Vol. 66 (21).-P. 10269-10273.

193. Zmijewski J.W., Lome E., Zhao X. et al. Mitochondrial respiratory complex I regulates neutrophil activation and severity of lung injury // Am. J. Respir. Crit. Care Med.- 2008.- Vol. 178.- P. 168-179.