Ультраструктурные и гистохимические особенности половой системы бескишечных турбеллярий (Acoela) и их филогенетическое значение тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.08, кандидат биологических наук Петров, Анатолий Александрович

• Петров, Анатолий Александрович
• кандидат биологических наук
• 2007

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Петров, Анатолий Александрович

Список сокращений к рисункам

ГЛАВА 1 СРАВНИТЕЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ПОЛОВОЙ СИСТЕМЫ

БЕСКИШЕЧНЫХ ТУРБЕЛЛЯРИЙ

1.1. Общи й обзор половой систем ы.

1.2. Ультраструктура спермиев.

1.3. Семенные сумки и их придатки.

1.4. Функциональная роль наконечников.

15 Замечания по терминологии.

ГЛАВА 2 МАТЕРИАЛ И МЕТОДИКА

ГЛАВА 3 УЛЬТРАСТРУКТУРА СПЕРМИЕВ

3 1 Результаты.

3 1 1 Pseudaphanostoma smithrn

3 12 Praeconvolutatigrina, lsodiametra pulchra, Aphanostoma bruscai

3 1 3 Otocelis sandara

3 1 4 Philocelis brueggemanni

3 1 5 Notocelis gullmarensis

3 1 6 Paedomecynostomum bruneum

3 1.7 Daku woorimensis

3 1 8 Stomatricha hochbergi

3 1 9 Wulguru cu&pidata

3 2 Обсуждение

3 2 1 Типы спермиев Acoela и их таксономическое значение

3 2 2 Эволюция спермиев

3 2 3 Цитоскелет спермиев морфофункциональные аспекты

ГЛАВА 4 УЛЬТРАСТРУКТУРА И ГИСТОХИМИЯ БУРС И ИХ

НАКОНЕЧНИКОВ

4 1. Результаты.

4 1 1 Notocelis gullmarensis

4 1 2 Daku woonmensis

4 1 3 Aphanostoma bruscai

4 1 4 Aphanostoma virescens

4 1 5 Wulguru cuspidata

4 1 6 Pseudmccynostomum phoca

4.2. Обсуждение.

42 1 Общая характеристика бурс и их склеротизированных придатков

4 2 2 Пути формирования скелетных структур у низших билатерий

4 2 3 Типы наконечников

4 24 Функциональные особенности наконечников

4 2 5 Эволюция придатков бурс

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Ультраструктурные и гистохимические особенности половой системы бескишечных турбеллярий (Acoela) и их филогенетическое значение»

Едва ли среди свободноживущих низших беспозвоночных найдется группа, сравнимая с бескишечными турбелляриями (Acoela) по уникальности своей морфологии и тканевой организации. Внешний вид Acoela кажется типичным для турбеллярий, но взгляд на их внутреннюю анатомию обнаруживает структуру более примитивную, чем у других ресничных червей (рис. 1). Бескишечные турбеллярии лишены эпителизованной кишки, и переваривание пищи происходит у них при участии специализированных паренхимных клеток, причем у некоторых форм эти клетки могут сливаться, образуя так называемый пищеварительный синцитий (рис. IA, Б, ср; Мамкаев, Маркосова 1979, Smith 1981 a,b; Smith & Tyler 1985 и др.) Дыхательная и выделительная системы отсутствуют. Центральная нервная система представлена несколькими продольными стволами, соединенными между собой неправильными тяжами грубого нервного сплетения; мозг, по существу, возникает как локальное утолщение фронтальной комиссуры; остальная часть нервной системы образована диффузным нервным плексусом (Raikova et al. 1998b; Reuter et al. 2001). Эпидермис не отграничен от постилающей его мускулатуры базалыюй пластинкой, и внеклеточный матрикс присутствует лишь в виде тонкой капсулы, окружающей статоцист. Эмбриональное развитие также имеет ряд уникальных черт. Дробление носит спиральный характер, но отделение макромеров на анимальном полюсе происходит не квартетами, как при обычном спиральном дроблении, а дуэтами, т.е попарно (Bresslau 1909; Apelt 1969, Богута 1972; Гуреева, Мамкаев 1989 и др.). В отличие от других первичноротых, бескишечные турбеллярии способны генерировать только зндомезодерму -эктомезодерма и ее производные у них отсутствуют (Henry et al. 2000). По существу, бескишечные турбеллярии устроены проще, чем любые другие свободноживущие билатерии, и хотя некоторые из перечисленных признаков говорят о специализации Acoela, большая часть из них, безусловно, свидетельствует о филогенетической примитивности группы.

Рис. 1. А - внешний вид Aphanostoma virescens, с живого придавленного экземпляра. Б - схема организации A. virescens. В - Notocelisgullmarensis, сагиттальный срез.

Хотя вопрос о первичной примитивности бескишечных турбеллярий обсуждается уже более ста лет (Мечников 1877, 1878,1886; Graff 1882, 1891, 19041908), убедительные доказательства в пользу этой гипотезы появились совсем недавно. Анализ последовательностей генов 18S и 28S рДНК (Ruiz-Trillo et al. 1999; Telford etal. 2003), миозина II (Ruiz-Trillo et al. 2002), гена let-7 (Pasquinelh et al. 2003) и митохондриальной ДНК (Ruiz-Trillo et al. 2004) показывает, что Acoelomorpha* не принадлежат к Plathelminthes (плоским червям), но являются сестринской группой для всех ныне живущих билатерий. Руководствуясь этими данными, Baguna & Ruitort 2004 предложили эволюционную гипотезу, согласно которой Acoelomorpha представляют собой раннее ответвление филогенетической ветви, давшей начало всему современному разнообразию трехслойных животных, и поэтому должны были сохранить многие примитивные черты, свойственные планулоидным предкам билатерально-симметричных животных. Плоские черви занимают аналогичное базальное положение в таксоне Lophotrophozoa, объединяющем Annelida, Mollusca, Tentaculata и близкие им группы (Jondelius et al. 2002).

Следует сказать, что вопрос о возможной полифилии плоских червей и необходимости разделения этого типа на две или три независимые группы (Acoelomorpha, Catenulida и Rhabditophora) обсуждался еще до появления первых молекулярно-филогенетических исследований (Smith et al. 1986). Действительно, признаки, объединяющие Acoelomorpha и Rhabditophora (гермафродитизм, внутреннее оплодотворение, нитевидные двужгутиковые спермии и др.), при всестороннем анализе оказываются либо плезиоморфиями, либо гомошшиями, и, следовательно, не могут служить надежными источниками филогенетической информации. Единственный признак, представляющий потенциальную филогенетическую ценность, связан с организацией камбиальной системы. У плоских червей (включая бескишечных турбеллярий и катенулид) соматические клетки неспособны к делению и поэтому заживление и восполнение дефинитивных тканей происходит исключительно за счет размножения и дифференцировки Класс (тип) Acoelomorpha включает бескишечных турбеллярий и родственный им отряд Nemertodermatida. специальной популяции стволовых клеток - необластов (Baguna et al. 1989; Дробышева 1991; Auladell et al. 1993; Rieger et al. 1999; Rieger& Ladurner2001 и др.) Тем не менее, вопрос о филогенетическом значении особенностей камбиальной системы нуждается в дополнительной разработке (в частности, неизвестно как происходит замещение соматических клеток в других группах низших билатерий) и поэтому далее в этой работе бескишечные турбеллярии будут рассматриваться как филогенетическая линия, возникшая независимо от рабдитофорных турбеллярий и катенулид. При этом термин «турбеллярии» («ресничные черви») будет использоваться для обозначения общего уровня организации без учета действительных филогенетических связей между группами, к которым прилагается этот термин.

Простота организации бескишечных турбеллярий служит серьезным препятствием при установлении филогенетических отношений в пределах отряда, существенно ограничивая число признаков, которые могут быть использованы при построении таксономической системы. В этой ситуации органы половой системы, достигающие у Acoela сложности, необычной на фоне примитивности других систем, становятся незаменимыми (а иногда и единственными) источниками филогенетической информации.

В то время как признаки мужских копулятивных органов широко используются в принятой на сегодняшний день системе бескишечных турбеллярий (Dorjes 1968), органы женского полового аппарата (бурсы и их наконечники) изучены мало и, по существу, остаются за пределами внимания исследователей. Наконечники бурс представляют собой сложные многоклеточные образования и, очевидно, что стандартные гистологические методики недостаточны для их всестороннего изучения. В этой ситуации неоценимую помощь могут оказать методы электронной микроскопии. К сожалению, на данный момент существует лишь одна работа, в которой наконечники бурс рассматриваются на ультраструктурном уровне (Bniggemann 1985).

Особенности ультраструктуры спермиев активно используются систематиками при исследовании самых разных групп беспозвоночных. Недавно было показано их потенциальное значение и в систематике бескишечных турбеллярий - на основании строения аксонем спермиев были установлены три основные группы ранга надсемейств, на которые распадается отряд Acoela (Raikovaetal 2001; Hooge et al. 2002). К сожалению, на текущий момент ультраструктура спермиев известна только для 32 видов бескишечных турбеллярий и лишь примерно половина спермиев из этого списка исследована достаточно детально для того, чтобы на основе этой информации можно было делать таксономические или филогенетические выводы. Едва ли можно сомневаться, что дальнейшее исследование выявит новые морфотипы спермиев и позволит с большей точностью определять филогенетические отношения между родами и семействами бескишечных турбеллярий.

Цель данного исследования - дать сравнительную и функциональную характеристику спермиев и наконечников бурс бескишечных турбеллярий и выявить таксономически значимые признаки. В соответствии с этим были поставлены следующие задачи:

• выбрать представителей с неясным или спорным таксономическим положением;

• провести ультраструктурное исследование спермиев;

• выяснить функциональную роль элементов цитоскелета в локомоции спермиев;

• провести комплексное (ультраструктурное и гистохимическое) исследование бурс и их склеротизированных придатков;

• выяснить функциональную роль склеротизированных придатков бурс и вероятные пути их эволюции;

• провести таксономическую оценку рассмотренных семейств Acoela.

Заключение диссертации по теме «Зоология», Петров, Анатолий Александрович

ОСНОВНЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ И ВЫВОДЫ

1. Исследование сперматозоидов у 11 видов Acoela показывает хорошее соответствие информации о тонкой организации спермиев (структура аксонем и конфигурация цитоплазматических микротрубочек) молекулярно-филогенетическим данным по гену 18S рДНК.

2. Судя по собственным данным и по предыдущим исследованиям, у бескишечных турбеллярий имеется три основных типа спермиев, а также промежуточные состояния, выявленные впервые и характерные для представителей семейств Otocelididae и Dakuidae.

3. Данные по ультраструктуре спермиев 5 представителей Isodiametridae и 2 представителей Convolutidae подтверждают монофилетичность этих семейств и их филогенетически независимый статус.

4. На основании морфологических особенностей спермиев и некоторых других данных показана принадлежность Stomatricha hochbergi к семейству Convolutidae.

5. У представителей Otocelididae выявлено три типа спермиев, что доказывает полифилетичность этой группы. В частности, показано, что сперматозоиды Philocelis brueggemanm имеют большее сходство со спермиями Philactinoposthia saliens (Actinoposthiidae), чем со спермиями других представителей отоцелидид

6. Показана морфофункциональная взаимосвязь между двигательным аппаратом спермиев (аксонемы) и их цитоскелетом (цитоплазматические микротрубочки), на основе этой информации предложена схема эволюционных преобразований ацельных спермиев.

7. Ультраструктурное и гистохимическое исследование склеротизированных придатков бурс у 7 видов Acoela позволило выделить 4 морфологических типа наконечников (простой бочонковидный наконечник, клеточный колпачок, массивный наконечник и вагинальный наконечник).

8. Все изученные наконечники характеризуются рядом общих признаков (многослойная структура, формирование канала за счет клеточных отростков, склеротизация посредством актиновых филаментов) и, вероятно, представляют собой гомологичные образования.

9. Данные о наконечниках, полученные методом дифференциальной окраски фаллоидином, хорошо согласуются с информацией, полученной на ультраструктурном уровне. Гистохимические данные, таким образом, могут служить надежным источником информации в морфологическом исследовании склеротизированных придатков.

10. На основании собственных и литературных данных сделаны выводы о функциональной роли наконечников. Показано, что наряду с основной и, вероятно, первоначальной задачей по подведению спермиев к яйцеклеткам, наконечники могут принимать на себя ряд дополнительных функций (сортировка, дозировка, модификация спермиев и подготовка к оплодотворению).

11. Жесткие структуры Acoela формируются внутриклеточно за счет усиления элементов цитоскелета. При этом скелетные образования эпидермального происхождения (шипы мужских совокупительных органов и вооруженных желез) являются производными микроворсинок и связанной с ними клеточной паутины, а склеротизированные структуры мезенхимной природы (наконечники бурс) возникают за счет усиления актина точечных контактов.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Проведенная работа по исследованию ультраструктуры спермиев у 11 видов Acoela позволила сделать целый ряд таксономических и филогенетических выводов. В диссертации подтверждена высказанная ранее гипотеза о трех основных типах организации спермиев, кроме того, выявлен четвертый, промежуточный, тип, характерный для представителей семейств Otocelididae и Dakuidae При этом показано, что наибольшее таксономическое значение с точки зрения систематики имеют признаки спермиев, связанные со структурой аксонем (9+2, 9+1 и 9+0) и конфигурацией цитоплазматических микротрубочек (кортикальные, аксиальные и промежуточные типы).

Спермии пяти исследованных видов семейства Isodiametndae имеют сходное строение (аксонемы 9+2 и кортикальные микротрубочки) и при этом кардинальным образом отличаются от спермиев представителей конволютид (Wulguru cuspidata и Stomatricha hochbergi). Таким образом, полученные данные убедительно подтверждают таксономическую обоснованность этих семейств и их филогенетически независимый статус (Hooge & Tyler 2005). Первоначально S hochbergi была классифицирована как представитель отоцелидид, однако в настоящей диссертации приводятся аргументы, свидетельствующие в пользу отнесения этого вида к семейству Convolutidae. Спермии трех исследованных представителей отоцелидид (Otocelis sandara, Notocehs gullmarensis и Philocelis brueggemanm) существенно отличаются друг от друга, что доказывает полифилетический характер этой группы. Кроме того, сперматозоиды одного из трех изученных видов - Ph brueggemanm - имеют значительное сходство со спермиями Philactinoposthia saliens, что указывает, по моему мнению, на необходимость перенесения рода Philocelis в семейство Actinoposthiidae. Для спермиев Paedomecynostomum bruneum описаны аксонемы формулы 9+1, что служит дополнительным аргументом в пользу монофилетичности группы, которая объединяет чайлдиид и мециностомид.

В качестве источника таксономической информации ультраструктурные особенности спермиев могут иметь более широкий спектр применения, чем предполагалось ранее. В частности, в ряде случаев морфология спермиев служит весьма эффективным инструментом в определении и идентификации видов, как это было показано на примере Daku woorimensis и Wulguru cuspidata.

В диссертации представлена функциональная связь между организацией аксонем и конфигурацией цитоплазматических микротрубочек, высказывается гипотеза, согласно которой аксиальные микротрубочки играют роль эффективного стержневого механизма при возвратном движении аксонем. На основе этой информации приводятся соображения об эволюции двигательного аппарата и цитоскелета спермиев, показан возможный путь появления и дальнейшей эволюции аксиальных микротрубочек.

Предлагаемая в диссертации схема строения бурс и их склеротизированных придатков основана на совокупности данных, полученных с помощью различных методик. Электронная микроскопия, без сомнения, дает наиболее полную картину структурной организации наконечников. К сожалению, временные затраты и сложное оборудование, необходимые для ультраструктурных исследований, не позволяют таксономистам и систематикам широко использовать электронный микроскоп в своей повседневной практике. В связи с этим особое значение для изучения наконечников приобретают методы дифференциальной окраски фаллоидином с последующим изучением препаратов на эпифлуоресцентном или конфокальном микроскопе. Как показано в данной работе, конфокальный метод предоставляет исключительно точные данные по распределению микрофиламентов в клетках наконечников, при этом приготовление фаллоидиновых препаратов обычно занимает всего несколько часов и не требует специальных навыков. Едва ли можно сомневаться, что данная методика в скором времени станет неотъемлемым инструментом исследователей, специализирующихся в области систематики бескишечных турбеллярий (и других ресничных червей).

Проведенное комплексное исследование показывает, что все склеротизированные придатки имеют сходную организацию и, следовательно, ведут начало от общего предкового состояния. Следующие признаки характеризуют все изученные наконечники: 1) многорядная клеточная структура;

2) образование канала (серии каналов) за счет отростков мезенхимных клеток;

3)склеротизация путем усиления внутриклеточных элементов цитоскелета (актиновых филаментов в точечных контактах)

В ходе электронномикроскопического исследования было выявлено четыре типа наконечников. Наиболее просто устроенный наконечник среди изученных видов был описан у Notocelis gullmarensis Этот наконечник составлен из склеротизированных отростков, являющихся продолжением клеток, формирующих стенку самой семенной сумки. При этом ядросодержащие части клеток наконечника расположены случайным образом непосредственно в стенке бурсы.

Так называемый клеточный колпачок (Aphanostoma bruscai, A virescens и Daku woorimensis) представляет собой вариант составного наконечника. В этом случае семенной канал образован не единой, непрерывной, жесткой трубкой, но разбит на цепочку склеротизированных сегментов. Склеротизированные участки лежат внутри клеточного колпачка и образованы центральными отростками клеток, составляющих его основу. Эти же клетки образуют тонкие листовидные пластинки, формирующие стенку бурсы.

Третий, наиболее совершенный, тип наконечника найден у Wulguru cuspidata. В этом случае лишь половина клеток подвергается склеротизации, пространство между ними заполнено несклеротизированными секреторными элементами, так называемыми промежуточными клетками. Большинство клеток наконечника полностью теряет свою связь со стенкой бурсы.

Вагинальный наконечник, характерный для ряда представителей мециностомид, открывается не в паренхиму, как это свойственно обычным наконечникам, а протоком во внешнюю среду. Ядра склеротизированных клеток располагаются у поверхности тела, под вентральным эпидермисом, а сам наконечник состоит из центральной трубковидной части и периферических пластинок.

Три первых типа организации наконечников могут соответствовать трем эволюционным этапам в развитии бескишечных турбеллярий. Первоначально наконечники дифференцируются как специализированные участки стенки бурсы, но в ряду более продвинутых форм происходит их постепенное обособление в качестве структур, чьи элементы (склеротизированные клетки) целиком независимы от покровов семенной сумки. Наряду с этим происходит дифференцировка клеток наконечника на несколько морфотипов - возникают специализированные осевые и промежуточные клетки.

Хотя наконечники бурс как источники филогенетической информации имеют меньшее значение, чем органы мужской половой системы, это объясняется отнюдь не бедностью признаков, но, прежде всего, сложностью их адекватной идентификации на светооптическом уровне, онтогенетической и эволюционной пластичностью наконечников и наличием множества параллельных линий развития в разных группах Acoela. Разнообразие наконечников отчасти определяется многообразием их функций. В работе показано, что наряду с основной (и, вероятно, первоначальной) задачей по подведению спермы партнера к яйцеклетке, наконечники часто принимают на себя дополнительные функции, такие, как дозировка, сортировка и капацитация спермиев. Не исключено, что в некоторых случаях (например, при возникновении вагинальных наконечников) может происходить и полная субституция функции.

В диссертации обсуждается вопрос о формировании скелетных структур у бескишечных турбеллярий и у других представителей низших билатерий. На основе собственных и литературных данных показано, что жесткие структуры Acoela формируются исключительно внутриклеточно за счет усиления элементов цитоскелета (микрофиламентов, микротрубочек и связывающих их белков). При этом склеротизация эпителиальных и мезенхимных клеток идет различными путями. Структурные образования эпидермального происхождения (шипы мужских совокупительных органов и вооруженных желез) являются производными микроворсинок и связанной с ними клеточной паутины. В то же время склеротизированные структуры мезенхимной природы (наконечники бурс), скорее всего, возникают за счет усиления актина точечных контактов.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Петров, Анатолий Александрович, 2007 год

1. Петроградск. общ. естествоисп., 43(4): 103-172. Беклемишев В.Н. 1963. Ресничные черви Каспийского моря. 3. Бюлл. Моск. Общиспыт. Природы, 68, отд. биол., 1: 29-40. Беклемишев В.Н. 1964. Основы сравнительной анатомии беспозвоночных. Изд. 3.

2. М , т. 1 (Проморфология): 1-432; т. II (Органология): 1-446. Бисерова НМ. 1991. Ультраструктурная организация сколекса и покровов стробилы Echinobothrium typus (Cestoda: Diphyllidea). Тр. Зоол. инст. 241:153172.

3. Богута К.К. 1970. Новая турбеллярия Anaperus biaculeatus (Acoela) из сублиторали

4. Белого моря. Зоол. журн , 49(2): 198-209. Богута КК. 1971. Морфология и жизненный цикл Anaperus biaculeatus (Turbellaria,

5. Acoela). Диссертация. Ленинград:1-167. Богута К.К. 1972. Ранний онтогенез Anaperus biaculeatus (Turbellaria, Acoela).

6. Дробышева И М. 1991. Камбиальность эпидермиса у турбеллярий. Тр. Зоол. инст. АН СССР, 241:53-87.

7. Иванов А.В. 1952. Бескишечные турбеллярии (Acoela) южного побережья Сахалина. Тр. Зоол. инст. АН СССР, 12:40-132.

8. Исаева В.В. Восстановительные явления у некоторых турбеллярий. Тр. Ленинградск. о-ва естествоиспыт. 78,4: 233-266.

9. Костенко А.Г. 1989. Положение Taurida fulvomaculata (Ах, 1959) в системе бескишечных турбеллярий. Тр. Зоол. инст. АН СССР, 195: 14-25.

10. Костенко АГ, Мамкаев ЮВ. 1990а. Положение «зеленых конволют» в системе бескишечных турбеллярий (Turbellaria, Acoela). 1. Simsagittifera gen. п. Зоол. журн. 69(6): 11-21.

11. Костенко АГ, Мамкаев ЮВ. 1990b. Положение «зеленых конволют» в системе бескишечных турбеллярий (Turbellaria, Acoela). 2. Sagittiferidae fam. п. Зоол. журн. 69(7):5-16.

12. Мамкаев Ю.В. 1961. Новый представитель гнатостомулид Gnathostomula murmamca sp. п. ДАН СССР, 141, 6: 1501-1504.

13. Мамкаев Ю.В. 1967. Очерки по морфологии бескишечных турбеллярий. Тр. Зоол. инст. АН СССР, 44: 26-108.

14. Мамкаев ЮВ, Дробышева ИМ. 1971. О множественной закладке семенных сумок и их наконечников у бескишечной турбеллярии Convoluta convoluta Докл. АН СССР, 196,6: 1474-1476.

15. Мамкаев Ю.В., Иванов В.П. 1970. Электронно-микроскопическое исследование сперматозоидов бескишечной турбеллярии Convoluta convoluta (Abildgaard). Тез. докл. Научн. сессии ЗИН АН СССР.

16. Мамкаев Ю.В., Маркосова Т.Г. 1979. Электронно-микроскопическое исследование паренхимы представителей бескишечных турбеллярий. Тр. Зоол. ин-та АН СССР, т. 84: 7-12.

17. Мечников И.И. 1877. О пищеварительных органах пресноводных турбеллярий. Академ. Собр. Соч., т. 1,1955: 252-259.

18. Мечников И.И. 1878. О пищеварительных органах некоторых пресноводных турбеллярий. Академ. Собр. соч., т. 1, 1955:266-268.

19. Мечников И.И. 1886. Эмбриологические исследования над медузами. Избр. биол. произв., М., 1950:271-471.

20. Райкова ОИ. 1985. Ультраструктура бескишечной турбеллярии Actinoposthia beklemischevi Дипломная работа. Ленинград.

21. Райкова ОИ. 1991. О филогенетическом значении ультраструктурных признаков турбеллярий. Тр. Зоол. инст. 241:26-52.

22. Achatz JG, Gschwentner G, Rieger R. 2005. Symsagittifera smaragdina sp. nov.: A new acoel (Acoela: Acoelomorpha) from the Mediterranean Sea. Zootaxa 1085: 33-35.

23. Afzelius BA. 1966. Anatomy of the cell. Chicago & London, Univ. Chicago Press:l-127.

24. Afzelius BA. 1975. The Functional Anatomy of the Spermatozoon. Pergamon Press, Oxford.

25. Afzelius В A. 1982. The flagellar apparatus of marine spermatozoa. Evolutionary and functional aspects. In: Prokaryotic and eukaryotic flagella. Amos WB, Duckett JG, eds., Cambridge Univ. Press- 495-519.

26. Apelt G. 1969. Fortpflanzungsbiologie, Entwicklungszyklen und vergleichende Friihentwicklung acoeler Turbellarien. Mar. Biol. 4:267-325.

27. Achatz JG, Gschwentner R, Rieger R. 2005. Symsagittifera smaragdina sp. nov.: a new acoel (Acoela: Acoelomorpha) from the Mediterranean Sea Zootaxa 1085:33-45.

28. Auladell C, Garcia-Valero J, Baguna J. 1993. Ultrastructural localization of RNA in the chromatoid bodies of undifferentiated cells (neoblasts) in planarians by the RNase-gold complex technique. J. Morph. 216:319-326.

29. Ax P. 1961. Verwandtschaftsbeziehungen und Phylogenie der Turbellarien. Ergebn Biol. 24:1-68.

30. Baguna, J, Salo E, Auladell C. 1989. Regeneration and pattern formation in planaria. 111. Evidence that neoblasts are totipotent stem cells and the source of blastema cells. Development 707:77-86.

31. Baguna J, Riutort M. 2004. The dawn of bilaterian animals: the case of acoelomorph flatworms. Bioessays 26:1046-1057.

32. Baccetti B, Afzelius BA. 1976. The biology of the sperm cell. Monographs in Developmental Biology 10:1-254.

33. Bedini C, Papi F. 1970. Peculiar patterns of microtubular organization in spermatozoa of lower Turbellaria. In: Baccetti B. (ed.), Comparative Spermatology. Academic Press, NY: 363-368.

34. Boyer ВС, Smith GW. 1982. Sperm morphology and development in two acoel turbellarians from the Philippines. Рас. Sci. 36:365-380.

35. Bresslau E. 1909. Die Entwicklung der Acoelen. Verhandl. D. Deutshes Zoll. Gesellschaft 19.314-324.

36. Bresslau E. 1933. Erster Klasse des Cladus Plathelminthes: Turbellaria. In: Kukenthal W, Krumbach T, eds. Handbuch der Zoologie. 2:54-320.

37. Briiggemann J. 1984. Ultrastruktur und DifTerenzierung den prostatoiden Organe von Polystyliphorafilum (Platyhelminthes, Proseriata). Zoomorphology 104: 85-95.

38. Briiggemann J. 1985. Ultrastructure and formation of the bursa mouthpiece of Philocelis cellata (Platyhelminthes, Acoela). Hydrobiologia 128:23-30.

39. Briiggemann J. 1986. Ultrastructural investigations on the differentiation of genital hard structures in free-living platyhelminths and their phylogenetic significance. Hydrobiologia 132:151-156.

40. Burton PR 1967. Fine structure of the unique central region of the axial unit of lung-fluke spermatozoa. J. Ultrastruct. Res. 19:166-172.

41. Burton, PR. 1973. Some structural and cytochemical observations on the axial filament complex of lung-fluke spermatozoa. J. Morphol. 740:185-196.

42. Burton PR, Hinkley RE, Pierson GB. 1975. Tannic-acid stained microtubules with 12, 13 and 15 protofilaments. J. Cell Biol. 65:227-233.

43. Bush LF. 1984. Marine flora and fauna of the Northeastern United States. Turbellaria: Acoela and Nemertodermatida. NOAA Technical Report NMFS Cicular 440: 1-69.

44. Chandler RM, Thomas MB, Smith JPS III. 1992. The role of shell granules and accessory cells in eggshell formation in Convoluta pulchra (Turbellana, Acoela). Biol. Bull. (Woods Hole) 182:54-65.

45. Cohen C, Reinhardt B, Castellani L, Norton P, Stirewalt M. 1982. Schistosome surface spines are "crystals" of actin. J. Cell Biol. 95:987-988.

46. Costello DP, Costello HM. 1938. Copulation in the acoelous turbellarian Polychoerus carmelensis. Biol. Bull. 75:(I):85-98.

47. Costello DP, Costello HM. 1968. Immotility and motility of Acoel turbellarian spermatozoa, with special reference to Polychoerus carmelensis Biol. Bull. 135:417.

48. Crezee M 1975. Monograph of the Solenofilomorphidae (Turbellaria: Acoela). Int. Rev. ges. Hydrobiol. 60:769-845.

49. Crezee M, Tyler S. 1976. Hesiolicium mops n.g. n.sp. (Turbellaria, Acoela) with observations on its ultrastructure. Zool. Scr. 5:207-216.

50. Doe DA. 1976. The proboscis hooks in Karkinorhynchidae and Gnathorhynchidae (Turbellaria, Kalyptorhynchia) as basement membrane or intracellular specializations. Zool. Scr. 5:105-115.

51. Doe DA. 1977. Fine structure of'cuticular' structure in Platyhelminthes. Am Zool. 17: 970.

52. Doe DA. 1986a. Ultrastructure of the copulatory stylet and accessory spines in Haplopharynx quadristimulus (Turbellaria). Hydrobiologia 132:157-263.

53. Doe DA 1986b. Ultrastructure of the copulatory organ of Haplopharynx quadristimulus and its phylogenetic significance (Plathelminthes, Haplopharyngida). Zoomorphology 106:163-173

54. Dorjes J. 1968. Die Acoela (Turbellaria) der deutschen Nordseekiiste und ein neues System der Ordnung. Z. zool. Syst. Evolutionsforsch. 6:56-452.

55. Ehlers U. 1985. Das Phylogenetische System der Plathelminthes. Stuttgart: Gustav Fischer.

56. Ehlers U, Dorjes J. 1979. Interstitielle Fauna von Galapagos. XXIII. Acoela (Turbellaria). Mikrofauna des Meeresboden 72:1-75.

57. Ehlers B, Ehlers U. 1980. Struktur und Differenzierung penialer Hartgebilde vonCarenscoilia bidentata Sopott (Turbellaria, Proseriata). 95: 159-167.

58. Faubel A. 1974. Die Acoela (Turbellaria) eines Sandstrandes der Nordseeinsel Sylt. Mikrofauna des Meeresbodens 32:1-58.

59. Faulstich H, Zobeley S, Rinnerthaler G, Small JV. 1988. Fluorescent phallotoxins as probes for filamentous actin. J. Muscle Res. Cell Motility 9:370-383.

60. Fawcett DW, Phillips DM. 1967. Further observations on mammalian spermiogenesis. J. Cell Biol, 35: 2,152A.

61. Fegley SR, Smith JPS, Rieger RM. 1984. Parahaploposthia thiophilus sp.n. and the use of living specimens in identification of acoel turbellarians. Zool. Scr. 75:1-8.

62. Gardiner EG. 1898. The growth of the ovum, formation of the polar bodies, and the fertilization in Polychoerus caudatus. J. Morph. 15:72-111.

63. Gevaerts H, Moens JB, Martens EE, Schockaert ER. 1995. Hard Parts in the Female System of Syndesmis longicanalis (Platyhelminthes, Rhabdocoela, Umagillidae) Are Basement Membrane Derivatives. Invertebrate Biology, 114: 279-284.

64. Wilhelm Engelmann. p. i-xii + 1-442. von Graff L. 1891. Die Organisation der Turbellaria Acoela. Leipzig, Verlag Von

65. Hendelberg J. 1969a Flatworm spermiogenesis and spermatozoa studied by light and electron microscope methods. Acta Univ. Upsaliensis 140:1-12.

66. Hendelberg J. 1969b. On the development of different types of spermatozoa from spermatids with two flagella in the Turbellana with remarks on the ultrastructure of the flagella. Zool. Bidr. Upps 38: 1-50.

67. Hendelberg J. 1974. Spermiogenesis, sperm morphology, and biology of fertilization in the Turbellaria. In: Riser NW, Morse MP (eds.), Biology of the Turbellaria. McGraw-Hill, NY: 148-164.

68. Hendelberg J. 1977. Comparative morphology of turbellarian spermatozoa studied by electron microscopy. Acta Zool. Fenn. 154:149-164.

69. Hendelberg J. 1983. Platyhelminthes-Turbellaria. In: Adiyodi KG, Adiyodi RG (eds.), Reproductive biology of invertebrates, Vol. II: Spermatogenesis and sperm function. J. Wiley & Sons, Ltd, Chichester: 75-104.

70. Henley C. 1974. Platyhelminthes (Turbellaria). In: Giese AC, Pears JS, eds Reproduction of marine invertebrates. Vol. I. Acoelomate and pseudocoelomate metazoans. New-York: Academic Press: 267-343.

71. Henry JQ, Martindale MQ, Boyer ВС. 2000. The unique developmental program of the acoel flatworm, Neochildia fusca. Developmental Biology 220: 285-295.

72. Hooge MD. 2001. Evolution of body-wall musculature in the Platyhelminthes (Acoelomorpha, Catenulida, Rhabditophora) J. Morphol. 249:171-194.

73. Hooge MD. 2003. Two new families, three new genera, and four new species of acoel flatworms (Acoela, Platyhelminthes) from Queensland, Australia. Cah. Biol. Mar. 44:275-298.

74. Hooge MD, Rocha CEF. 2006. Acoela (Acoelomorpha) from the northern beaches of the state of Sao Paulo, Brazil, and a systematic revision of the family Otocelididae. Zootaxa 1335:1-50.

75. Hooge MD, Smith JPS. 2004. New acoels (Acoela, Acoelomorpha) from North Carolina. Zootaxa 442:1-24.

76. Hooge MD, Tyler S. 2001. Non-muscle actin in sclerotic components of the female reproductive system of acoel turbellarians. Am. Zool. 40:1064.

77. Hooge MD, Tyler S. 2003. Acoels (Platyhelminthes, Acoela) from the Atlantic coast of North America. Meiofauna Marina 12:7-36.

78. Hooge MD, Tyler S. 2005. New tools for resolving phylogenies: A systematic revision of the Convolutidae (Acoelomorpha, Acoela). J. Zoolog. Syst. Evol. Res. 43:100113.

79. Hooge MD, Haye P, Tyler S, Litvaitis MK, Kornfield 1. 2002. Molecular systematics of the Acoela (Platyhelminthes) and its concordance with morphology. Mol. Phylogenet. Evol. 24:333-342.

80. Hyman LH. 1951. The invertebrates. Vol. 2. Platyhelminthes and Rhynchocoela. The acoelomate Bilateria. New York: McGraw-Hill: 1-572.

81. Jong-Brink M, Boerh HH, Hommes TG, Kodde A. 1977. Spermatogenesis and the role of Sertoli cells in the freshwater snail Biomphalaria glabrata. Cell and Tissue Res., 181(1): 37-58.

82. Karling TG. 1985. Revision of Byrsophlebidae (Turbellaria Typhloplanoida). Ann. Zool. Fenn. 22:105-116.

83. Mainitz M. 1983. Gnathostomulida. In: Adiyodi KG, Adiyodi RG, eds. Reproductive biology of invertebrates, vol. I. Oogenesis, oviposition, and oosorption. Chichester: John Wiley & Sons. p. 169-180.

84. Mamkaev YuV, Kostenko AG. 1991. On the phylogenetic significance of sagittocysts and copulatory organs in acoel turbellanans. Hydrobiologia 227:307-314.

85. Mark EL. 1892. Polychoerus caudatus nov. gen., et nov. spec. Festschrift zum 70 Gebirtstage R. Leuckart: 298-309.

86. Marcus E. 1957. Turbellaria. In: Exploration hydrobiologique des Lacs Kivu, Edouard et Albert (1952-1954). Resultats scientifiques, Vol. Ill, fasc. 2:25-51.

87. Martens EE. 1984. Ultrastructure of the spines in the copulatory organ of some Monocelididae (Turbellaria, Proseriata). Zoomorphology 104: 261-265.

88. Martens E. 1985. Comparative ultrastructure of copulatory organs having a stylet in the Proseriata (Turbellaria). Hydrobiologia 132: 323-343.

89. Martens EE, Schockaert E. 1981. Observations on the ultrastructure of the copulatory organ of Archilopsis unipunctata (Fabricius, 1826) (Proseriata, Monocelididae). Hydrobiologia 84: 277-285.

90. Martens EE, Schockaert E. 1985. Studies on the Ultrastructure of the Genital Organs in Proseriata (Turbellaria). I. Cirrifera aculeata (Ax) (Coelogynoporidae). Zoologica Scripta 14:81-90.

91. Meixner J. 1925. Beitrag zur Morphologie und zum System der Turbellana-Rhabdocoela: II Uber Typhlorhynchus nanus Laidlaw und die parasitischen Rhabdocoelen nebst Nachtragen zu den Calyptorhynchia. Z. Morphol. Okol. Tiere 5:577-624.

92. Mount PM. 1970. Histogenesis of the rostrellar hooks of Taenia crassiceps (Leder, 1800) (Cestoda). J. Parasitol., 56(5): 947-961.

93. Miiller MCM, Sterrer W. 2004. Musculature and nervous system of Gnathostomula peregrina (Gnathostomulida) shown by phalloidin labeling, immunohistochemistry, and cLSM, and their phylogenetic significance. Zoomorphology 123:169-177.

94. Pasquinelli AE, McCoy A, Jimenez E, Salo E, Ruvkun G, Martindale MQ, Baguna J. 2003. Expression of the 22 nucleotide let-7 heterochronic RNA throughout the Metazoa: a role in life history evolution? Evol. Devel. 5: 372-378.

95. Raikova 01, Justine J-L. 1994. Ultrastructure of spermiogenesis and spermatozoa in three Acoels (Platyhelminthes). Annales Sci. Naturelles (Zoologie), 15:63-75.

96. Raikova 01, Justine J-L. 1999. Microtubular system during spermiogenesis and in the spermatozoon of Convoluta saliens (Platyhelminthes, Acoela)' tubulin immunocytochemistry and electron microscopy. Mol. Reprod. Develop. 52:74-85.

97. Raikova 01, Falleni A, Justine JL. 1997. Spermiogenesis in Paratomella rubra (Platyhelminthes, Acoela): ultrastructural, immunocytochemical, cytochemical studies. Acta Zoologica 78: 295-307.

98. Raikova 01, Flyatchinskaya LP, Justine J-L. 1998a. Acoel spermatozoa: ultrastructure and immunocytochemistry of tubulin. Hydrobiologia 383:207-214.

99. Raikova 01, Reuter M, Kotikova EA, Gustafsson MKS. 1998b. A commissural brain! The pattern of 5-HT immunoreactivity in Acoela (Plathelminthes). Zoomorphology 118:69-77.

100. Raikova 01, Reuter M, Justine J-L. 2001. Contributions to the phylogeny and systematics of the Acoelomorpha. In: Interrelationships of the Platyhelminthes. Littlewood DTJ, Bray RA, eds., p. 13-23. Taylor & Francis, London.

101. Reisinger E. 1933. Turbellarien der Deutschen Limnologischen Sunda-Expedition. Arch. Hydrobiol, Suppl. Trop. Binnengew 4:239-262.

102. RepiachofFW. 1885. Nachtrag zu vorstehender Mitteilung. Zool. Anz., 8,194:272-273.

103. Hydrobiol. 56-385-496. Rieger RM. 1971a. Die Turbellarienfamilie Dolichomacrostomidae nov. Fam. (Macrostomida). I. Teil. Vorbemerkungen und Karlingiinae nov. subfam. 1. Zool. Jb. Syst. 98:236-314.

104. Rieger RM. 1971b. Die Turbellarienfamilie Dolichomacrostomidae RIEGER II. Teil.

105. Dolichomacrostominae 1. Zool. Jb. Syst. 98:569-703. Rieger RM. 1986. Uber dem Ursprung der Bilateria: die Bedeutung der Ultrastrukturforschung fur ein neues Verstehen der Metazoenevolution. Verh. Dtsch. Zool. Ges. 79:31-50.

106. Rieger RM, Doe DA. 1975. The proboscis armature of Turbellaria-Kalyptorhynchia, aderivative of the basement lamina? Zool. Scr. 4:25-32. Rieger RM, Ladurner P. 2001. Searching for the stem species of the Bilateria. Belg. J.

107. Rieger RM, Tyler S, Smith JPS, Rieger GE. 1991. Platyhelminthes: Turbellaria. In: Harrison FW, Bogitsh BJ, eds. Microscopic anatomy of invertebrates Vol. 3: Platyhelminthes and Nemertinea. New-York, Wiley-Liss: 7-140.

108. Rohde K. 1991. The evolution of protonephridia of the Platyhelminthes. Hydrobiologia 227 (Dev. Hydrobiol 69): 315-321.

109. Rohde K, Watson N, Cannon LRG. 1988. Ultrastructure of spermiogenesis in Amphiscolops (Acoela, Convolutidae) and of sperm in Pseudactinoposthia (Acoela, Childiidae). J. Submicrosc. Cytol. Pathol. 20:595-604.

110. Ruiz-Trillo 1, Paps J, Loukota M, Ribera C, Jondelius U, Baguna J, Riutort M. 2002. A phylogenetic analysis of myosin heavy chain type 11 sequences corroborates that Acoela and Nemertoderematida are basal bilaterians. PNAS 99:11246-11251.

111. Ruiz-Trillo I, Riutort M, Littlewood DTJ, Herniou EA, Baguna J. 1999. Acoel flatworms: earliest extant bilaterian metazoans, not members of Platyhelminthes. Science 283:1919-1923.

112. Ruiz-Trillo I, Riutort M, Fourcade HM, Baguna J, Boore JL. 2004. Mitochondrial genome data support the basal position of Acoelomorpha and the polyphyly of the Platyhelminthes. Mol. Phylog. Evol. 33: 321-332.

113. Schmidt P, Sopott-Ehlers B. 1976. Interstitielle fauna von Galapagos XV. Macrostomum O. Schmidt, 1848 und Siccomacrostomum triviale nov. gen. nov. spec. (Turbellaria, Macrostomida). Mikrofauna Meeresbodens 57:1-45.

114. Smith JPS. 1981a. Fine structural observations on the central parenchyma in Convoluta sp Hydrobiologia 84: 259-265

115. Smith JPS. 1981b. Fine structural anatomy of the parenchyma in the Acoela and Nemertodermatida (Turbellaria). Ph.D. Dissertation, University of North Caroline, Chapell Hill.

116. Smith JPS, Tyler S. 1984. Serial sectioning and staining of resin-embedded material for light microscopy: recommended procedures for micrometazoans. Mikroskopie 41: 259-270.

117. Smith JPS, Tyler S. 1985. The acoel turbellarians: kingpins of metazoan evolution or a specialized offshoot? In: Conway-Morris S, George DG, Gibson R, Piatt JM (eds.), Origins and relationships of lower invertebrates. Oxford University Press, Oxford.

118. Smith JPS, Tyler S, Rieger RM. 1986. Is the Turbellaria polyphyletic? Hydrobiologia, 132:13-21.

119. Sopott-Ehlers B. 1984. Epidermale Collar-Receptoren der Nematoplanidae und Polystyliphoridae (Plathelminthes, Unquiphora). Zoomorphology 104:226-230.

120. Sterrer W. 1971. Gnathostomulida: problems and procedures. In: Proceedings of the First International Conference on Meiofauna. Hulings NC, ed. Contributions to Zoology 76. Smithsonian Institution Press, Washington, DC: 9-15.

121. Sterrer W, Rieger R. 1974. Retronectidae a new cosmopolitan marine family of Catenulidae (Turbellaria) In: Riser NW, Morse MP (eds.), Biology of the Turbellaria. McGraw-Hill, NY:63-92.

122. Sud BN. 1961. The "chromatoid body" in spermatogenesis. Quat. J. Microsc. Sci. 102: 273-292.

123. Westblad E. 1946. Studien ueber skandinavische Turbellaria Acoela. IV. Ark. Zool. 38A(l):l-56.

124. Westblad E. 1948. Studien ueber skandinavische Turbellaria Acoela. V. Ark. Zool. 41A(7):l-82.

125. Winsor L. 1990. Marine Turbellaria (Acoela) from North Queensland Mem.

126. Queensland Mus. 28:785-800. Zd'arska Z, Nebesarova J. 2003. Ultrastructure of the early rostellum of Silurotaenia siluri (Batsch, 1786) (Cestoda: Proteocephalidae) Parasitol Res. 89(6):495-500.