УФ абсорбционная спектроскопия спинномозговой жидкости человека и ее аналогов тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 01.04.07, кандидат физико-математических наук Семибратова, Виктория Александровна

• Семибратова, Виктория Александровна
• кандидат физико-математических наук
• 2010

Оглавление диссертации кандидат физико-математических наук Семибратова, Виктория Александровна

Список использованных сокращений.

Введение.

Глава 1. Современные физические методы исследования спинномозговой жидкости человека.

1.1. физико-химические свойства спинномозговой жидкости 12 человека.

Существующие методы клинико-биохимического анализа спинномозговой жидкости.

1-3- Спектральные методы исследования спинномозговой жидкости.

1.3.1. ИК спектроскопия спинномозговой жидкости.

1.3.2. Спектроскопия комбинационного рассеяния спин- 22 номозговой жидкости.

1.3.3. Хроматография спинномозговой жидкости.

1.3.4. ЯМР спектроскопия спинномозговой жидкости.

1.4. УФ спектроскопия биологических объектов.

1.4.1. Основные принципы УФ спектроскопии.

1.4.2. УФ поглощение белков.

1.4.3. УФ спектроскопия спинномозговой жидкости.

Выводы главы 1.

Глава 2. Методы анализа слабоструктурированных спектров поглощения спинномозговой жидкости человека.

•1- Постановка задач исследования.

2.2. Изучение УФ спектров поглощения спинномозговой жид- 49 кости для нейрохирургических задач.

2.2.1. Экспериментальное оборудование.

2.2.2. Методика регистрации спектров.

2.2.3. Методики обработки спектров.

2.2.4. Анализ спектров поглощения спинномозговой жид- 57 кости.

2.3. Спектроскопия спинномозговой жидкости в видимой области.

Выводы главы 2.

Глава 3. Изучение перекисного окисления спинномозговой жидкости человека.

3.1. Хемилюминесценция спинномозговой жидкости при нейрохирургических заболеваниях.

3.1.1. Методика измерения окислительной хемилюминес-ценции.

3.1.2. Измерение интенсивности и времени затухания хе-милюминесценции.

3.2. Влияние перекисного окисления на спектр поглощения спинномозговой жидкости.

Выводы главы 3.

Глава 4. Изучение фармакокинетики «Эссенциале Н» методом

УФ абсорбционной спектроскопии.

4.1. Физико-химические свойства «Эссенциале Н».

4.2. Методика исследования фармакокинетики «Эссенциале Н»

4.2.1. Характеристика образцов исследования.

4.2.2. УФ спектроскопия надосадочной жидкости крови, содержащей «Эссенциале Н».

4.2.3. Определение оптимального времени экспозиции «Эссенциале Н».

4.3. Сопоставление результатов с клиническими данными.

Выводы главы 4.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «УФ абсорбционная спектроскопия спинномозговой жидкости человека и ее аналогов»

Актуальность исследования. Изучение обмена веществ мозга является неотъемлемой частью биохимического исследования метаболизма в целом организме, но представляет определенные трудности в связи с морфологическими и функциональными особенностями нервной системы. Экспериментальные данные показывают, что из-за более выраженной защитной и регу-ляторной функции барьера между кровью и мозгом спинномозговая жидкость лучше отражает биохимические изменения в мозге, чем кровь [1]. Спинномозговая жидкость, являясь внутренней средой центральной нервной системы, наиболее полно характеризует функциональную активность различных медиаторных систем головного и спинного мозга. Поэтому при заболеваниях нервной системы изучение спинномозговой жидкости, несмотря на некоторые методические сложности, наиболее целесообразно [2, 3, 4].

Спинномозговая жидкость изучалась ранее с помощью различных методов. Наибольшее количество данных получено химическими, биохимическими и микроскопическими исследованиями [4, 7, 57]. Вместе с тем в изучении спинномозговой жидкости имеются определенные пробелы. Прежде всего, это касается использования физических спектральных методов анализа. В прошлые десятилетия были попытки получения данных из УФ абсорбционных исследований [47, 48, 49, 50, 51]. Но вследствие широких перекрывающихся полос поглощения ранее не удалось получить однозначных результатов. Успешное развитие рентгеновской и ЯМР томографии, привело к получению большого количества полезной визуальной информации. На фоне этих успехов результаты спектральных исследований выглядели более скромно, и ими перестали интересоваться. На сегодняшний день ситуация изменилась благодаря компьютерной технике, позволяющей проводить более точные измерения с последующим анализом.

Известно, что в состав спинномозговой жидкости входит более 104 веществ, в УФ области спектра все они имеют широкие и часто перекрывающиеся полосы поглощения [47, 48, 49]. С одной стороны, это представляет 5 определенные трудности для анализа состава. С другой стороны, спектр поглощения содержит информацию обо всех органических веществах. Поэтому важно научиться выделять из малоструктурированных спектров информацию об изменении состава спинномозговой жидкости, связанную с заболеванием. В связи с этим были проведены спектральные исследования спинномозговой жидкости различными методами. В итоге разработана методика, основанная на измерениях спектров поглощения спинномозговой жидкости с последующим математическим анализом. Для этого измерение спектров и их математическая обработка были произведены на спектрально-вычислительном комплексе. Эта методика позволяет выявлять различия в спектрах поглощения спинномозговой жидкости не только больных, но и здоровых людей. Следует подчеркнуть, что стандартные методы разделения спектров на составляющие полосы в данном случае не подходят [52, 53].

Разработанная методика была также использована для изучения направленного транспорта лекарственных препаратов. Идея селективного воздействия фармакологических препаратов на определённые клетки была актуальна всегда, но приблизиться к её разрешению удалось лишь в настоящее время благодаря разработке и внедрению в медицину методов направленного транспорта. Доставка лекарственных препаратов осуществляется клетками крови (эритроцитами, лейкоцитами, тромбоцитами и др.). Направленный транспорт лекарственных препаратов в охваченную патологическим процессом зону позволяет, наряду с созданием в ней высокой концентрации вводимого препарата, максимально снизить токсическое воздействие, терапевтическую дозу препарата и кратность введения [77, 78, 79].

Гепатопротектор «Эсенциале Н» используется в медицинской практике для восстановления функциональной активности печени и снижения токсического действия химиотерапевтических препаратов у больных онкологическими и др. заболеваниями [79, 80]. Интерес представляла эффективность связывания «Эссенциале Н» с клетками крови (эритроцитами) и определение оптимального времени экспозиции «Эссенциале Н» для терапевтических заб дач. Для стандартных биохимических методик, используемых в медицине, это оказалось недоступно. В связи с этим, предложенная методика, основанная на измерениях с последующим математическим анализом УФ спектров поглощения надосадочной жидкости крови и «Эссенциале Н», позволяет качественно и количественно определять содержание «Эссенциале Н» в крови для решения задач направленного транспорта лекарственных препаратов и повышения эффективности лечения.

Цели работы.

1 .Спектральные исследования спинномозговой жидкости человека с целью выявления особенностей ее состава при нейрохирургических заболеваниях и в период выздоровления.

2.Изучение эффективности связывания лекарственного препарата «Эссенциале Н» с клетками крови человека методом УФ абсорбционной спектроскопии.

Задачи исследования.

1.Выделить и проанализировать перекрывающиеся полосы поглощения соединений, входящих в состав спинномозговой жидкости.

2.Выявить изменения состава спинномозговой жидкости в зависимости от вида и тяжести заболевания на основе спектральных данных.

3.Определить оптимальные условия при экспозиции препарата «Эссенциале Н» с клетками крови методом УФ абсорбционной спектроскопии.

Методы исследования. Основным методом исследования являлась УФ абсорбционная спектроскопия. Дополнительно использовался хемилюминес-центный метод.

Объекты исследования. Спинномозговая жидкость человека, надоса-дочная жидкость крови человека, лекарственный препарат «Эссенциале Н».

Научная новизна.

1, Впервые использована методика исследования слабоструктурированных УФ спектров поглощения спинномозговой жидкости, позволяющая выявлять характерные полосы, связанные с патологией. 7

2. Впервые изучено изменение УФ спектров поглощения спинномозговой жидкости в зависимости от клинических проявлений различных нейрохирургических заболеваний. Проведено сопоставление спектров поглощения с клиническими проявлениями заболеваний.

3. Впервые использован метод УФ абсорбционной спектроскопии для определения времени экспозиции лекарственного препарата «Эссенциале Н» с клетками крови.

Практическая значимость. Предложенная методика, основанная на измерениях УФ спектров поглощения, с последующими обработками на спектрально-вычислительном комплексе, позволяет выявлять изменения в составе спинномозговой жидкости при нейрохирургических заболеваниях. Высокая чувствительность методики даёт возможность использовать её для регистрации малых повреждений центральной нервной системы. Это позволяет более детально оценивать и интерпретировать состояния качественных свойств спинномозговой жидкости у нейрохирургических больных.

Результаты исследований могут быть использованы для решения задач направленного транспорта лекарственных препаратов и повышения эффективности лечения. В частности, данная методика позволяет качественно и количественно определять содержание лекарственных препаратов в биологических жидкостях, даже если концентрации препарата ничтожно малы.

Основные защищаемые положения.

1. В спектрах поглощения спинномозговой жидкости человека обнаружена характерная структура, связанная с электронными переходами в амид-ной группе белков.

2. Увеличение поглощения спинномозговой жидкости в области 210-230 нм связано с усилением п0—>тг* перехода в амидной группе при изменении структуры белка.

3. На основе спектроскопического исследования надосадочной жидкости крови выявлена нелинейная зависимость связывания препарата «Эссенциале Н» с клетками крови от времени экспозиции и установлено оптимальное время связывания «Эссенциале Н» с клетками крови.

Апробация работы. Основные результаты диссертации докладывались на VII Всероссийской школе-семинаре «Люминесценция и сопутствующие явления» (Иркутск, 2001), III международном съезде нейрохирургов (Санкт-Петербург, 2002), VI Байкальской молодежной научной школе по фундаментальной физике «Волновые процессы в проблеме космической погоды» (Иркутск, 2003), VII Байкальской молодежной научной школе по фундаментальной физике «Взаимодействие полей и излучения с веществом» (Иркутск, 2004), X Байкальской молодежной научной школе по фундаментальной физике «Современные проблемы в астрофизике и физике космической плазмы» (Иркутск, 2007), Феофиловском симпозиуме «Спектроскопия кристаллов, активированных редкоземельными ионами и ионами переходных металлов» (Иркутск, 2007), XI Международной школе-семинаре по люминесценции и лазерной физике (Иркутск, 2008).

Внедрение результатов работы в практику.

Результаты научных исследований внедрены в практику работы отделения нейрохирургии Иркутского научно-исследовательского института травматологии и ортопедии и ГУЗ «Областной онкологический диспансер» города Иркутска.

Публикации и личный вклад автора.

По результатам исследований в соавторстве и лично автором опубликовано 11 работ, из них 4 - в журналах, рекомендованных ВАК для публикации научных работ. Получено решение о выдаче патента на изобретение от 09 февраля 2010 года по заявке №2009118629/14 «Способ лечения анемии при химиолучевой терапии».

Большая часть экспериментов и расчетов выполнена автором самостоятельно.

Структура и объем диссертации.

Диссертационная работа состоит из введения, 4 глав, заключения и списка литературы из 91 наименования, из которых 40 зарубежных и 51 и отечественных авторов. Работа изложена на 108 страницах, содержит 6 таблиц и 39 рисунков.

Заключение диссертации по теме «Физика конденсированного состояния», Семибратова, Виктория Александровна

Выводы главы 4

В результате изучения фармакокинетики препарата «Эссенциале Н» методом УФ абсорбционной спектроскопии получены следующие результаты:

1. В результате математической, обработки в спектре поглощения «Эссенциале Н» выделены характерные полосы, максимумы которых находятся на длинах волн <210, 247 нм, 260 нм 285 и 351 нм. Это согласуется с литературными данными, в которых сообщается о полосах поглощения в области 213, 225, 239, 253 нм, 260, 280-нм, характерных для фосфолипидов.

2. Для характеристики эффективности связывания «Эссенциале Н» с клетками крови (эритроцитами) разработана методика обнаружения препарата в надосадочной жидкости. Методика основана на измерениях УФ спектров поглощения надосадочной жидкости крови, содержащей «Эссенциале Н» с последующей математической обработкой спектров, что позволяет выявлять характерные полосы поглощения «Эссенциале Н», присутствующие в спектре поглощения надосадочной жидкости.

3. Изучена степень связывания «Эссенциале Н» с клетками крови в зависимости от времени экспозиции в термостате от 10 с до 60 мин. При анализе УФ спектров поглощения надосадочной жидкости крови, содержащей «Эсенциале Н» выявлено, что при экспозиции препарата с клетками крови в течение 10 мин достигалось наибольшее связывание «Эссенциале Н» с клетками крови.

4. Результаты УФ спектроскопических исследований согласуются с клиническими данными, в которых сообщается об улучшении биохимических показателей и уменьшении количества осложнений у онкологических больных при экстракорпоральной фармакокоррекции с «Эссенциале Н» при экспозиции препарата с клетками крови в течение 10 минут.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Спинномозговая жидкость является внетканевой жидкостью с особыми свойствами, однако она тесно связана с внутритканевой жидкостью. Поэтому все биологические и физиологические изменения, возникающие в организме и изменяющие работу нервного барьера, в той или иной степени отражаются на составе спинномозговой жидкости [1, 58, 59]. Так, при различных повреждениях позвоночника возникают ликвородинамические расстройства: нарушается циркуляция и изменяется давление спинномозговой жидкости. Страдают основные функции спинномозговой жидкости — транспортная, экскреторная, механическая и функция специфического защитного иммунобиологического барьера. Исследование спинномозговой жидкости позволяет подтвердить наличие ишемии и воспаления с возможностью определения блока субарахноидального пространства [54, 55]. Однако, исследования стандартными биохимическими методами не дают полную информацию о состоянии нервных структур на момент исследования. Так как локально текущий воспалительный процесс не всегда сопровождается повышением белка в спинномозговой жидкости, в то время как диагностика этого состояния важна при выборе тактики лечения [56, 57].

Методы оптической спектроскопии имеют большое значение среди всех современных методов диагностики [8, 9, 44]. Однако, использование физических спектральных методов для характеристики качественных свойств спинномозговой жидкости у нейрохирургических больных занимает скромное место в общем потоке исследований [7, 25, 29, 37, 51]. Трудности использования методов ИК, ЯМР и УФ спектроскопии связаны с широкими перекрывающимися полосами поглощения соединений, входящих в состав спинномозговой жидкости [11, 12, 13, 32, 44, 45].

Метод УФ абсорбционной спектроскопии позволяет получить полную информацию обо всех органических соединениях, входящих в состав спинномозговой жидкости [44, 45]. К преимуществам метода, кроме информативности, следует отнести высокую чувствительность и простоту проведения

94 исследования. Поэтому для изучения спинномозговой жидкости с целью диагностики изменения состава при нейрохирургических заболеваниях и в период выздоровления был выбран метод УФ спектроскопии. Несмотря на то, что этот метод использовался ранее для исследования спинномозговой жидкости, детального анализа полос поглощения не выявлено. Кроме того, регистрация спектров поглощения спинномозговой жидкости ограничивалась диапазоном 240-300 нм, где наблюдалась широкая полоса в области 280 нм [47,48, 49, 50,51].

В результате проведенного исследования спинномозговой жидкости разработана методика анализа слабоструктурированных спектров поглощения спинномозговой жидкости в УФ области (200-360 нм). Анализ полосы поглощения в области 200-240 нм показал, что плавно убывающее поглощение происходит по экспоненциальному закону. Это позволяет смоделировать эту полосу соответствующей экспоненциальной функцией и затем вычесть ее из исходного спектра поглощения спинномозговой жидкости. В результате наблюдаются дополнительные полосы поглощения, максимумы которых часто находятся на длинах волн 208, 214, 219, 222 и 226 нм. При исследовании формы полосы в области 280 нм выявлено, что полоса имеет симметричную гауссову форму, что дает возможность моделировать ее соответствующей функцией, а затем вычитать из исходного спектра. В результате в области основной полосы удается наблюдать небольшие поглощающие компоненты, максимумы которых находятся на длинах волн 273, 277 и 280 нм. По литературным данным выделенные полосы поглощения соответствуют тирозину, триптофану, фенилаланину и др. аминокислотам, входящим в состав белков [44, 45, 46].

Для выявления спектральных особенностей поглощения в норме й при заболевании использовался усредненный спектр поглощения группы условно здоровых людей. Сравнение спектров поглощения спинномозговой жидкости в норме и при заболевании показало, что в случае воспалительного процесса к возрастает до 5,3 раз в области 220 нм и до 2,5 раз в области 280 нм.

95

Изменение концентрации поглощающих компонентов спинномозговой жидкости относительно нормы в области 220 нм составляет до 6,5 раз, а в области 280 нм - до 3,2 раз. Этот результат согласуется с биохимическими данными, в которых показано изменение концентрации общего белка по биохимическим данным составило от 3,41 до 0,73 раз. Поглощение в области 280 нм обусловлено поглощением ароматических аминокислот (в основном, тирозина и триптофана), входящих в состав белков [39, 40, 45].

В области 220 нм концентрация поглощающих компонентов возрастает от 6,55 до 1,04 раз относительно нормы. В этом случае вклад в поглощение связан не только с аминокислотами белков, но и с конформационными изменениями в структуре белков спинномозговой жидкости, проявляющимися при заболевании [39, 40, 41]. Так, поглощение в области 210-240 нм определяется присутствием аминокислот, а также наличием водородных связей, взаимодействий, зависящих от конформации белка и содержания в молекуле а-спиралей.

При травмах нарушается проницаемость гематоэнцефалического барьера, что приводит к появлению в спинномозговой жидкости железосодержащих белков крови, в частности гемоглобина [54, 55]. Анализ спектров поглощения спинномозговой жидкости пациентов с нейрохирургическими заболеваниями в видимой области позволил выявить характерные полосы, максимумы которых находятся на следующих длинах волн: 398, 428, 542, 578 нм. Полосы поглощения в области 428, 542 и 578 нм соответствуют производным гемоглобина - оксигемоглобину и метгемоглобину [62, 64]. Абсорбционный метод исследования спектров поглощения спинномозговой жидкости, предложенный выше, позволяет использовать его для целей диагностики и прогнозирования течения болезней. Сравнение спектров поглощения спинномозговой жидкости в норме и при заболевании показало, что в случае присутствия в спинномозговой жидкости крови коэффициент поглощения возрастает до 10 раз в области 400 нм, до 8 раз в области 420 нм и до 9 раз в области 540, 580 нм.

В результате воспалительного процесса, протекающего в спинномозговой жидкости при различных повреждениях позвоночника, увеличивается выработка клетками активных форм кислорода. Это приводит к накоплению поврежденных оснований ДНК, продуктов окисления белков и липидов [66, 70, 71]. Для диагностики течения воспалительного процесса в спинномозговой жидкости использовался метод окислительной хемилюминесценции. Для проведения исследования разработана методика, основанная на добавлении перекиси водорода. В результате исследования хемилюминесценции, выявлено, что при нормальном содержании белка в спинномозговой жидкости время затухания находится в пределах 4 мин; пиковая интенсивность хеми

1 7 люминесценции 1,38-10 фот/с при суммарном потоке фотонов 1,25-10 фот. При низком содержании белка в спинномозговой жидкости время затухания находится в пределах 3,7 мин; пиковая интенсивность хемилюминесценции

5 7 увеличивается до 1,5-10 фот/с при суммарном потоке фотонов 3,7-10 фот. При высоком содержании белка время затухания увеличивается до 40 мин. о

Пиковая интенсивность хемилюминесценции снижается до 8,0-10 фот/с при суммарном потоке фотонов 1,05-107 фот.

В результате исследований наблюдались заметные изменения спектров поглощения спинномозговой жидкости в УФ и видимой области в зависимости от вида и тяжести заболевания. Предложенная выше методика, основанная на измерениях с последующими обработками на спектрально-вычислительном комплексе, позволяет выявлять характерные полосы поглощения спинномозговой жидкости, связанные с заболеванием. Высокая чувствительность методики даёт возможность использовать её для регистрации малых повреждений центральной нервной системы.

Результаты УФ абсорбционных исследований косвенно согласуются с выводами, полученными при изучении кинетики хемилюминесценции и с исследованием влияния перекисного окисления на спектры поглощения спинномозговой жидкости.

Метод УФ спектроскопии имеет широкие возможности для анализа биологических жидкостей, т.к. большинство органических соединений имеет полосы поглощения в УФ области. Поэтому этот метод использовался для изучения фармакокинетики лекарственного препарата «Эссенциале Н». Одним из актуальных назначений «Эссенциале Н» является восстановление функций печени после химиотерапевтического лечения у онкологических больных [79, 90, 91]. В литературных источниках и инструкции к препарату описаны рекомендации по введению препарата с кровью [81], однако конкретных указаний на время его экспозиции с клетками крови не имеется.

Исследование проводилось с клеточной массой крови, в которую добавляли «Эссенциале Н», полученная смесь выдерживалась в термостате при 37°С в течение от 10 с до 60 мин. В течение этого времени происходило связывание препарата с клетками крови. Затем смесь центрифугировалась. Предполагалось, что связанный с клетками крови «Эссенциале Н» выпадает в осадок после центрифугирования, а несвязанный препарат содержится в на-досадочной жидкости. Поэтому дальнейшее исследование проводили с надо-садочной жидкостью крови, содержащей «Эссенциале Н».

Для определения эффективности связывания «Эссенциале Н» с клетками крови разработана методика обнаружения препарата в надосадочной жидкости по УФ спектрам поглощения. Спектр поглощения «Эссенциале Н» имеет характерные полосы поглощения, максимумы которых находятся на длинах волн <210, 247 нм, 260 нм 285 и 351 нм и не перекрываются с полосами поглощения надосадочной жидкости (Хтах= 282 нм). В спектре поглощения надосадочной жидкости, взятой после центрифугирования смеси клеток крови и «Эссенциале Н» и выдержанной в термостате, обнаружены характерные полосы поглощения препарата «Эссенциале Н». Относительное увеличение концентрации «Эссенциале Н» для времени экспозиции 1 час составило 39,0 раз; при 30 мин - 19,5 раз; при 20 мин -11,8 раз; при 10 мин - 1,3 раза; при 10 с - 6,3 раза.

Следовательно, при экспозиции в течение 10 мин достигалось наибольшее связывание «Эссенциале Н» с клетками крови. Результаты УФ спектроскопических исследований согласуются с клиническими данными [90, 91], в которых сообщается об улучшении биохимических показателей, уменьшении количества осложнений и сокращении срока лечения онкологических больных при экстракорпоральной фармакокоррекции с «Эссенциале Н» при экспозиции препарата с клетками крови в течение 10 минут.

В заключение, следует отметить, что новые методы исследования, возникшие на стыке клинической медицины и физики с применением компьютерной техники, позволяют более детально оценивать и интерпретировать состояния качественных свойств спинномозговой жидкости у нейрохирургических больных. Разработка физических методов анализа данных позволяет оптимизировать и совершенствовать подходы к лечению заболеваний.

Список литературы диссертационного исследования кандидат физико-математических наук Семибратова, Виктория Александровна, 2010 год

1. Фридман, А. П. Основы ликворологии / А. П. Фридман. Л. : Медицина, 1971.-647 с.

2. Маршалл, В. Дж. Клиническая биохимия / В. Дж. Маршалл ; пер. с англ. под ред. Н. И. Новикова. М. - СПб. : Бином - Невский диалект, 2000.-367 с.

3. Клиническая биохимия / под ред. В. Ткачука. Изд. 2-е доп. - М. : Гэотар-мед, 2004. - 515 с.

4. Клинический диагноз лабораторные основы / под ред. В. Меньшикова. - М. : Лабинформ, 1997. - 267 с.

5. Watson, М. Clinical utility of biochemical analysis of cerebrospinal fluid / M. Watson, M. Scott // Clinical chemistry. 1995. - Vol. 41, № 3. - P. 343-360.

6. Intraoperative values of S-100 protein, myelin basic protein, lactate, and albumin in the CSF and serum of neurosurgical patients / J. Vries et al. // Journal of neurology and neurosurgery psychiatry. 2001. - Vol. 71, № 5. -P. 671-674.

7. Юрищев, E, П. Клиническая ликворология в нейрохирургии / Е. П. Юрищев, И. Н. Вяльцева, О. А. Гаджиева // Клиническая лабораторная диагностика. 1995. - № 6. - С. 105-107.

8. Кантор, Ч. Биофизическая химия / Ч. Кантор, П. Шиммел ; пер. с англ. под ред. А. А. Богданова, Ю. С. Лазуркина, М. Д. Франк-Каменецкого. М. : Мир, 1984. - Т. 2. - 497 с.

9. Вилков, Л.В. Физические методы исследования в химии Структурные методы и оптическая спектроскопия / Л. В. Вилков, Ю. А. Пентин. -М. : Высшая школа, 1987. - 366 с.

10. Ю.Бенуэлл, К. Основы молекулярной спектроскопии / К. Бенуэлл. — М. : Мир, 1985. 384 с.

11. Hall, J. W. Near-infrared spectrophotometry: a new dimension in clinical chemistry / J. W. Hall, A. Pollard // Clinical chemistry. 1992. - Vol. 38, №9.-P. 1623-1631.

12. IR spectroscopic study of structure of serum albumin in pathological processes / A. I. Ivanov et al. // Journal of applied spectroscopy. 1991. -Vol. 54, №3.-P. 276-279.

13. Chapman, D. Infrared spectroscopy of lipids / D. Chapman // Journal of the American oil chemists' society. 1965. - Vol. 42, № 5. - P. 353-371.

14. Infrared spectroscopy: A new diagnostic tool in Alzheimer disease / M. Griebe et al. // Neuroscience Letters. 2007. - Vol. 420, № 1. - P. 29-33.

15. Functional and structural properties of lipid-associated apolipoprotein J (clusterin) / M. Calero et al. // Biochemistry. 1999. - Vol. 344. - P. 375383.

16. Carbon dioxide in tissues, cells, and biological fluids detected by FTIR spectroscopy / C. P. Schultz et al. // Physical chemistry. 1996. - Vol. 100, № 16.-P. 6845-6848.

17. Кэри, П. Применение спектроскопии КР и РКР в биохимии / П. Кэри. М.: Мир, 1985.-272 с.

18. Набиев, И.Р. Гигантское комбинационное рассеяние и его применение к изучению биологических молекул / И. Р. Набиев, Р. Г. Ефремов, Г. Д. Чуманов // Успехи физических наук. 1988. - Т. 154, К» 3. — С. 460-496.

19. Podstawka, E. P. Part I: Surface-enhanced Raman spectroscopy investigation of amino acids and their homodipeptides adsorbed on colloidal silver / E. P. Podstawka, Y. Ozaki, L. M. Proniewicz // Applied spectroscopy. — 2004. Vol. 58, № 5. - P. 570-580.

20. Nanofluidic biosensing for Amyloid detection using surface enhanced Raman spectroscopy / I-H. Chou et al. //Nano letters. 2008. - Vol. 8, № 6.-P. 1729-1735.

21. Biological applications of anti-stokes Raman spectroscopy: quantitative analysis of glucose in plasma and serum by a highly sensitive multichannel Raman spectrometer / X. Dou et al. // Applied spectroscopy. 1996. - Vol. 50, № 10.-P. 1301-1306.

22. Количественный анализ а-аминокислот в моче нейрохирургических больных методом тонкослойной хроматографии на пластинках «Арм-сорб» / В. Н. Майстренко и др. // Вестник Башкирского университета.- 2008. Т. 13, №2. - С. 265-269.

23. Liquid chromatographic assay of dityrosine in human cerebrospinal fluid / M. Abdelrahim et al. // Journal of chromatography biomedical applications.-1997.-Vol. 696, №2.-P. 175-182.

24. Tichy, J. Spectrum of total fatty acids in cerebrospinal fluid determined by gas chromatography / J. Tichy, I. Skorkovska , J. Base // Chromatography.- 1979.-Vol. 162, №2.-P. 185-96.

25. Браун, Д. Спектроскопия органических веществ / Д. Браун, А. Флойд, М. Сейнзбери ; пер. с англ. под ред. А. А. Кирюшкина. М. : Мир, 1992.-305 с.

26. Дэроум, Э. Современные методы ЯМР для химических исследований / Э. Дэроум ; пер. с англ. Ю. М. Демина, В. А. Черткова под ред. Ю. А. Устынюка. -М. : Мир, 1992. 401 с.

27. Хауссер, К. X. ЯМР в медицине и биологии: структура молекул, томография, спектроскопия in vivo / К. X. Хауссер, X. Р. Кальбитцер ; пер. с нем. 3.3. Рожковой, под ред. С. М. Рябченко. — Киев : Наукова думка, 1993.-261 с.

28. Observation of resolved glucose signals in !H NMR spectra of the human brain at 4 Tesla / R. Gruetter et al. // Magnetic resonance in medicine. -1996.-Vol. 36, № l.-P. 1-6.

29. Direct measurement of brain glucose concentrations in humans by 13C NMR spectroscopy / R. Gruetter et al. // Biophysics. 1992. - Vol. 89. - P. 1109-1112.

30. Competitive binding of bismuth to transferrin and albumin in aqueous solution and in blood plasma / H. Sun et al. // Biological chemistry. 2001. -Vol. 276, № 12. - P. 8829-8835.

31. Standardized method for high-resolution 'H-NMR of cerebrospinal fluid / R. A. Wevers et al. // Clinical chemistry. 1995. - Vol. 41; № 5. - P. 744751.

32. High-resolution *H NMR spectroscopy of cerebrospinal fluid in spinal diseases / F. Koschorek et al. // Neurosurgical review. 1993. - Vol. 16, № 4. -P. 307-315.

33. Quantification of 'H NMR spectra of human cerebrospinal fluid: a protocol based on constrained total-line-shape analysis / N. M. Jukarainen et al. // Metabolomics. 2008. - Vol. 4, № 2. - P. 150-160.

34. Демченко, А. П. УФ спектрофотометрия и структура белков / А. П. Демченко. — Киев : Наукова думка, 1981. — 208 с.

35. Tompa, P. Structure and function of intrinsically disordered proteins / P. Tompa. London-New York: Taylor & Francis Group, 2010.-362 p.

36. Волькенштейн, М. В. Биофизика / М. В. Волькенштейн. М. : Наука, 1988.-593 с.

37. Биополимеры / под ред. Ю. Иманиси ; пер. с японского М. К. Овечки-на. М. : Мир, 1988. - 544 с.

38. Гиллем, А. Электронные спектры поглощения органических веществ / А. Гиллем, Е. Штерн ; пер. с англ. под ред. JI. А. Блюменфельда. М. : Мир, 1957.-386 с.

39. Фрайфельдер, Д. Физическая биохимия. Применение физико-химических методов в биохимии и молекулярной биологии / Д. Фрай-фельдер. М.: Мир, 1980. - 582 с.

40. Карнаухова, JI. И. УФ-спектроскопия биологических макромолекул (учебно-методическое пособие) / Л.И. Карнаухова, Е.Н. Тупицын. -Саратов: изд-во Саратовского гос. ун-та, 2002. 15 с.

41. Saidel, L. J. The absorption spectra of amino acids in the region two hundred to two hundred and thirty millimicrons / L. J. Saidel,, A. R. Goldfarb, S. Waldman // Biological chemistry. 1952. - Vol. 197. - P. 285-291.

42. Skinner, E. F. An investigation of the absorption of ultraviolet light by cerebrospinal fluid in various disease states / E. F. Skinner // Journal of neurology and psychopathology. 1937. - Vol. 17. - P. 213-240.

43. Hack, M. N. The ultraviolet absorption spectrum of human cerebrospinal fluid / M. N. Hack // Biochemistry. 1947. - Vol. 41, № 4. - P. 522-524.

44. Sophian, L. H. Ultraviolet absorption spectra of normal cerebrospinal fluid / L. H. Sophian, V. J. Connolly // Physical chemistry. 1951. - Vol. 55, № 5. -P. 712-716.

45. Studies in difference spectra of cerebrospinal fluid / C. W. Kreke et al. // Clinical chemistry. 1966. - Vol. 12, № 3. - P. 165-174.

46. Фок, М. В. Разделение сложных спектров на индивидуальные полосы при помощи обобщенного метода Аленцева / М. В. Фок // Труды ФИ-АН СССР. 1972. - Т. 59. - С. 3-24.

47. Новые физико-химические методы исследования органических соединений / Б. В. Иоффе и др.. Л. : Изд-во ЛГУ, 1984. - 240 с.

48. Нейротравматология. Справочник / Под ред. А. Н. Коновалова, Л. Б. Лихтермана, А. А. Потапова. М.: Вазар-Ферро, 1994. - 416 с.

49. Mirovsky, Y. Eccentric compression of the spinal canal causing dominantly contralateral-side symptoms / Y. Mirovsky, N. Halptrin // Journal of spinal disorders.-2000.-Vol. 13, №2.-P. 174-177.

50. Эйнштейн, Э. Белки мозга и спинномозговой жидкости в норме и патологии / Э. Эйнштейн. М. : Мир, 1988. - 280 с.

51. Мошкин, А. В. Клиническое значение биохимического исследования спинномозговой жидкости / А. В. Мошкин, Л. М. Бурмакова // Лаборатория. 1997. - №7. - С. 3-6.

52. Майзелис, М. Я. Гематоэнцефалический барьер и его регуляция / М. Я. Майзелис. -М. : Медицина, 1973. 181 с.

53. Bradbury, М. The concept of a blood brain barrier / M. Bradbury. - New York: Wiley, 1979.-465 p.

54. Промыслов, M. Ш. Биохимические исследования при травме и опухолях головного мозга / М. Ш. Промыслов // Сб. науч. тр. Института нейрохирургии им. Бурденко. М., 1981. - С. 140-143.

55. Перутц, М. Молекула гемоглобина / М. Перутц // Молекулы и клетки. -М., 1966.-С.7-29.

56. Блюменфельд, Л.А. Гемоглобин / Л. А. Блюменфельд // Соросовский образовательный журнал. 1998. - №4. - С. 34-38.

57. Ногескег, В. L. The absorption spectra of hemoglobin and its derivatives in the visible and in the near infra-red region / B. L. Horecker // Journal of biological chemistry. 1943.-№148.-P. 173-183.

58. Zijistra, W. G. Absorption spectra of human fetal and adult oxyhemoglobin, de-oxyhemoglobin, carboxyhemoglobin and methemoglobin / W. G. Ziji-stra, A. Buusrma, W. P. Meeuwseen-van der Roest // Clinical chemistry. -1991.-Vol. 37, №9. -P. 1633-1638.

59. Владимиров, Ю. А. Активированная хемилюминесценция и биолюминесценция как инструмент в медико-биологических исследованиях / Ю. А. Владимиров // Соросовский образовательный журнал. 2001. - Т. 7, № 1.-С. 16-23.

60. Владимиров, Ю. А. Свободные радикалы и клеточная хемилюминесценция / Ю. А. Владимиров, Е. В. Проскурнина // Успехи биологической химии. 2009. - Т. 49. - С. 341-388.

61. Баренбойм, Г. М. Люминесценция биополимеров и клеток / Г. М. Ба-ренбойм, А. Н. Доманский, К. К. Туроверов. М. : Наука, 1966. - 233 с.

62. Рощупкин, Д. И. Кинетические особенности хемилюминесценция лю-минола, вызванной биогенными хлораминовыми соединениями / Д. И. Рощупкин, Н. А. Чудина, М. А. Мурина // Биофизика. 2002. - Т. 47, №2.-С. 211-218.

63. Бабко, А. К. Хемилюминесцентный анализ / А. К. Бабко, Л. И. Дубо-венко, Н. М. Луковская. Киев : Техника, 1966. - 250 с.

64. Examination of peroxide chemiluminescence of cerebrospinal fluid in spinal cord tumors / N. Okladnikova et al. // Clinical neurology and neurosurgery. 1997. - Vol. 99, № l.-P. 176-177.

65. Исследование процессов свободнорадикального окисления липидов в ликворе детей с гидроцефалией / И. А. Арефьева и др. // Вопросы медицинской химии. 1998. - Т. 44, №6. - С. 388-393.

66. Колмакова, Т. С. Антиоксидантные свойства ликвора при дегенеративных заболеваниях мозга / Т. С. Колмакова, О. Б. Смирнова, Е. И. Белякова // Нейрохимия. 2010. - Т. 27, № 1. - С. 47-52.

67. Haase, G. Ascorbic acid and copper in linoleate oxidation. Measurement of oxidation Ьуи ultraviolet spectrophotometry and the thiobarbituric acid test / G. Haase, W. L. Dunkley // Journal of lipid research. 1969. - Vol. 10. - P. 555-560.

68. Чазов, E. И. Направленный транспорт лекарств: проблемы и перспективы / Е. И. Чазов, В. Н. Смирнов, В. П. Торчилин // Журнал Всесоюзного химического общества им. Д.И. Менделеева. — 1987. № 5. — С. 485-487.

69. Горбачев, В. И. Экстракорпоральная фармакотерапия в лечении инфекционных осложнений: моногр. / Под ред. В. И. Горбачева, Т. В. Мухое-довой, Н. Г. Корнилова. Иркутск, 2009. - 135 с.

70. Ушкалова, Е. А. Место эссенциальных фосфолипидов в современной медицине / Е. А. Ушкалова // Фарматека. 2003. - № 10 (73). - С. 1015.

71. Бабак, О. Я. Первый клинический опыт применения препарата «Эссен-циале Н» на Украине / О. Я. Бабак // Consilium medicum. 2001. - Т. 3, № 3. - С. 45-49.

72. Бурбелло, А. Т. Современные лекарственные средства / А. Т. Бурбелло,

73. А. В. Шабров, П. П. Денисенко. СПб.: Нева, 2006. - 896 с.

74. Генинг, Т. П. Фармакокинетика антибиотика, вводимого в организм в клеточных носителях / Т. П. Генинг, К. К. Мануйлов // Антибиотики и химиотерапия. 1991. - № 9. - С. 19-20.

75. Вышковский Г.Л. Энциклопедия лекарств (Серия Регистр лекарственных средств России). 2004. - М., №12. - С.1037-1038.

76. Биохимия человека: В двух томах. Том 2 / Р. Марри и др. ; пер. с англ. М. Д. Гроздова [и др.]. М. : Мир, 2004. - 414 с.

77. Chiral molecular self-assembly of phospholipid tubules: A circular dich-roism study / M. S. Spector et al. // PNAS. 1996. - Vol. 93, № 23. - P. 12943-12946.

78. Participation of 7E-electrons of phospholipid molecules in absorption of ultraviolet light in the range of 260-280 nm / S. Zabelinskii et al. // Journal of evolutionary biochemistry and physiology. 2005. - Vol. 41, № 3. - P. 296-300.

79. Фрагменты функциональных белков в переживающей культуре эритроцитов человека / М. М. Филиппова и др. // Биоорганическая химия. 2008. - Т. 34, № 2. - С.145-155.

80. Пупкова, В. И. Определение гемоглобина в крови: информ.-метод. Пособие / В. И. Пупкова. Кольцово, 2001. - 18 с.

81. Подход к определению интенсивности внутрисосудистого гемолиза / И. А. Шперлинг и др. // Сибирский медицинский журнал. — 2006. — Т. 21, № 1,-С. 28-30.