Топоизомераза II и ее участие в незаконной рекомбинации: Эксперименты в модельной системе тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.03, кандидат биологических наук Иванова, Ольга Николаевна

• Иванова, Ольга Николаевна
• кандидат биологических наук
• 2006

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Иванова, Ольга Николаевна

Содержание.:.

Список сокращений и терминов, использованных в работе.

Введение.

Обзор литературы.

Точки разрывов при хромосомных перестройках.

Хромосомные перестройки и ассоциированные с ними заболевания.

Группы химерных белков.

Кластеры точек разрыва.

Механизм рекомбинации.

Структура белка и кажущаяся кластеризация точек разрыва.

Роль ядерной архитектуры в образовании хромосомных перестроек.

Структура и механизм действия топоизомераз II типа.

Основные свойства топоизомераз II.

Структура белка.

Механизм действия.

Клеточная роль топоизомеразы II.

Репликация.

Транскрипция.

Конденсация хромосом.

Рекомбинация.

Ингибирование топоизмеразы II.

Постановка задачи и методические подходы.

Материалы и методы.

Приготовление и трансформация компетентных клеток Е. coli.

Трансформация бактериальных клеток.

Манипуляции с плазмидной ДНК.

Полимеразная цепная реакция.

Выделение бакмидной ДНК из бактерий.

Положительная селекция клонов, содержащих KIL.

Декатенация плазмид.

Индукция незаконной рекомбинации in vitro.

Трансфекция.

Выделение плазмидной ДНК из эукариотических клеток.

Радиоактивное мечение олигонуклеотидов и гибридизация их с ДНК.

Обработка ядер микрококковой нуклеазой и Саузерн-гибридизация.

Конструирование плазмид.

Результаты исследования и их обсуждение.

Создание модельной системы для количественной оценки частоты незаконной рекомбинации.

Проверка функционирования гена KIL.

Декатенирование модельных конструктов.72.

Количественная оценка частоты незаконной рекомбинации.

Индукция незаконной рекомбинации in vitro.

Эксперименты in vivo.

Эписомная репликация модельных плазмид в эукариотических клетках.

Индукция незаконной рекомбинации in vivo и влияние ингибиторов.

Предположительная модель действия топоизомеразы II.

Картирование участков разрыва в рекомбинантных плазмидах.81"

Нуклеосрмный статус трансфецированных модельных плазмид.

Выводы.

Заключение диссертации по теме «Молекулярная биология», Иванова, Ольга Николаевна

1. Создана тест-система для количественной оценки частоты

незаконной рекомбинации в живых клетках. 2. Продемонстрировано, что подавление активности

топоизомеразы II в живых клетках стимулирует процесс незаконной

рекомбинации. 3. Показано, что в живых клетках основная часть событий

незаконной рекомбинации, опосредованной топоизомеразой П, происходит

по индуьщионному механизму. 4. Продемонстрировано, что на уровне первичной структуры ДНК

Ьсг не несут никаких сигналов, определяющих их повышенную

рекомбиногенность.