Сравнительный анализ отечественных и зарубежных подходов к проблеме замораживания спермы жеребцов тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.13, кандидат биологических наук Васильева, Ольга Валентиновна

• Васильева, Ольга Валентиновна
• кандидат биологических наук
• 2007

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Васильева, Ольга Валентиновна

ВВЕДЕНИЕ

ОГЛАВЛЕНИЕ

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Появление и развитие искусственного осеменения лошадей и других с/х животных.

1.2. Развитие методов введения спермы при искусственном осеменении лошадей и других с/х животных.

1.3. Влияние дозы вводимой спермы на зажеребляемость кобыл.

1.4. Факторы, которые влияют на оплодотворяющую способность спермы жеребцов после замораживания - оттаивания.

1.5. Методы замораживания спермы жеребцов.

1.5.1. Методы замораживания спермы жеребцов с использованием центрифугирования.

1.6. Методы замораживания спермы жеребцов в России.

1.6.1. Технология замораживания спермы в больших объёмах (15-20мл).

1.6.2. Технология замораживания спермы жеребцов объёмом 5-6мл с применением центрифугирования.

1.6.3. Технология замораживания спермы жеребцов объёмом 5мл с применением диализа.

Глава 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЙ.

2.1. Методика получения, оценки, разбавления и подготовки спермы к замораживанию.

2.2. Сравнение разных технологий замораживания спермы.

2.2.1. 1 этап - разбавление.

2.2.2. 2 этап - удаление надосадочной жидкости.

2.2.3. 3 этап - способы фасовки.

2.3. Изучение морфологии сперматозоидов разных фракций центрифугата.

2.4. Сравнение оплодотворяющей способности спермы жеребцов, замороженной по разным технологиям.

2.5. Испытание новых вариантов и технологических приёмов замораживания спермы в малых объёмах.

2.6. Сравнение результативности разных объёмов в осеменении кобыл.

Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.

3.1. Сравнение разных технологий замораживания спермы жеребцов.

3.1.1. 1 этап - разбавление.

3.1.2. 2 этап - удаление надосадочной жидкости.

3.1.3. 3 этап - способы фасовки.

3.2. Изучение морфологии сперматозоидов разных фракций спермы жеребцов после центрифугирования.

3.3 Сравнение оплодотворяющей способности спермы, криоконсервированной по разным технологиям.

3.4. Испытание новых вариантов и технологических приёмов замораживания спермы в малых объёмах.

3.5. Сравнение результативности разных объёмов в осеменении кобыл.

3.6. Сравнительный анализ экономической эффективности разных технологий замораживания спермы жеребцов.

Глава 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ.

ВЫВОДЫ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Сравнительный анализ отечественных и зарубежных подходов к проблеме замораживания спермы жеребцов»

Замораживание спермы жеребцов-производителей с эффективностью можно использовать в селекционно-племенной работе. Причём этот эффект заключается не только в рациональном использовании генетического потенциала наиболее ценных животных. Большое значение этот метод приобретает в связи с тем, что ряд пород и линий находится под угрозой исчезновения.

В коневодстве метод замораживания позволяет создавать запасы спермы от ценных жеребцов, сохранять её десятки лет, транспортировать на любые расстояния и получать потомство даже после смерти производителей. Кроме того, открываются возможности обмена спермой жеребцов высокого класса с зарубежными странами.

Практическое применение замороженной спермы жеребцов невелико из-за нестабильности результатов, трудоёмкости и дороговизны метода. Кроме того, устойчивость к замораживанию спермы часто зависит от индивидуальных особенностей производителей и варьирует в больших пределах. Сперма отдельных жеребцов совершенно не выдерживает замораживания.

В нашей стране и за рубежом разработано несколько технологий по замораживанию спермы жеребцов.

Российские и зарубежные технологии замораживания спермы жеребцов при многих общих элементах, имеют и значительные различия. Основным таким отличием является объём дозы осеменения. Зарубежные исследователи пошли по пути, аналогичному осеменению крупного рогатого скота. Они рекомендуют проводить осеменение кобыл в миниобъёмах, но при этом уделяют большое внимание количеству подвижных сперматозоидов в дозе.

Российские учёные подходят к решению данного вопроса иначе. Учитывая, что для кобыл физиологичен большой объём спермы, как это происходит при естественной случке. Они рекомендуют проводить осеменение в больших объёмах с меньшим количеством сперматозоидов в дозе.

Актуальность исследований:

В последние годы российские коневладельцы всё чаще стали использовать криоконсервированную сперму жеребцов, ввезённую из западных стран, и покупать дорогое оборудование для замораживания спермы. Это даёт возможность получить потомство от высококлассных жеребцов, находящихся в Европе или Америке, и замораживать сперму российских жеребцов по зарубежной технологии, в т.ч. и по Loomis Р., 1983. Это наиболее типичная технология замораживания спермы жеребцов, которая используется за рубежом. Кроме того, привлекает простота и удобство перевозки спермы в миниобъёмах (0,5 мл). Хранение такой спермы также не требует больших расходов дорогостоящего хладоагента.

В нашей стране, несмотря на разработку способов замораживания спермы в малых объёмах (5 мл), до сих пор широко используется метод криоконсервации в больших объёмах (20 мл). Этот метод хорошо зарекомендовал себя в практике в связи с простотой исполнения, недорогим оборудованием, получением стабильных результатов. Но его недостатком являются большие объёмы спермодоз, неудобные при хранении и перевозках, и затраты на дорогостоящий хладоагент. Актуален вопрос: в чём состоит суть различий в этих технологиях, и какая из них предпочтитетельнее с точки зрения результативности, простоты исполнения и экономии затрат.

Цель исследований:

С целью выявления наиболее эффективной технологии - провести сравнение трёх технологий замораживания спермы жеребцов (одной зарубежной и двух отечественных), а также изыскать возможность унификации технологии замораживания спермы в малых объёмах.

Задачи исследований:

1. Сравнить факторы и приёмы на этапах (разбавления, удаления надосадочной жидкости, способах фасовки) при использовании разных технологий замораживания спермы, позволяющие получить максимальную активность и выживаемость сперматозоидов после оттаивания.

2. Изучить морфологию сперматозоидов, находящихся в разных фракциях после центрифугирования спермы.

3. Сравнить оплодотворяющую способность спермы жеребцов, замороженной по разным технологиям (отечественной технологии Науменкова А.И., Романьковой Н.К., 1971 и зарубежной технологии Loomis Р., 1983).

4. Испытать новые варианты и технологические приёмы замораживания спермы в малых объёмах.

5. Выявить возможность уменьшения объёма дозы в отечественной технологии замораживания спермы жеребцов (Науменков А.И., Романькова Н.К., 1971).

6. Провести сравнительный анализ экономической эффективности разных технологий замораживания спермы жеребцов.

Научная новизна:

Впервые было проведено сравнение отечественных и зарубежной технологии замораживания спермы по качественным показателям спермиев, по оплодотворяющей способности и экономической эффективности.

Впервые получены данные по морфологии спермиев различных фракций центрифугата.

Впервые выявлена взаимозаменяемость различных приёмов и разбавителей при использовании отечественной и зарубежной технологии.

Впервые проведён опыт осеменения кобыл разными по объёму дозами замороженной спермы 5-10мл и 20мл (по отечественной технологии Науменкова А.И., Романьковой Н.К., 1971).

Теоретическая и практическая ценность работы

При сравнительной оценке отечественных и зарубежной технологий замораживания спермы жеребцов выявлены отрицательные и положительные стороны этих технологий. Изучена морфология сперматозоидов, находящихся в разных фракциях центрифугата.

После сравнительного анализа экономической эффективности выявлены преимущества отечественных технологий замораживания спермы жеребцов.

Апробация работы

Материалы диссертации доложены на научной конференции во ВНИИ коневодства (2005г.), в Костанае (Казахстан, 2006г.), и Всероссийской научно-практической конференции молодых учёных и специалистов в РГСХА им. Костычева П.А. (2006г.). По материалам диссертации опубликовано 8 статей.

Положения, выносимые на защиту:

1. Качественные показатели спермы, оплодотворяющая способность и экономическая эффективность отечественных и зарубежной технологий замораживания спермы жеребцов.

2. Исследование морфологии сперматозоидов в осадке и надосадке после центрифугирования спермы.

3. Возможность взаимозамены различных приёмов и разбавителей в отечественной и зарубежной технологиях.

Объём осеменения разными дозами замороженной спермы отечественной технологии.

Заключение диссертации по теме «Физиология», Васильева, Ольга Валентиновна

Выводы:

1. На этапе разбавления отечественные технологии замораживания спермы превосходят зарубежную. Степень разбавления 1:3, принятая в отечественных технологиях, оказывает благоприятное воздействие на сперму после замораживания и по зарубежной технологии.

2. При удалении 90% надосадка после центрифугирования по зарубежной технологии (Loomis Р., 1983) теряется 30% сперматозоидов. По отечественной технологии (Фоминой E.JL, 1988) при удалении 50% надосадка теряется лишь 2% сперматозоидов.

3. При сравнении различных способов фасовки спермы (в тубах и соломинах) показатели спермы после оттаивания в рамках одной технологии сходны.

4. В процессе центрифугирования спермы не происходит разделения морфологически нормальных и патологических сперматозоидов на фракции как по отечественной технологии (Фоминой E.JL, 1988), так и по зарубежной технологии (Loomis Р., 1983). Центрифугирование приводит к увеличению процента патологических сперматозоидов по сравнению с технологией без центрифугирования (Науменкова А.И., Романьковой Н.К., 1971).

5. В результате использования отечественной технологии замораживания спермы по Фоминой E.JL, 1988г. с применением центрифугирования, с надосадком удаляется меньшее количество морфологически нормальных сперматозоидов, чем при использовании зарубежной технологии по Loomis Р., 1983г.

6. В процессе центрифугирования как по отечественной технологии (Фоминой E.JL, 1988), так и по зарубежной технологии (Loomis Р., 1983), основные нарушения морфологии сперматозоидов происходят в акросоме и хвостовой части.

7. Результативность осеменений кобыл спермой, замороженной по отечественной технологии (Науменкова А.И., Романьковой Н.К., 1971), свидетельствует о некотором преимуществе по сравнению с зарубежной технологией (Loomis Р., 1983).

8. Осеменение кобыл замороженной спермой по отечественной технологии Науменкова А.И., Романьковой Н.К. (1971) в объёме 20мл даёт лучший результат, чем при объёме 5-10мл.

9. Сравнительный анализ экономической эффективности показал, что отечественные технологии превосходят зарубежную по 3-м составляющим:

- потери спермодоз при использовании отечественных технологий на 2730% меньше, чем в зарубежной технологии;

- расход хладоагента по отечественной технологии (Ф.) на уровне зарубежной технологии по (L.), но в 4 раза меньше, чем по технологии (Н.);

- стоимость дополнительного оборудования (отечественные технологии в 15 - 300 раз дешевле зарубежной).

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ.

1 Для тех хозяйств, которые не в состоянии приобрести импортное оборудование, но хотят замораживать сперму жеребца в малых объёмах, можно рекомендовать отечественную технологию Фоминой E.JL (1988), которая не уступает зарубежной технологии Loomis Р.(1983).

2. Замораживание спермы жеребцов как по отечественной технологии Фоминой E.JI. (1988), так и по зарубежной технологии Loomis Р. (1983) можно проводить как в тубах, так и в соломинах.

3. При замораживании спермы жеребцов можно пользоваться опытной технологией №1, как имеющей тенденцию к увеличению показателей активности и выживаемости спермы после оттаивания по сравнению с технологией по Фоминой Е.Л. (1988) и по Loomis Р. (1983).

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Васильева, Ольга Валентиновна, 2007 год

1. Айбазов, М.М. Результаты внутриматочного осеменения овец с использованием метода лапараскопии / М.М. Айбазов // Роль и значение метода искусственного осеменения с.-х. животных в прогрессе животноводства XX и XXI веков. Дубровицы, 2004.-С.155-169.

2. Андрюшин, В.В. Вопросы искусственного осеменения / В.В. Андрюшин // Коневодство и конный спорт.-1991 .-№7.-С.8-11.

3. Андрюшин, В.В. Сперматогенез и устойчивость спермы жеребцов к замораживанию в связи с уровнем стероидных гормонов /

4. B.В.Андрюшин, Е.Л.Фомина, Л.М.Кошарова и др. // Пути ускорения НТП в коневодстве: сб. науч. тр. ВНИИ коневодства, 1986.-С.112-121.

5. Багиров, В.А. Метод внутритрубного осеменения свиноматок/ В.А.Багиров, Н.П.Закунов, В.П.Кононов и др. // Роль и значение метода искусственного осеменения с.-х. животных в прогрессе животноводства XX и XXI веков. Дубровицы, 2004.-С.149-150.

6. Боярский, В.М. Влияние глубины введения замороженного семени баранов на результативность ягнения овец / В.М. Боярский // Разведение и кормление животных: сб. науч. тр. Ульяновск, 1985.1. C.68-71

7. Гельфонд, Е.М. Искусственное осеменение кобыл /Е.М. Гельфонд // Коневодство.-1937.-№5.-С.10-13.

8. ГОСТ 24168-80 «Сперма жеребцов замороженная». -М.,1980. 6 с.

9. Длительное хранение спермы жеребца путем замораживания. Разработка метода сохранения спермы жеребца в твердой углекислоте при температуре -78 . Т.4, тема 5, разд. 2: Отчет о

10. НИР / ВНИИ коневодства; Руководитель Г.В.Паршутин. Инв.№ 80. -М., 1956. - С.18-27. - Отв. исполн. А.Н.Буйко, Е.С.Кружкова.

11. Енишерлов, Н.П. Результаты опытов искусственного осеменения кобыл и влияние первого оплодотворителя на последующие приплоды / Н.П. Енишерлов // Коннозаводства.-1898.-№1. С.147.

12. Животков, X. Искусственное осеменение лошадей в сочетании с ветеринарно-зоотехнической гинекологией/ Х.Животков, И.Краков, С.Антоненко // Коневодство.-1939.-№1.-С.28.

13. Животков, Х.И. Глубокое введение спермы при искусственном осеменении лошадей/ Х.И.Животков, П.Н.Скаткин //Коневодство.-1941 .-№2.-С.6.

14. Животков, Х.И. Опыт искусственного осеменения лошадей/ Х.И.Животков, Н.Зданович //Коневодство.-1938.-№3.-С.16-20.

15. Жильцов, Н.З. Микрокапсулирование семени быка / Н.З.Жильцов, Ю.П.Фомичёв, И.Е.Дамрина // Роль и значение метода искусственного осеменения с.-х. животных в прогрессе животноводства XX и XXI веков. Дубровицы, 2004.-С.98-99.

16. Жмурин, Л.М. К вопросу о сохранении в замороженном состоянии семени жеребца / Л.М. Жмурин // Коневодство.-1959.-№4,-С.24-27.

17. Иванов, И.И. Искусственное осеменение у млекопитающих /И.И. Иванов//С-Пб, 1907.- 51с.

18. Изучение связи между возрастом жеребцов, свойствами семенных клеток и качеством потомства Т.З, тема 5, разд.З: Отчет о

19. НИР / ВНИИ коневодства; Руководитель Г.В.Паршутин. Инв.№ 25. -М., 1952. - С.520-524. - Отв. исполн. П.П.Печников.

20. Ильинская, Т.П. Влияние некоторых факторов на устойчивость спермы жеребца к замораживанию при температуре -70°С / Т.П. Ильинская // Коневодство.-1956.-№2.-С.32-35.

21. Инструкция по искусственному осеменению кобыл спермой жеребца, сохранённой при температуре -196°С. ВНИИК, 1987.-24 с.

22. Инструкция по искусственному осеменению кобыл. М.: Колос, 1969.-24 с.

23. Казеев, Г.В. Обоснование выбора оптимального времени искусственного осеменения коров / Г.В. Казеев // Роль и значение метода искусственного осеменения с.-х. животных в прогрессе животноводства XX и XXI веков. Дубровицы, 2004.-С.176.

24. Кононов, В.П. Факторы плазмы спермы повышающие устойчивость спермиев при замораживании / В.П.Кононов,

25. B.А.Семёнова, А.С.Ерохин // С.- х. биология.-1986.-№10.-С.98-101.

26. Корбан, Н.В. Влияние глицерина на акросомные ферменты сперматозоидов хряка при замораживании оттаивании / Н.В.Корбан, Л.А.Белкина, Н.И.Беззубцева // Бюлл. ВНИИРГЖ.-1978.-Вып.З.-С.25-28.

27. Кудряшов, С.А. Искусственное оплодотворение кобыл /

28. C.А. Кудряшов // Коневодство на северном Кавказе. Москва, 1930. -С.61-82.

29. Милованов, В.К. Биология воспроизведения и искусственное осеменение сельскохозяйственных животных / В.К. Милованов //М.-1962.-696 с.

30. Милованов, В.К. Физические свойства мембран липидов и устойчивость живчиков при глубоком охлаждении / В.К.Милованов,

31. В.П.Кононов, О.А.Азизова, А.Г.Максина // Вестник с.-х. науки.-1984.-№2.-С.93-100.

32. Науменкова, В.А. Использование диализа для криоконсервации спермы жеребца: дисс. . канд. биол. наук. Дивово, 1994.- 132 с.

33. Ормонд. Биология чистокровных лошадей / Ормонд // Коннозаводство.-1902.-№10.-С. 1-5.

34. Паршутин, Г.В. Зависимость зажеребляемости кобыл от переживаемости сперматозоидов жеребца / Г.В.Паршутин, П.Н.Скаткин // Вестник животноводства.-1940.-№2.-С. 155-159.

35. Паршутин, Г.В. Искусственное осеменение и случка кобыл / Г.В.Паршутин, П.Н Скаткин. М., 1944.-С.65-67.

36. Паршутин, Г.В. Качество спермы жеребцов при повторных садках. / Г.В. Паршутин // Коневодство.-1940.-№1.-С.15.

37. Паршутин, Г.В. Новое в искусственном осеменении лошадей / Г.В. Паршутин // Коневодство.-193 8.-№1.-С.27.

38. Паршутин, Г.В. Современная техника и организация искусственного осеменения и случка кобыл / Г.В. Паршутин // Коневодство.-1946.-№6-7.-С.9-14.

39. Патрушев, В.И. Искусственное осеменение лошадей / В.И. Патрушев // Коневодство.-1935.-№5.-С. 19-25.

40. Печников, П.П. Влияние режима использования производителей на биологические и физико-химические свойства спермы / П.П. Печников, Г.В. Паршутин // Работы по физиологиилошади: сб. науч. тр. / ВНИИ коневодства. М.,1961. - Т.23. - СЛ19-135.

41. Платов, Е.М. Длительное хранение спермы жеребца / Е.М.Платов, Е.С.Пустовая, В.А.Котягина, Н.К.Романькова // Ветеринария.- 1970.-№10.-С. 103-111.

42. Плохинский, Н.А. Математические методы в биологии /Н.А. Плохинский // М., 1978. 265 с.

43. Повышение плодовитости лошадей. Искусственное осеменение кобыл длительно сохраненной спермой. Тема 3, разд.4: Отчет о НИР / ВНИИ коневодства. Руководитель Г.В.Паршутин. -Инв.№ 15. - М., 1950. - С.449-458. - Отв. исполн. А.Н.Буйко.

44. Радченков, В.П. Сравнение эффективности использования различных технологий криоконсервирования спермы производителей в полимерных соломинках / В.П. Радченков // Зоотехния.-2006.-№2.-С.32.

45. Разработка метода хранения семени жеребца в замороженном состоянии. Т.2, тема 11: Отчет о НИР / ВНИИ коневодства. Руководитель П.Н.Скаткин. Инв.№48. - М., 1954. -С.227-242. - Отв. исполн.П.Н.Скаткин, В.А.Румянцева.

46. Рекомендации по подготовке и расфасовке спермы для замораживания в малых объёмах (5-6мл). ВНИИК, 1990. - 7 с.

47. Романькова, Н.К. Дозирование спермы жеребца / Н.К.Романькова, А.И.Науменков // Пути ускорения научно-технического прогресса в коневодстве: сб. науч. тр.-ВНИИК.-1986.-С.91-104.

48. Романькова, Н.К. Совершенствование методов хранения семени жеребца: дисс.канд. биол. наук. Дивово, 1972. - 184 с.

49. Ромбе, С.М. Длительное хранение спермы жеребца при глубоком замораживании /С.М. Ромбе // Коневодство в опытах: сб. науч. тр. / ВНИИ коневодства. М.,1967.-Т.24, Ч.1.-С.215-238.

50. Румянцева, В.А. Разработка метода замораживания спермы жеребца при температуре -79°С с малым количеством глицерина / В.А. Румянцева // Бюллетень научно-технической информации. М., 1959.-№4-5.-С.39-42.

51. Скаткин, П.Н. Некоторые вопросы теории и техники искусственного осеменения лошадей / П.Н. Скаткин // Коневодство,-1950.-№4-С.19-23.

52. Скаткин, П.Н. О разбавлении спермы жеребца / П.Н. Скаткин // Труды Всесоюзного научно-исследовательского института коневодства-М., 1950. Т. 18. - С.227-235.

53. Совершенствование метода длительного хранения семени жеребца. Т.З, тема 5, разд. 4.: Отчет о НИР / ВНИИ коневодства; Руководитель Г.В.Паршутин. Инв.№ 25. - М., 1952. - С.525-530. -Отв. исполн. П.Н.Скаткин, А.Н.Буйко,Е.Ю.Румянцева.

54. Совершенствование методов искусственного осеменения лошадей. Разработка способов длительного хранения спермы жеребца. Т.2, тема 9, разд. 1: Отчет о НИР / ВНИИ коневодства; Руководитель Г.В.Паршутин. Инв.№ 97 - М., 1958. - С.363-364. - Отв. исполн.

55. A.Н.Буйко, Л.М.Жмурин, П.П.Печников.

56. Титова, В.А. Возможности использования технологии микрокапсулирования спермы сельскохозяйственных животных/

57. B.А.Титова, А.И.Абилов // Современные технологические и селекционные аспекты развития животноводства России. Дубровицы, 2005.- Т.2.-С.273.

58. Фомина, Е.Л. Влияние кормления на уровень и качество сперматогенеза у жеребцов-производителей / Е.Л.Фомина,

59. C.Т.Угадчиков, К.И.Мирошникова // Интенсификация коневодства: сб. науч. тр. ВНИИК, 1985. - С.56-65.

60. Фомина, Е.Л. Воспроизводительная функция орловских и русских кобыл в условиях Дубровского конного завода / Е.Л.Фомина, К.И.Мирошникова, И.А.Валк // Интенсификация селекции и технологии выращивания лошадей: сб. науч. тр. ВНИИК, 1988.-С.190-201.

61. Фомина, Е.Л. Новое в технологии криоконсервации спермы жеребца в малых объёмах / Фомина Е.Л., Мирошникова К.И. // Пути ускорения научно-технического прогресса в коневодстве: сб. науч. тр. -ВНИИК, 1989.-С.65-66.

62. Чернышов, И.Л. Пути совершенствования отбора и осеменения кобыл-доноров эмбрионов: дисс. . канд. биол. наук. -Дивово, 1990.- 122 с.

63. Шапиев, И.Ш. Совершенствование методов замораживания и оценки спермы хряков: автореф. дисс. . д-ра биол. наук. Пушкин, 1998.-38с.

64. Advena, I. Deep frozen storage of stallion semen; comparison of the flattstraw and the macrotube methods in relation to their effects on the motility and acrosome integrity of the spermatozoa: thesis. Hannover, 1990. - S.124-128.

65. Aehnelt, E. Das Sperma Hengstes irnter Berucksichtigung von Umwelt und Vererbung. Hannover, 1950. 211 s.

66. Amann, R.P. Effects of age and frequency of ejaculation on sperm production and extraqonadal sperm reserves in stallions. / Amann R.P., Thompson D.L., Squires E.L., Pickett B.W. // J. Reprod. Fertill. -1979.-Suppl.27.-P.l-6.

67. Anderson, J. The examination of semen and the relationship to fertility // Proc. 2nd Int. Congr. Phys. Path. Anim. Reprod. A.I. -Copenhagen, 1952. Vol. 3.-P.7-34.

68. Aurich, J.E. Seminal plasma effects membrane intergrity and motility of equine spermatozoa after cryopreservation / Aurich J.E., Kuhne A., Hoppe H., Aurich C. // Theriogenology. 1996. - Vol.46. - P.791-797.

69. Backman, T. Pregnancy rates of mares inseminated with semen cooled for 18 hours and the frozen /Bachman Т., Bruemmer J.E., Graham J.K, Squires E.L. //J. Anim. Sci. 2004. - Vol.82. - P.690-694.

70. Bader, H. Fraktionierte ejakulatgewinnung beim hengst / Bader H., Huttenrauch O. // Dtsch. tierarztl. Wochenschr. 1966. - Bd.73. - S.547-548.

71. Bader, H. Weitere Erfahrungen uber die Tiefgefrierung von Hengstsperma.//Zuchthygiene. 1970. - Vol.5. - P.87.

72. Bader, H. Zur Tiefgefrierung von Hengstsperma nach der Pelletmethode. // 6. Internat. Kong. Tier. Fortpfl. Haustierbes. Paris, 1968. - Vol.2. - P.985-988.

73. Barker, C.A. Pregnancy in a mare resulting from frozen epididymal spermatozoa / Barker C.A., Gandier J.C. // Can. J. Сотр. Med.-1957.-Vol.21. P.47-51.

74. Batellier, F. Advances in cooled semen technology // Animal Reproduction Sciense. 2001. - Vol.68. - P.181-190.

75. Baumgartl, C. Lich-und elektronenmikroskopische Untersuchungen uber Veranderungen der Plasmamembran und Akrosomstruktur von Pferdespermien: diss. Hannover, 1980. -216 s.

76. Bedford, J.M. Ultrastructural changes in the sperm head during fertilization in the rabbit // Am. J. Anat. 1968. - Vol.123. - P.329-358.

77. Bielanski W., Kunstliche Besamung beim Pferd // Verlag Enke.-Stuttgart,1982.-S.464-490.

78. Bielanski, W. Artifical insemination of hourses. 3. Properties of stallion semen frozen at various times of the year. / Bielanski W., Kosinak K. // Anim. Breed. Abstr. -1971. Vol.39. - P.438.

79. Bielansky, W. The evaluation of stallion semen in aspects of fertility control and its use for artificial insemination // J. Reprod. Fertil. -1975. Vol.23.-P. 19-24.

80. Boyle, M.S. Artificial insemination in the hourse //Ann Zootech.-1992.-Vol.41 .-P.311-318.

81. Buttle, H.R.L. Sterile boars with "knobbed" spermatozoa / Buttle H.R.L., Hancock J.L. // J. agric. Sci. 1965. - Vol.65. - P.255-260.

82. Сагу, J.A. A comparison of electroejaculation and epididymal sperm collection techniques in stallions / Cary J.A., Madill S., Farnsworth K., Hayna J.T., Duoos L., Fahning M.L. // Can. Vet. J. 2004. - Vol.45. -P.35-41.

83. Cristanelli, M. Fertility of stallion semen processed, frozen and thawed by a new procedure / Cristanelli M., Squires E.L., Amann R.P., Pickett B.W. // Theriogenology. 1984. - Vol.22, №1. - P.39-45.

84. Delius, D. Untersuchungen zur Tiefgefrierkonservierung von Pferdesamen im 0,5 ml Volumenenheiten mit Hilfe computogesteurter Einfrierprogramme: thesis. -Hannover, 1985. 124 s.

85. Ellery, J.C. Artificial insemination of pony mares with semen frozen and stored in liguid nitrogen / Ellery J.C., Graham E.F., Zemjanis R. //Am. J. vet. Res.-1971.-Vol.32, №11.-P.1693-1698.

86. Equine AI and the Use of Frozen Stallion Semen in the British Isles //-Режим доступа: http://www.Sporthorse-Bredeer.com.

87. Garner, J.L. Immunoflurescent localization of acrosin in mammalian spermatozoa / Garner J.L., Easton M.P. // J. exp. Zool.-1977.-Vol.200.-P. 157-162.

88. Gebauer, M.R. Reproductive physiology of the stallion. Chemical characteristics of seminal plasma and spermatozoa / Gebauer M.R., Pickett B.W., Faulkner L.C., Remmenga E.E., Berndtson W.E. // J. Anim. Sci.-1976. Vol.43, №3. - P.626-632.

89. Gotze, R. Besamung und Unfruchtbarkeit der Haussaugetiere -Hannover, 1949.- 132 s.

90. Guay, P. Effect of glycerol on motility, viability, extracellular aspartate aminotransferase release and fertility of stallion semen before andafter freezing / Guay P., Rondeau M., Boucher S. // Eq. Vet. J.-1981.-Vol.13. P.177-182.

91. Haard, M. Use of frozen stallion semen in Europe // Acta. vet. scand.-1992.-Suppl.88.-P. 123-127.

92. Harrison, R.A.P. Aspects of the enzymology of mammalian spermatozoa//J. Anim. Sci. 1975 - Vol.42, №3.-S.301-316.

93. Healey, P. Effect of freezing on the ultrastructure of the spermatozoon //J. Reprod. Fertil.-1969.-Suppl.l8.-P.21-27.

94. Hendrikse, J. The morphology of live and dead spermatozoa. / Hendrikse J., Van Der Hoist W., Best A.P. // 8 Internat. Kongr. Tier. Fortpfl. Haustierbes.-Krakow, 1976.-P. 106.

95. Hess, R. Versuche zur Pelletierung von Hengstsperma / Hess R., Schafer W., Schmidt D., Baum W. // Fortpfl. Bes. u. Aufz. der Haust.-1968.-Bd.4.-S.207-214.

96. Horsten, D. Von. Tiefgefrierversuche an Hengstsperma, Einflub von Glyzerin-konzentration, Pelletgrobe und Auftraumedium auf die Spermienuberlebensrate: diss. Hannover, 1972.- 154 s.

97. Julienne, P. Artificial insemination with fresh semen from French trotter stallions and with frozen semen from French saddle stallions at a stud farm //13 eme journee de la recherche. Paris, 1987. - P. 12.

98. Katila, T. Sperm-uterine interactions: a review. // Anim. Reprod. Sci.-2001.-Vol.68. P.267-272.

99. Klug, E. Besamungsstation im Landgestut Celle-Ergebnisbericht aus der Saison.-1978. / Klug E., Martin J.C., Brede D. // Hann. Pferd. 1979. - Bd.53. - S.58-59.

100. Klug, E. Besamungsstation im Landgestut Celle-Ergebnisbericht aus der Saison.-1979. / Klug E., Martin J.C., Kluge G. // Hann. Pferd.-1980.-Bd.54.-S.62-63.

101. Klug, E. Untersuchungen von Hengsten zum Einsatz in der instrumentellen Samenubertragung mit Tiefgefriersperma. / Klug E., Gunzel

102. A.-R., Merkt H., Krause D. // Dtsch. tierarztl. Wochenschr.-1977.-Bd.84.-S.236-238.

103. Klug, E. Untersuchungen zur klinischen Andrologie des Pferdes. Die Bedeutung andrologischer Befunde am Hengst fur den Zuchteinsatz: diss. Hannover, 1982. 176 s.

104. Krause, D. Depfreezing of jackass and stallion semen in concentrated pellet form / Krause D., Grove D. // J. Reprod. Fertil.-1967.-Vol.l4.-P.139-141.

105. Krause, D. Untersuchungen an Bullensperma unter Berucksichtigung der fertilitatsdiagnostischen Bedeutung der Befunde: diss. -Hannover, 1966.- 136 s.

106. Lindsey, A.C. Low dose insemination of mares using non-sorted and sex-sorted sperm /Lindsey A.S., Bruemmer J.E., Squires E.L. //Animal Reproduction Science -2001. Vol.68.-P.279-289.

107. Loomis, P.R. Fertility of unfrozen and frozen stallion spermatozoa extended in EDTA-lactose-egg yolk and packaged in straws / Loomis P.R., Amann R.P., Squires E.L., Pickett B.W. // J. Anim. Sci.-1983.-Vol.56, №3.-P.687-693.

108. Loomis, P.R. Frozen semen management in equine breeding programs / . Loomis P.R., Squires E.L. // Theriogenology. 2005. - Vol.64, №3. - P.480-491.

109. Loomis, P.R. The equine frozen semen industry // Animal Reproduction Sciense.-2001. Vol.68.-P. 191-200.

110. Love, C.C. Comparison of pregnancy rates achieved with frozen semen using two packaging methods / Love C.C., Loch, W.L. Bristol F., Garcia M.C., Kenney R.M. // Anim. Reprod. Sci.-1989. Vol.31, №3.-P.613-621.

111. Luning, I. Rasterelektronenmikroskopische Untersuchungen an Pferdespermien: diss. Hannover, 1980.- 122 s.

112. Magistrini, M. Influence of season and frequency of ejaculation on production of stallion semen for freezing / Magistrini M., Chanteloube P., Palmer E. // J. Reprod. Fert.-1987.-Suppl.35.-P.122.

113. Magistrini, M. Interactions between sperm packaging, gas environment, temperature and diluent on fresh stallion sperm survival / Magistrini M., Couty I., Palmer E. // Acta vet. scand.-1992. Suppl.88. -P.97-110.

114. Marten-Rosse, W. Monte en liberte dans Ies troupeanx ouverts de juments Iourdes / Marten-Rosse W., Russe E. // CRZV INRA Bull, techn.-1985 .-№61 .-P.21-30.

115. Martin, J.C. Centrifugation of stallion semen and its storage in large volume straws / Martin J.C., Klug E., Gunzel A.-R. // J. Reprod. Fertil.-1979.-Vol.27.-P.47-51.

116. Martin, J.C. Einflub der Zentrifugation auf die Motilitat von Hengstsperma im Thermoresistenz- und Tiefgefriertest / Martin J.C., Papa F.O., Krause A., Klug E. //Zuchthygiene.-1980.-Bd.15.-S.93.

117. Martin, J.C. Synchronization of oestrus cycle in the mare / Martin J.C., Klug E., Brede D. // 9. Internat. Kongr. Tier. Fortpfl. Haustierbes.-Madrid, 1980.-Vol.3.-P.91.

118. Martin, J.C. Zur Samenubertragung beim Pferd-Spermakonservierung in Kunststoffrohrchen / Martin J.C., Klug E. // Prakt. Tierarzt.-1979.-Bd.3.-S. 193-204.

119. Merkt, H. Equine artificial insemination // Veter. Record.-1976.-Vol.24, №99.-P.69-71.

120. Merkt, H. Tiefgefrierspermaversuche mit Equidensperma unter Anwendung des sog. Pellet-Verfahrens / Merkt H., Krause D. // Dtsch. tierarztl. Wochenschr.-1966.-Bd.73.-S.267-268.

121. Morris, L.H. Hysteroscopic uterotubal insemination of mares with low numbers of spermatozoa /Morris L.H., Allen W.R. //Animal Reproduction Sciense -2001. Vol.68.-P.290-298.

122. Morton, D.B. Acrosomal enzymes: Immunochemical localization of acrosin and hyaluronidase in ram spermatozoa // J. Reprod. Fertil.-1975.-Vol.45.-P. 375-378.

123. Muller, Z. Fertility of frozen equine semen // J. Reprod. Fertil.-1982.-Vol.32.-P.47-51.

124. Nagase, H. Pelleted semen: Comparison of different extenders and processes on fertility of bovine spermatozoa / Nagase H., Graham E.F. // 5. Internat. Konr. Tier. Fortpfl. Haustierbes.-Trient, 1964.-Bd.5.-S.387-391.

125. Nagase, H. Studies on the freezing of stallion semen. 1. Fertility results of stallion semen in concentratred pellet form / Nagase H., Soejima S., Niwa Т., Oshida H., Sagara Y., Ishizaui N., Hoshi S. // Jap. J. Anim. Reprod.-1966.-Vol. 12.-P.48-51.

126. Newcombe, J.R. Practical evaluation of the fertilising capacity of frozen-thawed horse semen // Veterinary Record.-1999.-Vol.145.-P.46-47.

127. Nishikava, Y. Studies on deep freezing of horse spermatozoa / Nishikava Y., Waide Y., Shinomiya S. // 6. Internat. Kong. Tier. Fortpfl. Haustierbes.-Paris, 1968.-Vol.2.-P. 1589-1590.

128. Nishikava, Y. Studies on the preservation of raw and frozen horse semen //J. Reprod. Fertil.-1975.-Vol.23.-P.99-104.

129. Nishikawa, Y. Freezability of horse semen collected during the non breeding season. / Nishikawa Y., Shinomiya S. // 7 Internat. Kongr. Tier. Fortpfl. Haustierbes.-Munchen, 1972.-S. 1539-1543.

130. Oliveira, M.A.L. Einflub verschiedener Aufbereitungsverfahren auf Motilitat und Akrosinaktivitat in der Thermoresistenzprufimg und auf das Befruchtungsergebnis von tiefgefrorenem Pferdesamen: diss.-Hannover, 1982.- 133 s.

131. Oshida, H. Studies on the freezing storage of stallion semen. 3. Freezing of pellet frozen semen preserved in liguid nitrogen / Oshida H.,

132. Mikawa Т., Horiuchi S., Takahashi H., Tomizuka Т., Nagase H. // Jap. J. Anim. Reprod.-1967.-Vol. 13.-P. 136-140.

133. Pace, M.M. Effect of timing of insemination, numbers of spermatozoa, and extender components on the pregnancy rate in mares inseminated with frozen stallion semen / Pace M.M., Sullivan J.J. // J. Reprod. Fertil.-1975.-Vol.23.-P.l 15-121.

134. Palmer, E. Factors affecting semen survival and fertility // Proc. 10th ICARAI.-Urbana-Champaign, 1984.-Vol.3. P.377.

135. Pickett, B.W. Effect of centrifugation and seminal plasma on motility and fertility of stallion and bull spermatozoa / Pickett B.W., Sullivan J.J., Byers W.W., Pace M.M., Remmenga E.E. // Fertil. Steril.-1975 .-№26.-P. 167-174.

136. Pickett, B.W. Effect of month and stellion on seminal characteristics and sexual behavior / Pickett B.W., Faulkner L.C., Sutherland T.M. //J. Anim. Sci.-1970.-Vol.31.-P.713-728.

137. Pickett, B.W. Factors affecting quality and qantity of stallion spermatozoa. / Pickett B.W., Voss I.L., Squires E.L. // The compendium on continuing education.-1983 .-Vol.5 .-P.259-267.

138. Pickett, B.W. Reproductive Physiology of the stallion. Effect of freguency of ejaculation on seminal characteristics and spermatozoal output. / Pickett B.W., Sullivan I., Seidel G. // J. Anim. Sci.-1975.- Vol.40, №5,-P.917-922.

139. Pickett, B.W. Reproductive physiology of the stallion. Seminal and behavioral characteristics. / Pickett B.W., Faulkner L.E., Seidel G.E., Berndtson W.E., Voss J.L. //J. Reprod. Fertil.-1976.-Vol.23.-P.95-98.

140. Platov, E.M. Freezing stallion semen in horsebreeding of the USSR / Platov E.M., Fomina E.L. // Proc. 8th. ICARAI.- Krakov, 1976.-P.320.

141. Polge, C. Fertility in the pig and horse // Fertil. Steril.-1968.26p.

142. Pursel, V.G. Loss of boar sperm fertilizing capacity associated with altered acrocome morphology during in vitro storage / Pursel V.G., Johnson L.A., Schulma L.L. // 7. Internat. Kongr. Tier. Fortpfl. Haustierbes.-Munchen, 1972.-2.-S. 1595-1560/

143. Rajamannan, A.N.J. Film freezing of semen / Rajamannan A.N.J., Graham E.F. // 6. Internat. Kong. Tier. Fortpfl. Haustierbes.-Paris, 1968.-Vol.2.-P.l 141.

144. Rigby, S.Z. Advances in cooled semen technologies: semenal plasma and semen extender // Animal Reproduction Sciense.-2001. -Vol.68.-P.171-180.

145. Saacke, R.G. Morphology of sperm and its relationship to fertility // Proc. 3. Techn. Conf. Anim. Reprod. Artif. Insem. Nat. Assoc. Anim. Breed.-Chicago, 1970.-P. 17-30.

146. Smith, A. Storage of bull spermatozoa at low temperatures / Smith A., Polge C. //Veter. Rec.-1950.-Vol.9.-P.62.

147. Smith, A. Survival of spermatozoa at low temperatures / Smith A., Polge C. //Nature.-1950.-Vol.166.-P.4225.

148. Squires, E.L. Effect of successive ejaculation on stallion seminal characteristics. / Squires E.L., Pickett B.W., Amann R.P. // J. Reprod. Fertill.-1979.-Suppl.-27.-P.7-12.

149. Stambaugh, R. Identification and subcellular localization of the enzymes effecting penetration of the zona pellucida by rabbit spermatozoa / Stambaugh R., Buckley J. // J. Reprod. Fertil.-1969.-Vol.l9.-P.423-432.

150. Tischner, M. Equine artificial insemination in Central and East Europe // Acta vet. scand.-1992.-Suppl.88.-P. 111-115.

151. Tischner, M. Evaluation of deep frozen semen in stallions 11 J. Reprod. Fertil.-1979.-Vol.27.-P.53-59.

152. Tischner, M. Results of artificial insemination of horses in Poland in the post-war period // J. Reprod. Fertil.-1975.-Vol.23.-P. 111-114.

153. Tishner, M. Problems of semen preservation and artifical insemination in horses // Proc. 11 Inter. Cong. Anim. Reprod. and at all. -Dublin,1988.-P.354-362.

154. Treu, H. Auswertung von TG-Besamungsergerebnissen auf einer Versuchsweize eingerichteten Pferdebesamungsstation in einern Landgestut / Treu H., Hillman K., Heinze H., Klug E. // Zuchthygiene.-1974.-Bd.9.-S.91.

155. Van Der Hoist, W. A study of the morphology of stallion semen during the breeding and non breeding seasons. // J. Reprod. Fertill.-1975.-Vol.23.-P.87-89.

156. Varner, D.D. Effects of cooling rate and storage temperature on equine spermatozoal motility parameters / Varner D.D., Blanchard T.L., Love C.L., Garcia M.C., Kenney R.M. // Animal Reproduction Sciense.-1988.-Vol.29, №5.-P. 1043-1051.

157. Vieira, R.C. Akrosinbestimmung an Pferdespermien unter Berucksichtigung bestimmter andrologischer Fragestellungen: diss.-Hannover, 1980.-127 s.

158. Weitze, K.F. Untersuchungen zur Tiefgefrierkonservierung von Kaninchensperma: diss. Hannover, 1977,- 142 s.

159. Wockener, A. Untersuchungen zur Kryokonservering von Hengstsperma / Wockener A., Papa F.O., Bader H., Leps H., Schmitz R. // Pferdeheilkunde.-1989.-Bd.5.-S.333.

160. Yohanson, L. Age-zelated chaiges in the leydig cell population and spermoduction in stallion. / Yohanson L. Neavce W.B. // Biol. Reprod.-1981.-Vol.24, №3.-P.703-712.

161. Zaneveld, L.J.D. Inhibition and seminal plasma trypsin inhibitors / Zaneveld L.J.D., Robertson R.T., Kessler M., Williams W.L. // J. Reprod. Fertil.-1971.-Vol.25.-P.387-392.