Совершенствование методов и техники трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.13, кандидат биологических наук Передера, Константин Борисович

• Передера, Константин Борисович
• кандидат биологических наук
• 1985

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Передера, Константин Борисович

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Состояние и перспективы применения метода 8 трансплантации эмбрионов.

1.2. Отбор доноров и реципиентов. Ю

1.3. Суперовуляция у доноров крупного рогатого 12 скота.

1.4. Синхронизация охоты у донора и реципиента.

1.5. Извлечение эмбрионов у крупного рогатого 22 скота.

1.6. Хранение зародышей крупного рогатого 26 скота.

1.7. Культивирование эмбрионов.

1.8. Оценка жизнеспособности эмбрионов.

1.9. Пересадка эмбрионов 1фупного рогатого 40 скота.

ГЛАВА П. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

1. Материалы и методы исследований.

2. Результаты исследований.

2.1. Сравнительная оценка применения гонадотроп- 55 ных препаратов различных серий ГСЖЕС и CSK на коровах и телках разных пород, используемых в качестве доноров.

2.1.1. Влияние разных серий ГСЖК и СЖ на индуци- 55 рование суперовуляции.

2.1.2. Реакция суперовуляцией яичников на обработ- 61 ку гонадотропином в зависимости от породы доноров.

2.2. Сравнительная оценка известных систем для 77 вымывания эмбрионов и совершенствование нехирургического способа извлечения эмбрионов крупного рогатого скота.

2.3. Сравнительная оценка жизнеспособности эмбрио- 88 нов, полученных от доноров разных пород в зависимости от гонадотропного препарата

2.4. Криоконсервация эмбрионов крушого рогатого 94 скота.

2.5. Изучение эффективности применения морфологи- 101 ческого, флуоресцентного метода и метода культивирования для оценки жизнеспособности замороженных и оттаянных эмбрионов крупного рогатого скота и их сравнительная оценка.

2.6. Пересадка эмбрионов крушого рогатого скота 106 и результаты научно-производственного опыта.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Совершенствование методов и техники трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота»

Коммунистическая партия Советского Союза последовательно осуществляет курс аграрной политики, выработанный на ХХУ1 съезде КПСС и в Продовольственной программе до 1990 года, уделяет большое внимание вопросам обеспечения населения продуктами животноводства и других видов сельскохозяйственной продукции.

Решение этих вопросов возможно при хорошей организации воспроизводства стада, совершенствования качественного состава поголовья, улучшении племенной работы, разведении животных высоко-цродуктивных пород, рационального использования ресурсов племенных животных, поднятия уровня селекционно-племенной работы. В то же время важно получать за короткий срок хозяйственного использования и при сохранении оптимальной продуктивности наибольшее количество полноценного в племенном отношении приплода и сохранить (высокий генетический потенциал животных.

Воспроизводительная способность коров может быть увеличена при помощи метода трансплантации эмбрионов. Трансплантация эмбрионов - это новый биотехнический метод, перспективный для получения многочисленного потомства от высокопродуктивных коров, ускорения проверки их по качеству потомства, создания новых пород молочного и мясного направления продуктивности в более короткие сроки, импорта и экспорта генетического материала.

В последнее десятилетие в Советском Союзе и за рубежом ведутся целенаправленные исследования по трансплантации зародышей. Однако реализация этого метода в молочном и мясном скотоводстве сдерживается недостаточной разработкой ряда теоретических, технологических и биологических проблем. К ним относятся вопросы суперовуляции у доноров, получения большего количества полноценных эмбрионов, хранения и пересадки эмбрионов животным-реципиентам. До сих пор недостаточно разработаны методы гфиоконсерващи зигот и их прижизненной оценки жизнеспособности. Известные методы вызывания суперовуляции не позволяют постоянно получать больше 3-4 эмбрионов и яйцеклеток на донора (RovJePu., eiaL., 1976;OziLi'P.jttaL, 1979), недостаточно выяснено влияние породы на реакцию суперовуляции (WiatoiL J., tf oi. , 1970;5auvwande. J., tf olL 1977).

Решению этих вопросов уделяется большое внимание многих ученых (Лопырин А.И. и др., 1950, 1951; Квасницкий А.В., 1951, 1953; Соколовская И.И., 1957; Заводовский М.М., 1963; Клинский Ю.Д., 1967; Мартыненко Н.А., 1971; RoJiovt V., е+ al„ 1972; Зъеелккк J. , ftetUv1974; .ScayiLow v. » 1975;^b., I975;WiliJ*>n SvetcLl., I976;&<Atid^ K. . 1977; Прокофьев M.И. и др., 1977; Сергеев Н.И. и др., 1980; Эрнст Л.К. и др., 1978; V/iLmu+T. , 1978; Бугров А.Д., 1982; Осташко Ф.И. и др., 1982 и др.).

Анализ данных литературы показал целесообразность исследований по совершенствованию метода трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота. Это диктуется непредсказуемостью реакции суперовуляции, которая является одной из основных помех в трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота (SehttihiL Ц., 1968; (гогс/оп J. , 1975), отсутствием стабильности результатов по получению эмбрионов нехирургическим методом от еуперовулировавших доноров (Bakit.Д., c//lleil<* с2). , 1978) и другими сложностями - дороговизной хиругичес-кого метода (iUdin А.,, 1977; Sthelfoh /. , 1979), разрозненностью результатов по низкотемпературному хранению эмбрионов {v/ilmtiS., 1972; Гаггаи/Jv е/а£., 1977\ £L$dtyi H.t 1977), оценке жизнеспособности (Shu ft. , е/ <?/, . 1976; btHttiJ^e k., 1977), нестабильностью приживляемости эмбрионов крупного рогатого скота от хирургической и нехирургической пересадки (в-очЛоп J, , 1975; Sle&han J. , 1975; Bel%<uJg(LJt., гЪП'ЛЫи, 1977;/eJi07n4 I, 1979).

Целью нашей работы являюсь дальнейшее совершенствование метода и техники трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота в условиях промышленного молочного скотоводства.

Для достижения этой цели были поставлены на разрешение следующие задачи.

1. Произвести сравнительную оценку различных гонадотропных препаратов для вызывания суперовуляции у коров (телок) - доноров различных пород в местных условиях.

2. Усовершенствовать метод нехирургического получения зародышей у коров (телок) - доноров в условиях производства.

3. Исследовать и усовершенствовать метод и технику консервации и оценки жизнеспособности зародышей крупного рогатого скота.

4. Провести широкий научно-производственный опыт практического применения метода трансплантации в условиях крупной молочной фермы.

Заключение диссертации по теме «Физиология», Передера, Константин Борисович

1У. В Ы В О Д Ы

1. Ответная реакция яичников суперовуляцией, выход эмбрионов с оценкой А-отличные и выход оплодотворенных яйцеклеток достоверно выше при использовании ГСЖ, чем нативной СЖ (Р / 0,05). При этом выход эмбрионов с оценкой "отличные" более чем в 2 раза выше после применения ГСЖ по сравнению с нативной СЖ.

2. Ответная реакция яичников суперовуляцией на гонадотропные препараты выше у доноров лебединской и чернопестрой породы по сравнению с 1фасной степной и симментальской не только по числу овуляций, но и по числу животных, реагировавших множественной овуляцией от числа обработанных животных.

3. Реакция коров суперовуляцией на обработку гонадотропными препаратами в зимний и весенний периоды выше, чем в летний период (Р L 0,05). Число извлеченных эмбрионов и яйцеклеток на одного донора было достоверно ниже летом, чем зимой и весной (Р £ 0,05).

4. На 7-ой день после осеменения абсолютное большинство эмбрионов (98,63%) находится в верхней части рогов матки, на расстоянии до 10 см от маточно-трубного соединения.

5. Разработанное устройство для нехирургического извлечения эмбрионов крушого рогатого скота позволяет повышать выход эмбрионов от числа желтых тел с 80% до 88,3%, а числа животных, у которых удалось извлечь эмбрионы с 79% до 90,4%.

6. Разработанная капельная методика насыщения и выведения вриопротектором физиологической среды перед замораживанием эмбрионов 1фупного рогатого скота обеспечивает постепенное повышение и понижение концентрации криопротектора, более физиологична по воздействию на мембранный аппарат клетки, упрощает технологию его введения и выведения по сравнению с общецринятой методикой. При этом выживаемость эмбрионов после замораживания и оттаивания повышается с 52,6-55,2% до 57,9-58,1%.

7. Комбинированное сочетание морфологического и флуоресцентного методов оценки жизнеспособности эмбрионов повышает результативность их отбора для пересадки, при использовании флуоресцентного зонда АНС. Результативность пересадки эмбрионов крупного рогатого скота находится в зависимости от их морфологической оценки.

8. Введение эмбрионов в рога матки на глубину 5-7 и 10-12 см не оказало заметного влияния на их приживляемость.

9. С увеличении 1фатности использования реципиентов (рнтактных телок)с I до 3-х раз приживляемость эмбрионов понижается.

У. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРВДОЖЕНШ

1. В целях повышения эффективности гормонального вызывания суперовуляции, обеспечивающей высокий выход полноценных эмбрионов в цроизводственных условиях .предлагается использование ГСЖ в 10-15 мл растворителя в дозе 2000-3000 И.Е.

2. Для производственных целей на пунктах и центрах по трансплантации эмбрионов рекомендуется устройство для нехирургического извлечения эмбрионов, обеспечивающее более полное извлечение эмбрионов из рогов матки.

3. В НИИ лабораториях и производственных центрах, занимающихся трансплантацией эмбрионов, для оценки их жизнеспособности рекомендуется комбинированное сочетание морфологического и флуоресцентного методов (с использованием анилино-нафталино-сульфоната - АНС).

4. Для создания банков замороженных эмбрионов в НИИ лабораториях и производственных центрах трансплантации рекомендуется ускоренный режим охлаждения с использованием капельной методики насыщения и выведения криопротекторов.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Передера, Константин Борисович, 1985 год

1. Алиев А.А., Лимонов В.И., Ходжаев С.С., Ельчанинов В.И. -"Усовершенствованный хирургический метод получения и пересадки зародышей у крупного рогатого скота". "Животноводство", 1977, А* I, ст.64-66.

2. Безбородов Н.В. Устройство для нехирургического извлечения зигот у животных. Авторское свидетельство СССР кл.А 61.Д 7/00, А.61, М.25/00, № 1015890.

3. Белевич В.П. Устройство для извлечения эмбрионов из рогов матки животных. Авторское свидетельство СССР № 8586782, кл.А 61, В 10/00, А.61, Д.7/02. Информационный бюллетень, 1981, № 32.

4. Белевич В.П., Прокофьев М.И. "Устройство для извлечения эмбрионов из матки животных". Авторское свидетельство СССР J6 I0I4575, кл.А 61, Д.7/02.

5. Гордиенко Е.А., Бронштейн В.Л. К механизму лизиса. В книге "Актуальные вопросы криобиологии и криомедицины", Киёв, Наук. Думка, 1974, с.13-18.

6. Гордиенко Г.С., Клинский Ю.Д., Кадатский Г.М., Жирков Г.Ф., Панфилова Л.Ф. Изучение новых прогестагенных препаратов для регуляции половой функции сельскохозяйственных животных. В книге "Гормоны в животноводстве", Москва, 1977, с.146-161.

7. Дончев П., Уочев И., Марковский К., Алиев М. Цит. по Ю.Д. Клинскому. Синхронизация охоты у сельскохозяйственных животных. Итоги науки и техники, т.12, 1979, с.30-40.

8. Дончев С., Калудина Т., Петров П. Там же, 1979, с.30-40.

9. Дриняев В.М., Яшин В.К., Головчанский О.Н., Газарян К.Г., Карнаухов Н.К., Утешев В.И. Оценка жизнеспособности с помощью флюоресцентных зондов, заявка на изобретение, приоритетная справка J& 32512 ИБР Ж УССР, Пущино, 1982.

10. Заводовский М.М. Теория и практика гормонального метода стимуляции многоплодия сельскохозяйственных животных. Москва, Колос, 1963, с.671.

11. Квасницкий А.В. Опыт межпородной пересадки яйцеклеток. Советская зоотехника, 1951, J& 19, с.224-226.

12. Квасницкий А.В. Методика и результаты межпородной пересадки зигот у сельскохозяйственных животных. Тр.НИИ свиноводства, 1953, № 19, с.114-128.

13. Клинский Ю.Д. Гормоны в животноводстве, 1967, сб.(ВПК) J® 9, с.54.

14. Клинский Ю.Д. Проблемы эндокринологии воецроизведения сельскохозяйственных животных. В книге "Физиология воспроизведения'', Харьков, 1977, с.73-79.

15. Клинский Ю.Д., Павлов В.А., Булынин В.И. В книге "Гормоны в животноводстве". Труды ВАСХНИЕ, Москва, Колос, 1977, с.75-99.

16. Клинский Ю.Д., Бакшеев Е.Д., Даровских В.Е., Жарков Г.Ф. -Методы гормональной регуляции функции воспроизведения сельскохозяйственных животных в цромышленной технологии. В книге "Гормоны в животноводстве", Москва, 1977, с.112-125.

17. Клинский Ю.Д., Алексеенко А.Н. Трансплантация зародышей сельскохозяйственных животных. В книге "Итоги науки и техники", серия "Животноводство и ветеринария", Москва, 1979,т.12, с.52-111.

18. Клинский Ю.Д., Сергеев Н.И. Результаты трансплантации эмбрионов у крупного рогатого скота в СССР, 1982, т.36, $ I, с.55-60.

19. Левченко Э.Н., Землякова Н.А., Протасов Б.И. Морфологическая оценка режимов криоконсервирования эмбрионов. Бш.ВНИИРГЖ 1980.

20. Лимонов В. Высокопродуктивные коровы-доноры зигот. "Животноводство", 1980, № 7, с.36-37.

21. Лопырин А.И. Биология размножения овец. Москва, Колос, 1971, с.357.

22. Лопырин Л.И., Логинова Н.В., Карпов П.Л. Опыт межпородной пересадки зародышей у овец. Сов.зоотехника, 1950, № 8,с.50-52.

23. Лопырин А.И., Логинова Н.В., Карпов П.Л. Влияние измененных условий эмбриогенеза на рост и развитие ягнят. Сов.зоотехника, 1951, № II, с.83-95.

24. Максимов Н.А. 0 вымерзании и холодостойкости растений. Экспериментальные и критические исследования. Известия С-Пб. Лесного института, 1913.

25. Мартыненко Н.А. В книге "Эмбриональная смертность сельскохозяйственных животных и ее предупреждение". К. Урожай, 1971, с.7-9, с.103-104, с.128-132, с.155.

26. Мельникова Е.В., Дриняев В.А., Карнаухов В.Н., Яшин В.А., Утешев В.Н. Экспресс-диагностика жизнеспособности яйцеклеток и зародышей млекопитающих. "Консервация генетических ресурсов", АН СССР, Пущино, 1984.

27. Никоян П.Е., Клинский Ю.Д., Сергеев Н.И. Множественная овуляция при гормональной обработке. "Животноводство", 1982,5, с.56-57.

28. Осташко Ф.И. 0 природе холодового удара живчиков. Сб.работ НИИ1 Лесостепи и Полесья УССР. Искусственное осеменение сельскохозяйственных животных, Харьков, 1963.

29. Осташко Ф.И. Причины и механизм холодового удара клеток. Международный сельскохозяйственный журнал, 1964, № 3, с.106-109.

30. Осташко Ф.И. Глубокое замораживание и длительное хранение спермы производителей. К., Урожай, 1968, с.248, 246.

31. Осташко Ф.И. Глубокое замораживание и хранение спермы производителей. К., Урожай, 1976, с.255.

32. Осташко Ф.И. Глубокое замораживание и хранение длительное спермы производителей. К., Урожай, 1978, 58, с.81-100.

33. Осташко Ф.И. Криоконсервация зародышей. В книге "Воспроизведение стада"., К., Урожай, 1984, с.87-101.

34. Осташко Ф.И., Лопатко М.И., Бугров А.Д. Теория и практика глубокого охлаждения и длительного хранения спермы. Молочное и мясное скотоводство. "Респ.межв.научн.сб.", 1966, 7,с.3-13.

35. Осташко Ф.И., Павленко М.П. Харьковская технология получения и нриоконсервации спермы производителей. "Научно-технич. бшл.НИИЖ ЛиП УССР", 1974, 6, с.24-28.

36. Павлов В.А. В книге "Физиология воспроизводства крупного рогатого скота", М., Россельхозиздат, 1984, с.108.

37. Падучева А.Л., Бойко Д.Ф. Гормональные методы повышения плодовитости сельскохозяйственных животных. М., Колос, с.304.

38. Платов Е.М. Усовершенствованный метод замораживания семени быка. Вестник с/х науки, 1961, II, с.127-128.

39. Прокофьев М.И. В книге "Гормоны в животноводстве" (Труды ВАСХНШГ), М., Колос, 1977, с.125-145.

40. Прокофьев М.И. Роль гонадотропинов в формировании полового цикла и гормональные методы его регулирования у сельскохозяйственных животных. Автореферат дисс.докт.биол.наук. Харь- -ков, 1979, с.48.

41. Прокофьев М.И. Регуляция размножения сельскохозяйственных животных. Л., Наука, 1983, с.181-218.

42. Прокофьев М.И., Алиев А. А., Рябых В.П., Малышев B.C., Белевич В.П., Горячев B.C., Беляков С.П., Бескровных И.П., Жпленко

43. В.Л., Логинов А.Г. Трансплантация зигот у крупного рогатого скота. Вестник сельскохозяйственной науки, 1977, № 6, с.85-94.

44. Прокофьев М.И., Рябых В.П., Белевич В.П., Малышев B.C., Бахитов К.И., Черных В.Я., Горячев B.C., Баскакова Е.А., Трунтов А.К. Трансплантация зародышей крупного рогатого скота нехирургическим способом. Вестник с/х науки, 1978,1., с.64-72.

45. Прокофьев М.И., Голубев А.К. Трансплантация зигот сельскохозяйственных животных во Франции. Вестник сельскохозяйственной науки, 1978, № 6, с.136-140.

46. Прокофьев М.И., Белевич В.П., Рябых В.П., Бахитов К.И., Черных В.Я., Горячев B.C., Маленко Г.П., Никитин В.Н., Дронин А.П., Карецкая Л.И. Технология нехирургической трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота. "Животноводство", 1980, № 2, с.50-54.

47. Прокофьев М.И., Рябых В.П., Белевич В.П., Малышев B.C., Бахитов К.И., Горячев B.C. Эндокринная регуляция суперовуляции у коров и телок при трансплантации эмбрионов. Бюлл. У1фНИИ ФБП, 1980, в.1/4, с.44.

48. Цушкарь Н.С., Наконечный А.И., Калугин Ю.В. Некоторые вопросы механизма действия криопротекторов. В книге "Актуальные вопросы консервации костного мозга и 1фОви", Харьков, 1972, с.98-113.

49. Пушкарь Н.С., Белоус A.M. Введение в криобиологию. Киев, Наук.думка, 1975, с.342-343.

50. Пушкарь Н.С., Белоус A.M., Розанов Л.Ф. и др. Низкотемпературная кристаллизация в биологических системах. Киев, Наук, думка, 1977, с.243.

51. Пушкарь Н.С., Шраго М.И., Калугин Ю.В. 0 путях создания новых криопротекторов. Проблемы гематологии и переливания крови,1977, 22, Ш 2, с.18-19.

52. Сергеев Н.И., Постылько В., Шихов И. Перспективный способ размножения животных. Сельское хозяйство России, 1980, № 2, с.51-52.

53. Сергеев Н.И., Шихов И., Горбунов В. Воспроизводительная способность коров-доноров зигот. "Животноводство"; 1981, № 6,с.57-59.

54. Сергеев Н.И., Клинский Ю.Д., Овчинникова А.В. Полиовуляция у коров и телок - доноров эмбрионов. Ветеринария, 1982, й 7, с.47-49.

55. Сергеев Н.И., Никоян П.Е. Устройство дляшвлечения эмбрионов у животных. Авт.св.№ 1034735. Бюлл.Инф.№ 30, 1983.

56. Сергеев Н.И., Некрасов А.Л., Овчинникова А.В., Букарова В.И., Смыслова Н.И. Суперовуляция, получение, криоконсервирование и пересадка эмбрионов крупного рогатого скота. "Животноводство", 1983, № 10, с.20-22.

57. Сергеев Н.И., Шихов И.Я. Эффективность гормонального вызывания овуляции у коров и телок - доноров в зависимости от сезона года. "Животноводство", 1983, № 12, с.53-55.

58. Смирнов O.K., Клинский Ю.Д., Сергеев Н.И., Даровских В.Е., ■ Шихов И.Я., Горбунов В.И., Гольдман И.Л. Научные проблемы и пути внедрения трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота. Вестник сельскохозяйственной науки, 1980, № II, с.73-83.

59. Смит 0. Влияние низких температур на живые клетки и ткани. В кн."Применение замораживания и высушивания в биологии, под редакцией Р.Харриса. Изд.иностр.литературы, 1956, Москва.

60. Смит 0. Биологическое действие замораживания и переохлаждения. М., Изд-во иностранной литературы, 1963, с.509.

61. Смит 0. 1949-1968. Цит.по Осташко Ф.И. в кн."Глубокое замораживание и длительное хранение спермы производителей". Киев,1. Урожай, 1968, с.73.

62. Соколовская И.И. Прблемы оплодотворения сельскохозяйственных животных. М., Советская наука, 1957, с.314.

63. Черных В.Я., Прокофьев М.И., Петунина В.М., Маленко Г.П., Кононов В.П. Устройство для пересадки эмбрионов крупного рогатого скота. Авт.свид.й 897224, 1982, бгалл.й 2.

64. Эрнст Л.К., Голубев А.К., Кудрявцев И.В. Перспективы развития и практическая значимость исследований по трансплантации эмбрионов и клонированию млекопитающих. Сельскохозяйственная биология, 1978, т.13, 5, с.659-666.

65. Эрнст Л.К., Прокофьев М.И., Бахитов К.И., Белевич В.П., Шишкина К.И., Татаринова Л.В. Индивидуальная реакция яичников коров при индуцировании суперовуляции. Труды ВАСХНИЛ 1984,6, с.22-24.

66. Adams С.Е. Egg development in the rabbit: the influence of post coital ligation of the uterine tube and of ovariectomy. J.Endocrinology,1958,N I6,p.283-293.

67. Adams C.E. The development of rabbit eggs after culture in vitro 1-4 days. J.Embryol.and Eacperim.Morpholog. ,I970,H 23, p.21-34.

68. Bank H., Mazur P. Visualization of freezing damage. J.Cell. Biol.,1973,N 57,P.729-742.

69. Baumgarten G.f Hahn R., Lorrman W., Loder H., Hahn Y. Patent BRD, ATSCH ND/II.05.78.,I978.

70. Bennet J.P*, Rowson L.E.A. The use of radioactive artificial eggs in studies of egg transfer and transport in the female reproductive tract. In: Proc.4 th Intern. Congr.Anim.Reprod. The Hague,I96I,v.2,N 3,p.360-371.

71. Betteridge K.J. Techniques and results in cattle. Superovula-tion. "Monogr.Can.Dep.Agr.",1977,N I6,p.I~9.

72. Betteridge K.J. In vitro fertilization and use of follicular oocytes. "Monogr.Can.Dep.Agr.",1977,N I6,p.9-I0.

73. Betteridge K.J. Methods of assessing the viability of embryos. "Monogr.Can.Dep.Agr.",I977,N 16,p.24.

74. Betteridge K.J. Summary of factors affecting success rates ih surgical embryo transfer. "Monogr.Can.Dep.Agr.",1977,N 16, p.29-31.

75. Betteridge K.J. Techniques and results in pigs. Superovulation.. ■ (

76. Monogr.Can.Dep.Agr.",1977,N I6,p«4I-43.

77. Betteridge K.J., Mitchell D. Embryo transfer in cattle experience of twenty-four completed cases. J.Theriogenology, I974,v.2,N 2,p.69-75.

78. Bilton R.J., Moore N.W. Effects of ice seeding and thawing rate on the develppment of sheep embryos stored I96°C. -J.Theriogenology,1976,v.6,N 6,p.635.

79. Bilton R.J., Moore N.W. Storage of cattle embryos. J.Reprod. and Fert.,1976,v.46,N 2,p.537-538.- 139

80. Boland M.C., Crocby Т., Gordon I. Induction of twin pregnancy in heifers osing a simple non surdical techniques. Proc. 8th Int.Сongr.Anim.Reprоd. A.I.Krakow,1976,N 3,p.241-243.

81. Booth W.D., Newcomb R., Strange H., Rowson L.E»A., Sachr H.B. Plasma oestrogen and progesterone in relation to superovula-tion and egg recovery in the cow. Vet.Rec.,I975,v.97»N 19» p.366-369.

82. Brand A., Drost M. Embryo collection by non-surgical methods. -"Monogr.Can.Dep.Agr.",1977,N 16,p.16-19.

83. Brand A-r, Trounson D.f Aarts M., baayer D. Superovulation and non surgical embryo recovery in the lactating dairy cow. -J.Anim.Prod.,I97S,v.26,N I,p.55-60.

84. Breth N., Hausen. Agtransplantation pa kvoeg Komerciel Brug Dansek Vet.Tidssker,I977,v.60,N 20,p.I5/I0.93• Brinster R.L. A method for in vitro cultivation of mous two-cell to blastocyst. Exp.Cel.Res.,1963,v.32,p.205-207.

85. Casida L.E., Meyer R.K., MeShan W.N., Wisnicky W. Effects of pituitari gonadotropins on the ovaries and the induction ofsuperfecundity in cattle. Am,J.Yet.Res. ,194-3,v.p.76.

86. Chang M.C. Transplantation of fertilized rabbit ova: The effect on viability of age in vitro, storage period and storage temperature. J.Nature,1948,v.161,p.978-979.

87. Chang M.C. Effects of low temperature on fertilized rabbit ova in vitro and the normal development of ova kept at low temperature for several days. J.Genetical.Physiology,1948, v.31,p.385-410.

88. Cooper M.J. Control of oestrous cycles of heifers. With a syntetic prostaglandin analogue. Yet.Rec.,I974,v.95»N Ю, p.200-223.

89. Cooper M.J. Fluprostenol in mares; clinical trials for thetreatment of infertility. Yet.Rec.,1976,v.98,N 26,p.523-525.

90. Drost M., Brand A., Aarts M.H. A device for nonsurgical recovery of bovine embryos. J.Theriogenology,I976,v.6,N 5, p.503-507.

91. Du Mesnil du Buisson P., Renard J.P., Ievasseur M.C. Factors influencing the quality of ova and embryos. "Monogr.Can. Dep.Agr.",1977,N 16,p.24-26.

92. Dziuk P.J. Collection and isolation of ova. "Techn.Bul. Agric.Ebcp.Sta.,Minnesota,1958,v.222,N I,p.22-34.109» Elsden R.D. Embryo transfer by surgical methods. "Monogr. Can.Dep.Agr.",1977,N 16,p.27-28.

93. Elsden R.D. Comercial embryo transfer in North America and Australasia. "Monogr.Сan.Dep.Agr.",1977»N 16,p.59-61.

94. Elsden R.D., Lewis Cumming J., Lawson R. Superovulation in the cow following treatment with PMSG and prostaglandin

95. F2-Alpha. J.Reprod. and Fert.,1974,v.36,N 2,p.455-456.

96. Res.,1980,v.3,N 4,p.379-393. II5« Gordon I. Problems and prospects in cattle egg transfer. — J.Irish,Vet.,1975,N 29,p.21-30;39-62.

97. Gordon I., Williams G., Edwards J. The use of serum gonadotropin (PMS) in the cow. J.Agr.Sci.,(Cambr.),1962,v.59,p.143-198.

98. Greve T. Egg transfer in the bovine effect of injecting PMSG on different days. J.Theriogenology,I976,v.5,N I,p.15-19.-142

99. Greve Т. Non-surgical egg transfer in the cow, 27ih. Ann, Meet.Europ.Ass.Anim.Prod.,Ziirich,I976,N 8,p.23-26.

100. Greve Т., Hansen H., Breth J* Kirurgiske fostertrnplantationer pa k0dvaeg. Dan.Veterinaertidsskr,I976,v.59,N I,p.4-10.

101. Greve Т., Lehn-Jensen H. Non surgical embryo transplantation in larger dairy herd. XII Nord.Vet.Congr.Abo,1978.

102. Greve Т., Lehn-Jensen H., Rasbech И.О. Non surgical recovery of bovine embryos. J.Theriogenology,I977, N 7,p.239-250.

103. Greve Т., Lehn-Jensen H., Rasbech N.O. Morphological evaluation of bovine embryos recovered non surgically from supero-vulated dairy cows on 61/2 to 71/2-B A field study. J.Ann.Biol. Anim.Bioch.Biophys.,I979,v.I9,N 5,P.I599-I6II.

104. Halm J. Eilibertragung beim rind. Milchpracis,I997»v.I5, № 2,p«4~7.

105. Hahn J. and Schneider. Observations on the influence of the donors on egg quality and transfer results. EEC.Sem.Ovarian Stimulation and Egg Quality Tours,1978.

106. Hafez E.S.L. Storage media for rabbit ova. J.Appl.Physio-logy,1965,1® 20,p.731-736.

107. Hafez E.S.L. Egg Storage. Ini Methods in mammalian embiyology, 1971, P • H7-I32.

108. Hearshow H., Mattner P.E., Nancarrow C.D., Restall B.J. The effect of the mode of administration of prostaglandin F2-Alpha on the sychronization of oestrus in cattle. J.Reprod.and Fert. ,1974-,v.36,M 2,p.4-6-4-8.

109. Lampeter W.W. Practice of non surgical collection of bovine embryos. J.Zuchthyg,I977,NS I2,p.8-I3.

110. Lasten D.B. Follicular development in heifers influseol with follicle stimulating Hormone. J.Reprod.and Fert.,1972,v.28,p.285-289.

111. Lasten D.B. Disappearance and up take of (I25j) FSG in the rat, rabbit ewe and cow. J.Reprod.and Fert.,1972,v.30, p.407-415.

112. Lasten D.B. Disappearance and uptahe of (125^) FSH in the rat, rabbit, ewe and cow. J.Reprod,Fert,v.30,p.407-415»

113. Lawson R., Adams C. Development of egg in rabbit ovidact. -J.Reprod.and Fert.,1972,v.28,№ I,p.313-315.

114. Lawson R., Rowson L., Adams C.E. The development of cow eggs in the rabbit oviduct and their viability after re-transfer to heifers. J.Reprod.and Fert.,1972,v.28,№ 2,p.3I3-3I5.

115. Leibo S.P. Fundamental cryobiology of mouse ova and embryos.-Ins The freezing onmarrow stem cell suspensions: interactions of cooling and warming rates in the presence of PVP, sur-cose, orglycerol. J.Cryobiology,1971» N3 8,p.447-452.

116. Lehn-Jensen H., Greve T. Egransplantation hos kvaeg. Tolo-mandsladet, 1977,v.49 ,N2 9»P.495-500.

117. Lehn-Jensen H., Bovine egg transplantation. Preservation of embryos. J.Nord.Vet.,1980,v.32,Ш 12,p.523-532.

118. Louis T.M., Hafs H.D., Stellflug J.M. Control of ovulation, fertility and endocrine response after prostaglandin F2~Alpha in cattle. J.An.Biol.Anim.Biochim.Biophys. ,1975,v.15,N£2,p.407-417.

119. Lovelock J.E. Physical instability and thermal shock in red cells* J.Nature (London),1954,173.153» Lovelock J.E. The physical instability of human red blood cells. J.Biochem,I955»60.

120. Lovelock J.E., Polge G* The immobilization of spermatozoa by freezing and the protective action of glycerol. J.Biochem. 1954,58.

121. Lubbadeh W.I?., Graves C.N., Spahr S.L. Effect of repeated superovulation on ovulatory response of dairy cows. J.Anim. Sci.,1980,v.50,N2 I,p.124-127.

122. Maryman HIT! Freezing injury and iTs prevention in living cells. J.Ann.Rev.Biophyz.and Bionegr. ,I974,v.3,NS 4,p.341-363.

123. Maurer P.R. Storage of mammalian oocytes end embryos; A Review Canadian Journal of Animal Science,1976,v.56,№ 2,p.I3I-145.

124. Mazur P. Kinetics of water loss from cells at subzero temperatures and the likelihood pf intracellular freezing. J. Gen.P!bysiol,I963,№ 47,p.34-7-369.

125. Mazur P. Cryobiology: The freezing of biological systems. -J.Science (Wash D.C.),1970,Ж 168,p.939-949.

126. Mazur P. The role of intracellular freezing in the Death of Cells cooled at supraoptimal rates. J.Ciyobibology,I977»14,p.251-272.

127. Mazur P., Tarrant S., Leibo S.P., Chu E.H.Y. Survival of hamster tissue culture cells after freezing and thawing. -J. Cryobiology, 1969, NS 6,p. 1-9.

128. Mazur P. Slow-Freezing injury in mammalian cells. Ins The Freezing of mammalian embryos (Ciba Found.Symp.),Amsterdamsi Elsever,1977,P.19-45.

129. Mazur P., Leibo S.P. A two factor hypothesis of freezing injury evidence from chineze hamster tissue-culture cells.) -J.Exp.Cel.Rec.,1972,v.7I,i 2,p.345-355.

130. Me Grath J.J., Cravalho E.G. An experimental comparisson of intracellular ice formation and freeze-thaw survival of Hela S-3 cells. J.Cryobiology, 1975 »N? 13»P • 126-133•

131. Menezo Y. Attemps at in vitro fertilization in calf. Egg transfer in cattle,1976,p.I89-I99.

132. Melntosh J.E., Morr R., Allen W.R. Pregnant mare gerum gonadotropin: rate of clearance from the circulation of sheep.-J.Reprod.and Fert. ,I975,v.44,N2 I p.95-IOO.

133. Moore N. The control of time of oestrus and ovulation and induction of superovulation in cattle. Austral.J.Agr.,1975, v.36,N§ 2,p.295-ЗО4.

134. Newcomb R. Embryo transfer in farm animals. Monogr.Can. Dep.Agric.,1977,№ 16,p.28-29.

135. Newcomb R. Commercial embryo transfer in Europe. Monogr.Can. Dep.Agr. ,1977, N5 I6,p.61-62.

136. Newcomb R. Physiological factors on the early embryo. J. Biochem.Soc.Transact. ,I977»v 5,P.4-55-4-56.

137. Newcomb R. Surgical and non surgical transfer of bovine embryos. J.Vet.Rec.,1979,v.105,p.432-434.

138. Newcomb R. Investigation of factors affecting superovulation and nonsurgical embryo recovery from lactating. J.British. Frisian.Cows.Vet.Rec.,1980,v.106,N 3,p.48-49.

139. Newcomb R., Rowson L.E.A. In: "Egg Transfer in cattle". The-entry of superovulated eggs in the uterus., Seminar CEC, Luxembourg, EUR 54-9I,I976,p.I-I5.

140. Ogawa S. and Tomoda S. Survival of 16-celled and Morula stage rabbit embryos frosen to I96°C. - Experimental of Anim.,1976,v.25,p.273-282.

141. Ortavant R, Influence of climatic factors on reproduction in cattle. In: Conduite du troupean at reproduction. Paris, 1974,p.97-116.

142. Ozil J.P., Heyman J., Renard J.P. An instrument for transcervical recovery of embryos from heifers. J.Theriogenology,1979,v.II,p.173-183»

143. Phillipo M., Rowson L.R.A. Prostaglandins and superovulation in the "bovine. Arm.Biol.Anim.Biochim.Biophys.,1975,^.15,2,p.233-240.

144. Pincus G. The eggs of mamals. New York, Macmillan,I936,p.I60. 187» Rasbech N.O. Non-surgical recovery and transfer of bovineembryos under farm canditions. "27 th Ann.Meeting Eur.Assn. Anim.Prod.", Zurich,1976,3

145. Rasbech N.O. Instrumental becovery of bovine eggs. J.Nord. Vet.Med.,1981,v.33,p.141-144.

146. Renard J. In vitro culture of cow embryos from day 6 and 7. -Egg transfer in cattle,I976,p.®59,I75.

147. Renard J.P., Heyman J., Ozil J.P. La transplantation des embryons ches les bovins 1Tapplication practique. Elevage, 1978,Ш 73,p.39-44.

148. Robinson J. Theccolloquium in perspective. Ann.Biol.Anim. Biochim.Byophys. ,1975,v. 15,N1 2,p.481-492.

149. Rowson L.E.A. Egg transfer in domestic animals. J.Nature,1.7I,NS 233,P.378-388. I95« Rowson L.E.A., Dowling D.F. An apparatus for the extraction of fertilized eggs from the living cow. J.Vet.Rec.,1949, v.6I,p.191-197.

150. Saumande J., Chupin D., Mariana J., Ortavant R»f Mauleon P. Factors affecting the variability of ovulation rates after PMSG stimulation. -Ins EEC seminar Control of reproduction inthe cow. Golway,1977,P«37-60.

151. Scanlon P. Orientation of cattle Fetuses in utero in relation to stage of pregnancy. J.Dairy Sci.,1975,v.58,№ 4,p.571-573.

152. Scanlon P., Sreenan I., Gordon I. Hormonal induction of superovulation in cattle. J,Agr.Sci.(Cambr.),1968,v.70,p.179-182.

153. Schams D., Menzer C.H., Schallenberger E., Hoffmann В., Prokopp A., Harn В., Hanh R. Superovulation beim Rind. Hor-mon-profile bei stimulation mit Serumgonadotropin (PMSG) bsw. hypophysarem FSH. J.Zuchthygiene,I979,v.I4,NS I,p.II-25.

154. Schelton I.H. Bovine embryo transfer-techniwues and applications in research. "Austral.Adv.Vet.Sci.". Townsville,I979, p.13-19.

155. Schenel U. Fortpflanzung, besaumung und aufzucht der haustie-re. J.Biol.Pathol.and Hygiene,1968,v.4, N! 2(3),p.128-164.

156. Schilling E., Niemann H., Eisaesser F., Smidt D., Sacher B. Ergebnisse und folgerungen aus einem superovulations-versuch mit einer farsengruppe. J.Zuchthyg.,1981,v.16,N 4,p.I54-I6I,

157. Seidel J., Bowen J., Homan N., Okun N. Fertility of heifers with sham embryo transfer „throygh the cerviise. Vet.Rec., I975,v.97,K2 16,p.307-308.

158. Seidel G.E., Seidel S.M., Bowen R.A. Bovine embryo transfer procedure. Fort.Collins, Colorado State University,1978, p.40.

159. Seidel G.F., Elsden R.P., Nelson L.D., Bowen R.A. Superovula-tion of cattle with pregnant marels serum gonadotrophin and follicle stimulating hormone. In: EEC-Seminar "Contr.of Rep-rod. inthe cow". Golway,1979,p.37-45.

160. Simon N. Untersuchungen zur steurung der ovarfunktion durch gonadotropine beim rind. Mh.,Vet.Med.,1979,v.34,N2 7,p.247-249.

161. Shea E.F. The transfer of bovine embryos. In: Egg Transfer in cattle., EUR 549I,I976,Ses.2,p.I45-I56.

162. Shea B.E., Hines D., Lighfoot D., Olios G., Olson S. In: Egg transfer in cattle. Seminar CEC, Luxembourg, EUR,5491,1976, p.145-152.

163. Shea B.E. Evaluating the bovine embryo. J.Therio&en,,1981, v.I5,№ I,p.31-42.- 151

164. Shelton J.N., Heath T.D., Old K.Q., Tunbul G.E. Non-surgical recovery of egga from single-avulating bovines. J.Therio-genology,1979,v.II,№ 2,p.149-152.

165. Sreenan J.M., Gosling J.P. The effect of cycle stege and plasma progesterone level on the induction of multiple ovila-tions in heifers. J.Reprod.and fert.,1977,v.50,p.367-369.

166. Staples R.E. Development of 5-day rabbit blastocysts after culture at 37°C. J.Reprod.and Fert.,1977,v.50,p.367-369.

167. Sugie T. Successful transfer of a fertilized bovine egg by mon surgical techniques. J.Reprod.and Fert.,1972,v.10, p.197-201.

168. Tervit H.R., Whittingham D.G., Rowson L.E.A. Successful culture in vitro of sheep and cattle ova. J.Reprod.and Fert., 1972, N2 30,p.493-497.

169. Tervit H.R., Rowson L.E.A., Brand A.^Sinhronization of oestrus in cattle uzing a prostaglandin F2a analogue (ICI 79939). J.Reprod.and Fert.,I973,v.34,p.I79-I8I.

170. Tervit H.R. and Rowson L.E.A. Birth of lambs after culture of sheep ova in vitro for up to 6 days. J.Reprod.and Fert.,1974,v.38,p.177-179.

171. Tgunoda J., Sigue I. Survival of rabbit eggs presrved in plastic straws in liquid nitrogen. J.Reprod.and Pert.,1977, v.49,P.173-174.

172. Thibault C., Gerard M., Menezo Y. Acquisition par 1*ovocyte de lapine et de veau du facteur de decondensation du noyaudu spermatozoide ffecondant (MPGF). J.Aim.Biol.Anim.Biophys.,1975,N 15,P«705-714.

173. Trounson A.O., Rowson L.E.A. Research on embryo transfer in domestic animals. J.R Agr.Soc.England,1976,v.137,p.77-85»

174. Trounson A.O., Willadsen S., Rowson L., Newcomb R. The storage of cow eggs at room temperature and of low temperatures. -J.Reprod.and Fert.,I976,v.46,p.I73-I78.

175. Walter C.A., Knight S.C., Farrant J. Ultrastructural appea-rahce of freezesubstituted limphocytes frozen by interrupting rapid cooling with a period at -26°C. J.Cryobiology,I975,1. Ж 12, p. ЮЗ-Ю9.

176. Warwick B.L., Berry R.O. Inter-generic and intra-specmfic embryo transfers. J.Hered.,I949,v.40,p.297-303.239* Whittingham D.G. Survival of mouse embryos after freezing and thawing. Nature (London),1971,v.233,№ 5315»p.125-126.

177. Whittingham D.G. Survival of rat embryos after freezing and thawing. J.Reprod.and Pert,,1975,v.43,p.575-578.

178. Whittingham D.G. General aspects of egg culture and preser-wation. In: Egg Transfer in Cattle, Luxembourg and London, I976,p*I0I-I06.

179. Whittingham D.G. Low temperature preservation of embryos. -Monogr.Cab.Dep.Agr.,1977,№ 16,p.50-53.

180. Whittingham D.G., Wales R.G. Storage of two-cell mouse embryos in vitro. J.Agr.Sci.,Cambr.,1965,Ш 74,p.593.

181. Whittingham D.G., Wales R.G. Storage of two-cell mouse embryos in vitro. Australian J.of Biol.Sci.,1969,№ 22,p.1065-1068.

182. Whittingham D.G., Leibo S.P., Mazur P. Survival of mouse embryos frozen -i96°C. and 269°C. J.Science,1972,v.178, Ж 4060,p.411.

183. Whittingham D.G., Adams C.E. Low temperature preservation of rabbit embryos. J.Reprod.and Pert.,1976,v.47,p.269-274.24.7. Willadsen S.M., Polge C., Rowson S., Moor R. Deep freezing of sheep embryos. J.Reprod.and Pert.,1976,v.46,p.151-154.

184. Willams W., Lucken E., Iver D., Willams E. Plasma progesterone concentrations in cows and steers after repositol progesterone treatment. J.Dairy Sci.,1976,v.59,N2 8,p.I525-I527.

185. Willet E.L., Black W.G., Casida L.E., Stone W.N., Bucner P.J. Successful transplantation of a fertilized bovine ovum. -J.Science,I95I,v.II3,p.247.

186. Wilmut J., Rowson L. Experiments on the low temperature preservation of cow embryos. Vet.Rec. ,I973,v.92,N2 26,p.686-690.

187. Wilmut T. The value of embryo transfer to cattle breeding in Britain. Vet.Rec.,1978,v.I03, Ш 6,p.I07-II0.

188. Wood M.J., Farrant J. Preservation of mouse embryos by two-step freezing. J.Cryobiology,I979,№ 17,p.178-180.

189. Wright R.W. Successful culture in vitro pf swine embryos to the blastocyst stage. J.Anim.Sci.,1977,v.44,№ 5,P-854-858.1. УТВЕРЖДАЮ

190. Директор НИИЖ Лесостепи и Полесья УССР1. А. А. ОМЕЛЬЯНЕНКОв&гуеы*. 1984 годаV1. АКТг.Харьков, НИИЖ Лесостепи и Нолесья УССР

191. Новым катетером вымыты эмбрионы у 19 доноров. Получено всего 182 эмбриона и яйцеклеток, что составляет 88,3% от числа овуляций, в среднем на одного донора 9,4 эмбриона и яйцеклеток.

192. На основании изложенного можно заключить, что предлагаемый катетер можно рекомендовать использовать в производство

193. А.А.БЕЛИКОВ И.М.ВЕЛИЧКО Л.Д.ХАРЧЕНКО

194. Авторы: Ф.И.Осташко, А.Д.Бугров, К,Б.Передера

195. Заявленный объект предназначен для использования в сельском хозяйстве, в широкомасштабной селекционной работе, в лабораториях, пунктах по трансплантации эмбрионов.

196. В основном он предназначен для использования в животноводстве при получении эмбрионов от высокопродуктивных коров-доноров.

197. Результаты исследований объекта по патентной и научно-технической литературе в указанной области представлены в "справке" об исследовании заявленного объекта по патентной и научно-технической литературе".

198. Признаки Предлагаемого прототипа объекта

199. Существенные Существенные отличия признакитехничес- общественно кие полезные1. Резиновая трубка2. Боковые отверстия3. Прямой стилет

200. Фиксирующий флянец с тупым концом5. Надувной баллончик6. Надувной канал

201. Наружный выход резиновый трубки8. Нипельный клапан

202. Металлический переход трубки соединительной головки1.Резиновая трубка2.Боковые отверстия трубки

203. Резиновая трубка со сквозным отверстием2.Стилет с уступом

204. Фиксирующий флянец со сковзным отверстием1.0беспечи- . вает ток смывной жидкости через сквозное отверстие ' и полное вымывание эмбрионов

205. Повышает надежность контейнера в работе

206. Повышаем выход гс нетичес-кого материала на 59,5?

207. Снижение затрат I получение эмбрионов и яйцеклеток

208. Сравнение показывает, что заявляемый объект обладает преимуществами по сравнению с прототипом базовым объектом, имеет народнохозяйственное значение и его можно рекомендовать для внедрения.

209. Данное заключение обсуждено на экспертном совете НИИ животноводства Лесостепи и Полесья УССР, протокол 10 от Зиювя 1984 года.

210. Экспертння комиссия: Старший научный сотрудник1. Руководитель патентной1. А.А.БЕЛИКОВ Е.Г.ТАРАН

211. Й ; ■: ^ "УТВЕРВДАЮ" j Директор о/х-ва "Украинка" ; , НИИЖ Лесостепи и^лесья УССР1. Н.И.АЛЕШИН л 1985 года1. АКТо проведении испытаний устройства для извлечения эмбрионов у крупного рогатого скота в о/х-ве "Украинка"

212. Ра£работанным устройством эмбрионы извлечены у 12 доноров. Получено всего 131 Эмбрион и яйцеклетка, что составляет 86,4%, от числа овуляций. Извлечено на донора в среднем 10,9 эмбриона и яйцеклетка.

213. Иг,по.ттниФР1ттГ'"/г^С/ if r птиртгтттгрл1. СПРАВКА

214. УТВЕРадАЮ" Директор о/х-ва "Украинка"

215. Н.И.АЛШИН "ft " -gfc^W 1985 годао внедрении научных результатов диссертационной работы К,Б.ПЕРЕДЕРИ "Совершенствование методов и техники трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота"1. Название внедрения1. Место и объем внедрения1. Группы внедрения

216. Результаты внедрения с подтверждением с меса

217. Устройство для извлечения эмбрионов у крупного рогатого скота0/х-во "Украинка".научно-исследовательский институт животноводства Лесостепи и Полесья УССР

218. Применение для научно-производственных работ на пунктах и центрах по трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота