Совершенствование и оценка средств и методов лабораторной диагностики репродуктивного и респираторного синдрома свиней тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 16.00.03, кандидат ветеринарных наук Бунькова, Наталия Ивановна

• Бунькова, Наталия Ивановна
• кандидат ветеринарных наук
• 2008

Оглавление диссертации кандидат ветеринарных наук Бунькова, Наталия Ивановна

Список сокращений.

1. ВВЕДЕНИЕ.

1.1. Актуальность темы.

1.2. Цель и задачи исследования.

1.3. Научная новизна работы.

1.4. Практическая значимость результатов исследований.

1.5. Основные положения, выносимые на защиту.

1.7. Личный вклад соискателя.

1.8. Структура и объём диссертации.

1.9. Благодарности.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

2.1. История открытия болезни, этиология и мировое распространение РРСС.

2.2. Таксономия, физико-химическая и молекулярно-генетическая характеристика вируса РРСС.

2.3. Культивирование вируса РРСС in vitro.

2.4. Репликация, вирусные белки и патогенез болезни.

2.5. Биологическая и генетическая вариабельность вируса РРСС.

2.6. Средства и методы лабораторной диагностики РРСС.

2.6.1. Прямое обнаружение вирусных антигенов в тканях и органах заражённых животных.

2.6.2. Изоляция и идентификация вируса РРСС.

2.6.3. Методы обнаружения вирусного генома.

2.6.4. Характеристика и диагностическая ценность методов обнаружения вирусспецифических антител.

2.6.4.1. Иммуно-гистохимические методы анализа.

2.6.4.2. Методы твёрдофазного иммуноферментного анализа (ELISA).

2.6.4.3. Реакция нейтрализации.

2.6.4.4. Специфические иммуноглобулины М и диагностическая ценность их обнаружения.

2.6.4.5. Интерпретация результатов серологических исследований.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Совершенствование и оценка средств и методов лабораторной диагностики репродуктивного и респираторного синдрома свиней»

1.1. Актуальность темы

Репродуктивный и респираторный синдром свиней (РРСС) - контагиозная вирусная болезнь, характеризующаяся абортами в конце срока супоросно-сти, рождением мертвых и/или слабых поросят, погибающих в первые 2-3 недели жизни, и поражением органов дыхания у поросят в постотъёмный период (23, 45, 200). Вирус чаще циркулирует в изолированных фермах с полным циклом и промышленных свинокомплексах, наносит значительный экономический ущерб из-за репродуктивных потерь и низкой сохранности новорожденных и поросят на доращивании (15).

В настоящее время, на основании имеющихся сведений о вирусе и патогенезе болезни рутинные диагностические исследования базируются на использовании серологических методов для обнаружения специфических антител и обратно-транскриптазной полимеразной цепной реакции (ОТ-ПЦР) для обнаружения генома (200). Так, при типичных случаях (т.е. наличии эпизоотологи-ческих данных, клинических признаков) в хозяйстве с полным циклом при отсутствии вакцинации, первичного обнаружения генома вируса РРСС и специфических антител, особенно у поросят группы доращивания, достаточно для подтверждения диагноза, а обследуемая ферма (хозяйство) считается неблагополучной по РРСС (36, 61). Однако, результаты исследований, выполняемых на основе использования коммерческих диагностических наборов «РРСС-Серотест» производства НПО НАРВАК, широко используемого в РФ, «HerdChek PRRS 2XR» фирмы IDEXX (США) и др., не позволяют идентифицировать группы недавно зараженных животных в неблагополучной ферме, потому что реакции предназначены для обнаружения только специфических антител к вирусу РРСС класса IgG. Недостаточная информативность существующих серологических методов не позволяет использовать их для совершенствования стратегии и тактики борьбы с болезнью. Учитывая энзоотичность РРСС в свиноводческих хозяйствах, особенно с полным циклом, перспективным направлением для совершенствования мер борьбы с болезнью является разработка серологического метода для выявления животных на ранних стадиях заражения, являющихся источником вируса, а именно, обнаружение специфических вирусу РРСС ранних антител класса IgM. Несмотря на широкое использование методов обнаружения ранних антител в медицинской вирусологии, сведения о диагностическом значении специфических антител класса IgM в ветеринарии, в том числе и при РРСС, ограничены лишь несколькими работами (117, 166).

До последнего времени считалось, что в странах Европы (за исключением Дании) циркулируют изоляты вируса РРСС европейского генотипа, а в Северной Америке и странах Азии - американского. По данным литературы, в свиноводческих хозяйствах РФ циркулируют изоляты, относящиеся только к европейскому генотипу вируса РРСС (16). Однако, с учетом значительных закупок племенных свиней из стран Европы и Северной Америки, а также применения в течение нескольких лет живой вакцины из штамма «БД» американского варианта (181), ситуация может измениться, и поэтому с целью контроля заноса вируса РРСС американского варианта актуальным является серологический мониторинг свиней как неблагополучных, так и благополучных хозяйств на присутствие антител к американскому варианту вируса.

Таким образом, несмотря на существенные достижения в изучении вируса и вызываемой им болезни, применение существующих средств специфической профилактики и мер борьбы не всегда дает успех, так как эффективные вакцины отсутствуют, а длительная персистенция, различные формы проявления болезни и циркуляция генетически различных европейского и американского вариантов вируса РРСС приводят к необходимости повысить эффективность серологических исследований и улучшить схему лабораторных диагностических исследований.

Заключение диссертации по теме «Ветеринарная эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология», Бунькова, Наталия Ивановна

6. выводы

1. Для выделения полевых изолятов вируса РРСС, циркулирующих на территории РФ, необходимо использовать первичную культуру АМС после предварительной проверки чувствительности помётов свиноматок к репродукции референс-вируса; для приготовления тест-препаратов в РНИФ - вирус европейского («Lelystad») и американского («БД») вариантов, адаптированный к культуре клеток MARC-145, при множественности заражения 0,1-1,0 ТЦД 50/клетка;

2. Усовершенствованные серологические методы (РНИФ, ГХ-ИФА) с использованием коньюгатов анти-IgM свиньи позволяют обнаруживать специфические антитела (иммуноглобулины) класса М к вирусу РРСС с 4-х по 28 сутки после заражения;

3. На основании установленной достоверной средней корреляционной связи между виремией и обнаружением специфических IgM в сыворотках крови свиней, зараженных вирусом РРСС, РНИФ и ГХ-ИФА могут быть использованы для обнаружения вирусоносителей;

4. Разработанная модификация РНИФ позволяет дифференцировать специфические антитела к европейскому и американскому вариантам в сыворотках крови инфицированных и переболевших свиней, а также, используя гомологичные или гетерогенные специфические сыворотки, определять принадлежность вируса к европейскому или американскому варианту;

5. Диагностические характеристики лабораторных методов диагностики РРСС зависят от времени отбора проб после заражения: так, метод изоляции вируса и ОТ-ПЦР имеют 75-100% чувствительность с 7 по 28 сутки после заражения и в этот же период РНИФ в 83,3-100% проб обнаруживаются специфические антитела класса IgM. Серологические методы определения специфических РРСС IgG имеют наибольшую чувствительность, начиная с 14-21 (42-100%) до 45 суток (100%>) (срок наблюдения);

6. Наиболее результативными лабораторными методами для обнаружения и скрининга инфицированных вирусом РРСС животных по диагностической

Ill чувствительности и специфичности являются РНИФ и ГХ-ИФА, обеспечивающие как обнаружение специфических антител класса IgM, IgG, так и дифференциацию европейских и американских изолятов вируса;

7. Рекомендованная схема лабораторной диагностики РРСС, включающая методы обнаружения ранних специфических IgM и IgG к вирусу РРСС, серологический метод дифференциации европейского и американского вариантов вируса, позволяет идентифицировать как стадию инфекционного процесса (острую или реконвалесценцию) у отдельных животных, так и определять эпизо-отологический статус обследуемой популяции/фермы.

7. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Данные, полученные в результате проведения экспериментальных исследований, позволяют рекомендовать для применения в лабораторной диагностике РРСС метод выявления специфических антител IgM и серологический метод дифференциации европейского и американского вариантов вируса РРСС как чувствительные, специфичные и высоко воспроизводимые методы.

2. Подготовлена и утверждена директором ГНУ ВНИИВВиМ нормативная документация: «Временные методические указания по идентификации антител к европейскому и американскому вариантам вируса репродуктивного и респираторного синдрома свиней».

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Таким образом, в результате проведенных исследований раскрыты некоторые особенности клинических проявлений РРСС, проведена сравнительная оценка лабораторных методов диагностики РРСС, разработан гистохимический метод определения специфических вирусу антител IgM, позволяющий выявлять животных на ранних стадиях заражения вирусом РРСС, и серологический метод для дифференциации вариантов вируса и вирусспецифических антител. Разработанные методы позволяют полно характеризовать эпизоотологическую ситуацию по РРСС в свинокомплексах, определять группы животных, являющиеся резервуаром возбудителя болезни. Проведена сравнительная оценка характеристик основных методов, используемых для лабораторной диагностики РРСС: ОТ-ПЦР, изоляции вируса, определения специфических антител IgG с помощью РНИФ, ГХ-ИФА и ТФ-ИФА, а также разработанных методов определения специфических антител IgM и серологической дифференциации вариантов вируса и антител.

Диагностическая оценка характеристик методов при экспериментальном заражении животных и при исследовании полевого материала позволяет рекомендовать метод определения специфических вирусу антител IgM и метод серологической дифференциации европейского и американского вариантов вируса для использования при лабораторной диагностике РРСС.

Список литературы диссертационного исследования кандидат ветеринарных наук Бунькова, Наталия Ивановна, 2008 год

1. Байбиков, Т.З. Репродуктивно-респираторный синдром свиней / Т.З. Байбиков // Ветеринарный врач. -2000. №2.- С. 20-24.

2. Бородавкин, И.В. Патоморфология и дифференциальная диагностика ре-продуктивно-респираторного синдрома свиней: автореф. дис. . канд. вет. наук: 16.00.02 / Бородавкин Игорь Валерьевич. Саратов,2000. - 28 с.

3. Вишняков, И.Ф. Выделение и идентификация вируса репродуктивно -респираторного синдрома свиней (РРСС) в Самарской области / И.Ф. Вишняков, Е.А. Балашова, О.В. Суханова и др. // Ветеринария. 1997. -№11. - С.16-19.

4. Выдрин, В.Н. Проявление репродуктивно респираторного синдрома свиней / В.Н. Выдрин, В.А. Мищенко, А.И. Дудников // Ветеринария. -1995. - №8.-С. 12-14.

5. Голубцов, А.В. Клинико-эпизоотологическая характеристика и профилактика репродуктивно-респираторного синдрома свиней: автореф.дис. .канд. вет. наук: 16.00.03 / Голубцов Андрей Васильевич. Воронеж, 2000. -21с.

6. Группа компаний «Биохиммарк» Электронный ресурс. / Лабораторное оборудование и реагенты для клинико-диагностических лабораторий. -Режим доступа: http://www.biochemmack.ru, свободный. — Загл. с экрана.

7. Иммунология. Том 1 / под ред. У. Пола, пер. с англ. М.: Мир, 1987. - 450 с.

8. Каныпина, А.В. Разработка методов иммуноферментного анализа для выявления антител к вирусу репродуктивно-респираторного синдрома свиней: автореф. дис. канд. вет. наук: 16.00.03 / Каныпина Анжелика Влаг димировна. Владимир, 2004. - 23 с.

9. Кукушкин, С.А. Особенности течения и вакцинопрофилактика репродуктивно-респираторного синдрома свиней в Российской Федерации: автореф. дис.канд. вет. наук: 16.00.03 / Кукушкин Сергей Анатольевич. -Владимир, 2000. 26 с.

10. Кукушкин, С.А. Эпизоотология и меры борьбы с репродуктивно-респираторным синдромом свиней в мире и в Российской Федерации / С.А. Кукушкин // Ветеринарная патология, 2006. Том 19, № 4. - С.89-95.

11. Лакин, Г.Ф. Биометрия / Г.Ф. Лакин // М.: Высшая школа, 1990. — 352 с.

12. Лярски, 3. Диагностика вирусных болезней животных / 3. Лярски, пер. с польск. М.: Колос, 1980. - 400 с.

13. Мищенко, В.А. Репродуктивно респираторный синдром свиней ("синее ухо") / В.А. Мищенко, В.М. Авилов, В.М. Захаров и др. // Ветеринария. -1994. - №9.-С. 22-24.

14. Независимая лаборатория INVITRO Электронный ресурс. / Анализы и цены. Режим доступа: http://www.invitro.ru, свободный. - Загл. с экрана.

15. ООО «АмерКард» Электронный ресурс. / Иммуноферментные диагностические тест системы, производства «АмерКард», Россия; «ВЮ-RAD», Франция; "Orgenics", Израиль; «VIDIA», Чехия. - Режим доступа: http://www.arnercard.ru, свободный. - Загл. с экрана.

16. Орлянкин, Б.Г. Диагностика и специфическая профилактика РРСС / Б.Г. Орлянкин, Е.А. Непоклонов, Т.И. Алипер и др. // Ветеринария. 2000. -№10.-С. 16-19.

17. Орлянкин, Б.Г. Специфическая профилактика репродуктивного и респираторного синдрома свиней / Б.Г. Орлянкин, Т.В. Гребенникова, Т.И. Алипер, Е.А. Непоклонов // Ветеринария. 2004. - №11. - С. 3-5.

18. Сергеев, В.А. Вирусные вакцины / В.А. Сергеев. Киев: Урожай, 1993. -370 с.

19. Соколов, М.А. Биологические свойства штаммов вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней: автореф. дис. . канд. биол. наук: 16.00.03 / Соколов Михаил Александрович. М., 2004. - 25 с.

20. Сосов, Р.Ф. Методические указания по применению статистических методов в эпизоотологии / Р.Ф. Сосов, А.А. Глушков. М., 1974. - 68 с.

21. Суханова, О.В. Разработка средств и методов лабораторной диагностики-репродуктивно-респираторного синдрома свиней: автореф. дис.канд. вет. наук: 16.00.03 / Суханова Ольга Валентиновна. Покров, 1997. — 23с.

22. Сюрин, В.Н. Вирусные болезни животных / В.Н. Сюрин, А .Я. Самуйлен-ко, Б.В. Соловьев, Н.В. Фомина. М.:ВНИТИБП, 1998. - С.552-558.

23. Шахов, А.Г. Течение репродуктивно-респираторного синдрома свиней в специализированных хозяйствах / А.Г. Шахов, А.И. Ануфриев, А.В. Голубцов и др. // Экологические проблемы патологии, фармакологии и терапии животных. Воронеж, 1997. - С. 154-155.

24. Шевцов, И.А. Эпизоотологическая характеристика, диагностика и профилактика репродуктивно-респираторного синдрома свиней в Курской области: автореф. дис. . канд.вет.наук: / И. А. Шевцов. Курск, 1999. — 27 с.

25. AASP subcommittee on PRRS / Laboratory diagnosis of porcine reproductive and respiratory syndrome (PRRS) virus infection // Swine Health and Production. 1996. - Vol. 1, №4. - P. 33-35.

26. Albina, E. An enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) for the detection of antibodies to the porcine reproductive and respiratory syndrome (PRRS) virus / E. Albina et al. // Ann. Rec. Vet. 1992. - №23. - P. 167-176.

27. Albina, E. Immune response and persistence of the porcine reproductive and respiratory syndrome virus in infected pigs and farm units / E. Albina et al. // Vet. Rec. 1994. - №134. - P. 567-573.

28. Albina, E. Immune responses in pigs infected with porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) / E. Albina et al. // Vet. Immunol. Im-munopathol. 1998. - №61. - P. 49-66.

29. Albina, E. Persistance of the porcine epidemic abortion and respiratory syndrome (PEARS) virus in infected pigs and farm units / E. Albina et al. // Proc. Int. Congr. Pig Vet. Soc. 1994. - №13. - P.53.

30. Albina, E. Epidemiology of porcine reproductive and respiratory syndrome (PRRS): An overview / E. Albina // Veterinary Microbiology. 1997. - Vol. 55, №1-4.-P. 309-316.

31. Animal health yearbook 1992 / FAO-WHO-OIE.-Rome,l993.-27lc.

32. Animal health yearbook 1993 / FAO-WHO-OIE.-Rome,1994.-230c.

33. Animal health yearbook 1994 / FAO-WHO-OIE.-Rome, 1995.-254c.

34. Animal health yearbook 1996 / FAO-WHO-OIE.-Rome, 1997.-284c.

35. Animal health yearbook 1997 / FAO-WHO-OIE.-Rome, 1998.-290c.

36. Astrup, P. Porcilis PRRS: A laboratory assessment of vaccinal virus spread / P. Astrup, H.J. Riising // Proceedings of the International Pig Veterinary Society Congress. -2002.-380c.

37. Bautista, E.M. Comparison of porcine alveolar macrophages and CL2621 cells for the detection of porcine reproductive and respiratory syndrome (PRRS) virus and anti-PRRS antibody / Bautista E.M et al. // J. Vet. Diagn. Invest.-1993.-Vol.5.-P. 163-165.

38. Bautista, E.M. Structural polypeptides of the American (VR-2332) strain of porcine reproductive and respiratory syndrome virus / E.M. Bautista et al. // Arch. Virol. 1996. - Vol.141. - P.1357-1365.

39. В en field, D.A. Characterization of swine infertility and respiratory syndrome (SIRS) virus (isolate ATCC VR-2332) / D.A. Benfield et al. // J. Vet. Diagn. Invest. 1992. - Vol.4. - P.127-133.

40. Benfield, D.A. Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome / D.A.Benfield et al. // Diseases of Swine. 8th Edition. Blackwell Science, 1999.-P. 201-232.

41. Bierk, M. Diagnostic investigation of chronic porcine reproductive and respiratory syndrome virus in a breeding herd of pigs / M. Bierk et al. // Vet. Record. 2001. - Vol.148. - P.687-690.

42. Bloemraad, M. Porcine reproductive and respiratory syndrome: Temperature and pH stability of Lelystad virus and its survival in tissue specimens from vi-raemic pigs /М. Bloemraad et al. // Vet Microbiol. 1994. - Vol.42. - P.361-371.

43. Botner, A. Appearance of acute PRRS-like symptoms in sow herds after vaccination with a modified-live PRRS vaccine / A. Botner et al. // Vet. Rec. -1997. Vol.141. - P.497-499.

44. Botner, A. The PRRS situation in Denmark, Norway, Finland, and Sweden / A. Botner // 2003 PRRS Compendium: second edition. National Pork Board, Des Moines, Iowa, 2003. - P.233-238.

45. Botner, A. Diagnosis of PRRS / A. Botner // Vet.Microbiol. 1997. - Vol. 55. - P.295-301.

46. Botner, A. Isolation of porcine reproductive and respiratory syndrome (PRRS) virus in a Danish swine herd and experimental infection of pregnant gilts with the virus /А. Botner, J. Nielsen, V. Bille-Hansen // Vet. Microbiol. 1994. -Vol.40.-P.351-360.

47. Carman, S. Assessment of seropositivity to porcine reproductive and respiratory syndrome (PRRS) virus in swine herds in Ontario: 1978 to 1982 / S. Carman, S.E. Sanfold, S. Dea, S. // Can. Vet. J. 1995. - Vol.36. - P.776-777.

48. Cavanagh, D. Nidovirales: A new order comprising Coronaviridae and Ar-teriviridae / D. Cavanagh //Arch. Virol. 1997. - Vol.142. - P.629-633.

49. Centres for Disease Control and Prevention (CDC) Электронный ресурс. / Центры по контролю над инфекционными заболеваниями, Режим доступа: http://www.cdc.gov, свободный. - Загл. с экрана.

50. Chang, С.С. Porcine reproductive and respiratory syndrome (PRRS) in Taiwan / C.C. Chang et al. // J. Chin. Soc. Vet. Sci. 1993. - Vol.19. - P.268-276.

51. Chang, C.C. Evolution of porcine reproductive and respiratory syndrome (PRRS) virus during sequential pig passages /С.С. Chang et al. // J. Virol. -2002. Vol.76. - P. 4750-4763.

52. Christianson, W.T. Porcine reproductive and respiratory syndrome: A review / W.T. Christianson, H.S. Joo // Swine Health and Production.-1994.-Vol.2. -P.10-28.

53. Christianson, W.T. Experimental reproduction of swine infertility and respiratory syndrome in pregnant sows / W.T. Christianson et al. // Am. J. Vet. Res. 1992,-Vol.54.-P.485-488.

54. Christopher-Hennings, J. Detecting PRRSV in boar semen / J. Christopher-Hennings, E.A. Nelson, D.A. Benfield // Swine Health and Production. 1996. -Vol. 4. -P.37-39.

55. Christopher-Hennings, J. Persistence of porcine reproductive and respiratory syndrome virus in serum and semen of adult boars / J. Christopher-Hennings et al. // J. Vet. Diagn. Invest. 1995. - Vol.7. - P.456-464.

56. Christopher-Hennings, J. Effects of a modified-live vims vaccine against porcine reproductive and respiratory syndrome in boars / J. Christopher-Hennings et al. // Am. J. Vet. Res. 1997. - Vol.58. - P.40-45.

57. Cho, H.J. An ELISA for porcine reproductive and respiratory syndrome: production of antigen of high quality / H.J. Cho, D. Deregt, H.S. Joo // Can. J. Vet. Res. 1996. - Vol.60. - P.89-93.

58. Chueh, L.L. Sequence analysis of the nucleocapsid protein gene of the porcine reproductive and respiratory syndrome virus Taiwan MD-001 strain / L.L. Chueh et al. //Adv. Exp. Med. Biol. 1998. - Vol.440. - P.795-799.

59. Collins, J.E. International symposium on SIRS / PRRS / J.E. Collins // American Assoc. Swine Pract. Newslet. 1992. - Vol.4. - P.l.

60. Collins, J.E. Experimental transmission of swine reproductive failure syndrome (mystery swine disease) in gnotobiotic pigs / J.E. Collins et al. // Conf. Res. Workers in Anim. Dis. Abstr. 1990. - P.2.

61. Conzelmann, K.K. Molecular characterization of porcine reproductive and respiratory syndrome virus, a member of the Arterivirus group / K.K. Conzelmann et al. // Virology. 1993. - Vol.193. - P. 329-339

62. Dea, S. Virus isolation from farms in Quebec experiencing severe outbreaks of respiratory and reproductive problems / S. Dea et al. // In Proc. Mystery Swine Dis. Comm. Meet Li vest. Conserv. Inst. Denver, Colo. - 1990. - P. 6772.

63. Dea, S. Swine Reproductive and Respiratory Syndrome in Quebec: Isolation of an enveloped virus serologically-related to Lelystad virus / S. Dea et al. // Can. Vet. J. 1992. - Vol.33. - P.801-808.

64. Dea, S. Competitive ELISA for detection of antibodies to porcine reproductive and respiratory syndrome virus using recombinant E.Coli-expressed nucleo-capsid protein as antigen / S. Dea et al. // J. Virol. Meth. 2000. - Vol.87. -P.109-122.

65. Dee, S.A. 2003. Approaches to prevention, control and eradication / S. A. Dee // 2003 PRRS Compendium: second edition. National Pork Board, Des Moines, Iowa, 2003.-P. 119-130.

66. Dee, S.A. Controlling the spread of PRRS virus in the breeding herd through management of the gilt pool / S.A. Dee, H.S. Joo, C. Pijoan // Swine health and production. 1995. - Vol.3. - P.64-69.

67. Dee, S.A. Detecting subpopulations after PRRS virus infection in large breeding herds using multiple serologic tests / S.A. Dea et al. // Swine Health and Production. 1995. - Vol.4. - P.181-184.

68. Dee, S.A. An evaluation of test and removal for the elimination of porcine reproductive and respiratory syndrome virus from 5 swine farms / S.A. Dee, M.D. Bierk, J. Deen, T.W. Molitor // Can. J. Vet. Res. 2001. - Vol.65. -P.22-27.

69. Dee, S.A. Prevention of the spread of PRRS virus in endemically infected pig herds by nursery depopulation /S.A. Dee, H.S. Joo // Vet. Rec. 1994. -Vol.135.-P. 6-9.

70. Dee, S.A. Evaluation of the effects of nursery depopulation on the persistence of PRRS virus and production on 34 pig farms / S.A. Dea et al. // Vet. Rec. -1997. Vol.140. - P. 247-248.

71. Dee, S.A. Evaluation of the effects of nursery depopulation on the profitability of 34 pig farms / S.A.Dee, H.S.Joo, D.D. Poison, W. Marsh. // Vet. Rec. -1997.-Vol.140.-P. 498-500.

72. Dewey, C. Lelystad-lilce strain of porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) identified in Canadian swine / C. Dewey et al. // Can. Vet. J. 2000. - Vol.41. - P.493-494.

73. Done, S.H. Porcine reproductive and respiratory syndrome ("blue-eared" pig disease) / S.H. Done et al. // Pig Vet. J. 1992. - Vol.28. - P.9-23.

74. Duan, Z. Identification of a putative receptor for porcine reproductive and respiratory syndrome virus on porcine alveolar macrophages / Z. Duan et al. // J. Virol. 1998. - Vol.72. - P.4520-4523.

75. Edwards, S. PRRS ("blue-eared pig disease") in Great Britain / S. Edwards et al. // American Association of Swine Practitioners Newsletter, 1994. Vol.4. -P.32-36.

76. Elvander, M.; Larsson, В.; Engvall, A.; Klingeborn, В.; and Gunnarsson, A. 1997. Nation-wide surveys of TGE/PRCV, CSF, PRRS, SVD, L.pomona and B.suis in pigs in Sweden / M. Elvander et al. // Proceedings Epidemiologie Sante Animale 1997. - P.31-32.

77. European Comission, Directorate General for Agriculture. The new pig de-sease: Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome // A Report on the Seminar /Workshop Held in Brussels on 29-30 Apr 1991. P.82-86.

78. Ferrin, N. Validation of a blocking ELISA for antibodies against PRRSV / N. Ferrin et al. // Proceedings of the International Pig Veterinary Society Congress. 2002. - P.3 65.

79. Frey, M.L. Diagnostic testing for SIRS virus at the National Veterinary Services Laboratories (NVSL) / M.L. Frey et al. // American Association of Swine Practitioners Newsletter. Vol.4. - P.31.

80. Garner, M.G. Report on the national serological survey for PRRS in Australia / M.G. Garner et al. // Pig Research and Development Corporation Project No. BRS 1/1037.- 1996.

81. Goyal, S.M. Porcine reproductive and respiratory syndrome: Review article / S.M. Goyal // J. Vet. Diagn. Invest. 1993. - Vol.5. - P.656-664.

82. Goyal, S.M. SIRS serology and virus isolation / S.M. Goyal, J.Collins // Minnesota Board of Animal Health Newsletter. 1992. - Vol.37. - P.2.

83. Halbur, P.G. Factors that influence the severity of clinical disease / P.G. Halbur // 2003 PRRS Compendium: second edition. National Pork Board, Des Moines, Iowa, 2003. - P. 17-26.

84. Halbur, P.G. Development of a streptavidin-biotin immunoperoxidase procedure for the detection of porcine reproductive and respiratory syndrome virus antigen in porcine lung / P.G. Halbur et al. // J. Vet. Diagn. Invest. 1994. -Vol.6. - P.254-257.

85. Halbur, P.G. Comparison of the pathogenicity of two US porcine reproductive and respiratory syndrome virus isolates with that of the Lelystad virus / P.G. Halbur et al. // Vet. Pathol. 1995. - Vol.32. - P.648-660.

86. Henry, S.C. Clinical considerations in "acute" PRRS / S.C. Henry // Proceedings of the American Association of Swine Practitioners. 1994. -P.231-235.

87. Hirose, О. Prevalence of porcine reproductive and respiratory syndrome virus in Chiba prefecture / O. Hirose et al. // J. Jpn. Vet. Med. Assoc. 1995. -Vol.48. -P.650-653.

88. Hoist, S. Porcine reproductive and respiratory syndrome (PRRS) / S. Hoist // Danske Slagterier. 1995. - P.6.

89. Horter, D.C. Characterization of the carrier state in porcine reproductive and respiratory syndrome virus infection / D.C. Horter et al. // Vet. Microbiol. -2002. Vol.86. - P.213-228.

90. Houben, S. Pattern of infection with the porcine reproductive and respiratory syndrome virus on swine farms in Belgium / S. Houben, K. van Reeth, M.B. Pensaert // J. Vet. Med. 1995. - Vol.42. - P.209-215.

91. Itou, T. Analysis of open reading frame 5 in Japanese porcine reproductive and respiratory syndrome virus isolates by restriction fragment length polymorphism/ T. Itou et al. // J. Vet. Med. Sci. 2001. - Vol.63. - P. 1203-1207.

92. Joo, H.S. PRRS: Diagnosis / H.S. Joo // Proceedings of the Allen D. Leman Swine Conference, Vet. Cont. Ed. And Ext., Univ. of Minnesota. 1993. -Vol. 20. -P.53-55.

93. Joo, H.S. Indirect fluorescent IgM antibody response of pigs infected with porcine reproductive and respiratory syndrome virus / H.S. Joo et al. // Vet. Microbiol. 1997. - Vol.55. - P.303-307.

94. Jusa, E.R. Haemagglutination with porcine reproductive and respiratory syndrome virus / E.R. Jusa et al. // J. Vet. Med. Sci. 1996. - Vol.58. - V.521-527.

95. Kaltreider, H.B. Porcine immunoglobulins. Identification of classes and preparation of specific antisera / H.B. Kaltreider, J.S. Johnson // J. Immunol. 1972. -Vol.109(5). -P.992-998.

96. Keay, S. A retrospective study of PRRS diagnostic results from routine serologic testing of seven PRRS naive herds / S. Keay, I. A. Moreau, P. Pro vis // Proceedings of the American Association of Swine Veterinarians. 2002. -P.147-148.

97. Keffaber, K.K. Reproductive failure of unknown etiology / K.K. Keffaber // American Association of Swine Practitioners Newsletter. 1989. - Vol.1. -P.l-10

98. Kim, H.S. Enhanced replication of porcine reproductive and respiratory syndrome (PRRS) virus in a homogeneous subpopulation of MA-104 cell line / H.S. Kim et al. // Arch. Virol. 1993. Vol.133. - P.477-483.

99. Kleiboeker, S.B. Evaluation of RT-PCR on oropharyngeal scrapings and paired serology for detection of PRRSV in sows / S.B. Kleiboeker, J.R. Lehman, T.J. Fangman // J. Swine Health Prod. 2002.

100. Labarque, G.G. Effect of cellular changes and onset of humoral immunity on the replication of porcine reproductive and respiratory syndrome virus in the lungs of pigs / G.G. Labarque et al. // J. Gen. Virol. 2000. - Vol.81. -P.1327-1334.

101. Lager, K.M. Gross and microscopic lesions in porcine fetuses infected with porcine reproductive and respiratory syndrome virus / K.M. Lager, P.G. Halbur // J. Vet. Diagn. Invest. 1996. - Vol.8. - P.275-282.

102. Lager, K.M. Pathogenesis of in utero infection in porcine fetuses with porcine reproductive and respiratory syndrome virus / K.M. Lager, W.L. Mengeling // Can. Vet. J. 1995. - Vol.59. - P. 187-192.

103. Lindhaus, W. Tatselhafte Sweinekrankheit / W. Lindhaus, B. Lindhaus // Praktische Tierarztl. 1991. - Vol.25. - P.423-425.

104. Loemba, H.D. Kinetics of humoral immune response to the major structural proteins of the porcine reproductive and respiratory syndrome virus / H.D. Loemba et al. // Arch. Virol. 1996. - Vol.141. - P.751-761 .

105. Lowry, O.H. Protein measurement with the Folin phenol reagent / O.H. Lowry et al. // J. Bio. Chem. 1951. - Vol.193. -P.265-275

106. Loyal, S. M. Porcine reproductive and respiratory syndrome / S.M. Loyal // J.Vet. Diagn. Invest. 1993. - Vol.5. - P.656-664.

107. Mardassi, H. Identification of major differences in the nucleocapsid genes of a Quebec strain and European strains of porcine reproductive and respiratory syndrome virus / H. Mardassi, S. Mounir, S. Dea // J. Gen. Virol. 1994. -Vol.75.-P.681-685.

108. McCaw, M.B. Characterization of pseudorabies virus antibody response in young swine after infection and vaccination using an IgM antibody capture ELIZA / M.B. McCaw, T.W. Molitor, H.S. Joo // J. Clin. Microbiol. 1992. -Vol.30. - P.346-350.

109. McKinney, R. Conjugation methods in immunofluorescence / R. McKinney, L. Thacker, G.A. Hebert // J. Dent. Res. 1976. - Vol.55. - P.38-44.

110. Meng, X.J. Sequence comparison of open reading frames 2 to 5 of low and high virulence US isolates of porcine reproductive and respiratory syndrome virus / X.J. Meng et al. // J. Gen. Virol. 1995. - Vol.76. - P.3181-3188.

111. Meng, X.J. Heterogeneity of porcine reproductive and respiratory syndrome virus: implications for current vaccine efficacy and future vaccine development / X J. Meng // Vet. Microbiol. 2000. - Vol.74. - P.309-329.

112. Mengeling, W.L. Diagnosis of porcine reproductive and respiratory syndrome / W.L. Mengeling, K.M. Lager, A.C. Vorwald // J. Vet. Diagn. Invest. 1995. -Vol.7. -P.3-16.

113. Mengeling, W.L. Alveolar macrophages as a diagnostic sample for detecting natural infection of pigs with porcine reproductive and respiratory syndrome virus / W.L. Mengeling, K.M. Lager, A.C. Vorwald // J. Vet. Diagn. Invest.1996.- Vol.8. -P.238-240.

114. Mengeling, W.L. An update of research at the National Animal Disease Center on current strains of porcine reproductive and respiratory syndrome (PRRS) virus. / W.L. Mengeling et al. // In Proc 24th Allen D. Leman Swine Conf.1997.-P. 138-145.

115. Mengeling, W.L. Clinical effects of porcine reproductive and respiratory syndrome virus on pigs during the early postnatal interval / W.L. Mengeling, K.M. Lager, A.C. Vorwald // Am. J. Vet. Res. 1998. - Vol.59. - P.52-55.

116. Mengeling, W.L. Comparison among strains of porcine reproductive and respiratory syndrome virus for their ability to cause reproductive failure / W.L.Mengeling et al. // Am. J. Vet. Res. 1996. - Vol.57. - P.834-839.

117. Mengeling, W.L. Diagnosis of porcine reproductive and respiratory syndrome using infected alveolar macrophages collected from live pigs / W.L.Mengeling et al. // Vet. Microbiol. 1996. - Vol.49. - P.105-115.

118. Meredith, M.J. Review of porcine reproductive and respiratory syndrome / M.J. Meredith // Pig Dis. and Info. Center. Cambridge, 1992. - P.l-23

119. Meredith, M.J. Porcine reproductive and respiratory syndrome (PRRS) / M.J. Meredith // Pig Dis. and Info. Center.- Cambridge, 1995. P.5-10.

120. Meulenberg, JJ.M. Subgenomic RNAs of Lelystad virus contain a conserved leader-body junction sequence / JJ.M. Meulenberg, E.J. De Meijer, R.J.M. Moormann//J. Gen. Virol. 1993. - Vol.74. - P. 1697-1701.

121. Meulenberg, J.J.M. Lelystad vims, the causative agent of porcine epidemic abortion and respiratory syndrome (PEARS) is related to LDV and EAV / J.J.M. Meulenberg et al. // Virology. 1993. - Vol.206. - P.l55-163.

122. Meulenberg, J.J.M. Molecular characterization of Lelystad vims / J.J.M. Meulenberg et al. // Vet. Microbiol. 1997. - Vol.55. - P. 197-202.

123. Mittelholzer, C. Analysis of classical swine fever vims replication kinetics allows differentiation of highly vimlent from avimlent strains / C. Mittelholzer et al. // Vet. Microbiol. 2000. - Vol.74. - P.293-308.

124. Molitor, T.W. PRRS vims infection of macrophages: regulation by maturation and activation state / T.W. Molitor, J. Xiao, C.S. Choi // Proceedings of the American Association of Swine Practitioners. 1996. - P.563-569.

125. Molitor, T.W. Immunity to PRRSV: Double-edged sword / T.W. Molitor, E.M. Bautista, C.S. Choi // Vet. Microbiol. 1997. - Vol.55. - P.265-276.

126. Morrison, R.B. Serological evidence incriminating a recently isolated vims (ATCC VR-2332) as the cause of swine infertility and respiratory syndrome (SIRS) / R.B. Morrison et al. // J. Vet. Diagn. Invest. 1992. - Vol.4. -P.186-188.

127. Murakami, Y. Isolation and serological characterization of porcine reproductive and respiratory syndrome (PRRS) vimses from pigs with reproductive and respiratory disorders in Japan / Y. Murakami et al. // J. Vet. Med. Sci. -1994.-Vol.56.-P.891-894.

128. Murtaugh, M.P. Comparison of the structural protein coding sequences of the VR-2332 and Lelystad vims strains of the PRRS vims / M.P. Murtaugh, M.R. Elam, L.T. Kakach //Arch. Virol. 1995. - Vol.140. - P. 1451-1460.

129. Nelson, E.A. Serum immune response to the proteins of porcine reproductive and respiratory syndrome (PRRS) virus / E.A. Nelson, J. Christopher-Hennings, D.A. Benfield // J. Vet. Diagn. Invest. 1994. - Vol.6. - P.410-415.

130. Nelson, E.A. Differentiation of US and European isolates of porcine reproductive and respiratory syndrome virus by monoclonal antibodies / E.A. Nelson et al. // J. Clin. Microbiol. 1993. - Vol.31. - P.3184-3189.

131. Nielsen, J. Hematological and immunological parameters of 4 1/2 month old pigs infected with PRRS virus / J. Nielsen, A. Botner // Vet. Microbiol. 1997. - Vol.55.-P.289-294.

132. Nodelijk, G. Comparison of a commercial ELISA and an immunoperoxidase monolayer assay to detect antibodies against porcine respiratory and reproductive syndrome virus / G. Nodelijk et al. // Vet. Microbiol. 1996. - Vol.49. -P.285-295.

133. Nodelijk, G. Seroprevalence of porcine reproductive and respiratory syndrome virus in Dutch weaning pigs / G. Nodelijk et al. // Vet. Microbiol. — 1997. -Vol.56.-P.21-32.

134. Nodelijk, G. A quantitative assessment of the effectiveness of PRRSV vaccination in pigs under experimental conditions / G. Nodelijk et al. // Vaccine. -2001. Vol.19. - P.3636-3644.

135. Ohlinger, V. In vivo and in vitro studies on the immunobiology of PRRS / V. Ohlinger et al. // Assoc. Swine Pract. Newsl. 1992. - Vol.4, №4. - P.24.

136. OIE (Office International des Epizooties). World Animal Health in 1996. Reports on the Animal Health Status and Disease Control Methods and List A Disease Outbreaks, Statistics. 1997. -P.249.

137. Osorio, F.A. Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome / F.A. Osorio // Proceedings of the 17th IPVS Congress. Vol.1. - Ames; Iowa; USA, 2002.

138. Park, В.К. Evaluation of an indirect fluorescent IgM antibody test for the detection of pigs with recent infection of porcine reproductive and respiratory syndrome virus / B.K. Park et al. // J. Vet. Diagn. Invest. 1995. - Vol.7. -P.544-546.

139. Paton, D.J. Laboratory diagnosis of porcine reproductive and respiratory syndrome / D.J. Paton et al. // Pig Vet. J. 1992. - Vol.29. - P.l88-192.

140. Plagemann, P.G. Lactate dehydrogenase-elevating virus, equine arteritis virus, and simian hemorrhagic fever virus: A new group of positive-strand RNA viruses / P.G. Plagemann, V. Moenning // Adv. Virus Res. 1992. - Vol.41. -P.99-192.

141. Plagemann, P.G. Lactate dehydrogenase-elevating virus and related viruses / P.G. Plagemann // In field virology, 3d ed. Philadelphia: Lippincott-Raven, 1996.-P.l 105-1120.

142. Pol, J.M. Pathological, ultrastructural, and immunohistochemical changes caused by Lelystad virus in experimentally induced infections' of mystery swine disease / J.M. Pol // Vet. Q. 1991. - Vol.13. - P. 137-143.

143. Pol, J.M. Comparative morphogenesis of three PRRS virus strains / J.M. Pol, F. Wagenaar, J.E.G. Reus // Vet. Microbiol. 1997. - Vol.55. - P.203-208.

144. Rossow, K.D. Pathogenesis of porcine reproductive and respiratory syndrome virus infection in gnotobiotic pigs / K.D. Rossow et al. // Vet. Pathol. 1995. -Vol.32.-P.361-373.

145. Rossow, K.D. Chronological immunohistochemical detection and localization of porcine reproductive and respiratory syndrome virus infection in gnotobiotic pigs / K.D. Rossow et al. // Vet. Pathol. 1996. - Vol.33. - P.551-556.

146. Saito, A. Characteristics of major structural protein coding gene and leader-body sequence in subgenomic m-RNA of porcine reproductive and respiratory syndrome virus isolated in Japan / A. Saito et al. // J. Vet. Med. Sci. 1996. -Vol.58.-P.377-380.

147. Shimuzu, M. Isolation of porcine reproductive and respiratory syndrome (PRRS) virus from Heko-Heko disease of pigs / M. Shimuzu et al. // J. Vet. Med. Sci. 1994. - Vol.56. -P.389-391.

148. Shin, J.H. Sero-epidemiological studies on porcine reproductive and respiratory syndrome in Korea. Detection of indirect fluorescent antibodies / J.H. Shin et al. // RDA J. Agri. Sci. 1993. - Vol.35. - P.572-576.

149. Sipos, W. Transmission of EU-ML-PRRSV (PORCILIS ® PRRS, INTERVET) from vaccinated to non-vaccinated gilts / W. Sipos et al. // Proceedings of the International Pig Veterinary Society Congress. 2002. - Vol.2. -P.418.

150. Snijder, E. J. Molecular biology of arteriviruses / E.J. Snijder, J.M. Meulenberg // J.Gen.Virol. 1998. - Vol.79. - P.961-979.

151. Sorensen, K.J. Evaluation of a blocking ELISA for screening of antibodies against porcine reproductive and respiratory syndrome (PRRS) virus / K.J. Sorensen et al. // Vet. Microbiol. 1997. - Vol.56. - P. 1-8.

152. Sorensen, K.J. Blocrking ELISA's for the distinction between antibodies against European and American strains of porcine reproductive and respiratory syndrome vims / K.J. Sorensen et al. // Vet. Microbiol. 1998. - Vol.60. -P.169-177.

153. Stadejek, T. PRRS in Central and Eastern Europe / T. Stadejek, Z. Pejsak //2003 PRRS Compendium: second edition. National Pork Board, Des Moines, Iowa, 2003. - P.239-244.

154. Suarez, P. Direct detection of the porcine reproductive and respiratory syndrome (PRRS) vims by reverse polymerase chain reaction (PT-PCR) / P. Suares et al. // Arch. Virol. 1994. - Vol. 135. - P.89-99.

155. Takikawa, N. Detection of antibodies against porcine reproductive and respiratory syndrome (PRRS) vims in swine sera by enzyme-linked immunosorbent assay / N. Takikawa et al. // J. Vet. Med. Sci. 1996. - Vol.58. - P.355-357.

156. Terpstra, C. Experimental reproduction of porcine epidemic abortion and respiratory syndrome (mystery swine disease) by infection with Lelystad vims:

157. Koch's postulates fulfilled / C. Terpstra, G. Wensvoort, G.M. Pol // Vet. Q. -1991.-Vol.13.-P.131-136.

158. Thacker, B. Clinical manifestation of PRRS vims / B. Thacker // 2003 PRRS Compendium: second edition. National Pork Board, Des Moines, Iowa, 2003. — P.7-16.

159. Thacker, E.L. Mycoplasma hyopneumoniae potention of porcine reproductive and respiratory syndrome virus-induced pneumonia / E.L. Thacker et al. // J. Clin. Microbiol. 1999. - Vol.37. - P.620-627.

160. Torremorell, M. Specificity of the PRRSV IDEXX ELISA test in negative farms / M. Torremorell et al. // Proceedings of the International Pig Veterinary Society Congress. 2002. - Vol.1. - P.209.

161. Van Alstine, W.G. Diagnosis of porcine reproductive and respiratory syndrome / W.G. Van Alstine, G.W. Stevenson, C.L. Kanitz // Swine Health and Production. 1993. - Vol.1. - P.24-28.

162. Wagstrom, E.A. Diagnostic performance of a reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR) test to detect porcine reproductive and respiratory syndrome virus / E.A. Wagstrom et al. // J. Vet. Diagn. Invest. 2000. -Vol.12.-P.75-78.

163. Wensvoort, G. Mystery swine disease in the Netherlands: the isolation of Lelystad virus / G. Wensvoort et al. // Vet. Q. 1991. - Vol.13. - P. 121-130.

164. Wensvoort, G. Lelystad virus and the porcine epidemic abortion and respiratory syndrome / G. Wensvoort // Vet. Res. 1993. - Vol.24. - P. 117-124.

165. Wensvoort, G. Mystery swine disease in the Netherlands: The isolation of Lelystad virus / G. Wensvoort et al. // Vet. Q. 1991. - Vol. 13. - P. 121-130.

166. Wensvoort, G. Antigenic comparison of Lelystad virus and swine infertility and respiratory syndrome (SIRS) virus / G. Wensvoort et al. // J. Vet. Diagn. Invest. 1992. - Vol.4. -P.134-138.

167. Wensvoort, G. Lelystad virus, the cause of porcine epidemic abortions and respiratory syndrome: A review of mystery swine disease research at Lelystad / G. Wensvoort et al. // Vet. Microbiol. 1992. - Vol.33. - P.l85-193.

168. Westergaard, J.M. Health strategies control swine infectious disease: european experience / J.M. Westergaard // Proc. 14th Int. Pig Vet. Soc. Congr. Bologna, Italy, 1996. -P.32-38.

169. White, M. 1991. Blue ear disease of pigs / M. White // Vet. Rec. 1991. -Vol.128.-P.574.

170. Wills, R.W. Porcine reproductive and respiratory syndrome virus: a persistent infection / R.W. Wills et al. // Vet. Microbiol. 1997. - Vol.55. - P.231-240.

171. Yoon, K.-J. Virology / K.-J. Yoon //2003 PRRS Compendium: second edition. National Pork Board, Des Moines, Iowa, 2003. - P. 163-184. r

172. Yoon, K.-J. Diadnosis / K.-J. Yoon, J. Christopher-Hermings, E. A. Nelson //2003 PRRS Compendium: second edition. National Pork Board, Des Moines, Iowa, 2003. - P.59-74.

173. Yoon, K.-J. Antibody-dependent enhancement (ADE) of porcine reproductive and respiratory syndrome vims (PRRSV) infection in pigs / K.J. Yoon, L.L. Wu,.JJ. Zimmerman, K.B. Piatt // Virol. Immunol. 1996. - Vol.9. - P.51-63.

174. Yoon, K.J. Failure to consider the antigenic diversity of porcine reproductive and respiratory syndrome (PRRS) vims isolates may lead to misdiagnosis / K.J.Yoon et al. // J. Vet. Diagn. Invest. 1995. - Vol.7. - P.386-387.

175. Yoon, K.J. Characterization of the humoral immune response to porcine reproductive and respiratory syndrome (PRRS) vims infection / K.J.Yoon et al. // J. Vet. Diagn. Invest. 1995. - Vol.7. - P.305-312.ф U-y

176. Yoon, K.J. An indirect fluorescent antibody te^ffor the detection of antibody to swine infertility and respiratory syndrome virus in swine sera / K.J.Yoon et al. // J. Vet. Diagn. Invest. 1992. - Vol.4. - P. 144-147.

177. Zhou, E.M. Development and evaluation of an IgM-capture ELIZA for detection of recent infection with bluetongue viruses in cattle / E.M. Zhou et al. // J. Vet. Met. 2001. - Vol.91. - P. 175-182.

178. Zhou, E. Development of a blocking ELISA for detection of swine antibodies to PRRSV / E. Zhou et al. // Proceedings of the American Association of Veterinary Laboratory Diagnosticians. 2001. - P.60.

179. Zimmerman, J. What we know about persistent infection with respect to the epidemiology of PRRS virus / J. Zimmermann // Proceedings of the American Association of Swine Practitioners. 1999. -P.311-312.

180. Zimmerman, J.J. General overview of PRRSV: A perspective from the United States / J.J. Zimmerman et al. // Vet. Microbiol. 1997. - Vol.55. - P. 187196.