Роль моноцитов с онкогенной мутацией JAK2 V617F в развитии фиброза костного мозга при миелопролиферативных неоплазиях тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.03.10, кандидат наук Силютина Анна Александровна

• Силютина Анна Александровна
• кандидат наук
• 2018

Оглавление диссертации кандидат наук Силютина Анна Александровна

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ТЕОРЕТИЧЕСКИЕ ОСНОВЫ ИЗУЧЕНИЯ РОЛИ МОНОЦИТОВ С ОНКОГЕННОЙ МУТАЦИЕЙ JAK2 V617F В РАЗВИТИИ ФИБРОЗА КОСТНОГО МОЗГА ПРИ МИЕЛОПРОЛИФЕРАТИВНЫХ НЕОПЛАЗИЯХ

1.1. Современные представления о механизмах миелофиброза

1.1.1. Патогенез миелофиброза

1.1.2. Роль JAK2 V617F

1.2. Модели для изучения миелофиброза

1.2.1. TPOhigh модели

1.2.2. GATA-1low модель

1.2.3. JAK2 V617F-модель

1.2.4. MPL W515L-модель

1.3. Роль макрофагов в развитии фиброза

1.4. Молекулярные механизмы возникновения и развития миелофиброза

1.4.1. Металлопротеиназы и их ингибиторы в развитии миелофиброза

1.4.2. Ростовые факторы в развитии миелофиброза

1.4.3. Галектин-3 в развитии миелофиброза

1.4.4. Пентраксин-3 в развитии миелофиброза

1.5. Лабораторная диагностика миелофиброза

1.5.1. Гематологические показатели

1.5.2. Кариотипические изменения

1.5.3. Молекулярная диагностика

1.5.4. Биохимические показатели

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. Экспериментальная работа с культурой клеток

2.1.1. Создание трансгенной клеточной линии

2.1.2 Секвенирование по Сэнгеру

2.1.3. Культуральные методы

2.1.4. Проточная цитофлуориметрия

2.1.5. Анализ молекулярно-генетического профиля и кондиционированных сред от клеточных линий

2.2. Исследование материала от пациентов

2.2.1 Взятие образцов и отбор пациентов для исследования

2.2.2 Исследование мутационного статуса

2.2.3. Исследование факторов, участвующих в развитии фиброза костного мозга56

2.3. Статистическая обработка данных

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

3.1. Механизмы активации макрофагов под влиянием активации JAK-STAT пути

3.1.1. Характеристика полученных линий после трансдукции

3.1.2. Оценка количества живых клеток

3.1.3. Экспрессия макрофагами с активированным и неактивированным JAK2 металлопротеиназ и их ингибиторов при культивировании в различных условиях

3.1.4. Уровень экспрессии макрофагами с активированным и неактивированным JAK2 ростовых факторов, пентраксина-3 и галектина-3 при культивировании в различных условиях

3.1.5. Содержание TGFb, VEGF и ММП-9 в кондиционированных средах от макрофагов с активированным и неактивированным JAK2 в различных условиях

культивирования

3.1.6 Зависимость эффектов человеческого тромболизата на макрофаги от активности Янус-киназы

3.1.7. Влияние сывороточного амилоида А на эффект человеческого тромболизата

3.2. Обследование пациентов с МПН

3.2.1. Характеристика обследованных пациентов

3.2.2. Уровень матриксных металлопротеиназ в сыворотке пациентов с МПН

3.2.3. Уровень ростовых факторов в сыворотке пациентов с МПН

3.2.4. Уровень галектина-3 в сыворотке пациентов с МПН

3.3. Создание лабораторного алгоритма дифференциальной диагностики миелопролиферативных неоплазий

3.3.1. Определение уровня ММП-9 и галектина-3 в сыворотке крови для дифференциальной диагностики эссенциальной тромбоцитемии и первичного миелофиброза

3.3.2. Клинический случай

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

ПЕРСПЕКТИВЫ ДАЛЬНЕЙШЕЙ РАЗРАБОТКИ ТЕМЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ЛИТЕРАТУРА

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Роль моноцитов с онкогенной мутацией JAK2 V617F в развитии фиброза костного мозга при миелопролиферативных неоплазиях»

ВВЕДЕНИЕ Актуальность исследования

Актуальной проблемой клинической лабораторной диагностики является определение лабораторных диагностических маркеров гематологических заболеваний (Луговская С. А., 2013; Наумова Е. В., 2014; Фидарова З. Т., 2012; Никитин Е. А., 2012; Плеханова О. С., 2016; Хвастунова А. Н., 2015; Кисиличина Д. Г., 2012; Обухова Т. Н., 2012; Абдулкадыров К. М., 2014, 2015; Мартынкевич И. С., 2010; Грицаев С. В., 2011). Одним из важных направлений является поиск дифференциально-диагностических маркеров при миелопролиферативных неоплазиях (МПН), к которым относят хронический миелоидный лейкоз (ХМЛ), истинную полицитемию (ИП), эссенциальную тромбоцитемию (ЭТ), первичный миелофиброз (ПМФ) и некоторые другие более редкие заболевания (Абдулкадыров К. М., 2013). Развивающийся при МПН фиброз костного мозга приводит к замещению кроветворной ткани соединительной, что приводит к полной либо частичной его функции. При ПМФ фиброз костного мозга является ведущим состоянием, определяющим течение заболевания, при ИП и ЭТ может развиваться как осложнение, что существенно ухудшает течение и прогноз (Agarwal, 2015). При этом механизмы стромальной регуляции при фиброзе костного мозга остаются неясными, что делает актуальным изучение этиопатогенетических механизмов развития миелофиброза с использованием морфологических, генетических, молекулярно-биологических и

экспериментальных методов исследования. Считается, что основными продуцентами цитокинов, стимулирующих миелофиброз, являются мегакариоциты и клетки моноцитарно-макрофагального ряда (Wagner-Ballon, 2006), при этом предполагается, что макрофаги активируются во вторую очередь под действием факторов, вырабатываемых патологическими мегакариоцитами. Основным патогенетическим механизмом развития Ph-негативных МПН является

активация JAK-STAT-сигнального пути, которая происходит в результате мутаций в генах JAK2, MPLи CALR (Baxter, 2005; Kralovics, 2005; Levine, 2005; Pardanani, 2006; Pikman, 2006; Nangalia, 2013; Klampfl, 2013). Самой распространенной мутацией является JAK2 V617F (Cross, 2011).

В настоящее время все более широкое распространение получают патогенетические препараты для терапии фиброза костного мозга, такие как ингибиторы Jak и цитокинов, опосредующих фиброз (Harrison, 2012; Verstovsek, 2015). Однако существующие протоколы терапии недостаточно эффективны и необходимо искать новые возможности предотвращения и регрессирующего воздействия на формирование фиброзных изменений, что пробуждает интерес к расширению понимания цитокиновой регуляции изменений стромы костного мозга при этом состоянии.

Создание модельного объекта необходимо для исследования локальных клеточных и молекулярных взаимодействий на уровне стромы костного мозга и глубинного понимания роли отдельных клеточных элементов в наблюдаемом патологическом процессе и является актуальной задачей экспериментальной и лабораторной медицины.

На данный момент не существует специфических маркеров развития фиброза костного мозга. Определенную сложность может иметь дифференциальная диагностика ЭТ и раннего ПМФ - оба заболевания могут протекать с небольшим повышением количества лейкоцитов, тромбоцитозом, анемией легкой и средней тяжести, повышением активности сывороточной ЛДГ и одинаковым мутационным профилем. Основным методом диагностики является визуальный морфологический анализ биоптата костного мозга, однако по современным представлениям методы клинической лабораторной диагностики должны быть автоматизированы, иметь возможность проведения независимого контроля качества и исключать возможность двоякой интерпретации результатов. Это обуславливает разработку на основании клиниколабораторных исследований теоретической базы для поисковых диагностических программ

дифференциальной диагностики ЭТ и ПМФ, что является актуальной задачей современной клинической лабораторной диагностики.

Степень разработанности темы исследования

Современные проблемы понимания патогенетических механизмов миелофиброза, его дифференциальной диагностики с другими МПН нашли свое отражение в отечественных и зарубежных исследованиях (Абдулкадыров К. В., 2013; Саврилова А. М., 2014; Булычева Е. Н., 2013; Ковалева Л. Г., 2012, Ольховский И. А., 2014, Дьяконов Д. А., 2015; Мещерякова Л. М., 2011; Vannucchi, 2002; Toki, 2005; Kreipe, 2012; Vytrva, 2014; Wagner-Ballon, 2006, Verstovsek, 2016; Passamonti, 2016; Agarwal, 2015).

Прорывом в понимании молекулярно-генетических основ развития МПН явилось открытии в 2005 году мутации в гене Янус-киназы 2 JAK2 V617F (Baxter, 2005; Kralovics, 2005; Levine, 2005), после чего в 2006 году была обнаружена мутация в гене тромбопоэтинового рецептора MPLW515 (Pardanani, 2006; Pikman, 2006) и в 2013 году - мутации в гене кальретикулина CALR (Nangalia, 2013; Klampfl, 2013). Все эти мутации тем или иным путем приводят к лиганд-независимой активации JAK-STAT сигнального пути, что в конечном итоге приводит к усилению клеточной пролиферации.

Фиброз костного мозга является цитокин-опосредованным состоянием, возникающим в результате клонального злокачественного перерождения в мультипотентной гемопоэтической стволовой клетке и характеризуется усилением продукции белков экстрацеллюлярного матрикса.

Основными продуцентами цитокинов и других активных молекул, опосредующих миелофиброз, считаются мегакариоциты и клетки моноцитарно-макрофагального ряда. Существует достаточно большое количество работ, посвященных изучению роли мегакариоцитов в развитии миелофиброза (Vannucchi, 2002; Toki, 2005; Kreipe, 2012; Vytrva, 2014), однако исследований, посвященных клеткам моноцитарно-макрофагального ряда, гораздо меньше и

полученные в результате них данные противоречивы (Wagner-Ballon, 2006, Verstovsek, 2016). Интерес к клеткам моноцитарно-макрофагального ряда еще более возрос после появления данных о существовании в костном мозге пациентов с ПМФ коллаген- и фибронектин-продуцирующих фиброцитов, которые имеют моноцитарное происхождение (Verstovsek, 2016).

В настоящее время описано достаточно большое число моделей миелофиброза на животных и на клеточных культурах. Самые распространенные из них - животные с высоким уровнем тромбопоэтина (Kakumitsu, 2005), низким уровнем экспрессии транскрипционного фактора GATA-1 (Vannucchi, 2002; Centurione, 2004; Vannucchi, 2005), мутациями JAK2 V617F (Lacout, 2006; Wernig, 2006), MPLW515L (Pikman, 2006) и мутациями в гене CALR (Luo, 2013; Cabagnols, 2015; Marty, 2016), описаны модели с культивированием клеток в присутствии тромболизата (Булычева Е. Н., 2013). При этом не описаны модели для исследования вклада клеток моноцитарно-макрофагального ряда с патогенетической мутацией в патогенез миелофиброза.

Современные рекомендации ВОЗ по диагностике миелофиброза включают в себя клинические, гематологические, биохимические и молекулярные критерии, но главную роль продолжает играть морфологическое исследование биоптатов костного мозга (Passamonti, 2016). В классических случаях ПМФ, протекающих с гепатоспленомегалией, лейкоэритробластической картиной крови, периферической цитопенией, каплевидными эритроцитами и фиброзом костного мозга постановка диагноза не составляет труда, но на ранних стадиях диагностировать заболевание очень сложно. При этом другие МПН - истинная полицитемия (ИП) и эссенциальная тромбоцтемия (ЭТ) могут осложняться миелофиброзом, и все три заболевания могут трансформироваться в острый миелолейкоз (Agarwal, 2015). Между тем различить раннюю стадию миелофиброза при ИП и ЭТ необычайно важно для проведения адекватной терапии (Абдулкадыров К. М., 2013). В настоящее время точная постановка диагноза возможна только при морфологическом анализе трепанобиоптата костного мозга, что вносит субъективный компонент в установление диагноза и в

большой мере зависит от квалификации врача-морфолога, а также требует госпитализации пациента с целью взятия биопсии высококвалифицированными врачами гематологами. Препятствием на пути быстрой и высокоточной малоинвазивной диагностики является отсутствие маркеров, которые возможно было бы с высокой чувствительностью и специфичностью определять в сыворотке крови пациентов для проведения дифференциальной диагностики МПН. Таким образом, актуальной областью исследования таких наук, как клиническая лабораторная диагностика и гематология и переливание крови является поиск новых способов объективной оценки состояния больного с целью установления ему правильного диагноза на ранних стадиях заболевания, обладающих малой инвазивностью и возможностью взятия материала вне стационарных условий персоналом со средним медицинским образованием.

Цель исследования: оценить роль клеток моноцитарно-макрофагального ряда с мутацией JAK2 V617F в продукции факторов, участвующих в развитии фиброза костного мозга, для создания лабораторного алгоритма дифференциальной диагностики миелопролиферативных неоплазий.

Задачи исследования

1. Создать клеточные линии моноцитарно-макрофагального ряда с экспрессией мутации V617F в гене JAK2 (клеточная линия mut) и гиперэкспрессией гена JAK2 «дикого типа» (клеточная линия wt).

2. Оценить влияние тромбоцитарного лизата как активатора продукции факторов, участвующих в развитии фиброза костного мозга, в созданных клеточных линиях: трансформирующий фактор роста в (TGFP), галектин-3, матриксные металлопротеиназы (MMP) 2, 9, 12, 13, тканевые ингибиторы матриксных металлопротеиназ (TIMP) 1, 2, 3, 4, фактор роста эндотелия сосудов (VEGF), основной фактор роста фибробластов (bFGF), пентраксин-3.

3. Определить уровень факторов, участвующих в развитии фиброза костного мозга, в сыворотке крови пациентов с миелопролиферативными неоплазиями.

4. Сформировать лабораторный алгоритм дифференциальной диагностики миелопролиферативных неоплазий на основании обнаруженных различий уровня факторов, участвующих в развитии фиброза костного мозга, в сыворотке крови пациентов с истинной полицитемией, эссенциальной тромбоцитемией и первичным миелофиброзом.

Научная новизна

В результате проведенного исследования впервые были созданы клеточные линии моноцитарно-макрофагального ряда с экспрессией мутации V617F в гене JAK2 и гиперэкспрессией гена JAK2 «дикого типа», изучено влияние мутации JAK2 V617F на способность макрофагов к активации под воздействием тромболизата, были определены количественные изменения молекулярно-генетических факторов, участвующих в развитии миелофиброза (в том числе трансформирующего фактор роста в (TGFP), галектин-3, матриксные металлопротеиназы (ММР) 2, 9, 12, 13, тканевые ингибиторы матриксных металлопротеиназ (Т1МР) 1, 2, 3, 4, фактор роста эндотелия сосудов (VEGF), основной фактор роста фибробластов (bFGF), пентраксин-3) в созданных клеточных линиях.

В периферической крови пациентов с миелопролиферативными неоплазиями проанализировали молекулярные маркеры, участвующие в развитии фиброза костного мозга и впервые выявлены отличия между истинной полицитемией, эссенциальной тромбоцитемией и первичным миелофиброзом по содержанию ММП-9 и галектина-3 в сыворотке крови.

Теоретическая и практическая значимость работы

Результаты работы способствуют пониманию фундаментальной роли клеток моноцитарно-макрофагального ряда в развитии фиброза костного мозга и влияние мутации JAK2 V617F на их способность к активации и экспрессии про- и антифибротических факторов.

Создана стабильная клеточная линия моноцитарно-макрофагального ряда с экспрессией мутации V617F в гене JAK2 и гиперэкспрессией гена JAK2 «дикого типа», которая позволяет исследовать локальные клеточные и молекулярные механизмы развития заболеваний, к которым приводит активация JAK-STAT, а также может быть использована как объект для тестирования новой таргетной терапии.

Показано потенциирующее влияние человеческого тромболизата на активность клеток моноцитарно-макрофагального ряда in vitro, что раскрывает молекулярные механизмы взаимодействия «мегакариоцит/макрофаг» в условиях патологических изменений при фиброзе костного мозга.

Разработана теоретическая база по модификации существующего диагностического протокола МПН на основании установленных связей между мутационным статусом, нозологией и молекулярными маркерами, имеющими потенциальную диагностическую значимость для миелофиброза у пациентов с МПН.

Создан лабораторный алгоритм дифференциальной диагностики миелофиброза и эссенциальной тромбоцитемии с чувствительностью 75% и специфичностью 68,18%.

Положения, выносимые на защиту

1. Созданная клеточная линия моноцитарно-макрофагального ряда с экспрессией мутации V617F в гене JAK2 (клеточная линия mut) и гиперэкспрессией гена JAK2 «дикого типа» (клеточная линия wt) является основой для экспериментальной части поисково-диагностических программ исследования патогенетических механизмов миелопролиферативных заболеваний с активацией JAK2.

2. Макрофаги с мутацией V617F в гене JAK2 и гиперэкспрессией гена JAK2 «дикого типа» под воздействием тромболизата усиливают продукцию ферментов и ростовых факторов, способствующих развитию миелофиброза, в то

время как неизмененные макрофаги реагируют на воздействие тромбоцитарных факторов снижением продукции этих агентов.

3. Матриксная металлопротеиназа 9 и галектин-3 в сыворотке крови пациентов с миелопролиферативными неоплазиями могут использоваться как дополнительные диагностические маркеры при дифференциальной диагностике миелофиброза и эссенциальной тромбоцитемии.

Методология и методы исследования

В работе использованы теоретические (анализ и синтез), лабораторные (молекулярно-биологические, культуральные и иммунохимические) и статистические (параметрические и непараметрические критерии сравнения групп и определения связей, построение ROC-кривых) методы.

Степень достоверности и апробация результатов

Степень достоверности результатов определяется достаточным и адекватным объемом выборки, использованием современных лабораторных методов и статистических методов обработки полученных данных.

Материалы исследования неоднократно доложены на Всероссийских и Международных конференциях: 19-ой Международной Пущинской школе-конференции молодых ученых «БИОЛОГИЯ - НАУКА XXI ВЕКА» (г. Пущино, Московская обл., 2015 г.), 1-ом Российском онкологическом научно-образовательном форуме «Белые ночи-2015» (г. Санкт-Петербург, 2015 г.), 20th Congress of European Hematology Association (EHA) (Vienna, Austria, 2015), Cellular and molecular mechanism of tumour-microenvironment crosstalk (Tomsk, Russia, 2015), XXI Wilsede meeting (Wilsede, Germany, 2016), 46th Annual Scientific Meeting International Society for Experemental Hematology (Frankfurt, Germany, 2017).

Проведение исследования одобрено этическим комитетом федерального государственного бюджетного учреждения «Национальный Медицинский

Исследовательский Центр имени В.А. Алмазова» Министерства Здравоохранения Российской Федерации.

Результаты, полученные в процессе выполнения диссертационной работы, внедрены в образовательный процесс Института медицинского образования ФГБУ «НМИЦ им. В.А. Алмазова» МЗ РФ и в научно-исследовательскую и клиническую работу клинических подразделений и Института гематологии ФГБУ «НМИЦ им. В.А. Алмазова» МЗ РФ.

Личный вклад автора

Автором был проведен анализ литературных данных о молекулярных и клеточных механизмах развития миелопролиферативных неоплазий и миелофиброза, в частности, лабораторной диагностике миелофиброза, существующих моделях для изучения миелофиброза. Сформулирована цель, определены методы и задачи исследования, разработан план исследования. Автором лично были проведены все лабораторные исследования как на материале от пациентов, так и клеточных линиях, создание клеточной линии, статистический анализ полученных данных с последующим описанием и интерпретацией. Сформулированы выводы и даны практические рекомендации.

Публикации по теме диссертации

По теме диссертационной работы опубликовано 10 статей и тезисов, 3 из которых изданы в рецензируемых изданиях, входящих в список ВАК.

Структура и объем диссертации

Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов экспериментальных исследований и их обсуждения, заключения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы. Работа изложена на 121 странице

машинописного текста, иллюстрирована 23 рисунками и 8 таблицами. Список литературы включает 215 источников (25 на русском языке и 190 на иностранном).

ГЛАВА 1. ТЕОРЕТИЧЕСКИЕ ОСНОВЫ ИЗУЧЕНИЯ РОЛИ МОНОЦИТОВ

С ОНКОГЕННОЙ МУТАЦИЕЙ JAK2 V617F В РАЗВИТИИ ФИБРОЗА КОСТНОГО МОЗГА ПРИ МИЕЛОПРОЛИФЕРАТИВНЫХ НЕОПЛАЗИЯХ

1.1. Современные представления о механизмах миелофиброза

BCR-ABLl-негативные миелопролиферативные заболевания (МПЗ) возникают из-за избыточной пролиферации аберрантных гематопоэтических клеток и включают в себя истинную полицитемию (ИП), эссенциальную тромбоцитемию (ЭТ) и первичный миелофиброз (ПМФ) (Ruben, 2013). Миелофиброз (МФ) может развиваться вторично в результате ИТ и ЭТ, известный как пост-ИТ и пост-ЭТ миелофиброз соответственно (Barosi, 2008; Hoffman, 2007). Заболевание характеризуется дисфункцией гемопоэза с цитопенией, возникновением экстрамедуллярных очагов кроветворения и гиперкатаболическим состоянием (Hoffman, 2007; Mesa, 2007). Основными симптомами являются утомляемость, ночные поты, боль в костях, повышение температуры тела, потеря веса и боль в области селезенки (Mesa, 2007). Частыми осложнениями являются кровотечения, портальная гипертензия, снижение иммунитета с подверженностью инфекциям и трансформация в острый миелолейкоз (Cervantes, 2009; Scherber, 2011). Пациенты с миелофиброзом имеют самую высокую морбидность и смертность среди больных МПЗ. Средняя выживаемость составляет 5-7 лет (Barosi, 2008; Hoffman, 2007; Cervantes, 2009).

1.1.1. Патогенез миелофиброза

Фиброз является распространенным клиническим состоянием при некоторых заболеваниях с локализацией преимущественно в легких, печени, почках или сердце. В гемопоэтических тканях человека фиброз встречается не так часто, но обычно ассоциирован с двумя различными состояниями: хронический

идиопатический миелофиброз с миелоидной метаплазией и острый панмиелоз с миелофиброзом (Tefferi, 2000). Фиброз костного мозга является цитокин-опосредованным состоянием, возникающим в результате клонального злокачественного перерождения в мультипотентной гемопоэтической стволовой клетке (Jacobson, 1978; Reeder, 2003) и характеризуется усилением продукции белков экстрацеллюлярного матрикса (Reilly, 1997). Исследования in vitro и in vivo указывают на вовлечения в эти процессы некоторых цитокинов, при этом особый акцент делается на роли плейотропного цитокина TGFßl. Этот цитокин способен активировать фибробласты, что в итоге приводит к продукции белков межклеточного матрикса, увеличению экспрессии протеаз и ингибированию продукции белков, участвующих в деградации межклеточного матрикса. TGFß секретируется большим количеством типов клеток, но в основном моноцитами/макрофагами и мегакариоцитами/тромбоцитами. Исследования, проведенные на человеческом материале (Thiele, 1989; Martyre, 1994) и мышиных моделях (Villeval, 1997; Vannucchi, 2002; Toki, 2005) указывают на ведущую роль мегакариоцитов в индукции миелофиброза. При этом другие исследования говорят о важной роли клеток моноцитарно-макрофагальной линии. Эта теория базируется на нескольких различных наблюдениях: Rameshwar et al. (Rameshwar, 2000) указывают на то, что моноциты от пациентов с ПМФ способны спонтанно активироваться и секретировать аномальный TGFß, и Frey et al. (Frey, 1998) обнаружили, что оверэкспрессия тромбопоэтина у SCID мышей приводит к развитию миелофиброза, а у NOD/SCID — нет. Так как NOD/SCID мыши отличаются от SCID нарушением фагоцитарной функции мононуклеаров (Shultz, 1995; Serreze, 1993), авторы утверждают что моноциты/макрофаги являются обязательным звеном в развитии миелофиброза у мышей с оверэкспрессией тромбопоэтина. При этом исследования Wagner-Ballon et al. (Wagner-Ballon, 2006) утверждают об обратном.

МФ характеризуется коллагеновым фиброзом костного мозга, остеосклерозом и избыточным ангиогенезом (Mesa, 2000; Tefferi, 2001). Фибробласты костного мозга поликлональны (Greenberg, 1987; Wang, 1992;

Castro-Malaspina, 1982) и имеют нормальные функциональные и морфологические характеристики (Castro-Malaspina, 1982). В то же время уровень профибротических и ангиогенных цитокинов как интра-, так и экстрацеллюлярно подвергается патологическим изменениям, что говорит о том, что гистологические изменения при МФ являются реактивными и провоцируются цитокинами (Castro-Malaspina, 1982; Castro-Malaspina, 1981; Rameshwar, 1994). По данным литературы, этими цитокинами являются TGFß, PDGF, bFGF, VEGF и TIMP (Terui, 1990; Martyre, 1994; Martyre, 1991). Основными продуцентами этих веществ являются мегакариоциты (Martyre, 1994; Katoh, 1990) и активированные макрофаги (Rameshwar, 1994). Кроме того, явление эмпериолеза (поглощение мегакариоцитами нейтрофилов без повреждения последних), связанного с повышенным содержанием Р-селектина в цитоплазме мегакариоцитов, провоцирует нарушение продукции цитокинов (Schmitt, 2000; Centurione, 2004). Ферменты нейтрофилов, включая нейтрофильную эластазу, могут также принимать участие в патологическом процессе, провоцируя выход в периферическую кровь миелоидных предшественников (Peius, 2004; Barosi, 2001; Xu, 2005).

В настоящее время для моделирования МФ существует две линии мышей: TPOhlgh и GATA-1low. Первая характеризуется оверэкспрессией тромбопоэтина, а вторая - снижением экспрессии транскрипционного фактора GATA-1. В обеих линиях проявляется увеличение количества мегакариоцитов в костном мозге, в первой за счет увеличения пролиферации, а во второй за счет нарушения созревания (Yanagida, 1997; Yan, 1995; Yan, 1996; Villeval, 1997; Vannucchi, 2002; Kaushansky, 1999).

1.1.2. Роль JAK2 V617F

Общим в патогенезе всех МПН является активация тирозинкиназ (Radich, 2010). Первой открытой мутацией для Ph(-) МПН была транслокация в гене BCR-ABL, которая приводит к активации пролиферации, ингибирует апоптоз и

снижает активность ингибиторов тирозинкиназ, что может существенно ухудшить течение болезни (Radich, 2010). Молекулярные повреждения, характерные для ИП, ЭТ и ПМФ оставались неизвестными до 2005 года, когда были опубликованы данные о найденной точечной мутации в гене Янус-киназы (JAK2), вызывающей замену валина на фенилаланин в 617 положении полипептидной цепи (Baxter, 2005; Kralovics, 2005; Levine, 2005). Мутация была найдена в половине случаев заболеваний ЭТ и ПМФ и почти во всех случаях ИП (Kiladjian, 2012). JAK2 V617F является соматической мутацией, характерной для гемопоэтической ткани (Ross, 2008).

Семейство Янус-киназ включает в себя JAK1, JAK2, JAK3 и TYK2. Каждая из них содержит 7 гомологичных доменов. JH1 домен, расположенный на С-конце, является каталитическим доменом, а JH7 на N-конце представляет собой домен, ассоциированный с цитокиновым рецептором (Chen, 1997). Домены JH5 -JH6-JH7 составляют FERM-фрагмент, а домены JH3-JH4 - БН2-фрагмент (Constantinescu, 2013). Показано, что N-терминальный фрагмент FERM-SH2 выполняет функцию стабилизации JAK2-рецептора на поверхности клетки (Huang, 2001; Radtke, 2002; Ragimbeau, 2003). Валин 617 находится в домене JH2, или псевдокаталитическом домене, который имеет стуктуру, гомологичную JH1, но не обладает при этом киназной активностью. Это делает механизм активации JAK2 в результате мутации V617F не совсем ясным. Однако, существуют данные об активации JAK2 в результате делеции JH2 (Saharinen, 2002). Основываясь на подобных наблюдениях, можно предположить, что домен JH2 осуществляет негативную регуляцию киназной активности JH1, подобно аутоингибирующему действию юкстамембранного домена в тирозинкиназных рецепторах, например, FLT3 (Griffith, 2004). Расчетная модель структуры рецептора JAK2 показала, что валин 617 тесно ассоциирована с активационной шпилькой в JH1 (Lindauer, 2001).

В отсутствие лиганда в нормальных условиях комплекс JAK2-рецептор неактивен. При связывании цитокина или ростового фактора происходит изменение конформации рецептора, что вызывает образование димеров JAK2-рецепторов (Constantinescu, 2001; Brown, 2005). При этом происходит

аутотрансфосфорилирование тирозинов в цитозольном домене JAK2. Термин аутотрансфосфорилирование указывает на то, что киназа в рецепторе фосфорилирует не свой тирозин, а соседний в димере, приставка «ауто» означает, что для фосфорилирования не требуются дополнительные кофакторы (Petsko, 2009). Фосфорилированная Янус-киназа активирует сигнальные протеины STAT, Ras/MAPK и PI3K/Akt/mTOR, которые переносят сигнал в ядро (Brawn, 2005; Haan, 200б; Seubert, 2003; Witthuhn, 1993).

Янус-киназы, связанные с цитокиновыми рецепторами и рецепторами тирозинкиназ, играют ведущую роль в восприятии и передаче сигнала от цитокинов в клетках млекопитающих. Многочисленные молекулярные и биологические данные указывают, что активация JAK2 вызывает и усиление цитокинового сигнала в разной степени для различных цитокиновых рецепторов, что объясняется способностью разных цитокинов действовать на рецепторы различных Янус-киназ. Большинство цитокиновых рецепторов ассоциированы с более чем одной Янус-киназой, но существуют данные, что на клетки-предшественницы миелоидного ряда, дефицитные по JAK2, не действуют эритропоэтин, тромбопоэтин и гранулоцито-макрофагальный

колониестимулирующий фактор, что в конечном счете приводит к нарушению эритропоэза (PaTganas, 1998). Эти наблюдения указывают, что JAK2 является главной Янус-киназой, участвующей в развитии и дифференцировке клеток миелоидного ряда. Это подтверждается также и тем, что мутации, нарушающие функцию JAK2, наблюдаются в целом ряде миелопролиферативных заболеваний (Levine, 2005; Jelinek, 2005; Steensma, 2005), а клетки, позитивные по JAK2 V617F, гиперчувствительны к цитокиновой стимуляции (Levine, 2005; James 2005).

Открытие мутации JAK2 V617F позволило по-новому взглянуть на патогенез МПН, но также и поставило новые важные вопросы. Первым и самым важным из них явился вопрос о том, как одна и та же мутация может вызывать три пусть и родственных, но клинико-патологически различных миелопролиферативных заболевания. Данные генетического анализа указывают,

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Силютина Анна Александровна, 2018 год

ЛИТЕРАТУРА

1. Абдулкадыров, К. М. Современные представления о диагностике и лечении эссенциальной тромбоцитемии / К. М. Абдулкадыров, В. А. Шуваев, И. С. Мартынкевич и др. // Вестник гематологии. - 2014. - №1. - С. 4 - 39.

2. Абдулкадыров, К. М. Современные представления о диагностике и лечении истинной полицитемии / К. М. Абдулкадыров, В. А. Шуваев, И. С. Мартынкевич и др. // Вестник гематологии. - 2015.

- № 11(1). - 4 - 46.

3. Абдулкадыров, К.М. Критерии диагностики и современные методы лечения первичного миелофиброза. / К. М. Абдулкадыров, В. А. Шуваев, И. С. Мартынкевич // Вестник гематологии. - 2013. - Т. 9. -№3. - С.44.

4. Абдулкадыров, К.М. Первичный миелофиброз: собственный опыт и новое в диагностике и лечении. / К.М. Абдулкадыров, В.А. Шуваев, И.С. Мартынкевич // Онкогематология. -2015. - №10(2). - C. 26 - 36.

5. Булычева, Е. Н. Модель миелофиброза in vitro с использованием тромболизата человека / Е. Н. Булычева, Н. Т. Сиордия, Е. Г. Ломаиа и др. // Клиническая онкогематология. - 2013. -№4. - С. 365 - 371.

6. Гематология: руководство для врачей / под ред. Н .Н. Мамаева. - СПб : СпецЛит, 2008. - 543 с.

7. Грицаев, С. В. Острый миелоидный лейкоз и минимальная резидуальная болезнь (литературный обзор) / С. В. Грицаев, И. С. Мартынкевич, М. В. Москаленко и др. // Бюллетень СО РАМН. - 2011.

- № 31 (2). - С. 6 - 13.

8. Дьяконов, Д. А. Особенности гемограммы при первичном миелофиброзе в зависимости от фазы заболевания / Д. А. Дьяконов, В. А. Росин, Н. А. Федоровская, Н. С. Федоровская // Актуальные вопросы трансфузиологии и клинической медицины. - 2015. - №1. - С. 264 - 267.

9. Казакова, М. С. Референсные значения показателей общего анализа крови взрослого работающего населения / М. С. Казакова, С. А. Луговская, В. В. Долгов // Клиническая лабораторная диагностика. -2012. - №6. - С. 43-49.

10. Кисиличина, Д. Г. Особенности экспрессии антигенов CD38 и 7ЛР-70 как факторов прогноза при лечении В-клеточного хронического лимфолейкоза / Д. Г. Кисиличина, С. А. Луговская, М. Е. Почтарь и др. // Гематология и трансфузиология. - 2012. - № 57 (Приложение). - С. 51.

11. Клиническая лабораторная диагностика: Национальное руководство. В 2-х томах. / под ред. В. В. Долгова. - М. : Гэотар-Медиа, 2013. - Т. 1. - 928 с.

12. Клиническая лабораторная диагностика: Национальное руководство. В 2-х томах. / под ред. В. В. Долгова. - М. : Гэотар-Медиа, 2013. - Т. 2. - 808 с.

13. Ковалева, Л. Г. Диагностика, лечение и качество жизни больных первичным миелофиброзом / Л. Г. Ковалева, Л. М. Мещерякова, О. В. Пороткова и др. // Гематология и трансфузиология. - 2012. - № 57 (Приложение). - С. 51 - 52.

14. Луговская, С. А. Новые маркеры ^160, CD200, LAIR-1) в диагностике В-клеточных лимфопролиферативных заболеваний / С. А. Луговская, Д. Г. Кисиличина, М. Е. Почтарь и др. // Клиническая онкогематология. Фундаментальные исследования и клиническая практика. - 2013. - № 6(1). - С. 45-52.

15. Мартынкевич, И. С. Цитогенетическая диагностика хронического лимфолейкоза / И. С. Мартынкевич // Клиническая онкогематология. - 2010. - № 3(2). - С. 216 - 217.

16. Мещерякова, Л. М. Первичный миелофиброз / Л. М. Мещерякова, О. В. Пороткова, Л. Г. Ковалева и др. // Онкогематология. - 2011. - №4. - С. 50 - 58.

17. Наумова, Е. В. Оценка и сравнительная характеристика определения ПНГ-клона на ретикулоцитах методом проточной цитометрии / Е. В. Наумова, О. С. Плеханова, С. А. Луговская и др. // Клиническая лабораторная диагностика. - 2014. - № 59(7). - С. 25-40.

18. Никитин, Е. А. Нарушения гена TP53 у больных хроническим лимфолейкозом / Е. А. Никитин, Н. А. Северина, Т. Н. Обухова и др. // Клиническая онкогематология. Фундаментальные исследования и клиническая практика. - 2012. - № 5(4). - С. 316 -322.

19. Никитин, Е. А. Факторы, предсказывающие полную ремиссию и рефрактерность к терапии у первичных больных ХЛЛ, получающих режим FCR / Е. А. Никитин, С. А. Луговская, Е. Ю. Варламова и др. // Гематология и трансфузиология. - 2012. - № 57 (Приложение). - С. 16 - 17.

20. Обухова, Т. Н. «Double-hit» лимфомы / Т. Н. Обухова, Е. А. Барях, Ю. Ю. Лорие и др. // Гематология и трансфузиология. - 2012. -№ 57 (Приложение). - С. 17.

21. Ольховский, И. А. Определение мутации в гене кальретикулина у пациентов с подозрением на хронические миелопролиферативные неоплазии / И. А. Ольховский, А. С.Горбенко, М. А. Столяр и др. // Гематология и трансфузиология. - 2014. - №3. - С. 12 - 15.

22. Плеханова, О. С. Методологические подходы к диагностике пароксизмальной ночной гемоглобинурии / О. С. Плеханова, Е. В.

Наумова, С. А. Луговская и др. // Клиническая лабораторная диагностика. - 2016. - № 61(3). - С. 151 - 168.

23. Саврилова, А. М. Выявление мутации Jak2 V617F при хронических Ph-негативных заболеваниях / А. М. Саврилова, А. В. Костерина, А. Р. Ахмадеев // Практическая медицина. - 2014. - №4 (80).

- С. 100 - 120.

24. Фидарова, З. Т. Определение ПНГ-клона у больных апластической анемией на различных этапах течения заболевания и лечения / З. Т. Фидарова, Е. А. Михайлова, С. А. Луговская и др. // Гематология и трансфузиология. - 2012. - № 57 (Приложение). - С. 84.

25. Хвастунова, А. Н. Использование клеточного биочипа в диагностике волосатоклеточного лейкоза / А. Н. Хвастунова, Л. С. Аль-ради, Н. М. Капранов и др. // Онкогематология. - 2015. - №1. - С. 37 -45.

26. Abina, M. A. Major effects of TPO delivered by a single injection of a recombinant adenovirus on prevention of septicemia and anemia associated with myelosuppression in mice: Risk of sustained expression inducing myelofibrosis due to immunosuppression / M. A. Abina, M. Tulliez, C. Lacout et al. // Gene Ther. - 1998. - V. 5(4). - P. 497

- 506.

27. Abina, M. A. Thrombopoietin (TPO) knockout phenotype induced by cross-reactive antibodies against TPO following injection of mice with recombinant adenovirus encoding human TPO / M. A. Abina, M. Tulliez, M. T. Duffour et al. // J. Immunol. - 1998. - V. 160(9). - P. 4481 -4489.

28. Agarwal, M. B. Myeloproliferative neoplasms working group consensus recommendations for diagnosis and management of primary myelofibrosis, polycythemia vera, and essential thrombocythemia / M. B. Agarwal, H. Malhotra, P. Chakrabarti et al. // Indian Journal of Medical and

Paediatric Oncology: Official Journal of Indian Society of Medical & Paediatric Oncology. - 2015. - V. 36(1). - P. 3 - 16.

29. Alonci, A. Evaluation of circulating endothelial cells, VEGF and VEGFR2 serum levels in patients with chronic myeloproliferative diseases / A. Alonci, A. Allegra, G. Bellomo et al. // Hematol Oncol. - 2008.

- V. 26. - P. 235 - 239.

30. Auffray, C. Blood Monocytes: Development, Heterogeneity, and Relationship with Dendritic Cells / C. Auffray, M. H. Sieweke, F. Geissmann // Annual Review of Immunology. -2009. - V. 27. - P. 669 -692.

31. Avraham, H. Modulation of megakaryocytopoiesis by human basic fibroblast growth factor / H. Avraham, N. Banu, D. T. Scadden et al. // Blood. - 1994. - V. 83. - P. 2126 - 32.

32. Baird, A. Immunoreactive fibroblast growth factor in cells of peritoneal exudate suggest its identity with macrophage-derived growth factor / A. Baird, P. Mormede, P. Bohlen // Biochem. Biophys. Res. Commun. - 1985. - V. 126. - P. 358 - 364.

33. Barondes, S. H. Galectins. Structure and function of a large family of animal lectins / S. H. Barondes, D. N. Cooper, M. A. Gitt, H. Leffler // J. Biol. Chem. - 1994. - V. 269. - P. 20807 - 20810.

34. Barondes, S. H. Galectins: a family of animal beta-galactoside-binding lectins / S. H. Barondes, V. Castronovo, D. N. Cooper et al. // Cell.

- 1994. - V. 76. - P. 597 - 598.

35. Barosi, G. Diagnostic and clinical relevance of the number of circulating CD34(+) cells in myelofibrosis with myeloid metaplasia / G. Barosi, G. Viarengo, A. Pecci et al. // Blood. - 2001. - V. 98. - P. 3249 -3255.

36. Barosi, G. Evidence that Prefibrotic Myelofibrosis Is Aligned along a Clinical and Biological Continuum Featuring Primary Myelofibrosis

/ G. Barosi, V. Rosti, E. Bonetti et al. // Tse. W., ed. PLoS ONE. - 2012. -V. 7(4).

37. Barosi, G. Proposed criteria for the diagnosis of post-polycythemia vera and post-essential thrombocythemia myelofibrosis: a consensus statement from the International Working Group for Barosi G. Myelofibrosis Research and Treatment / G. Barosi, R.A. Mesa, J. Thiele et al. // Leukemia. - 2008. - V. 22. - P. 437 - 438.

38. Baxter, E. J. Acquired mutation of the tyrosine kinase JAK2 in human myeloproliferative disorders / E. J. Baxter, L. M. Scott, P. J. Campbell et al. // Lancet. - 2005. - V. 365. - P. 1054 - 1061.

39. Bellanne'-Chantelot, C. Genetic and clinical implications of the Val617Phe JAK2 mutation in 72 families with myeloproliferative disorders / C. Bellanne'-Chantelot, I. Chaumarel, M. Labopin et al. // Blood. - 2006. -V. 108. - P. 346 - 352.

40. Boiocchi, L. Increased expression of vascular endothelial growth factor receptor 1 correlates with VEGF and microvessel density in Philadelphia chromosome-negative myeloproliferative neoplasms / L. Boiocchi, C. Vener, F. Savi et al. // J Clin Pathol. - 2011. - V.64. - P.226 -231.

41. Brand, C. The involvement of the spleen during chronic phase of Schistosoma mansoni infection in galectin-3-/-mice / C. Brand, F. Oliveira, C. Takiya et al. // Histol. Histopathol. - 2012. - V. 27(8). - P. 1109 - 20.

42. Brown, R.J. Model for growth hormone receptor activation based on subunit rotation within a receptor dimer / R. J. Brown, J. J. Adams, R. A. Pelekanos et al. // Nat. Struct. Mol. Biol. - 2005. - V. 12. - P. 814 -821.

43. Brunner, G. Basic fibroblast growth factor expression in human bone marrow and peripheral blood cells / G. Brunner, H. Nguyen, J. L. Gabrilove et al. // Blood. - 1993. - V. 81. - P. 631 - 8.

44. Bruno, E. Basic fibroblast growth factor promotes the proliferation of human megakaryocyte progenitor cells / E. Bruno, R. J. Cooper, E. L. Wilson et al. // Blood. - 1993. - V. 82. - P. 430 - 5.

45. Bucala, R. Circulating fibrocytes define a new leukocyte subpopulation that mediates tissue repair / R. Bucala, L. A. Spiegel, J. Chesney et al. // Molecular Medicine. - 1994. - V. 1. - P. 71 - 81.

46. Campanelli, R. Evaluation of the bioactive and total transforming growth factor beta1 levels in primary myelofibrosis / R. Campanelli, V. Rosti, L. Villani et al. // Cytokine. -2011. - V. 53(1). - P. 100 - 106.

47. Cannizzo, S.J. Augmentation of blood platelet levels by intratracheal administration of an adenovirus vector encoding human thrombopoietin cDNA / S.J. Cannizzo, B.M. Frey, S. Raffi et al. // . Nat Biotechnol 1997;15(6): 570-573.

48. Castaño, A.P. Serum amyloid P inhibits fibrosis through FcyR-dependent monocyte-macrophage regulation in vivo / A. P. Castaño, S. L. Lin, T. Surowy et al. // Sci. Transl. Med. - 2009. - V. 1 (5). - P. 5-13.

49. Castro-Malaspina, H. Characteristics of bone marrow fibroblast colony-forming cells (CFU-F) and their progeny in patients with myeloproliferative disorders / H. Castro-Malaspina, R. E. Gay, S. C. Jhanwar et al. // Blood. - 1982. - V. 59. - P. 1046-1054.

50. Castro-Malaspina, H. Human megakaryocyte stimulation of proliferation of bone marrow fibroblasts / H. Castro-Malaspina, E. M. Rabellino, A. Yen et al. // Blood. - 1981. - V. 57. - P. 781-787.

51. Centurione, L. Increased and pathologic emperipolesis of neutrophils within megakaryocytes associated with marrow fibrosis in GATA-1(low) mice / L. Centurione, A. Di Baldassarre, M. Zingariello et al.// Blood. - 2004. - V. 104(12). - P. 3573 - 3580.

52. Cervantes, F. New prognostic scoring system for primary myelofibrosis based on a study of the International Working Group for

Myelofibrosis Research and Treatment / F. Cervantes, B. Dupriez, A. Pereira et al. // Blood. - 2009. - V. 113. - P. 2895 - 2901.

53. Chagraoui, H. Prominent role of TGF-beta 1 in thrombopoietin-induced myelofibrosis in mice / H. Chagraoui, E. Komura, M. Tulliez et al. // Blood. - 2002. - V. 100(10). - P. 3495 - 3503.

54. Challen, G. A. Distinct hematopoietic stem cell subtypes are differentially regulated by TGF-beta1 / G. A. Challen, N. C. Boles, S. M. Chambers, M. A. Goodell // Cell Stem Cell. - 2010. - V. 6(3). - P. 265 -78.

55. Chen, M. The amino terminus of JAK3 is necessary and sufficient for binding to the common gamma chain and confers the ability to transmit interleukin 2-mediated signals / M. Chen, A. Cheng, Y. Q. Chen et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 1997. - V. 94. - P. 6910 - 6915.

56. Cheng, Y. L. Increased galectin-3 facilitates leukemia cell survival from apoptotic stimuli / Y. L. Cheng, W. C. Huang, C. L. Chen et al. // Biochem. Biophys. Res. Commun. - 2011. - V. 412. - P. 334 - 340.

57. Choi, J. Intraperitoneal immunotherapy for metastatic ovarian carcinoma: Resistance of intratumoral collagen to antibody penetration / J. Choi, K. Credit, K. Henderson et al. // Clin. Cancer Res. - 2006. - V. 12. -P. 1906 - 12.

58. Chou, J.M. Bone marrow immunohistochemical studies of angiogenic cytokines and their receptors in myelofibrosis with myeloid metaplasia / J. M. Chou, C. Y. Li, A. Tefferi // Leuk. Res. - 2003. - V. 27(6). - P. 499 - 504.

59. Constantinescu, S. N. Activating Janus kinase pseudokinase domain mutations in myeloproliferative and other blood cancers / S. N. Constantinescu, E. Leroy, V. Gryshkova et al. // Biochemical Society Transactions. - 2013. - V. 41 (4). - P. 1048 - 1054.

60. Constantinescu, S. N. Ligand-independent oligomerization of cell-surface erythropoietin receptor is mediated by the transmembrane

domain / S. N. Constantinescu, T. Keren, M. Socolovsky et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. - 2001. - V. 98. - P. 4379 - 4384.

61. Cross, N. C. Genetic and epigenetic complexity in myeloproliferative neoplasms // Hematology Am. Soc. Hematol. Educ. Program. - 2011. -P. 208 - 214.

62. de Sauvage, F.J. Physiological regulation of early and late stages of megakaryocytopoiesis by thrombopoietin / F. J. de Sauvage, K. Carver-Moore, S. M. Luoh et al. // J. Exp. Med. - 1996. - V. 183(2). - P. 651 - 656.

63. Deban, L. Pentraxins in innate immunity: lessons from PTX3 / L. Deban, S. Jaillon, C. Garlanda et al. // Cell Tissue Res. - 2011. - V. 343. - P. 237 - 249.

64. Di Raimondo, F. Elevated vascular endothelial growth factor (VEGF) serum levels in idiopathic myelofibrosis / F. Di Raimondo, M. P. Azzaro, G. A. Palumbo et al. // Leukemia. - 2001. - V.15. - P.976-980.

65. Dragomir, A.-C. D. Role of galectin-3 in classical and alternative macrophage activation in the liver following acetaminophenintoxication / A.-C. D. Dragomir, R. Sun, H. Choi et al. // J. Immunol. - 2012. - V. 189(12). - P. 5934-41.

66. Duffield, J. S. Selective depletion of macrophages reveals distinct, opposing roles during liver injury and repair / J. S. Duffield, S. J. Forbes, C. M. Constandinou et al. // J. Clin. Invest. - 2005. - V. 115. - P. 56 - 65.

67. Duhrsen, U. Effects of vascular endothelial and platelet-derived growth factor recertor inhibitors on long-term cultures from normal human bone marrow/ U. Duhrsen, T. Martinez, G Vohwinkel. et al. // Growth Factors. - 2001. - V.19. - P.1-17.

68. Dvorak, H. F. Tumors: wounds that do not heal. Similarities between tumor stroma generation and wound healing // N. Engl. J. Med. -1986. - V. 315. - P. 1650 - 9.

69. Fallowfield, J. A. Scar-associated macrophages are a major source of hepatic matrix metalloproteinase-13 and facilitate the resolution of murine hepatic fibrosis / J. A. Fallowfield, M. Mizuno, T. J. Kendall et al. // J. Immunol. - 2007. - V. 178. - P. 5288 - 95.

70. Frey, B. M. Adenovector-mediated expression of human thrombopoietin cDNA in immune-compromised mice: insights into the pathophysiology of osteomyelofibrosis / B. M. Frey, S. Rafii, M. Teterson et al. // J. Immunol. - 1998. - V. 160. - P. 691 - 699.

71. Friedman, S. L. Mechanisms of disease: mechanisms of hepatic fibrosis and therapeutic implications // Nat .Clin. Pract. Gastroenterol. Hepatol. - 2004. - V. 1(2). -P. 98-105.

72. Gabbianelli, M. "Pure" human hematopoietic progenitors: permissive action of basic fibroblast growth factor / M. Gabbianelli, M. Sargiacomo, E. Pelosi et al. // Science. - 1990. - V. 249. - P. 1561-4.

73. Gastinne, T. Adenoviral-mediated TGF-beta1 inhibition in a mouse model of myelofibrosis inhibit bone marrow fibrosis development / T. Gastinne, F. Vigant, C. Lavenu-Bombled, et al. // Exp Hematol. - 2007. -V. 35(1). - P. 64-74.

74. Gianelli, U. VEGF expression correlates with microvessel density in Philadelphia chromosome-negative chronic myeloproliferative disorders / U. Gianelli, C. Vener, P. R. Raviele et al. // Am. J. Clin. Pathol. -2007. - V. 128. - P. 966 - 973.

75. Giannandrea, M. Diverse functions of matrix metalloproteinases during fibrosis / M. Giannandrea, W. C. Parks // Dis. Model. Mech. - 2014.

- V. 7(2). - P. 193 - 203.

76. Gill, S. E. Metalloproteinases and their inhibitors: regulators of wound healing / S. E. Gill, W. C. Parks // Int. J. Biochem. Cell Biol. - 2008.

- V. 40. - P. 1334 - 1347.

77. Greenberg, B. R. Cytogenetics of bone marrow fibroblastic cells in idiopathic chronic myelofibrosis / B. R. Greenberg, L. Woo, I. C. Veomett et al. // Br. J. Haematol. - 1987. - V. 66. - P. 487 - 490.

78. Griffith, J. The structural basis for autoinhibition of FLT3 by the juxtamembrane domain / J. Griffith, J. Black, C. Faerman, et al. // Mol. Cell. - 2004. - V. 13. - P. 169 - 178.

79. Haan, C. Jaks and cytokine receptors: an intimate relationship / C. Haan, S. Kreis, C. Margue, I. Behrmann // Biochem. Pharmacol. - 2006.

- V. 72. - P. 1538 - 1546.

80. Han, Z. C. New insights into the regulation of megakaryocytopoiesis by haemopoietic and fibroblastic growth factors and transforming growth factor beta-1 / Z. C. Han, S. Bellucci, H. Y. Wan, J. P. Caen // Brit. J. Haematol. - 1992. - V. 81. - P. 1 - 5.

81. Haudek, S.B. Bone Marrow-derived Fibroblast Precursors Mediate Ischemic Cardiomyopathy in Mice / S. B. Haudek, Y. Xia, P. Huebener et al. //. Proceedings of the National Academy of Sciences. -2006. -V. 103. - P. 18284 - 18289.

82. Haudek, S.B. Trial Fc receptor engagement mediates differentiation of cardiac fibroblast precursor cells / S .B. Haudek, J. Trial, Y. Xia et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 2008. - V. 105. - P. 10179 -10184.

83. Hoffman, R. Biology and treatment of primary myelofibrosis / Hoffman R., Rondelli D. // Hematology Am. Soc. Hematol. Educ. Program.

- 2007. - P. 346 - 354.

84. Hsu, D. K. Galectin-3 expression is induced in cirrhotic liver and hepatocellular carcinoma / D. K. Hsu, C. A. Dowling, K. C. Jeng et al. // Int. J. Cancer. - 1999. - V. 81. - P. 519 - 526.

85. Huang, L.J. The N-terminal domain of Janus kinase 2 is required for Golgi processing and cell surface expression of erythropoietin

receptor / L. J. Huang, S. N. Constantinescu, H. F. Lodish // Mol. Cell. -2001. - V. 8. - P. 1327 - 1338.

86. Huang, Y.-Q. Thrombin induces vascular endothelial cell growth factor (VEGF) in human tumor cells and fibroblasts / Y.-Q. Huang, J.-J. Li, L. Hu, S. Karpatkin // Blood. - 1999. - V.94 (Suppl. 1). - P.12a, Abstr. 40.

87. Jacobson, R. J. Agnogenic myeloid metaplasia: a clonal proliferation of hematopoietic stem cells with secondary myelofibrosis / R. J. Jacobson, A. Salo, and P. J. Fialkow // Blood. - 1978. - V. 51. - P. 189 -194.

88. James, C. A unique clonal JAK2 mutation leading to constitutive signaling causes polycythaemia vera / C. James, V. Ugo, J. P. Le Couedic et al. // Nature. - 2005. - V. 434. - P. 1144 - 1148.

89. Jelinek, J. JAK2 mutation 1849G T is rare in acute leukemias but can be found in CMML, Philadelphia-chromosome negative CML and megakaryocyte leukemia / J. Jelinek, Y. Oki, V. Gharibyan, et al. // Blood.

- 2005. - V. 106. - P. 3370 - 3373.

90. Kakumitsu, H. Transgenic mice overexpressing murine thrombopoietin develop myelofibrosis and osteosclerosis / H. Kakumitsu, K. Kamezaki, K. Shimoda, et al. // Leuk. Res. - 2005. - V. 29(7). - P. 761 -769.

91. Kasai, K. Galectins: a family of animal lectins that decipher glycocodes / K. Kasai, J. Hirabayashi // J. Biochem. - 1996. -V. 119. - P. 1

- 8.

92. Kasper, M. Immunocytochemical evidence for a modulation of galectin 3 (Mac-2), a carbohydrate binding protein, in pulmonary fibrosis / M. Kasper, R. C. Hughes // J. Pathol. - 1996. - V. 179. - P. 309 - 316.

93. Katoh, O. Platelet derived growth factor messenger RNA is increased in bone marrow megakaryocytes in patients with

myeloproliferative disorders / O. Katoh, A. Kimura, T. Itoh et al. // Am. J. Hematol. - 1990. - V. 35. - P. 145 - 150.

94. Kaushansky, K. Thrombopoietin: The primary regulator of platelet production // Blood. - 1995. - V. 86 (2). - P. 419 - 431.

95. Khokha, R. Metalloproteinases and their natural inhibitors in inflammation and immunity / R. Khokha, A. Murthy, A. Weiss // Nat. Rev. Immunol. - 2013. - V. 13. - P. 649 - 65.

96. Kisseleva, T. Bone marrowderived fibrocytes participate in pathogenesis of liver fibrosis / T. Kisseleva, H. Uchinami, N. Feirt et al. // J. Hepatol. - 2006. - V. 45. - P. 429 - 438.

97. Klagsbrun, M. The fibroblast growth factor family: structural and biological properties // Progress in Growth Factor Res. - 1989. - V. 1. -P. 207 - 35.

98. Koopmans, S. M. The involvement of Galectins in the modulation of the JAK/STAT pathway in myeloproliferative neoplasia / S. M. Koopmans, F. J. Bot, H. C. Schouten et al. // Am. J. Blood Res. - 2012. -V. 2(2). - P. 119 - 127

99. Kralovics, R. A gain-of-function mutation of JAK2 in myeloproliferative disorders / R. Kralovics, F. Passamonti, A. S. Buser et al. // N. Engl. J. Med. - 2005. - V. 352(17). - P. 1779 - 1790.

100. Kralovics, R. Clonal hematopoiesis in familial polycythemia vera suggests the involvement of multiple mutational events in the early pathogenesis of the disease / R. Kralovics, D. W. Stockton, J. T. Prchal // Blood. - 2003. - V. 102. - P. 3793 - 3796.

101. Lacout, C. JAK2V617F expression in murine hematopoietic cells leads to MPD mimicking human PV with secondary myelofibrosis / C. Lacout, D. F. Pisani, M. Tulliez et al. // Blood. - 2006. - V. 108. - P. 1652 -1660.

102. Le Bousse-Kerdiles, M. C. Differential expression of transforming growth factor-beta, basic fibroblast growth factor, and their

receptors in CD341 hematopoietic progenitor cells from patients with myelofibrosis and myeloid metaplasia / M. C. Le Bousse-Kerdiles, S. Chevillard, A. Charpentier et al. // Blood. - 1996. - V. 88(12). - P. 4534 -4546.

103. Levine, R. L. Myeloproliferative disorders / R. L. Levine, D. G. Gilliland // Blood. - 2008. - V. 112(6). - P. 2190 - 2198.

104. Levine, R.L. The JAK2V617F activating mutation occurs in chronic myelomonocytic leukemia and acute myeloid leukemia, but not in acute lymphoblastic leukemia or chronic lymphocytic leukemia / R. L. Levine, M. Loriaux, B. J. Huntly et al. // Blood. - 2005. - V. 106. - P. 3377 - 3379.

105. Levine, R. L. Activating mutation in the tyrosine kinase JAK2 in polycythemia vera, essential thrombocythemia, and myeloid metaplasia with myelofibrosis / R. L. Levine, M. Wadleigh, J. Cools et al. // Cancer Cell. - 2005. - V. 7. - P. 387 - 397.

106. Lindauer, K. Prediction of the structure of human Janus kinase 2 (JAK2) comprising the two carboxy-terminal domains reveals a mechanism for autoregulation / K. Lindauer, T. Loerting, K. R. Liedl, R. T. Kroemer // Protein Eng. - 2001. - V. 14. - P. 27 - 37.

107. Liu, T. Regulation of TGF-beta signaling by protein phosphatases / T. Liu, X. H. Feng // Biochem. J. - 2010. - V. 430(2). - P. 191 - 198.

108. Lundberg, L.G. Bone marrow in polycythemia vera, chronic myelocytic leukemia, and myelofibrosis has an increased vascularity / L. G. Lundberg, R. Lerner, P. Sundelin, R. Rogers, J. Folkman, J. Palmblad // Am J Pathol. - 2000. - V.157. - P. 15-19.

109. Machado, C. Galectin-3 disruption impaired tumoral angiogenesis by reducing VEGF secretion from TGFb1-induced macrophages / C. Machado, L. Andrade, V. Teixeira et al. // CancerMed. -2014. - V. 3(2). - P. 201 - 14.

110. Maeda, N. Stimulation of proliferation of rat hepatic stellate cells by galectin-1 and galectin-3 through different intracellular signaling pathways / N. Maeda, N. Kawada, S. Seki et al. // J. Biol. Chem. - 2003. -V. 278. - P. 18938 - 18944.

111. Manicone, A. M. Matrix metalloproteinases as modulators of inflammation / A. M. Manicone, J. K. McGuire // Semin. Cell Dev. Biol. -2008. - V. 19. - P. 34 - 41.

112. Mantovani, A. Macrophage plasticity and polarization in tissue repair and remodeling / A. Mantovani, S. K. Biswas, M. R. Galdiero et al. // The Journal of Pathology. - 2013. - V. 229. - P. 176 - 185.

113. Markowska, A. Galectin-3 protein modulates cellsur-face expression and activation of vascular endothelial growth factor receptor 2 in human endothelial cells / A. Markowska, K. Jefferies, N. Panjwani // J. BiolChem. - 2011. - V. 286(34). - P. 29913 - 21.

114. Marty, C. Myeloproliferative neoplasm induced by constitutive expression of JAK2V617F in knock-in mice / C. Marty, C. Lacout, A. Martin, et al. // Blood. - 2010. - V. 116(5). - P. 783 - 787.

115. Martyre, M. C. Transforming growth factor- and megakaryocytes in the pathogenesis of idiopathic myelofibrosis / M. C. Martyre, N. Romquin, M. C. Le Bousse-Kerdiles et al. // Br. J. Haematol. -1994. - V. 88. - P. 9 - 16.

116. Martyre, M.C. Elevated levels of basic growth factor in megakaryocytes and platelets from patients with idiopathic myelofibrosis / M. C. Martyre, C. Le Bousse-Kerdiles, N. Romquin et al. // Brit. J. Haematol. - 1997. - V. 97. - P. 441 - 8.

117. Martyre, M. C. Increased intraplatelet levels of platelet-derived growth factor and transforming growth factor-beta in patients with myelofibrosis with myeloid metaplasia / M. C. Martyre, H. Magdelenat, M. C. Bryckaert et al. // Br. J. Haematol. - 1991. - V. 77. - P. 80 - 86.

118. McDevitt, M. A. A "knockdown" mutation created by cis-element gene targeting reveals the dependence of erythroid cell maturation on the level of transcription factor GATA-1 / M. A. McDevitt, R. A. Shivdasani, Y. Fujiwara et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 1997. - V. 94(13). - P. 6781 - 6785.

119. Mehrad, B. Circulating peripheral blood fibrocytes in human fibrotic interstitial lung disease / B. Mehrad, M. D. Burdick, D. A. Zisman et al. // Biochem. Biophys. Res. Commun. - 2007. - V. 353. - P. 104 - 108.

120. Mehul, B. Plasma membrane targetting, vesicular budding and release of galectin 3 from the cytoplasm of mammalian cells during secretion / B. Mehul, R. C. Hughes // J. Cell Sci. - 1997. - V. 110. - P. 1169 - 1178.

121. Mesa, R. A. Evaluation and clinical correlations of bone marrow angiogenesis in myelofibrosis with myeloid metaplasia / R. A. Mesa, C. A. Hanson, S. V. Rajkumar et al. // Blood. - 2000. - V. 96. - P. 3374 - 3380.

122. Mesa, R. A. The burden of fatigue and quality of life in myeloproliferative disorders (MPDs): an international internet-based survey of 1179 MPD patients / R. A. Mesa, J. Niblack, M Wadleigh. et al. // Cancer. - 2007. - V. 109. - P. 68 - 76.

123. Migliaccio, A. R. GATA-1 as a regulator of mast cell differentiation revealed by the phenotype of the GATA-1low mouse mutant / A. R. Migliaccio, R. A. Rana, M. Sanchez, et al. // J. Exp. Med. - 2003. - V. 197(3). - P. 281 - 296.

124. Mignatti, P. Release of basic fibroblast growth factor, and angiogenic factor devoid of secretory signal sequence: a trivial phenomenon or a novel secretion mechanism / P. Mignatti, D. B. Rifkin // J. Cell Biochem. - 1991. - V. 47. - P. 201 - 7.

125. Murray, P. J. Protective and pathogenic functions of macrophage subsets / P. J. Murray, T. A. Wynn // Nat. Rev. Immunol. -2011. - V. 11. - P. 723 - 37.

126. Musolino, C. Soluble Angiogenic Factors: Implications for chronic myeloproliferative disorders / C Musolino., L. Calabro, G. Bellomo et al. // Am. J. Hematol. - 2002. - V.69. - P.159 - 163.

127. Nangalia, J. Somatic CALR Mutations in Myeloproliferative Neoplasms with Nonmutated JAK2 / J. Nangalia, C. E. Massie, E. J. Baxter, et al. // The New England journal of medicine. - 2013. - V. 369(25). - P. 2391 - 2405.

128. Netti, P. A. Role of extracellular matrix assembly in interstitial transport in solid tumors / P. A. Netti, D. A. Berk, M. A. Swartz et al. // Cancer Res. - 2000. - V. 60. - P. 2497 - 503.

129. Ohwada, A. In vivo adenovirus vector-mediated transfer of the human thrombopoietin cDNA maintains platelet levels during radiation-and chemotherapy-induced bone marrow suppression / A. Ohwada, S. Rafii, M. A. Moore, R. G. Crystal // Blood. - 1996. - V. 88(3). - P. 778 - 784.

130. Olive, K. P. Inhibition of Hedgehog signaling enhances delivery of chemotherapy in a mouse model of pancreatic cancer / K. P. Olive, M. A. Jacobetz, C. J. Davidson et al. // Science. - 2009. - V. 324. P. 1457 - 61.

131. Oliver, L.J. Long-term culture of human bone marrow stromal cells in the presence of basic fibroblast growth factor / L. J. Oliver, D. B. Rifkin, J. L. Gabrilove // Growth Factors. - 1990. - V. 3. - P. 231 - 6.

132. Panteli, K. Serum levels, and bone marrow immunohistochemical expression of, vascular endothelial growth factor in patients with chronic myeloproliferative diseases / K. Panteli, M. Bai, E. Hatzimichael et al. // Hematology. - 2007. - V.12(7). - P.481-486.

133. Pardanani, A. Host genetic variation contributes to phenotypic diversity in myeloproliferative disorders / A. Pardanani, B. L. Fridley, T. L. Lasho et al. // Blood. - 2008. - V. 111. - P. 2785 - 2789.

134. Pardanani, A. D. MPL515 mutations in myeloproliferative and other myeloid disorders: A study of 1182 patients / A. D. Pardanani, R. L. Levine, T. Lasho et al. // Blood. - 2006. - V. 108(10). - P. 3472 - 3476.

135. Parganas, E. Jak2 is essential for signaling through a variety of cytokine receptors / E. Parganas, D. Wang, D. Stravopodis et al. // Cell. -1998. - V. 93. - P. 385 - 395.

136. Parks, W. C. Matrix metalloproteinases as modulators of inflammation and innate immunity / W. C. Parks, C. L. Wilson, Y. S. López-Boado // Nat. Rev. Immunol. - 2004. - V. 4. - P. 617 - 629.

137. Pelus, L.M. Neutrophil-derived MMP-9 mediates synergistic mobilization of hematopoietic stem and progenitor cells by the combination of G-CSF and the chemokines GRO-beta/CXCL2 and GRO-betaT/CXCL2-delta-4 / L.M. Pelus, H. Bian, A. G. King et al. // Blood. - 2004. - V. 103. P. 110 - 119.

138. Peng, H. VEGF Improves, Whereas sFlt1 Inhibits, BMP2-Induced Bone Formation and Bone Healing Through Modulation of Angiogenesis / H. Peng, A. Usas, A. Olshanski et al. // J. Bone Miner. Res. -2005. - V. 20. - P. 2017 - 2027.

139. Petsko, G.A. Protein Structure and Function / G. A. Petsko, D. Ringe D. - Oxford University Press Inc., New York, U.S.A, 2009. - 195 p.

140. Phillips, R.J. Circulating fibrocytes traffic to the lungs in response to CXCL12 and mediate fibrosis / R. J. Phillips, M. D. Burdick, K. Hong et al. // J. ClinInvest. - 2004. - V. 114. - P. 438 - 446.

141. Pikman, Y. MPLW515L is a novel somatic activating mutation in myelofibrosis with myeloid metaplasia / Y. Pikman., B. H. Lee, T. Mercher et al. // PLoS Med. - 2006. - V. 3. - P. e270.

142. Pilling, D. Reduction of bleomycin-induced pulmonary fibrosis by serum amyloid P / D. Pilling, D. Roife, M. Wang et al. // J. Immunol. -2007. - V. 179. - P. 4035 - 4044.

143. Ra, H. J. Control of matrix metalloproteinase catalytic activity / H. J Ra, W. C. Parks // Matrix. Biol. - 2007. - V. 26. - P. 587 - 596.

144. Rabinovich, G.A. Galectins and their ligands: amplifiers, silencers or tuners of the inflammatory response? / G. A. Rabinovich, L. G. Baum, N. Tinari et al. //Trends Immunol. - 2002. - V. 23. - P. 313 - 320.

145. Radtke, S. Novel role for Janus kinase 1 in the regulation of oncostatin M receptor surface expression / S. Radtke, H. M. Hermanns, C. Haan et al. // J. Biol. Chem. - 2002. - V. 277. - P. 11297 - 11305.

146. Ragimbeau, J. The tyrosine kinase Tyk2 controls IFNAR1 cell surface expression / J. Ragimbeau, E. Dondi, A. Alcover et al. // EMBO J. -2003. V. 22. - P. 537 - 547.

147. Ramachandran, P. Differential Ly-6C expression identifies the recruited macrophage phenotype, which orchestrates the regression of murine liver fibrosis / P. Ramachandran, A. Pellicoro, M. A.Vernon et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 2012. - V. 109. - P. E3186-95.

148. Rameshwar P. NF-B as a central mediator in the induction of TGF- in monocytes from patients with idiopathic myelofibrosis: an inflammatory response beyond the realm of homeostasis / P. Rameshwar, R. Narayanan, J. Qian et al. // J. Immunol. - 2000. - V. 165. - P. 2271 - 227.

149. Rameshwar, P. Monocyte adhesion in patients with bone marrow fibrosis is required for the production of fibrogenic cytokines: Potential role for interleukin-1 and TGFbeta / P. Rameshwar, T. N. Denny, D. Stein et al. // J. Immunol. - 1994. - V. 153. - P. 2819 - 2830.

150. Reeder, T. L. Both B and T lymphocytes may be clonally involved in myelofibrosis with myeloid metaplasia / T. L. Reeder, R. J. Bailey, G. W. Dewald, A. Tefferi // Blood. - 2003. - V. 101. - P. 1981 -193.

151. Reilkoff, R. A. Fibrocytes: emerging effector cells in chronic inflammation / R. A. Reilkoff, R. Bucala, E. L. Herzog // Nat. Rev. Immunol. - 2011. - V. 11. P. 427 - 435.

152. Reilly, J. T. Idiopathic myelofibrosis: pathogenesis, natural history and management // Blood Rev. - 1997. - V. 11. - P. 233 - 242.

153. Roberts, A. B. Transforming growth factor type beta: rapid induction of fibrosis and angiogenesis in vivo and stimulation of collagen formation in vitro / A. B Roberts, M. B. Sporn, R. K. Assoian et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 1986. - V. 83. - P. 4167 - 71.

154. Romeo, P. H. Megakaryocyte and erythrocytic lineages share specific transcription factors / P. H. Romeo, M. H. Prandini, V. Joulin V et al. // Nature. - 1990. - V. 344(6265). - P. 447 - 449.

155. Ruben A. The evolving treatment paradigm in myelofibrosis // Leuk Lymphoma. - 2013. - V. 54(2). - P. 242 - 251.

156. Rupoli, S. Thrombosis in essential thrombocytemia and early/prefibrotic primary myelofibrosis: the role of the WHO histological diagnosis / S. Rupoli, G. Goteri, P. Picardi et al. // Diagnostic Pathology. -2015. - V. 10. - P. 29.

157. Ruscetti, F. W. Autocrine transforming growth factor-beta regulation of hematopoiesis: many outcomes that depend on the context / F. W. Ruscetti, S. Akel, S. H. Bartelmez // Oncogene. - 2005. - V. 24(37). - P. 5751 - 63.

158. Saharinen, P. The pseudokinase domain is required for suppression of basal activity of Jak2 and Jak3 tyrosine kinases and for cytokine-inducible activation of signal transduction / P. Saharinen, O. Silvennoinen // J. Biol. Chem. - 2002. - V. 277. - P. 47954 - 47963.

159. Sakai, N. Fibrocytes are involved in the pathogenesis of human chronic kidney disease / N. Sakai, K. Furuichi, Y. Shinozaki et al. // Human pathology. - 2010. - V. 41. - P. 672 - 678.

160. Salven, P. Leukocyte and platelets of patients with cancer contain high levels of vascular endothelial growth factor / P. Salven, A. Oprana, H. Joensuu // Clin Cancer Res. - 1999. - V.5. - P.487 - 491.

161. Sasaki, S. Galectin-3 modulates rat mesangial cell proliferation and matrix synthesis during experimental glomerulonephritis induced by anti-Thy1.1 antibodies / S. Sasaki, Q. Bao, R. C. Hughes // J. Pathol. - 1999.

- V. 187. - P. 481 - 489.

162. Sayinalp, N. Plasma basic fibroblast growth factor and bone marrow fibrosis in clonal myeloproliferative disorders / N. Sayinalp, H. Qmar, A. Üner et al. // Clinical & Laboratory Haematology. - 2004. - V. 26.

- P. 265 - 268.

163. Scherber, R. The Myeloproliferative Neoplasm Symptom Assessment Form (MPN-SAF): international prospective validation and reliability trial in 402 patients / R. Scherber, A.C. Dueck, P. Johansson et al. // Blood. - 2011. - V. 118. - P. 401 - 408.

164. Schmitt, A. Pathologic interaction between megakaryocytes and polymorphonuclear leukocytes in myelofibrosis / A. Schmitt, H. Jouault, J. Guichard et al. // Blood. - 2000. - V. 96. - P. 1342 - 1347.

165. Schulze-Osthoff, K. In situ detection of basic fibroblast growth factor by highly specific antibodies / K. Schulze-Osthoff, W. Risau, E. Vollmer, C. Sorg // Am. J. Pathol. - 1990. - V. 137. - P. 85 - 92.

166. Scott, L.M. Progenitors homozygous for the V617F mutation occur in most patients with polycythemia vera, but not essential thrombocythemia / L.M. Scott, M.A. Scott, P.J. Campbell, A.R. Green // Blood. - 2006. - V. 108. - P. 2435 - 2437.

167. Serreze, D. V. Hematopoietic stem-cell defects underlying abnormal macrophage development and maturation in NOD/Lt mice: defective regulation of cytokine receptors and protein kinase C / D. V. Serreze, J. W. Gaedeke, E. H. Leiter // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 1993. -V. 90. - P. 9625 - 9629.

168. Seubert, N. Active and inactive orientations of the transmembrane and cytosolic domains of the erythropoietin receptor dimer /

N. Seubert, Y.Royer, J. Staerk et al. // Mol. Cell. - 2003. - V. 12. - P. 1239 - 1250.

169. Shivdasani, R.A. A lineageselective knockout establishes the critical role of transcription factor GATA-1 in megakaryocyte growth and platelet development / R.A. Shivdasani, Y. Fujiwara, M.A. McDevitt, S.H. Orkin // EMBO J. - 1997. - V. 16(13). - P. 3965 - 3973.

170. Shultz, L. D. Multiple defects in innate and adaptive immunologic function in NOD/LtSz-scid mice / L. D. Shultz, P. A. Schweitzer, S. W. Christianson et al. // J. Immunol. - 1995. - V. 154. - P. 180 -191.

171. Staerk, J. An amphipathic motif at the transmembrane-cytoplasmic junction prevents autonomous activation of the thrombopoietin receptor / J. Staerk, C. Lacout, T. Sato, et al. // Blood. - 2006. - V. 107. - P. 1864 - 1871.

172. Steensma, D.P. The JAK2 V617F activating tyrosine kinase mutation is an infrequent event in both "atypical" myeloproliferative disorders and the myelodysplastic syndrome / D.P. Steensma, G.W. Dewald, T.L. Lasho, et al. // Blood. - 2005. - V. 106. - P. 1207 - 1209.

173. Steurer, M. Increased angiogenesis in chronic idiopathic myelofibrosis: vascular endothelial growth factor as a prominent angiogenic factor / M. Steurer, H. Zoller, F. Augustin, et al. // Human Pathology. -2007. - V. 38. - P. 1057 - 1064.

174. Tefferi, A. Myelofibrosis with myeloid metaplasia // The New England Journal of Medicine. - 2000. - V. 342(17). - P. 1255-65.

175. Tefferi, A. Myeloproliferative neoplasms 2012: The John M. Bennett 80th birthday anniversary lecture A. Tefferi // Leukemia Research. -2012. - V. 36. - P. 1481 - 1489.

176. Tefferi, A. Novel mutations and their functional and clinical relevance in myeloproliferative neoplasms: JAK2, MPL, TET2, ASXL1, CBL, IDH and IKZF1 // Leukemia. - 2010. - V. 24(6). - P. 1128 - 38.

177. Tefferi, A. The pathogenesis of chronic myeloproliferative diseases // Int. J. Hematol. - 2001. - V. 73. - P. 170 - 176.

178. Tefferi, A. Experimental myelofibrosis in mice and the implications to human disease // Leuk. Res. - 2005. - V. 29(7). - P. 723 -726.

179. Tefferi, A. Myelofibrosis with myeloid metaplasia // N. Engl. J. Med. - 2000. - V. 342. - P. 1255-1265.

180. Tefferi, A. Proposals and rationale for revision of the World Health Organization diagnostic criteria for polycythemia vera, essential thrombocythemia, and primary myelofibrosis: recommendations from an ad hoc international expert panel / A. Tefferi, J. Thiele, A. Orazi et al. // Blood.

- 2007. - V. 110(4). - P. 1092 - 1097.

181. Terui, T. The production of transforming growth factor-beta in acute megakaryoblastic leukemia and its possible implications in myelofibrosis / T. Terui, Y. Niitsu, K. Mahara et al. // Blood. - 1990. - V. 75. - P. 1540 - 1548.

182. Pilling, D. The Long Pentraxin PTX3 Promotes Fibrocyte Differentiation / D. Pilling, N. Cox, V. Vakil, J. S. Verbeek, R. H. Gomer // PLoS ONE. - 2015. - V. 10(3). - e0119709.

183. Radich, J. The Molecular Biology of Myeloproliferative Disorders // Cancer Cell. - 2010. - V. 18. - I. 1. - P. 7 - 8.

184. Kiladjian, J.-J. The spectrum of JAK2-positive myeloproliferative neoplasms // ASH Education Book. - 2012. - V. 2012. -N. 1. - P. 561-566.

185. Thiele, J. Ultrastructure of the bone marrow tissue in so-called primary (idiopathic) myelofibrosisosteomyelosclerosis (agnogenic myeloid metaplasia) I. Abnormalities of megakaryopoiesis and thrombocytes / J. Thiele, T. Kuemmel, C. Sander, R. Fisher // J Subsmicroscopic Cytol Pathol.

- 1991. - V. 23. - P. 93-107.

186. Thiele, J. Histomorphometry of bone marrow biopsies in primary osteomyelofibrosis/-sclerosis (agnogenic myeloid metaplasia): correlations between clinical and morphological features / J. Thiele, B. Hoeppner, R. Zankovich, R. Fischer // Virchows Arch. A. Pathol. Anat. Histopathol. - 1989. - V. 415. - P. 191 - 202.

187. Tiedt, R. Ratio of mutant JAK2-V617F to wild type JAK2 determines the MPD phenotypes in transgenic mice / R. Tiedt, H. Hao-Shen, M. A. Sobas, et al. // Blood. - 2007. - 111. - P. 3931-3940.

188. Toki, T. Transgenic expression of BACH1 transcription factor results in megakaryocytic impairment / T. Toki, F. Katsuoka, R. Kanezaki et al. // Blood. - 2005. - V. 105. - P. 3100 - 318.

189. Tomasek, J. J. Myofibroblasts and mechano-regulation of connective tissue remodeling / J. J. Tomasek, G. Gabbiani, B. Hinz, C. Chaponnier, R. A. Brown // Nat Rev Mol Cell Biol. - 2002. - V. 3(5). - P. 349-363.

190. Tsai, S. F. Cloning of cDNA for the major DNA-binding protein of the erythroid lineage through expression in mammalian cells / S. F. Tsai, D. I. Martin, L. I. Zon, A. D. D'Andrea, G. G. Wong, S.H. Orkin // Nature. - 1989. - V. 339(6224). - P. 446-451.

191. Ulich, T. R. Systemic hematologic effects of PEG-rHuMGDF-induced megakaryocyte hyperplasia in mice / T. R. Ulich, J. del Castillo, G. Senaldi et al. // Blood. - 1996. - V. 87(12). - P. 5006-5015.

192. Van Obberghen-Schilling, E. Transforming growth factor beta 1 positively regulates its own expression in normal and transformed cells / E. Van Obberghen-Schilling, N. S. Roche, K. C. Flanders, M. B. Sporn, A. B. Roberts // J Biol Chem. -1988. - V. 263(16). - P. 7741-7746.

193. Vannucchi, A. M. Development of myelofibrosis in mice genetically impaired for GATA-1 expression (GATA-1low mice) / A. M. Vannucchi, L. Bianchi, C. Cellai et al. // Blood. - 2002. - V. 100. - P. 1123 - 1132.

194. Vannucchi, A. M. Animal Models of Myelofibrosis / A. M. Vannucchi, J. L. Villeval, O. Wagner-Ballon et al. // In: Conn P.M. (eds) Sourcebook of Models for Biomedical Research. Humana Press. - 2008. -P. 713 - 723.

195. Vannucchi, A. M. Pathogenesis of myelofibrosis with myeloid metaplasia: Lessons from mouse models of the disease / A. M. Vannucchi, A. R. Migliaccio, F. Paoletti, H. Chagraoui, F. Wendling // Semin Oncol. -2005. - V. 32. - P. 365-372.

196. Verstovsek, S. PRM-151 in Myelofibrosis: Durable Efficacy and Safety at 72 Weeks / S. Verstovsek, R. A. Mesa, L. M Foltz et al. // Blood. - 2015. - V. 126 (23). - P. 56.

197. Verstovsek, S. Role of neoplastic monocyte-derived fibrocytes in primary myelofibrosis / S. Verstovsek, T. Manshouri et al. // The Journal of experimental Medicine. - 2016. - V. 213. - N. 9. - P. 1723 - 1740.

198. Villeval, J. L. High thrombopoietin production by hematopoietic cells induces a fatal myeloproliferative syndrome in mice / J. L. Villeval, K. Cohen-Solal, M. Tulliez et al. // Blood. - 1997. - V. 90. - P. 4369 - 4383.

199. Vyas, P. Consequences of GATA-1 deficiency in megakaryocytes and platelets / P. Vyas, K. Ault, C. W. Jackson, S. H. Orkin, R. A. Shivdasani // Blood. - 1999. - V. 93(9). - P. 2867-2875.

200. Wagner-Ballon, O. Monocyte/Macrophage Dysfunctions Do Not Impair the Promotion of Myelofibrosis by High Levels of Thrombopoietin / O.Wagner-Ballon, H. Chagraoui, E. Prina et al. // J. Immunol. - 2006. - V. 176. - P. 6425 - 6433.

201. Wang, J. C. Cytogenetic studies of bone marrow fibroblasts cultured from patients with myelofibrosis and myeloid metaplasia / J. C. Wang, H. D. Lang, S. Lichter et al. // Br. J. Haematol. - 1992. - V. 80. - P. 184 - 188.

202. Wang, L. Galectin-1 and galectin-3 in chronic pancreatitis / L. Wang, , H. Friess, Z. Zhu, L. Frigeri, A. Zimmermann, M. Korc, P. O. Berberat, M. W. Buchler // Lab. Invest. - 2000. - V. 80. - P. 1233-1241.

203. Wernig, G. Expression of Jak2 V617F causes a polycythemia vera-like disease with associated myelofibrosis in a murine bone marrow transplant model / G. Wernig, T. Mercher, R. Okabe, R. L. Levine, B. H. Lee, D. G. Gilliland // Blood. - 2006. - V. 107. - P. 349-353.

204. Witthuhn, B. A. JAK2 associates with the erythropoietin receptor and is tyrosine phosphorylated and activated following stimulation with erythropoietin / B. A. Witthuhn, F. W. Quelle, O. Silvennoinen, T. Yi, B. Tang, O. Miura, J. N. Ihle // Cell. - 1993. - V. 74. - P. 227-236.

205. Wynn, T. A. Common and unique mechanisms regulate fibrosis in various fibroproliferative diseases // J Clin Invest. - 2007. - V. 117(3). -P. 524-529.

206. Xing, S. Transgenic expression of JAK2V617F causes myeloproliferative disorders in mice / S. Xing, W. T. Ho, W. Zhao, et al. // Blood. - 2008. - V. 111. - P. 5109-5117.

207. Xu, M. The constitutive mobilization of CD34 cells into the peripheral blood in idiopathic myelofibrosis may be due to the action of a number of proteases / M. Xu, E. Bruno, J. Chao et al. // Blood. - 2005. - V. 105. - P. 4508-4515.

208. Yamamoto-Sugitani, M. Galectin-3 (Gal-3) induced by leukemia microenvironment promotes drug resistance and bone marrow lodgment in chronic myelogenous leukemia / M. Yamamoto-Sugitani, J. Kuroda, E. Ashihara, H. Nagoshi, T. Kobayashi, Y. Matsumoto, N. Sasaki, Y. Shimura, M. Kiyota, R. Nakayama, K. Akaji, T. Taki, N. Uoshima, Y. Kobayashi, S. Horiike, T. Maekawa, M. Taniwaki // Proc Natl Acad Sci USA. - 2011. - V. 108. - P. 17468-17473.

209. Yan, X. Q. Chronic exposure to retroviral vector encoded MGDF (mpl-ligand) induces lineage-specific growth and differentiation of

megakaryocytes in mice / X. Q. Yan, D. Lacey, F. Fletcher, et al. // Blood. -1995. - V. 86(11). - P. 4025-4033.

210. Yan, X. Q. A model of myelofibrosis and osteosclerosis in mice induced by overexpressing thrombopoietin (mpl ligand): Reversal of disease by bone marrow transplantation / X. Q. Yan, D. Lacey, D. Hill et al. // Blood. - 1996. - V. 88. - P. 402-409.

211. Yanagida, M. The role of transforming growth factor-beta in PEG-rHuMGDF-induced reversible myelofibrosis in rats / M. Yanagida, Y. Ide, A. Imai et al. // Br J Haematol. - 1997. - V. 99(4). - P. 739-745.

212. Yu, C. Targeted deletion of a high-affinity GATA-binding site in the GATA-1 promoter leads to selective loss of the eosinophil lineage in vivo / C. Yu, A. B. Cantor, H. Yang, et al. // J Exp Med. - 2002. - V. 195(11). - P. 1387-1395.

213. Gong, X. B. The morphology features of bone marrow in the prefibrotic-early primary myelofibrosis / X. B. Gong, X. H. Zhang, X. G. Lu, Q. S. Tang, X. Gao, J. Yang // Zhonghua Xue Ye Xue Za Zhi. - 2012. -V. 33(1). - P. 25-30.

214. Zhou, W. Transgenic mice overexpressing human c-mpl ligand exhibit chronic thrombocytosis and display enhanced recovery from 5-fluorouracil or antiplatelet serum treatment / W. Zhou, C. F. Toombs, T. Zou, J. Guo, M. O. Robinson // Blood. - 1997. - V. 89(5). - P. 1551-1559.

215. Zingariello, M. Characterization of the TGF-01 signaling abnormalities in the Gata1low mouse model of myelofibrosis / M. Zingariello, F. Martelli, F. Ciaffoni, et al. // Blood. - 2013. - P. 121(17). - P. 3345-3363.