Роль биосинтеза холестерина в онкогенезе нестин-опосредованной медуллобластомы типа Sonic Hedgehog тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.04, кандидат наук Гордон Рената Эмилевна

• Гордон Рената Эмилевна
• кандидат наук
• 2018

Оглавление диссертации кандидат наук Гордон Рената Эмилевна

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Медуллобластома: клиническая картина, прогноз и лечение

1.2. Гистологическая характеристика медуллобластомы

1.3. Молекулярно-генетические аспекты классификации медуллобластом. Медуллобластома типа Sonic Hedgehog

1.4. Роль каскада Sonic Hedgehog в гистогенезе мозжечка

1.5. Характеристика сигнального каскада Sonic Hedgehog в норме и при онкогенезе

1.6. Роль холестерина в регуляции сигнального каскада Sonic Hedgehog

1.7. Регуляция сигнального каскада Sonic Hedgehog: белок нестин

1.8. Таргетная терапия медуллобластомы типа Sonic Hedgehog

1.9. Особенности биосинтеза холестерина в головном мозге

1.10. Статины: общие сведения, применение в онкологии

1.11. Модельные системы медуллобластомы у животных

1.12. Заключение

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Реактивы и оборудование

2.2. Объекты исследования

2.2.1. Объекты исследования in vitro

2.2.1.1. Методы работы с прокариотическими клетками.

Бактериальные культуры

2.2.1.2. Методы работы с эукариотическими клетками.

Клеточные линии

2.2.1.3. Первичные клеточные культуры

2.2.2. Объекты исследования in vivo

2.3. Моделирование эндогенных медуллобластом типа Sonic Hedgehog

у мышей in vivo

2.4. Моделирование подкожного аллотрансплантанта медуллобластомы

2.5. Моделирование интракраниального аллотрансплантанта медуллобластомы

2.6. Приготовление тканевых образцов методом микрургии

2.7. Исследование влияния делеции Nsdhl в опухолевых клетках

на прогрессию медуллобластомы

2.8. Приготовление образцов медуллобластомы для иммуногистохимического

и иммунофлуоресцентного анализов. Перфузия

2.9. Анализ пролиферации клеток in vitro. Иммунофлуоресцентный анализ

2.10. Приготовление лентивирусов

2.11. Определение концентрации холестерина методом флуориметрического ферментного анализа и масс-спектрометрией

2.12. Флуоресцентная проточная цитометрия

2.13. Анализ уровня экспрессии генов методом ОТ-кПЦР

2.14. Анализ уровня экспрессии белков методом вестерн-блот

2.15. Статистическая обработка данных

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

3.1. Характеристика экспрессии нестина в ходе постэмбрионального развития мозжечка и при онкогенезе медуллобластомы

3.1.1. Идентификация нестин-экспрессирующей клеточной популяции мозжечка

3.1.2. Оценка экспрессии нестина в клетках медуллобластомы

3.2. Оценка пролиферативного потенциала нестин-экспрессирующих клеток медуллобластомы

3.2.1. Оценка способности нестин-экспрессирующих прогениторных клеток к формированию медуллобластомы

3.2.2. Исследование пролиферации нестин-экспрессирующих клеток медуллобластомы

3.3. Оценка активности биосинтеза холестерина в клетках медуллобластомы

3.3.1. Оценка экспрессии белков, вовлеченных в метаболизм холестерина,

в тканях мышиных моделей медуллобластомы

3.3.2. Определение уровня содержания холестерина в клетках медуллобластомы мыши

3.3.3. Исследование влияния холестерина на активацию сигнального пути

Sonic Hedgehog

3.4. Исследование влияния снижения уровня холестерина на нестин-опосредованную пролиферацию клеток медуллобластомы in vitro и in vivo

3.4.1. Исследование влияния кшРНК к Nsdhl на активацию пути Sonic Hedgehog

в клетках медуллобластомы in vitro

3.4.2. Исследование влияния делеции Nsdhl на пролиферацию клеток медуллобластомы in vivo

3.5. Определение внутриклеточной мишени холестерина в клетках медуллобластомы

3.5.1. Исследование влияния холестерина на передачу сигнала Sonic Hedgehog в мышиных эмбриональных фибробластах, несущих дефектную копию гена Ptchl

3.5.2. Исследование влияния холестерина на передачу сигнала Sonic Hedgehog в мышиных эмбриональных фибробластах, несущих мутацию SmoM2

3.5.3. Исследование влияния ингибиторов биосинтеза холестерина на клеточную пролиферацию клеток медуллобластомы

3.6. Исследование влияния снижения уровня холестерина на пролиферацию клеток медуллобластомы in vivo

3.6.1. Оценка влияния симвастатина на рост подкожных Ptchl-дефектных опухолей медуллобластомы

3.6.2. Оценка влияния симвастатина на рост подкожных SmoM2 опухолей медуллобластомы

3.6.3. Оценка синергетического эффекта комбинации статинов и антагониста Smo на рост подкожных опухолей медуллобластомы

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

СПИСОК ЦИТИРУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

ВВЕДЕНИЕ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Роль биосинтеза холестерина в онкогенезе нестин-опосредованной медуллобластомы типа Sonic Hedgehog»

Актуальность проблемы

Сигнальный путь Sonic Hedgehog (Shh) является ключевым механизмом, регулирующим клеточную пролиферацию, детерминацию и дифференцировку в ходе эмбриогенеза и раннего онтогенеза (Marti and Bovalenta, 2002). Нарушения, приводящие к чрезмерной активации каскада Shh, являются ведущей причиной развития таких онкологических заболеваний как медуллобластома (МБ), базалиома и рабдомиосаркома. Дисрегуляция каскада Shh в той или иной степени сопряжена с патогенезом многих других солидных опухолей, в частности с раком поджелудочной, предстательной, молочной желез и мелкоклеточным раком легкого (Rubin and de Sauvage, 2006).

Среди описанных Shh-опосредованных новообразований МБ является наиболее злокачественной и агрессивной опухолью, поражающей преимущественно новорожденных и детей младше 3-х лет (Ward et al., 2014; Louise et al., 2016). При благоприятном прогнозе пятилетняя выживаемость составляет не более 75%, однако метастазирование и рецидив опухоли нередко приводят к снижению данного показателя до 35% (Jakacki et al., 2012; Remke et al., 2013; Gajjar and Robinson, 2014).

Основным подходом к лечению МБ является подавление роста опухоли посредством блокады клеточной пролиферации. Достижение данной цели осуществляется с использованием комбинации методов онкохирургии, краниоспинального облучения и адъювантной химиотерапии (Packer et al., 2006). Ввиду неспецифичности действия, традиционные подходы к лечению МБ сопряжены с развитием тяжелых нейрокогнитивных и нейроэндокринных расстройств (Mulhern at al., 2005; Northcott et al., 2011), обусловленных поражением здоровых и развивающихся тканей и органов.

В последние годы широкое развитие получила таргетная терапия, позволяющая специфично воздействовать на конкретные мишени в онкотрансформированных клетках, не поражая при этом здоровые ткани

организма. Мишенями таргетной терапии Shh-опосредованных онкозаболеваний являются отдельные компоненты сигнального каскада Shh (Kieran, 2014). Так, антагонист белка Smoothened (Smo) - эффектора каскада Shh, препарат висмодегиб, был одобрен для лечения базалиомы, однако клинические испытания для лечения МБ были приостановлены в связи с высокой токсичностью и тяжелыми побочными эффектами препарата (Robinson et al., 2015). Таким образом, существует острая потребность в разработке менее токсичных подходов к таргетной терапии МБ, что станет возможным с углублением нашего понимания о механизме онкогенеза заболевания.

Несмотря на то, что каскад Shh изучен относительно хорошо, механизмы его регуляции неясны. В исследовании Yang с соавторами сообщается, что при активации каскада Shh в клетках мозжечка часть онкотрансформированных клеток завершают клеточный цикл и дифференцируются, в то время как остальные клетки продолжают бесконтрольное деление (Yang et al., 2008). Данное наблюдение указывает о существовании некоего фактора, поддерживающего Shh-опосредованную клеточную пролиферацию. Ранее сообщалось, что ткани МБ экспрессируют маркер стволовых клеток филамент нестин (Rao et al., 2003). В последствии нами было обнаружено, что клетки, продолжающие деление, характеризовались высокой экспрессией нестина. Несмотря на то, что строение и функции нестина были описаны ранее, его значение в онкогенезе Shh-опосредованных заболеваний неизвестно.

Неисследованными остаются не только роль нестина в ходе Shh-зависимой клеточной пролиферации, но и механизмы регуляции его экспрессии. Новейшие исследования структуры отдельных компонентов сигнального пути Shh показали, что холестерин является эндогенным активатором эффектора каскада Shh - онкопротеина Smo (Huang et al., 2016; Byrne et al., 2016), а исследования влияния оксистеролов на пролиферацию клеток МБ in vitro подтвердили потенциал данных соединений к регуляции Shh-опосредованного клеточного деления (Corcoran and Scott, 2006; Myers et al., 2013).

Нами было предположено, что высокая экспрессия белка нестина в тканях МБ обусловлена его ролью в онкогенезе, а именно может быть связана с передачей сигнала Shh в онкотрансформированных клетках. Вместе с тем холестерин, выступая в качестве активатора каскада Shh, может оказывать регулирующие действие на экспрессию нестина, а значит в перспективе может явиться новой мишенью для таргетной терапии злокачественных новообразований группы Shh.

В соответствии с вышеизложенным в данной работе была поставлена цель - выявить механизм, посредством которого биосинтез холестерина воздействует на экспрессию белка нестина при онкогенезе медуллобластомы типа Shh.

Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи:

1. Провести анализ экспрессии белка нестина в мозжечке мыши в норме и при онкогенезе медуллобластомы типа Shh.

2. Исследовать влияние белка нестина на Shh-опосредованную пролиферацию клеток медуллобластомы мыши in vitro и in vivo.

3. Определить уровень активации биосинтеза холестерина в клетках и тканях медуллобластомы типа Shh.

4. Выявить эффекты снижения уровня эндогенного холестерина на нестин-опосредованную пролиферацию клеток медуллобластомы типа Shh мыши in vitro и in vivo.

5. Установить внутриклеточную мишень, на которую воздействует холестерин при активации сигнального пути Shh в клетках медуллобластомы.

6. Показать влияние ингибиторов биосинтеза холестерина статинов и их комбинации с антагонистом каскада Shh висмодегибом на рост подкожного аллотрансплантанта медуллобластомы типа Shh.

Научная новизна

В данной работе впервые установлено, что экспрессия нестина способствует поддержанию Shh-опосредованной пролиферации опухолевых клеток МБ мыши, а также их предшественников, в условиях in vitro и in vivo. Впервые был проведен анализ активности биосинтеза холестерина в клетках и

тканях МБ мыши, выявивший повышенные показатели активности, а также содержания эндогенного холестерина в клетках МБ. Показано, что ингибирование биосинтеза холестерина в клетках МБ приводит к подавлению экспрессии белка нестина, ослаблению передачи сигнала в каскаде Shh, и последующему снижению клеточной пролиферации. Проведены исследования по установлению внутриклеточной мишени холестерина в мышиных клетках МБ типа Shh с использованием методов in vitro и in vivo. Обнаружено, что липофильные ингибиторы биосинтеза холестерина симвастатин и аторвастатин специфично блокируют пролиферацию клеток в культуре МБ, а также показан подавляющий эффект данных препаратов на рост МБ in vivo. Предложено обоснование для применения комбинированной терапии статинов с ингибитором каскада Shh висмодегибом, а также показана терапевтическая эффективность данной методики.

Научно-практическая значимость работы

Установление роли нестина и холестерина в регуляции передачи сигнала Shh представляет особый интерес для глубокого понимания механизма функционирования сигнального каскада Shh. Полученные данные предлагают экспериментальное обоснование использования новых мишеней для таргетной терапии Shh-опосредованных онкологических заболеваний. Так, использование широко применяемых в клинической практике ингибиторов биосинтеза холестерина для контроля опухолевого роста может способствовать сокращению побочных эффектов традиционной терапии Shh-опосредованных онкозаболеваний. Ввиду того, что статины характеризуются низкими показателями токсичности и не имеют тяжелых побочных эффектов, данные препараты являются перспективными кандидатами для терапии МБ у детей. Также обнаружено, что комбинированное использование статинов в сочетании с ингибитором сигнального каскада Shh висмодегибом характеризуется ярко выраженным синергетическим эффектом в подавлении роста опухоли МБ. Использование данного подхода позволит использование меньших доз

висмодегиба, что потенциально отразится на снижении токсичности и минимизирует побочные эффекты терапии.

Положения, выносимые на защиту:

1. В ткани опухоли медуллобластомы типа Shh обнаружена высокая экспрессия белка нестина, который является модулятором Shh-опосредованной клеточной пролиферации.

2. Посредством активации онкопротеина Smoothened холестерин оказывает активирующее действие нестин-опосредованную клеточную пролиферацию.

3. Подавление биосинтеза холестерина с использованием генетических и фармакологических методов блокирует нестин-зависимую пролиферацию и прогрессию клеток медуллобластомы мыши.

Апробация работы

Результаты исследования были изложены на ежегодной конференции Американской ассоциации по исследованию опухоли (American Association for cancer Research (AACR), (Филадельфия, США, 2015), на 4-ом ежегодных симпозиумах Темпльского Университета, посвященных проблемам трансляционной науки (Филадельфия, США, 2016), на III Всероссийской научной конференция молодых учёных «Проблемы биомедицинской науки третьего тысячелетия» (Санкт-Петербург, Россия, 2016), на V съезде сообщества биохимиков России (Дагомыс, Россия, 2016), на 19-ой (устный доклад отмечен вторым местом в рамках конференции), 20-ой, 21-ой и 22-ой (устный доклад отмечен первым местом в рамках конференции) ежедгодных конференциях онкологического центра Фокс Чейз (Fox Chase Cancer Center) (Филадельфия, США, 2014, 2015, 2016 и 2017), на VIII Конференции молодых ученых РМАНПО «Горизонты медицинской науки» (Москва, Россия, 2017), на ежегодной VI Международной научно-практической конференции «Новые концепции механизмов воспаления, аутоиммунного ответа и развития опухоли» (Казань, Россия, 2017), на 4-ой международной конференции, посвященной

фундаментальным и трансляционным исследованиям в области педиатрической нейро-онкологии (Society for Neuro-Oncology (SNO), (Нью-Йорк, США, 2017), на 22-ом ежегодном съезде нейро-онкологического сообщества (Society for Neuro-Oncology (SNO), (Сан-Франциско, США, 2017).

Публикации

По теме диссертации опубликовано 19 научных работ, среди которых 7 публикаций в журналах базы SCOPUS и 12 тезисов научных докладов.

Структура и объем диссертации

Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов, их обсуждения, выводов и списка цитированной литературы. Работа изложена на 136 страницах машинописного текста, включает 1 таблицу и 48 рисунков. Библиография включает 168 наименований.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Медуллобластома: клиническая картина, прогноз и лечение

Медуллобластома (МБ) является наиболее распространенной примитивной нейроэктодермальной злокачественной опухолью головного мозга, поражающей главным образом детей в возрасте до 14 лет (Шонус и Щербенко, 2013). Ежегодно во всем мире регистрируется 5 случаев МБ на 1 000 000 детей (McNeil et al, 2002; Smoll and Drummond, 2012). Заболеваемость МБ у детей составляет 20% от общего количества опухолей головного мозга, в то время как у взрослых МБ встречается реже, составляя 2% (Smoll and Drummond, 2012; Yee et al, 2006).

МБ стремительно развивается в мозжечке в области задней черепной ямки и метастазирует с потоками цереброспинальной жидкости в пределах центральной нервной системы (ЦНС). Известны случаи распространения метастазов в костные ткани и шейные лимфоузлы, реже - в легкие (Хачатрян В .А. с соавт., 2013).

Основными клиническими проявлениями МБ являются гидроцефалия -увеличение размера черепа, вызванного избыточным скоплением цереброспинальной жидкости в желудочках головного мозга, а также вызванные ею головные боли, тошнота, рвота, мозжечковая атаксия и нарушения координации (Gilbertson and Ellison, 2008). Спинальные метастазы проявляются болями в спине, двигательными и чувствительными нарушениями (Хачатрян В .А. с соавт., 2013).

Пятилетняя выживаемость больных МБ в возрасте старше 3-х лет за последнее десятилетие увеличилась с 30% до 70-75% благодаря использованию ряда методов лечения, включающих онкохирургию, краниоспинальное облучение и химиотерапию (Packer et al., 2006; Gajjar et al., 2006; Rutcowski et al., 2010).

Несмотря на прогресс, сделанный в области лечения МБ, применение сильнодействующих методов онкотерапии в юном возрасте приводит к развитию тяжелых и длительных побочных эффектов, включающих нейрологические и

нейроэндокринные расстройства, а также дефекты физиологического и психосоциального характера (Mabbott et al., 2008; Spiegler et al., 2004; Northcott et al., 2012a). Выбор подходов к лечению МБ основывается на разделении пациентов на группы высокого и среднего риска по результатам первичной и послеоперационной диагностики. Индивидуальный подход к лечению МБ позволяет достичь увеличения эффективности терапии для пациентов высокой группы риска, а также помогает минимизировать побочные эффекты в группе среднего риска за счет снижения доз облучения (Packer et al., 1999).

1.2. Гистологическая характеристика медуллобластомы

С точки зрения гистологического анализа, МБ свойственна морфологическая гетерогенность.

Гистологические типы МБ Классическая МБ Анапластическая МБ Десмопластическая МБ

Рис.1. Гистологические типы МБ. Окрас срезов МБ гематоксилином и эозином: классическая МБ (Fritz et al., 2000), анапластическая МБ и десмопластическая МБ (Gajjar and Robinson, 2014).

Согласно классификации ВОЗ от 2007 года, принято выделять следующие гистологические варианты МБ (Рис.1): классическая МБ, содержащая плотноупакованные мелкие клетки с тонким слоем цитоплазмы и гиперхромным ядром; анапластическая (крупноклеточная) МБ, характеризующаяся наличием увеличенных плейоморфных ядер, и имеющая наиболее агрессивный характер течения; и, наконец, десмопластическая (нодулярная) МБ, характеризующаяся гетерогенной структурой, и состоящая из участков с высокопролеферирующими

клетками (десмопластические регионы), и дифференцированных нодулярных структур - псевдорозеток Хомера-Райта. Отмечено, что проявления нодулярности ассоциированы с наиболее благоприятным прогнозом МБ ввиду высокого уровня дифференцировки клеток, составляющих псевдокорзинки (Eberhart et al, 2002; Рыжова М.В. с соавт., 2013; Хачатрян В.А. с соавт., 2013).

1.3. Молекулярно-генетические аспекты классификации медуллобластом.

Медуллобластома типа Sonic Hedgehog

Благодаря развитию интегративной геномики за последние 10 лет, научное сообщество приобрело глубокие знания о биологии МБ, в частности - о гетерогенности природы данного заболевания. Наряду с гетерогенностью по гистологическим параметрам, МБ характеризуются неоднородностью молекулярно-генетических свойств. Несколькими группами исследователей было установлено, что медуллобластомам, имеющим схожие молекулярно-генетические характеристики, свойственны отличия в прогнозе и характере течения заболевания (Pomeroy et al., 2002; Cho et al., 2011; Kool et al., 2012). Установление молекулярно-генетических различий МБ имеет фундаментальное значение для современной медицины, поскольку позволяет увеличить эффективность лечения, а также избежать последствий серьезных побочных эффектов ввиду применения индивидуальных подходов лечения. Кроме того, идентификация молекулярных и генетических процессов, лежащих в основе патогенеза МБ, открывает новые возможности для лечения МБ с использованием таргетной терапии, направленной на подавление конкретной внутриклеточной мишени в опухолевых клетках. Данный подход позволит минимизировать побочные эффекты, обусловленные негативным влиянием химических агентов на здоровые клетки в развивающемся мозге больных детей.

Современные представления о механизмах онкогенеза МБ во многом обязаны прогрессу, сделанному в области геномики и протеомики. Так, развитие транскриптомного анализа, позволяющего исследовать все транскрипты клетки, открыло новые возможности для изучения экспрессии генов индивидульного

организма на фоне развития различных заболеваний. Первое исследование транскриптома образцов МБ человека выявило существование различных групп МБ. Группы, имеющие транскриптомные отличия, характеризовались схожими по структурным хромосомным изменениям, мутациям, характеру течения заболевания, а также гистологическим и демографическим характеристикам. По результатам исследований, проведенных несколькими независимыми исследовательскими группами (Thomson et al., 2006; Cho et al., 2011; Northcott et al., 2011; Kool et al., 2008), был принят консенсус (Taylor at al., 2012), согласно которому принято выделять 4 типа МБ: тип Wnt, тип Shh, Группа 3 и Группа 4 (Рис.2).

КОНСЕНСУС WNT

Cho, 2010 Northcott, 2010 Kool, 2008 Thompson, 2008

ДЕМОГРАФИЯ

Возраст St') ■

Пол Q Cf КЛИНИКА

Гистология

Метастазы

Прогноз

ГЕНЕТИКА

jpiga"

ЭКСПРЕССИЯ ГЕНА

С6 WNT А В

SHH

сз

SHH

в

C\D

ttflt cf cf: 9 9

Классическая, анапластическая

Редко Хороший

й

Муташш CTNNBI

Wnt-путь MYC+

fcfcfl ff

сГсГ: 99

Классическая, анапластическая. десмопластнческая

Редко

Младенцы- хороший, остальные - средний

3q

К

10ц-

Мутации Ptchl, Smo, Sufu

Амплификация Gli2, MYCN Shh путь MYCN+ j

C1/C5 Группа С E E, A

Cf Cf: 9

Классическая, анаатастическая

Часто Плохой

' И

'q* II 5ч 17q+ ft I lOq lOqt Ш • i6q-

I17q

Амплификация МУС

Фоторецептор/GABA

эргическая v MYC+++ j

Группа 4

C2/C4 Группа D C/D

А, С

fc Q ft 9 f

CfCf: 9

Классическая, анапластическая

Очень часто Средний

ХН

1IP-

* 9

Амплификация CDK6, MYCN Нейрональная/ Глутаматергнческая минимум MYC/MYCN .

Рис.2. Сравнительная характеристика типов МБ, составленная в соответствии со всеми опубликованными литературными данными по молекулярно-генетической классификации МБ (Taylor et al., 2012).

Тип Wnt является наиболее изученным типом МБ и характеризуется благоприятным прогнозом - медиана 5-летней выживаемости составляет 90% (Clifford et al., 2006; Thompson et al., 2006). Регистрируемые смерти больных группы Wnt чаще сопряжены с появлением вторичных новообразований или с осложнениями на фоне терапии, нежели чем с риском рецидива МБ (Taylor et al., 2012). Название данного класса происходит от одноименного сингального каскада Wnt. В норме сигнальный путь Wnt регулирует клеточную пролиферацию и миграцию в ходе эмбрионального развития организма, однако чрезмерная активация каскада Wnt сопряжена с канцерогенезом МБ, глиобластомы, меланомы, рака предстательной железы, молочной железы, легкого и других (Cadigan and Nusse, 1997). Харакерной особенностью данного типа МБ является наличие мутации в гене CTNNB1, кодирующем ß-катенин, потеря которого сопряжена с активацией сигнального каскада Wnt. Развитие МБ типа Wnt характерно для пациентов всех возрастов, однако у новоражденных встречается крайне редко (Рис.2, 3).

Вфослые >19 лет

Shh

Shh

Shh

Группа 3

Группа 4

Wnt

Группа 4

I руина 4

Группа 3

Wnt

Рис.3. Схематическое распределение частоты встречаемости типов МБ среди различных возрастных групп (Gajjar and Robinson, 2014).

МБ типа Shh названы по аналогии с сигнальным путем Sonic Hedgehog (Shh), лежащим в основе развития МБ данного класса. Каскад Shh является ключевым механизмом, регулирующим клеточную пролиферацию, детерминацию и дифференцировку в ходе эмбрионального и раннего постэбрионального развития. Нарушения механизма передачи сигнала Shh, обусловленные мутациями генов Ptch1, Smo, SuFu, а также амплификацией Gli2 и Myc-N, лежат в основе развития МБ, базалиомы и рабдомиосаркомы. Повышенная активация каскада Shh сопряжена с онкогенезом таких новообразований, как мелкоклеточный рак легкого, рак груди, печени, поджелудочной и предстательной желез (Rubin and de Sauvage, 2006). МБ типа Shh является наиболее распространенным классом МБ среди новорожденных детей в возрасте до 3-х лет, а также среди взрослых (Taylor et al., 2012) (Рис.2, 3). Shh-опосредованные МБ являются одними из наиболее агрессивных и многочисленных, составляя 30% от количества всех диагностированных МБ (Kool et al., 2012). При использовании традиционных подходов к лечению МБ пятилетняя выживаемость составляет 75% (Northcott et al., 2012b).

МБ группы 3 имеют агрессивный характер течения, высокий уровень метастазирования и наихудший прогноз среди всех описанных типов МБ. Генетической особенностью данного класса МБ является амплификация Myc (Рис.2). 50% МБ группы 3 не имеют выраженных молекулярно-генетических характеристик (Northcott et al, 2012a). Развитие МБ группы 3 характерно для новорожденных и детей, во взрослом возрасте встречается крайне редко (Рис.3). Пятилетняя выживаемость среди младенцев составляет 45%, среди детей в возрасте до 19 лет - 58% (Kool et al., 2012; Northcott et al., 2012a).

МБ группы 4 встречаются с наибольшей частотой и составляют 35% от общего количества диагностированных МБ (Kool et al., 2012). Генетическими маркерами данного типа являются амплификация Myc-N и Cdk6. Следует отметить, что молекулярно-генетические механизмы МБ группы 4 недостаточно хорошо изучены. МБ группы 4 встречаются наиболее часто в детском возрасте,

реже - у новорожденных и взрослых пациентов (Gajjar and Robinson, 2014). Пятилетняя выживаемость в среднем составляет 80% (Kool et al., 2012).

1.4. Роль каскада Sonic Hedgehog в гистогенезе мозжечка

Структура мозжечка схожа среди многообразия видов позвоночных и характеризуется высокоупорядоченной организацией (Wang and Zoghbi, 2001). В мозжечке различные типы клеток образуют слои, расположение которых меняется в результате клеточной миграции в ходе эмбрионального и постнатального развития. Ввиду того, что основным объектом исследований в данной работе явились мыши, рассмотрим мышиную гистологическую модель мозжечка (Рис.4).

Рис.4. Схема гистологической организации мозжечка мыши в ходе раннего онтогенеза на момент постнатальных дней развития 4-7 (Р4-7) (Ruiz I Altaba et al., 2002).

Внешняя поверхность мозжечка образована наружным гранулярным слоем (НГС), состоящим из плотно расположенных гранулярных нейрональных предшественников (ГНП). ГНП характерна экспрессия специфичного нейронального маркера прогениторных клеток Mathl. Далее следует молекулярный слой (МС), состоящий из астроцитов, экспрессирующих маркеры GFAP и S100, и плотно прилегающий к нему слой калбиндин-положительных клеток Пуркинье (грушевидные нейроны). Ветвистые дендриты клеток Пуркинье направлены в НГС, где формируют синапсы с ГНП. Известно, что пролиферация ГНП поддерживается митогеном Shh, а пик митоза приходится на постнатальные дни 4-7 (Р4-Р7). На протяжение этого периода ГНП активно делятся в плотноупакованном клетками НГС (Wechsler-Reya and Scott, 1999). Принято считать, что Shh секретируется клетками Пуркинье и доставляется к ГНП по их отросткам. После наступления Р7 ГНП начинают дифференцировку и миграцию радиально вглубь мозжечка, где окончательно дифференцируют и с образованием внутреннего гранулярного слоя (ВГС). Зрелые гранулярные нейроны характеризуются экспрессией белка семейства «цинковых пальцев» Ziel. Формирование ВГС завершается с наступлением Р21.

Исследования in vitro показали, что добавление митогена Shh в очищенную культуру ГНП стимулирует клеточную пролиферацию (Dahmane and Ruiz i Altaba, 1999), а эксперименты in vivo по подавлению секреции Shh c использованием Shh-блокирующих антител 5Е1 выявили дефекты в развитии НГС и нарушения могфологии клеток Пуркинье (Ericson et al., 1996).

Известно, что МБ развивается на поверхности мозжечка, в области активной пролиферации ГНП в НГС (Behesti and Marino, 2009). Исследования экспрессии нейрональных маркеров показали принадлежность клеток МБ нейрональному типу, а исследования in vivo выявили, что генетические манипуляции, такие как мутации гена Ptchl или Smo, приводят к чрезмерной активации сигнального каскада Shh в клетках ГНП и последующему развитию МБ. Полученные данные позволили заключить, что МБ типа Shh возникает из ГНП в результате бесконтрольной активации каскада Shh (Yang at al., 2008).

1.5. Характеристика сигнального каскада Sonic Hedgehog в норме и при онкогенезе

Сигнальный путь Shh является ключевым регулятором клеточной пролиферации в ходе эмбриогенеза позвоночных и беспозвоночных. Подавление передачи сигнала Shh приводит к возникновению патологий развития, в то время как бесконтрольная активация данного каскада лежит в основе онкогенеза многочисленных заболеваний (Echelard, et al., 1993; Riddle et al., 1993).

Сигнальный путь Shh занимает особое положение в становлении ЦНС, регулируя формирование переднего, среднего и заднего мозга (Jessell, 2000). Митоген Shh вовлечен в механизмы пролиферации олигодендроцитов (Lu et al., 2000; Soula et al., 2001) и нескольких групп нейронов (Chiang at al., 1996).

Свое название каскад Shh получил по аналогии с одноименным белком, запускающим процесс передачи сигнала в клетке. Shh впервые был охарактеризован как морфоген, регулирующий процессы клеточной пролиферации, детерминации и дифференцировки в ходе формирования дорсо-вентральной полярности, развития конечностей и органогенеза (Ingham, 1998). Несмотря на свое функциональное разнообразие, механизму передачи сигнла Shh свойственна межвидовая консервативность (Chuang and Konberg, 2000).

В контексте работы сигнального каскада Shh условно принято выделять два типа клеток: клетки, в которых происходит процессинг и протеолиз лиганда Shh с последующей секрецией в межклеточное пространство, и клетки, способные к ответной реакции на наличие морфогена Shh, результатом чего является клеточная пролиферация.

В клетках, синтезирующих лиганд Shh (Рис.5), в результате протеолитического расщепления предшественника Shh образуется два белка: N-концевая форма N-Shh (Hammerschimdt et al., 1997), выполняющая ведущую функцию при передаче сигнала Shh, а также С-концевая форма C-Shh, обладающая протеолитической активностью (Porter et al., 1996). Вслед за протеолизом N-Shh модифицируется ковалентным присоединением молекулы холестерина на С-конце, а также присоединением пальмитиновой кислоты на N-

конце. Известно, что модификация холестерином необходима для секреции лиганда в межклеточное пространство, а также наряду с пальмитатом обеспечивает стабильность молекулы Shh (Lewis et al., 2001; Zeng at al., 2001).

При отсутствии Shh в межклеточном пространстве сигнальный путь находится в неактивном состоянии. Запуск каскада начинается со взаимодействия лиганда Shh с его рецептором Patched 1 (Ptchl). Ptchl представляет собой 12-доменный трансмембранный белок. У млекопитающих встречаются две изоформы Ptch - Ptch1 и Ptch2, однако в ЦНС отмечается преобладание формы Ptch1 (Goodrich et al., 1996).

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Гордон Рената Эмилевна, 2018 год

СПИСОК ЦИТИРУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ:

1. Вердиев, Б. И. Исследование молекулярно-генетических механизмов нейрогенеза неокортекса и сетчатки человека in vivo и in vitro: автореф. дис. ... канд. биол. наук: 03.03.05, 03.02.07 / Бахтияр Исраил Оглы Вердиев. - Москва, 2010. - 22 с.

2. Габитова, Л.Р. Удаление фермента NSDHL способствует клеточному старению мышиных эмбриональных фибробластов / Л.Р. Габитова, И.А. Асцатуров // Учен. зап. Казан. ун-та. Сер. Естеств. науки. - 2015. - Т. 157. -№1. -С.127-139.

3. Габитова, Л.Р. Роль ферментов биосинтеза холестерина в подавлении развития KRas-опосредованного онкогенеза: автореф. дис. ... канд. биол. наук: 03.01.04 / Линара Рустамовна Габитова. - Казань, 2015. - 21 с.

4. Горин, А. О. Роль биосинтеза стеролов в чувствительности опухолевых клеток к блокаторам рецептора эпидермального фактора роста: автореф. дис. ... канд. биол. наук: 03.01.04 / Андрей Олегович Горин. - Казань, 2013. - 32 с.

5. Доманицкая, Н.В. Роль АВСС10-транспортера в формировании множественной лекарственной устойчивости рака молочной железы при лечении таксанами: автореф. дис. ... канд. биол. наук: 03.01.04 / Наталья Васильевна Доманицкая. - Новосибирск, 2014. - 23 с.

6. Рыжова, М.В. Особенности медуллобластомы у детей младше трех лет / М.В. Рыжова, О.Г. Желудкова, Э.В. Кумирова, Л.В. Шишкина, Т.Н. Панина, С.К. Горелышев, и др. // Вопросы нейрохирургии им. Н.Н. Бурденко. - 2013. -Т.77. - №.1. - С.3-11.

7. Хачатрян, В. А. Медуллобластома. Часть I. Эпидемиология. Патоморфология. Диагностика / В.А. Хачатрян, А.Ю. Улитин, К.А. Самочерных, А.В. Ким, А.Р. Тадевосян, А. А. Пальцев // Нейрохирургия и неврология детского возраста. - 2013. - Т.4. - №13. - С.59-70.

8. Шонус, Л.Х. Медуллобластома у детей. Клиника, диагностика, лечение, нерешенные проблемы / Л.Х. Шонус, О.И. Щербенко // Вестник

Российского Научного центра рентгенорадиологии Минздрава Российской Федерации. - 2013. - Т.13. - С.1-48.

9. About, I. Nestin expression in embryonic and adult human teeth under normal and pathological conditions / I. About, D. Laurent-Maquin, U. Lendahl, T.A. Mitsiadis // American Journal of Pathology. - 2000. - V.157. - P.287-295.

10. Alder, J. Embryonic precursor cells from the rhombic lip are specified to a cerebellar granule neuron identity / J. Alder, N.K. Cho, M.E. Hatten // Neuron. - 1996. - V.17. - P.389-399.

11. Behesti, H. Cerebellar granule cells: Insights into proliferation, differentiation, and role in medulloblastoma pathogenesis / H. Behesti, S. Marino // The International Journal of Biochemistry and Cell Biology. - 2009. - V.41. - P.435-445.

12. Bidet, M. The hedgehog receptor patched is involved in cholesterol transport / M.

Bidet, O. Joubert, B. Lacombe, M. Ciantar, R. Nehme, P. Mollat, et al. // PLOS one. - 2011. - V.6. - P.e23834.

13. Bjorkhem, I. Cholesterol homeostasis in human brain: turnover of 24S-hydroxycholesterol and evidence for a cerebral origin of most of this oxysterol in the circulation / I. Bjorkhem, D. Lutjohann, U. Diczfalusy, L. Stahle L, G. Ahlborg, J. Wahren // Journal of Lipid Research. - 1998. - V.39. - P.1594-1600.

14. Bjorkhem, I. Brain cholesterol: long secret life behind a barrier / I. Bjorkhem, S. Meaney // Arterioscleosis, Thrombosis and Vascular Biology. - 2004. -V.24. - P.806-815.

15. Briscoe, J. The mechanisms of Hedgehog signalling and its roles in development and disease / J. Briscoe, P.P. Therond // Nature Reviews Molecular Cell Biology. - 2013. - V.14. - P.416-429.

16. Burke, R. Dispatched, a novel sterol-sensing domain protein dedicated

to the release of cholesterol-modified hedgehog from signaling cells / R. Burke, D. Nellen, M. Bellotto, E. Hafen, K.A. Senti, B.J. Dickson // Cell. - 2002. - V.99. -P.803-815.

17. Byrne, E.F.X. Structural basis of Smoothened regulation by its extracellular domains / E.F.X. Byrne, R. Sircar, P.S. Miller, G. Hedger, G. Luchetti, S. Nachtergaele, et al. // Nature. - 2016. - V.535. - P.517-522.

18. Cadigan, K.M. Wnt signaling: a common theme in animal development / K.M. Cadigan, R. Nusse // Genes and Development. - 1997. - V.11. - P.3286-3305.

19. Callejo, A. Hedgehog lipid modifications are required for Hedgehog stabilization in the extracellular matrix / A. Callejo, C. Torroja, L. Quijada, I. Guerrero // Development. - 2006. - V.133. - P.471-483.

20. Canene-Adams, K. Preparation of formalin-fixed paraffin-embedded tissue for immunohistochemistry / K. Canene-Adams // Methods Enzymology. - 2013. -V.533. - P.225-233.

21. Chiang, C. Cyclopia and defective axial patterning in mice lacking Sonic hedgehog gene function / C. Chiang, Y. Litingtung, E. Lee, K.E. Young, J.L. Corden, H. Westphal, et al. // Nature. - 1996. - V.383. - P.407-413.

22. Cho, Y.-J. Integrative genomic analysis of medulloblastoma identifies a molecular subgroup that drives poor clinical outcome / Y.J. Cho, A. Tsherniak, P. Tamayo, S. Santagata, A. Ligon, H. Greulich, et al. // Journal of Clinical oncology. -2011. - V.29. - P.1424-1430.

23. Chuang, P.T. On the range of hedgehog signaling / P.T. Chuang, T.B. Kornberg // Current Opinion in Genetics and Development. - 2000. - V.5. - P.515-522.

24. Clifford, S. Wnt/wingless pathway activation and chromosome 6 loss characterise a distinct molecular subgroup of medulloblastomas associated with a favourable prognosis / S. Clifford, Lusher M, J. Lindsey, J. Langdon, R. Gilbertson, D. Straughton // Cell Cycle. - 2006. - V.5. - P.2666-2670.

25. Collison, E.A. Atorvastatin prevents RhoC isoprenylation, invasion, and metastasis in human melanoma cells / E.A. Collison, C. Kleer, M. Wu, A. De, S.S. Gambhir, S.D. Merajver, et al. // Molecular Cancer Therapeutics. - 2003. - V.2. -P.941-948.

26. Cooper, M.K. Teratogen-mediated inhibition of target tissue response to Shh signaling / M.K. Cooper, J.A. Porter, K.E. Young, P.A. Beachy // Science. - 1998. - V.280. - P.1603-1607.

27. Cooper, M.K. A defective response to Hedgehog signaling in disorders of cholesterol biosynthesis / M.K. Cooper, C.A. Wassif, P.A. Krakowiak, J. Taipale, R. Gong, R.I. Kelley // Nature Genetics. - 2003. - V.33. - P.508-513.

28. Corcoran, R.B. Oxysterols stimulate Sonic hedgehog signal transduction and proliferation of medulloblastoma cells / R.B. Corcoran, M. Scott // Proceedings of the National Academy of Sciences. - 2006. - V. 103. - P.8408-8413.

29. Creanga, A. Scube/You activity mediates release of dually lipid-modified Hedgehog signal in soluble form / A. Creanga, T.D. Glenn, R.K. Mann, A.M. Saunders, W.S. Talbot, P.A. Beachy // Genes Development. - 2012. - V.26. - P.1312-1325.

30. Cunningham, D. Analysis of hedgehog signaling in cerebellar granule neuron precursors in a conditional Nsdhl allele demonstrates an essential role for cholesterol in postnatal CNS development / D. Cunningham, A.E. DeBarber, N. Bir, L. Binkley, L.S. Merkens, R.D. Steiner, et al. // Human molecular genetics. - 2015. -V.24. - P.2808-2825.

31. Dahlstrand, J. Characterization of the human nestin gene reveals a close evolutionary relationship to neurofilaments / J. Dahlstrand, L.B. Zimmerman, R.D. McKay, U. Lendahl // Journal of Cell Science. - 1992. - V.103. - P.589-597.

32. Dahmane, N. Sonic hedgehog regulates the growth and patterning of the cerebellum / N. Dahmane, A. Ruiz I Altaba // Development. - 1999. - V. 126. -P.3089-3100.

33. Dawber, R.J. Differential range and activity of various forms of the Hedgehog protein / R.J. Dawber, S. Hebbes, B. Herpers, F. Docquier, M. van den Heuvel // BMC Developmental Biology. - 2005. - V.30. - P.5-21.

34. Demierre, M.F. Statins and cancer prevention / M.F. Demierre, P.D. Higgins, S.B. Gruber, E. Hawk, S.M. Lippman // Nature Reviews Cancer. - 2005. -V.5. - P.930-942.

35. Ducuing, A. Absolute requirement of cholesterol binding for Hedgehog gradient formation in Drosophila / A. Ducuing, B. Mollereau, J.D. Axelrod, S. Vincent // Biology Open. - 2013. - V.2. - P.596-604.

36. Eberhart, C.G. Histopathologic grading of medulloblastomas: a pediatric oncology group study / C.G. Eberhart, J.L. Kepner, P.T. Goldthwaite, L.E. Kun, P.K. Duffner, H.S. Friedman // Cancer. - 2002. - V.94. - P.552-560.

37. Echelard, Y. Sonic hedgehog, a member of a family of putative signaling molecules, is implicated in the regulation of CNS polarity / Y. Echelard, D.J. Epstein,

B. St-Jacques, L. Shen, J. Mohler, J.A. McMahon, et al. // Cell. - 1993. - V.75. -P.1417-1430.

38. Eiland, L.S. Use of statins for dyslipidemia in the pediatric population / L.S. Eiland, P.K. Luttrell / J Pediatr Pharmacol Ther. - 2010. - V.15. - P.160-172.

39. Ericson, J. Two critical periods of Sonic Hedgehog signaling required for the specification of motor neuron identity / J. Ericson, S. Morton, A. Kawakami, H. Roelink, T.M. Jessell // Cell. - 1996. - V.87. - P.661-673.

40. Fellner, C. Vismodegib (Erivedge) For Advanced Basal Cell Carcinoma /

C. Fellner // Pharmacy and Therapeutics. - 2012. - V.37. - P.673-677.

41. Fletz, M.J. The hedgehog gene family in Drosophila and vertebrate development / M.J. Fletz, J.P. Concordet, R. Barbosa, R. Johnson, S. Krauss, A.P. McMahon, et al. // Development. Supplement. - 1994. - V.1. - P.43-51.

42. Frederiksen, K. Proliferation and differentiation of rat neuroepithelial precursor cells in vivo / K. Frederiksen, R.D. McKay // Journal of Neuroscience. -1988. - V.4. - P. 1144-1151.

43. Fritz, A. International classification of deseases in oncology / A. Fritz, C. Percy, A. Jack, K. Shanmuragatman, L.H. Sobin, D.M. Parkin, et al. // World Health organization. Geneva. - 2000.

44. Gage, G.J. Whole Animal Perfusion Fixation for Rodents / G.J. Gage, D.R. Kipke, W. Shain // Jornal of Visualized Experiments. - 2012. - V.65. - P.1-6.

45. Gallet, A. Cholesterol modification is necessary for controlled planar longrange activity of Hedgehog in Drosophila epithelia / A. Gallet, L. Ruel, L. Staccini-Lavenant, P.P. Therond // Development. - 2006. - V.133. - P.407-418.

46. Gajjar, A.J. Risk-adapted craniospinal radiotherapy followed by high-dose chemotherapy and stem-cell rescue in children with newly diagnosed medulloblastoma (St Jude Medulloblastoma-96): long-term results from a prospective, multicentre trial / A. Gajjar, M. Chintagumpala, D. Ashley, S. Kellie, L.E. Kun, T.E. Merchant, et al. // Lancet Oncology. - 2006. - V.10. - P.813-820.

47. Gajjar, A.J. Medulloblasoma - translating discoveries from the bench to the bedside / A.J. Gajjar, G.W. Robinson // Nature Reviews Clinical Oncology. - 2014. -Vol.11. - P.714-722.

48. Gibson, P. Subtypes of medulloblastoma have distinct developmental origins / P. Gibson, T. Yong, G. Robinson, M.C. Thompson, D.S. Currle, C. Eden, et al. // Nature. - 2010. - V.468. - P.1095-1099.

49. Gilbertson, R.J. The origins of medulloblastoma subtypes / R.J. Gilbertson, D.W. Ellison // Anual Review of Pathology: Mechanisms of Disease. - 2008. - V.3. -P.341-365.

50. Gniadecki, R. Depletion of membrane cholesterol causes ligand independent activation of Fas and apoptosis / R. Gniadecki // Biochemical and Biophysical Research Communications. - 2004. - V.320. - P.165-169.

51. Goodman, J.M. Demonstrated and inferred metabolism associated with cytosolic lipid droplets / J.M. Goodman // Journal of Lipid Research. - 2009. - V.50. -P.2148-2156.

52. Goodrich, L.V. Conservation of the hedgehog/patched signaling pathway from flies to mice: induction of a mouse patched gene by Hedgehog / L.V. Goodrich, R.L. Johnson, L. Milenkovic, J.A. McMahon, M.P. Scott // Genes Development. -1996. - V.3. - P.301-312.

53. Goodrich, L.V. Altered neural cell fates and medulloblastoma in mouse patched mutants / L.V. Goodrich, L. Milenkovic, K.M. Higgins, M.P. Scott // Science. - 1999. - V.277. - P. 1109-1113.

54. Graaf, M.R. The risk of cancer in users of statins / M.R. Graaf, A.B. Beiderbeck, A.C. Egberts, D.J. Richel, H.J. Guchelaar // Journal of Clinical Oncology.

- 2004. - V.22. - P.2388-2394.

55. Guerrete, D. Molecular evolution of type VI intermediate filament proteins / D. Guerette, P.A. Khan, P.E. Savard, M. Vincent // BMC Evolutionary Biology. -2007. - V.7:164. - P.1-10.

56. Hahn, H. Patched target Igf2 is indispensable for the formation of medulloblastoma and rhabdomyosarcoma / H. Hahn, L. Wojnowski, K. Specht, R. Kappler, J. Calzada-Wack, D. Potter, et al. // Journal of Biological Chemistry. - 2000.

- V.275. - P.28341-28344.

57. Hammerschimdt, M. The world according to hedgehog / M. Hammerschmidt, A. Brook, A.P. McMahon // Trends in genetics. - 1995. - V.31. -P.14-21.

58. Heldt, S.A. The use of lentiviral vectors and Cre/loxP to investigate the function of genes in complex behaviors / S.A. Heldt and K.J. Ressler // Frontiers of Molecular Neuroscience. - 2009. - V.2. - P.1-13.

59. Hentosh, P. Sterol-independent regulation of 3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme A reductase in tumor cells / P. Hentosh, S.H. Yuh, C.E. Elson, D.M. Peffley // Molecular Cancerogenesis. - 2001. - V.32. - P.154-166.

60. Hirotsu, M. Smoothened as a new therapeutic target for human osteosarcoma / M. Hirotsu, T. Setoguchi, H. Sasaki, Y. Matsunoshita, H. Gao, H. Nagao, et al. // Molecular Cancer. - 2010. - V.9:5. - P.1-14.

61. Huang, P. Cellular cholesterol directly activates Smoothened in Hedgehog signaling / P. Huang, D. Nedelcu, M. Watanabe, C. Jao, Y. Kim, J. Liu, et al. // Cell. -2016. - V.166. - P.1176-1187.

62. Huang, X. Region-specific requirement for cholesterol modification of sonic hedgehog in patterning the telencephalon and spinal cord / X. Huang, Y. Litingtung, C. Chiang // Development. - 2007. - V.134. - P.2095-2105.

63. Incardona, J.P. The teratogenic Veratrum alkaloid cyclopamine inhibits sonic hedgehog signal transduction / J.P. Incardona, W. Gaffield, R.P. Kapur, H. Roelink // Development. - 1998. - V.125. - P. 3553-3562.

64. Ingham, P.W. Transducing Hedgehog: the story so far / P.W. Ingham // EMBO Journal. - 1998. - V.13. - P.3505-3511.

65. Jakacki, R.I. Outcome of children with metastatic medulloblastoma treated with carboplatin during craniospinal radiotherapy: a Children's Oncology Group Phase I/II study / R.I. Jakacki, P.C. Burger, T. Zhou, E.J. Holmes, M. Kocak, A. Onar, et al. // Journal of Clinical Oncology. - 2012. - V.30. - P. 2648-2653.

66. Jessell, T.M. Neuronal specification in the spinal cord: inductive signals and transcriptional codes / T.M. Jessell // Nature Reviews Genetics. - 2000. - V.1. -P.20-29.

67. Johansson, C.B. Nestin enhancer requirements for expression in normal and injured adult CNS / C.B. Johansson, C. Lothian, M. Molin, H. Okano, U. Lendahl // Journal of Neuroscience Research. - 2002. - V.69. - P.784-794.

68. Johnson, K.A. The whole brain atlas / K.A. Johnson, J.A. Becker [Электронный ресурс] // Lippincott Williams and Wilkins. - 1999. - Режим удаленного доступа: http://www.med.harvard.edu/aanlib/home.html

69. Jozefczuc, J. Preparation of mouse embryonic fibroblast cells suitable for culturing human embryonic and induced pluripotent stem cells / J. Jozefczuc, K. Drews, J. Adjaye // Journal of Visualized Experiments. - 2012. - V.64. - P.1-5.

70. Karghadkar, S.S. Hedgehog signalling in prostate regeneration, neoplasia and metastasis / S.S. Karhadkar, G.S. Bova, N. Abdallah, S. Dhara, D. Gardner, A. Maitra, et al. // Nature. - 2004. - V.431. -P.707-712.

71. Kieran, M.W. Targeted treatment for sonic hedgehog-dependent medulloblastoma / M.W. Kieran // Neuro-Oncology. - 2014. - V.8. - P.1037-1047.

72. Kirby, T.J. Cataracts produced by triparanol (MER-29) / T.J. Kirby // Transactions of the American Ophtalmology Society. - 1967. - V.65. - P.494-543.

73. Kimura, H. Transient inhibition of the Hedgehog pathway in young mice causes permanent defects in bone structure / H. Kimura, J.M.N. Ng, T. Curran // Cancer cell. - 2008. - V.13 - P.249-260.

74. Kool, M. Integrated genomics identifies five medulloblastoma subtypes with distinct genetic profiles, pathway signatures and clinicopathological features / M. Kool, J. Koster, J. Bunt, N.E. Hasselt, A. Lakeman, P. van Sluis, et al. // PLoS One. -2008. - V.3. - P.1-14.

75. Kool, M. Molecular subgroups of medulloblastoma: an international meta-analysis of transcriptome, genetic aberrations, and clinical data of WNT, SHH, Group 3, and Group 4 medulloblastomas / M. Kool, M. Remke, A. Korshunov, D.T.W. Jones, M. Schlanstein, P.A. Northcott, et al. // Acta Neuropathologica. - 2012. - Vol.123. - P. 473-484.

76. Krupkova, O. Jr. Nestin expression in human tumors and tumor cell lines / O. Jr. Krupkova, T. Loja, I. Zambo, R. Veselska // Neoplasma. - 2010. - V.57. -P.291-298.

77. Kuzu, O.F. The role of cholesterol in cancer / O.F. Kuzu, M.A. Noory, G.P. Robertson // Cancer Research. - 2016. - V.76. - P.2063-2070.

78. Kuwabara, P.E. The sterol-sensing domain: multiple families, a unique role? / P.E. Kuwabara, M. Labouesse // Trends in Genetics. - 2002. - V.18. - P.193-201.

79. Lee, A. Isolation of neural stem cells from the postnatal cerebellum / A. Lee, J.D. Kessler, T.A. Read, C. Kaiser, D. Corbeil, W.B. Huttner, et al. // Nature Neuroscience. - 2005. - V.8. - P.723-729.

80. Lee, G. Role of nucleotide sequences of loxP spacer region in Cre-mediated recombination / G. Lee, I. Saito // Gene. - 1998. - V.216. - P.55-65.

81. Lewis, P.M. Cholesterol modification of sonic hedgehog is required for long-range signaling activity and effective modulation of signaling by Ptc1 / P.M. Lewis, M.P. Dunn, J.A. McMahon, M. Logan, J.F. Martin, B. St-Jacques, et al. // Cell. - 2001. - V.105. - P.599-612.

82. Li, L. Nestin expression in hair follicle sheath progenitor cells / L. Li, J. Mignone, M. Yang, M. Matic, S. Penman, G. Enikolopov // Proceedings of the National Academy of Sciences. - 2003. - V.100. - P.9958-9961.

83. Li, P. A population of Nestin-expressing progenitors in the cerebellum exhibits increased tumorigenicity / P. Li, F. Du, L.W. Yuelling, T. Lin, R.E. Muradimova, R. Tricarico, et al. // Nature Neuroscience. - 2013. - V.16. - P. 17371744.

84. Li, P. Nestin mediates hedgehog pathway tumorigenesis / P.Li, E. Lee, F. Du, R.E. Gordon, L.W. Yuelling, Y. Liu, et al. // Cancer Research. - 2016. - V.76. -P.5573-5583.

85. Li, Y. Cholesterol modification restricts the spread of Shh gradient in the limb bud / Y.Li, H. Zhang, Y. Litingtung, C. Chiang // Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. - 2006. - V.103. - P.6548-6553.

86. Litingtung, Y. Shh and Gli3 are dispensible for imb skeleton formation but but regulate digit number and identity / Y. Litingtung, R.D. Dahn, Y. Li, J.F. Fallon, C. Chiang // Nature. - 2002. - V.418. -P.979-983.

87. LoRusso, P.M. Phase I trial of hedgehog pathway inhibitor vismodegib (GDC-0449) in patients with refractory, locally advanced or metastatic solid tumors / P.M. LoRusso, C.M. Rudin, J.C. Reddy, R. Tibes, G.J. Weiss, M.J. Borad, et al. // Clinical Cancer Research. - 2011. - V.17. - P.2502-2511.

88. Lothian, C. An evolutionarily conserved region in the second intron of the human nestin gene directs gene expression to CNS progenitor cells and to early neural crest cells / C. Lothian, U. Lendahl // European Journal of Neuroscience. - 1997. -V.9. - P.452-462.

89. Louis, D.N. The 2016 World health organization classification of tumors of central nervous system: a summary / D.N. Louis, A. Perry, G. Reifenberger, A. von Deimling, D. Figarella-Branger, W.K. Cavenee, et al. // Acta Neuropathologica. -2016. - Vol.131. - P. 803-820.

90. Lu, Q.R. Sonic hedgehog--regulated oligodendrocyte lineage genes encoding bHLH proteins in the mammalian central nervous system / Q.R. Lu, D. Yuk, J.A. Alberta, Z. Zhu, I. Pawlitzky, J. Chan, et al. // Neuron. - 2000. - V.25. - P.317-329.

91. Mabbott, D.J. Core neurocognitive functions in children treated for posterior fossa tumors / D.J. Mabbott, L. Penkman, A. Witol, D. Strother, E. Bouffet // Neuropsychology. - 2008. V.22. - P.159-168.

92. Marcelli, M. Caspase-7 is activated during lovastatin-induced apoptosis of the prostate cancer cell line LNCaP / M. Marcelli, G.R. Cunningham, S.J. Haidacher, S.J. Padayatty, L. Sturgis, C. Kagan, et al. // Cancer Research. - 1998. - V.58. - P.76-83.

93. Markant, S.L. Personolized mice: modelling the molecular heterogeneity of medulloblastoma / S.L. Markant, R.J. Wechsler-Reya // Neuropathology and Applied Neurobiology. - 2012. - V.28. - P.228-240.

94. Marvin, M.J. A rod end deletion in the intermediate filament protein nestin alters its subcellular localization in neuroepithelial cells of transgenic mice / M.J. Marvin, J. Dahlstrand, U. Lendahl, R.D.G. McKay // Journal of Cell Science. - 1999. -V.111. - P.1951-1961.

95. Marti, E. Sonic Hedgehog in CNS development: one signal, multiple outputs / E. Marti, P. Bovalenta // Trends in Neurosciences. - 2002. - V.25. - P.89-96.

96. Matusewicz, L. The effect of statins on cancer cells / L. Matusewicz, J. Meissner, M. Toporkiewicz, A. F. Sikorski // Tumour Biol. - 2015. - V.36. - P.4884-4904.

97. Mauch, D.H. CNS Synaptogenesis Promoted by Glia-Derived Cholesterol / D.H. Mauch, K. Nagler, S. Schumacher, C. Göritz, E.-C. Müller, A. Otto, et al. // Science. - 2001. - V.294. - P.1354-1357.

98. Maxfield, F.R. Analysis of cholesterol trafficking with fluorescent probes / F.R. Maxfield, D. Wustner // Methods Cell Biology. - 2012. - V. 108. - P.367-393.

99. McNeil, D.E. Incidence and trends in pediatric malignancies medulloblastoma/primitive neuroectodermal tumor: a SEER update. Surveillance

Epidemiology and End Results / D.E. McNeil, T.R. Cote, L. Clegg, L.B. Rorke // Medical and Pediatric Oncology. - 2002. - V.39. - P. 190-194.

100. Mesmin, B. Intracellular sterol dynamics / B. Mesmin, F.R. Maxfield // Biochimica et Biophysica Acta. - 2009. - V.91. - P.636-645.

101. Miao, J. Rapid isolation of single malaria parasite-infected red blood cells by cell sorting / J. Miao, L. Cui // Nature protocols. - 2011. - V.6. - P.140-146.

102. Michalczyk, K. Nestin structure and predicted function in cellular cytoskeletal organization / K. Michalczyk, M. Ziman // Histology and Histopathology. - 2005. - V.20. - P.665-671.

103. Morshead, C.M. Neural stem cells in the adult mammalian forebrain: a relatively quiescent subpopulation of subependymal cells / C.M. Morshead, B.A. Reynolds, C.G. Craig, M.W. McBurney, W.A. Staines, D. Morassutti, et al // Neuron. -1994. - V.13. - P.1071-1082.

104. Mulhern, R.K. Neurocognitive consequences of risk-adapted therapy for childhood medulloblastoma / R.K. Mulhern, S.L. Palmer, T.E. Merchant, D. Wallace, M. Kocak, P. Brouwers, et al. // Journal of Clinical Oncology. - 2005. - V.24. - P. 5511-5519.

105. Murphy, S.L. Deaths: final data for 2010 / S.L. Murphy, J. Xu, K.D. Kochanek // National vital statistics reports. - 2013. - Vol.61. - P. 1-117.

106. Myers, B.R. Hedgehog pathway modulation by multiple lipid binding sites on the smoothened effector of signal response / B.R. Myers, N. Sever, Y.C. Chong, J. Kim, J.D. Belani, S. Ruchnovsky, et al. // Developmental Cell. - 2013. - V.26 - P.347-356.

107. Nachtergaele, S. Oxysterols are allosteric activators of the oncoprotein Smoothened / S. Nachtergaele, L.K. Mydock, K. Krishnan, J. Rammohan, P.H. Schlesinger, D.F. Covey, et al. // Nature Chemical Biology. - 2012. - V.8. - P.211-220.

108. Nachtergaele, S. Structure and function of the Smoothened extracellular domain in vertebrate Hedgehog signaling / S. Nachtergaele, D.M. Whalen, L.K.

Mydock, Z. Zhao, T. Malinauskas, K. Krishnan, et al. / Elife. - 2013. - V.01340. -P.1-32.

109. Nedelcu, D. Oxysterol binding to the extracellular domain of Smoothened in Hedgehog signaling / D. Nedelcu, J. Liu, Y. Xu, C. Jao, A. Salic // Nature Chemical Biology. - 2013. - V.9. - P.557-554.

110. Northcott, P.A. Medulloblastoma comprises four distinct molecular variants / P.A. Northcott, A. Korshunov, H. Witt, T. Hielscher, C.G. Eberhart, S. Mack, et al. / Journal of Clinical Oncology. - 2011. - V.29. - P.1408-1414.

111. Northcott, P.A. Medullablastomics: the end of the beginning / P.A. Northcott, D.T.W. Jones, M. Kool, G.W. Robinson, R.J. Gilbertson, Y.-J. Cho, et al. // Nature Reviews Cancer. - 2012. - V.12. - P. 818-834 (a).

112. Northcott, P.A. The clinical implication of medulloblastoma subgroups / P.A. Northcott, A. Korshunov, S. Pfister, M.D. Taylor // Nature Reviews Neurology. -2012. - V.8. - P.340-351 (b).

113. Packer, R.J. Treatment of children with medulloblastomas with reduced-dose craniospinal radiation therapy and adjuvant chemotherapy: A Children's Cancer Group Study / R.J. Packer, J. Goldwein, H.S. Nicholson, L.G. Vezina, J.C. Allen, M.D. M.D. Ris, et al. // Journal of Clinical oncology. - 1999. - V.17. - P.2127-2136.

114. Packer, R.J. Phase III study of craniospinal radiation therapy followed by adjuvant chemotherapy for newly diagnosed average-risk medulloblastoma / R.J. Packer, A.J. Gajjar, G. Vezina, L. Rorke-Adams, P.C. Burger, P.L. Robertson, et al. // Journal of Clinical Oncology. - 2006. - V.24. - P. 4202-4208.

115. Pepinsky, R.B. Identification of a palmitic acid-modified form of human Sonic hedgehog / R.B. Pepinsky, C. Zeng, D. Wen, P.Rayhorn, D.P. Baker, K.P.Williams // Journal of Biological Chemistry. - 1998. - V.273. - P.14037-14045.

116. Peukert, S. Small-molecule inhibitors of the hedgehog signaling pathway as cancer therapeutics / S. Peukert, K. Miller-Moslin // ChemMedChem. - 2010. - V.5. -P.500-512.

117. Pfieger, F.W. Cholesterol metabolism in neurons and astrocytes / P.W. Pfieger, N. Ungerer // Progress in Lipid Research. - 2011. - V.50. - P.357-371.

118. Philipp, M. Hedgehog signaling: is Smo a G-coupled receptor? / M. Philipp, M.G. Caron // Cell Current Biology. - 2009. - V.19. - P.125-127.

119. Pitas, R.E. Lipoproteins and their receptors in the central nervous system. Characterization of the lipoproteins in cerebrospinal fluid and identification of apolipoprotein B,E(LDL) receptors in the brain / R.E. Pitas, J.K. Boyles, S.H. Lee, D. Hui, K.H. Weisgraber // Journal of Biological Chemistry. - 1987. - V.262. - P.14352-14360.

120. Pomeroy, S.L. Prediction of central nervous system embryonal tumour outcome based on gene expression / S.L. Pomeroy, P. Tamayo, M. Gaasenbeek, L.M. Sturla, M. Angelo, M.E. McLaughin, et al. // Nature. - 2002. - V.415. - P.436-442.

121. Porter, J.A. Hedgehog patterning activity: role of a lipophilic modification mediated by the carboxy-terminal autoprocessing domain / J.A. Porter, S.C. Ekker, W.J. Park, D.P. von Kessle, K.E. Young, C.H. Chen, et al. // Cell. - 1996. - V.86. -P.21-34. (a)

122. Porter, J.A. Cholesterol modification of hedgehog signaling proteins in animal development / J.A. Porter, K.E. Young, P.A. Beachy // Science. - 1996. -V.274. - P.255-259 (b).

123. Rao, G. Sonic hedgehog and insulin-like growth factor signaling synergize to induce medulloblastoma formation from nestin-expressing neural progenitors in mice / G. Rao, C.A. Pedone, L. Del Valle, K. Reiss, E.C. Holland, D.W. Fults, et al // Oncogene. - 2004. - V.23. - P.6156-6162.

124. Rao, G. c-Myc enhances sonic hedgehog-induced medulloblastoma formation from nestin-expressing neural progenitors in mice / G. Rao, C. A. Pedone, C.M. Coffin, E.C. Holland, D.W. Fults // Neoplasia. - 2003. - V.5. - P.198-204.

125. Rao, S. Lovastatin-mediated G1 arrest is through inhibition of the proteasome, independent of hydroxymethyl glutaryl-CoA reductase / S. Rao, D.C. Porter, X. Chen, T. Herliczek, M. Lowe, K. Keyomarsi // Proceedings of the National Academy of Sciences. - 1999. - V.96. - P.7797-7802.

126. Remke, M. Medulloblastoma molecular dissection: the way toward targeted therapy / M. Remke, V. Ramaswamy, M.D. Taylor // Current Opinion Oncology. -2013. - Vol.25. - P.674-681.

127. Riddle, R.D. Sonic hedgehog mediates the polarizing activity of the ZPA / R.D. Riddle, R.L. Johnson, E. Laufer, C. Tabin // Cell. - 1993. - V.75. - P.1401-1417.

128. Rietveld, A. Association of sterol- and glycosylphosphatidylinositol-linked proteins with Drosophila raft lipid microdomains / A. Rietveld, S. Neutz, K. Simons, S. Eaton // Journal of Biological Chemistry. - 1999. - V.274. - P.12049-12054.

129. Riobo, N.A. Cholesterol and is derivatives in Sonic Hedgehog signaling and cancer / N.A.Riobo // Current opinion in Pharmacology. - 2012. - V.12. - P.736-741.

130. Robinson, G.W. Vismodegib exerts targeted efficacy against recurrent Sonic Hedgehog-Subgroup Medulloblastoma: Results From Phase II Pediatric Brain Tumor Consortium Studies PBTC-025B and PBTC-032 / G.W. Robinson, B.A. Orr, G. Wu, S. Gururangan, T. Lin, I. Qaddoumi, et al. // Journal of Clinical Oncology. - 2015. - V.33. - P.2646-2654.

131. Rubin, L.L. Targeting the Hedgehog pathway in cancer / L.L. Rubin, F.J. de Sauvage // Nature Reviews Drug Discovery. - 2006. - V. 12. - P.1026-1033.

132. Ruiz i Altaba, A. Gli proteins encode context-dependent positive and negative functions: implications for development and disease / A. Ruiz i Altaba // Development. - 1999. - V.14. - P.3205-3216.

133. Rutkowski, S. Survival and prognostic factors of early childhood medulloblastoma: an international meta-analysis / S. Rutkovski, K. von Hoff, A. Emser, I. Zwiener, T. Pietsch, D. Figarella-Branger, et al. // Journal of Clinical Oncology. - 2010. - V.33. - P.4961-4968.

134. Sasai, K. Shh pathway activity is down-regulated in cultured medulloblastoma cells: implications for preclinical studies / K. Sasai, J.T. Romer, Y. Lee, D. Finkelstein, C. Fuller, P.J. McKinnon, et al. // Cancer Research. - 2006. -V.66. - P.4215-4222.

135. Sheridan, C. Genentech obtains proof of concept for hedgehog inhibition / C. Sheridan // Nature Biotechnology. - 2009. - V.27. - P.968-969.

136. Smoll, N.R. The incidence of medulloblastomas and primitive neurectodermal tumours in adults and children / N.R. Smoll, K.J. Drummond // Journal of clinical neuroscience. - 2012. - V.11. - P.1541-1544.

137. Soula, C. Distinct sites of origin of oligodendrocytes and somatic motoneurons in the chick spinal cord: oligodendrocytes arise from Nkx2.2-expressing progenitors by a Shh-dependent mechanism / C. Soula, C. Danesin, P. Kan, M. Grob, C. Poncet, P. Cochard // Development. - 2001. - V.128. - P.1369-1379.

138. Spiegler, B.J. Change in neurocognitive functioning after treatment with cranial radiation in childhood. Journal of clinical oncology / B.J. Spiegler, E. Bouffet, M.L. Greenberg, J.T. Rutka, D.J. Mabbott // Official journal of the American Society of Clinical Oncology. - 2004. - V.22. - P.706-713.

139. Steinert, P. M. A high molecular weight intermediate filament-associated protein in BHK-21 cells is nestin, a type VI intermediate filament protein. Limited co-assembly in vitro to form heteropolymers with type III vimentin and type IV alpha-internexin / P.M. Steinert, Y.-H. Chou, V. Prahlad, D.A. Parry, L.N. Marekov, K.C. Wu, et al. // Journal of Biological Chemistry. - 1999. - V.274. - P.9881-9890.

140. Su, V.F. Quantitative analysis of Hedgehog gradient formation using an inducible expression system / V.F. Su, K.A. Jones, M. Brodsky, I. The // BMC Developmental Biology. - 2007. - V.7:43. - P.1-15.

141. Sutter, R. Cerebellar stem cells act as medulloblastoma-initiating cells in a mouse model and a neural stem cell signature characterizes a subset of human medulloblastomas / R. Sutter, O. Shakhova, H. Bhagat, H. Behesti, C. Sutter, S. Penkar, et al. // Oncogene. - 2010. - V.29. - P.1845-1856.

142. Taipale, J. Patched acts catalytically to suppress the activity of Smoothened / J. Taipale, M.K. Cooper, T. Maiti, P.A. Beachy // Nature. - 2002. - V.418. -P.892-897.

143. Tanori, M. Developmental and oncogenic effects of insulin-like growth factor-I in Ptc 1 +/- mouse cerebellum / M. Tanori, M. Santone, M. Mancuso, E.

Pasquali, S. Leonardi, V. Di Majo, et al. // Molecular Cancer. - 2010. - V.9:53. - P. 112.

144. Taylor, M.D. Molecular subgroups of medulloblastoma: the current consensus / M.D. Taylor, P.A., A. Korshunov, M. Remke, Y.-J. Cho, S.C. Clifford, et al. // Acta Neuropathologica. - 2012. - V. 123. - P. 465-472.

145. Thomson, M.C. Genomics identifies medulloblastoma subgroups that are enriched for specific genetic alterations / M.C. Thompson, C. Fuller, T.L. Hogg, J. Dalton, D. Finkelstein, C.C. Lau, et al. // Journal of Clinical Oncology. - 2006. - V.24.

- P.1924-1931.

146. Tobert, J.A. Lovastatin and beyond: the history of the HMG-CoA reductase inhibitors / J.A. Tobert // Nature Reviews Drug Discovery. - 2003. - V.2. - P.517-526.

147. Tukachinsky, H. Dispatched and scube mediate the efficient secretion of the cholesterol-modified hedgehog ligand / H. Tukachinsky, R.P. Kuzmickas, C.Y. Jao, J. Liu, A. Salic // Cell Reports. - 2012. - V.2. - P.308-320.

148. Ukomadu, C. p21-dependent inhibition of colon cancer cell growth by mevastatin is independent of inhibition of G1 cyclin-dependent kinases / C. Ukomadu, A. Dutta // Journal of Biological Chemistry. - 2003. - V.278. - P.43586-43594.

149. Vance, J.E. Cholesterol homeostasis in neurons and glial cells / J.E. Vance, H. Hayashi, B. Karten // Seminars in Cell and Developmental Biology. - 2005. - V.2.

- P.193-212.

150. Varnat, F. Human colon cancer epithelial cells harbour active HEDGEHOG-GLI signalling that is essential for tumour growth, recurrence, metastasis and stem cell survival and expansion / F. Varnat, A. Duquet, M. Malerba, M. Zbinden, C. Mas, P. Gervaz, et al. // EMBO Molecular Medicine. - 2009. - V.1. -P.338-351.

151. Venkatakrishnan, A.J. Molecular signatures of G-protein-coupled receptors / A.J. Venkatakrishnan, X. Deupi, G. Lebon, C.G. Tate, G.F. Schertler, M.M. Babu // Nature. - 2013. - V.494. - P.185-194.

152. Vallianou, N.G. Statins and cancer / N.G.Vallianou, A. Kostantinou, M. Kougias, C. Kazazis // Anticancer Agents Med Chem. - 2014. - V.14. - P. 706-712.

153. Villa, G.R. An LXR-Cholesterol Axis Creates a Metabolic Co-Dependency for Brain Cancers / G.R. Villa, J.J. Hulce, C. Zanca, J. Bi, S. Ikegami, G.L. Cahill, Y. Gu , et al. // Cancer Cell. - 2016. - V.30. - P.683-693.

154. Von Hoff, D.D. Inhibition of the hedgehog pathway in advanced basal-cell carcinoma / D.D. Von Hoff, P.M. LoRusso, C.M. Rudin, J.C. Reddy, R.L. Yauch, R. Tibes, et al. // New England Journal of Medicine. - 2009. - V.361. - P.1164-1172.

155. Wang, C. Structure of the human smoothened receptor bound to an antitumour agent / C. Wang, H. Wu, V. Katritch, G.W. Han, X.P. Huang, W. Liu, et al. // Nature. - 2013. - V.497. - P.338-343.

156. Wang, C. Structural basis for Smoothened receptor modulation and chemoresistance to anticancer drugs / C. Wang, H. Wu, T. Evron, E. Vardy, G.W. Han, X.P. Huang, et al. // Nature Communications. - 2014. - V.5:4355. - P.1-11.

157. Wang, V.Y. Genetic regulation of cerebellar development / V.Y. Wang, H.Y. Zoghbi // Nature Reviews Neuroscience. - 2001. - V.7. - P.484-491.

158. Ward, E. Childhood and adolescent cancer statistics / E. Ward, C. DeSantis, A. Robbins, B. Kohler, A. Jemal // CA: Cancer Journal for Clinicians. - 2014. -Vol.64. - P.83-103.

159. Wechsler-Reya, R.J. Control of neuronal precursor proliferation in the cerebellum by Sonic Hedgehog / R.J. Wechsler-Reya, M.P. Scott // Neuron. - 1999. -V.1. - P.103-114.

160. Wiese, C. Nestin expression - a property of multi-lineage progenitor cells? / C. Wiese, A. Rolletschek, G. Kania, P. Blyszczuk, K.V. Tarasov, Y. Tarasova // Cell and Molecular Life Sciences. - 2004. - V.61. - P.2510-2522.

161. Wong, W.W. HMG-CoA reductase inhibitors and the malignant cell: the statin family of drugs as triggers of tumor-specific apoptosis / W.W. Wong, J. Dimitroulakos, M.D. Minden, L.Z. Penn // Leukemia. - 2002. - V.16. - P.508-519.

162. Wu, J. Blocking the Raf/MEK/ERK pathway sensitizes acute myelogenous leukemia cells to lovastatin-induced apoptosis / J. Wu, W.W. Wong, F. Khosravi, M.D. Minden, L.Z. Penn // Cancer Research. - 2004. - V.64. - P.6461-6468.

163. Yang, Z.J. Medulloblastoma can be initiated by deletion of patched in lineage-restricted progenitors or stem cells / Z.J. Yang, T. Ellis, S. Markant, T.-A. Read, J.D. Kessler, M. Bourboulas, et al. // Cancer Cell. - 2008. - V.14. - P.135-145.

164. Yauch, R.L. Smoothened mutation confers resistance to a Hedgehog pathway inhibitor in medulloblastoma / R.L. Yauch, G.J. Dijkgraaf, B. Alicke, T. Januario, C.P. Ahn, T. Holcomb, et al. // Science. - 2009. - V.326. - V.572-534.

165. Yee, G. Primary brain tumor statistical report 1998-2002 years data collected/ G. Yee, R. Rycroft, C. Phillips, B. Cromartie, S. Carson, C. Verrill, et al. // Central brain tumor registry of the United States. - 2006. - P. 1-60.

166. Yuelling, L. Isolation of distinct cell populations from the developing cerebellum by microdissection / L. Yuelling, F. Du, P. Li, R.E. Muradimova, Z.J. Yang // Journal of Visualized Experiments. - 2014. - V.91:52034. - P.1-5.

167. Zeng, X. A freely diffusible form of Sonic hedgehog mediates long-range signalling / X. Zeng, J.A. Goetz, L.M. Suber, W.J. Scott, C.M. Schreiner, D.J. Robbins // Nature. - 2001. - V.411. - P.716-720.

168. Zhao, Y. Hedgehog regulates smoothened activity by inducing a conformational switch / Y. Zhao, C. Tong, J. Jiang // Nature. - 2007. - V.450. - P.252-258.