Разработка технологии микробиологического синтеза пигмента тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.23, кандидат технических наук Смирнова, Светлана Николаевна

• Смирнова, Светлана Николаевна
• кандидат технических наук
• 2000

Оглавление диссертации кандидат технических наук Смирнова, Светлана Николаевна

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. МИКРОБНЫЕ И РАСТИТЕЛЬНЫЕ ПИГМЕНТЫ.

ТЕХНОЛОГИЧЕСКИЕ ПРИЕМЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ ПРИ ИХ БИОСИНТЕЗЕ И ВЫДЕЛЕНИИ.

1Л. Применение пищевых красителей.

1Л Л. Натуральные пищевые красители.

1Л .2. Синтетические органические красители.

1Л .3. Неорганические красители.

1.2. Пищевые красители и здоровье человека.

1.3. Микроорганизмы - продуценты пигментов.

1.4. Особенности ферментации микроорганизмов - продуцентов пигментов.

1.5. Методы выделения и разделения пигментов из микробных и растительных клеток.

1.6. Стабильность пищевых красителей.

1. 7. Выводы и постановка задачи.

Глава 2. ОБЪЕКТ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.1. Объект исследований.

2.1.1. Морфологические признаки культуры- продуцента.

2.1.2. Физиологические свойства культуры- продуцента.47 2.1.3.Биохимические свойства культуры- продуцента.

2.2. Хранение культуры.

2.3. Методы культивирования микроорганизмов.

2.4. Определение кинетических характеристик культуры-продуцента.

2.5. Оптимизация питательных сред.

2.6.0пределение оптимальных физико-химических параметров процесса культивирования.

2.7. Изучение выделения продукта.

2.8. Изучение строения пигмента.

2.9. Определение статистических характеристик процесса выделения.

Глава 3. ПРОЦЕСС ФЕРМЕНТАЦИИ.

3.1. Хранение культуры.

3.1.1. Субкультивирование.

3.1.2. Хранение культуры под слоем вазелинового масла.

3.1.3. Хранение лиофилизированной культуры.

3.2. Изучение параметров процесса культивирования бактерий.

3.2.1. Свет.

3.2.2. Температура.

3.2.3.Влияние величины рН на культивирование бактерий.

3.2.4. Потребность культуры в кислороде.

3.3 . Оптимизация питательных сред.

3.3.1. Влияние источников азота на рост бактерий и синтез пигмента.

3.3.1.1. Органические и минеральные источники азота.

3.3.1.2. Влияние дрожжевого автолизата на процесс культивирования.

3.3.1.3. Нахождение оптимального соотношения источников минерального азота и фосфора в среде.

3.3.1.4. Источники минерального азота.

3.3.1.5. Замена дрожжевого автолизата другим источником органического азота.

3.3.1.6. Соевая мука.

3.3.2. Источники углерода.

3.3.3. Витаминные потребности культуры.

3.3.4. Микроэлементы.

3.4. Анализ кинетики роста культуры и синтеза пигмента.

Глава 4. ИЗУЧЕНИЕ ОСНОВНЫХ ПАРАМЕТРОВ ПРОЦЕССА ВЫДЕЛЕНИЯ ПИГМЕНТА.

4.1. Обоснование выбора экстрагента.

4.2. Определение кинетических характеристик процесса экстрагирования.

Глава 5. ИЗУЧЕНИЕ ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИХ СВОЙСТВ

ПИГМЕНТА.

5.1. Определение растворимости пигмента в различных растворителях

5.2. Изучение строения пигмента.

5.3. Идентификация компонентов пигмента.

Глава 6. СТАБИЛЬНОСТЬ ПИГМЕНТА.

Глава 7.МЕРОПРИЯТИЯ ПО РЕАЛИЗАЦИИ ТЕХНОЛОГИИ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Разработка технологии микробиологического синтеза пигмента»

Вопрос снабжения населения безопасным и экологически чистым продовольствием приобретает в последнее время в связи с загрязнением окружающей среды все большую актуальность. При современной технологии производства пищевых продуктов очень часто они в процессе переработки изменяют или теряют свою первоначальную окраску и приобретают непривлекательный или неэстетичный вид. Такие изменения снижают органолептические свойства пищевых продуктов, а через психофизиологические механизмы ухудшается аппетит и пищеварение. Для придания пище естественной окраски используются пищевые красители. Наиболее широко в настоящее время используются синтетические красители. Их применение должно быть обусловлено крайней необходимостью, поскольку многие из них обладают вредными, иногда даже канцерогенными свойствами. Тем более, что синтетические красители не имеют пищевой ценности и являются посторонними примесями в продуктах питания.

Использование в качестве источника пищевых красителей растительного сырья не всегда оправдано, т.к. его можно использовать непосредственно для питания населения. Эти причины вынуждают вести поиск источников красителей в микробном мире.

Таким образом, поставленная в настоящей работе задача изучения пигмента, синтезируемого бактериями рода Р1ауоЬас1епат, представляет собой важную народнохозяйственную проблему.

Настоящая работа посвящена разработке технологии получения пищевого красителя и определению его основных физико-химических характеристик. Для достижения поставленной цели в работе решались следующие задачи:

Выбор продуцента красителя и всестороннее изучение его свойств. 7

Подбор условий хранения культуры.

Исследование условий роста культуры и биосинтеза пигмента при воздействии различных внешних факторов среды.

Оптимизация питательных сред, сравнение рекомендуемых сред по их влиянию на основной технологический показатель - выход пигмента.

Разработка основ технологии и изучение основных технологических параметров выделения пигмента из культуральной жидкости.

Изучение физических и химических характеристик пигмента.

Практическая ценность: Реализация полученных результатов оптимизации условий культивирования и питательной среды позволила значительно увеличить выход пигмента в 2.5-3 раза.

Разработан лабораторный регламент производства микробного пигмента. Предложен более экономичный способ извлечения пигмента из культуры-продуцента в связи со снижением энергозатрат, что объясняется исключением стадии выделения биомассы из культуральной жидкости.

Подготовлен проект ТУ на биотехнологический пигмент. Производство красителя бактериями рода Р1ауоЬас1:спшп обладает главным преимуществом по сравнению с растительными источниками сырья, - оно не связано с сезонностью роста, необходимостью длительного хранения сырья, другими проблемами сельского хозяйства.

Оценка пигмента Р1ауоЬас1епит aquatile показала возможность использования его в качестве красителя в пищевой промышленности, например, для окрашивания кондитерского крема. При концентрации пигмента в креме 300400 мг/кг изделие приобретает насыщенную естественную розовую окраску.

Изучена возможность применения красителя и в ликероводочной промышленности, а также для окрашивания парфюмерных изделий. 8

Сухая биомасса бактерий предложена в качестве компонента комбикормов для повышения декоративности аквариумных рыб. Возможность ее использования подтверждена заключением по биотестированию, представленным ООО «НПО Биотест».

Совместно с Проблемной научно-исследовательской лабораторией электрофизических методов обработки пищевых продуктов Московского государственного университета прикладной биотехнологии изучена возможность замены бактериальным красителем нитрита натрия, традиционно использующегося для окрашивания колбасных изделий. 9

Заключение диссертации по теме «Биотехнология», Смирнова, Светлана Николаевна

ОСНОВНЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ И ВЫВОДЫ

1.Изучены свойства бактерии Fl.aquatile - продуцента пигмента. Подобраны условия хранения и поддержания культуры и питательные среды, гарантирующие постоянство качественного и количественного состава пигмента.

2. Определены основные физико-химические параметры культивирования клеток - температура 24-26 °С, рН 6,8-7,0, уровень аэрация.

3. Изучено влияние различных источников минерального и органического азота и углерода на рост бактерий и синтез пигмента. В качестве источника углерода выбран глицерин, органического азота - дрожжевой автолизат.

4. Выявлено стимулирующее воздействие на биосинтетическую способность культуры пантотеновой кислоты и ионов марганца.

5. На основании изучения факторов питания разработана оптимальная среда, позволившая увеличить выход пигмента в 2.53 раза по сравнению с контролем. Получены основные кинетические характеристики культуры - продуцента. Определена взаимосвязь между процессами роста культуры и синтеза пигмента, роста культуры и потребления титрующего агента.

6. Изучены условия экстрагирования пигмента из культуральной жидкости и биомассы. Экспериментально определен коэффициент распределения пигмента для системы бактериальная биомасса : этилацетат.

7. Изучены основные физико-химические характеристики пигмента, методом ЯМР !Н получены данные о его структуре.

8. Получены данные о кинетике деструкции пигмента под воздействием света и температуры, рекомендованы условия для его долговременного хранения .

9. На основании проведенных исследований предложена технологическая схема производства пигмента и бактериальной

166 биомассы, отдельные стадии технологического процесса отработаны на опытной установке. Составлен проект ТУ на биотехнологический пигмент и разработан лабораторный регламент производства пигмента. Проведены испытания по использованию пигмента в качестве красителя для кондитерского крема, парфюмерной продукции, колбасных изделий.

Москва,2000г ш

Список литературы диссертационного исследования кандидат технических наук Смирнова, Светлана Николаевна, 2000 год

1. Булдаков A.C. Пищевые добавки.- Санкт-Петербург: Ut,1996.-240 с.

2. Пищевые добавки. Европейская классификация и описание.

3. В пяти томах./Под ред. Емец В.Н. Минск: ЗАО ВАЭМ, 1998.

4. Краткий определитель бактерий Берги. /Под ред.Дж. Хоулта.-М.:Мир, 1980.-496с.

5. Большой практикум по микробиологии. /Под ред. Г.Л.Селибера.- М.: Высшая школа,1969.-139с.

6. Феофилова Е.П. Пигменты микроорганизмов. М.: Наука, 1974 г

7. Красильникова H.A., Кириллова Н.Ф. и др. Токсономическое значение макимумов поголощения пигментов красно-оранжевых лучистых грибков.//Микробиология.- 1967,- т. 36.- вып.1.- 129135.

8. Т.С.Бобкова Каротиноиды нефотосинтезирующих микро организмов.//Успехи микробиологии.- 1970.-№6, 37-57.

9. Journal of bacteriology.- 1964,- 88.- 6,- 1688-1694

10. Бабьева И.П., Голубев В.И. Методы выделения и идентификации дрожжей. М.: Пищевая пром-сть,1979.-120с.

11. Ю.Феофилова Е.П., Клеточная стенка грибов. М.: Наука, 1983.-248 с.

12. П.Д.Мецлер. Биохимия. Химические реакции в живой клетке. Т. 3. М.:Мир,1980.-488с.

13. Э.Беккер, Физиология грибов и их практическоеиспользование. Издательство Московского Университета, 1963,- 272с.181

14. Гаврилов A.C., Киселева А.И., Матушкина С.А., Кордюкова Н.П., Феофилова Е.П. Получение ликопина микробиологическим способом в условиях завода. //Прикладная биохимия и микробиология.- 1996.-т. 32, № 5.-545-548

15. Феофилова Е.П., Терешина В.М., Меморская A.C. Способ получения ликопина./ Патент РФ №2115678 С09 В61/00.- БИ №20.-1998.

16. Иванин А.Ф.,Феофилова Е.П. и др.Способ получения ликопина. Патент РФ №2102416 С09 В61/00.- БИ №2.-1998.

17. М.И.Бехтерева, Н.В.Тарасова, Е.П.Феофилова и др.Изучение условий образования у?-каротина Bl.trispora// Микробиология.-1967.-т.36.-вып.1.-46-50.

18. Н.В.Тарасова, М.Н.Бехтерева. Биосинтез/?-каротина некоторыми грибами.//Успехи микробиологии. М.:Наука.-1966.-174-191.

19. Ева Ласло. /?-оинон в биосинтезе каротина.//Прикладная биохимия и микробиология.-1966.-т.- 2.- № 6,- 644-648.

20. Колот Ф.Б., Голышева М.Г. Биосинтез каротиноидов грибом В1. trispora на средах с различыми источнниками углеводов.// Прикладная биохимия и микробиология.- 1967.-т.- 3,- № 6.-738-740.

21. Королева И.Ф., Залашко М.В. и др. Биосинтез каротина дрожжами Sp. Pararoseus Т. при культивировании их на оксидате торфа.//Прикладная биохимия и микробиология.-1979.-т.- 15.-№2.-222-226.

22. Людникова Т.А., Беззубов A.A., Крицкий М.С. Исследование регуляторного взаимодействия путей биосинтеза и десатурации жирных кислот и каротиноидщов у мутантов N. crassa. //Прикладная биохимия и микробиология.-1992.-том 28.-№ 4.571-578.182

23. Полулях О.В., Подопригора О.И. и др. Биосинтез торулина и торулародина дрожжами Ph. rodozyma.// Прикладная биохимия и микробиология.-1991.-т.27.- № 4.-541-545.

24. Быховский В.Я., Райдина В.П. и др. Биосинтез порфиринов бактериями рода Arthrobacter.//Прикладная биохимия и микробиология,- 1992.-том 28.-№ 4.-579-590.

25. Буракаева А.Д., Торопова Е.Г. и др. Способ получения красителя.// Патент РФ№ 2016026, С09В 61/00.-1994, БИ №13

26. Гаврилов А.С., Иванин А.Ф и др. Способ получения кристаллического /?-каротина. //Патент РФ№ 211280, С12Р 23/00,- 1998, БИ №16.

27. Мишина И.М., Карнаухова Е.И. и др. Биосинтетическое получение дейтерированных каротиноидов.//Биотехнология.-1993.-№1, 13-17.

28. Феофилова Е.П., Вакулова J1.А.,Тарасова Н.В. Идентификация каротиноидов гриба Bl. trispora. // Прикладная биохимия и микробиология.-1967.-т.-3.-№ 4.-446-449.

29. Алиев Н.Д., Керимов Ю.Б. и др. Получение пищевого красителя.//Патент СССР № 988846, С09 В61/00, БИ № 22.-1983.

30. Yeast to color fish and egg yolks// Genet. Eng. And Biotechnol. Monit.-1990.-№28.-36.

31. Supercritical fluids to extract algae products.// Bioprogress. Technol.-1989.-ll, №9, 1

32. Леонов Б.И., Леонов Г.Б., Руднев Н.Н. Способ получения пищевого красителя.// Патент СССР №126570, С09В 61/00.1961, БИ№22.

33. Черепкин B.C., Болотов В.М.,и др. Способ получения пищевого флавоноидного красителя из растительного сырья.// Патент РФ №2134280, С09 В61/00, БИ№8.-1998.183

34. Бурвич Н.П., Халилов Д.А и др. Способ получения вытяжки из шафрана. //Патент СССР №207313, С09 В61/00, БИ №2.-1968.

35. Асланов С., Таджиев В.Д. и др. Способ получения экстракта каротиноидов.// Патент РФ №2039775, С09 В 61/00, БИ №20.-1995.

36. Каджая М.П. Способ получения красного пищевого красителя из ягод бузины и черной туты.//Патент СССР №277155, С09В61/00, БИ№ 24.-1970.

37. Козуб Г.И., Ковалевский К.А. и др. Способ получения пищевого красителя из выжимок плодов и ягод.//Патент СССР №707947, С09 В61/00, БИ № 1.-1980.

38. Грейвс Ф.А., Геллехер Д.Д. Способ экстракции каротиноидов из каротинсодержащих природных источников. //Патент РФ №2111991, С09 В 61/00, БИ №2.-1998.

39. Квасенков О.И. Способ получения красного пищевого красителя.// Патент РФ № 2061003 С09В 61/00. -1996, БИ №15.

40. Красильникова JI.B., Филиппов В.И. и др. Способ получения концентрата пищевого красителя из свеклы.//Патент РФ № 2061004 С09В 61/00.- 1996, БИ №15.

41. Тоётама корё К.К. Способ очистки желтого красителя, выделенного из плодов Gardenia jasminoides.// Патент Японии С09 В61/00РЖ ИСМ,- 41-9-93.

42. Накадзоно Сюдо, Сато Симэ. Способ получения красного пигмента для пищевых продуктов.// Патент Японии № 4-79387, С09 В 61/00, РЖ ИСМ,- 43-01-95.184

43. Хино кагаку когё К.К. Способ получения дезодорированного красителя из плодов паприки.// Патент Японии №5-49711, РЖ ИСМ.- 43-12-95

44. Каталог ETOL. Пищевые красители для пищевых продуктов, май 1999

45. Г.Бриттон Биохимия природных пигментов. М.гМир, 1986.

46. Асланов С., Вафоев Б.Д., Баранов B.C. Способ получения пищевых красителей из растительного сырья. //Патент РФ № 2001067, С09В 61/00.-1993, БИ № 37 38.

47. Асланов С., Вафоев Б.Д.,Мухамадалиев Б.Д. Способ получения пастообразного свекловичного красителя. //Патент РФ №2001068, С09В 61/00.-1993, БИ№ 37 38.

48. Бирюков В.В., Биттеева М.Б. и др. Штамм Flavobacterium aquatile ВКПН B-7429-продуцент малинового пищевого пигмента. Патент РФ№ 2125071, С09 В61/00.

49. Определитель бактерий Берджи. В 2-х т./ Под ред. Дж. Хоулта, Н Крига и др.- М.: Мир,1997.-432 е., ил.

50. ГОСТ28178-89. Дрожжи кормовые. Методы испытаний. М.:Гос.ком.СССР по станд.

51. Спирин A.C. Спектрофотометрическое определение количества нуклеиновых кислот // Биохимия.-1955.- т. 23.- вып 5.

52. Леонов Б.И., Руднев Н.М., Лурье И.С. Концентрирование энокрасителя. М.:ЦИНТИпищепром, 1963, №3,8

53. Бокучава М.А. Биохимия производства растительных красителей. Тбилиси, 1975, 97с.

54. Гнеденко Б.В. Курс теории вероятностей.-М.:Наука.-1988.-448с.185

55. А.С.Пригода, А.И.Коренева /Конструирование бессывороточных питательных сред для культивирования клеток млекопитающих //Биотехнология.-1991.-№4.-38 40.

56. Пригода A.C. и др.//Биотехнология.- 1990.- №2.- с 35-39.

57. Патент США 4427658, МКИ3 А61 К 37/00 (НКИ 424/177), 1984.

58. Смирнова А.Г. и др. //Журн. Микробиол. эпидемиолог, иммунобиолог.- 1985.-№12.-с 22-27.

59. Коновалова Е.Ю., Андреева И.В., Пригода A.C.: Тез. докл. конф. «Разработка и производство препаратов медицинской биотехнологии». 41.- Махачкала,1990.- с 16-17.

60. Шарп Д., Госни Н., Роули А. Практикум по органической химии. М.:Мир, 1993,240 с.

61. Методы общей бактериологии. В трех томах, т.1 /Под ред. Ф. Герхардта и др., М.:Мир, 1983.- 536 е., ил.

62. Shopfer W.,Jung А. 1935. Compt.rend.Soc.biot., 120,1093.

63. Ю.Е.Ерохин, А.И.нестеров и др.//Микробиология.-1964.-т.33,-вып.6.-951-955

64. Е.П.Феофилова. каротиноиды грибов: биологические функции и практическое использование//Прикладная биохимия и микробиология.-1994.-т.30.-вып. 2.-181-195.

65. О.В.Weeks R.J. Garner. Biosynthesis of carotenoids in Fl. dehydrogenans Arnaudi.//Arhives of Biochemisrtry and Biophysics.-1967,- 121, 35-49.

66. Chu F.S., Lilly V.G.II Mycologia,1960.-52.-80.

67. Nandy S.,Sen C.N. //Can.J.Microbiol.,1963.-9.-603

68. Иерусалимский H.Д. Азотное и витаминное питание микробов. М.-Л., 1949.-167 с.

69. А.С.Пригода, А.И.Коренева, Е.Ю.Коновалова, И.В.Андреева Конструирование бессывороточных питательных сред для186культивирования клеток млекопитающих.//Биотехнология.- 1990.-№2.-35.

70. Мосичев М.С., Складнев A.A., Котов В.Б. Общая технология микробиологических производств. М.: Легкая промышленность1982,- 264с.

71. Т. Сенкевич, К-Л Ридель. Молочная сыворотка: переработка и использование в агропромышленном комплексе. Под ред И.И.Митасева. М.: Агропромиздат, 1989. 270 е.: ил., стр 38

72. Горбатова К.К. Биохимия молока и молочных продуктов.-М.:Колос.-1997.-288с.,ил.

73. ГОСТ 3898-56 Мука соевая дезодорированная. М.:Изд. станд.

74. Ciegler A.,Arnold М., Anderson R.,1959b. Appl.Microbiol.,7,98

75. Г.Готтшалк Метаболизм бактерий/ пер. с англ. М.: Мир , 1982.■ 310с.

76. С. Дж.Перт Основы культивирования микроорганизмов и клеток. М.: Мир, 1978.-33 1с., ил.

77. Бирюков В.В., Кантере В.М. Оптимизация периодических процессов микробиологического синтеза. М.:Наука,1985.-290с.

78. Л.А.Вакулова, В.П.Кузнецова, Ф.Б. Колот, И.Б. Бабьева Г.И.Самохвалов. Быстрый метод количественого определения ß-каротина у микрорганизмов.// Микробиология, 1964.-т.33.- вып.6.

79. А.С.Днепровский, ТИ.Темникова. Теоретические основы органической химии. Л.: Химия, 1991, 560 е.,ил.

80. Кавецкий Г.Д., Королев A.B. Процессы и аппараты пищевых производств. М.: Агропроииздат, 1991.- 432 с.

81. Геккелер К.Е., Экштайн X. Аналитические и препаративные лабораторные методы: Справ, изд.: Перев. с нем.- М.: Химия,1994.-416 е.,ил.187

82. К.И.Сакодынский, В.В.Бражников, С.А.Волков, В.Ю. Зельвенский, Э.С.Ганкина, В.Д.Шатц. Аналитическая хроматография. -М.: Химия, 1993.-464с. :ил

83. Чмутов К.В., Хроматография. М.¡Издательство академии наук, 1962.-100с.

84. Ахрем А.А., Кузнецова А.И. Тонкослойная хроматография. М.: Наука, 1965.-175 с.

85. Айвазов Б.В. Введение в хроматографию: Учебн. Пособие для хим.спец.вузов: М.:Высш.шк., 1983.- 240 е.,ил

86. Лурье А.А. Сорбенты и хроматографические ностители. М.:Химия,1972 г., 320 с.

87. Ф.М.Шемякин, Э.С.Мицеловский, Д.В.Романов/ Хроматографический анализ, М.:ГОСХИМИЗДАТ, 1955.-208с.

88. Т.С.Бобкова. Каротиноидные пигменты микобактерий и дрожжей// Микробиология.-1965.-т.34.- вып. 2.- стр.273-277.

89. Z. Simpson, Nakayama Т.О.М., С.О. Chichester Biosynthesis of yeast carotinoid.// J of bacteriology, 1964, 88, 6, 1688-1694

90. Справочник биохимика. Р.Досон, Д.Эллиот, У. Эллиот, К. Джонс. М.: Мир,1991.-545 е., ил.

91. Справочник по биохимии Ф.Л. Калинин, В.П. Лобов, В.А. Жидков., Киев: Наукова думка, 1971, 850с.93. С.A. Bailey, В.Н.

92. Chen/ Simultaneous separation and identification of carotenoids and chlorophylls in turf bermudagrass by high-performance liquid chromatography.// J. of Chromatography.-1988.- vol.455.-396-400.

93. Jensen S. L., Jensen A. Progress in the chemistry of fats and lipids, 1965.-8.-p.2.-129. Pergamon Press.

94. T.W.Goodwin. Chemistry and Biochemistry of Plant Pigments.Acad. Press, New-York -London.188

95. S. Liaaen Jensen. Bacterial carotenoid.// Acta Chemica Scandinavica.-1972.-V 21.- №7.

96. G.Britton, W.J.S. Lockley, N.J. Patel, T.W. Goodwin. The use of deuterium oxide as a label in studies of biosynthetic pathways.// FEBS Letters,.-1977,- V79.- №2,- 281-283.

97. J.C.B. McDermott, G.Britton, T.W. Goodwin.Shot communications.// Biochem. J.-1973.-134.-11 15-1117.

98. A.J.Castro, A.H.Corwin, F.J. Waxham, A.L.Beilby. Products from Serratia marcescens. //J. oforganic. chemistry,V 24.-1959.-455-459.

99. R.L.Harned The production of prodigiosin by sybmerged growth of Serratia marcescens.//Applied Microbiol.-1954.-V2.-№4.-365-368.

100. A.H. Jackson, G.W. Kenner. Pyrroles and related compounds X. // Tetrahedron.-1967.-V 23,.- 603-632.

101. Williams R.P./ Ph.D.Thesis, Iowa State Univ., Ames.,1965. ЮЗ.Шлегель Т. Общая микробиология: Пер. с нем.-М.:Мир, 1987.-567е., ил.