Разработка суспензионных препаратов для экспрессной иммунодиагностики сифилиса тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.23, кандидат медицинских наук Джанаев, Вячеслав Феликсович

• Джанаев, Вячеслав Феликсович
• кандидат медицинских наук
• 2004

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Джанаев, Вячеслав Феликсович

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Глава 1. СОВРЕМЕННОЕ СОСТОЯНИЕ ЭПИДЕМИОЛОГИИ И ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ СИФИЛИСА

1.1. Эпидемиология сифилиса 10 1.2 Методы лабораторной диагностики сифилиса. 17 1.3. Использование коллоидного серебра в конструи- 28 ровании диагностических тест-систем.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1. Штаммы микроорганизмов, взятые в работу

2.2. Питательные среды.

2.3. Основные химические реактивы и сырье.

2.4. Аппаратное оснащение исследований.

2.5. Материалы, полученные из клиник.

2.6. МИБП и биологичесие препараты.

2.7. Лабораторные животные, использованные в опы- 37 тах.

2.8. Физико-химические и иммунологические методы

2.9. Сублимация МИБП.

2.10. Статистическая обработка материала.

Глава 3. СИФИЛИС В РЕСПУБЛИКЕ СЕВЕРНАЯ

ОСЕТИЯ-АЛАНИЯ.

Глава 4. РАЗРАБОТКА ТРЕПОНЕМНОГО АНТИГЕННОГО СУСПЕНЗИОННОГО ДИАГНОСТИ-КУМА ДЛЯ РЕАКЦИИ АГГЛЮТИНАЦИИ ЛАТЕКСА.

Глава 5. РАЗРАБОТКА ТРЕПОНЕМНОГО АНТИГЕННОГО ДИАГНОСТИКУМА С КОЛЛОИДНЫМ СЕРЕБРОМ ДЛЯ ДОТ-ИММУНО-АНАЛИЗА

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Разработка суспензионных препаратов для экспрессной иммунодиагностики сифилиса»

Сифилис - болезнь оборотень, хамелеон, грозная с хроническим волнообразным течением, способная проявить себя множеством кожных симптомов, поражающая практически все органы и ткани, в глубоком смысле - нейроинфекция, протекающая без особых ощущений для больного, который, находя массу отговорок и объяснений проявлениям её, не обращается к специалисту. Сифилис способен сбить с толку многих врачей не венерологов и требует к себе отношения по принципу - всякая сыпь на коже считается сифилисом,пока не доказано обратное. Необходимо отметить, что заболевания, передающиеся половым путем (3111Ш), и в частности сифилис, способствуют распространению такого смертельно опасного заболевания как ВИЧ-инфекция.

По статистике Минздрава РФ, в России в 2002 г. зарегистрировано 1,047 млн. случаев 3111111, в том числе 207 тыс. 157 случаев заболевания сифилисом. Заболеваемость сифилисом в России остается крайне высокой и составляет более 143 случаев на 100 тыс. населения. По сравнению с 1989 г. число заболевших сифилисом выросло более чем в 33 раза. За прошедший год зарегистрировано свыше 52 тыс. больных 3111111 в возрасте до 17 лет. У девочек до 14 лет показатель заболеваемости сифилисом по сравнению с 1990 г. возрос в 85 раз. Проведенный в 37 субъектах России анализ путей заражения сифилисом показал, что в 60 % случаев дети заразились половым путем. В таких условиях большое значение приобретает своевременная диагностика данного заболевания, основанная на высокочувствительных и высокоспецифичных реакциях. Особая роль при этом должна отводиться методам массового профилактического обследования населения (скрининга) с целью раннего выявления инфекции, что также диктует необходимость повышения требований к чувствительности и специфичности экспрессных тестов на сифилис (Овчинников Н.М., Беднова, В.Н., Делекторский В.В., 1987; Дмитриев Г.А., 1996; Ткачев В.К., 1997; Сухова Л.П., Машеро В.В., Войнова H.H., 1999, Онищенко Г.Г.,2002; Jo-honson P.C., Farnie M.A., 1994; Larsen S.A., Steiner B.M., Rudolf A.N., 1995; Young H., 1998).

В лабораторной практике используют комплекс серологических реакций (КСР), включающий отборочную реакцию микропреципитации (MP) с кардиолипиновым антигеном и стандартные серологические реакции -реакцию связывания комплемента (РСК) с кардиолипиновым и трепонем-ным антигенами. Кроме того, ставят специфические реакции - иммуноф-луоресценции (РИФ) и её модификации (РИФ- абс, РИФ - 200), реакцию иммобилизации бледных трепонем (РИБТ), иммуноферментный анализ (ИФА). При этом не все вышеуказанные тесты равнозначны по чувствительности и специфичности из-за разных причин: использование неспецифического кардиолипинового антигена, наличия в исследуемом материале антител к общим антигенам спирохет, перекрестные реакции при других заболеваниях и определенных физиологических состояниях организма.

Поэтому в зоне внимания исследователей постоянно находятся проблемы совершенствования существующих и разработки новых методов диагностики сифилиса с целью расширения арсенала диагностикумов и повышения их качества.

Цель и основные задачи исследования

Цель диссертационной работы - разработка биотехнологии получения новых эффективных специфичных трепонемных иммунпрепаратов и оценка их пригодности для использования в диагностике сифилиса.

Для достижения указанной цели предполагалось решить следующие задачи:

- провести анализ заболеваемости и лабораторной диагностики сифилиса в Республике Северная Осетия-Алания; получить высокоспецифичный полноценный комплексный трепонемный антиген для использования его при конструировании медицинских иммунобиологических препаратов (МИБП);

- разработать биотехнологию получения трепонемного антигенного диагностикума на основе полимерной матрицы - латекса для экспресс-диагностики сифилиса в реакции агглютинации (РАЛ);

- разработать трепонемный суспензионный антигенный диагности-кум с коллоидным серебром для дот-иммуноанализа (ДИА);

- провести лабораторные и клинические испытания разработанных трепонемных иммунодиагностикумов.

Научная новизна работы

Впервые представлены данные об особенностях эпидемиологии сифилиса в Республике Северная Осетия-Алания за последние пять лет. Методом эпидемиологического районирования определены тенденции распространения этой инфекции и причины высокой заболеваемости в отдельных районах Республики, которые выше многих территориальных показателей по Российской Федерации.

Разработана высокоэффективная схема получения комплексного трепонемного антигена, который использован в качестве лиганда при конструировании иммунодиагностикумов.

Получен трепонемный суспензионный антигенный латексный диаг-ностикум, характеризующийся высокой чувствительностью и специфичностью.

Впервые осуществлена разработка биотехнологии получения трепонемного антигенного препарата на основе коллоидного серебра для ДИА.

Практическая значимость диссертации

Разработанные суспензионные антигенные трепонемные поли-акролеиновый диагностику для РА и иммунодиагностикум с частицами золя коллоидного серебра для ДИА, как показали лабораторные и клинические испытания, обеспечивают высокую специфичность, чувствительность, и демонстративность при проведении иммуноанализов. Сочетание этих двух тестов позволяет серологически верифицировать сифилис практически у 100 % пациентов и рекомендовать их применение в составе нового комплекса реакций на сифилис.

Результаты реакций учитывают визуально, вследствие чего отпадает нужда в дорогостоящем оборудовании. Простота и экономичность реакций, стабильность их компонентов позволяют осуществлять постановку тестов в лабораториях различного уровня. Это обусловливает их преимущества и особую ценность при проведении массовых скрининговых исследованиях на сифилис.

Материалы научных разработок легли в основу следующих методических документов:

1. Методические рекомендации «Получение и применение суспензионных трепонемных антигенных латексного диагностикума и имму-нодиагностикума с коллоидным серебром для экспресс-анализа на сифилис», одобрены Ученым советом СтавНИПЧИ (протокол № 8 от 30.09.2004) и утверждены директором СтавНИПЧИ.

2. Информационно-методическое письмо «Характеристика заболеваемости сифилисом с 1999 г. по 2003 г. в Республике Северная Осетия-Алания с учетом региональных особенностей. Совершенствование методов и мер по её снижению», утверждено ЦКМС СОГМА 10.11.2004 г.

Апробация работы

Основные результаты диссертационной работы были доложены на 8-й научной сессии сотрудников СОГМА «Актуальные проблемы теоретической и клинической медицины» (Владикавказ, 2001 г.), межлабораторной научной конференции СтавНИПЧИ (Ставрополь, 2004 г.). Публикации

Основное содержание диссертации отражено в 7 опубликованных работах.

Структура и объем работы

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, 4-х глав собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций, списка использованной литературы. Она изложена на 125 страницах, содержит 13 таблиц и 20 рисунков. Список литературы включает 165 отечественных и 82 зарубежных источника.

Заключение диссертации по теме «Биотехнология», Джанаев, Вячеслав Феликсович

ВЫВОДЫ

1. Впервые представлен многолетний анализ заболеваемости сифилисом в Республике Северная Осетия-Алания, выявивший её высокий уровень и тенденцию к распространению в отдельных районах Республики, что диктует необходимость проведения массовых, скрининговых профилактических обследований населения с привлечением надежных экспрессных методов лабораторной диагностики.

2. Подобран эффективный комплекс последовательных манипуляций, позволивший получить высокоспецифичный комплексный трепонем-ный полноценный антиген, явившийся высококачественным сырьем при конструировании препаратов для иммунодиагностики сифилиса.

3. Получен трепонемный суспензионный диагностикум на основе полиакролеиновой матрицы и комплексного антигена, обеспечивающий высокую чувствительность, специфичность, демонстративность, воспроизводимость реакции агглютинации латекса.

4. Впервые отработаны методические подходы для конструирования диагностикума с применением коллоидного серебра в качестве маркера трепонемного антигена и детекции в ДИА специфических антител. ДИА пригоден для исследования на сифилис клинического материала, характеризуется высокой чувствительностью, специфичностью, экспрессностью, простотой выполнения, демонстративностью.

5. Лабораторные и клинические испытания разработанных суспензионных антигенных диагностикумов для РАЛ и дот- иммуноанализа показали по ряду параметров свое превосходство над традиционными серологическими реакциями и перспективность их использования в качестве скрини-рующих тестов на сифилис.

6. Сочетание РАЛ и дот-иммуноанализа позволяет серологически верифицировать сифилис практически у 100 % пациентов и рекомендовать их применение в составе нового комплекса реакций на сифилис.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В последнее время насчитывается более 20 инфекций, передаваемых половым путем, среди которых сифилис занимает значительное место. Заболеваемость сифилисом в России остается крайне высокой и составляет более 143 случаев на 100 тыс. населения. По сравнению с 1989 г. число заболевших сифилисом выросло более чем в 33 раза, причем её подъем имеет многие признаки эпидемии: преобладают в структуре свежие формы; происходит рост числа детей с врожденным и приобретенным бытовым сифилисом; появились территории с показателями заболеваемости, значительно превышающими статистические показатели по стране (Аковбян В.А., Про-хоренков В.И., Машкиляйсон A.JI. и др. 1995; Адаскевич В.П., 1999; Родионов А.Н., 2000).

Республика Северная Осетия-Алания является регионом, где наряду с общероссийскими проблемами (увеличение числа социально неадаптированных лиц, более раннее начало половой жизни, рост проституции и др.), имеются и свои особенности, главными из которых являются высокая плотность населения, приближенность к "горячим точкам", наличие большого количества беженцев и вынужденных переселенцев, выраженность миграционных процессов.

Анализируя заболеваемость сифилисом в PCO - А по районам за пять лет, можно отметить, что она носит циклический характер, во всех районах и в г. Владикавказе наблюдается её нестабильность, со «взлётами» и «падениями». Так, подъем заболеваемости в 2003 г. (43,0 на 100 тыс.) произошёл за счёт увеличения случаев сифилиса в Пригородном (в 2 раза), Ардонском (в 2,5 раза), Кировском (более чем в 3 раза) и Алагирском (почти в 5 раз) районах. В других районах Республики и в г. Владикавказе наблюдалось некоторое снижение заболеваемости.

С 1999 г. по 2003 г. стало заметно изменение удельного веса различных форм сифилиса в сторону увеличения раннего (с 43,5% до 56,0%), появления позднего скрытого сифилиса (5,8%) и врожденного сифилиса (1,7%). С 2001 г. отмечены случаи нейросифилиса. В структуре заболеваемости превалируют скрытые формы сифилиса, которые характеризуются полным отсутствием симптоматики и выявляются только по положительным серологическим реакциям при обследовании крови в поликлиниках, стационарах, при устройстве на работу и различных профилактических осмотрах.

Основную массу больных сифилисом составляют лица обоих полов в возрасте от 20 до 39 лет. Однако в последнее время отмечается тенденция к увеличению удельного веса лиц в возрасте свыше 40 лет. По семейному положению основную массу больных составляют лица разведённые (5%), состоящие в браке повторно (13,0%) и холостые (60%), т.е. семья является одним из сдерживающих факторов в предупреждении случайных половых связей. Анализ социального состава больных сифилисом показал, что основная масса больных (78,9%) представлена нигде не работающими лицами, что в значительной мере затрудняет проведение противоэпидемических мероприятий. Среди причин, влияющих на заболеваемость, необходимо отметить возросшую сексуальную активность подростков, увеличение числа вне- и добрачных половых связей вследствие возросшей сексуальной раскрепощённости населения, коммерциализацию интимных отношений, широкое распространение порнографии, наркомании и т.д.

Таким образом, анализ заболеваемости сифилисом в Республике Северная Осетия-Алания свидетельствует о высокой тенденции распространения этого заболевания. Это обусловливает необходимость разработки и интенсивного проведения противоэпидемических мероприятий как в неблагополучных районах, так и в целом по Республике. При этом лабораторные методы играют существенную роль в системе этих мероприятий.

В централизованной лаборатории Северо-Осетинского кожновенерологического диспансера во исполнение приказа МЗ № 87 с 2001 г. для исследования на сифилис широко применяются: тест быстрых плазменных реагинов (RPR), метод иммуноферментного анализа (ИФА), как скрининговый, трепо-немные подтверждающие тесты - реакция пассивной гемагглютинации (РПГА) и реакция иммунофлюоресценции (РИФ), позволившие выявить большее количество поздних форм сифилиса: в 2000 г. поздний скрытый сифилис был в 2-х, в 2002 г. - уже в 4-х случаях; в 2000 г. нейросифилис не обнаруживался, а в 2002 г. - уже диагностировали 7 случаев этой тяжёлой формы болезни. Необходимо отметить, что в 12,4% случаях при установлении диагноза раннего скрытого сифилиса и 50,0% - при нейросифилисе при отрицательной реакции Вассермана ИФА была резко положительной.

Дальнейшее расширение арсенала лабораторных методов, и особенно за счет экспрессных, с помощью которых возможно исследовать большое количество людей за короткий промежуток времени и получить достоверную информацию о сложившейся ситуации по этой инфекции , дает возможность принимать оперативные меры в борьбе с заболеваемостью сифилисом.

Нами разработана биотехнология приготовления трепонемного суспензионного антигенного диагностикума для реакции агглютинации и дана оценка его диагностической ценности. Изготовление препарата осуществляли в соответствии с методикой, разработанной И.А.Базиковым (2000), в нашей модификации, используя в качестве полимерной матрицы акролар К, полученный из института биоорганической химии им. Шемякина. Гомогенные частицы латекса правильной сферической формы, окрашенные в розовый цвет имели средний диаметр (1,2±0,1) мкм.

Лигандом служил комплексный антитиген, полученный по разработанной нами биотехнологической схеме, состоящий из коммерческого ульт-раозвученного трепонемного антигена (УЗТА) для РСК производства ФГУП «Аллерген» (г.Ставрополь), подверженного специальной очистке, и цетавло-нового супернатанта, представляющего собой поверхностные антигены трепонем, изолированные нами по методике M.C.Blake, E.C.Goschliech понем, изолированные нами по методике M.C.Blake, E.C.Goschliech (1982), в соотношении 2:1. Коммерческий антиген и поверхностные антигены извлекали из культуральных бледных трепонем штаммов V, VI, VII, VIII, IX и Рейтера.

УЗТА предварительно подвергали очистке , которая заключалась в иммуносорбции неспецифических антигенов, переосаждении сульфатом аммония, гельфильтрации, стабилизации методом сублимации.

Для извлечения поверхностных антигенов использовали цетавлон, позволяющий изолировать полимерный комплекс, включающий липид, полисахарид в сочетании с протеинами и нуклеиновыми кислотами. Комплексный антиген явился в дальнейшем высококачественным сырьем при конструировании препаратов для иммунодиагностики сифилиса.'

Нами получен трепонемный суспензионный диагностикум на основе полиакролеиновой матрицы, При этом отработаны оптимальные условия сенсибилизации латексных микросфер комплексным трепонемным антигеном: 0,20 мг лиганда соединяли с 2 мл с 2 % полимерного носителя. К смеси добавляли 2 мл 0,9% раствора натрия хлорида, рН 7,2. Сенсибилизацию проводили в течение 3 ч при температуре 22 °С на магнитной мешалке. Далее суспензию осаждали центрифугированием при 4000 g в течение 3-4 мин и дважды отмывали от несвязавшегося антигена. Для стабилизации трепо-немного полимерного латексного диагностикума отработан оптимальный режим его лиофильного высушивания.

По вышеописанной технологии изготовлено 10 серий диагностикума. Оценка их диагностической ценности проводилась на базе централизованной лаборатории Северо-Осетинского РКВД . Для исследования были взяты сыворотки крови 416 стационарных больных до лечения и после лечения с различными диагнозами: сифилис первичный серопозитивный; сифилис вторичный свежий, сифилис вторичный рецидивный, сифилис скрытый ранний, сифилис скрытый поздний, нейросифилис ранний в сравнении с

КСР (микрореакция преципитации, реакции Вассермана , ИФА, РИГА, РИФ). Контрольной группой служили сыворотки крови 167 лиц, свободных от сифилитической инфекции.

При изучении чувствительности и специфичности диагностикума использовали два варианта постановки РАЛ: на стекле, как скрининг на сифилис (качественный тест), и титрование сывороток в микропланшетах (количественный тест). Для этого использовали 96-луночные микропланшеты для иммунологических реакций из полистирола отечественного и импортного производства.

На основании проведенных испытаний установлено, что изготовленный по разработанной нами технологии трепонемный суспензионный антигенный диагностикум позволяет проводить реакцию агглютинации латекса, по чувствительности, сопоставимую с такими трепонемными тестами, как РПГА, ИФА, РИФ, в то же время РАЛ превосходит реакции Вассермана и МР по этому показателю. При сравнительном изучении специфичности РАЛ достоверно установлена его высокая специфичность.

В последние годы в иммунодиагностике широко развиваются направления, связанные с иммунохроматографическими, иммунофильтрационными и так называемыми «дот-блот» методиками, в которых в качестве твердой фазы используют пористые мембраны, а в качестве маркера - ферменты, красители или золи металлов. В поисках доступных и дешевых каталитически активных металлов, способных выявляться «физическим проявлением», мы обратили внимание на коллоидное серебро. Золи серебра достаточно стандартны и легко воспроизводимы, а сконструированные с их участием тест-системы по чувствительности практически не уступают другим твердофазным методам.

Нами отработаны методические подходы при конструировании диагностикума с применением коллоидного серебра в качестве маркера трепо-немного антигена для детекции в ДИА специфических антител.

Золь серебра получали восстановлением азотнокислого серебра бор-гидридом натрия. Для этого к 5 мл 0,05% водного раствора боргидрида натрия одномоментно приливали равный объем 0,02% водного раствора азотнокислого серебра. Перемешивали на магнитной мешалке при комнатной температуре в течение 15 мин. При конструировании диагностикума использовали комплексный трепонемный антиген.

Наиболее эффективно стабилизировал золь серебра антиген в количестве 375 мкг на 10 мл золя. Исходя из этого, для приготовления диагностикума к 1 мл антигена (375 мкг белка) при постоянном интенсивном перемешивании добавляли 5 мл золя серебра. После 10-минутного перемешивания на магнитной мешалке при комнатной температуре в раствор добавляли следующую порцию золя - 3 мл, а спустя 10 мин - еще 2 мл золя и 2 мл 10 % водного раствора БСА (для блокирования свободных сайтов связывания на поверхности частиц маркера). Через 30 мин перемешивания диагностикум стабилизировали внесением равного объема 0,02 М фосфатного буфера pH 7,2, содержащего 1 % БСА, 10% НЛС и 0,04% азида натрия. Приготовляемый препарат дополнительно интенсивно встряхивали в течение 30 минут, разливали в ампулы ШПВ-6 по 2 мл. Срок хранения диагностикума - 6 месяцев.

Постановку реакции осуществляли традиционным для дот-иммуно-анализа способом. Сыворотки крови разводили забуференным физиологическим раствором (ЗФР) pH 7,2 с 0,5% БСА в 200 раз и титровали путем двухкратного разведения до необходимой концентрации в планшете для иммунологических реакций. Каждое разведение сывороток наносили на твердофазный носитель в объеме 1 мкл в виде линейно расположенных точек. В качестве такового мы апробировали НЦМ для электрофореза «Bio-Rad», «Mil-lipor», «Serva» и мембранные фильтры«Агшсоп», «Millipor», «Sinpor»H «Вла-дипор» с различным размером пор, исходя из того, что прочность связывания ими антител и их сорбционная емкость может быть неоднозначна.

Проведенные испытания показали, что наименее пригодными оказались мембранные фильтры «Аппсоп», «МлШрог» и «Владипор».Хорошими характеристиками обладали НЦМ и мембранные фильтры «Бтрог» (достаточная сорбционная емкость и прочность связывания наносимого материала).

После нанесения исследуемого материала (1 мкл) на мембрану мы испытали несколько режимов иммобилизации: 20,30,40 мин при (20±1) °С, 10,15,20 мин при 37 °С. Все режимы сорбции были приемлемы, для дальнейшей работы нами избран режим: 10 мин при 37 иС.

Мембрану после фиксации материала помещали в чашку Петри и однократно промывали ЗФР. Затем подложку заливали ЗФР, содержащим 1 % БСА, блокируя таким образом на ней свободные участки связывания в течение 10-15 мин при комнатной температуре. После двукратного промывания ЗФР мембрану помещали на 5-10 мин в раствор диагностикума, затем тщательно (трехкратно по 2-3 мин) промывали ЗФР и однократно - дистиллированной водой. Визуализацию результатов реакции проводили погружением мембраны в раствор проявителя на 5-8 мин.

Проявитель выбирали по проявляющему веществу: амидол, гидрохинон, глицин, метол, фенидон в разных сочетаниях. Всего нами было апробировано 14 составов проявителей для каталитического усиления сигнала серебряного золя. Результаты испытаний показали, что проявители, содержащие метол, развивали высокую оптическую плотность: исследуемые сыворотки крови, содержащие специфические антитела, проявлялись в виде серо-коричневых пятен различной интенсивности в зависимости от количественного содержания антител. В то же время остальные проявители давали светлые, малоконтрастные отложения. В связи с этим в экспериментах мы использовали проявитель, содержащий метол.

Используя сконструированный иммунодиагностикум, исследовано в ДИА с коллоидным серебром 215 проб сывороток крови больных различными формами сифилиса, 55 - обследуемых на сифилис. Контрольной группой служили сыворотки крови 70 лиц, свободных от сифилитической инфекции. Эти же сыворотки параллельно оценивались в МР. Результаты испытаний несомненно свидетельствуют о высокой чувствительности разработанного диагностикума. Так, у 157 (73%) больных обнаруживались антитрепонемные Ат в титрах 1:400, у 58 (27%) человек - 1:800, в то же время как из 215 больных, обследованных в МР, лишь у 165 (77,3 %) больных отмечен положительный результат. Из 55 больных обследуемых на сифилис у 40 (72%) титр сывороток в ДИА был равен 1:400, у 5 (9%) - 1:800, у 10 (18,2%) - отрицательный результат. Реакция микропреципитации с кардиолипиновым антигеном у 45,7% обследуемых (25 человек) была отрицательной. Специфичность иммунодиагностикума на основе коллоидного серебра подтверждена при исследовании 70 сывороток крови лиц, свободных от сифилитической инфекции.

Таким образом, нами сконструирован высокочувствительный и высокоспецифичный иммунодиагностикум для ДИА с использованием комплексного трепонемного антигена, меченного частицами коллоидного серебра. Этот тест, в сравнении с традиционными серологическими реакциями на сифилис, более чувствителен, экспрессен, экономичен и свидетельствует о перспективности использования ДИА со специфическим антигеном трепонем, меченным коллоидным серебром, в качестве экспрессного ультрамикроме-тода лабораторной диагностики сифилиса.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Джанаев, Вячеслав Феликсович, 2004 год

1. Адаскевич В.П. Инфекции, передаваемые половым путем. Руководство для врачей. - М.: Мед. книга. - из-во НГМА: Н.Новгород, 1999. -С. 17-83.

2. Аковбян В.А., Прохоренков В.И., Машкилейсон А.Л. и др. Заболеваемость сифилисом в России: опыт истории, эпидемиогический анализ, прогнозы // Бюллетень ассоциации САНАМ «Инфекции, передаваемые половым путем». 1995. - № 4. - С.22-25.

3. Аковбян В. А., Резайкина А. В., Тихонова Л. И. Характеристика эпидемиологических закономерностей, определяющих распространение заболеваний, передаваемых половым путём в России // Вестн. дермато-венерол. 1998. -№1.- С. 4-6.

4. Акопова З.П. Роль реакции агглютинации в серодиагностике сифилиса // Вестн. дермато-венерол. 2000. - № 6. - С. 12-13.

5. Александров М. В., Пиратинская В. А., Соколовский В. В. Циклический характер заболеваемости сифилисом и неспецифическая резистентность микроорганизма// Вестн. дерматол. 1997. - № 3. - С. 48-51.

6. Аравийская Е. Р. Социально-психологические особенности и их взаимосвязи с рискованным сексуальным поведением больных с приобретённым сифилисом // Рос. журн. кожн. и венер. болезней 1999. - № 4. - С. 17-19.

7. Афанасьев E.H. Сравнительная характеристика антигенной структуры рода Brucella: Дис. . канд. мед. наук. Ставрополь, 1983. - 173 с.

8. Афанасьев E.H. Научно-методические аспекты экспресс-диагностики возбудителей особо опасных зоонозных инфекций (чумы, бруцеллез, сибирская язва. Дис. . д-ра мед. наук. - Ставрополь, 2000. - 307 с.

9. Афонин Л.В., Молочков В.А., Буеверов А.О. Гепатиты как причина серорезистентности при сифилисе и ложноположительных серореак-ций // Рос. журн. кожн. и венер. болезней 2003. - № 2. - С. 48-50.

10. Ашмарин И. П., Воробьев А. А., Статистические методы в микробиологических исследованиях. JL, 1962. - 180 с.

11. Бабий А. В. Клинико-серологическая оценка модифицированного иммуноферментного анализа для серодиагностики сифилиса: Дисс. .канд. мед. наук. М., 1990. - 127 с.

12. Базаев B.JI., Фидаров A.A., Тургиев М.С., Джанаев В.Ф., Губаев А.Ш. Аутрич среди женщин, занятых в сфере коммерческого секса в Республике Северная Осетия-Алания //Инфекции, передаваемые половым путем. 2002. - №4. - С. 23-25.

13. Базиков И.А. Разработка новых препаратов для экспрессных методов диагностики сифилиса. Дис. . д-ра мед. наук. - Ставрополь,2000. -200 с.

14. Бакулев A.JI. Колоколов О.В., Суворов А.П. Особенности сифилиса нервной системы // Вест. Дермато-венерол. 2002. - №4. - С.53-57.

15. Батыршин Р. Ф. Совершенствование организационных форм активного выявления больных сифилисом: Дисс. . канд. мед. наук. М.,1993. - 234 с.

16. Беднова В. Н. Реакция иммунофлюоресценции //Лабораторная диагностика заболеваний, передающихся половым путём. М., 1987. - С. 126-133.

17. Беднова В. Н., Дмитриев Г. А., Бабий А. В. и др. Новая тест-система иммуноферментного анализа для серодиагностики сифилиса //Вестн. дерматол. 1995. - № 1. - С. 19-20.

18. Беднова В. Н., Дмитриев Г. А., Бабий А. В., Милонова Т. И. Новая тест-система ИФА на сифилис // Вестн. дерматол. 1994. - № 4. - С. 5151.

19. Беднова В. Н., Коляденко В. Г., Павлова Е. В. Новый сорбент для постановки РИФ-абс на сифилис // Вестн. дерматол. 1992. - № 6. - С. 37-39.

20. Беднова В. Н., Лосева О. К. Исторические аспекты серодиагностики сифилиса // Вестник дерматол. 1985. - № 2. - С. 14-20.

21. Вельская H.A., Митина B.C., Вейнблат В.И.Микрометод фракционирования и идентификации белков бактерий // Материалы СевероКавказской биохим. конф. Махачкала, 1970. - С.270-271.

22. Вельская H.A., Митина B.C., Вейнблат В.И. Микрометод фракционирования и идентификации белков //Лаб. дело 1972. - № 10. - С.514-516.

23. Березин И.В., Угарова H.H., Киршенгольц Б.М. Метод очистки пероксидазы //Биохимия. 1975. - Т.40, №2. - С.297-301

24. Благовещенский В.А., Степанчук-Рудник Г.И., Жулина Л.В. Изучение химического состава водных экстрактов культур БЦЖ, подвергнутых обработке ультразвуком, и выделение из них растворимого антигена //Журн. микробиол. 1961. - № 3. - С. 17-22.

25. Бланков Б.И., Клебанов Д.Л. Применение лиофилизации в микробиологии. М., 1961. - С. 57-87.

26. Борисенко К. К., Беднова В. Н. Неспецифические положительные серологические реакции на сифилис. Количественные модификации современных серологических реакций // Методические рекомендации. .- МЗ СССР, ЦКВИ.-М., 1990.-20 с.

27. Бухарович А. М. Особенности эпидемиологии сифилиса у жителей сельской местности. // Актуальные вопросы бесплодн. браков, обусл. БППП: Тез. докл. респ. научно-практ. конф. дерм.-вен. и акуш.-гинек.1-2 дек.1989. Свердловск. - 1989. - С.14.

28. Вейнблат В.И., Каминский В.В., Орлова JI.C. Иммунодиск-электрофорез антигенов чумного микроба //Проблемы особо опасных инфекций. Саратов, 1972. - Вып. ;(26). - С. 196-200.

29. Винокуров В.М. Химическое серебрение зеркал. -М., 1950.156с.

30. Волкославская В. Н. Заболеваемость сифилисом на Украине в XX веке (обзор литературы и собственные данные) // Врачебное дело. 1998. -№ 1. - С. 197-202.

31. Воробьёва 3. Г., Фокина Е. Н. Экспериментальные основы реакции латекс-агглютинации (обзор литературы) // Клиническая лабораторная диагностика. 1992. - № 7-8. - С. 60-62.

32. Воробьева З.Г., Бурков А.Н., Блинова Т.В. Определение иммуноглобулинов класса М в реакции агглтинации латекса. // Клиническая и лабораторная диагностика 1999. № 5. - С. 54 - 56.

33. Гельтцер Р. Р. О культивировании патогенных спирохет // Анналы Мечниковского института. 1936. - Т. 4. - Вып.2. - С. 359-364.

34. Гельтцер Р. Р., Зебницкая JI. В. Сравнительное изучение антигенных свойств Казанских и Ставропольских штаммов чистых культур бледной спирохеты // Эпидемиология и микробиология: Сб. научн. тр. Ставрополь, 1950. - Вып. 2. - С. 80-84.

35. Гельтцер P.P., Тутова Л.И. Серологические свойства различных культур бледной спирохеты в опытах с сыворотками крови больных сифилисом //Ученые записки: сб. науч. Тр. Ставропольского мед. ин-та. Ставрополь, 1949. - Т.З. - С. 137-141.

36. Голубев Л.Г., Сажин Б.Е., Валашек Е.Р. Сушка в химико-фармацевтической промышленности. М., 1978. - С. 18-50.

37. Горелова О. В., Аковбян Н. А., Фидаров А. А. Сексуальное поведение подростков, больных ИППП // Вестник дерматол. 1999. - № 4. - С. 1920.

38. Гражданцева А. А., Сиволобова Г. Ф., Урманов И. X. Клонирование и экспрессия в E.coli основных антигенов Tr.pallidum и исследование их иммунохимических свойств // Иммунология. 1998. - № 4. - С. 17-20.

39. Гребенников В. А., Жаров Л. В., Ометов В. К. О легализации публичных домов // Вестн. дерматол. 1999. - № 2. - С. 14-15.

40. Гуревич Г. А., Кудрявцев A.A., Фихте Б. А. Инженерно-физические аспекты и феноменология процессов дезинтеграции микроорганизмов //Материалы Всесоюз. конф. по дезинтеграции микроорганизмов (2527 окт. 1972 г.). Пущино-на-Оке, 1972. - С. 15-51.

41. Джанаев В.Ф., Бетрозов В.Т., Албегонова Л.В., Губаев А.Ш. Диагностика некоторых ИЛИИ в СОРКВД // Там же. С.36.

42. Джанаев В.Ф. Характеристика заболеваемости сифилисом с 1999 г. по 2003 г. в Республике Северная Осетия-Алания с учетом региональных особенностей. Совершенствование методов и мер по её снижению //Ставрополь, 2004. 25 с. -Деп. в ВНТИЦ, №1412, В-2004.

43. Джанаев В.Ф. Разработка суспензионных препаратов для экспрессной иммунодиагностики сифилиса. Сообщение 1. Трепонёмный антигенный суспензионный диагностикум для реакции агглютинации латекса //Ставрополь, 2004. 14 с. -Деп. в ВНТИЦ, №1487-В-2004.

44. Джанаев В.Ф. Разработка суспензионных препаратов для экспрессной иммунодиагностики сифилиса. Сообщение 2. Трепонемный антигенный диагностикум на основе коллоидного серебра для дот-иммуноанализа //Ставрополь, 2004. 14 с. -Деп. в ВНТИЦ, №1487-В-2004.

45. Джеймс X. Теория фотографического процесса /пер. с англ.- JL, 1980.-672 с.

46. Дмитриев Г. А. Тест-системы в лабораторной диагностике сифилиса // Вестн. дерматол. 1996. - № 6. - С. 34-37.

47. Дмитриев Г. А., Брагина Е. Е. Современные методы лабораторной диагностики сифилиса // Вестник дерматол. 1996. - № 2,3. - С. 29-38.

48. Дмитриев Г.А., Галишников Ю.А., Зверева Н.С. Опыт применения иммуноферментного анализа для лаборатоной диагностики сифилиса //Вестн. дерматол. 2000. - № 1. - С. 6 - 8.

49. Дьяченко JI.A., Оловянников О.В. Количественная постановка микрореакции преципитации с кардиолипиновым антигеном // Вестн. дерма-то-венерол. 1988. - № 12. - С. 44-46.

50. Ерёмин В.Ф., Барабонов Л.Ш., Гасич E.JI. и др. Серологическая и молекулярно-биологическая диагностика инфекций, передаваемых половым путем // Вестн. дермато-венерол. 2002. - № 2. - С. 22-29.

51. Ерохин Е. П. Метод пассивной агглютинации полимерных дисперсий для диагностики легионеллёза // ЖМЭИ. 1991. - № 11. - С. 41 -43.

52. Жарникова И.В. Стабилизация биологического сырья и диагностических препаратов методом лиофильного высушивания . Ставрополь,2003. 22 с. - Деп. в ВИНИТИ 26.12.2003. - №2288-В2003.

53. Жарникова И.В. Методологические подходы и разработка биотехнологии иммунобиологических препаратов для диагностики инфекционных особо опасных заболеваний и детекции их возбудителей. Автореф. дис. . доктора биол. наук. - Ставрополь, 2004. - 39 с.

54. Загоскина Т.Ю., Калиновский A.M., Меринов С.П. и др. Дот-иммуноанализ с частицами коллоидного серебра в качестве специфического антигена для исследования сывороток крови людей на бруцеллез // Мед. па-разитол. 2002. - №2. - С.15-17.

55. Загоскина Т.Ю., Марков Е.Ю., Калиновский А.И., Голубинский Е.П. Обнаружение антигенов бруцелл с помощью частиц коллоидных металлов в качестве маркеров специфических антител //ЖМЭИ. 2001. - № 3. -С.65-69.

56. Загоскина Т.Ю., Голубинский Е.П., Меринов С.П. и др. Современные подходы к конструированию диагностических тест-систем с использованием неорганических корпускулярных меток // Бюл. ВСНЦ СО РАМН.2004.-Т. 2, № 1. С. 176-180

57. Иванов О. J0L, Ломоносов К. М., Стенина М. А. Оценка иммунного статуса больных ранним сифилисом и его прогностическое значение для негативации серологических реакций // Рос. журн. кожн. и венер. болезней. -1998.-№6.- С. 47-51.

58. Ивашкин В.Т., Буеверов А.О. Аутоиммунные заболевания печени в практике клинициста // М,, 2001. С.8-22.

59. Калмыкова Г. Н. Некоторые эпидемиологические особенности распространения сифилиса в Ростове-на-Дону. // Вестн. дерматол. 1991. -№5. - С. 24-26.

60. Капкаев P.A., Проблемы БППП в условиях перехода к рыночной экономике //Новости дераматол и венерол. 1998. - № 3. - С.9-12.

61. Каральник Б.В., Денисова Т.Г., Кешилева З.Б. Антигенсвязы-вающие лимфоциты (АСА) и антитела в диагностике сифилиса //ИППП. -1999.-№5.-С.

62. Каримова 3. X., Кондратьев Т. Т. К вопросу о выделении бледной спирохеты чистой культуры из крови больного сифилисом человека // Мик-робиол., эпидемиол. и иммунунол. 1941. - № 7-8. - С. 99-102.

63. Карпенко В.В., Сачков В.И. Обезболивание животных в эксперименте . ~Методические рекомендации- М., 1985.-53 с.

64. Касторная М.Н. Конструирование диагностических препаратов для экспрессных методов лабораторной диагностики бруцеллеза и детекции его возбудителей //Дис. . канд. биол. наук. Ставрополь, 2003. - 180 с.

65. Ким Э. Г. Особенности иммуногенетики и иммуногенеза при сифилисе (клинико-экспериментальные условия): Дис. . докт. мед. наук. -Ташкент. 1992. - 282 с.

66. Киселёва Г. А., Беднова В. Н., Дмитриев Г. А. Постановка ИФА для серодиагностики сифилиса // Вестн. дерматол. 1998. - № 1. - С. 39-42.

67. Ковалёва JI. Н. Социально-эпидемиологическая и социально-психологическая характеристика, новый отборочный тест диагностики, совершенствование терапии заразных форм сифилиса у работников морского транспорта: Дис. . докт. мед. наук. -М., 1992. 220 с.

68. Короткий Н. Г., Маркин И. Я. Проблема серорезистентности при лечении сифилиса // Актуальные вопросы дерматологии и венерологии: Сб. тр. юбил. конф., посвящ. 5-летию каф. кож. и вен. болезней педиатр, фак. РГМУ (5-6 июня 1997) . М., 1997. - С. 45-46.

69. Короткий Н. Г., Чиненова Е. Г. Современные особенности течения врождённого сифилиса // Педиатрия. 1998. - № 3. - С. 61-64.

70. Котровский А. В. Разработка и клиническая оценка методики постановки иммуноферментного анализа на поверхности твердофазного носителя для серодиагностики сифилиса: Дис. . канд. мед. наук. М., 1986. -195 с.

71. Котровский А. В., Беднова В. Н. Значение иммунных нарушений в патогенезе распространённых и тяжелопротекающих дерматомикозов и методы их терапевтической коррекции. М., 1982. - С. 167-170.

72. Красносельских Т. В. Определение спектра и соотношения анти-трепонемных антител в диагностике приобретённого сифилиса: Автор, дис. . канд. мед. наук. С.-Пб. - 1998. - С. 22.

73. Кривеня В.Я., Елигулашвили Р.К. Получение и исследование иммуноферментных комплексов //Вирусные гепатиты типов А и В. Рига, 1983. - С.110-115.

74. Крейнгольд С.У. Каталиметрия в анализе реактивов и веществ особой чистоты. -М., 1983. 190 с.

75. Крутских Е. С., Яцуха М. В., Шевченко А. А. Контроль сифилитической инфекции с помощью компьютерного моделирования // Вестн. дер-матол. 1998. -№ 1.-С. 18-20.

76. Кулагин В.И., Селисский Г.Ж., Богуш П.Г. и др. Проблема сифилиса центральной нервной системы // Вестн. дермато-венерол. 2003. - № 2. -С.63-66.

77. Куфлина С.А., Павлова Т.Н. Эвтаназия экспериментальных животных: Методические рекомендации по выведению животных из экспериментов. М., 1985. - 9 с.

78. Лабораторные работы и задачи по коллоидной химии /Под ред. Ю.С.Фролова. -М., 1986.-215 с.

79. Ломоносов К.М. Актуальное интервью. Глвое в диагностике и терапии сифилиса // Рос. журн. колен, и вен. болезней. 2002. - №5. - С.56-60.

80. Лосева О. К. Сексуальное поведение больных сифилисом (эпидемиологические и медико-социальные проблемы): Дис. . докт. мед. наук. -М., 1991.-280 с.

81. Лосева О. К., Бабкова И. Н. Изучение сексуального поведения мужчин и женщин, заболевших сифилисом (панельное исследование) //Вестн. дерматол. 1999. - № 1. - С. 43-45.

82. Лосева О. К., Доля О. В., Чиханатова А. Г. Трансфузионный сифилис // Новое в трансфузиологии. 1997. - № 18. - С. 55-58.

83. Лосева О. К., Нашхоев М. Р. Социальное происхождение, сексуальное поведение, потенциал в распространении инфекций, передающихся половым путём у женщин, представляющих платные сексуальные услуги //Вестн. дерматол. -1999. № 2. - С. 20-24.

84. Лосева O.K., Тактамышева Э.Ш. Штульман Д.Р. Современный нейросифилис: диагностика, лечение и тактика ведения больных // Рос. дурн. Кожн. вен. болезней. 1999. - №4. - С.39-44.

85. Лузан Н. В. Концепция первичной профилактики ИППП у несовершеннолетних // Вестн. дерматол. 1999. - № 4. - С. 16-18.

86. Лукин Ю. В. Бахарев В. Н., Заиченко А. С. и др. Полиакролеино-вые латексы: синтез, введение наполнителей и механизмы формирования. -Доклад АН СССР. 1985. - Т. 285. - № 1. - С. 159-161.

87. Лукин Ю. В. Синтез и исследование полимерных дисперсных систем для иммуноанализа: Автореф. дис. . канд. мед. наук. М., 1986. -17с.

88. Лукин Ю. В., Трифонов В. Д., Туркин С. И., Зубов В. П. Полиак-ролеиновые латексы в качестве иммунореагентов // Тр. МХТИ. 1985. -Вып. 135.-С. 88-92.

89. Лямперт И.М. Этиология, иммунология и иммунопатология ревматизма//М., 1972.

90. Милич М.В. Серологическая резистентность при сифилисе //М.,1984.

91. Милич М.В., Антоньев A.A., Блохин Б.А. и др. Роль микрореакции с кардиолипиновым антигеном при массовых серологических исследованиях // Вестн. дермато-венерол. 1983. - № 10. - С. 19-22.

92. Молочков В.Л., Кириченко И.М. Полимеразная цепная реакция и её применение для диагностики дермато-венерологии // Рос. дурн. Кожн. вен. болезней. 2004. - №1. - С.44-54.

93. Мюллер М., Otto М., Вернер Г. Каталитические методы в анализе следов элементов М., 1983. - 193 с.

94. Навроцкий А. П. Медико-социальная профилактика венерических заболеваний среди несовершеннолетних: Дис. . канд. мед. наук. -Минск. 1989. - 170 с.

95. Назаров П. Г., Старченко М. Е., Касаткин Е. В., Данилов С. И. Новая концепция формирования серорезистентности при сифилисе // Вестн. дерматол. 1999. - № 6. - С. 17-19.

96. Овчинников. Н. М., Беднова В. Н., Делекторский В, В. Лабораторная диагностика заболеваний, передающихся половым путём. М., 1987. -303 с.

97. Овчинников H. М., Резникова JI. С., Сагдеева JI. Г. Регламент производства ультраозвученного трепонемного антигена. М., 1970. - 143 с.

98. Оксман Г. А., Смоловский К., Ноэл Дж. Математическое моделирование распространения эпидемического сифилиса. // ЗППП,- 1996. № 3. -С. 21-32.

99. Ометов В. К., Авилов Е. Н., Капустюк JI. П. Влияние сезонности на распространение венерических заболеваний в Ростовской области // Вестн. дерматол. 1998. - № 1. - С. 21-23.

100. Ометов В.К., Моргуль М.П., Уразовская Е.В., Крушинская И.А. О применении иммуноферментного анализа в диагностике сифилиса //Вестн. дерматол. 1997. - № 3. - С.46-47.

101. Патент RU № 2092853 С1(51) 6 G01 №33/553, 33/53. Иммуноди-агностикум и способ твердофазного иммуноанализа на его основе /А.Г.Полтавченко, Ю.И.Сенькин, В.С.Караваев. Заявка №5065593/14; заявлено 12.10.92; Опубликовано 10.10.97.

102. Патрушева Н.Б., Рогачей JI.H., Дегтярёва Г.Н., Бейкин Я.Б. Скри-нинговый КСР для диагностики сифилиса // Клин. лаб. диагност. 1997. - № 6. - С. 66-67.

103. Пожарская В. О. Антигенные свойства отдельных клеточных структур культуральных бледных трепонем: Автореф. дис. . канд. мед. наук.-М., 1986. 16 с.

104. Пожарская В.О. Антигенные свойства структурных детерминант трепонем, выращенных на искусственной питательной среде. Роль иммунобиологических препаратов в современной медицине. // Материалы международного симпозиума. Уфа. - 1995. - Ч. 2.- С. 217-218.

105. Пожарская В.О. Особенности иммунного ответа кроликов на введение антигенов из бледных трепонем //Тез. докл.7 Всерос. съезда дерматол. и венер. Казань. - 1996. - Т. 3. - С. 73-74.

106. Пожарская В.О., Беднова В.Н., Падалка С.Ф. Новый специфический сорбент для РИФ-абс при серодиагностике сифилиса //Вестн. дерматол. -1995.-№2.-С.15-16.

107. Полтавченко А.Г., Караваев B.C., Тузиков В.Ф. Использование золей серебра как маркеров иммуноанализа //Журн. микробиол. 1998. -№2.-С. 108-111.

108. Полтавченко А.Г., Полтавченко Д.А. Стабилизация коллоидного серебра //Сибирь-Восток. 2002. - Вып. 6(54). - С. 17-18.

109. Полтавченко А.Г., Полтавченко Д.А., Загоскина Т.Ю. Перспективы использования коллоидного серебра как маркера в иммуноанализе //Сибирь-Восток. 2002. - Вып. 3(51). - С.10-12.

110. Полтавченко А.Г., Полтавченко Д.А., Загоскина Т.Ю. Проявление золей серебра в микротитровальных планшетах //Сибирь-Восток. -20026.-Вып. 9(57). С.7-9.

111. Полтавченко А.Г., Тузиков Ф.В., Полтавченко Д.А., Загоскина Т.Ю. Получение серебряных золей-маркеров для иммуноанализа //Сибирь-Восток. 2002в. - Вып. 4(52). - С. 18-20.

112. Потекаев Н.С., Потекаев С.Н. Заметки к этиологии и патогенеза сифилиса / Этиология и патогенез сифилиса. 2002. - №1. - С.63-68.

113. Практическая химия белка: М.: Мир, 1989. С.300-301.

114. Приказ № 1179 от 10 октября 1983 г. «Об утверждении нормативов затрат кормов для лабораторных животных в учреждениях здравоохранения.-М., 1983.

115. Прокопов Н. И. Синтез монодисперсных функциональных полимерных микросфер для иммунодиагностических исследований. // Успехи химии. 1996. - Т. 65. - № 2. - С. 178-192.

116. Разнатовский А. М., Соколовский Е. В., Красносельских Т. В. Причины и факторы, способствующие развитию серологической серорезистентности после современного лечения сифилиса // Дермато-венерол. и косметологии. 1996. - № 1. - С. 60-66.

117. Рассказов Н. И. Временный порядок серологической диагностики и серологического контроля излеченности сифилиса в Астраханской области: Инструкция для врачей. 1998. - 16 с.

118. Родионов А.Н. Сифилис,- Руководство для врачей. С.-Пб.: «Питер», 2000.- 184 с.

119. Родионов П.П., Третьяков В.В. Колларгол и протаргол , свойства // Препринт: коллоидное серебро. Физико-химические свойства. Применение в медицине. Новосибирск, 1992. - С.5-14.

120. Розовский Г.И. Химическое меднение с применением в качестве восстановителя боргидрида // Исследования в области осаждения металлов : Материалы к XI Респ. конф. электрохимиков Литовской ССР. Вильнюс, 1971. - С.93-95.

121. Роуз Н. Р. Основные аспекты аутоиммунного заболевания. Механизмы иммунопатологии,- М., 1989. С. 165-180.

122. Санофи Диагностике Пастер. Стандартизация методов исследования сифилиса // Информационно-методическое пособие М., - 1998. - 23 с.

123. Сафронова A.B., Маликов В.Е., Бурова A.A. и др. Аспекты использования иммуноферментного анализа в серологической диагностике сифилиса //Клиническая лабораторная диагностика . 1999. - №11. - С.22-23.

124. Серегин C.B., Белавин П.Б., Бабкина И.Н. и др. Получение ре-комбинантных антигенов Trponema pallidum и их применение в иммунофер-ментной диагностику сифилиса // Вестн. дерматол. 1979. - № 8. - С. 48-51.

125. Сержантова Т. И. Опыт культивирования бледных трепонем на тиогликолевой среде // Вестн. дерматол. -венерол. 2000. - № 2. - С. 5-8.

126. Свергун Д.И., Фейгин JI.A. Рентгеновское и нейтронное малоуго-вое рассеивание М., 1988. - 279 с.

127. Сивак В.В., Чеботарев В.В., Чеботарева Н.В. Сифилис в пените-циарной системы //Ставрополь, 2003. 166 с.

128. Сидорова Е. В., Ляхов В. Ф. Значение определения противотре-понемных IgM-антител в серодиагностике сифилиса. //Бюллетень ассоциации САНАМ «Инфекции, передаваемые половым путем». 1995. - № 4. - С. 1113.

129. Скрипкин Ю.К., Курбанова A.A., Шарапова Г.Я., Селицкий Г.Д. Инфекции, передаваемые половым путем. Практическое руководство //М.: «МЕДиресс». 1999. - 361 с.

130. Скрипкин Ю. К., Резайкина А. В. Иммунопатологические механизмы патогенеза хронических дерматозов: М., 1997. С. 94-98.

131. Соколовский Е. В. Серологическая резистентность после лечения сифилиса: (причины и факторы развития, профилактика и лечение): Автореф. дис. . докт. мед. наук. С-Пб. - 1996. -40 с.

132. Суханов Е. С., Сметанина С. Е., Максимов В. А. Прямая детекция ДНК Tr.pallidum в клиническом материале и крови доноров методом ПЦР с гарантией достоверности отрицательного результата // Вестн. службы крови России. 1998. -№3.-С.18-21.

133. Сухова Л.П., Машеро В.В., Войнова H.H. Опыт применения ИФА-тест-систем с использованием рекомбинантных белков в диагностике сифилиса //Бюллетень ассоциации САНАМ «Инфекции, передаваемые половым путем». 1999 - № 1. - С.34-35.

134. Сызранцев П. И. Простые способы вычисления основных статистических величин. // Социалистическое зерновое хозяйство. 1938. - № 3. -С. 185-203

135. Тинкер А.И. Влияние сублимационного (лиофильного) высушивания на штамм ЕВ чумного микроба . Дис. . доктора мед. наук. - Ставрополь, 1971.-351 с.

136. Тимченко Г.Ф. РПГА в серодиагностике сифилиса: Дисс. . докт. мед. наук. М. - 170с.

137. Тихонова JI. И. Общий обзор ситуации с инфекциями, передаваемыми половым путём // Вестн. дерматол. 1999. - № 2. - С. 4-7.

138. Ткачев В.К. ИФА диагностика сифилиса. - Информационно-методическое пособие. - Кольцово, 1997. - 30 с.

139. Тутова Л. И. Гемокультуры бледной спирохеты // Материалы по обмену опытом между институтами эпидемиологии и микробиологии: Сб. науч. тр. Ставрополь. - 1947. - С.14.

140. Тюменцева И. С. Научно-методические основы конструирования и усовершенствования производства диагностических тест-систем для выявления возбудителей особо опасных и других инфекций: Автореф. дис. . д-ра. мед. наук. Саратов. - 1996. - 57 с.

141. Урбах В. Ю. Статистический анализ в биологических и медицинских исследованиях: М., 1975. 296 с.

142. Файгль Ф., Ангер В. Капельный анализ неорганических веществ -М., 1975. Т.2. - С. 116-117.

143. Фриго Н.Ф. Современные критерии дифференциальной диагностики сифилиса и ложнополодительных результатов стандартных серологических раекций на сифилис // Дис. . доктора мед. наук. М., 2001.

144. Фриго Н.В., Комарова В.Д., Обрядина А.П., Бурков А.Н. Сравнительные результаты иммуноферментного анализа, реакции пассивной гемагглютинации и микрореакции в серодиагностике // Вестн. дермато-венерол. 2000. - № 4. - С.34-36.

145. Хамидов Ш.Ф., Ввлиханов У.А., Балтабаев М.К. Особенности эпидемиологии современного течения и лечения раннего приобретенного сифилиса // Вестн. дермато-венерол. 2004. - № 2. - С.55-57.

146. Чеботарёв В. В. Индустрия секса, нравственно-этическое, половое воспитание нерешённые проблемы. // Вестн. дерматол. - 1999. - № 3. -С. 29-30.

147. Чеботарев В.В., Павлик JI.B. Повторные заражения сифилисом // Вестн. дерматол. 1996. - № 4. - С.46-49.

148. Чеботарев В.В., Павлик JI.B., Гуджиева О.Д. Экстрагенитальные и биполярные шанкры казуистика или повседневность ? // Вестн. дерматол. - 1999.-№3,-С. 56-58.

149. Чеботарев В.В., Павлик Л.В., Земцов М.А. Особенности течения сифилиса в период эпидемии //Вестн. дерматол. 1999. - №6. - С.56-58.

150. Шалкаускас М.И., Вашкялис А.Д. Химическая металлизация пластмасс. Л.,1977. - 168 с.

151. Шершевский Я. Г. О распознавании возбудителя сифилиса путём культивирования бледной спирохеты // Харьковский медицинский журнал. -1910. -Т.10. № 7. - С.159-163.

152. Эльпинер И.Е. О механизме действия ультразвуковых волн на микроорганизмы //Микробиология. 1955. -Т.24. - С.371-381

153. Эльпинер И.Е.Биофизика ультразвука //Из-во «Наука», М.,1973. -384 с.

154. Юдицкая H. М. Возможность применения латекс-агглютинации для экспресс-диагностики дизентерии. // Иммунология. 1991. - № 1. - С. 63-64.

155. Юлдашев К.Л., Магрунов Б.Л., Парпиев З.А., Реймназарова Г.Д. Беременность и сифилис // Вестн. дермато-венерол. 2003. - №3. - С.34-35.

156. Яцуха М. В., Аковбян В. А. Эпидемическое значение активного выявления больных сифилисом в соматических стационарах //Современные проблемы дермато-венерологии: Сб. науч. тр. Курск. - 1994. - С. 16-18.

157. Antoni G., Dal Maso G., Berti B. et al. Detection of antigenic determinants in the Treponema pallidum membrane protein Tmp A using overlapping synthetic peptides // J. Immunol. Meth. 1996. - Vol. 189. - № 1. - P. 137-140.

158. Augenbraun M., Rolfs R., Johnson R.;. Treponemal specific tests for the serodiagnosis of syphilis. Syphilis and HIV Study Group // Sex. Transm. Dis. -1998. Vol.25(10). - P.549-552.

159. Backhouse J. L., Hudson B. J. Evalution of immunoglobulin G enzyme immunoassay for serodiagnosis of yaws // J. Clin. Microbiol. 1995. -Vol. 33. -№ 7. - P. 1875-1878.

160. Bailey M. G., Penn C. N., Cockayne A. Evodence for the presence of lipopolysacharide in Treponema phagedenis (biotype Reiter) bat not in Treponema pallidum (Nichols) // FEMS Microbiol Lett. 1985. - Vol. 27. - № 1. - P. 117-121.

161. Balic-Winter A., Kansky A. Seroloska dijagnostika sifilisa //Lijecn.vjens. 1985. - Vol. 107. - № 1-2. - P. 92-94.

162. Batteiger В., Newhall W.J., Jones R.B. The use of tween 20 as a blocking agent in the immunological detection of protein transferred to nitrocellulose membranes //J. Immunol. Methods. 1982. - Vol.55, N3. - P. 297-307.

163. Beebe G. L., Nouri N. G. Comparative evaluation of commercial fluorescent treponemal antibody-absorbent test kits // J. Clin. Microbiol. 1984. -Vol. 19. -№6. - P. 789-793.

164. Berg R. N., Duncan W. P., Thornton C. G. Antigen analysis of cultivable Reiter and Nichols treponems // Br. J. Vener. Dis.- 1972. Vol. 48. - № 6. -P. 489-495.

165. Bernard Ph., Souyri N., Bonnetbanc G. M. Serologia de la Syphilis //Med. Cent. - 1984. - Vol. 1. - P. 109-114.

166. Blanco D.R., Champion C.I., Exner M.M. et al.Porin activity and sequence analysis of a 31-kilodalton Treponema pallidum sub sp. pallidum rare outer membrane protein (Trompl) // J. Bacteriol. 1995. - Vol. 177. - № 12. - P. 3556-3562.

167. Bolensen E., Abecht S., Benche W. et al. Reativity of locally produced CSF antibodies in patient with neurosyphillis againts antigens of Treponema pallidum // J. of Neurol. 1993. - Vol. 240. - № 8. - P. 470-474.

168. Byrne R.E., Laska S., Bell M. Et al. Evaluation of a Treponema pallidum western immunoblot assay as a confirmatory test for syphilis // J. Clin. Microbiol. 1992. - Vol.30(l). - P.l 15-122.

169. Cannefax G. R., Garson W. Reiter protein complement fixation test for syphilis // Publ. Health. Rep. 1957. - № 72. - P. 335-340.

170. Chermesky M.A., Nucleic axid tesths foediagnosis of sexually trans-mited deseasis //FEMS Immun. Med. Microbiol. -1999.- N24. P.437-448.

171. Christiansen A. H. Studies on the antigenic structure of treponemes especially the polysaccharide fraction // Danich. Med. Bulletin. 1967. - № 14. -P.103-109.

172. Collins U.P. (Коллинз У.П.) Новые методы иммуноанализа . Пер. с англ.-М., 1991.-279 с.

173. Cox D.L, Chang P., Mc Dovall A.M. et al. The outer membrane, not a coat of host proteins, limite antigenicity of virulent Treponema pallidum //Infect. Immun. 1992. - Vol. 60. - № 3. - P. 1076-1083.

174. Cristian C. L., De Simore A. R., AbrussofL. Anti-DNA antibodies in hyperimmunised rabbits // J. of exp. Med. 1965. - Vol. 121. - № 2. - P. 309321.

175. D'Alessandro G. Extract antigen from treponema in the serology of syphilis //11 Intern. Congr. of Dermatology. Proceedings. Stockholm. 1957. -Vol. 3. - P. 718-719.

176. D'Alessandro G., Dardanoni L. On the Antigenic structure of Treponema pallidum with partucular reference to the Treponema group specific protein antigen// Bull. Res. Connsil. Israel. 1958. - № 7. - P. 47-52.

177. D'Alessandro G., Del Carpio C. A. Lipopolysaccharide antigen of the treponema//Natur. 1958. - Vol. 181. - P. 991-992.

178. D'Alessandro G., Oddo F.G., Dardanoni L. The antigens of the Cultured Treponema Pallidum (Reiter Strain) and the antispirochetal antibodies in human syphilis // Ven, Dis. Inf. 1950. - Vol. 31. - P. 314-315.

179. D'Alessandro G., Zaffiro P. Sulla Structura antigenica del Treponema pallidum // Minerva med. 1962. - Vol. 53. - № 102. - P. 3833-3927.

180. Deacon W. E., Hunter E. F. Treponemal antigens a Related to Identification and Syphilis Serologi // Proc. Soc. Exp. Biol. and. Med. - 1962. - № 110. -P. 352-356.

181. Dische Z. Uber uniae nerr characteristische Farben reactionen der Thismonuelein Saure und cene mikromethod zur Bestimmung der selben in tierischen Oroanen mit Hilpedieser Reaktionen // Hikrochem. 1930. - № 8. - P. 432.

182. Doniach A. Autoantibodies in syphilis and chronic biologic false positive reactions // Sex. Transmit. Dis. London: Academic Press. - 1976. - P. 210-214.

183. Egglesttone S/I/. Turner A.J.L. (Эгглстоун С.И., Тернер А.Дж.Л., Серологическая диагностика сифилиса //ИППП. 2001. - №3. - С.4-9.

184. Farchy С.Е., Hunter E.F., Larsen S.A. et al. Double conjugate enzyme-linked immunosorbent assay for immunoglobulins Gand Maganst Treponema pallidum. // J. Clin. Microbiol. 1984. - Vol. 20. - № 6. - P. 1109-1113.

185. Farshy C.E., Hunter E.F., Pope V. et al Four serologic tests for syphilis. Results with comparison of selected groupe of sera // Sex. Transmit. Dis. -1986. Vol. 13. - № 4. - P. 228-231.

186. Fitzgerald T. J. Effects of efetamet (Ro 15-8074) on Treponema pallidum and experimental syphilis //Antimicrob. Agents. Chemother. 1992.-Vol. 36.-№3.-P. 598-602.

187. Fostrom L. Reiter protein complement fixation (RPCF) test as a serological test for syphilis //Acta dermato-venerologica. 1967. - Vol. 47. - P. 165171.

188. Fromm G. Spirochäten Antigene in der Serolog. diagnostik der Syphilis //Arzt. Wochenschr. - 1954. -№9. -P. 639-641.

189. Gasponi A., Nedosant M., Fosti A. et al. Valutasione di unnuovo metodo immunoenzimatico per la dimonstrazione delle IgM-treponema specifiche nella sifilide umana // J. of Ital. Dermatol. 1988. - Vol. 123. - № 3. - P. 113-116.

190. Goodhort G.L. Use and Interpretation of serologic Tests for the Diagnosis of Syphilis //Suoth met. J. 1983. - Vol. 76.-№ 3.-P. 373-379.

191. Grob J.J., Bonerand Y.J. Antiphospholipid antibodies and antiphos-pholipid antibody sindrom // Ann. Dermatol. Venerol. 1986. - Vol. 113. - № 9. -P. 811-818.

192. Hardi P. H. Prospects for improved laboratory diagnosis of treponemal infections and species definition // Rev. Infect. Dis. 1985. - Vol. 7. - Suppl. № 2. - P. 300-304.

193. Hardi P. H., Frediricks W. R., Nell E. E. Isolation and Antigenic characteristics of axial filements from the Reiter Treponema // Infect. Immun. -1975.-№11.-P. 380-386

194. Horvath I., Puskas E., Horvath A. et al. Autoantibodies in immune defense againts cholisterol? // Orv. Hetil. 1994. - Vol. 135. - № 5. - P. 965-968.

195. Ito F., Hunter E.F., George R.W. et al. Specific immunofluorescent staining of pathogenetic treponemes with a monoclonal antibody // J. Clin. Microbiol. 1992. - Vol. 30. - № 4,- P. 831-838.

196. Johonson P. C., Farnie M. A. Testing for syphilis // Dermatol. Clin. -1994.-Vol. 12.-№1.-P. 9-17.

197. Kaplan M., Galef E., Bercovici T., The selective detection of cell surfaces determinants by means of antybodies and acetylated avidin atlached to highly fluorescent polymer microspheres. // Biochim. Biophys.Acta. 1983. - № 728. -P.l 12-120.

198. Kell P.D., Barton S.E., Sammerbell C.D. et al. Sexually transmitted diseases in HIV-1 seropositive monen at presentation // Int. J. STD AIDS. -1991. Vol. 2. -№3. - P. 204-206.

199. Larsen S. A., Steiner B. M., Rudolph A. N. Laboratory diagnosis and interpretation of tests for syphilis. // Clin Microbiol Ref. 1995. - Vol. 8. - № 1. -P. 21-22.

200. Lee Y.B., Farshy C.E., Hunter E.F. et al. Detection of immunoglobulin M in cerebrospinal fluid from syphilis patients by enzyme-linked immunosorbent assay // J. Clin. Microbiol. 1986. - Vol. 21. - № 5. - P. 736-744.

201. Lefevre G.C., Prere M.F., Abbal M., Leareng M.B. Quantitative evaluation of the FTA-abs IgM intreated and untreated syphilis // Ann. Dermatol. Venerol. 1983. - Vol. 110(5). - P. 426-430.

202. Margel S., Wesel E. Acrolein polimerazation: Monodisperse, Homo and Hydro microperes, Systhesis mechanism and Reactions // Sci. Polym. Chem. 1984. - V. 22. - P. 145-148.

203. Matsumoto M., Ishikawa F., Matsubayashi T. Et al. Latex agglutination test for detecting antibodies to Treponema pallidum // Clin. Chem. 1993. -Vol.39(8). - P.1700-1705

204. Morrison-Plunner T., Alderte Y.F., Basemon J.B. Enzyme-linked immunosorbent assay for the detection of serum antibody to on the membrane protein of T.pallidum // Brit. J. Vener. Dis. 1983. - Vol. 59. - P. 75-79.

205. Nayar R. Campos J. M. Evaluation of the DCL Syphilis-G enzyme immunoassay test kit for the serologic diagnosis of syphilis // Ann. J. Clin. Pathol. 1993. - Vol.99. -№ 3. - P. 282-285.

206. Parus D., Braun W., Oi V. Antigen specific identfication and cleaning of hibidoes with a fluoresce-activated cell sorter. // Proc. Nat. Acad. Sci (USA). -1979.-№76.-P.1962-1966.

207. Paris-Hamelin A., Loupy G., Vaisman A., Deregnancourt G. Recherche et dosage des IgM treponemiques par une methode immunoenzymelogique

208. ELISA). Comparaison avec le FTA-Abs-IgM et le SPHA modifie // Feuill. biol. -1985. Vol. 26. - № 145. - P.13-19.

209. Petersen C. S., Pedersen N. S., Axelsen N. H. A simple method for the isolation of flagella from Treponema Reiter // Acta pathol. et microbiol. scand. -1981. Vol. 89. -№6. - P. 379-385.

210. Peterson C. S., Pedersen N. S., Axelsen N. H. Purification of a Reiter treponemal protein antigen that is immunologically related to an antigen in Treponema pallidum (DNA) // Infect. Immun. 1982. - Vol. 35. - № 3. - p. 974-978.

211. Poison A., Potgieter G.M., Largier J.E. The fractionation of protein mixtures by linear polymers of higth molecular weight //Biochem. Biophis. Acta. 1964. - Vol.82. -P.463-475.

212. Pucilow K., Zajac W. Biologisch falschpositive seren in der diagnostic/Derm. Moschr. 1980. -Bd.166. -№11. -P. 713-721.

213. Quinn T.C. Recent advanced in diagnosis of sexually transmited diseases // Sex. Trans. Dis. 1994,- N 21. - P.19-27

214. Radolf J. D. Treponema pallidum and quest for outer membrane proteins // Moll. Microbiol. 1995. - Vol. 16. - P. 1067-1073.

215. Radolf J.D., Robinson E.J., .Burell K.W et al. Characterization of outer membranes isolated from Treponema pallidum, the syphilis spirochete //Infect. Immun. 1995. - Vol. 63. - № 11.- P. 4244-4252.

216. Rembaum A., Dreuer W. Immunomicrospheres; reagents for cell labeling and separation. // Sciens. 1980. - Vol. 208. - № 4442. - P. 364-368.

217. Rossetti O.L. AreseA.L. Boschiroli M.L., Cravero S.L. Coloning of Brucella abortus gene and characterization of expressed 26-kilodalton peripasmicprotein: potential use for diagnosis //J.Clin. Microbiol. -1996. Vol.34, N 1. -P.165-169/

218. Schaudinn F. Hoffman E. Vorlaufigen Bericht über das vorkommen von Spirocheaten in syphilitischen krankjeits producten und dei Rupp Papillonen //Arb. a. Kaiserl. Gerund. 1905. - № 22. - P. 527-534.

219. Sevars A. H., Schasfoart R. B., Salden M. H An immunosensor for syphilis screening Based on surface plasmon resonans // Biosens. Bioelectron. -1993. Vol. 8. - № 3-4. - P. 185-189.

220. Silletti R. P. Comparison of Captia syphilis G enzyme immunoassay with rapid plasma reagin test for detection of syphilis // J. of Clin. Microbiol. -1995. Vol. 33. - №7. -P. 1829-1831.

221. Simon M., Milward F., Lefebvere R. et al. Spirochetes: vaccines, animal models and diagnostics // Res. Microbiol. 1992. - Vol. 143. - № 6. - P. 641-647.

222. Stienstra S., Peeters T., Van der Straaten A.M., Kadir N. Treponema pallidum membrane protein A ELISA: a new test for screening and diagnosis of syphilis // Beitr. Infusionsther. 1992. Vol.30. -P.85-91.

223. Vaisman A., Hamelin A. Les antigenes treponemiques dans le sérodiagnostic de la syphilis // Presse med. 1958. - № 66. - P. 1357-1358.

224. Van der Sluis J. J. Laboratoris techniques in diagnosis of syphilis. //Geritourin Med. 1992. - Vol. 68. - P. 413-419.

225. Vajpayee M., Malhotra N., Pandey R.M. et al. Human immunodeficiency virus and syphilis seropositivity among patients attending clinic for sexually transmitted disease letter. [In Process Citation] I I Int. J. STD AIDS. 2000. - Vol. 11 (7). - P.482.

226. Vila P., .Hernander M.C, Lopez-Fernandez M.F. et al.Prevalence, follow-up and clinical significance of the anticardiolipin antibodies in normal subjects // Thromb-Hemoctr. 1994. - Vol.72. - № 2. - P. 209-213.

227. Wachter M.S., Johnson R.C. Treponeme outer envelope'.Chemical analysis //Proc. Soc. Exp. Biol, and Med. 1976. - Vol. 151. - № 1. - P. 97-100.

228. Warburg O., Christian W., Isolierung and Kristallisation des Garug-sterments Enolase//Biochem. J. 1941. -V.310. - P. 1120-1122.

229. Young H. Syphilis. Serology //Scotland Determatol. Clin. 1998. -Vol. 16(4). - P. 691-698.

230. Young H., Moyes A., de Ste Croix I., McMillan A. A new recombinant antigen latex agglutination test (Syphilis Fast) for the rapid serological diagnosis of syphilis // Int. J. STD AIDS. 1998. - Vol.9(4). -P.196-200.

231. Young H., Moyes A., Mc.Millan A. et al. Enzyme immunoassay for anti-treponemal IgG: screening or confirmatory test? // J. of Clin. Pathol. 1992. -Vol.45.-№1,- P. 37-41.

232. Young H. (Янг X.) Рекомендации по серологической диагностике сифилиса //Инф., передав. Пол. Путем. 2001. - №3. - С.10-12.Ц1. ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

233. Для повышения специфичности трепонемных антигенов необходимо подвергать их специальной очистке путем переосаждения сульфатом аммония, гельфильтрации, иммуносорбции неспецифических антигенов.

234. При получении полиакролеинового суспензионного диагности-кума для РАЛ оптимальными условиями сенсибилизации латексных микросфер комплексным трепонемным антигеном являются: 0,20 мг лиганда на 2 мл 2 % полимерного носителя 3 часа при 22 °С.

235. При конструировании иммунодиагностикума с частицами коллоидного серебра для эффективной стабилизации золя серебра необходим комплексный трепонемный антиген в количестве 375 мкг на 10 мл золя.

236. МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ И СОЦИАЛЬНОГО РАЗВИТИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

237. Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт

238. УТВЕРЖДАЮ ДиректйЙЩ^мюпольского на^^л^о^льского " гтитута,1. Деятель науки:5Фгв|•рМШфременко « 2004 г.

239. ПОЛУЧЕНИЕ И ПРИМЕНЕНИЕ СУСПЕНЗИОННЫХ ТРЕПОНЕМ-НЫХ АНТИГЕННЫХ ЛАТЕКСНОГО ДИАГНОСТИКУМА И ИММУ-НОДИАГНОСТИКУМА С КОЛЛОИДНЫМ СЕРЕБРОМ ДЛЯ ЭКСПРЕСС-АНАЛИЗА НА СИФИЛИС1. Методические рекомендации1. Ставрополь, 2004 г

240. МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РЕСПУБЛИКИ СЕВЕРНАЯ ОСЕТИЯ-АЛАНИЯ

241. СЕВЕРО-ОСЕТИНСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ МЕДИЦИНСКАЯ АКАДЕМИЯ

242. Кафедра инфекционных болезней ДЖАНАЕВ В.Ф.

243. ХАРАКТЕРИСТИКА ЗАБОЛЕВАЕМОСТИ СИФИЛИСОМ С 1999 ПО 2003 г.г. В РСО-АЛАНИЯ С УЧЁТОМ РЕГИОНАЛЬНЫХ ОСОБЕННОСТЕЙ И СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ МЕТОДОВ И МЕР ПО ЕЁ1. СНИЖЕНИЮ.

244. Методические рекомендации)1. Владикавказ 2004 г.

245. РЕСПУБЛИКА СЕВЕРНАЯ ОСЕТИЯ-АЛАНИЯ

246. Министерство здравоохранения Республиканский кожвендиспансергор. Владикавказ, проспект Доватора, 22, телефоны: 52-23-31, 52-24-281. От № 1. АКТ

247. Зав.централизованной лабораторией РКВД, РСО Алании в г. Владикавказ

248. Врач-лаборант централизованной лаборатории РКВД, РСО-Алан г.Владикавказбегоноваанаев

249. РЕСПУБЛИКА СЕВЕРНАЯ ОСЕТИЯ-АЛАНИЯ

250. Министерство здравоохранения

251. Республиканский кожвеедиспансергор. Владикавказ, проспект Доватора, 22, телефоны: 52-23-31, 52-24-281. От №1. АКТ

252. Зав.централизованной лабораторией тАлбегонова

253. РКВД, РСО Алании в г. Владика!

254. Врач-лаборант централизованной Джанаевлаборатории РКВД, РСО-Аланид г.Владикавказ