Клиническая оценка современных методов диагностики у больных ранними формами сифилиса (клинико-лабораторное исследование) тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.11, кандидат медицинских наук Дударева, Людмила Анатольевна

• Дударева, Людмила Анатольевна
• кандидат медицинских наук
• 2007

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Дударева, Людмила Анатольевна

Список использованных сокращений.

Введение.

Глава 1 Обзор литературы

1.1 .Кпинико-эпидемиологическая характеристика сифилиса на современном этапе.

1.2.Методы лабораторной диагностики ранних форм сифилиса.

1.2.1. Прямые методы исследования.

1.2.1.1. Темнопольная микроскопия.

1.2.1.2. Использование полимеразной цепной реакции для диагностики сифилиса.:.

1.2.1.3.Принципы и методы постановки полимеразной цепной реакции.

1.2.1.4. Современные данные о применении полимеразной цепной реакции для диагностики сифилиса.

1.2.2. Серологические методы, используемые для диагностики сифилиса.

1.2.2.1 .Нетрепонемные тесты.

1,2.2.2.Трепонемные тесты.

1.2.2.3 .Иммуноблоттинг.

Глава 2 Материалы и методы обследования

2.1. Этапы выполнения работы, исследованный контингент и материалы.

2.2. Прямые методы диагностики сифилиса.

2.2.1. Микроскопия в темном поле.

2.2.2. Полимеразная цепная реакция.

2.3. Серологические методы диагностики сифилиса.

2.3.1. Классические методы серологической диагностики сифилиса.

2.3.2. Метод иммуноблоттинга.

Глава 3 Результаты исследования

3.1. Особенности современного клинического течения первичного и вторичного сифилиса.

3.2. Диагностическая значимость полимеразной цепной реакции в сравнении с темнопольной микроскопией у больных с манифестными проявлениями при ранних формах сифилитической инфекции (первичный и вторичный сифилис).

3.3. Эффективность метода иммуноблоттинга при диагностике ранних форм сифилиса и у лиц, находившихся в половом контакте с больными сифилисом.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Клиническая оценка современных методов диагностики у больных ранними формами сифилиса (клинико-лабораторное исследование)»

Актуальность. Несмотря на успехи, достигнутые в последние годы отечественной и зарубежной сифилидологией, проблема диагностики ранних форм сифилитической инфекции (первичного, вторичного, раннего скрытого сифилиса) остается по-прежнему актуальной. Это определяется эпидемиологическими особенностями распространения инфекции при ранних формах сифилиса: высокой контагиозностью специфических проявлений на коже и слизистых оболочках больных, опасностью заражения половых партнеров, возможностью развития врожденного сифилиса. В связи с несвоевременным установлением диагноза на ранних стадиях инфекции отмечается рост заболеваемости поздними формами сифилиса, нейросифилисом. Следует отметить патоморфоз сифилитической инфекции, который в последние десятилетия коснулся не только клинических, но и серологических особенностей заболевания. Данное обстоятельство вызывает необходимость разработки эффективных алгоритмов диагностики сифилиса на ранних стадиях заболевания с учетом клинико-лабораторных данных (Островский А.Г., 2003).

К проблемам диагностики ранних форм сифилитической инфекции на современном этапе относятся: недостаточно высокая чувствительность темнопольной микроскопии (ТПМ), трудность дифференциации патогенных трепонем и трепонем-сапрофитов; наличие «серологического окна» при первичном сифилисе, когда классические серологические реакции дают отрицательный результат, ложно пол ожител ьн ы е и ложноотрицательные результаты серологических реакций на сифилис.

С целью решения вышеуказанных проблем создаются новые методы диагностики. При этом среди прямых методов наибольшее развитие получила полимеразная цепная реакция (ПЦР), а среди серологических методов -иммуноблотгинг (ИБ).

Диагностическая чувствительность ПЦР во многом зависит от клинического материала, взятого для исследования (кровь, спинномозговая жидкость, рейц-серум сифилидов и др.)- Наибольшая чувствительность достигается при исследовании отделяемого сифилидов ввиду большей концентрации возбудителя в материале для исследования. Специфичность метода во многом обусловлена правильным выбором мишени для амплификации. Наиболее специфичными, по данным литературы, являются 47kDa, polA и 16s рибосо мальный ген РНК гены ДНК T.pallidum. Выявляя в исследуемом материале фрагмент ДНК, характерный только для данного возбудителя, что обеспечивается нуклеотидной последовательностью праймеров, ПЦР-диагноста кумы, в отличие от иммунологических методов, исключают проблемы, связанные с перекрестно-реагирующими антителами тем самым обеспечивая абсолютную специфичность. Вместе с тем, метод ПЦР при диагностике сифилиса пока носит исследовательский статус. Работы, посвященные сравнительному изучению данного метода в сравнении с другими прямыми методами детекции возбудителя сифилиса, представляют в России значительную редкость (Шахматов Д.А. 1999; Петухова И.И., 2002; Стрельченко О.В., 2002), что не позволяет разработать рекомендации по применению ПЦР при диагностике ранних форм сифилиса.

Несмотря на широкое применение прямых методов исследования, на первом месте по частоте использования в диагностике сифилиса продолжают оставаться непрямые (серологические) методы. Итоговый результат, получаемый при постановке любой их серологических реакций на сифилис, зависит от содержания в испытуемой сыворотке крови специфических антител к этим антигенным детерминантам возбудителя сифилиса. Вместе с тем, не все из применяемых методов исследования являются адекватными при диагностике ранних стадий заболевания, что влечет за собой ошибки диагностики и несвоевременное назначение лечения. Это вызывает необходимость совершенствования диагностических методов и определения их роли среди общепринятых методов исследования.

Одним из перспективных непрямых методов диагностики сифилитической инфекции является метод иммуноблотганга (ИБ). Метод является одним из вариантов иммуноферментного анализа и заключается в одновременном выявлении антител к рекомбинантным антигенам бледной трепонемы, иммобилизованным на нейлоновых тест-полосках. За счет высокой степени очистки рекомбинантных антигенов и одновременного выявления антител к наиболее иммуногенным детерминантам возбудителя сифилиса метод обладает высокой чувствительностью и специфичностью (George R., 1998; Marangoni А., 2000, Backhouse J.L.,Nesteroff S.I., 2001; Sambri V. et al., 2001; Hagedorn HJ. et al., 2002). При сравнении IgM и IgG диагностикумов большинство зарубежных авторов отдает предпочтение IgG-иммуноблоттингу как более высокочувствительному на всех стадиях заболевания сифилисом (Кувшинов М.В. с соавторами, 2006; Baker-Zander S.A., 1986; Sanchez Р.J., 1988; Schmidt B.L., 1994). Среди отечественных дерматовенерологов отношение к данному методу диагностики еще не сформировалось. Не установлена диагностическая значимость метода иммуноблотганга у больных ранними формами сифилитической инфекции, не разработаны клинические рекомендации для использования этого метода при первичном, вторичном, скрытом раннем сифилисе, а также у лиц, бывших в половом контакте с больными сифилисом.

Целью настоящего исследования явилась клиническая оценка значимости использования современных методов диагностики (полимеразной цепной реакции и иммуноблотганга) у пациентов с ранними формами сифилиса.

В задачи исследования входило: 1. Изучить особенности клинического течения ранних манифестных форм сифилиса (первичного и вторичного) на современном этапе.

2. Провести сравнительное изучение диагностической значимости полимеразной цепной реакции в сравнении с темнопольной микроскопией у больных с манифестными проявлениями при ранних формах сифилитической инфекции (первичный и вторичный сифилис).

3. Исследовать эффективность метода иммуноблоттинга при диагностике ранних форм сифилиса (первичный, вторичный и скрытый ранний сифилис) и у лиц, находившихся в половом контакте с больными сифилисом (ЛБПК).

4. Разработать рекомендации по применению полимеразной цепной реакции и иммуноблоттинга для диагностики ранних форм сифилиса.

Научная новизна исследований:

Впервые на большом клиническом материале показана высокая диагностическая эффективность полимеразной цепной реакции и иммуноблоттинга в сравнении с общепринятыми методами исследования: темнопольной микроскопией (ПЦР) и регламентированными для диагностики сифилиса серологическими тестами (иммуноблотгинг) при диагностике ранних форм приобретенного сифилиса. Практическая значимость:

Впервые в практике отечественной дерматовенерологии разработаны рекомендации по рациональному использованию методов ПЦР и иммуноблоттинга, позволяющие устанавливать диагноз при ранних формах сифилиса, что будет способствовать своевременному выявлению больных сифилисом в сложных клинических ситуациях и повышению уровня оказания медицинской помощи населению.

Отмечены особенности современного клинического течения первичного и вторичного сифилиса, что будет способствовать уменьшению диагностических ошибок и своевременному выявлению заболевания.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Клиническое течение ранних манифестных форм сифилитической инфекции (первичного, вторичного сифилиса) в настоящее время имеет ряд особенностей в сравнении с данными дерматовенерологов конца XIX - первой половины XX века.

2. Метод ПЦР с использованием в качестве мишени гена tpp47 T.pallidum является более чувствительным методом при исследовании райц-серума сифилидов больных первичным и вторичным сифилисом в сравнении с прямым методом - темнопольной микроскопией. Специфичность метода ПЦР составляет 100%.

3. Метод линейного иммуноблоттинга имеет высокую чувствительность при диагностике ранних форм приобретенного сифилиса, превышающую чувствительность нетрепонемных и трепонемных тестов (кроме РИФабс) при первичном сифилисе и чувствительность нетрепонемных и трепонемных тестов при скрытом раннем сифилисе. Специфичность метода составляет 98%.

4. Методы ПЦР и иммуноблоттинга могут быть рекомендованы к применению на ранних стадиях сифилитической инфекции (первичный, вторичный, скрытый ранний сифилис, у лиц, бывших в половом контакте с больными сифилисом) в качестве дополнительных к регламентированным методам диагностики сифилиса.

Апробация работы:

Основные результаты диссертации доложены и обсуждены на IX Всероссийском съезде дерматовенерологов, Москва, 2005; IX, XI и XII междисциплинарных симпозиумах «Новое в дерматовенерологии, андрологии, акушерстве и гинекологии: наука и практика», Москва, 2004,2006,2007гг. Публикации.

По теме диссертации опубликовано 8 печатных работ.

Структура и объем диссертации.

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, характеристики материалов и методов исследования, результатов собственных исследований, заключения, выводов и списка литературы. Работа изложена на 168 страницах машинописного текста, включает 5 таблиц и 19 рисунков. Указатель литературы содержит 335 источников, из них 143 отечественных и 192 иностранных авторов.

Заключение диссертации по теме «Кожные и венерические болезни», Дударева, Людмила Анатольевна

Выводы:

1 .В результате проведенных исследований установлены особенности современного клинического течения ранних манифестных форм сифилитической инфекции в сравнении с данными дерматовенерологов конца XIX - первой половины XX века, которые заключаются в значительной частоте регистрации язвенных, множественных и осложненных твердых шанкров и отсутствии специфического лимфангита у больных первичным сифилисом и в увеличении частоты встречаемости папулезных высыпаний на ладонях и подошвах, значительной частоте регистрации пустулезных сифилидов, уменьшении частоты встречаемости специфической алопеции у больных вторичным сифилисом.

2. В результате сравнительного изучения диагностической эффективности ПЦР и темнопольной микроскопии при исследовании райц-серума сифилидов больных первичным и вторичным сифилисом установлена более высокая чувствительность метода ПЦР с использованием в качестве мишени гена tpp47 T.pallidum (диагностикум «Амплисенс Treponema pallidum»): при первичном сифилисе чувствительность ПЦР составила 100%, ТПМ - 76,5%, р<0,05; при вторичном сифилисе чувствительность ПЦР составила 80,5%, ТПМ - 51,2% , р<0,001). Специфичность ПЦР составила 100%.

З.При обследовании больных ранними формами сифилиса методом иммуноблоттинга и стандартными серологическими методами (РМП, РСК, ИФА, РПГА, РИФабс) выявлена высокая чувствительность линейного npw иммуноблоттинга (диагностикум «INNO-Lia Syphilis Score») при диагностике первичного (чувствительность 100%), вторичного (чувствительность 100%), скрытого раннего (чувствительность 100%) сифилиса, обследовании лиц, бывших в половом контакте с больными сифилисом (чувствительность — 36%), превышавшая чувствительность стандартных нетрепонемных и трепонемных тестов (кроме РИФабс) при первичном сифилисе и чувствительность нетрепонемных и трепонемных тестов при скрытом раннем сифилисе. Специфичность метода составила 98%.

4.Результаты проведенных исследовании позволяют рекомендовать применение ПЦР и иммуноблоттинга на ранних стадиях сифилитической инфекции в качестве дополнения к общепринятым методам диагностики в следующих клинических ситуациях:

Метод ПЦР - при подозрении на первичный и вторичный сифилис, в особенности при отрицательных данных ТПМ, приеме системных и местных антибактериальных и антисептических препаратов, наличии микст-инфекции (в особенности герпетической).

Метод иммуноблоттинга - на ранних стадиях инфекции при обследовании лиц, бывших в половом контакте с больными сифилисом; при обследовании пациентов с подозрением на первичный сифилис при отрицательных результатах стандартных серологических реакций (РМП, РСК) и высоком риске заражения сифилисом; для подтверждения диагноза сифилиса скрытого раннего при противоречивых результатах классических серологических методов и необходимости проведения дифференциальной диагностики с ложноположительными результатами серологических реакций на сифилис.

134

Заключение

Заболеваемость сифилитической инфекцией в Российской Федерации остается напряженной. В особенности опасным для населения страны в целом является высокий уровень заболеваемости ранними формами инфекции, имеющими большую медико-социальную значимость. Это обусловливает необходимость изучения особенностей клинического течения ранних форм сифилиса в современных условиях, необходимость поиска путей и методов раннего выявления сифилиса путем разработки и внедрения в практику новых, высокочувствительных и специфичных методов диагностики.

К числу таких методов исследования относятся полимеразная цепная реакция и иммуноблотгинг, имеющие в России пока исследовательский статус.

Целью настоящего исследования явилась клиническая оценка значимости использования современных методов диагностики (полимеразной цепной реакции и иммуноблоттинга) у пациентов с ранними формами сифилиса.

В задачи исследования входило:

1. Изучить особенности клинического течения ранних манифестных форм сифилиса (первичного и вторичного) на современном этапе.

2. Провести сравнительное изучение клинической значимости полимеразной цепной реакции в сравнении с темнопольной микроскопией у больных с манифестными проявлениями при ранних формах сифилитической инфекции (первичный и вторичный сифилис).

3. Исследовать эффективность метода иммуноблоттинга при диагностике ранних форм сифилиса (первичный, вторичный и скрытый ранний сифилис) и у лиц, находившихся в половом контакте с больными сифилисом (ЛБГТК).

4. Разработать рекомендации по применению полимеразной цепной реакции и иммуноблоттинга для диагностики ранних форм сифилиса.

В ходе проведения настоящей работы было обследовано 211 пациентов с ранними формами сифилиса, в том числе 133 мужчины и 78 женщин в возрасте от 15 до 75 (средний возраст 28,9 лет).

На первом этапе исследования проводилось изучение особенностей современного клинического течения первичного и вторичного сифилиса путем сопоставления частоты изучаемых признаков заболевания с данными литературы прошлых лет. В этой же группе больных было проведено сравнительное изучение диагностических возможностей ПЦР по выявлению возбудителя сифилиса - бледной трепонемы - в сравнении с другим прямым методом диагностики - темнопольной микроскопией. Клиническим материалом для проведения ПЦР и темнопольной микроскопии служил райц-серум сифилидов, полученный с одних и тех же высыпных элементов для исследования обоими методами.

Для выполнения задач первого этапа на базе ПСБ №14 им. В.Г. Короленко и ряда кожно-венерологических диспансеров г. Москвы в период с января 2003 по февраль 2006 года был обследован 101 больной первичным и вторичным сифилисом. Диагноз первичного сифилиса был установлен у 19 человек (18,8%), в том числе у 14 мужчин и 5 женщин в возрасте от 15 до 52 лет; диагноз вторичного сифилиса - у 82 (81,2%) человек, в том числе у 58 мужчин и 24 женщин в возрасте от 15 до 75 лет. Группу контроля составили 118 пациентов с высыпаниями несифилитической этиологии на гениталиях и в полости рта.

На втором этапе исследования проводилось изучение диагностических возможностей иммуноблоттинга при диагностике ранних форм сифилиса в сравнении с другими серологическими методами. Для этого были исследованы сыворотки крови 210 пациентов, обследованных в ФГУ «ЦНИКВИ Росздрава» в период с ноября. 2003 по сентябрь 2005г.г. Часть из них (110 человек), составила опытную группу, в которую вошли больные первичным (46 человек), вторичным (25 человек) и скрытым ранним сифилисом (25 человек), а также лица, бывшие в половом контакте с больными заразными формами сифилиса (ЛБПК, 14 человек). Группу контроля (100 человек) составили лица, свободные от сифилитической инфекции: 50 больных дерматозами и 50 доноров.

В качестве клинического материала на втором этапе исследования были использованы сыворотки крови пациентов, полученные стандартным способом.

Для получения сравнительных данных диагностической эффективности ПЦР и темнопольной микроскопии использовались: стандартный метод темнопольной микроскопии и метод ПЦР. При этом для выявления ДНК Т. pallidum методом ПЦР использовался диагностикум «Амплисенс Treponema pallidum» производства ФГУН ЦНИИ эпидемиологии Роспотребнадзора» (№ государственной регистрации JIC-000916 от 18.11.2005г.). В качестве мишени для амплификации в данной тест-системе применен фрагмент гена поверхностного антигена бледной трепонемы - tpp47 (PCR tpp47), который отсутствует у других видов рода Treponema.

В случае несовпадения результатов ПЦР и ТПМ проводилось дополнительное тестирование образцов с помощью некоммерческой ПЦР-тест-системы, разработанной ФГУН «ЦНИИ эпидемиологии Роспотребнадзора» с прайм ерами к 168-рибосомальному гену микроорганизмов рода Treponema и последующей обратной транскрипцией, позволявшей на основе полученной РНК выявлять ДНК бледной трепонемы (PCR-16S-DNA). Входящие в состав тест-системы олигонуклеотидные праймеры позволяли амплифицировать фрагмент ДНК не только бледной трепонемы, но и ДНК других видов трепонем. Для этого был использован метод секвенирования. Полученные данные анализировались с помощью программного обеспечения BLAST и международной базы данных генетической информации GenBank, что позволяло установить вид микроорганизма.

В целях установления причин несовпадения результатов ПЦР и ТПМ проводилась также дифференциация сифилитической и герпетической этиологии эрозивно-язвенных высыпаний в области гениталий. Для этого образцы райц-серума одновременно исследовались на предмет выявления ДНК вируса простого герпеса I и II типа (ВПГ-1 и ВПГ-2).

При верификации диагноза серологическими методами использовались методы диагностики, регламентированные Приказом № 87 «О совершенствовании серологической диагностики сифилиса» от 26.03.2001 года: реакция микропреципитации (РМП), реакция связывания комплемента (РСК), иммуноферментный анализ (ИФА), реакция пассивной гемагглютинации (РПГА), реакция иммунофлюоресценции с абсорбцией (РИФабс). Для постановки указанных реакций применялись зарегистрированные в Российской Федерации диагностикумы, выпускаемые на Российских и зарубежных предприятиях. Для постановки РИФабс, кроме того, использовался трепонемный антиген, полученный из 7-суточного орхита кролика (штамм Ни колье).

Для клинической оценки значимости использования иммуноблоттинга у пациентов с ранними формами сифилиса.была применена зарегистрированная в Российской Федерации коммерческая тест-система «ИННО-Лиа Сифилис усовершенствованный» («INNO - Lia™ Syphilis Score» производства фирмы «INNOGENETICS N.V.», Бельгия). Диагностикум дает возможность учитывать суммарный результат реакции по совокупности данных по всем детерминантам, а также (при необходимости изучить интенсивность иммунного ответа) проводить полуколичественную оценку результатов реакции по каждой антигенной детерминанте в отдельности.

Расчет средних значений показателей (М) с определением ошибки (т), среднего квадратического отклонения (ст), достоверности различий между показателями (t; р), частоты признаков (р) в выборке с вычислением ошибки (т) и достоверности различий между показателями проводился классическим методом с определением достоверности различий с помощью t-критерия Стъюдента и методом альтернативного варьирования. Статистический анализ проведен с помощью коммерческих пакетов программ Excel (Microsoft Office 2000) на персональном компьютере Pentium IV.

При изучении клинической картины у больных первичным и вторичным сифилисом были выявлены некоторые особенности, в частности, склонность к осложненному течению сифилитической инфекции, что коррелировало с негативными социально-эпидемиологическими тенденциями, имеющими место в настоящее время (ухудшение питания, социально-бытовых условий проживания большой части населения России.).

Несмотря на установленное при обследовании пациентов с первичным сифилисом преобладание эрозивных твердых шанкров (у 52,6% пациентов) над язвенными., эрозивные шанкры встречались значительно реже, чем в конце XIX века (по данным А.Фурнье - в 8 случаев из 10 - 80%), что совпало с результатами современных авторов (В.Н.Бугорского, 2003; А.В. Вислобокова, 2006), отметивших по результатам собственных наблюдений и по литературным данным значительное увеличение частоты регистрации язвенных шанкров у больных первичным сифилисом в течение последних десятилетий XX века (с 25% в 1992г. до 66,7% к 2003г.),

У больных первичным сифилисом выявлен значительный процент множественных первичных сифилом (47,4%), что коррелировало с данными авторов второй половины XX - начала XXI века (Антоньев А.А.,1978 - 39,1%; О.Г.Калугина, 2003 г. - 46,5%) и существенно отличалось от более низких показателей встречаемости множественных твердых шанкров, отмеченных дерматовенерологами конца XIX века (Ге А., 1895 - 13,6%; А.Фурнье 1899 -17,47%;) и дерматовенерологами первой половины XX века (Мещерский Г.И.Д936 - 20%; Григорьев П.Г.,1938 - 30%). Отмечена также высокая частота регистрации осложненных форм первичного сифилиса (фимоз, парафимоз), -у 31,6% пациентов, соответствующая данным, полученным П.М. Зориным (1974), О.К Шапошниковым (1980) и А.В Вислобоковым. (2006).

Регионарный лимфаденит был выявлен нами у всех обследованных (100%), что несколько отличалось от показателей, полученных в исследовании О.Г.Калугиной, 2003, отметившей отсутствие регионарного лимфаденита у 2.,2% пациентов, а также от данных П.М. Зорина, 1974, Ю.К. Скрипкина, 1975, А.А. Антон ьева, 1978, которые регистрировали отсутствие регионарного лимфаденита у 2,8% - 6,3% больных первичным сифилисом. Полученные нами данные не позволяют считать отсутствие регионарного склераденита одним из существенных признаков современного течения первичного сифилиса.

Вместе с тем, сопутствующий лимфангит не был отмечен ни у одного из обследованных пациентов (0%). Анализ данных литературы показал существенное снижение частоты регистрации данного признака: с 30% -18,6% в конце XIX века (Bassereau, 1895; Фурнье А., 1899) до 1,7% в начале XXI века (О.Г.Калугина, 2003), что позволило расценить его отсутствие у наблюдавшихся нами пациентов как одну из особенностей современного течения первичного сифилиса.

В результате проведенных исследований не отмечено каких-либо существенных отличий при сравнении клинических симптомов вторичного сифилиса с данными литературы прошлых лет. Вместе с тем, установлено существенное увеличение частоты встречаемости папулезных высыпаний на ладонях и подошвах (47,6%) в сравнении с данными авторов конца XIX века (Те А., 1895 - 4,5-6%;), 70-х годов XX века. (Скрипкин Ю.К., 1975 - 22,1%; Антоньев А.А.Д978 - 20,7%), что коррелирует с данными, полученными О.Г.Калугиной (2003), А.В Вислобоковым. (2006). Отмечено также увеличение частоты регистрации пустулезного сифилида (у 3,7% больных) в сравнении с данными авторов 60-70х годов XX века (Рахманов В.А., 1967- 2,4%; Абдулаев А.Х., 1972 - 0,57-2,1%; Антоньев А.А.,1978 - 1,3%). Выявлено значительное уменьшение частоты встречаемости сифилитической алопеции (у 13,4% больных) в сравнении с данными авторов конца XIX (Diday, 1895 - 90%) и отсутствие существенных изменений в частоте встречаемости лейкодермы (3,7% по результатам настоящего исследования; 4% - по данным Фурнье А.Д899; 2,1% - по данным Аковбяна В.А., 2002).

Таким образом, полученные в данной работе результаты анализа историй болезни пациентов с ранними манифестными формами сифилиса во многом соответствовали негативным современным тенденциям течения сифилитической инфекции, отмеченным в недавних исследованиях Калугиной О.Г. (2003) и Бугорского В.Н. с соавторами (2004). Проведенные исследования позволили констатировать изменение клинического течения ранних манифестных форм сифилитической инфекции (первичного, вторичного сифилиса) в сравнении с данными дерматовенерологов конца XIX - первой половины XX века, что может быть расценено, как ее патоморфоз.

Учет особенностей течения сифилитической инфекции на современном этапе имеет большую практическую значимость, способствует уменьшению числа ошибок диагностики, допускаемых клиницистами при обследовании больных с подозрением на сифилис, раннему выявлению сифилиса.

Одной из задач настоящего исследования являлась оценка клинической значимости полимеразной цепной реакции при диагностике ранних форм сифилиса. Для этого проводилось сравнение эффективности данного метода с методом прямого выявления возбудителя сифилиса - темнопольной микроскопией.

Метод ПЦР в настоящее время не относится к регламентированным методам диагностики сифилиса и носит исследовательский статус. Вместе с тем, учитывая его высокую чувствительность и специфичность, следует рассматривать возможность применения данного метода для диагностики сифилиса, в особенности в сложных случаях, когда обычные методы детекции дают отрицательный результат, а клинико-анамнестические данные не позволяют исключить сифилитическую инфекцию.

При анализе результатов параллельного исследования клинических образцов, полученных от больных с диагнозами первичного и вторичного сифилиса методами ПЦР и ТПМ полное совпадение результатов было получено у 67% пациентов, у остальных 33% обследованных было выявлено расхождение результатов этих методов исследования.

Максимальное число совпадений положительных результатов ТПМ и ПЦР отмечалось у больных с диагнозом первичного сифилиса (у 68,4% пациентов), что соответствовало современным взглядам о размножении Т. pallidum в первичном аффекте, предшествующем этапу диссеминации возбудителя. Известно, что первичный аффект развивается при концентрации возбудителя не менее чем 10 (Wicher К, et al., 1992). Однако при длительном существовании очага поражения, предварительно проведенном лечении пациента количество трепонем может значительно уменьшаться. В связи с этим со вторичного периода сифилиса количество возбудителя в очагах заметно падает, аллергический компонент в очаге (первичная сифилома) преобладает над воспалительным. Поэтому закономерным и ожидаемым явилось уменьшение числа пациентов с синхронно положительными результатами ПЦР и ТПМ у больных вторичным сифилисом (у 41,1% пациентов), а также то, что только при вторичном сифилисе у ряда пациентов (13 человек) отмечались отрицательные результаты ТПМ и ПЦР.

Анализ несовпадений результатов ТПМ и ПЦР позволил разделить этих пациентов на две группы. При этом у части обследованных (28 человек) ТПМ давала отрицательный результат, но методом ПЦР-//?/?4 /обнаруживалась ДНК бледной трепонемы. Процент пациентов с отрицательными значениями ТПМ был несколько выше среди больных с диагнозом вторичного сифилиса (24/82, 29,2%; у пациентов с диагнозом первичного сифилиса - 4/19, 21%). Дополнительное исследование клинического материала этих пациентов на наличие ДНК трепонем методом ПЦР-MS с последующим секвенированием и филогенетическим анализом подтвердило наличие T.pallidum.

Возможной причиной расхождения результатов исследования образцов этих пациентов методами ТПМ и ПЦР-(р/>47следует считать более высокую аналитическую чувствительность метода ПЦР. Данное предположение подтверждается результатами работ зарубежных и отечественных исследователей. Так, в работах Orle КА (1996), Liu Н. (2001) было показано, что предел детекции методов на основе ПЦР позволяет обнаруживать возбудителя сифилиса при очень низких концентрациях - до 2x10 клеток/мл, в то время как для ТПМ предел обнаружения составляет примерно 105 клеток/мл (Liu Н., 2001).При разработке тест-системы «Амплисенс T.pallidum», выпускаемой ФГУН «ЦНИИ эпидемиологии Роспотребнадзора», удалось добиться аналитической чувствительности в пределах 4x10 клеток/мл (Родионова Е.Н., 2003). К этому следует добавить данные полуколичественной оценки концентрации ДНК T.pallidum в различном клиническом материале, показывающие, что образцы отделяемого эрозивно-язвенных высыпаний при сифилисе обычно содержат от

2.2х104-5.7х 106 микроорганизмов, что нередко выходит за пределы детекции метода темнопольной микроскопии (Liu Н., 2001). Дополнительной причиной отрицательных результатов ТПМ являлось применение пациентами наружных (раствор КМп04, синтомициновая эмульсия, гентамициновая мазь и другие) или системных (сумамед, нолицин, гентамицин, бисептол, цифран) антимикробных препаратов, которые, очевидно, уменьшали количество в очагах бледных трепонем, доступных для их определения методом темнопольной микроскопии.

Одной из возможных причин получения отрицательного результата ТПМ может также являться некачественная техника взятия образца или исследования материала, поэтому отрицательный результат ТПМ не является основанием для исключения диагноза сифилиса (Глазко И.И. с совторами, 2006).

Большой интерес при выяснении причин несовпадений результатов ТПМ и ПЦР представляла группа пациентов, у которых бледная трепонема обнаруживалась методом ТПМ, а результаты исследования клинических образцов методом ПЦР-tpp47 были отрицательными. Эта группа была представлена двумя пациентами с диагнозом первичного сифилиса и тремя пациентами с диагнозом вторичного сифилиса. Обращало на себя внимание, что именно у этих двух пациентов с диагнозом первичного сифилиса результаты как трепонемных, так и нетрепонемных серологических тестов в период обследования были отрицательными, а диагноз был установлен на основании данных клиники и положительных результатов темнопольной микроскопии. Дополнительное молекулярно-генетическое исследование клинического материала этих пациентов с филогенетическим анализом показало, что у двух больных вторичным сифилисом в образцах присутствует ДНК Treponema putidum - недавно охарактеризованный новый вид трепонем, обитающий в ротовой полости и генетически близкий Treponema denticola (Wyss С., 2004). У обоих пациентов с диагнозом первичного сифилиса и одного пациента с диагнозом вторичного сифилиса была обнаружена ДНК Treponema refringens. Treponema putidum может обнаруживаться в материале с зубных налетов, участвуя в развитии острого некротизирующего гингивита и периодонтита, а Т.refringens, как известно, является сапрофитом, колонизируя наружные половые органы. Имеющиеся протоколы лабораторного обследования свидетельствуют о том, что у пациентов, у которых вместо T.pallidum была обнаружена T.putidum, материал забирался как раз со слизистой ротовой полости, а у пациентов с выявленной Т. refringens - с высыпаний в области половых органов. При этом ни у одного из пациентов группы С не было обнаружено фрагментов 168-рибосомального гена, принадлежащих T.pallidum. На основании полученных результатов можно предположить, что в материале у данных пациентов спирохеты, наблюдаемые при микроскопическом исследовании, были ошибочно приняты за Treponema pallidum. Такой вывод находит поддержку со стороны данных как зарубежной, так и отечественной литературы. В обзоре Larsen S. (1995), посвященном, лабораторным методам диагностики сифилиса, указывается, что даже опытный специалист может испытывать большие трудности при дифференциации T.pallidum от сапрофитных трепонем, при этом наиболее часто при микроскопическом исследовании T.pallidum путают с T.refringens и T.denticola. В отечественных руководствах также указывается на трудности в видовой идентификации спирохет из-за того, что T.refringens, T.phagedenis, T.denticola морфологические сходны с T.pallidum (Байчурина А. 3., (1999); Родионов А.Н. (2000); Савичева А.М., (2004)). Распространенность же сапрофитных трепонем может быть достаточно высокой. Так, по данным Hook (1985), они были обнаружены у 23% (7 из 30) клинически здоровых лиц.

Если при подозрении на вторичный сифилис в лабораторном обследовании акцент делается на выявлении серологических маркеров, которые к этому периоду инфекции выявляются у подавляющего большинства инфицированных, то в первичном периоде сифилиса результаты серологических реакций могут оставаться отрицательными еще в течение 1-4 недель после развития клинических проявлений инфекции. В этом случае прямое обнаружение возбудителя имеет важнейшее значение для установления окончательного диагноза. Данное положение может быть проиллюстрировано результатами обследования двух пациентов с диагнозом первичного сифилиса. Как уже было отмечено, этим двум пациентам, у которых впоследствии с использованием двух методологий ПЦР и секвенирования было подтверждено наличие в клинических образцах Treponema refringens, а не T.pallidum. Диагноз первичного сифилиса был поставлен при отрицательных результатах серологического обследования на основании клинических признаков -высыпаний эрозивно-язвенного характера в области головки полового члена, наличия регионарного лимфаденита и положительных результатов ТПМ. Кроме того, именно у этих двух пациентов из всех обследованных лиц в материале соскобов с высыпаний на коже была обнаружена ДНК вируса простого герпеса 2-го типа. Возможно, на фоне клинической картины, характерной для сифилиса, мнение специалиста, проводившего микроскопию, о видовой принадлежности наблюдаемых спирохет склонилось в пользу T.pallidum, в то время как причиной эрозивно-язвенных поражений гениталий, по-видимому, являлся ВПГ-2. Полученные результаты позволяют считать, что этим двум пациентам с эрозивно-язвенными проявлениями, вызванными ВПГ-2 и колонизированными сапрофитными трепонемами, на основе результатов ТПМ диагноз первичного сифилиса был поставлен ошибочно.

Изучение специфичности метода ПЦР при диагностике сифилиса, проведенное на 118 пациентах группы контроля, позволило подтвердить высокую специфичность метода. При этом результаты ПЦР оказались отрицательными у 116 пациентов и положительными - у 2-х женщин, у которых клинический материал был получен из цервикального канала и на момент обследования отсутствовали клинические проявления сифилиса. При динамическом наблюдении за данными пациентками была отмечена позитивация серологических реакций на сифилис и развились клинические признаки сифилиса. Возможно, в момент обследования клинические проявления инфекции у этих пациенток локализовались в области шейки матки и не были замечены при обследовании. Известно, что у женщин в 8 — 12% случаев первичная сифилома локализуется на шейке матки и редко — на стенках влагалища (Родионов А Н., 2000). В связи с этим представляет интерес выявление ДНК T.pallidum при ПЦР-анализе мазков из цервикального канала при отсутствии у пациенток клинических проявлений сифилиса на момент взятия проб. Возможно, твердый шанкр шейки матки встречается значительно чаще, чем диагностируется. Использование в данном случаев ПЦР в качестве скринингового метода позволит улучшить своевременную диагностику сифилитической инфекции. Кроме того, применение ПЦР целесообразно для дифференциальной диагностики заболеваний, имеющих сходную клиническую картину, в частности, при эрозивных поражениях слизистых оболочек герпетической этиологии, при трихомонозе, мягком шанкре.

Общий процент случаев гипердиагностики сифилиса с выявлением «бледных трепонем» методом ТПМ составил 5% (5человек из 101), причем темнопольная микроскопия проводилась квалифицированными специалистами разных лечебных учреждений.

Таким образом, проведенное исследование показало, что результаты метода ПЦР при обследовании лиц с подозрением на сифилис позволяют более объективно по сравнению с микроскопическим методом оценивать наличие возбудителя в исследуемом материале, обеспечивая точность поставленного диагноза. Широкая оснащенность современных диагностических лабораторий оборудованием для проведения ПЦР-исследований и наличие зарегистрированных коммерческих тест-систем позволяют ставить вопрос о включении данного метода в алгоритм лабораторного обследования лиц с подозрением на первичный и вторичный сифилис. В связи с этим следует считать целесообразным применять метод ПЦР при подозрении на первичный и вторичный сифилис, в особенности при отрицательных данных ТПМ, приеме системных и местных антибактериальных и антисептических препаратов, наличии микст-инфекции (в особенности герпетической).

На втором этапе исследования проводилось изучение эффективности метода иммуноблоттинга при диагностике ранних форм сифилиса и у лиц, находившихся в половом контакте с больными сифилисом.

В зарубежной литературе последних лет все чаще стали появляться указания на использование для диагностики сифилиса метода иммуноблоттинга (Sambri V., et al, 2001; Ebel A., et al, 2000; Hagedom H.J., et al, 2002). Отмечаются преимущества этого метода, в особенности его рекомбинантного варианта, перед другими тестами, обусловленные высокой чувствительностью и специфичностью, превосходящей таковые общепринятых трепонемных тестов: FTA^, МНА-ТР, ТРРА {Marangoni A, et al, 1999), отсутствием необходимости в опасных манипуляциях, связанных с перевивкой штаммов патогенной бледной трепонемы (Paris-HamelinA., et al, 1999), возможностью применения теста для диагностики раннего врожденного сифилиса в варианте IgM-иммуноблоттинга (Sanchez PJ-, et al, 1989; Lewis L.L., et al, 1990), а также для дифференциальной диагностики БЛПР, в особенности при аутоиммунных заболеваниях: ревматизме, системной красной волчанке, когда классические трепонемные тесты (FTA^) часто дают ложноположитеяьный результат (Murphy F.T., et al, 1999).

Среди отечественных дерматовенерологов отношение к данному методу диагностики еще не сформировалось. Это послужило поводом для проведения данного раздела работы.и позволило подтвердить высокие диагностические потенции метода иммуноблоттинга с применением тест-системы INNO-Lia Syphilis Score, сконструированной в формате линейного ИФА, для диагностики ранних форм сифилиса.

Чувствительность иммуноблоттинга при первичном сифилисе первоначально была определена, как 97,8 %. При этом у 1 пациента с отрицательным результатом ИБ был выявлен факт неправильного хранения материала пред исследованием, что не исключало возможности получения ложноотр и дательного ответа. При повторном обследовании больного с исследованием новой порции крови был получен положительный результат ИБ, что позволило сделать вывод о 100% чувствительности метода ИБ. Положительные результаты иммуноблоттинга регистрировались у ряда пациентов с первичным сифилисом при отрицательных результатах РСКк, РМП или РСКт, а также ИФА и РПГА. При этом чувствительность метода иммуноблоттинга достоверно превышала чувствительность РСКк (р<0,001), РМП (р<0,05) и РСКт (р<0,05).

Таким образом, проведенные исследования позволили сделать заключение о 100% чувствительности метода ИБ у больных первичным сифилисом, превышающей чувствительность нетрепонемных (РСКк; РМП) и трепонемных (кроме РИФабс) тестов.

У больных вторичным сифилисом положительными оказались результаты всех серологических методов (РСК, РМП, РПГА, РИФабс, ИФА, а также иммуноблоттинга (100% чувствительность), что соответствовало современным представлениям о развитии на вторичной стадии сифилитической инфекции максимального иммунного ответа организма больных к Т. pallidum и свидетельствовало о нецелесообразности использовать метод иммуноблоттинга для диагностики этой стадии инфекции.

При обследовании больных скрытым ранним сифилисом методом иммуноблоттинга положительные результаты были получены у всех пациентов (100% чувствительность). При этом положительные результаты иммуноблоттинга регистрировались у двух больных скрытым ранним сифилисом с разноречивыми данными классических серологических методов (РСКк и РМП - отрицательные, РСКт - положительная в низком титре), когда требовалось проведение дифференциальной диагностики с ложноположительными результатами стандартных серологических реакций. Таким образом, проведенные исследования позволили сделать заключение о 100% чувствительности метода ИБ у больных скрытым ранним сифилисом, превышающей чувствительность стандартных нетрепонемных и трепонемных тестов (Для сравнения: при скрытом раннем сифилисе чувствительность РМП и РСКк составила 92,0±5,5%, РСКт -96,0±4,0 %. Чувствительность РПГА, РИФабс и ИФА составила 96,0±4,0%.). Это подтвердило целесообразность применения данного метода серологической диагностики при необходимости подтверждения скрытого раннего сифилиса, в особенности при противоречивых результатах других методов исследования и необходимости проводить дифференциальную диагностику с ложноположительными результатами серологических реакций на сифилис.

Иммуноблоттинг оказался наиболее чувствительной реакцией, позволяющей устанавливать инфицированностъ у лиц, бывших в половом контакте с больными сифилисом. При обследовании лиц, бывших в половом контакте с больными сифилисом, положительный результат в иммуноблоте был получен у 36 % пациентов (5 человек), в то время как в РМП - у 7% обследованных, в ИФА - у 21%. Другие реакции (РСКТ, РСКк РИФабс и РПГА) у пациентов этой группы оказались отрицательными.

При изучении специфичности метода иммуноблоттинга, проведенного путем тестировании сывороток крови лиц без указаний на наличие сифилитической инфекции (100), все 50 сывороток крови от больных кожными заболеваниями и 48 сывороток крови, взятых от доноров крови, показали отрицательные результаты. У двух доноров были зарегистрированы положительные результаты им у нобл отти нга с невысокими уровнями позитивности реакции с отдельными рекомбинантными белками (на уровне 1-2+). Последующее обследование этих пациентов с помощью иммуноблоттинга и других специфических реакций (ИФА, РИФабс), проведенное через 2 недели после первого обследования, позволило установить ложный характер серопозитивности. Таким образом, специфичность линейного

TRjf иммуноблоттинга при использовании диагностикума «INNO-Lia Syphilis Score» составила 98%.

Метод иммуноблоттинга позволяет не только проводить диагностику сифилиса по суммарному результату реакции, но и, при необходимости, давать оценку вклада каждого из рекомбинантных белков диагностикума и образования к ним антител в формирование общего результата реакции.

Проведенные исследования показали, что антитела к отдельным рекомбинантным белкам Treponema pallidum (TpN17, TpN47, TpN15) регистрировались на самых ранних стадиях инфекции, начиная с периода инкубации (лица, контактные по сифилису, получающие превентивное лечение).

У этих пациентов максимальным было антителообразование по отношению к TpN17 (при количественном учете реакции по системе четырех «крестов» - на уровне 1,4 ± 0,01), однако образование антител по отношению к другим рекомбинантным антигенам бледной трепонемы (TpN47, TpN15, TmpA) было незначительным (к TpN47 - 0,9±0,01; к TpN15 - 0,8±0,005; к TmpA -0,8±0,06), что не позволило регистрировать положительный результат реакции у всех пациентов. При первичном сифилисе отмечалось значительное (но не максимальное - в сравнении с вторичным сифилисом) усиление антителообразования по отношению ко всем используемым в ИБ антигенам (максимально - по отношению к TpN17: 2,9±0,01; к TpN47: 2,7±0,01; к TpN15: 2,2±0,15, минимально - к TmpA - 1,7±0,03), что сопровождалось возрастанием числа положительных результатов иммуноблотганга до 100% за счет суммарного учета реакции на все рекомбинантные антигены.

В период «разгара» инфекции (вторичный, скрытый ранний сифилис) интенсивность антителообразования являлась максимальной и проявлялась в иммуноблоте по отношению ко всем четырем рекомбинантным антигенам Treponema pallidum (при вторичном сифилисе - к TpN17 - 3,8±0,003; к TpN47 -3,7±0,005; к TpN15 - 3,8±0,003; к TmpA - 3,1±0,005 ; при скрытом раннем сифилисе: к TpN17 - 3,8±0,007; к TpN47 - 3,3±0,003; к TpN15 - 3,3±0,007; к TmpA - 3,3±0,007), что обеспечивало 100% чувствительность реакции.

Таким образом, полученные данные свидетельствуют о том, что метод иммуноблотгинга может быть удобным инструментом для ранней диагностики сифилиса. Наличие таких его преимуществ, как высокая чувствительность, специфичность, относительная простота постановки и интерпретации результатов; возможность автоматизации и документирования данных, изучения спектра антител сразу к нескольким антигенам Т. pallidum и оценки вклада в общую реакцию антител различной специфичности; применение высокоочищенных рекомбинантных и пептидных антигенов, снижающих до минимума неспецифическую реактивность сывороток, и возможности отказа от трудоемких и субъективных методов, связанных с опасными для исследователя манипуляциями (перевивка штаммов Т. pallidum, работа с патогенной бледной трепонемой при постановке реакции), — все это определяет предпочтение метода иммуноблоттинга перед другими трепонемными тестами для диагностики сифилиса, в частности РИФ и в особенности РИБТ. Следует отметить высокую диагностическую эффективность иммуноблоттинга в возможном инкубационном периоде (что выявляется при обследовании лиц, бывших в половом контакте с больными сифилисом) и при первичном сифилисе, а также в сложных диагностических ситуациях, когда этот метод может выполнять функции референс-метода. Учитывая изложенное, следует считать целесообразным применение метода иммуноблоттинга на ранних стадиях инфекции при обследовании лиц, бывших в половом контакте с больными сифилисом; при обследовании пациентов с подозрением на первичный сифилис в случае отрицательных результатов стандартных серологических реакций (РМП, РСК) и высоком риске заражения сифилисом; для подтверждения диагноза сифилиса скрытого раннего при противоречивых результатах классических серологических методов и необходимости проведения дифференциальной диагностики с ложноположительными результатами серологических реакций на сифилис.

Таким образом, полученные данные, позволившие на большом клиническом материале показать высокую диагностическую эффективность полимеразной цепной реакции и иммуноблоттинга в сравнении с традиционными методами исследования, послужили основанием для разработки рекомендаций по применению изученных методов в качестве дополнения к общепринятым методам диагностики в следующих клинических ситуациях: Метод ПЦР - при подозрении на первичный и вторичный сифилис, в особенности при отрицательных данных ТПМ, приеме системных и местных антибактериальных и антисептических препаратов, наличии микст-инфекции (в особенности герпетической).

Метод иммуноблоттинга - на ранних стадиях инфекции при обследовании лиц, бывших в половом контакте с больными сифилисом; при обследовании пациентов с подозрением на первичный сифилис при отрицательных результатах стандартных серологических реакций (РМП, РСК) и высоком риске заражения сифилисом; для подтверждения диагноза сифилиса скрытого раннего при противоречивых результатах классических серологических методов и необходимости проведения дифференциальной диагностики с ложноположительными результатами серологических реакций на сифилис. f

132

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Дударева, Людмила Анатольевна, 2007 год

1. Аковбян В.А. Новый диагностический комплекс серологических реакций на сифилис: прощание с Вассерманом / Аковбян В.А. // Consilium medicum. Дерматология. Венерология,- 2003. - Т. 5. - №3. - С. 150-151.

2. Аковбян В.А. Анализ заболеваемости инфекциями, передаваемыми половым путем, в России / Аковбян В.А., Какорина Е.П., Сон И.М., Иванова М.А. // Частные вопросы дерматовенерологии. Саратов. 2006. - С. 112-113.

3. Аксенов М.Ю. Диагностика инфекционных заболеваний методом ПЦР / Аксенов М.Ю., Гинцбург А.Г. // Молекуляр. генетика, микробол. вирусол. 1993. - №4. - С.3-8.

4. Кузнецова Г.А. Сравнительный анализ использования линейного иммуноблота для диагностики сифилиса / Кузнецова Г.А. // IX Всероссийский съезд дерматовенерологов: Тез. докл. М.,2005. - Т. П. - С.45.

5. Аравийская Е.Р. Применение обоймы психологических тестов для изучения психологического профиля личности у пациентов с сифилисом: М-лы 31-й конф. дерматологов, акушеров-гинекологов и урологов. М., 1999. - С.57.

6. Артемьев М.И. ПЦР-детекция Treponema pallidum в клинических материалах / Артемьев М.И., Федоров Н.А., Максимов В.А. и др. // Полимеразная цепная реакция в диагностике и контроле лечения инфекционных заболеваний. М.,1998. - С. 40.

7. Бабий А.В. Клинико-серологическая оценка модифицированного иммуноферментного анализа для серодиагностики сифилиса: Дис. . канд. мед. наук./ Бабий АВ. М, 1990. -127 с.

8. Базиков И. А. Разработка прямой реакции иммунофлюоресценции для визуализации бледных трепонем / Тюменцева И.С., Афанасьев Е.Н. // Рос. журн. кож. и вен. болезней. 2002. - №1. - 41-43.

9. Байчурина А. 3. Медицинская микробиология / Байчурина А. 3., Гильманова Г.Х., Григорьев. В.Е., Ершов Ф.И. и др. Москва: «ГЕОТАР», 1999.- 1200 с.

10. Беднова В.Н. Новый сорбент для постановки РИФ-абс на сифилис / Беднова В.Н., Коляденко В.Г., Павлова Е.В., Степаненко В.И., Милонова Т.И. // Вестн. дерматол. венерол. 1992. - №6. - С.37-39.

11. Беднова В.Н. Новая тест-система ИФА на сифилис / Беднова В.Н., Дмитриев Г.А., Бабий А.В., Милонова Т.Н. // Вестн. дерматол. венерол. 1994.- №.4.-С. 51.

12. Белохвостое А.С. Военная медицина. Проблемы профилактики, диагностики, лечения экстремальных состояний / Белохвостое А.С. М.,1994.- С. 336-343.

13. Белохвостое А.С. Полимеразная цепная реакция и лигазная реакция, принципы, традиционные методики и нововведения / Белохвостое А. С. // Молек. генетика, микробиол. и вирусол. 1995. - №.2. - С. 21-26.

14. Борисенко К.К. Современные особенности клиники и течения сифилиса, ошибки его диагностики / Борисенко К.К. Винокуров И.Н., Потекаев Н С. и др. М.,1989. - С.3-39.

15. Борисенко К.К. Сочетание сифилиса и ВИЧ-инфекции / Борисенко К.К., Зудин Б.И., Назарова А.Ю., Цераиди Н.Ф., Шакиров М.Т., Топоровский JI.M. // Вестн. дерматол. и венерол. 1990. - № 1. - С.72-76.

16. Борисенко К.К. Сифилис междисциплинарная проблема / Борисенко К.К. // М-лы рабоч. совещ. дерматовенер. и акушеров-гинекологов. - М., 1999, - С. 11-12.

17. Бугорский В.Н. Клинико-эпидемиологические ососенности ранних форм сифилиса в Тульском регионе в периоды роста и снижениязаболеваемости: Автореф. дне. канд. мед. наук. / Бугорский В Н. М, 2003. -21 с.

18. Бугорский В.Н. Современные особенности клиники ранних форм сифилиса / Бугорский В.Н., Халдин А.А., Рюмкина Н.А. // Клин, дерматол. и венерол. 2004. - №1. - С.30-33.

19. ВИЧ-инфекция в дерматовенерологической практике: ме-тод.указания. Киев: ЦМК МЗ Украины 1993. - С.27—28.

20. Власов В.В. Как читать медицинские статьи: Часть 2. Исследования, посвященные методам диагностики / Власов В.В. // Междунар. журн. мед. практики. -1997. №. 1 .-С. 11-16.

21. Виноградов А.В. Цифровые методы регистрации результатов ПЦР/ Виноградов А.В. // Полимеразная цепная реакция в диагностике и контроле лечения инфекционных заболеваний. М.,1998. - С. 136-139.

22. Галлямова Ю.А. Профилактика ИППП важный фактор сохранения репродуктивного здоровья / Галлямова Ю.А., Пивень Н.П., Матвиенко И.Н. // Вестн. последиплом. мед. образования. - 2004. - №3-4. - С. 64-67.

23. Глазко И.Н. Современные подходы к молекулярной диагностике сифилиса / Глазко И.И., Дмитриев Г.А. // Венеролог. 2006. - №10. - С.36-42.

24. Говорун В.М. Новые направления в ДНК-диагностике / Говорун В.М. // Полимеразная цепная реакция в диагностике и контроле лечения инфекционных заболеваний -М.,1998.-С. 12-13.

25. Гражданцева А.А. Исследование сывороток больных сифилисом методом иммуноферментного анализа с использованием рекомбинантныхантигенов / Гражданцева А.А., Кочнева Г.В., Сиволобов Г.Ф. и др. // Иммунология. 1998. - №4. - С.20-23.

26. Гражданцева А.А. Клонирование и экспрессия в Е. coli основных антигенов Treponema pallidum и исследование их иммунохимических свойств / Гражданцева А.А, Сиволобова Г.Ф., Урманов И.Х. // Иммунология. 1998. -№4. - С. 17-20.

27. Гражданцева А.А. Рекомбинантные антигены в развитии ИФА для диагностики сифилиса: Автореф. дне. . канд. биол. наук. / Гражданцева А.А. -Кольцове (Новосибирская область), 2000. 37 с.

28. Гусева С.Н. Дополнительный критерий к постановке диагноза серорезистентности при сифилисе / Гусева С.Н., Пирятинская А.Б., Карякина JI.A., Радченко И.Д. // IX Всерос. съезд дерматовенерологов: Тез. докл. -М.,2005. Т.П.-С.45.

29. Гущин А.Е. Возможности и перспективы метода полимеразной цепной реакции (ПЦР) в диагностике ранних форм сифилиса / Гущин А.Е., Баткаев Э.А., Топоровский Л.М., Чухриенко И.Ю., Дударева JI.A. // Вестн. последиплом. мед. образования. 2005. - №1. - С.65.

30. Гущин А.Е. Сифилис: проблемы диагностики и возможности молекулярно-биологических технологий / Гущин А.Е., Родионова Е.Н., Шипулин Г.А., Кубанова А.А. и др. // 5-я Всерос. науч.-практ. конф.: Генодиагностика ИППП: Сб. тр. М., 2004. - С.24-27.

31. Зб.Дмитриев Г.А. Общественный прогресс остановить невозможно /

32. Дмитриев Г.А // Клин, дермат. и венерол. 2004. - №1. - С.92-93.

33. Дмитриев Г. А Современные методы лабораторной диагностики сифилиса. Ч. 1. / Дмитриев Г.А, Брагина Е.Е. // Вестн. дерматол. венерол. -1996. №2. - С.29-33.

34. Дмитриев Г. А. Современные методы лабораторной диагностики сифилиса. Ч. 2. / Дмитриев Г.А, Брагина Е.Е. //Вестн. дерматол. венерол. -1996. №3. - С.33-38.

35. Дубенский В.В. Диагностика сифилиса сердечно-сосудистой системы / Дубенский В.В., Аникин В.В., Балашова И.Ю., Камалдынова О.Е. // Клин, дерматол. и венерол. 2004. - №1. - С.24-26.

36. Зигангирова Н.А., Гинцбург A.JI., Четина Е.В., Прозоровский С.В. // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунопатол. 1991. - №.11. - С. 20-24.

37. Ибрагимова Л.Э. Пути инфицирования и обстоятельства выявления инфицированных ВИЧ лиц призывного возраста в Ульяновском регионе / Ибрагимова Л.Э., Гладько В.В., Соколова Т.В. // Веста, последиплом. мед. образования. 2004. - №1. - С.87-88.

38. Иванова М.А. Сифилис и беременность / Иванова М.А., Лосева O.K., Коробейникова Э. А., Кравцова Е.Я., Федорова И.В. // Вестн. дерматол. венерол. -2000.-№.6.-С.63-66.

39. Ивин Д.И. Выявление латентных форм урогенитальных инфекций у половых партнеров / Ивин Д.И., Кохрсидзе Н.А., Веденеева Г.Н. // Полимеразная цепная реакция в диагностике и контроле лечения инфекционных заболеваний. М.,1998. - С. 55-57.

40. Ильина Е.Н. Масс-эррей как инструмент анализа резистентности бактериальной флоры / Ильина Е.Н., Малахова М.В., Верещагин В.А., Припутневич Т.В., Говорун В.М. // IX Всерос. съезд дерматовенерологов: Тез. докл. М.,2005. - Т. П. - С.41.

41. Калугина О.Г. Особенности клинической картины сифилиса на современном этапе: Дис.канд. мед. наук. /Калугина О.Г. СПб., 2003.

42. Каральник Б.В. Причины ложноположительных результатов с рекомбинантными препаратами на ВИЧ-инфекцию / Каральник Б.В., Рязанова Г.А., Шуратов И.Х. // Журн. микробиол. эпидемиол. иммунопатол. 1991. -№1. - С.32-35.

43. Касаткина Е.В. Модификация иммуноферментного анализа длядиагностики сифилиса / Касаткина Е.В. // Актуальные вопросы профилактики и клинической медицины. СПб., 1994. - С. 27-28.

44. Каур Р. Усовершенствование методов диагностики сифилиса при помощи определения антител к специфическим белкам возбудителя / Каур Р., Сильм X., Виндиревских Г., Шевчук О. // ЗППП. 1998. - №4. - С.21-22.

45. Кожные и венерические болезни: Рук-во для врачей в 2т. / Под ред. Ю.К. Скрипкина, В.Н. Мордовцева. М: Медицина, 1999. - T.l. - С.530, 565580, 751—753.

46. Козенко Л.И. Выявление ВИЧ-инфекции у больных сифилисом / Козенко Л.И., Лин В.Н., Кириуцов А.М. // Вестн. дерматол. венерол. 2004. -№4. - С.56.

47. Козырева Л.Т. Возрастно-половые группы риска в заболеваемости сифилисом населения в республике Северная Осетия-Алания в 1995-2000 годах / Козырева Л.Т., Яцуха М.В. // Вестн. последиплом. мед. образования. -2002. -№1.-С. 93.

48. Коломойцев А.В. Повышение эффективности диагностики различных форм сифилиса на основе иммуноферментного анализа: Автореф. дис. канд. мед. наук. / Коломойцев А.В. Пермь, 2005. - 21 с.

49. Кон И.С. Сексуальная культура в России: клубничка на березке / Кон И.С.- М:ОГИД997.-С.279-298, 337-350.

50. Контактные инфекции, передающиеся половым путем / Под. ред. И И. Маврова . Киев, 1989. - 384 с.

51. Корогодин Д.В. Новые рекомбинантные антигены: использование в серодиагностике сифилиса / Корогодин Д.В., Богуш П.Г., Казарова Т.А., Редченко Е.Б., Чиркова Е.Ю. // IX Всерос. съезд дерматовенерологов: Тез. докл. М.,2005. - Т. П. - С.47.

52. Котровский А.В. Разработка и клиническая оценка методики постановки иммуноферментного анализа на поверхности твердофазного носителя для серодиагностики сифилиса: Автореф. дис. . канд. мед. наук. /

53. Котровский А.В. М, 1986. - 16 с.

54. Кочетов Д.П. Состояние сердечно-сосудистой системы у больных сифилисом в процессе лечения и клинико-серологического контроля / Кочетов Д.П., Фриго Н.В. // Сб. науч. тр. Горьковского НИКВИ: Горький, 1972. Т. 31.- С.61-66.

55. Кубанова А. А. Современные представления об эпидемическом процессе инфекций, передаваемых половым путем, и ВИЧ-инфекции / Кубанова АА, Аковбян В.А., Тоскин И.А. // Вестн. дерматол. венерол. 2000. - №6. - С. 14-19.

56. Ловенецкий А.Н. Совершенствование серологической диагностики сифилиса в Российской Федерации: первые итоги действия приказа Минздрава РФ №87 / Ловенецкий А.Н. // Клин, дерматол. и венерол. 2002. - №1. - С.39-43.

57. Лосева O.K. Сифилис и беременность / Лосева O.K. // Современные методы диагностики, терапии и профилактики ИППП и других урогенитальных инфекций: Сб. м-лов раб. совещ. дерматовенерологов и акушеров-гинекологов.- М.,1999-2000. С.13-18.

58. Лосева O.K. Сифилис и беременность / Лосева О.К. // Венеролог. -2006.-№8.- С. 13-20.

59. Лосева О.К. Эпидемиология. Клиника, диагностика и лечениесифилиса / Лосева О.К., Ловенецкий А.Н.: Рук-во для врачей. М.,2000. - с. 80

60. Лыкова С.Г. Полимеразная цепная реакция в дифференциальной диагностике латентного сифилиса / Лыкова С.Г., Шахматов Д.А. // Тез. докл. регион, науч.-практ. конф.: Дерматовенерология Сибири. Наука и практика. -Новокузнецк, 1998. С. 86-87.

61. Мавлютова Г.И. Особенности течения сифилиса у больных туберкулезом и ВИЧ-инфицированных / Мавлютова Г.И. // IX Всерос. съезд дерматовенерологов: Тез. докл. М.,2005. - Т. П. - С.60-61.

62. Мавров И.И. Половые болезни / Киев, 1994. - 479 с.

63. Мавров Г.И. / Мавров Г.И., Бондаренко Г.М. Мамедли М.М. // Дерматология и венерология (Харьков). 1998. - Т.5, № 1. - С. 8-13.

64. Мошкалов А.В. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) в клинике кожных и венерических болезней / Мошкалов А.В., Имянитов Е.Н., Лыщёв А.А., Того А.В., Хансон К.П. // Журн. дерматовенерол. и косметол. 1996. -№1 С.88-94.

65. Мудренко О. С. Женщины, занимающиеся коммерческим сексом, как группа риска в распространении урогенитальных инфекций: Дис. канд. мед. наук./ Мудренко О. С. -М.,2000.- 138 с.

66. Мюллис К.Б. Необычайная история о том, как родилась полимеразная цепная реакция / Мюллис К.Б. // В мире науки. 1990. - № 6. - С. 26-34.

67. Нестеренко Н.Л. Амплификационные тест-системы (ПЦР) ЗАО «Ниармедик Плюс» / Нестеренко НЛ. // Полимеразная цепная реакция вдиагностике и контроле лечения инфекционных заболеваний. М.,1998. -С. 142-144.

68. Нестеренко В.Г. Иммуноблот для подтверждения сероконверсии к антигенам T.pallidum: возможности метода и его практическое применение / Нестеренко В.Г., Суслов А.П., Ловенецкий А.Н. // Частные вопросы дерматовенерологии. Саратов,2006. - С.112-113.

69. Нестеренко Н.Л. Тест-системы на основе ПЦР для идентификации возбудителя туберкулеза / Нестеренко Н.Л., Шагинян И.А., Аксенов М.Ю. и др. // Проблемы туберкулеза. 1994. - №.4. - С. 29-32.

70. Никулин Н.К. Применение ПЦР в диагностике сифилиса / Никулин Н.К., Фриго Н.В. // Отечественная дерматовенерология 2000: Сб. науч. тр. -Н. Новгород, 2000. - С. 171-172.

71. Овчинников Н.М. О наличии бледных трепонем в периферических нервных волокнах при заразных формах сифилиса / Овчинников Н.М., Делекторский В.В., Гладкова Н.С., Пхалагов Т.В. // Вестн. дерматол. венерол. -1980. №3. - С.33-36.

72. Овчинников Н.М. Лабораторная диагностика заболеваний, передающихся половым путем / Овчинников Н.М., Беднова В.Н., Делекторский В.В. М, Медицина, 1987. - 304 с.

73. Овчинников Н.М. Атлас электронной микроскопии некоторых представителей рода трепонем, рода нейссерия и трихомонад / Овчинников Н.М., Делекторский В.В. М, Медицина, 1974. - 52 С.+176 ил.

74. Ометов В.К. О применении иммуноферментного анализа в диагностике сифилиса / Ометов В.К., Моргуль М.П., Урасовская Е.В., Крупшнская И.А. // Вестн. дерматол. венерол. -1997. №.3. - С.46-47.

75. Петрипшна С.В. Совершенствование диагностики сифилиса (клинико-лабораторное исследование): Автореф. дис. канд. мед. наук. / Петрипшна С.В. М., 2005. - 28 с.

76. Петухова И.И. Возможности полимеразной цепной реакции в детекции бледной трепонемы у больных сифилисом: Автореф. дис. канд. мед. наук. / Петухова И.И. М., 2002. - 18 с.

77. Пожарская О.В. Новый специфический сорбент для РИФ-абс при серодиагностике сифилиса / Пожарская О.В., Беднова В.Н., У гримов С.А., Додалко С.Ф. // Вестн. дерматол. венерол. 1995. - №.2. - С.15-16.

78. Полухина О.Э. Некоторые особенности гуморального иммунитета у больных с различными формами сифилиса / Полухина О.Э., Разнатовский К.И., Аксенов О.А., Мурина Е.А. // Клин, дерматол. и венерол. 2004. - №2. - С.94-97.

79. Прохоренков В.И. К проблеме ошибок в диагностике нейросифилиса / Прохоренков В.И., Гринштейн А.Б., Родиков М.В. // Дерматовенерология Сибири. Наука и практика: Тез. докл. науч.-практ. конф. Новосибирск, 1997. - С. 160-167.

80. Прохоренков В.И. О современных проблемах эпидемиологии инфекций, передаваемых половым путем / Прохоренков В.И., Шергин С.И., Карачев Ю.В. // Вестн. дерматол. и венерол. 1998. - №5. - С.27-28.

81. Пунченко О.Е. Серологические и иммунологические способы диагностики первичного и вторичного сифилиса: дис. канд. мед. наук. / Пунченко О.Е. Санкт-Петербург, 2003. - 120 с.

82. Радюк С.Н. Полимеразная цепная реакция в диагностике и прогнозе ВИЧ-инфекции / Радюк С.Н., Мацевич Г.Р., Анджапаридзе О.Г. // Вопр. вирусол. 1994. - №.3. - С.98-101.

83. Разнатовский И.М. Поражение нервной системы и внутренних органов у больных ранним приобретенным сифилисом в настоящее время / Разнатовский И.М., Красносельских Т.В., Соколовский Е.В. // Журн. дерматовенерол. косметол. 1996.- №1.- С.67-71.

84. Рассказов Н.И. К вопросу о серологической диагностике сифилиса / Рассказов Н.И., Адтухов С.А, Фомина Т.В., Страшкевич Л.Л., Агпухов Д.А. // Новое в диагностике и лечении заболеваний, передаваемых половым путем и болезней кожи. М., 1997. - С. 197-200.

85. Рассказов Н.И. Применение иммуноферментного анализа для регистрации специфических Ig-M- антител у больных сифилисом / Рассказов Н.И., Ермолин Г.А., Чалов В.В. и др. // Вестн. дерматол. венерол. 1990. -№11. -С.12-16.

86. Рентой A.M. Контроль и ведение заболеваний, передаваемых половым путем, в Великобритании и в Российской Федерации: сходства и различия / Рентой А.М., Борисенко К.К., Тихонова Л.И., Аковбян В.А. // ИППП. 1999. - № 5. - С. 27-33.

87. Родионов А.Н. Сифилис: рук-во для врачей / Родионов А.Н. -СПб.: Питер, 2000. 288 с.

88. Романова Л.В. Праймеры для родоспецифического обнаружения

89. Francisella Tularensis в полимеразной цепной реакции / Романова Л.В., Мишанькин Б.Н. // Журн. Микробиол. 1995. - №.5. - С.77-80.

90. Савичева А.М. Краткое руководство по микроскопической диагностике инфекций передаваемых половым путем / Савичева A.M. Соколовский Е.В., Домейка М. СПб.: «Фолиант», 2004. - 128 с.

91. Серегин С.В. Получение рекомбинантных антигенов Тг. pallidum и их применение в иммуноферментном анализе сифилиса / Серегин С.В., Белавин П.Б., Бабкина И.Н., Максютов А.З., Вяткина Т.Г., Баранова С.Г. // Вестн. дерматол. и венерол. 2000. - №2. - С.3-7.

92. Сивак В.В. Особенности клинического течения сифилиса у больных, находящихся в пенитенциарной системе // Вестн. последиплом. мед. образования. 2003. - №2. - С. 50-51.

93. Сивак В.В. некоторые особенности заболеваемости и клиники сифилиса у заключенных в условиях пенитенциарной системы / Сивак В.В. // Вестн. дерматол. и венерол. 2004. - №4. - С.33-35.

94. Сидорова Е.В. Сравнительная оценка различных методов серодиагностики сифилиса / Сидорова Е.В., Новоселов B.C., Чернышева И.Н., Гаврилова М.В., Уменко Т.И. // Вестн. последиплом. мед. образования. 2003. -№2.-С. 45-49.

95. Скрипкин Ю.К., ред. Кожные и венерические болезни: Рук-во для врачей / Скрипкин Ю.К., Мордовцев В.Н., ред. М.: Медицина, 1999. - Т. 1. -С. 530-531, 565-580.

96. Соколовский Е.В. Сифилис навсегда рядом с нами? / Соколовский Е.В., Красносельских Т.В. // Клин, дерматол. и венерол. - 2002. - №1. - С. 44-47.

97. Старченко М.Е. Значение определения фракций Ig-G в диагностики сифилиса / Старченко М.Е., Гракович Р.И., Данилов С.И. // Вест, дерматол. венерол.-1994.- №1С.9-11.

98. Стрельченко О.В. Информативность ПЦР при диагностике серорезистентности после лечения сифилиса: дис. канд. мед. наук./ Стрельченко О.В. Новосибирск., 2002. - 101 с.

99. Тимченко Г.Ф. Реакция пассивной гемагглюпгинации в серодиагностике сифилиса: дис. доктора мед. наук. / Тимченко Г.Ф. -Москва, 1991. 162с.

100. Ткачев В.К. ИФА-диагностика сифилиса: Информ.-метод. Пособие / Ткачев В.К. Кольцове, 1998.- 36 с.

101. Тоскин И. А. Сравнительный анализ уровня знаний о ЗППП и личной сексуальной практики в группе подростков 14—18 лет, проживающих в

102. Майкопе / Тоскин И.А., Борисенко К.К., Новелла Ж.Л., Деранкур К. // ЗППП. -1998.- №4. С.27-31.

103. Федоров Е.Н. ПЦР-детекция ДНК и РНК Treponema pallidum в крови серопозитивных доноров / Федоров Е.Н., Петухова И.И., Суханов Ю.С., Ёлов А.А., Федоров Н.А. // Вестн. службы крови России. 2001. - № 3. - С .4246.

104. Федоров Ю.П. Специфические миокардиты при ранних проявлених сифилиса / Федоров Ю.П., Гребенников В.А., Булохов С.М., Мапошкина И.Т., Журавлев С.Г., Севидова Л.Д. // Вестн. дерматол. и венерол. 2002. - №5. - С. 56-57.

105. Фриго Н. В. Рекомбинантные белки и синтетические пептиды в дифференциации истинных и ложноположительных реакций на сифилис / Фриго Н. В. // Рос. журн. кож. и вен. болезней. 1999. - №4. - С. 18-22.

106. Фриго Н.В. Совершенствование критериев дифференциальной диагностики раннего скрытого сифилиса и ложноположительных результатов стандартных серологических реакций на сифилис: Дис. д-ра мед. наук / Фриго Н. В. Н. Новгород. -2001.-446 с.

107. Хантке Л.Г. Об одной из причин биологически ложноположительных результатов серологических реакций на сифилис: Автореф. дис.канд. мед. наук./ Хантке Л.Г. М., 1974. - 16 с.

108. Ходжаев А.И. Диагностика и варианты течения нейросифилиса / Ходжаев А.И., Юлдашев К.А., Бескровная А.Ю., Бескровная Л.В. // Вестн. дерматол. и венерол. 2003. - №6. - С. 29-30.

109. Чеботарев В.В. О скрытых формах сифилиса / Чеботарев В.В., Земцов М.А, Чеботарева Н.В. // Вестн. дерматол. и венерол. 2006. - №3. -С.52-54.

110. Чеботарев В.В. Тенденции динамики заболеваемости сифилисом на современном этапе в пенитенциарной системе / Чеботарев В.В., Сивак В.В. // Вестн. последиплом. мед. образования. 2003. - №1. - С. 70-71.

111. Чернова Т. А. Трудности лабораторной диагностики сифилиса в современных условиях / Чернова Т.А., Гордева Г.В., Прокопьева А.Е. // Клин, дерматол. и венерол. 2006. - №3. - С. 15-16.

112. Чернышев А.В. К вопросу о разработке и исследованию высокопроизводительного оборудования для ПЦР диагностики / Чернышев А.В., Белова О.В. // Полимеразная цепная реакция в диагностике и контроле лечения инфекционных заболеваний,- М.,1998.- С. 144-145.

113. Шапаренко М.В. Феномен прозоны в лабораторной диагностике сифилиса / Шапаренко М.В., Милонова Т.И., Селисский Г.Д., Хубиева Ф.В., Лебедева Г.А. // Вестн. последиплом. мед. образования. 2003. - №2. - С. 53.

114. Шахматов Д.А. Сравнительная оценка ПЦР в лабораторной диагностике сифилиса: автореф. дис. канд. мед. наук. / Шахматов Д.А. -Новосибирск. 1999. - 16с.

115. Шахматов Д.А. Полимеразная цепная реакция в диагностике сифилиса / Шахматов Д А., Кузнецов П.В., Киншт В.Н. // Консилиум. 1999. -№ 3. - С.28-30.

116. Шейх-Заде К.Ю. Функциональная оценка сердца в норме и при раннем скрытом сифилисе: Автореф. дис. канд. мед. наук. Краснодар, 2001. -19 с.

117. Шувалова Т.М. Заболеваемость сифилисом в Московской области / Шувалова Т.М., Туманян А.Г., Соколова И.М., Геворкян Г.Х., Овакимян JI.C. // ЗППП. — 1998. — № 6. — С. 26-32.

118. Щепин О.П. Проблемы реформирования здравоохранения Российской Федерации / Щепин О.П., Филатов В.Б., Нечаев B.C. // Пробл. соц. гигиены и история медицины. 1998. - № 2. - С. 3-5.

119. Яцуха М.В. Повторно болеющие как группа повышенного риска в распространении инфекций, передаваемых половым путем / Яцуха М.В., Козырева Л.Т. // Вестн. последиплом. мед. образования. 2002. - №1. - С. 5556.

120. Al-Hussami О. Use of immunoblotting to characterize the mitochondrial antigens recognized by anti-mitochondrial autoantibodies / Al-Hussami O., Godinot C., Monier J.M., Тгеро C., Monier J.C. // J. Immunol. Methods.- 1988. V.l 13, n.l. - P.61-73.

121. Andrews H. The role of microscopy in the diagnosis of sexually transmitted infections in women / Andrews H., Acheson N., Huengsberg M.,

122. Radcliffe K.W. // Genitourin. Med. 1994. - V.70, n 2. - P.l 18-120.

123. Antoni J. Detection of antigenic determinants in the Treponema pallidum membrane protein TmpA using overlapping syntetic peptides // J. Immunol .Methods. 1996. -V.189, №1. - P. 137-140.

124. Augenbraun M. Treponemal specific tests for the serodiagnosis of syphilis / Augenbraun M., Rolfs R., Johnson R., Joesoe R., Pope V. // Sex. Transm. Dis. 1998. - V.25, n.10. - P.549-552.

125. Baker-Zander S.A Antigens of Treponema pallidum recognized by IgG and IgM antibodies (fairing syphilis in humans / Baker-Zander S.A, Hock E.W. 3rd, Bonin P., HandsfildHR, Lukehait SA //J. Infect Dis. 1985. - V.151, n.2. -P.264-272.

126. Baker-Zander S.A IgG and IgM antibody reactivity to antigens of Treponema pallidum after treatment of syphilis / Baker-Zander SA, Roddy R.E., Handsfild EE., Lukehait SA // Sex Transm. Dis. 1986. - V.13, n.4. - P.214-220.

127. Backhouse J.L. Treponema pallidum western blot: comparison with the FTA-ABS test as a confirmatory test for syphilis / Backhouse J.L., Nesteroff S.I. // Diagn. Microbiol. Meet. Dis. 2001. - V.39, n.l. - P.9-14.

128. Barsanti C. Diagnostico de sifilis congenita: comparacao entre testes sorologicos na mae e no recem-nascido / Barsanti C., Valdetaro F., Diniz E.M., Succi R.C.// Rev. Soc. Bras. Med. Trop. 1999. - V. 32(6). - P. 605-611.

129. Baughn R.E. Characterization of the antigenic determinants and host components in immune complexes from patients with secondary syphilis / Baughn R.E., McNeely M.C., Jonizzo J.L., Musher D.M. // J. Immunol. 1986. - V.136, №4. - P. 1406-1414.

130. Behets F.M Chancroid, primary syphilis, genital herpes, and lymphogranuloma venereum in Antananarivo, Madagascar / Behets F.M., Andriamiadana J., Randnanasolo D. et al. // J. Infect Dis. 1999. - V.180, n.4. - P. 13825

131. Behets F.M. Genital Ulcers: Etiology, Clinical Diagnosis, and Associated Human Immunodeficiency Virus Infection in Kingston, Jamaica / Behets

132. F.M., Brathwaite A.R., Hylton-Kong T et al. // Clin. Infect. Dis. 1999. - V.28. -P.1086-1090.

133. Belisle J.T. Fatty acids of Treponema pallidum and Borrelia burgdorferi lipoproteins // J. Bacteriol. 1994. - V.176, №8. - P.2151-2157.

134. Berry C.D. Neurologic relapse after benzilpenicillin therapy for secondary syphilis in a patient with HIV infection /Berry C.D., Hooton T.M., Collier A C., Lukehart S.A.//N. Eng. J. Med. -1987. V.316. - P.l 587-1589.

135. Birdsall ER The diagnostic dilemma of otosyphilis. A new western blot assay / Birdsall H.H., Baughn RJ3., Jankins HA // Arch. Otolaiyngol. Head. Neck. Surg. 1990. -V. 116, n5. - P.617-621.

136. Blanco D.R. Surface antigens of the syphilis spirochete and their potential as virulence determinants / Blanco D.R., Miller J.N., Lovett M.A. // Emerg. Infect. Dis. 1997. - V.3, n.l. - P.l 1-12.

137. Bolknsen E. Reactivity of locally produced CSF antibodies in patients with neurosyphilis against antigens of Treponema pallidum / Bolknsen E., Albrecht S., Beuche W., Made M., Prange RW. // J. Neurol. 1993. - V.240, n.8. - P.471-744.

138. Boom R. Rapid and simple method for purification of nucleic acids / Boom R., Sol C.J.A, Salimans M M. et al // J. Clin. Microbiol. 1990. - V.28. - P.495 -503.

139. Bromberg K. Diagnosis of congenital syphilis by combining Treponema pallidum-specific IgM detection with immimofluorescent antigen detection for T. pallidum / Bromberg K., Rawstron S., Tannis G. // J. Infect. Dis. 1993. - V.168, n.l. - P.238-242.

140. Bruisten S.M. Diagnosing genital ulcer disease in a clinic for sexually transmitted diseases in Amsterdam, the Netherlands / Bruisten S.M, Cairo I., Pijl A. et al. // J. Clin. Microboil. 2001. - V. 39, n.2. - P.601-605.

141. Burst J.M. Sensitive Detection of Treponema pallidum by Using the Polymerase Chain Reaction / Burst J.M., Grimprel E., Lukehart S. et al. // J. Clin. Microbiol. -1991. V.29, n.l. - P.62-69

142. Byrne R.E.Evaluation of a Treponema pallidum western immunoblot assay as a confirmatory test for syphilis / Byrne R.E., Laske S., Bell M. et al. // J. Clin. Microbiol. 1992.-V.30. - P.115-122.

143. Carlsson B. Evaluation of the fluorescent treponemal antibody-absorption (FTA- Abs) test specificity / Carlsson В., Hanson H.S., Wasserman J., Brauner A. // Acta Derm. Venereol. 1991. - V.71, n.4. - P.306-311.

144. Centurion-Lara A. Conservation of the 15kD lipoprotein among Treponema pallidum subs, and strains and other pathogenic Treponemes: genetic and antigenic analyses / Centurion-Lara A. et al. // Inf.immun. 1997. - V.65, №4. -P.1440-1444.

145. Centurion-Lara A. The flanking region sequences of the 15-kDa lipoprotein gene differentiate pathogenic treponemes / Centurion-Lara A., Castro C., Castillo R. et al. // J. Infect. Dis. 1998. - V.177. - P.1036-1040.

146. Centurion-Lara A. Detection of Treponema pallidum by a sensitive reverse transcriptase PCR / Centurion-Lara A., Castro C., Shaffer J.M. et al. // J. Clin. Microbiol. 1997. - V.35, n.6. -P.1348-1352.

147. Chang K.Y. Gastric syphilis: polymerase chain reaction detection of treponemal DNA in pseudolymphomatous lesions / Chang K.Y., Lee M.G., Lee J.D. // Med. J. -1994. V.35. - P.190-197.

148. Chung K.-Y. Detection of Treponema pallidum by polymerase chainreaction in the cerebrospinal fluid of syphilis patients / Chung K.-Y., Lee M.-G., Lee J.B. // Yonsei Med. J. 1994. - V.35, n.2. - P. 190 - 197.

149. Clyne B. Syphilis testing / Clyne В., Jerrard D.A. // J. Emerg. Med. -2000.-V.18, n.3. -P.361-367.

150. Codd A.A., Competitive enzyme-linked immunosorbent assay for Treponema pallidum antibodies / Codd A.A., Sprott M.S., Narang H.K. // J. Med. Microbiol. 1988. - V.26. - P. 153-157.

151. Costello P.D. Binding affinity of serum immunoglobulin G to cardiolipin and other phospholipids in patients with systemic lupus erythematosis and syphilis / Costello P.D., Green F.A. // Infect. Immun. 1988. -V.56. - P. 17381742.

152. Cox D R. The outer membrane not a coat of host proteins, limits the antigenecity of virulent Treponema pallidum / Cox D.R., Chang A., Mc Dowall A., Radolf J.D. // Infect Immun.- 1992. V.60. - P.1076-1083.

153. Cox D.L. Treponema pallidum in gel microdroplets: a novel strategy for investigation of treponemal molecular architecture // Mol. Microbiol. 1995. - Vol.15, №6. -P.1151-1164.

154. Cunningham S.D. Attitudes about sexual disclosure and perceptions of stigma and shame / Cunningham S.D., Tschann J., Gurvey J.E. et al. // Sex. Transm. Infect. 2002. - V.78, n.5. - P.334-338.

155. De Bleser D. Passive particle agglutination test ft* screening of Treponema Pallidum antibodies m blood bank routine / De Bleser D., Van Renterghem L., Vanderkerckhove B. //Acta Clin. Belg.- 1998. -V.53,n.5.-P.319-21.

156. Deka P.K. Physicochemical evidence that Treponema pallidum TroA is a zinc- containing metalloprotein that lacs porin-like structure / Deka P.K., Lee Y.H., Hagman K.E. et al. // J. Bacterid. 1999. - V.181, n.14. - P.4420-4423.

157. Dettoa G. Evaluation of Western immunoblotting technique in the serological diagnosis of human syphilitic infections / Dettoa G., Grillo R., Mora G. et al. //Eur. J. Epidemiol. 1989. - V.5, n.l. -P.22-30.

158. Dobson S.R. Recognition of Treponema pallidum antigens by IgM and IgG antibodies in congenitally infected newborns and their mothers / Dobson S.R., Tabet L.H., Bsughn R.E. // J. Infect Dis. -1988. V.157, n.5. - P.903-910.

159. Ebel A. Evaluation of a New Competitive Immunoassay (BioElisa Syphilis) for Screening for Treponema pallidum Antibodies at Various Stages of Syphilis / Ebel A., Bachelart L.C., Alonso J.M. // J. Clin. Microbiol. 1998. - V. 36, n.2. -P.358-361.

160. Ebel A Validation of the INNO-LIA Syphilis Kit as a Confirmatory Assay for Treponema pallidum Antibodies / Ebel A., Vanneste L., Cardinales M. et al. // J. Clin. Microbiol. 2000. - V.38, n.l. - P.215-219.

161. Egglestone S.I. Serological diagnosis of syphilis / Egglestone S.I., Turner AJ.L. // Commun. Dis. Public. Health. 2000. - V.3. - P.158-162.

162. Engelkenq H.J.H. / Engelkenq H.J.H., Sluis JJvan der, Stolz E. // Int. J. Dermatol. 1991. - V.30, n.4. - P. 254-256.

163. Erlich H.A., Arnheim N. Genetic analysis using the polymerase chain reaction /Erlich H.A., Arnheim N. // Annu. Rev. Genet. 1992. - V.26. - P. 479-506.

164. Fieldsteel A.H. Cultivation of virulent Treponema pallidum in tissue culture / Fieldsteel A.H., Cox D.L., Voekli R. // Infect. Immunol. 1981. - V.32. -P. 908-915.

165. Fleming D.T. Syphilis in Atlanta during an era of declining incidence / Fleming D.T., Levine W.C., Trees D,L, et aL // Sex.Transm.Dis. 2000. - V.27, n.2. - P.68-73

166. Friedhoff P. Quantitative polymerase chain reaction with oligodeoxynucleotide ligation assay/enzyme-linked immunosorbent assay detection / Friedhoff P., Hahn M., Wolfes H., Pingoud A. // Analyt. Biochem. 1993. - V.215. -P.9-16.

167. Fujimura K. Reactivity of recombinant Treponema pallidum (r-Tp) antigens with anti-Tp antibodies in human syphilitic sera evaluated by ELISA / Fujimura K., Ise N., Hori T. et al. // J. Clin. Lab. Anal. 1997. - V.l 1, n.6. - P.315-322.

168. George R. An analysis of the value of some antigen-antibody interactions used as diagnostic indicators in a treponemal Western blot (TWB) test for syphilis / George R., Pope V., Fears M. et al. // J.Clin.Lab.Immunol. 1998. - V.50, n.l. - P.27-44.

169. Gerber A. Recombinant Treponema pallidum antigens in syphilis serology / Gerber A, Krell S., Morenz J. // Immunobiol. 1996-1997. - V.196, n.5. -P.535-549.

170. Haake D.A. Spirochaetal lipoproteins and pathogenesis // Microbiology. 2000. - V.146. - P.1491-1504.

171. Hagedom H.J. Evaluation of INNO-LIA syphilis assay as a confirmatory test for syphilis / Hagedorn H.J., Kraminer-Hagedom A, De Bosschere K. et al. // J. Clin. Microbiol. 2002. - V.40, n.3. -P.973-978.

172. Hart G. Syphilis tests in diagnostic and therapeutic decision making //

173. Ann. Intern. Med. -1986. V.104. - P.843-849.

174. Hay H.E. Use of the polymerase chain reaction to detect DNA sequences specific to pathogenic treponemes in cerebrospinal fluid / Hay H.E., Clarke J.R., Strugnell R.A. et al.// Microbiol. Lett. 1990. - V.68. - P. 233-238.

175. Hay H.E. Detection of treponemal DNA in the CSF of patients with syphilis and HIV infection using the polimerase chain reaction / Hay H.E., Clarke J.R., Taylor-Robinson D., Goldmeier D. // Genitourin. Med. 1990. - V.66. -P. 428-432.

176. Heid C.A. Real time quantitative PCR / Heid C.A., Stevens J., Livak K.J., Williams P.M. //Genome. Res. 1996. - V.6, n.10. - P.986-994.

177. Hensel U. Sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis immunoblotting as a serological tool in the diagnosis of syphilitic infections / Hensel U., Wellensiek H.J., Bhakdi S. // J. Clin. Microbiol. 1985. - V.21, n.l. -P.82-87.

178. Hessol N.A. Gender, ethnicity and treatment category variation in HIV disease progression / Hessol N.A., Palacio H. // JAIDS. 1996. - V.10, Suppl. - P. A69-74.

179. Holmes K.K. Sexually Transmitted Diseases / Holmes K.K., Mardh P.A., Sparling P.F., Weisner P.J. NY et al: McGraw-Hill Inc,1984.

180. Hook E.W. Detection of Treponema pallidum in lesion exudate with a pathogen-specific monoclonal antibody / Hook E.W., Roddy R.E., Lukehart S.A., Holmes К. K., Tam M.R. // J. Clin. Microbiol. 1985. - V.22, n.2. - P.241-244.

181. Inagaki H. Gastricsyphilis: polymerase chain reaction detection of treponemal DNA in pseudolymphomatous lesions / Inagaki H., Kawai Т., Miyata M. et al // Hum. Pathol. 1995. - V.27. - P.761-765.

182. JanierM A prospective study of the influence of HIV status on the seroreveision of serological tests for syphilis / Janier M., Chastang C., Spridler E. et al. // Dermatology. -1999. V.198, n.4. - P.362-369.

183. Jaworsky С J The molecular diagnosis of cutaneous infection // Cutan. Pathol.-1993. V.20. - P.508-512.

184. Jenkins M.A. Capillary electrophoresis as a clinical tool / Jenkens M.A., GuerinM.D. // J. Chromatogr. B. Biomed. Appl. 1996. - V.682. - P.23-34.

185. Jethwa Hitendra S. Comparison of Molecular and Microscopic Techniques for Detection of Treponema pallidum in Genital Ulcers / Jethwa H.S., Schmitz J.L., Dallabetta G. et al. // J. Clin. Microbiol. 1995. - V.33, n.l. - P.180-183.

186. Johnson P.S. Testing for syphilis / Johnson P.S., Farmer M.A. // Dermatol. Clin. 1994. - V.I2. - P.9-17.

187. Jones S. A Monoclonal antibody with hemagglutination, immobilization, and neutralization activities defines an immunodominant, 47,000 mol wt, surface-exposed immunogen of Treponema pallidum (Nichols) // J. Exp. Med. 1984. -V.160, n.5.-P. 1404-1420.

188. Joyanes P. The association of false-positive rapid plasmareagin results and HIV infection / Joyanes P., Borobio MV, Arquez J.M., Perea E J. // Sex. Transm. Dis. 1998. -V.25, n.10. - P.569-571.

189. Jurado R.L. Prozone phenomenon in secondary syphilis. Has its time arrived? / Jurado R.L., Campbell J., Martin P.D. // Arch. Intern. Med. 1993. -V.I53. - P. 2496-2498.

190. Kalichman S.C. Sexually transmitted infections among HIV seropositive men and women / Kalichman S.C., Rompa D., Cage M. // Sex. Transm. Infect. 2000. - V.76, n.5. - P.350-354.

191. Keenan G.F. Polymerase chain reaction as a diagnostic tool // Adolesc. Med. 1998. - V.9, n.l. - P.35-43.

192. Kim D.K. Changes of serum IgG antibody reactivity to protein antigens of Treponema pallidum in syphilis patients after treatment / Kim D.K., Lee M.G., Lee J.B. // J. Korean. Med. Sci. 1989. - V.4, n.2. - P.63-69.

193. Knox CM. Polymerase chain reaction-based assays of vitreous samplesarbitrarily primed polymerase chain reaction / Liu D., Coloe S., Baird R., Pedersen J. //Br. J.Dermatol.-1997. V.137. - P.351-355.

194. Lopez-Zetina J. Predictors of syphilis seroreactivity and prevalence of HIV among street recruited injection drug users in Los Angeles County, 1994-6 / Lopez-Zetina J., FordW.,WeberM,etaL //Sex.Tiansm.Infect.-2000.- V.76,jl6.- P.462469.

195. Luger A.F. Significance of laboratory findings for the diagnosis of neurosyphilis / Luger A.F., Schmidt B.L., Kaulich M. // Int. J. STD AIDS. 2000. -V.l 1, n.4. - P.224-234.

196. Lukehart S.A. Characterization of the humoral immune response of the rabbit to antigens of Treponema pallidum after experimental infection and therapy / Lukehart S.A., Baker-Zander S.A., Sell S. // Sex. Transm. Dis. 1986. - V.13, n.l. -P.9-15.

197. Lukehart S.A. Invasion of the central nervous system by Treponema pallidum: implication for diagnosis and treatment / Lukehart S.A., Hook E.W., Baker-Zander S.A. et al. // Ann. Intern. Med 1988. - V.109. - P.855-862.

198. Lukehart S.A. Demonstration of the in vitro phagocytosis of Treponema pallidum by rabbit peritoneal macrophages / Lukehart S.A., Miller J.N. // J. Immunol. 1978. - V.121, n.5. - P.2014-2024.

199. Lukehart S.A. Immunology and pathogenesis of syphilis / Lukehart S.A., Quinn T.C., Gallin J.I. et al // Sex. Transmit. Dis. 1992. - V.8. - P.141-163.

200. Machungo F. Syphilis, gonorrhoea and chlamydial infection amongfor the diagnosis of viral retinitis. Use in diagnostic dilemmas / Knox C.M., Chandler D., Short G.A., Margolis T.P. // Ophthalmology. 1998. - V.105. - P.37-44.

201. Kodama T. Serological tests for syphilis / Kodama Т., Kinouchi T. // Nippon.Rinsho. 1999. - V.57. - P.120-123.

202. Коек A G. Specific and sensitive diagnosis of syphilis using a real-time PCR for Treponema pallidum / Коек A.G., Bruisten S.M., Dierdorp M. et al. // Clin. Microbiol. Infect. 2006. - V.12, n.12. - P.1233-1236.

203. Kouznetsov A.V. Molecular diagnosis of syphilis: the Schaudinn-Hoffmann lymphnode biopsy / Kouznetsov A.V., Prinz J.C. // Lancet. 2002. -V.360.- Aug.3. -P.388-389.

204. Larsen S.A. Congenital syphilis: past, present, and future / Larsen S.A., Zenker P.N. //Clin.Microbiol.Newsl. 1990. - V.12. - P.181-182.

205. Larsen S.A. Advances in sex / Larsen S.A., Hambie E.A., Wobig G.H., Kennedy E.J. // Ttransm. dis. VNU Sci Press,1985. - P.157-162.

206. Larsen S.A. Laboratory diagnosis and interpretation of tests for syphilis / Larsen S.A., Steiner B.M., Rudolph A.H. // Clin. Microbiol. Rev. 1995. - V.8, n.l. -P.l-21.

207. Levis L.L. Evaluation of immunoglobulin M Western blot analysis in the diagnosis of congenital syphilis / Levis L.L., Taber L.H., Baughn R.E. // J. Clin. Microbiol. -1990. V.28, n.2. - P.296-302.

208. Liu D. Molecular determination of dermatophyte fungi using thewomen undergoing legal or illegal abortion in Maputo / Machungo F., Zanconato G., Persson K. et al. // Int. J. STD & AIDS. 2002. - V.13, n.5. - P.326-330.

209. Marangoni A. Treponema denticola infection is not a cause of false positive Treponema pallidum serology / Marangoni A., Sambri V., Cavrini F. et al. // News Microbiol. 2005. - V.28, n.3. - P.215-221.

210. Marangoni A IgG western blot as a confirmatory test in early syphilis / Marangoni A., Sambri V., Olmo A., D'Antuono A. et al. // Zentralbl. Bakteriol. -1999. V.289, n.2.- P.125-133.

211. Marangoni A Treponema pallidum surface immunofluorescence assay for serologic diagnosis of syphilis / Marangoni A., Sambri V., Storni E. et al. // Clin. Diagn. Lab. Immunol. 2000. - V.7, n.3. - P.417-421.

212. Marfin A A Amplification of the DNA polymerase I gene of Treponema pallidum from whole blood of persons with syphilis / Marfin A.A., Liu H., Sutton M.Y. et al. // Diagn. Microbiol. Infect. Dis. 2001. - V.40, n.4. - P.163-166.

213. Marra C.M. Diagnosis of neurosyphilis in patients infected with human immunodeficiency virus type 1 / Мала C.M., Gary D.W., Kuypers J., Jacobson M.A. //J. Infect. Dis. 1996. - V.174. - P.219-221.

214. Marchitto K.S. Molecular specificities of monoclonal antibodies directed against virulent Treponema pallidum / Marchitto K.S., Selland-Grossling C.K., Norgard M.V. //Infect hnmun. 1986. - V.51, n.l. -P. 168-176.

215. McCuster S. Behavioral risk factors for HIV infection among homosexual men at a Boston Community health center / McCuster S., Stoddard A.M., Mayer K.N. et al. // Am. J. Public. Health. 1988. - V.78. - P.68-71.

216. McPherson M.J.,ed. PCR. A Practtical approach / Eds. McPherson M.J., Quirke P., Taylor G.R. Oxford: 1RL press,1992.

217. Mertz K.J. Etiology of genital ulcers and prevalence of human immunodeficiency virus coinfection in 10 US cities / Mertz K.J., Trees D., Levine W.C. et al. // J. Infect. Dis. 1998. - V.178. - P.1795-1798.

218. Meyer M.P. Whole-blood hemagglutination inhibition test for venereal disease research laboratory (VDRL) antibodies / Meyer M.P., Baughn R.E. // J. din. Microbiol. 2000. - V.38, n.9. - P3413-3414.

219. Meyer M.P. Analysis of western blotting (immunobloting) technique in diagnosis of congenital syphilis / Meyer M.P., Eddy Т., Baughn R.E. // J. Clin. Microbiol. 1994. -V.32. - P.629-633.

220. Meyer L. Surveillance of STDs in France: recent trends and incidence / Meyer L., Goulet V., Masseri V., Lepoutre-Toulemon A. // Genito. Urin. Meds. -1994.-V.70.-P.15-21.

221. Moskophidis M. Comparison of intrathecal synthesis of Treponema pallidum-specific IgG antibodies and polymerase chain reaction for the diagnosis of neurosyphilis / Moskophidis M., Peters S. // Zentralbl. Bakteriol. 1996. - V.283. -P. 295-305.

222. Mullis K.B., ed. The polymerase chain reaction / Eds. Mullis K.B., Ferre F., Gibbs R.A. Boston: Birkhauser,1994.

223. Mullis K.B. Specific synthesis of DNA in vitro via a polymerase catalysed chain reaction / Mullis K.B., Faloona F.A. // Meth. Enzymol. 1987. -V.155. -P.335.

224. Murphy F.T. The use of Western blotting as the confirmatory test for syphilis in patients with rheumatic disease / Murphy F.T., George R., Kubota K. et al // J. Rheumatol. 1999. - V.26, n.ll. - P.2448-2453.

225. Nelson S. Detection of Bordetella pertussis in clinical specimens by PCRand a microtiter plate-based DNA hybridization assay / Nelson S., Matlow A., McDowell C. et al. // J. Clin. Microbiol. 1997. - V.35. - P.l 17-120.

226. Newton C.R. PCR. BIOS / Newton C.R., Graham A. - Oxford: Sci. Publishers Ltd,1994.

227. Norris S.J. Polypeptides of Treponema pallidum: progress toward understanding their structural, functional and immune roles // Microbiol. Rev. -1993. -V.57, n.3. P.750-779.

228. Norgard M.V. Phenotypic expression of the major 47kDa surface immunogen of Treponema pallidum in virulent, tissue-cultured treponemes / Norgard M.V., Marchitto K.S., Cox D.L. // J. Gen. Microbiol. 1986. - V.I32. -P. 1775-1778.

229. Orle К A Simultaneous PCR detection of Haemophilus ducrei, Treponema pallidum, and Herpes simplex virus types 1 and 2 from genital ulcers / Orle K.A., Gates С A, Martin D.H. et al. // J. Clin. Microbiol. 1996. - V.34, n.l. -P. 49-54.

230. Ortlepp S.A. Performing nucleic acid reactions using predispensed lyophilized reaction mixtures / Ortlepp S.A, McKey LA // Biotechniques. 1989. -V.7. - P.l 110-1115.

231. Orton S.L. Prevalence of circulating Treponema pallidum DNA and RNA in blood donors with confirmed-positive syphilis tests / Orton S.L., Liu H., Dodd R.Y., Williams E. // Transfusion. 2002. - V.42. - P.94-99.

232. Palmer H.M. Use of PCR in the diagnosis of early syphilis in the United Kingdom / Palmer H M, Higgins S P, Herring A J, Kingston MA// Sex. Transm. Infect. 2003. V.79. - P.479^183.

233. Panchand С. Sexually transmitted diseases among adolescents in developed countries / Panchand C., Singh S., Feivelson D. et al // Fam. Plann. Perspect. 2000. - V.32, n.l. - P.24-32,45.

234. Paris-Hamelin A Immunoblotting for the scRxiiagnosis of syphilis. A candidate to replace the Nelson-Maya- test/ ftrts-Hameftn A, DebruyneM, Fustec-Isartxxie S. //Ann Pharm Ft. -1999. V.57,nl.-P.68-75.

235. Peterson K.M. / Peterson K.M., Baseman J.B., Alderete J.F. // Genitourin. Med. 1987. - V.63. - P.355-360.

236. Pfaller M.A. Candida species: emerging hospital bloodstream pathogens // Infect. Control. Hosp. Epidemiol. 1991. - V.I2. - P.103-110.

237. Pietravalle M. Diagnostic relevance of polymerase chain reaction technology for T. pallidum in subjects with syphilis in different phases of infection / Pietravalle M., Pimpinelli F., Maini A. et al. // News Microbiol. 1999. - V.22, n.2. -P.99-104.

238. Prariyachatigul C. Assessment of a PCR technique for the detection and identification of Cryptococcus neoformans / Prariyachatigul C., Chaiprasert A., Meevootisom V., Pattanakitsakul S. // J. Med. Vet. Mycol. 1996. - V.34. - P.251-258.

239. Purcell B.K. Molecular cloning and characterization of the 15-kilodalton major immunogen of Treponema pallidum / Purcell B.K., Chamberlain N.R., Goldberg M.S. et al. // Infect. Immun. 1989. - V.57, n.12. - P.3708-3714.

240. Quinn T.S. Recept advances in diagnosis of sexually transmitted diseseas // Sex. Transm. Dis. 1994. - V.21. - P.19-27.

241. Radcliffe M. Single-dose benzathine penicillin in infants at ride of congenital syphilis results of a randomised study / Radcliffe ML, Meyer M, Roditi D., Malan A. // S. Afr. Med. J. - 1997. - V.87, n.l. - P.62-65.

242. Radolf J.D. PCR detection of Treponema pallidum // Diagnostic molecular microbiology: principles and applications / J.D. Radolf, D.H. Persing et al. Washington: D.C.,1993. - P. 224-229.

243. Radolf J.D. Role of outer membrane architecture in immune evasion by Treponema pallidum and Borrelia durgdorferi / Radolf J.D. // Tunds. Microbiol. -1994. V.l-2, n.9. - P.307-311.

244. Radolf J.D. Treponema pallidum and the quest for outer membrane proteins // Mol. microbiol. 1995. - V.16, n.6. - P.1067-1073.

245. Radolf J.D. Characterization of outer membranes isolated from Treponema pallidum, the syphilitic spirochete / Radolf J.D., Robinson E.J., Bourell K.W. //Mol. Microbiol. 1995. - V.63, n.ll. - P.4244-4252.

246. Rath P.M. Serological distinction between syphilis and Lyme borreliosis / Rath P.M., Marsch W.C., Brade V., Fehrenbach F. // Int. J. Med. Microbiol. Virol. Parasitol. Infect. Dis. 1994. - V.280. - P.319-324.

247. Rawstron S.A. Congenital syphilis and fluorescent treponemal antibody test reactivity after the age of 1 year / Rawstron S.A., Mehta S., Marceffino L. et al // Sex. Transm. Dis. 2001. - V.28, n.7. - P.412-416.

248. Riviere G.R. Identification of spirochetes related to Treponema pallidum in necrotizing ulcerative gingivitis and chronic periodontitis / Riviere G.R., Wagoner M.A., Baker-Zander S.A. et al. //N. Engl. J. Med. 1991. - V.325, n.8. - P.539-543.

249. Rodgers G.C. Serological characterization and gene localization of an Escherichia coli-expressed 37-kilodalton Treponema pallidum antigen / Rodgers G.C., Laird W.J., Coates S.R. et al. // Infect. Immun. 1986. - V.53, n.l. - P. 16-25.

250. Roos K.L. Pearls and pitfalls in the diagnosis and management of central nervous system infectious diseases// Semin. Neurol. 1998. - V.18. - P. 185-196.

251. Saiki R.K. Primer-directed enzymatic amplification of DNA with a thermostable DNA-polymerase / Saiki R.K., Gelfand D.H., Stoffel S. et al. // Science. 1988. - V.239. - P.487-491.

252. Sambri V. Western Immunoblotting with Five Treponema pallidum Recombinant Antigens for Serologic Diagnosis of Syphilis / Sambri V., Marangoni A., Eyer C. et al. // Clin. Diagn. Lab. Immunol. 2001. - V.8, n.3. - P.534-539.

253. Sambri V. Evaluation of recomWell Treponema, a novel recombinant antigen-based enzyme-linked immunosorbent assay for the diagnosis of syphilis / Sambri V., Marangoni A., Siaone M. A etal // Clin. Microbiol. Infect. 2001. - V.7, n.4. - P.200-205.

254. Sambrook J. Molecular cloning: A laboratory Handbook / Sambrook J., Fritsch E.F., Maniatis T. New Yoik,1989. - P.57-69.

255. Sanchez P.J. IgM antibody to Treponema pallidum in cerebrospinal fluid of infants with congenital syphilis / Sanchez P.J., Wendel G.D., Norgard M. V. // Am. J. Dis. Child. 1992. - V.146, n.10. - P. 1171-1175.

256. Sato N.S. Analysis of Treponema pallidum recombinant antigens for diagnosis of syphilis by western blotting technique / Sato N.S., Nirata M.H. Nirata R.D. et al. // Rev. Inst. Med. Trop. San Paulo. 1999. - V.41, n.2. - P.l 15-118.

257. Schmidt B.L. PCR in laboratory diagnosis of human Borrelia burgdorferi infections // Clin. Microbiol. Rev. 1997. - V.10. - P.185-201.

258. Schmidt B.L. Evaluation of a New Particle Gel Immunoassay for Determination of Antibodies against Treponema pallidum // J. Clin. Microbiol. -2004. V.42, n.6. - P.2833-2835.

259. Schmidt B.L. Specific IgM tests in syphilis diagnosis / Schmidt B.L., Luger A., DuschetP. et al. // Hautarzt. 1994. - V.45, n.10. - P.685-689.

260. Schouls L.M. Molecular biology of Treponema pallidum // Mol. Cell. Biol. Hum. Dis. Ser. 1992. - V.l. - P.85-129.

261. Schouls L.M. Overproduction and purification of Treponema pallidum recombinant-DNA-derived proteins TmpA and TmpB and their potential use in serodiagnosis of syphilis // Infect. Immun. 1989. - V.57, n.9. - P.2612-2623.

262. Sonmez E. False-positive reaction between syphilis and hepatitis С infection / Sonmez E., Ozerol S. Senol M. et al. // Isr. J. Med. 1997. - V.33, n.ll. - P.724-727.

263. Stamm J.V. Identification, cloning and purification of protein antigens of Treponema pallidum / Stamm J.V., Dallas W.S., Ray P.H., Bassford P.J. // Rev. Infect. Dis. 1988. - V.10, n.2. - P.403-407.

264. Stephen F. Borrelia burgdorferi and Treponema pallidum: a comparison of functional genomics, environmental adaptations, and pathogenic mechanisms / Stephen F., Schwan P., Schwan T.G. // J. Clin. Invest. 2001. - V.107, n.6. - P.651-656.

265. Stoll B.J., Clinical and serologic evaluation of neonates for congenital syphilis: a continuing diagnostic dilemma / Stoll B.J., Lee F.K., Larsen S.A. et al. // J. Infect. Dis. 1993. - V. 167. - P. 1093-1099.

266. Sykes J.A. / Sykes J.A., Viller J.N., Kalan A.J. // Brit. J. Vener. Dis. 1974. - V.50. - P.40-44.

267. Tholcken С A Evaluation of the Bio-Rad syphilis IgG test performed on the CODA system for serologic diagnosis of syphilis / Tholcken C.A., Woods G.L. // Diagn. Microbiol. Infect. Dis. 2000. - V37, n.3. - P.157-160.

268. Thomas D.D. / Thomas D.D., Navab M., Haake D.A., et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1988. - V.85. - P. 1324-1326.

269. Valle P.M. Diagnostic relevance of polymerase chain reaction technology for T. pallidum in subjects with syphilis in different phases of infection / Valle P.M., Pimpinelli F., Maini A. et al. // Microbiologics. 1999. - N 22. - P. 99-104.

270. Volkenandt M. Quantitation of gene copy number and mRNA using the polymerase chain reaction / Volkenandt M., Dicker A.P., Baneijee D. et al. // Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 1992. - V.200. - P. 1-6.

271. Weigel L.M. The 47-kDa major lipoprotein immunogen of Treponema pallidum is a penicillin-binding protein with carboxypeptidase activity / Weigel L.M., Radolf J.D., Norgard M.V. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1994. - V.91. -P.l 1611-11615.

272. Whang K.K. Production and characterization of monoclonal antibodies to Treponema pallidum / Whang K.K., Lee M.G., Lew W., Lee J.B. // J. Dermatol. Sci.- 1992.-V.4, n.l. P.26-32.

273. White B.,ed. PCR protocols. New Jersey: Humana Press Inc.,1993.

274. Winceslaus S.J. Screening for syphilis // Lancet 1999. - V.353, n.9162. - P.1441.

275. Wicher K. Target organs of infection in guinea pigs with acquired congenital syphilis // Infect .Immun.-.1996.-.V.64, n.8. P.3174-3179.

276. Wicher K. Identification of persistent infection in experimental syphilis by PCR / Wicher K., Abbmscato F., Wicher V. et aL // Infect. Immun. 1998. - V.66, n.6. -P.2509-2513.

277. Wicher K. Detection of Treponema pallidum in early syphilis by DNA amplification / Wicher K., Noordhoek G.T., Abbruscato F., Wicher V. // J. Clin. Microbiol.- 1992. V.30, n.2. - P.497-500.

278. Wicher V. The time-dependent clearance of virulent Treponema pallidum in susceptible and resistant strains of guinea pigs is significantly different / Wicher V., Wicher K., Abbruscato F. et al. // Clin. Immunol. 1999. - V. 91, n.l. -P. 77-83.

279. Wicher K. Treponema pallidum subsp. pertenue displays pathogenic properties different from those of T. pallidum subsp. Pallidum / Wicher K., Wicher V., Abbruscato F., Baughn R.E. // Infect. Immun. 2000. - V. 68, n.6. - P. 3219-3225.

280. Wicher K. bnmunogenicity of three recombinant Treponema pallidumantigens examined in guinea pigs / Wicher K., van Embden J.D., Schouls L.M. et al. // Int. Arch. Allergy. Appl. Immunol. 1989. - V.89, n.2-3. - P. 128-135.

281. Woods G.L. Update on laboratory diagnosis of sexually transmitted diseases // Clin. Lab. Med. 1995. - V.15. - P.665-684.

282. Yap E.P.H. Slide PCR: DNA amplification from cell on microscopic glass slides / Yap E.P.H., DMeGee J.O. //Nucl. Acids Res. 1991. - V.19. - P.429-4298.

283. Young H. Siphilis: new diagnostic directions // Int. J. STD & AIDS -1992.-V.3. P.391-413.

284. Young H. Syphilis. Serology //Dermatol. Clin. 1998. - V.16, a4. - P.691698.

285. Young H. EnzyweD recombinant enzyme immunoassay for the serological diagnosis of syphilis / Young H., Aktas G„ Moyes A. // Lit J. STD AIDS. 2000. - V.l 1, П.5.-Р288-291.

286. Young H. Novel recombinant-antigen enzyme immunoassay for serological diagnosis of syphilis / Young H., Moyes A., Seagar L., McMillan A. // J.Clin.Microbiol. 1998. - V.36, n.4. - P.913-917.

287. Zrein M. Recombinant antigen-based enzyme immunoassay for screening of Treponema pallidum antibodies in blood bank routine / Zrein M., Maure I., Boursier F., Souffet L. // J. Clin. Microbiol. 1995. - V.33, n.3. - P.525-527.

288. Zugehor M. Characterization of treponemal axial filament antigens using the Western blot / Zugehor M, Struy H., Borkhardt H.L., Mirenz J. // Z. Gesamte. Hyg. -1989. V.35. n.10. - P.614-615.

289. Zhang H.H. Renaturation of recombinant Treponema pallidum rare outer membrane protein 1 into a trimeric, hydrophobic, and porin-active conformation / Zhang H.H., Blanco D.D.R., Exner M M. et al. // J. Bacterid. Dec. 1999. - V.181, n.23. - P.7168-7175.

290. Zhiburt E.B. A syphilis marker study of blood component donors / Zhibuit E.B., Bel'gesovN. V., Bondarchuk I.V. et aL // Klin. Lab. Diagn. -1998.-n.l 1.-P. 15-17.

291. Zoechling N. Molecular detection of Treponema pallidum in secondary and tertiary syphilis / Zoechling N, Schluepen E.M, Soya* HP. et aL // Br. J. Dermatol. -1997. V.136, n.5. - P.683-686.