Разработка основ молекулярно-генетического исследования возбудителя мелиоидоза и близкородственных буркхольдерий тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.07, доктор медицинских наук Замараев, Валерий Семенович

• Замараев, Валерий Семенович
• доктор медицинских наук
• 2005

Оглавление диссертации доктор медицинских наук Замараев, Валерий Семенович

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА

ТАКСОНОМИЯ, БИОЛОГИЯ И ГЕНЕТИКА БУРКХОЛЬДЕРИЙ

1.1. Геносистематика буркхольдерий.

1.2. Биологические свойства и генетика патогенных буркхольдерий

1:3- Гибридизационный анализ буркхольдерий.

ГЛАВА

ПЛАЗМИДЫ ВОЗБУДИТЕЛЯ МЕЛИОИДОЗА

2.11. Роль плазмид в биологии микроорганизмов.

2.2. Выделение плазмидной ДНК из штаммов буркхольдерий.

2.2.1. Ускоренный метод обнаружения плазмид В.рзеис1ота1Ы.

2.2.2. Препаративное выделение плазмидных ДНК В.рзеис1ота1Ы.

2.31 Плазмидныйанализ штаммов буркхольдерий.

2.3-.1. Изучение плазмидного спектра штаммов В.рБегкЛотаИег.

2.3.2. Изучение стабильности наследования плазмид В.рзеис1ота1Ш.

2.3.3. Рестрикционный анализ- внехромосомных ДНК буркхольдерий.

2.4. Изучение гомологии плазмидных ДНК.буркхольдерий.

2.4.1. Изучение взаимной гомологии плазмид возбудителя мелиоидоза.

2.4.2. Изучение гомологии плазмид возбудителя мелиоидоза с ДНК гетерологичных видов микроорганизмов.

2.4.3. Изучение гомологии ДНК криптической плазмиды рРМ1и фагов возбудителя мелиоидоза.

ГЛАВА

СТРУКТУРНО-ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ ПЛАЗМИД ВОЗБУДИТЕЛЯ МЕЛИОИДОЗА

З.Г. Физическое картирование плазмид В.ръеийотаЬШ

3.1.1. Рестрикционный анализ и построение физической карты рРМ

3.1.2. Рестрикционный анализ и построение физической карты рСМ2 . 106' 3.2 Функциональная организация плазмидВ.р$еш1ота11е

3.2.1. Локализация-области начала репликации плазмиды рРМ

3.2.2. Клонирование фрагментов плазмиды рМ1 и изучение-продуктов экспрессии.

3.2.3. Клонирование фрагментов плазмиды рСМ2 и изучение продуктов экспрессии.

ГЛАВА

ПЛАЗМИДНЫЕ ВЕКТОРЫ И КЛОНИРОВАНИЕ ГЕНЕТИЧЕСКИХ ДЕТЕРМИНАНТ БУРКХОЛЬДЕРИЙ

4:1. Получение векторов для широкого круга бактериальных хозяев:.

4.2. Передача криптических плазмид B.pseudomallei в J?, mallei.

4.2.1. Мобилизация плазмидных репликонов возбудителя мелиоидоза в штаммы возбудителя сапа.

4.2.2. Анализ плазмидных профилей и фенотипических свойств трансконьюгантов В.mallei.

4.3. Клонирование генетических детерминант B.pseudomallei

4.3.1. Конструирование и анализ геномной библиотеки на основе плазмидного вектора pBR

4.3.2. Конструирование и анализ геномной библиотеки на основе плазмидного вектора pUC 19.

4.3.3. Конструирование и анализ геномной библиотеки на основе плазмидного вектора pBR

ГЛАВА

ГЕНЕТИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ИДЕНТИФИКАЦИИ ПАТОГЕННЫХ БУРКХОЛЬДЕРИЙ

5.1. Молекулярно-генетические методы дифференциации и идентификации микроорганизмов.

5.2. Генетическая трансформация как метод идентификации*.

5.3. Рестрикционный анализ (ПДРФ) микроорганизмов

5.4. Получение группоспецифического ДНК-зонда для идентификации буркхольдерий

5.4.1. Оценка гибридизационной активности рестрикционных фрагментов криптической плазмиды рРМ1 возбудителя мелиоидоза.

5.4.2. Конструирование ДНК-зонда на основе фрагмента криптической плазмиды рРМ

5.4.3. Выявление гомологии ДНК фага М13 и генома возбудителя мелиоидоза.:.

5.5. Идентификация патогенных буркхольдерий методом полимеразной цепной реакции.

5.5.1. Отработка условий постановки ПЦР.■.

5.5.2. Конструирование и анализ эффективности праймеров на основе гена

23 S рРНК.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Разработка основ молекулярно-генетического исследования возбудителя мелиоидоза и близкородственных буркхольдерий»

Прогресс в изучении патогенности микроорганизмов в значительной мере обязан развитию генетических и молекулярно-биологических исследований. Результаты полученные последние годы на модели возбудителей инфекционных заболеваний существенно'расширили наше представление о роли детерминант, имеющих отношение к реализации* патогенности, их первичной структуре и генетической организации, механизмах патогенеза-и формирования антибиотикоустойчивости микроорганизмов, что имеет основополагающее значение для разработки эффективных средств профилактики, лечения и диагностики инфекций. Достаточно интенсивному изучению в этом направлении подвергались и возбудители особо опасных инфекций.

Вшеречне опасных инфекционных заболеваний мелиоидоз и сап всегда занимали место экзотических инфекций" с ограниченным ареалом распространения [14, 44, 133]. Burkholderia mallei вызывает тяжелое инфекционное заболевание у человека и довольно широкого круга животных. В отличие от мелиоидоза нозоареал сапа существенно сузился и прежде широко распространенный среди различных'животных во-многих странах, в том числе во Франции, Германии' и России^ в дальнейшем в большинстве стран сап был практически ликвидирован. Но в некоторых из них', в,частности, Турции, Иране, Монголии и Италии, сап продолжает регистрироваться [14, 67]. Заболеваемость сапом людей отмечается редко. Большие эпидемии не наблюдаются. На территории СССР'сап считался полностью ликвидированным.

В России, как и в других странах СНГ, не было зарегистрировано до сих пор ни одного достоверного случая мелиоидоза, но существуют эндемичные очаги в странах Восточной, Средней и Юго-Восточной^ Азии (Иран, Индия, Турция, Вьетнам, Таиланд, Сингапур, Китай и др.), с которыми имеются обширные экономических и культурные контакты [160, 168, 187, 197, 214, 215, 216, 249, 289, 309].

В 70-х годах прошлого века произошло существенное изменение точки зрения на географию и эпидемиологию этой инфекции [157, 159, 251, 253]. Заболевание мелиоидозом людей и животных и выделение культур Burkholderia pseudomallei из внешней среды в Австралии, Франции, Италии; странах Центральной и Южной Америки показали всю серьезность проблемы диагностики, лечения при почти непредсказуемых последствиях завоза возбудителя в страны с умеренным климатом [14, 129, 137, 152, 158, 167, 168, 241]. Серьезность отношения мировой медицинской общественности к проблеме мелиоидоза подчеркивается* проведением с интервалом в 3 года международных конгрессов в Таиланде (1998), Австралии (2001) и Сингапуре (2004).

Учитывая высокую инфекциозность возбудителей мелиоидоза и сапа* при аэрогенном заражении, формирование тяжелых форм инфекций, трудности их диагностики и высокую летальность, следует считаться с мнением отечественных и зарубежных специалистов, рассматривающих возможность применения В.pseudomallei и B.mallei в качестве биологического оружия и потенциальных агентов биотерроризма категории В, входящих в перечень Centers for Disease Control [110, 148, 151, 244, 268, 304]. Не являясь для России эндемичными, мелиоидоз и сап включены постановлением Правительства РФ в «Перечень заболеваний, представляющих опасность для окружающих» [75].

Таксономическое положение В.pseudomallei и B.mallei долгое время оставалось недостаточно ясным. По основным биологическим свойствам возбудители сапа и мелиоидоза в 8-ом и 9-ом изданиях определителя Bergey были включены в род Pseudomonas, довольно размытого по своим таксономическим границам семейства Pseudomonadaceae [240]. В это семейство входили микроорганизмы с ГЦ-типом в диапазоне от 58 до 71 моль%. Хотя в отдельных работах по изучению ДНК-ДНК гомологии, в том числе проведенных в нашей лаборатории, возбудители сапа и мелиои-доза не обладали таковой с большинством представителей этого рода, они были отнесены ко второй группе рРНК-ДНК гомологии псевдомонад, куда помимо них входили также пять видов фитопатогенных псевдомонад (Pseudomonas cepacia, Pseudomonas gladioli, Pseudomonas pickettii, Pseudomonas solanacearum, Pseudomonas caryophylli).

Дальнейшие исследования уровня филогенетического родства различных групп псевдомонад по результатам секвенирования нуклеотидов 16 S рРНК позволили Yabuuchi et al. (1992) выступить с предложением о выделении 7 видов псевдомонад второй группы рРНК-ДНК гомологии в самостоятельный род Burkholderia [307].

Наличие в природе бактерий, генетически и иммунологически близких к возбудителям сапа и мелиоидоза, но при этом не патогенных для, человека и животных, является давно установленным фактом [9, 136, 223, 280]. Однако лишь в последнее десятилетие, благодаря повысившемуся интересу к проблеме заболеваемости мелиоидозом в мире, изучение биологических характеристик буркхольдерий распространилось не только на клинические изоляты, но и на огромное количество культур, выделенных с помощью селективных сред из внешней среды эндемичных территорий [140, 154, 223, 301, 306]. В ходе этих исследований особое внимание уделено так называемым B.pseudomallei-like штаммам, основное различие которых с возбудителем мелиоидоза состояло лишь в авирулентности для лабораторных животных и более высокой биохимической активности по отношению к олигосахаридам из группы пентоз. Основные диагностические признаки, имеющие значение при серологической диагностике и анализе культур в дифференциальных полуавтоматических системах типа API 20 NE, у этих культур и вирулентных типичных штаммов B.pseudomallei были идентичны [140, 301].

Стабильность дифференциальных признаков (vir , ага+), в сочетании с наличием минорных различий нуклеотидных последовательностей при секвенировании фрагментов 16S рРНК, позволили P.Brett et al. (1998) выделить эти микроорганизмы в самостоятельный вид рода Burkholderia — Burkholderia thailandensis [138]. Несмотря на небольшую дискуссию, последовавшую за этой публикацией, большинство специалистов одобрили это таксономическое нововведение и в публикациях наименование B.thailandensis вытеснило* аморфное — B.pseudomallei-like spp. Необходимость изучения гено- и фенотипических свойств этого вида микроорганизма очевидна как в направлении разработки диагностических и профилактических средств, так и в плане расшифровки механизмов реализации па-тогенности близких ему возбудителей особо опасных инфекций - сапа и мелиоидоза. Так, S.L.Stocki и D.E.Woods (2004) среди большой группы исследованных генов B.thailandensis выявили два, действие которых подавлялось в присутствии арабинозы [287]. Но мнению« авторов, данные гены, имеющиеся и у B.pseudomallei, могут иметь значение в реализации патогенных функций возбудителя мелиоидоза.

Наличие у бактерий внехромосомных элементов наследственности несомненно является чрезвычайно важным фактом. Устойчивость к химическим и физическим агентам, катаболизм органических соединений и детерминация бактериоцинов, участие в рекомбинационных и репарационных процессах бактериальной клетки - только незначительный перечень известных свойств микроорганизмов обусловленных внехромосомными репликонами [20, 58, 80].

Особого внимания заслуживают плазмиды, имеющие отношение к реализации вирулентных свойств патогенных бактерий. Многоплановое и детальное изучение геномной организации Yersinia pestis позволило, в частности, дать физическую и функциональную характеристику внехромосомных элементов, имеющих существенное значение для реализации патогеннности возбудителя-чумы [60, 61, 91, 134, 162, 278]. Плазмиды, имеющие отношение к реализации патогенности, известны также у возбудителей сибирской язвы, псевдотуберкулеза, бруцеллеза, сальмонеллезов, дизентерии и др. [56, 79, 92, 123, 170, 224, 299]. Молекулярное клонирование обеспечило изучение природы и функции продуктов экспрессии выявленных детерминант, разработку на основе анализа хромосомной и плаз-мидных ДНК эффективных средств детекции штаммов методами ДНК-ДНК гибридизации и полимеразной цепной реакции [52, 87, 88, 98, 121]. Изучение' плазмид, ответственных за синтез видоспецифических антигенов, на которых основана иммунодиагностика возбудителей опасных инфекционных заболеваний, способствовало совершенствованию и конструированию принципиально новых диагностических препаратов и тест-систем. Богатый плазмидный спектр у многих видов патогенных бактерий позволяет использовать плазмидный скрининг для типированиш клинических штаммов и проведения эпидемиологического анализа*[78, 122].

Возбудители мелиоидоза и сапа достаточно долго оставались в числе-малоизученных. Методические приемы работы с нуклеиновым^ материалом, как хромосомным, так и внехромосомным, разработаны не были. Исследование собственных плазмид возбудителя мелиоидоза было начато в 80-е годы [76]. Единичные публикации появившиеся позже о выявлении или невыявлении плазмидных репликонов- у возбудителя мелиоидоза не давали представления о природном носительстве, закономерности их распространения и функциональной значимости. Наличие плазмидных репликонов у возбудителя мелиоидоза было также отмечено-в кратком сообщении Tanphaichitra D. (1989), о передаче плазмиды B.pseudomallei ъ Salmonella typhi и-последующем серологическим выявлением у нее антигенов, мелиоидозного микроба [291]. Заслуживает внимания и работа-Jigen J. и Li L. (1992), в которой отмечен не только факт обнаружения в 7 штаммах возбудителя мелиоидоза криптической плазмиды, размером 28,44 т.п.н., но и показана связь с географическим регионом, в котором обнаружен плаз-мидосодержащий штамм [193].

В недавней работе тайских ученых по исследованию геномной организации B.pseudomallei на наборе из 20 штаммов отмечено, что ни один из них не содержал ДНК плазмид [281]. Однако другими авторами в двух штаммах возбудителя мелиоидоза, выделенных в том же Таиланде, обнаружены две плазмиды небольшого размера [254].

В то же время, известно, что плазмиды широко распространены среди представителей рода Pseudomonas, в который до недавнего времени входили возбудители сапа и мелиоидоза. Достаточно хорошо изучены половые факторы, плазмиды антибиотикорезистентности и биодеградации, обеспечивающие псевдомонадам адаптацию к условиям существования в природе [21, 22]. Разнообразие биосинтетических и катаболических реакций у представителей рода Pseudomonas, широко населяющих биосферу и' принимающих активное участие в процессах минерализации органических соединений, очистке окружающей среды от загрязнений, прямо или косвенно связано с плазмидными репликонами [14, 20, 101].

У Burkholderia cepacia, одного из близкородственных B.pseudomallei микроорганизмов, обнаружены плазмиды биодеградации органических соединений, гербицидов, а также плазмиды, детерминирующие устойчивость к ряду неорганических соединений [21, 44, 93, 101, 135, 144]. Известно,' что возбудитель мелиоидоза также обладает целым рядом уникальных свойств, позволяющих ему персистировать и даже размножаться во внешней среде [179, 188, 201,297].

Публикации, непосредственно относящиеся к генетике возбудителей сапа и мелиоидоза, касаются, прежде всего, работ по получению у того и другого видов маркированных штаммов [105, 108, 119], а таюке изучению генетической трансформации [1,2, 24, 96, 102, 104, 107] и конъюгации [4, 5, 7, 68]. С помощью различных мутагенов получен набор полимаркированных штаммов В.рйеис1ота1Ш с зависимостью" от аминокислот и азотистых оснований, а также штаммов, дефектных по протеазам, антигену 8, подвижности и с измененной вирулентностью [69,* 84].

Рядом авторов показана возможность коньюгационного переноса в клетки возбудителей сапа и мелиоидоза КР4 и некоторых других плазмид 1пс Р-1 группы несовместимости [4, 7]. Плазмиды данной группы несовместимости обладают способностью к интеграции с хромосомой В.рзеис1отс11Ш и мо1ут осуществлять мобилизацию хромосомных маркеров [68, 69].

Исследование систем генетического обмена возбудителя мелиоидоза показало, что В.рзеис1ота1Ы способна к трансформации в условиях естественной компетентности. Это позволило использовать метод трансформации для изучения' генома- возбудителя' [24, 103, 106]. Исследования, направленные на изучение природной'компетентности вида, не только-расширили знания о геноме возбудителя мелиоидоза, но>и-позволили^ разработать метод идентификации патогенных буркхольдерий, основанный на генетической трансформации хромосомной ДНК [102].

В последние годы появились первые публикации о клонировании генетического материала возбудителя мелиоидоза [3, 145, 146, 290]. Однако системы клонирования на представителях патогенных псевдомонад и возможность использования для этих целей известных векторных молекул только апробируются.

Заметное место среди перспективных методов-начинают занимать генотипические методы идентификации, позволяющие детектировать определенные участки генома микроорганизма. Среди-генетических диагностических тестов наибольшее применение находят гибридизация нуклеиновых кислот, плазмидный анализ, полимеразная цепная реакция, секвени-рование и др. [8, 15, 16, 265, 267, 294, 296]. Метод молекулярной гибридизации, сводящийся к определению сходства нуклеотидных последовательностей, считается одним из наиболее результативных как в решении спорных вопросов систематики, так и при установлении таксономического положения трудно идентифицируемых обычными методами штаммов.

Гомология ДНК между близкородственными микроорганизмами может достигать очень высокого уровня. Так, например, у представителей видов Y.pestis и Yersinia pseudotuberculosis обнаружено сходство нуклео-тидных последовательностей до 80-100% [141]. Гомология нуклеотидных последовательностей ДНК B.pseudomallei и В.mallei составляет 99-100%, на основании чего некоторые авторы предлагают рассматривать их как биовары одного вида [44, 194, 236, 257, 265]. Филогенетически близкими патогенным буркхольдериям также являются В.cepacia и B.thailandensis [138, 298]. Сходные данные о высокой степени гомологии получены при анализе результатов ДНК-ДНК гибридизации и-у других микроорганизмов [16].

Наличие негомологичных участков у близкородственных видов является предпосылкой для поиска видоспецифических нуклеотидных последовательностей, на основе которых создаются диагностические ДНК-зонды, позволяющие с использованием метода ДНК-ДНК гибридизации идентифицировать микроорганизмы. С помощью ДНК-зондов можно выявлять эпидемически значимые, антибиотикорезистентные или атипичные штаммы микроорганизмов.

К настоящему моменту ДНК-зонды сконструированы для-широкого круга патогенов микробной и вирусной природы. Получены видоспецифи-ческие ДНК-зонды для- идентификации, и дифференциации возбудителей чумы, холеры, сибирской^ язвы, легионеллеза, сальмонеллеза, энтеропато-генной кишечной палочки и многих других микроорганизмов [13, 59, 62, 72, 73, 88, 109, 120, 164, 228, 270]. Первое сообщение о создании видоспе-цифического ДНК-зонда для идентификации возбудителя мелиоидоза опубликовано Sermswan R.W.et al. (1994) [274].

Революция в молекулярной, биологии, связанная- с определением нуклеотидной последовательности, привела к возникновению нового мо-лекулярно-генетического направления в диагностике инфекционных болезней - полимеразной цепной реакции (ПЦР), как одного из наиболее чувствительных, специфичных и легко применимых в лабораторной практике молекулярно-биологического метода идентификации микроорганизмов и типирования штаммов^ ПЦР открывает новые возможности для установления эпидемиологических связей, прогнозирования эпидемической ситуации при изменении свойств «циркулирующих штаммов» [29; 30, 152, 227].

Рассматривая современные методы идентификации буркхольдерий, следует отметить и методы прямого'сравнения их нуклеотидных последовательностей. Существенный прорыв,в изучении буркхольдерий намечается в.связи с секвенированием их геномов.[147, 191, 275]. Проведенные исследования геномной организации' и нуклеотидной последовательности B.psendomallei показало наличие у возбудителя- мелиоидоза двух хромосом с функциональным разделением генов между ними [183]. По мнению авторов^ геноме имеются участки сравнительно недавно приобретенные, что свидетельствует о высокой генетической'пластичности возбудителя, обеспечивающей ему полипатогенность и приспособляемость к выживанию в условиях внешней- среды [184]. Анализ геномных последовательностей буркхольдерий выявил множество гомологичных участков- у B.psendomallei и В.mallei, отсутствующих у B.thailandensis [230]: Проведенное сравнительное исследование вирулентных и авирулентных культур позволило определить набор генов; потенциально имеющих отношение к вирулентности, что открывает новые перспективы .в изучении и-понимании генетических механизмов реализации-патогенности возбудителей мелиоидоза и сапа. Информация о секвенировании генома этих микроорганизмов может быть использована для разработки быстрых и точных методов диагностики и дифференциации патогенов, от близкородственных микроорганизмов [192, 312].

Развитие эпидемиологической ситуации в России в современный условиях, по разным причинам способствующей росту инфекционной заболеваемости, а также возросший уровень экономических связей, наряду со- снижением санитарного контроля, диктуют необходимость настороженности- со стороны медицинской и ветеринарной служб нашей страны, к возможным случаям- появления такой прежде экзотической для России.инфекции как мелиоидоз.

На основании изложенного, представляется необходимым проведение научных исследований, направленных на изучение особенностей геномной организации буркхольдерий, включая анализ внехромосомных ре-пликонов, выявление детерминант, ответственных за реализацию патоген-ности, поиск видоспецифических последовательностей и разработку современных генотипических методов'идентификации.

Представленная диссертация содержит обобщенные результаты государственных тем, выполненных в лаборатории молекулярной биологии Волгоградского научно-исследовательского противочумного института в этих направлениях. Вошедшие в диссертацию материалы получены как лично соискателем, так и в соавторстве с сотрудниками лаборатории, работавшими под его руководством. Некоторые эксперименты проведены совместно с сотрудниками лабораторий генетики и структурно - функционального анализа микроорганизмов.

Цель работы заключалась в молекулярно-генетическом исследова-штлгВ.рзеийотаИег и близкородственных видов с использованием гибри-дизационного, плазмидного, рестрикционного анализа, клонирования генетических детерминант и в разработке основ генетических методов идентификации патогенных буркхольдерий.

Задачи исследования:

1. Изучить уровень внутривидовой и межвидовой гомологии ДНК буркхольдерий и оценить значение гибридизационного анализа в качестве таксономического критерия.

2. Сконструировать многофункциональные плазмидные векторы, способные реплицироваться в клетках B.pseudomallei, В.mallei, E.coli, B.subtilis, оценить их стабильность в этих видах микроорганизмов в зависимости от условий селекции.

3. Получить геномные библиотеки B.pseudomallei на основе плаз-мидных векторов и провести анализ рекомбинантных клонов E.coli с целью выявления генетических детерминант, имеющих отношение к реализации некоторых биологических свойств возбудителя мелиоидоза.

4. Осуществить поиск оптимальных методов плазмидного скрининга штаммов B.pseudomallei. Изучить плазмидный спектр штаммов возбудителя мелиодоза с оценкой стабильности наследования плазмид и возможности их использования в качестве маркеров для внутривидового типирова-ния.

5. Разработать технику препаративного выделения плазмидных ДНК B.pseudomallei, провести гибридизационный, рестрикционный анализ и физическое картирование внехросомных репликонов микроорганизма.

6. Изучить возможность экспрессии криптических плазмид B.pseudomallei в близкородственных видах буркхольдерий: провести мобилизацию плазмидных репликонов и охарактеризовать стабильность и фе-нотипические проявления,их в рекомбинантных штаммах.

7. Осуществить клонирование фрагментов криптических плазмид возбудителя мелиоидоза и провести анализ продуктов экспрессии в клетках E.coli с целью выявления генетических детерминант, имеющих функциональное значение.

8; ©ценить эффективность метода генетической трансформации: для идентификации патогенных буркхольдерий и значение анализа полиморфизма. длины рестрикционных фрагментов (ПДРФ) для внутривидовой^ дифференциации.

9. Разработать, методические подходы к генодиагностике буркхольдерий с. использованием ДНК-зондов на основе фрагментов криптических плазмид возбудителя мелиоидоза и полимеразной цепной реакции на основе последовательностей гена 23S рРНК.

Научная новизна:

Проведено молекулярно-генетическое изучение B.psendomallei и других, представителей Burkholderia и разработаны^ подходы к идентификации; патогенных, буркхольдерий с использованием генотипических методов. На основании' гибридизационного; анализа: установлен; высокий; уровень ДНК-гомологии B.psendomallei,. В.mallei и- BJhailandensis как; свидетельство их таксономической близости. Филогенетическое родство данных видов- подтверждается идентичностью их рекомбинационных систем, выявленной во взаимной генетической трансформации-.

Впервые проведено изучение внехромосомных репликонов B.pseudomallei. Выделены и охарактеризованы четыре типа криптических плазмид возбудителя мелиоидоза, отличающихся размерами и профилями рестрикции. Плазмиды стабильно наследуются в клетках микроорганизма в процессе хранения и пассирования штаммов in vitro и in vivo, что открывает перспективы использования плазмидного анализа для внутривидового типирования культур.

Впервые показано:,, что плазмидные репликоны одного типа, выделенные из , штаммов B.pseudomallei pa3личного географического происхождения, имеют идентичные рестрикционные- профили. Все типы плазмид обладают выраженной взаимной гомологией и гомологией с ДНК близкородственных буркхольдерий В.mallei и B.thailandensis, проявляя себя в реакциях гибридизации как хромосомная ДНК B.pseudomallei, что позволяет рассматривать их в качестве резидентных плазмид возбудителя мелиоидо-за.

Впервые осуществлено физическое картирование плазмид возбудителя мелиоидоза рРМ1 и рСМ2. Путем маркирования и клонирования между 10-й и 12-й координатами физической карты критической1 плазмиды рРМ1 локализована область начала репликации и впервые показана возможность функционирования оп-региона плазмиды, возбудителя мелиоидоза в штаммах Е. coli.

Впервые идентифицирована детерминанта криптической плазмиды рРМГ, локализованная между 12-й и 0-й координатами физической карты, ответственная за изменение белкового состава наружной мембраны, развитие множественной антибиотикорезистентности и формирование у реком-бинантного* штамма E.coli капсулоподобной структуры. Установлено, что белки наружной мембраны рекомбинантных клонов, специфически взаимодействующие с иммуноглобулинами поликлональной сыворотки к клеткам B.pseudomallei, способны к ассоциации в высокомолекулярные формы.

Впервые в составе криптической плазмиды рСМ2 идентифицирован Hind III - фрагмент размером 2,471* т.п.н., детерминирующий в рекомби-нантном штамме E.coli синтез белка с молекулярной массой ~100 кДа, специфически взаимодействующий с иммуноглобулинами B.pseudomallei. Секвенирование и анализ с использованием программы BLAST показали наличие гомологии данного фрагмента с представленными в GenBank нук-леотидными последовательностями плазмидных репликонов pSB102 (AJ304453.1) и pIP02T (AJ297913.2), детерминирующими синтез TraS (САС79161.1) и TraR (САС82765.1),белков, соответственно.

При анализе геномной библиотеки B.pseudomallei, полученной на векторе pBR325, отобраны клоны, обладающие в клетках рекомбинантных штаммов E.coli внеклеточной протеазной и гемолитической активностями, а также внеклеточной продукцией мелиоидозных антигенов, выявляемых в реакциях иммунопреципитации и иммуноэлектрофореза фильтратов бульонных культур рекомбинантных штаммов с очищенными IgG и поливалентной мелиоидозной сывороткой. С использованием мультиплексной ПЦР показано наличие в рекомбинантных штаммах дополнительного ам-пликона размером 375 п.н., что свидетельствует о,структурной перестройки их геномов.

С помощью мобилизующей плазмиды RPl::TnlO впервые осуществлена передача криптических плазмид B.pseudomallei рСМ2 и рСМЗ в штамм В.mallei Ц4, определены плазмидные профили и изучены отдельные фенотипические свойства полученных культур. Показано опосредованное влияние криптических плазмид возбудителя мелиоидоза на вирулентность трансконьюгантов.

В репликоне рРМ1 в пределах сайтов Pst Г (5.4) - Ват Ш (9.3) ее физической карты идентифицирован участок, обеспечивающий гомологичную ДНК-ДНК гибридизацию с геномами буркхольдерий. Находящийся в пределах данного участка Sal GI-фрагмент размером 0,4 т.п.н., испытанный в качестве ДНК-зонда и обнаруживший гомологию только с ДНК близкородственных микроорганизмов B.pseudomallei, В.mallei и В. cepacia, был проклонирован в составе фагового вектора М13тр18.

Практическая ценность:

Предложены методы скрининга штаммов B.pseudomallei на наличие внехромосомных репликонов и препаративного выделения плазмид возбудителя мелиоидоза, включенные в методические рекомендации' «Лабораторная диагностика, лечение и профилактика мелиоидоза», утвержденные 1 ноября 1994г. зам. председателя Госкомсанэпиднадзора России Онищен-ко Г.Г. и подтвержденные патентом на изобретение Российского агентства по патентам и товарным знакам № 2218401 от 10.12.2003 г.

Предложен метод идентификации бактериальных- и морфологически , измененных форм патогенных буркхольдерий, вошедший в практические руководства «Мелиоидоз. Лабораторная диагностика возбудителей особо опасных инфекционных болезней» (Саратов, 1998), «Сап., Лабораторная диагностика возбудителей особо опасных инфекционных болезней» (Саратов, 1998) и подтвержденный авторским свидетельством Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий № 1190638 от 16.07.82г.

Сконструирован ряд многофункциональных плазмидных векторов, способных реплицироваться' в Blpseudomallei, В.mallei, E.coli, B-.subtilis, охарактеризована-их стабильность в. клетках указанных видов микроорганизмов в различных селективных условиях. Практическая значимость векторов подтверждена авторскими свидетельствами Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий №-298237 от 3.07.89 г и №-• 322767 от 2.01.91 г.

Разработана технология1 мобилизации мелиоидозных плазмид в В.mallei и получен набор рекомбинантных штаммов возбудителя сапа, содержащих криптические плазмиды рСМ2 и рСМЗ B.pseudomallei, предназначенных для изучения генетических детерминант и функциональной роли данных плазмид (Методические рекомендации «Применение мобилизации для передачи криптических плазмид B.pseudomallei в-гетерологичные виды», утвержденные директором Волгоградского научно - исследовательского противочумного института Тихоновым Н.Г. 20 апреля 1998'г.).

Отработаны-системы клонирования и методы детекции генетических детерминант возбудителя мелиоидоза в-кишечной палочке. Полученные рекомбинантные штаммы E.coli, экспрессирующие отдельных хромосомные и плазмидные признаки B.pseudomallei, депонированы в государственной коллекции патогенных бактерий «Микроб» Российского научно-исследовательского противочумного института «Микроб», а также поддерживаются- в коллекционном центре живых культур Волгоградского научно-исследовательского противоч5^много института.

На основе фрагмента плазмидной ДНК возбудителя: мелиоидоза pPMl сконструирован рекомбинантный фаг М13РМ, являющийся, продуцентом группоспецифического ДНК-зонда для идентификации буркхоль-дерий путем введении1 метки техникой достройки, секвенационного прай-мера. Разработанный метод вошел в методические рекомендации: «Лабораторная; диагностика, лечение* и профилактика сапа», утвержденные; 16 марта 1995 г. зам. председателя Госкомсаиэпидиадзора России Онищенко F.F.; «Лабораторная диагностика, лечение и профилактика мелиоидоза», утвержденные' 23 сентября 1994 г. зам: председателя ■Роскомсанэпиднадзо-ра России Оншценко T.F., а также в практические руководства «Мелиои-доз. Лабораторная? диагностика возбудителей особо опасных, инфекционных болезней» (Саратов, 1998), «Gan.„ Лабораторная^ диагностикам возбудителей особо опасных инфекционных болезней» (Саратов, 1998).

Разработаны, методические подходы к ПЦР-диганостике: буркхольде-рий, вошедшие в «Практическое пособие для подготовки врачей-бактериологов) и эпидемиологов: по вопросам противодействия биотерроризму» (Волгоград, 2004). Путем анализа: гена 23 S pPHK проведены первичные исследования; по поиску видо- и группоспецифических праймеров для выявления патогенных буркхольдерий:

Материалы диссертации• используются при чтении;лекций и проведении практических занятий для? студентов« медико-биологического факультета Волгоградского государственного? медицинского» университета, а^ также накурсах профессиональнойшереподготовкш «Диагностика. особо>опас-ных инфекций, индикация, возбудителей; особо опасных инфекций,, санитарная охрана территории и противоэпидемическая защита населения»,. «Особо опасные инфекции для лаборантов противочумной системы Министерства здравоохранения РФ»; на курсах повышения квалификации «Противодействие биотерроризму» и «Клиническая микробиология», проводимых в Волгоградском научно-исследовательском противочумном институте.

Положения, выносимые на защиту

1. На основании современных молекулярно-генетических технологий, включающих гибридизационный, плазмидный, рестрикционный анализы, клонирование генетических детерминант, разработаны методические' подходы к изучению геномов возбудителя мелиоидоза и родственных ему буркхольдерий В.mallei и B.thailandensis и созданию средств их идентификации и типирования.

2. Штаммы возбудителя мелиоидоза* содержат четыре вида плазмид, отличающихся размерами и рестрикциоными профилями, стабильно наследующихся в процессе хранения и пассирования' культур in vitro и- in vivo. Данные внехромосомные репликоны можно считать резидентными для возбудителя мелиоидоза на основании1 идентичности профилей рестрикции плазмид одного размера, выделенных из штаммов B.pseudomallei отдаленных географических регионов, отсутствия ДНК-гибридизации с гетерологичными видами микроорганизмов, выраженной гомологии всех внехромосомных репликонов между собой, а также с ДНК B.pseudomallei и ДНК родственных буркхольдерий (при, отсутствии в них плазмид).

3. Ori-регион плазмиды рРМ1 возбудителя мелиоидоза способен функционировать в клетках кишечной палочки. Клонированная в E.coli последовательность ДНК плазмиды рРМ1, локализованная в пределах 12 и О координат её* физической карты, детерминирует в штаммах кишечной палочки множественную резистентность к антибиотикам, формирование капсулоподобной структуры и синтез дополнительных белков наружной мембраны, специфически взаимодействующих с мелиоидозной сывороткой.

4. Hind Ш - фрагмент, размером 2,471 т.п.н., плазмиды рСМ2 возбудителя мелиоидоза детерминирует в рекомбинантном штамме E.coli синтез белка с молекулярной массой -100 кДа, специфически взаимодействующего с иммуноглобулинами B.pseudomallei. Данный фрагмент обладает гомологией с представленными в GenBank нуклеотидными последовательностями плазмидных репликонов pSB102 и р1Р02Т, ответственных за синтез TraS и TraR белков.

5. Криптические плазмидные репликоны рСМ2 и рСМЗ B.pseudomallei мобилизуются в щтаммы близкородственного вида В.mallei коньюгативными плазмидами PI группы несовместимости, стабильно наследуются в трансконъюгантах, как правило, вместе с мобилизующими плазмидами, образуя в ряде случаев делеционные варианты и оказывая опосредованное влияние на< вирулентность рекомбинантных штаммов возбудителя сапа.

6. Клонированные последовательности хромосомной ДНК B.pseudomallei обеспечивают рекомбинантным.штаммам E.coli внеклеточную протеазную и гемолитическую активности, а также внеклеточную продукцию мелиоидозных антигенов, выявляемую в реакциях иммунопре-ципитации, иммуноэлектрофореза фильтратов бульонных культур рекомбинантных штаммов с очищенными IgG и поливалентной мелиоидозной сывороткой. Мультиплексная ПЦР обнаруживает в рекомбинантных штаммах дополнительный ампликон размером 375 п.н.

7. B.pseudomallei обладает высокой степенью ДНК-гомологии, а также сходством- рекомбинационных систем с В'.mallei и B.thailandensis. Феномен генетической трансформации, основанный на природной трансфор-мабельности возбудителя мелиоидоза, является эффективным методом идентификации B.pseudomallei, в том числе, в случаях латентного течения мелиоидозной инфекции, а также близкородственных буркхольдерий.

8. Фрагмент плазмиды pPMl возбудителя мелиоидоза, находящийся в пределах сайтов Pst I (5.4) - Ваш Ш (9.3) ее физической карты, обладает, гомологией с геномами буркхольдерий, выявляемой в ДНК-ДНК гибридизации. Рекомбинантный фаг М13РМ, содержащий Sal GI-фрагмент гомологичного участка криптической плазмиды, является- продуцентом груп-поспецифического ДНК-зонда для идентификации буркхольдерий.

Апробация работы

Диссертация выполнена на основе 13 государственных плановых тем, в 9 из которых соискатель являлся научным руководителем. Основные результаты диссертации изложены в 45- опубликованных работах, в том числе в двух патентах, трех авторских свидетельствах, двух коллективных монографиях и практическом пособии по подготовке врачей-бактериологов и эпидемиологов по вопросам противодействия биотерроризму. Материалы диссертации. были представлены на. 1-ой Всесоюзной, конференции «Теоретическая и прикладная инфекционная иммунология». (Москва, 1982), Российской научной конференции «Генетика и биохимия* вирулентности особо опасных инфекций» (Волгоград, 1992), Российской научной конференции «Современные аспекты природной очаговости, эпидемиологии и профилактики особо опасных инфекционных болезней» (Ставрополь, 1993), 7-ом международном конгрессе «Бактериология и прикладная микробиология» (Прага, 1994), международном симпозиуме «Идеи Пастера в борьбе с инфекциями» (Санкт-Петербург, 1995), международной- научной конференции, посвященной 150-летию со дня> рождения- И.И.Мечникова'(Харьков; 1995), научно-практической конференции, посвященной 100-летию образования противочумной службы России (Саратов, 1997), научно-практической конференции «Проблемы санитарно-эпидемиологической охраны территории стран СНГ» (Саратов, 1998), научной конференции, посвященной 70-летию НИИ микробиологии МО РФ «Диагностика, лечение и профилактика опасных инфекционных заболеваний. Биотехнология. Ветеринария.» (Киров, 1998), научной конференции, посвященной 25-летию ГНЦ прикладной микробиологии «Проблемы медицинской и экологической биотехнологии» (Оболенск, 1999), 1-й научно-практической конференции «Генная диагностика особо опасных инфекций» (Саратов, 2000), VIII съезде Всероссийского общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов (Москва, 2002), научно-практическом симпозиуме в рамках международной конференции «Геномика, протеоми-ка и биоинформатика для медицины» (Москва, 2002), IV всероссийской научно-практической конференции «Генодиагностика инфекционных заболеваний» (Москва, 2002), IV межгосударственной научно-практической конференции государств стран СНГ «Современные технологии в диагностике особо опасных инфекционных болезней» (Саратов, 2003). XI Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2004), на итоговых ежегодных научных конференциях Волгоградского научно-исследовательского противочумного института.

Объем и структура работы.

Диссертация изложена в форме монографии на 279 листах машинописного текста, состоит из введения и 5 глав, включающих описание литературных данных и результаты собственных исследований, заключения и выводов. Работа содержит литературные ссылки и иллюстрации в виде 22 таблиц и 90 рисунков. Указатель литературы включает 312 источников.

Заключение диссертации по теме «Микробиология», Замараев, Валерий Семенович

ВЫВОДЫ

1. С использованием современных молекулярно-генетических методов (гибридизационного, плазмидного, рестрикционного анализа, клонирования генетических детерминант) проведено изучение геномов B.pseudomallei и родственных ей видов буркхольдерий и определены методические подходы к созданию средств их идентификации и типирования.

2. Разработаны эффективные методы плазмидного скрининга штаммов и препаративного выделения плазмидных ДНК B.pseudomallei. Впервые выявлены и охарактеризованы криптические плазмиды возбудителя мелиоидоза, обозначенные pPMl, рСМ2, рСМЗ и рСМ4. Плазмиды стабильно наследуются в процессе хранения и пассажей штаммов B.pseudomallei in vitro и in vivo, что открывает возможность использования плазмидного анализа для внутривидового типирования культур возбудителя мелиоидоза.

3. Определены размеры плазмид возбудителя мелиоидоза, показана идентичность профилей рестрикции плазмидных репликонов одного размера, независимо от места и времени выделения культуры. Все типы плазмид обладают выраженной взаимной гомологией и гомологией с ДНК близкородственных буркхольдерий B.mallei и B.thailandensis, проявляя себя в реакциях гибридизации как хромосомная ДНК B.pseudomallei, что позволяет рассматривать их в качестве резидентных плазмид возбудителя мелиоидоза;

4. Осуществлено физическое картирование плазмид возбудителя мелиоидоза pPMl и рСМ2. Путем маркирования и-клонирования локализована область начала репликации pPMl между 10-й и 12-й координатами физической карты криптической плазмиды. Показана возможность функционирования ori-региона криптической плазмиды возбудителя мелиоидоза в штаммах E.coli.

5. Путем клонирования и последующего анализа показано, что плаз-мида рРМ1 содержит детерминанты, ответственные за развитие множественной антибиотикорезистентности, изменение белкового состава наружной мембраны и формирование у рекомбинантного штамма E.coli капсуло-подобной структуры. Белки, наружной* мембраны рекомбинантных клонов специфически взаимодействуют с иммуноглобулинами поликлональной мелиоидозной сыворотки и способны к ассоциации в более высокомолекулярные формы."

6. Установлено,- что Hind"III — фрагмент размером 2,471 т.п.н. плазмиды рСМ2 детерминирует в рекомбинантном штамме E.coli синтез белка с молекулярной массой 100 кДа, специфически взаимодествующего с иммуноглобулинами возбудителя мелиоидоза. Секвенирование и анализ с использованием программы BLAST позволили выявить гомологию данного фрагмента с представленными в GenBank нуклеотидными последовательностями плазмидных репликонов pSB102 (AJ304453.1) и рГР02Т (AJ297913.2), ответственных за синтез TraS (САС79161.1) и TraR (САС82765.1) белков, соответственно.

7. Осуществлена передача криптических плазмид B.pseudomallei рСМ2 и рСМЗ в штамм P.mallei Ц4 с помощью мобилизующей плазмиды RPl::Tnl0. Плазмидные репликоны возбудителя мелиоидоза стабильно наследуются в новом хозяине в условиях in vitro и in vivo. При пассаже трансконьюгантов на золотистых хомячках происходит структурная перестройка репликона рСМ2, выражающаяся в образовании делеционных вариантов. Показано опосредованное влияние плазмид возбудителя мелиоидоза на вирулентность трансконьгантного штамма возбудителя сапа.

8. Сконструирован ряд многофункциональных плазмидных векторов, способных к репликации в клетках B.pseudomallei, В.mallei, E.coli, B.subtilis. Охарактеризована их стабильность в клетках указанных видов микроорганизмов в различных селективных условиях. Полученные векторы могут быть использованы. для изучения генетических детерминант буркхольдерий, имеющих хромосомную и плазмидную локализацию.

9. На основе вектора pBR325 получена геномная^ библиотека B.pseudomallei. Отобраны клоны, обладающие в клетках рекомбинантных штаммов ,Е. coli внеклеточной'протеазной и гемолитической активностями, а также внеклеточной продукцией антигенов, выявленных в реакциях им-мунопреципитации и иммуноэлектрофореза фильтратов бульонных культур- рекомбинантных штаммов с очищенными IgG и поливалентной^ ме-лиоидозной» сывороткой. Мультиплексной ПЦР показано наличие в рекомбинантных штаммах дополнительного ампликона размером 375 п.н., что свидетельствует о структурной перестройки их геномов.

10. Показано, что природная трансформабельность возбудителям мелиоидоза, проявляющаяся нат плотной питательной среде, позволяет использовать феномен генетической трансформации длящего ¿идентификации, в том числе в случаях латентного течения мелиоидозной инфекции, а также для идентификации близкородственных буркхольдерий В.mallei и B'.thailandensis, обладающих высокой степенью ДНК-гомологии и» сходством рекомбинационных систем по отношению к B.pseudomallei.

11. Установлено, что гомологию с геномами буркхольдерий плазми-ды рРМ1 обеспечивает фрагмент, находящийся в пределах сайтов Pst I (5.4) - Bam Ш (9.3) ее физической карты. Sal Gl — фрагмент гомологичного участка размером 0,4 т.п.н. проклонирован в составе нитевидного фага М13тр18. Полученный рекомбинантный фаг М13РМ может применяться в качестве продуцента группоспецифического ДНК-зонда для идентификации буркхольдерий при-введение метки* техникой достройки секвенацион-ного праймера.

Список литературы диссертационного исследования доктор медицинских наук Замараев, Валерий Семенович, 2005 год

1. Абаев И.В., Акимова JI.A., Шитов В.Т. и др. Трансформация патогенных псевдомонад плазмидной ДНК // Молекул, генетика.- 1992. №.3-4.- С.17-20.

2. Абаев И.В., Асташкин Е.И. Пачкунов Д.М. и др. Pseudomonas mallei и Pseudomonas pseudomallei: введение и поддержание природных и ре-комбинантных плазмидных репликонов // Молекул, генетика.- 1995.-№.1.- С.28-36.

3. Абаев И.В., Померанцева О.М., Асташкин Е.И. Создание библиотек геномной ДНК Pseudomonas mallei и Pseudomonas pseudomallei. II Мол. генет., микробиол. вирусол.- 1997.- №.1.- С. 17-21.

4. Агеева Н.П., Меринова JI.K. Влияние условий скрещивания на эффективность передачи плазмиды RP4 у Pseudomonas mallei II Микро-биол.журн.- 1986.- №.5.- С.3-6.

5. Агеева Н.П., Меринова JI.K., Петере М.К. Применение плазмиды рТНЮ для получения донорных штаммов Pseudomonas mallei II Молекул. генетика.- 1989.- №.4.- С. 14-18.

6. Агеева Н.П., Меринова JI.K. Особенности наследования Тп5 клетками Pseudomonas mallei II Мат. Российской научной конференции «Генетика и биохимия вирулентности возбудителей особо опасных инфекций».- Волгоград, 1992.- С.26.

7. Анищенко М.А., Меринова JI.K. Мобилизация с помощью плазмид группы несовместимости Р-1 в штаммы Pseudomonas pseudomallei и Pseudomonas mallei потенциальных векторов для клонирования ДНК //Мол. генет., микробиол. вирусол.- 1992. -№.5-6.- С.13-16.

8. Антонов В.А. Первичная характеристика плазмид возбудителя мелио-идоза: Автореф. дис. .канд. мед. наук. Саратов, 1995.- 22с.

9. Антонов В.А., Илюхин В.И., Замараев B.C., Трушкина М.Н. Использование плазмид возбудителя мелиоидоза в качестве ДНК-зондов для идентификации близкородственных микроорганизмов // Биотехнология.- 2000.-№.4.- С.8-14.

10. Ю.Антонов В.А., Гришкина Т.А., Замараев B.C., Илюхин В.И. Влияние температуры культивирования на внехромосомные факторы наследственности возбудителя мелиоидоза // Журн. микробиол. эпидемиол. иммунобиол.- 2003.- №.2.- С.3-7.

11. П.Антонов Ю:В., Поповцева Л. Д., Ярулин Р.Г. Проблемы-резистентности возбудителя мелиоидоза к антибиотикам // Антибиотики и химио-тер.- 1991.- Т.36, №¡10.- С.26-28.

12. Балахонов-С.В:, Ганин B.C., Урбанович Л.Я! и др. Сравнительное изучение различных методов определения токсигенности Vibrio cholerae II Мол. генет., микробиол. вирусол.- 1999.- №.1.- С.9-12.

13. Беляков;В.Д., Ряпис Л.А., Илюхин В.И. Псевдомонады и псевдомоно-зы.- М.: Медицина, 1990.- 224 с.

14. Блохина И.Н.,Леванова Г.Ф. Геносистематика бактерий и ее'природное значение // Успехи микробиологии. М.: Наука,- 1990,- Т.24'.- С.З-25.

15. Блохина И.Н., Леванова Г.Ф., Антонов А.С. Систематика бактерий (с основами геносистематики) // Н.Новгород: изд-во Нижегородского унта, 1992.- 171 с.

16. Бондаренко В.М. Эволюция бактерального генома // Биохимия и био-физ. микроорганизмов.- Горький, 1982.- С.5-12.

17. Бондаренко В.М., Яблочков А.Л: Эволюция генома и генофонд бактериальных популяций // Журн. микробиол^, эпидемиол., иммунобиол. -1986. -Ж8.-С.92-99.

18. Воронин А.М., Гвоздяк Р.И., Иерепнихатка В.И. и др. Плазмиды Pseudomonas syringae II Изв. АН,СССР.- 1989.- №.6.- С.916-921.

19. Воронин А.М., Кочетков В.В., Скрябин Г,К. Группы несовместимости плазмид биодеградации- нафталина бактерий рода Pseudomonas II Генетика.- 1980.'- Т.16, №.5.- С.792-803.

20. Воронин А.М. Биология плазмид // Успехи, микробиологии.- М.: Наука, 1983.- Т.18.- С.143-163.

21. Воронин А.М., Анисимова Л.А. R-плазмиды Pseudommonas aeruginosa II Антибиотики.- 1984.-№.9.- С.678-695.

22. Будченко A.A. Сравнительный электрофоретический анализ белков патогенных псевдомонад: Автореф.дис.канд.биол.наук. Саратов, 1995.- 24с.

23. Буланцев A.JL, Лозовая H.A. Спонтанная генетическая трансформация у Pseudomonas pseudomallei // Мол. генет., микробиол. вирусол. -1985.-№.9.- С.11-15.

24. Васкоренко З.П., Фролов А.Ф., Смирнов В.В., Рубан Н.М. Жирно-кислотные профили бактерий, патогенных для человека и животных // Киев.: Наукова думка, 1992. - 264 с.

25. Гаранина С.Б. Конструирование тест — системы, основанной на поли-меразной цепной реакции, для детекции возбудителя бруцеллёза // Ав-тореф. дис. .канд. биол. наук. Саратов.- 1996.- 20 с.

26. Гинзбург A.JL, Брюханов А.Ф., Янишевский Н.В. и др. Применение метода генного зондирования для выявления эпидемически опасных штаммов холерных вибрионов // Молекул, генетика.- 1987.- №.11.-С.9-13.

27. Гинзбург A.JL, Горелов В.Н. Молекулярно-генетические методы решения задач медицинской микробиологии и эпидемиологии // Проблемы инфектологии / под ред. C.B. Прозоровского.- М.: Медицина, 1991.- С.139-149.

28. Гинзбург A.JL, Романова Ю.М. Полимеразная цепная реакция в диагностике и контроле лечения инфекционных заболеваний // Клин. лаб. диагност.- 1998.- №.2.- С.35-39.

29. Горбунова В.Н., Баранов В.Н. Введение в молекулярную диагностику и генотерапию наследственных заболеваний.- СПб.: Специальная литература, 1997,- 287с.

30. Гришкина Т.А., Меринова JI.K. Выделение и характеристика умеренных фагов Pseudomonas pseudomallei II Генетика, микробиология и совершенствование методов лабораторной диагностики особо опасных инфекций.- Саратов, 1991.- С.131-135.

31. Гришкина Т.А., Меринова JI.K. Изучение спонтанной фагопродукции Pseudomonas pseudomallei и круга хозяев мелиоидозных фагов среди представителей рода Pseudomonas // Микробиол.журн.- 1993.- Т.55, №.4.- С.43-47.

32. Гришкина Т.А. Явление лизогении у Pseudomonaspseudomallei и сравнительная характеристика мелиоидозных фагов: Дис.канд. мед. наук. -Волгоград.- 1996,- 118 с.

33. Дентовская C.B., Куличенко А.Н. Использование молекулярно — генетических подходов для лабораторной диагностики бруцеллёза // Сб. науч. тр «Проблемы особо опасн. инф.» / Под ред. В.В. Кутырева.- Саратов, 1999.- С.3-11.

34. Домарадский И.В. О «побочных» эффектах плазмид (R-плазмиды и вирулентность) // Мол.генет., микробиол.вирусол.- 1987.- №.6.- С.3-9.

35. Дорофеев А.Н. Распределение животных по степени восприимчивости к сапу // Ветеринария.- 1941.- №.6. С.6-10.

36. Дубейковский A.M., Гафаров А.Б., Наумов A.B. Плазмидный контроль деградации сульфоароматических соединений штаммом Pseudomonas sp. DS 1304//Генетика.- 1992.-Т.28, №.11.-С.34-39.

37. Есикова Т.З., Гршценков В.Г., Кулаков Л.А. и др. Группы несовместимости плазмид биодеградации Е-капролактама бактерий рода Pseudomonas // Мол. генет., микробиол.вирусол.- 1990.- №.4.- С.25.

38. Замараев B.C., Ряпис J1.A. Влияние температуры на динамику размножения возбудителя мелиоидоза в жидкой питательной среде // Патологическая. физиология особо опасных инфекций.- Саратов, 1981.- С. 145-150.

39. Замараев B.C. Л-трансформация возбудителей как один из путей реализации хронического носительства бактерий рода Pseudomonas // Микробиол. журн.- 1987.- Т.49.- №.3.- С.91-96.

40. Замараев B.C., Антонов Ю.В., Илюхин В.И. Индукция морфологических вариантов возбудителя мелиоидоза в организме животных // Труды Волгоградского мед. ин-та,- Волгоград, 1981.- Т.34,- №.4.- С.55-56.

41. Иванова B.C., Лебедева С.А., Гончарова H.A., Гурлева Г.Г. Скрининг плазмид у музейных штаммов чумного микроба, выделенных из разных природных очагов // Мол. генет., микробиол. вирусол.- 1990.-№.3.- С.16-18.

42. Илюхин В.И., Лихолетов С.М., Мельников Б.И. Диффузионные камеры при работе с возбудителями особо опасных инфекций // Пробл. особо опасн. инф.- 1978.- №.4.- С. 21-24.

43. Илюхин В.И. Псевдомонадные инфекции в патологии человека // Журн.микробиол., эпидемиол. и иммунобиол.- 1985.- №.2.- С. 110-114.

44. Илюхин В.И. Антигенная структура и серология псевдомонад // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол.- 1986.- №.5.- С.88-93.

45. Илюхин В.И., Батманов В.П. Клиника и лечение мелиоидоза // Мелио-идоз /Под ред. акад. Н.Г.Тихонова.- Волгоград, 1995.- С.142-161.

46. Илюхин В.И., Замараев B.C., Каплиев В.И. Микробиология, таксономия и бактериологическая диагностика Pseudomonas pseudomallei II Мелиоидоз / Под ред. акад. Н.Г.Тихонова.- Волгоград, 1995,- С.8-26.

47. Илюхин В.И., Сенина Т.В., Плеханова Н.Г. и др. Burkholderia thailan-densis: биологические свойства, идентификация и таксономическая позиция // Мол. генетика.- 2002.- №.1.- С.7-11.

48. Калина Г.П. Род Pseudomonas-, новые аспекты старой проблемы // Журн. микробиол., эпидемиол., иммунобиол.- 1985.- №.5.- С.91-98.

49. Каплиев В.И., Денисов И.И., Курилов В.Я. Морфологическая характеристика слизистых вариантов Pseudomonas pseudomallei II Журн. микробиол. эпиедмиол. иммунобиол.- 1990.- №.10.- С.41-45.

50. Каминский Г.Д. Быстрые и медленные перестройки генома: молеку-лярно-генетические механизмы изменений вирулентности // Вестн. АМН СССР.- 1989.-№.11.- С.41-49.

51. Кириллина O.A. Физическое картирование ДНК плазмиды pFra чумного микроба, клонирование области, ответственной за синтез кап-сульного антигена: Автореф. дис. . канд.мед.наук.- Саратов, 1992,-19с.

52. Клонирование ДНК. Методы: Пер. с англ. / Под ред. Д. Гловера.- М.: Мир, 1988.- 538 с.

53. Косович П.В., Прозоров-A.A. Естественная трансформация у бактерий //Молекул, генет. микробиол., вирусол.- 1990.- №.1.- С.3-6.

54. Костромина Е.А. Молекулярно-генетические- свойства штаммов холерного вибриона Эльтор с различной эпидемической значимостью: Автореф. дис. .канд. мед. наук. Саратов, 2004. - 22 с.

55. Кравцов А.Н., Корешкова Е.А., Рыжков В.Ю. Собственные плазмиды у возбудителя бруцеллеза // Мат. науч. конф. «Современные аспекты природной очаговости, эпидемиологии и профилактики особо опасных инфекционных болезней».- Ставрополь, 1993.- С.217-218.

56. Краткий определитель бактерий Берги: Пер. с англ. / Под ред. Дж. Хоулта.- М.: Мир, 1980.- 496 с.

57. Кудлай Д.Г. Внехромосомные факторы наследственности бактерий и их значение в инфекционной патологии.- М.: Медицина,- 1977.- 224 с.

58. Куличенко А.Н. Конструирование молекулярно-генетических систем для детекции возбудителей особо-опасных инфекций: чумы, бруцеллеза и сибирской язвы // Автореф. дис. . докт. мед. наук. Саратов, 1995-43 с.

59. Кутырев В.В., Попов Ю.А., Проценко O.A. Плазмиды патогенности чумного микроба // Мол.генет., микробиол.вирусол.- 1986.- №.6.- С.З-10.

60. Кутырев В.В., Филиппов A.A., Шавина Н.Ю., Проценко O.A. Генетический анализ и моделирование вирулентности Yersinia pestis // Мол.генет.микробиол.вирусол.- 1989.- №.8.- С.42-47.

61. Кутырев В.В., Смирнова Н.И. Генодиагностика и молекулярное типи-рование возбудителей чумы, холеры и сибирской язвы // Мол. генет., микробиол. вирусол.- 2003.- №.1.- С.6-14.

62. Кучеряева В.Т., Анищенко М.А., Меринова JI.K. Трансформационная передача плазмиды RP4 Pseudomonas pseudomallei Н Особо опасные инфекционные заболевания. Иммунология, генетика и биологические свойства возбудителей.-Волгоград, 1989.- Вып.5.- С. 126-129.

63. Мазин A.B., Кузнеделов К.Д., Краев A.C. и др. Методы молекулярной генетики и генной инженерии.- Новосибирск: Наука, Сиб. отделение, 1990. 248 с.

64. Маниатис Т.,Фрич Э.,Сэмбрук Д. Методы генетической инженерии. Молекулярное клонирование: Пер с англ.- М.: Мир, 1984.- 479с.

65. Мелиоидоз. / Под ред.Ширяева Д.Т.- М.: Медицина, 1976.- 112 с.

66. Мельников Б.И., Пивень H.H., Яковлев А.Т. и др. К вопросу о выделении возбудителя сапа от монгольской лощади на Улан-Удэнском мясокомбинате // В сборн.: Вопросы противоэпидемической защиты.-НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи.- 1987.- Вып.ЗЗ.- С.49-54.

67. Меринова JI.K. Системы генетического обмена патогенных псевдомонад: Автореф. дис. докт. мед. наук. Волгоград, 1997.- 40с.

68. Мельников Б.И., Попов С.Ф., Яковлев А.Т. и др. Капсулообразование у возбудителя мелиоидоза в; организме // Журн. микробиол.,.эпидемиол., иммунобиол. 1990. - Ж9. - С.6-10;

69. Мишанысин Б.Н., Гольдберг A.Mi Отношение к некоторым пеницил-линам и пенициллиназная активность у возбудителей сапа и. мелиоидоза" // Лекарственная* устойчивость микроорганизмов. Ереван,-1969t- С.87.

70. Монахова Е.В., Власов? В.П., Вуцан В. IT. и др. Видоспецифический ДНК-зонд для идентификации холерных вибрионов // Мол. генет., микробиол. вирусол.- 19931- №.4.-(2.8-11.

71. Нагаев И.Г., Зигангирова Н: А., Гинзбург А. Л. и др. Специфический ДНК-зонд для, детекции? Legionella pneumophilla II Мол. генетика.-1990.-№.5,- С.8-12.

72. Обеззараживание: исследуемого1 материала, инфицированного бактериями I-IV групп патогенности, при работе методом Г1ЦР // Методические указания МУ 3.5.5.1034 01.

73. Об утверждении перечня социально значимых заболеваний и перечня заболеваний, представляющих, опасность, для окружающих // Постановление: Правительства Российской Федерации №715 от 1 декабря 2004 т.

74. Петере М.К. Обнаружение собственных плазмйд у возбудителя мелиоидоза // Молекул, биол. и генетика возбудителей особо опасных инф.- Саратов, 1982.- Ч.1.- С.53-54.

75. Петере М.К., Пивень H.H., Илюхин В.И., Барков А.М. Характер: изменения антигенного спектра возбудителяшелиоидоза при пассировании на животных // Журн. микробиол., эпидемиол., иммунобиол. 1983.' Ж8,- С. 47-49.

76. Пехов А.П. Плазмидььбактерий.- М.: Медицина,- 1986.- 224 с.

77. Пехов А.П. Несовместимость плазмид бактерий // Мол. генет. мик-робиол. вирусол.- 1983.- №.8.- С.3-12.

78. Пивеиь Н.Н., Илюхин В.И. Иммунохимический анализ термостабильных антигенов морфологических вариантов возбудителя мелиоидоза // Пробл. особо опасн. инф.- 1979,- Вып.5.- С.60-63.

79. Пивень Н.Н. Антигенная структура возбудителя мелиоидоза // Мелио-идоз / Под ред. акад. Н.Г.Тихонова. Волгоград, 1995.- С.47-57.

80. Пивень Н.Н. Антигенный анализ возбудителей мелиоидоза и сапа в аспектах идентификации, диагностики и патогенности: Автореф. дис. . докт. мед. наук. Волгоград, 1997.- 41с.

81. Плазмиды. Методы: Пер. с англ. / Под ред. К.Харди.- М.: Мир, 1989.267 с.

82. Подладчикова О.Н., Мишанькин Б.Н., Диханов Г.Г. ДНК-зонд для обнаружения Yersinia pestis и I сероварианта Yersinia pseudotuberculosis методом детекции специфических повторяющихся последовательностей //Молекул, генетика.- 1992.- №.9-10.- С.21-26.

83. Попов Ю.А. Конструирование и использование ДНК-зондов на представителях рода Yersinia II Генетика, микробиология и совершенствование методов лабораторной диагностики особо опасных инфекций.-Саратов,-1991.-C.3-13.

84. Попов Ю.А. Структурная и функциональная организация плазмид чумного микроба и генно-инженерные разработки на этой модели: Автореф. дисс. . докт. биол. наук.- Саратов,- 1991.- 45 с.

85. Попов С.Ф., Курилов В.Я., Мельников Б.И. Особенности паразитиро-вания возбудителей мелиоидоза в клетках хозяина // Журн. микро-биол., эпидемиол., иммунобиол.- 1991.- №11.- С.12-14.

86. Проценко О.А., Филиппов А.А., Кутырев В.В. Гетерогенность популяций штаммов возбудителя чумы по плазмидному составу // Мол. генет. микробиол. вирусол.- 1992.- №3-4.- С.20-24.

87. Проценко О.А., Анисимов П.И., Можаров О.Т. и др. Выявление и характеристика плазмид чумного микроба, детерминирующих синтез пестицина I, антигена фракции I и экзотоксина «мышиного» токсина // Генетика.- 1983.-Т.19, №.7-С.1081-1090.

88. Романова Ю.М. Плазмиды вирулентности бактерий рода Shigella II Мол.генет.микробиол.вирусол.- 1991.- №.6.- С.3-9.

89. Рубан E.JI. Физиология и биохимия представителей рода Pseudomonas.- М.: Наука, 1986.- 200 с.

90. Ряпис Л.А., Илюхин В.И., Сычева Н.М. Штамм Pseudomonas pseudomallei VPA для получения диагностической мелиоидозной агглютинирующей сыворотки. Авторское свидетельство № 712999 от 05.10.79.

91. Ряпис Л.А., Илюхин В.И., Вострова Е.И., Джузепов Ф.Ф. Лабораторная диагностика клинически значимых видов псевдомонад // Лаб.дело.- 1988.- №.2.- С.66-71.

92. Ряпис Л.А., Тарасова Т.Д. Перспективы применения хромосомной трансформации для идентификации возбудителя мелиоидоза // Журн. микробиол. эпидемиол. иммунобиол.- 1988.- №.8.- С. 16-19.

93. Рысков А.П. Геномная дактилоскопия / Информ.бюллетень «Геном человека».- М.: 1990.- №.3.- С.1-40.

94. Савостина Е.П. Изучение плазмиды Са-зависимости Yersinia pestis методом рестрикционного картирования: Автореф. дис. . канд. мед. наук.- Саратов,- 1990.- 19с.

95. Саяпина Л.В. Совершенствование стандартизации и оценка качества средств диагностики особо опасных инфекций: Автореф. дис.докт. мед. наук.- Саратов, 1999.- 46с.

96. Сенина Т.В. Биологические свойства и дифференциальная диагностика буркхольдерий, имеющих значение в медицинской практике: Автореф. дисс. . канд. биол. наук.- Саратов, 2004.- 22 с.

97. Смирнов В.В., Киприанова Е.А. Бактерии рода Pseudomonas.- Киев: Наук, думка, 1990.- 264 с.

98. Тарасова Т.Д., Замараев B.C., Антонов Ю.В. Использование трансформации для идентификации возбудителя при поиске мелиоидозной инфекции // Мат. Всес. науч.-практ. конф. «Профилактика природно-очаговых инфекций».- Ставрополь, 1983.- С.352-353.

99. Тарасова Т.Д., Ряпис Л.А. Оптимальные условия трансформации у возбудителя мелиоидоза и возможность ее применения для картирования хромосомы // Мол. генет., микробиол. вирусол.- 1983.- №.3.-С.26-29.

100. Тарасова Т.Д., Ряпис Л.А. Трансформация бактерий на плотной среде // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол.- 1983.- №.7.- С.8-13.

101. Тарасова Т.Д., Ряпис J1.A. Получение ауксотрофных мутантов возбудителя мелиоидоза // Молекул, генет. микробиол. ,вирусол.- 1984.-№.2.- С.15- 17.

102. Тарасова Т.Д., Ряпис J1.A., Меринова JI.K. и др. Использование трансформации для картирования хромосомы Pseudomonas pseudomallei II Журн. микробиол., эпидемиол. иммунобиол.- 1983—№.1.- С.33-36.

103. Тарасова Т.Д., Ряпис J1.A. Оптимальные условия трансформации у возбудителя мелиоидоза и возможность её применения для картирования хромосомы // Молекул, генет., микробиол., вирусол.- 1983.- №.3.-С.26 29.

104. Тарасова Т.Д., Антонов Ю.В. Картирование пуринзависимых мутаций у возбудителя мелиоидоза // Молекул, генетика, микробиол. и вирусол.- 1984.- №.6.- С.8-12.

105. Тимошин В.Б., Замараев B.C., Антонов В.А., Липницкий A.B. Видос-пецифический ДНК-зонд для идентификации токсигенных штаммов возбудителя сибирской язвы // Мол. генет., микробиол. вирусол. -1994.-№.1.- С.30-33.

106. Тихонов Н.Г., Липницкий A.B. Биологический терроризм (проблемы противодействия) // Природно-очаговые инфекции в Нижнем Поволжье. Сб. науч. тр. / Под ред. Н.Г.Тихонова. Волгоград, 2000. - С. 265 -271.

107. Ткаченко Г.А. Конструирование амплификационной тест-системы для выявления патогенных буркхольдерий: Автореф. дисс. . канд. мед. наук.- Саратов, 2003.- 20 с.

108. Томилин Н.В. Генетическая стабильность клетки.- Л.: Наука,- 1983.156 с.

109. Томов А.Ц., Цветкова Е., Милушева М. Лизогения у рода Maleomyces II Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 1970.- №.8.- С. 102105.

110. Томов А.Ц. Антагонизм у бактерий из рода Malleomyces II Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол.- 1970.- №.6.- С.105-108.

111. Федоров А.Ю. Микробная деструкция компонентов сточных вод производства фенола : Автореф. дис. . канд. биол. наук.- Саратов, 1993.20 с.

112. Холловей Б.В. Генетика Pseudomonas II Молекулярные основы генетических процессов.- М.: Наука, 1981.- С.269-278.

113. Шагинян И.А., Гинцбург A.JI. Геномный полиморфизм возбудителей бактериальных инфекций // Молекул, генетика.- 1991.- №.12.- С.3-9.

114. Шагинян И.А., Ананьина Ю.В., Токарская О.Н. и др.Геномная дактилоскопия возбудителей сапронозов // Журн.микробиол.- 1991.- №.6.-С.25-29.

115. Шиповская Н.П., Меринова JI.K., Ряпис JI.A. Свойства ауксотрофных мутантов Pseudomonas mallei II Журн. микробиол. эпидемиол. имму-нобиол.- 1983.- №.4. С.36-39.

116. Шишкина О.Г. Получение видоспецифического генетического зонда на основе плазмиды, определяющей синтез антигена фракция I чумного микроба: Автореф. дис. канд. мед. наук.- Саратов, 1990.- 20с.

117. Шишкина О.Г., Попов Ю.А., Кириллина С.В. и др Конструирование видоспецифического ДНК-зонда на основе плазмиды pFra чумного микроба //Мол. генет., микробиол. вирусол.- 1991.- №.10.- С. 16-19.

118. Шубин Ф.Н., Гинзбург A.JL, Китаев В.М. и др. Анализ плазмидного состава штаммов Yersinia pseudotuberculosis и его применение для ти-пирования возбудителя псевдотуберкулеза // Мол. генет., микробиол. вирусол- 1989.- №.6,- С.20-25.

119. Яковлева О.Н., Маракуша Б.И. Биологические свойства бесплазмид-ных штаммов Salmonella typhimurium и S.dublin II Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол.- 1987.- №.6.- С.6-11.

120. Яненко А.С., Крылов В.Н., Станиславский Е.С., Холодкова Е.В. Влияние плазмид на вирулентность штаммов Pseudomonas aeruginosa в экспериментах на мышах // Журн.микробиол., эпидемиол. и иммунобиол.- 1985.-№.7.-С. 19-21.

121. Altwegg М., Hickman-Brenner F.W., Farmer J.J. Ribosomal RNA gene restriction pattern provide increased sensitivity for typing Salmonella typhi strains // J. Infect. Dis.- 1989.- V.160.- P. 145-149.

122. Anunnatsiri S., Chetchotisakd P., Mootsikapun P. et al. A Comparison Of Ceftazidime Versus Combination Ceftazidime-Trimethoprim-Sulphamethoxazole For The Treatment Of Severe Melioidosis // 4th World Melioidosis Congress 2004.- Singapur.- 2004.-P. 13.

123. Arima K., Beppi M. Induction and mechanisms of arsenite resistance in Pseudomonas pseudomallei II J.Bacteriol.-1964.-V.88, №.1.-P.143-150.

124. Asche V. History of Melioidosis in the northern territory of Australia // 4th World Melioidosis Congress 2004.- Singapur.- 2004.- P.39.

125. Ashdown L.R. Identification of Pseudomonas pseudomallei in clinical laboratory II J. Clin. Pathol.- 1979.- V.32.- P.500-504.

126. Ashdown L.R, Frettingham R. In vitro activity of various cephalosporins against Pseudomonas pseudomallei II J.Infect. Diseases.- 1984.- V.150.-P.779-780.

127. Ballard R.W., Palleroni N.J., Doudoroff M. et al. Taxonomy of the aerobic pseudomonads: Pseudomonas cepacia, P.marginata, P.allicola and P.caryophylli II J.Gen.Microbiol.- 1970.- V.60.- P.T99-214.

128. Bauernfeind A., Roller C., Meyer D. et al. Molecular procedure for rapid detection of Burkholderia mallei and Burkfiolderia pseudomallei II J. Clin. Microbiol.- 1998.- V.36, №.9.- P.2737-2741.

129. Beeching N.J., Hart C. A., Duerden I. Tropical and exotic infections // J. Med. Microbiol.- 2000:- V.49.- P.5-27.o

130. Ben-Gurion R'., ShaffermanrA. Essential virulence determinants of different Yersinia species are carried on a common plasmid// Plasmid.- 1981.- №.5.-P.183-187.

131. Bopp L.H., Chakrabarty A.M., Ehrlich H.L. Chromate resistance plasmid in Pseudomonas fluorescens II J. Bacteriol.- 1983.- V.155, №.3.- P.1105-1109.

132. Bremmelgaard A. Differentiation between Pseudomonas cepacia and Pseudomonas pseudomallei in clinical bacteriology // Acta Pathol. Microbiol. Scand.- 1975.- V.83.- №.2.- P.65-70.

133. Bremmelgaard A., Bygbjerg I., Hoiby N. Microbiological and-immunological studies in a case of human melioidosis diagnosed in Denmark // Scand. J. Infect. Dis.- 1982.- V.14.- №.4.- P.271-275.

134. Brown N.F., Beacham I.R. Cloning and analysis of genomic differences unique to Burkholderia pseudomallei by comparison with B. thailandensis II J. Med. Microbiol.- 2000.- V.49.- №.11.- P.993-1001.

135. Brubaker R.R.-The genus Yersinia: biochemistry and genetics of virulence // Curr. Top. Microbiol. Immunol.- 1972.- V.57.- P.l 11-158.

136. Cain R.B., Murray K., Sagoo G.S., Johnston J.B. Arylsulfonate esulfonating enzyme. A catabolic enzyme system probably specified by a plasmid // Soc. Gen. Microbiol. Proc.- 1977.- V.4.- P.99.

137. Casse F.,Boucher C.,Julliot J.S. et al Identification and characterisation of large plasmids in Rhizobium meliloti using agarose gel electrophoresis // J. Gen. Microbiol.- 1979.- V.113.- P.229-242.

138. Chakrabarty A.M. Plasmids in Pseudomonas II Ann.Rev.Genet.- 1976.-№.10.- P.7-30.

139. Cheung-T.K.M., Ho P.L., Woo P.C.Y, Yuen K.Y. et al. Cloning and Expression of Class A B-Lactamase Gene ¿/¿zAbps in Burkholderia pseu-domallei II Antimicrobial agents and Chemotherapy.- 2002.- V.46, №.4.-P.l 132-1135.

140. Chin C.Y., Sheila N., Roohaida O. Cloning, expression and purification of Burkholderiapseudomallei serine metalloprotease, SMBPF4 from local isolate // 4th World Melioidosis Congress 2004.- Singapur.- 2004.- P.62.

141. Chong C.E., Lim B.S., Zulkeflie Z., Rahmah M. A comparative genome study of Burkholderia pseudomallei: analysis of the virulent factors and ARAC/XYLS family transcription factors // 4th World Melioidosis. Congress 2004.- Singapur.- 2004.-P.52.

142. Christopher, G. W., T. J. Cieslak, J. A. Pavlin et al. Biological warfare: a historical perspective // JAMA.- 1997.- V.278.- P.412-417.

143. Clark P., Richmond M. Genetics and biochemistry of Pseudomonas London.: Willey Sons, 1975.- 366p.

144. Currier T.C., Morgan M.K. Plasmids of Pseudomonas syringae: evidence of a role in toxin production or pathogenicity // Can. J. Microbiol.- 1983.-V.29.- P.84-89.

145. Dance D:A.B. Melioidosis as an emerging global problem // Acta Trop.-2000.- V.74.- P.l 15-119.

146. Dance D.A.B. Recent Insights Into The Epidemiology And Distribution of Melioidosis // 4th World Melioidosis Congress 2004.- Singapur.- 2004.-P.10.

147. Dharakul T., Songsivilai S. Recent developments in the laboratory diagnosis of melioidosis // J. Infect. Dis. Antimicrob. Agents.- 1996.- V.13.- P.77-80.

148. De Ley J. DNA-base composition and hybridization in the taxonomy of phytopathogenic bacteria// Ann.Rev.Phytopathol.- 1968.- №6.- P.63-90.

149. De Shazer D., Brett P., Carlyon R., Woods D.E. Mutagenesis of Burkholderia pseudomallei with Tn5-OT182: isolation of motility mutants and molecular characterization of the flagellin structural gene // J. Bacte-riol.- 1997.- V.179.- P.2116-2125.

150. Dodin A., Ferry R. Recherches epidemiologiques du bacille de Whitmore en Afrique //Bull. Soc. Pathol. Exot.- 1974.- V.67.- №.2.- P.121-126.*

151. Dodin A. La melioidose: un problème mondial (Melioidosis an asian disease now a Worldproblem) // Recherche- 1976.- V.l.- №.68.- P.574-577.

152. Dodin A., Galimand M. Le bacille de Whitmore II Reel. Med. Vet. Ec. Alfort.- Paris.- 1976.- V.152.- №.5.- P.323-325.

153. Dodin A., Galimand M. Naissance vie et recul d,une maladie infectionse la melioidose en pays tempere II Arch. Inst. Pasteur Tunis.- 1986.- V.63, №.1.- P.69-73.

154. Eisenstein B.I. New molecular techniques for microbial epidemiology and the diagnosis of infectious diseases // J.Infect.Dis.- 1990.- V.161.- P.595-602.

155. Ferber D.M., Brubacer R.R. Plasmids in Yersinia pestis II Inf.Immun.-1981.- V.31.- №.2.- P.839-841.

156. Fitch W., Smith T., Ralph W. Mapping the order of DNA restriction fragment//Gene.- 1983.-Vol.22.- №.1.- P. 19-29.

157. Fitts R. Use of DNA probes in the diagnosis of infectious disease // Drug Dev. and Ind. Pharm.- 1985.- V.l 1.- №.5.- P. 1051-1057.

158. Fournier J., Chambon L. La melioidose maladie d'actualité et le bacille de Whitmore (Malleomices pseudomallei) Il Paris.: Ed.Med.Flammarion.-1958.-P. 47-90.

159. Fournier J. Les antigenes thermostables de Pseudomonas pseudomallei et de Malleomyces mallei et leurs communautés II Ann. Inst. Pasteur.- 1967.-V.l 12.-P.93-104.

160. Galimand M. Nouvel habitat de Pseudomonas pseudomallei II These Doct. de 3 cycle. Microbiología.- Universite. Paris VIL- 1979.

161. Galimand M., Dodin A. Le point sur la melioidose dans le monds // Bull. Soc. Pathol. Exot.- 1982.- V.75.- №.4.- P.375-383.

162. Garrity G., Jonson K.L., Bell J., Searles D.B. Taxonomic Outline of the Procaryotes / Bergey's Manual of Systematic Bacteriology.- Second Edition.- 2002.

163. Gemski P., Lazere J.R., Casey T., Wohlhieter J.A. Presence of a virulence-associated plasmid in Yersinia pseudotuberculosis II Infect. Immun.-1980.- V.28.- P. 1044-1047.

164. Gilardi GX. Identification of glucose nonfermenting gram negative rods // Depart. Lab. North Gen. Hosp. - New York, 1989.

165. Govan J.R.W., Hughes J.E., and Vandamme. Burkholderia cepacia: medical, taxonomic and ecological issues // J. Med. Microbiol 1996 - Vol.45-P.395-^497.

166. Haase A., Brennan M., Barrett S. et al. Evaluation of PCR for diagnosis of melioidosis //J. Clin. Microbiol.- 1998.- V.36, №.4,- P.1039-1041.

167. Haase A., Melder A., Smith-Vaughan H. et al RAPD analysis of isolates of Burkholderia pseudomallei from patients with recurrent melioidosis. // Epidemiol Infect.- 1995.- V.l 15, №.1.- P. 115-121.

168. Hansen J.B., Olsen R.H. Isolation of large bacterial plasmids and characterisation of the P2 incompatibility group plasmids pMGl h pMG5 // J.Bacteriol.- 1978.- V.135.- P.227-238.

169. Hansen J.B., Olsen R.H. Inc P-2 group of Pseudomonas a class of in-iquelli large plasmids //Nature.- 1978.- V.274.- P.715-717.

170. Hassan A.K.R., Inglis T.J J., O'Reilly L. Isolation and molecular epidemiology of Burkholderia pseudomallei from East Malaysia // 4th World Melioidosis Congress 2004.- Singapur.- 2004.- P 37.

171. HecklyR. Melioidosis//Nat. Res.- 1970.- V.23.- №.3.- P.8-17.

172. Highfield P.E., Dougan G. DNA probes for microbial diagnosis // Med. Labor. Sei.- 1985.- V.42.- №.4.- P.352-360.

173. Hohl P. The susceptibility of Pseudomonas pseudomallei to six lactams and five other antibiotics in vitro // Experienta.- 1986.- V.42, №.1.- P.98-102.

174. Holden M.T.G., Titball R.W., Peacock S. et al. Genomic plasticity of the causative agent of melioidosis, Burkholderia pseudomallei // Proc. Natl. Acad. Sei. USA.- 2004.- V.101.- №.39.- P.14240-14245.

175. Holden M.T.G., Parkhill J. Unravelling A versatile pathogen: the sequencing and analysis of the Burkholderia pseudomallei genome // 4th World Melioidosis Congress 2004.- Singapur.- 2004.-P.17.

176. Holloway B.W. Plasmids that mobilize bacterial chromosome // Plasmid.-1979.-№.2.- P.l-19.

177. Holmes A., Govan J., Goldstein R. Agricultural use of Burkholderia (Pseudomonas) cepacia: A threat to human health? // Emerg. Infect. Dis. 1998 — Vol.4, №.2.-P.221-227.

178. Howe C., Sampath A., Spotnitz M. The pseudomallei group: a review // J. Infect. Dis.- 1971.- V.124.- P.598-606.

179. Inglis T.J J., Rigby P., Robertson T.A et al. Interaction between Burkholderia pseudomallei and Acanthamoeba species results in coiling phagocytosis, endamebic bacterial survival, and escape // Infect. Immun.-2000.- V.68, №.3.- P.1681-1686.

180. Jacoby G.A., Sutton L., Knobel L., Mammen P. Properties of Inc P-2 plasmids of Pseudomonas spp. H Antimicrob. Agents Chemother.- 1983.- V.24, №.2.- P.168-175.

181. Jameson J.E. An antibiotic from Pfeifferella whitmori II J. Hyg.- 1949.-V.47.- P.142-145.

182. Jenks P. Sequencing microbial genomes what will it do for microbiology? //J. Clin. Microbiol.- 1998.-V.47.- P.375-382.

183. Jesudason M. V., Balaji V., Singhai P,K, et al. Evaluation of rapid tests to detect B.pseudomallei in blood culture broth supernatants // 4th World Melioidosis Congress 2004.- Singapur.- 2004.- P. 12.

184. Jigen J., Li L. Study on the plasmids in Pseudomonas pseudomallei II Chin. J.Epid.- 1992.- №.13.- P.452.

185. Johnson J.L., Palleroni N.G. Deoxyribonucleic acid similarities among Pseudomonas species II Int. J. Sys. Bacteriol.- 1989.- V.39, №.3.- P.230-235.

186. Jones A.L., Beveridge T.J., Woods D.E. Intracellular survival of Burkholderia pseudomallei II Infect. Immun 1996.- Vol.64.- P.782-790.

187. Kado C.I.,Liu S.T. Rapid procedure for detection and isolation of large and small plasmids II J.Bacteriol.- 1981.- V.145.- P. 1365.

188. Kanai K., Deysirilert L. Pseudomonas pseudomallei and melioidosis, with special reference to the status in Thailand.// Jpn. J. Med. Sei. Biol.- 1988.-№.41.- P.123-157.

189. Kanai K., Kondo E. Recent advances in biomedical sciences of Burkholderia pseudomallei (basonym: Pseudomonas pseudomallei) // Jpn. J. Med. Sei. Biol.- 1994.- V.47.- P. 1-45.

190. Kasturi K.,Tamhane D.V. Growth of Pseudomonas pseudomallei and P.aeruginosa on petroleum fractions // Indian J.Exp.Biol.- 1971.- V.9, №.2.- P.235-239.

191. King C.J. Plasmid analysis and variation in Pseudomonas syringae II J.Appl.Bacteriol.- 1990.- V.67, №.5.- P.489.

192. Kinoshita R.E., Wuthiekanun V., Chan S.Y. Epidemiology of melioidosis in an oceanarium in Hong Kong: an environmental and molecular study // 4th World Melioidosis Congress 2004.- Singapur.- 2004.- P.36.

193. Korbsrisate S., Suwannasai N., Leelaporn A. et al. Molecular cloning and expression of fosfolipase C gene from Burkholderia pseudomallei II International Congress on Melioidosis.- Bangkok.- 1998.- P. 103.

194. Korbsrisate S., Kerdsuk P., Vanaporn M. et al. The rpoe (algu) operon plays an important role in the survival of Burkholderia pseudomallei under stress // 4th World Melioidosis Congress 2004.- Singapur.- 2004.- P.27.

195. Kunakorn M., Markham R.B. Clinically practical seminested PCR for Burkholderia pseudomallei quantitated by enzyme immunoassay with andwithout solution hybridization I I J. Clin. Microbiol.- 1995.- V.33.- P.2131-2135.

196. Kunakorn M., Raksakait K., Sethaudom C. et al. Comparison of three PCR primer sets for diagnosis of septicemic melioidosis // Acta Tropica.- 2000.-№.74.- P.247-251.

197. Kuzio J., Kropinski A. O-antigen convertion in Pseudomonas aeruginosa PAOl by bacteriophage D3 // J.Bacteriol.- 1983.- V.155.- P.203-212.

198. Lacobellis N.S., Morea M., Palumbo G., Sisto A. Plasmid-coded cytokinin biosynthesis by Pseudomonas amygdali II Assoc. Genet. Ital.- 1989.-№.35.- P.177-178.

199. Lalande M. Pulsed-field electrophoresis: application of a computer model to the separation of large DNA molecules // Proc. Natl. Acad. Sei.- 1987.--V.84.- P.8011-8015.

200. Layne S.P., Beugelsdijk T.J. High-Throughput Laboratories for Homeland and National Security // Biosecurity and bioterrorism: biodefence, strategy, practice and science.- 2003.- V.l.- №.2.- P.123-130.

201. Lazzaroni S., Inglis T., Currie B. The characterisation of Burkholderia pseudomallei isolates from the townsville region using pulse-field gel electrophoresis // 4th World Melioidosis Congress 2004.- Singapur.- 2004.-P.38.

202. Lee M.-A., Liu Y.-C. Cloning and characterization a novel protese gene from Burkholderia pseudomallei II International Congress on Melioidosis.-Bangkok.- 1998.- P.99.

203. Legroux R., Djemil K. Sur la lyse du bacille de la monve et du bacillus pyocianique // Compt.Rend. Acad.Sci. 1931.- 35p.

204. Li L., He J. Pseudomonas pseudomallei and melioidosis in China // Clin. Med. J.- 1992.- V.105.- №.5.- P.'775-779.

205. Li L., Lu Z., Han O. Epidemiology of melioidosis in China // Chung Hua Liu Hsing Ping Hsuch Tsa Chin.- 1994.- V.15.- P.292-295.

206. Lim O.P. Epidemiology Of Melioidosis In Singapore // 4th World Melioidosis Congress.- Singapur.- 2004.- P. 10.

207. Liu Y.-C-, Yap E.P.H., Yap E.H. et al. Identification and characterization of a lipase gene and its modulator from Burkholderia pseudomallei II International Congress on Melioidosis.- Bangkok.- 1998.- P.102.

208. Liu Y., Tin L.A., Loh J. et al. Multiplex PCR-based tandem repeats analysis for rapid discrimination of Burkholderia pseudomallei isolates // 4th World Melioidosis Congress 2004.- Singapur.- 2004.- P.37.

209. Livermore D.M., Chan P.Y., Wong A.J.W., Leung J.K. B-lactamase of Pseudomonas pseudomallei and its contribution to antibiotic resistance // J. Antimicrob. Chemother.- 1987,- V.20.- №.3.- P.313-320.

210. Mandel M. Deoxyribonucleic acid base composition in the genus Pseudomonas II J.GenJMicrobiol.- 1966.- V.43, №.2.- P.273-275.

211. Marmur J. A procedure for isolation of deoxyribonucleic acid from micro-orcanisms //J.Mol.Biol.- 1961.- Vol.3.- P.208-218.

212. Mathew M.K., Smith C.L., Cantor C.R. High-resolution separation and accurate size determination in pulsed-field gel electrophoresis of DNA. DNA size standarts and the effect of agarose and temperature // Biochemistry (US).- 1988.- V.27.- P.9204-9210.

213. McCormick J.B., Weaver R.E., Hayes P.S. Wound infection by an indigenous Pseudomonas pseudomallei-like organism isolated from the soil case report and epidemiologic study // J. Infect. Dis.- 1977.- V.135.- №.1.-P.103-107.

214. Mikesell P., Ivins B.E., Ristroph J.D., Dreier T.M. Evidence for Plasmid-Mediated Toxin Production in Bacillus anthracis II Infect.Immun.- 1983.-V.39.- P.371-376.

215. Moore R. A., DeShazer D., Reckseidler S. Efflux-mediated aminoglycoside and macrolide resistance in Burkholderia pseudomallei II Antimicrobial Agents and Chemotherapy March.- 1999.- V.43.- №.3.- P.465-470.

216. Moore R., Troung C., Woods D. E. Regulation of ß-lactamase in Burkholderia pseudomallei and Burkholderia thailandensis II 4th World Melioidosis Congress 2004.- Singapur.- 2004.- P. 15.

217. Mullis K.B., Fallona F.A. Specific synthesis of DNA in vitro via a poly-merase-catalyzed chain reaction // Meth. Enzymol.- 1987.- V.155.- P.335-350.

218. Nair G.B., Bag P.K., Shimada T. et al. Evaluation of DNA probes for specific detection of Vibrio cholerae 0139 Bengal II J. Clin. Microbiol. 1995. - V.33,№.8.-P.2186-2187.

219. Nakazawa T., Hayashi E., Yokota T. et al. Isolation of TOL and RP4 recombinants by integrative supression // J.Bacteriol.- 1978.- V.134.- P.270-277.

220. Nierman W.C., DeShazer D., Kim H. S. et al. Structural flexibility in the Burkholderia mallei genome // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.- 2004.- V.101.-№.39.-P. 14246-14251.

221. Norton R., Roberts B., Freeman M. Characterisation and molecular typing of Burkholderia pseudomallei'. are disease presentations of melioidosis clonally related? // FEMS Immunol. Med. Microbiol.- 1998.- V.20.- P.37-44.

222. Ogawa T., Yatome C., Idaka E. Degradation of p-aminoazobenzene by continuous cultivation of Pseudomonas pseudomallei 13 NA // J. Soc. Dyers Colour.- 1981.- V.97.- №.10.- P.435-438.

223. Owen R.J. Chromosomae DNA fingerprinting a new method of species and strain identification applicable to micro bial pathogens // J. Med. Microbiol.- 1989,- V.30.- P.89-99.

224. Palchaudhuri S., Chakrabarty A. Isolation of plasmid deoxyribonucleic acid from Pseudomonas putida // J.Bacteriol.- 1976.- V.126.- №.1.- P.410-416.

225. Palleroni N., Ballard R.W., Ralston E. et al. Deoxyribonucleic acid homologies among some Pseudomonas species II J. Bacteriol.- 1972.- V.110.-№.1.- P.1-11.

226. Palleroni N., Doudorff M. Some properties and taxonomic subdivisions of the genus Pseudomonas II Ann.Rev. Phytopathol.- 1972,- V.10.- P.73-100.

227. Palleroni N.J., Kunisawa R., Contopoulou R., Doudoroff M. Nucleic acid homologies in the genus Pseudomonas II Int.J.Syst.Bacteriol.- 1973.-V.23, №.4.- P.333-339.

228. Palleroni N.J. Introduction to the famili Pseudomonadaceae II Procariotes.-Berlin, 1981.- V.I.- P.655-665.

229. Palleroni N.J. Bergey's Mannual of systematic bacteriology.- Baltimore, 1984.-V.1.-P.140-199.

230. Paredes L., Avila R. Infectiones por Pseudomonas pseudomallei. Estudio baeteriologico y significado clinico // Rev. Med. Chile.- 1976.- V.104.-№.8.- P.531-537.

231. Puthucheary S.D. Host-pathogen interactions: Intracellular survival of Burkholderia pseudomallei II 4th World Melioidosis Congress.- Singapur.-2004.- P.28.

232. Pelt C., Verduin C.M., Goessens W.H.F. et al. Identification of Burkholderia spp. in the Clinical Microbiology Laboratory: Comparasion of Cjnventional and Molecular Methods // J. Clin. Microbiol.- 1999.- V.37, №.7.- P.2158-2164.

233. Piliouras P. Melioidosis prevention // 4th World Melioidosis Congress.-Singapur.- 2004.- P.42.

234. Piwowarski J.M., Shaw P.D. Characterization of plasmid from plant athogenic pseudomonads //Plasmid.- 1982.-№.7.-P.85-94.

235. Platonov A.E., Karan L.S., Yazyshina S.B. et al. Microheterogenicity of the Volgograd Clone of West Nile Virus // International Conference on Emerging Infectious Diseases.- Atlanta, Georgia, USA.- 2002,- P.l 12.

236. Rolim D. B., Vilar D. C. L. F., Souza A.Q. et al. First Melioidosis Outbreak In Brazil // 4th World Melioidosis Congress.- Singapur.- 2004.- P. 11.

237. Popov S., Tikhonov N., Kurilov V. Influence of capsule formation in Pseudomonas pseudomallei and Pseudomonas mallei on their relations with host cells // Immunol. Infect.Dis.- 1994.- V.4.- P. 142-145.

238. Pourtaghva M., Machoun A., Dodin A. Mise en evidence de Pseudomonas pseudomallei (bacille de Whitmore) dans la boue des rizieres iraniennes // Bull. Soc.Path. Exot.- 1975.- №.68.- P.367-370.

239. Pourtaghva M., Dodin A., Portovi M. Premier cas de melioidose pulmonale humaine en Iran // Bull. Soc. Pathol. Exot.- 1977.- V.70.- №.2.- p. 107109.

240. Propost A., Vigier M. Isolement au Tchad (Afrique centrale) de deux souches de Malleomyces pseudomallei II Ann. Inst. Pasteur.- I960.- V.98.-№.3. P.461 -463.

241. Radua S., Ling O.W., Srimontree S. et al. Characterization of Burkholderia , pseudomallei isolated in Thailand and Malaysia II Diagn. Microbiol. Infect. Dis.- 2000,- V.38;- №.3.- P.141-145:

242. Rainbow L., Hart C.A., Winstanley C. Distribution of type III secretion gene clusters in Burkholderia pseudomallei, B. thailandensis and B. mallei II J. Med. Microbiol.- 2002.- V.51.- P.374-384.

243. Rattanathongkom A., Sermswan R.W., Wongratanacheewin S. Detection of Burkholderia pseudomallei in blood samples using polymerase chain reaction //Mol. Cell. Probes.- 1997.- V.ll.- №.1,-P.25-31.

244. Ramisse V., Balandreau J., Thibault F. et al. DNA-DNA hybridization study of Burkholderia species using genomic DNA macro-array analysis coupled to reverse genome probing // Intern. J. System. Evolut. Microbiol.-2003.- V.53.- P.739—746.

245. Reckseidler S., Moor R., Woods D.E. Identification and characterization jf pilin genes in Burkholderia pseudomallei II International Congress on Melioidosis.- Bangkok.- 1998.- P.58.

246. Reckseidler S.L., Tuanyok A., Woods D.E. Genetic and functional characterization of the capsular polysaccharides of Burkholderia pseudomallei II 4th World Melioidosis Congress.- Singapur.- 2004.- P.27.

247. Redfearn M.S., Palleroni N., Stanier R.J. A comparative study of Pseudomonas pseudomallei and Bacillus mallei II J. Gen. Microbiol.- 1966.- V.43.-P:293-313.

248. Reimmann C., Rella M., Haas D.< Integration of Replication defective R68.45 like plasmids into* the Pseudomonas aeruginosa chromosome // J.Gen.Microbiol.- 1988.- V.134.- P.1515-1523.

249. Rella M. Transposon insertion mutagenesis of the Pseudomonas genome a temperature-sensitive RP1 plasmid as a vector for Tn5'derivatives: Dis. . doct. natur. Sei. Swiss. Fed.- Zurich, 1984.- 189 p.

250. Repley R., Theophilus B.D.M., Bevan I.S., Walker M.R. Fundamentals of the polymerase chain reaction: A future in clinical diagnostics? // Med. Lab. Sei.- 1992.- V.49.- P.l 19-128.

251. Rogul M., Brendle J.J., Haapala D.K. et al. Nucleic acid similarities among Pseudomonas pseudomallei, Pseudomonas multivorans and Actinobacillus mallei 111. Bacteriol.- 1970.- V.101, №.3.- P.827-835.

252. Rogul M., Carr S.N. Variable ammonia production among smooth and rough strains of Pseudomonas pseudomallei: resemblance to bacteriocin production // J.Bacteriol.- 1972.-V.112, №.1.-P.372-380.

253. Rosselo-Mora R, Amann R. The species concept for procariotes // FEMS Microbiol. Rev.- 2001.- V.25.- P.39-67.

254. Rotz L.D., Khan A.S., Lillibridge S.R. et al. Public health assessment of potential biological terrorism agents // Emerg. Infect. Dis. 2002. - Vol.8, №.2.- P.225-230.

255. Royle P.L., Holloway B.W. Relationship between R and FP plasmids in Pseudomonas aeruginosa II Antimicrob. Agents Chemother.- 1980.- V.17.-№.3.- P.293-297.

256. Samadpour M., Moseley S.L., Lory S. Biotinylated DNA probes for exotoxin A and pilin genes in the differentiation of Pseudomonas aeruginosa II J.Clin. Microbiol.- 1988.- V.26.- P.2319-2323.

257. Saunders J.R., Grinsted J. Properties of RP4 an R factor wich originated in Pseudomonas aeruginosa S8 // J. Bacteriol.- 1972.- V.112.- №.2.- P.690-696.

258. Saunders N.A., Harrison T,G., Rachwalla N., Taylor A.C. Identification of species of the genus Legionella using a cloned rRNA gene from Legionella pneumophillia II J. Gen. Microbiol.- 1988.- V.134.- №.8.- P.2263-2274.

259. Sermswan R.W., Wongratanacheewin S., Tattawasart U. et al. Construction of a specific DNA probe for diagnosis of melioidosis and use as an epidemiological marker of Burkholderia pseudomallei II Mol. Cell Probes.-1994.- V.8.- №.1.- P.l-9.

260. Shazleen A., Zamrod Z., Mohamed R. Methodology for high-throughput data mining of transcription regulatory network of Burkholderia pseu-domallei II 4th World Melioidosis Congress.- Singapur.- 2004.- P 50.

261. Shively J.M., Hartsell S.E. Bacteriolysis of the pseudomonads. II. Chemical treatments affecting the lytic response // Canad. J. Microbiol.- 1964.- V.10.-№.6.- P.911-915.

262. Skurnik M. Studies on the virulence plasmids of Yersinia species II Acta Univ. Ouluen.- 1985.- A.- №.169.- P.l-61

263. Slezak T., Kuczmazski T., Ott L. et al. Comparative genomics tools applied to boiterrorism defence II Brief Bioinform.- 2003.- V.2.- №.4.- P.133-149.

264. Smith M.D., Angus B.J., Wuthiekanun V., White N.J. Arabinose assimilation defines a nonvirulent biotype of Burkholderia pseudomallei II Infect. Immun.- 1997.-V.65.-P.4319-4321.

265. Snipes K.P., Hirsh D.S., Hansen L.M., Hird D.W. et al. Use of an rRNA probe and restriction endonuclease analysis to fingerprint Pasteurella mul-tocida isolated from turkeys and wildlife // J. Clin. Microbiol.- 1989.-V.27.- P.1847-1853.

266. Songsivilai S., Neelamek M., Nuntauanuwat S.et al. Organization of Burkholderia pseudomallei chromosomes // International Congress on Melioidosis. Bangkok.- 1998.- P.55.

267. Songsivilai S., DhaRakul T. Multiple replicons constitute the 6.5-megabase genome of Burkholderia pseudomallei II Acta TRopica.- 2000.- №.74.-P. 169-179.

268. Stanier R.Y., Palleroni N.J., DoudoroffM. The aerobic pseudomonads: a taxonomic study // J. Gen. Microbiol.- 1966.- V.43.- P. 159-271.

269. Stanier R.Y. Reflexions sur la taxonomie des Pseudomonas II Bull. Inst. Pasteur.- 1976.- V.74.- P.255-270.

270. Steel J.H. Glanders // CRC Handbook series in zoonoses, section A.- 1979.-V.I.- P.339-362.

271. Stephen A., Madden T. L., Schäffer A.A. et al. Gapped BLAST and PSI-BLAST: a new generation of protein database search programs // Nucleic Acids Res.- 1997.- №.25,-P.3389-3402.

272. Stocki S.L., Woods D. E. Changes in gene expression mediated by L-arabinose in Burkholderia II 4th World Melioidosis Congress.- Singapur.-2004.-P. 19.

273. Stull T.L., LiPuma J.J., Edling Th.D. A broad spectrum probe for molecular epidemiology of bacteria: ribosomal RNA // J.Infect.Dis.- 1988.-V.157.- P.280-286.

274. Suputtamongkol Y., Hall A., Dance D. et al The epidemiology of melioidosis in Ubon Ratchatani; northeast Thailand // Int. J. Epidemiol.- 1994.-V.23.- P.1082-1090.

275. Tan B.B., Zulkeflie Z., Rahmah M. Identification and cloning of type III secretion system in Burkholderia pseudomallei II 4th World Melioidosis Congress.- Singapur.- 2004,- P.49.

276. Tanphaichitra D. Introduction of Pseudomonas pseudomallei (melioidosis) antigen into the gale Salmonella typhy TY 21 vaccine strains as carriers of melioidosis antigens to the immune system // J. Cell. Biochem.- 1989.-№.13.- P.246.

277. Taxonomic Outline of the Procaryotes Bergey's Manual of Systematic Bacteriology / Second Edition, Relies 3.0 July 2002.

278. Tenover F.C. Diagnostic deoxyribonucleic acid probes for infection diseases II Clin.Microbiol.Rev.- 1988.- V.I.- P.82-101.

279. Thomson-Carter F.M., Carter P.E., Pennington P:H. Differentiation of staphylococcal species and strains by ribosomal RNA gene restriction patterns // J.Gen. Microbiol.- 1989.- V.135.- P.2093-2097.

280. Trevors J.T. DNA probes for the detection of specific genes in bacteria isolated from the environment // Trends Biotechnol.- 1985.- V.3, №.11.-P.291-293.

281. Tuanyok A., Tom M., Dunbar J. Microarray analysis of gene expression in Burkholderia pseudomallei in response to various growth conditions // 4th World Melioidosis Congress.- Singapur.- 2004.- P.19.

282. Uchida I., Sekizaki T., Hashimoto К., Terakado N. Association of the encapsulation of Bacillus anthracis with a 60 megadalton plasmid // J. Gen. Microbiol.- 1985.- V.131.- P.363-367.

283. Walia S.K., Madhvan T. Molecular analysis of Pseudomonas aeruginosa plasmid DNA analysis: Ann. Meet. Amer. Soc. Microbiol. / Ann. Meet. Washington.- Washington, 1986.- P.151.

284. Wang D., Yap E.H. et al. Identification of a novel repetitive DNA element and its use as a molecular marker for strain typing and discrimination of ara" from ara+ Burkholderia pseudomallei isolates. // J. Med. Microbiol.- 2002.-V.51.- P.76-82.

285. Weinstock G. Genomics and bacterial patogenesis // Emerg. Infect. Dis. — 2000.- V. 6.- №.5.- P.496-505.

286. Williams P. Genetic interactions between mixed microbial populations // Phil. Trans. Roy. Sos. London.- 1982.- V.297.- P!631-639.

287. Wongratanacheewin S.,Komutrin K., Sermswan R.W. Use of multiplex PCR patterns as genetic markers for Burkholderia pseudomallei II Acta Tropica.- 2000.- V.74.- P.193-199:

288. Woods D.E. Molecular pathogenesis of Burkholderia pseudomallei II 4th World Melioidosis Congress.- Singapur.- 2004.- P.23.

289. Wuthiekanun V., Smith M.D., Dance D.A. et al. Biochemical characteristics of clinical and environmental isolates of Burkholderia pseudomallei II J.Med.Microbiol.- 1996.- V.45.- P.408-412.

290. Yap E., Chan Y, Goh К/ et al. Sudden unexplained death syndrome a new manifestation in melioidosis? // Epidemiol. Infect.- 1991.- V.107.-№.3,- P.577-584.

291. Yatome C., Ogawa T., Koda D.,Idaka E. Biodegradation of several dyes by the starved cells Pseudomonas pseudomallei II J. Soc. Fiber. Sei. Technol. Gap.- 1981.- У.37.-Ж11.- P.91-94.

292. Yatome C., Ogawa T., Idaka E. Degradation of p-aminoazobenzene by means of cell-free extracts from Aeromonas hydrophila var. 2413 and Pseudomonas pseudomallei 13NA // Eur. J. Appl. Microbiol. Biothechnol.-1981.- V.12.-№.3.- P.189-191.

293. Yoshimasa K., Hirosawa W. 11 Genbank database, National CenteR foR Biotechnology InfoRmation, Washington, DC. Genbank accession № D13048, D13049, D13050, D13051 and D13052.