Разработка методических подходов для определения содержания бактериальных эндотоксинов в фармацевтических субстанциях тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.04.02, кандидат наук Шаповалова, Ольга Владимировна

• Шаповалова, Ольга Владимировна
• кандидат наук
• 2018

Оглавление диссертации кандидат наук Шаповалова, Ольга Владимировна

Оглавление

ГЛАВА 1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Пирогены и их характеристика

1.2 Пирогенная реакция и ее последствия для организма

1.3 Методы определения пирогенных примесей

1.3.1. Испытание на пирогенность

1.3.2 ЛАЛ-тест

1.3.3 Тест активации моноцитов (МАТ)

1.3.4 Преимущества и недостатки методов

1.4. Особенности определения пирогенных примесей в фармацевтических субстанциях

ВЫВОДЫ К ГЛАВЕ 1

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1 Объекты исследования

2.2 Реактивы и расходные материалы

2.3 Методы исследования

2.4 Статистическая обработка полученных результатов

ГЛАВА 3. РАСТВОРИМОСТЬ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИХ СУБСТАНЦИЙ И ВЛИЯНИЕ ОРГАНИЧЕСКИХ РАСТВОРИТЕЛЕЙ НА РЕЗУЛЬТАТЫ ИСПЫТАНИЯ ПО ПОКАЗАТЕЛЮ «БАКТЕРИАЛЬНЫЕ ЭНДОТОКСИНЫ»45

3.1 Исследование влияния растворителя на активность бактериальных эндотоксинов

3.2. Исследование растворителя на наличие мешающих факторов

ГЛАВА 4. РАЗРАБОТКА И СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ МЕТОДИК ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОДЕРЖАНИЯ БАКТЕРИАЛЬНЫХ ЭНДОТОКСИНОВ ДЛЯ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИХ СУБСТАНЦИЙ

4.1 Теоретический этап

4.1.1 Расчет нормы предельного содержания бактериальных эндотоксинов

4.1.2 Изучение физико-химических свойств фармацевтических субстанций

4.2 Подготовительный этап

4.2.1 Особенности растворения фармацевтических субстанций

4.2.2 Измерение рН основных водных растворов фармацевтических субстанций и их разведений

4.2.3 Выбор метода определения бактериальных эндотоксинов

4.2.4 Расчет максимально допустимого разведения для основных растворов фармацевтических субстанций

4.3 Разработка методик

4.3.1 Качественный анализ с помощью гель-тромб теста

4.3.2 Количественный анализ с помощью гель-тромб теста

4.3.3 Выбор рабочего разведения и подтверждение возможности его применения

ГЛАВА 5. ВАЛИДАЦИЯ МЕТОДИК ОПРЕДЕЛЕНИЯ БАКТЕРИАЛЬНЫХ ЭНДОТОКСИНОВ В ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИХ СУБСТАНЦИЯХ

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

СПИСОК ТЕРМИНОВ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

ПРИЛОЖЕНИЕ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Разработка методических подходов для определения содержания бактериальных эндотоксинов в фармацевтических субстанциях»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность и степень разработанности темы. Важным критерием безопасности активных фармацевтических субстанций (АФС), используемых в изготовлении стерильных лекарственных препаратов, является показатель «Бактериальные эндотоксины», направленный на определение источников пирогенных реакций [41,78]. Оценку данного показателя выполняют согласно требованиям ГФ РФ действующего издания и ведущих зарубежных фармакопей мира с помощью ЛАЛ (Ыши1ш атеЬоеу:е 1уБа1е) - теста, реактив которого специфически реагирует с эндотоксином [13,70,77,81,105].

Нормативная документация на АФС, используемые в производстве стерильных лекарственных препаратов, обязательно включает раздел «Бактериальные эндотоксины» с нормой предельного содержания бактериальных эндотоксинов (БЭ) и ссылкой на ОФС 1.2.4.0006.15. В данной статье приведены общие сведения о выполнении анализа лекарственных средств на наличие БЭ, но отсутствуют подробные рекомендации для проведения ЛАЛ-теста и не указаны условия пробоподготовки образцов. Это значительно усложняет процедуру определения БЭ, особенно в тех случаях, когда изучаемые АФС:

- водонерастворимы,

- окрашены,

- обладают мешающими факторами.

В настоящее время один из наиболее сложных вопросов при определении БЭ в водонерастворимых АФС является выбор растворителя, так как он может оказывать влияние на активность эндотоксина и тем самым затруднять получение достоверных результатов. Согласно лишь единичным разрозненным данным литературы [110] в качестве растворителей можно использовать этиловый спирт 96%, диметилсульфоксид, диметилформамид, однако данное предположение требует подтверждения.

Цель исследования заключается в разработке методических подходов для определения содержания бактериальных эндотоксинов в фармацевтических субстанциях.

Задачи исследования:

1. Провести сравнительный анализ отечественной и зарубежной нормативной документации, регламентирующей условия определения бактериальных эндотоксинов в образцах АФС.

2. Установить растворители для водонерастворимых АФС, которые не обладают мешающими факторами в ЛАЛ-тесте.

3. Определить методические особенности и разработать универсальную схему проведения анализа АФС по показателю «Бактериальные эндотоксины».

4. Разработать методики определения бактериальных эндотоксинов в АФС, которые обладают мешающими факторами в ЛАЛ-тесте.

5. Провести валидационные исследования разработанных методик с помощью обоснованных параметров и критериев их оценки.

Научная новизна работы.

Впервые разработаны методические подходы для определения бактериальных эндотоксинов, направленные на обоснование и оптимизацию условий пробоподготовки и проведения анализа фармацевтических субстанций с учетом их физико-химических свойств (растворимость, вязкость, кислотность, щелочность, химическое строение и др.).

Обоснована и установлена схема пробоподготовки АФС с разной растворимостью, позволяющая исключить ложноотрицательные результаты ЛАЛ-теста.

Определены основные критерии выбора растворителя для водонерастворимых АФС, которые обосновывают отсутствие влияния на биологическую активность БЭ и реакцию ЛАЛ-реактива с контрольным стандартным образцом эндотоксина.

Усовершенствована методика определения бактериальных эндотоксинов в фармацевтической субстанции терафтала, способствующая устранению мешающего фактора и определению реального содержания эндотоксинов в меньшем разведении основного раствора субстанции.

Для анализа водонерастворимой субстанции рифампицина на наличие бактериальных эндотоксинов установлен и рекомендован этиловый спирт 96%, как инертный к эндотоксинам растворитель, и не влияющий на результаты испытаний.

Определены и обоснованы критерии выбора метода определения БЭ (гель-тромб тест или инструментальные методы), способствующие рациональному проведению испытаний.

Предложена процедура проведения валидационных исследований с соответствующими параметрами и критериями приемлемости.

Теоретическая и практическая значимость работы:

Разработаны методики определения БЭ в 54 наименованиях АФС с экспериментальным обоснованием применения рабочего разведения для устранения мешающих факторов.

На фармацевтическом предприятии ФГУП ГНЦ «НИОПИК» были внедрены рекомендации, направленные на устранение ложноотрицательных результатов при определении БЭ в АФС терафтала (акт внедрения от 23.11.2005 г.).

Для 16 наименований АФС малорастворимых и практически нерастворимых в воде усовершенствованы методики пробоподготовки.

Впервые экспериментально подтверждена возможность использования этилового спирта 96% для определения БЭ в водонерастворимых АФС. Установлена кратность его разведения в воде, при которой отсутствуют мешающие факторы, влияющие на результаты опыта.

Установлено, что использование диметилформамида и диметилсульфоксида в качестве растворителей для водонерастворимых АФС нежелательно.

Материалы диссертации были использованы при подготовке ОФС 1.2.4.0006.15 «Бактериальные эндотоксины» Государственной Фармакопеи ГФ XIII издания, проекта ОФС «Бактериальные эндотоксины» Государственной Фармакопеи РФ XIV издания, ФС.2.10032.15 «Рифампицин» (акт внедрения 20.06.2017 г.), а также в разработке методических рекомендаций «Правила составления, изложения и оформления нормативной документации на фармацевтические субстанции» (2009 г.).

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Критерии выбора растворителя для водонерастворимых

фармацевтических субстанций.

2. Методики определения бактериальных эндотоксинов в

фармацевтических субстанциях.

3. Результаты валидационных исследований разработанных методик.

Методология исследования заключалась в выборе оптимальных условий проведения испытаний АФС с помощью ЛАЛ-теста, апробации и валидации разработанных методик.

Степень достоверности и апробации результатов. Для проведения экспериментальных работ использовано оборудование с действующими свидетельствами о поверке, аттестации, калибровке.

Научные положения и выводы достаточно обоснованы, логически вытекают из полученных данных, основанных на значимом количестве экспериментальных исследований, обработанных статистически с помощью компьютерной программы «Statistica 6.0».

Достоверность первичных материалов подтверждена и не вызывает сомнений.

Апробация работы. Результаты и основные положения работы доложены и обсуждены на XIII, XIV, и XV Российских национальных конгрессах «Человек и лекарство», (Москва, 2006, 2007, 2008 г.), заседании секции медицинской и фармацевтической микробиологии Московского отделения Всероссийского научно-практического общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов (Москва, 2017 г.).

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена в рамках государственного задания, утвержденного Минздравом России 29.12.2014 г. на 2015 год и плановый период 2016 и 2017 гг., по НИР «Разработка и совершенствование научно -методических критериев стандартизации лекарственных средств для медицинского применения и последующей экспертной оценки их качества» (№ государственной регистрации 115111740008).

Соответствие диссертации паспорту научной специальности.

Научные положения диссертации соответствуют формуле специальности 14.04.02 - фармацевтическая химия, фармакогнозия, конкретно пункту 2 «формулирование и развитие принципов стандартизации и установление нормативов качества, обеспечивающих терапевтическую активность и безопасность лекарственных средств», пункту 3 - «разработка новых, совершенствование, унификация и валидация существующих методов контроля качества лекарственных средств на этапах разработки, производства и потребления».

Личное участие автора в получении научных результатов. Автору принадлежит основная роль в определении цели и постановке задач, выборе объектов исследования, теоретических изысканий, проведении экспериментальных исследований, обобщении результатов, а так же

представлении материалов диссертационной работы в виде докладов, публикаций, проектов ОФС.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 10 научных работ, из них 4 - в изданиях, входящих в «Перечень российских рецензируемых научных журналов и изданий» ВАК Минобрнауки РФ.

ГЛАВА 1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Пирогены и их характеристика

В настоящее время известно значительное количество соединений, вызывающих симптомы лихорадочного состояния или повышения температуры. Среди них соединения природного и синтетического происхождения с различным механизмом действия. Причиной такой реакции являются пирогены.

Термин «пироген» был введён в употребление венским хирургом Кристианом Теодором Бильротом в 1862 году и заимствован из греческого языка. Явление повышения температуры связано со словом «ПИР» (PYR) и «ГЕН» (GENOS), что в переводе означает «огонь» и «рождающий, вызывающий» [92].

Пирогены, поступая в систему кровообращения, повышают температуру тела, индуцируя лейкоциты для высвобождения провоспалительных цитокинов (например, интерлейкина [IL] -1, IL-6 и фактора некроза опухоли-а [TNF-а]), которые действуют как эндогенные пирогены. Эти высокомолекулярные вещества происходят из различных источников: выделяются из микробиологических организмов (то есть, бактерий, вирусов и грибов) во время гибели клеток или после иммунологической атаки [61,92,110]. Одним из наиболее мощных пирогенных материалов является эндотоксин, компонент внешней клеточной стенки грамотрицательных бактерий (Рисунок 1) [76].

Пирогены - это в основном полисахариды, которые являются эндо- и экзотоксинами, высвобождаемыми при гибели клеток бактерий и грибов. Эндотоксины - относительно устойчивые к нагреванию липосахариднопротеиновые комплексы, содержащиеся в клеточных стенках многих грамотрицательных бактерий, таких как Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae и др. Экзотоксины - неустойчивые к нагреванию протеиновые

комплексы, образуемые грамположительными бактериями такими, как Staphylococcus aureus, Staphylococcus pyrogenes [110].

ПИРОГЕНЫ

Рисунок 1 - Микробные, антимикробные пирогены и связанные с ними активные микробные продукты

Термин «эндотоксины» предполагает внутреннее происхождение этих токсинов в отличие от «экзотоксинов» - токсинов, выделяемых бактериями в процессе жизнедеятельности в окружающую среду. Считалось, что БЭ освобождаются только после разрушения бактерии и остаются во внешней среде после ее гибели. На самом деле БЭ являются частью наружной стенки грамотрицательных бактерий и действительно оказываются во внешней среде после ее разрушения, в сущности, представляя собой осколки клеточной стенки. Впрочем, и живые бактерии постоянно выделяют БЭ, которые отрываются от наружной стенки [83]. БЭ устойчивы к нагреванию и легко переносят процесс стерилизации, например автоклавирование, при котором разрушаются бактерии, а фрагменты клеточных стенок этих бактерий, то есть БЭ, сохраняют свои свойства. Таким образом, стерилизация не может гарантировать отсутствия БЭ, для разрушения которых используются другие способы. Сам же процесс разрушения БЭ называется депирогенизацией, при этом, как правило, имеется ввиду именно разрушение БЭ, а не других пирогенов [92].

Неочищенные БЭ состоят из липидной, полисахаридной и белковой частей. Очищенные БЭ не содержат белок, поэтому эндотоксины грамотрицательных бактерий называют еще липополисахаридами, подчеркивая тем самым их химическую природу [92,110].

Молекула липополисахарида состоит из трех частей, каждая из которых проявляет свои уникальные свойства (Рисунок 2). Это - липид А, центральный олигосахаридный участок (кор) и О-специфический полисахарид. Липид А состоит из дисахарида, фосфата и жирных кислот. Центральную часть молекулы составляет олигосахаридное ядро (кор), которое служит соединительным мостом между Липидом А и О-специфической цепью [69]. Многие сахара и их производные, входящие в О-специфическую цепь, являются уникальными и их различные комбинации определяют огромное количество серотипов грамотрицательных бактерий [50].

Core glycolipid

O-specific polysaccharide chain

t

O-specific (outer) (Inner)

oligosaccharide core oligo saccharide subunit

t

О-специфический полисахарид

t

Центральный олигосахаридный участок (кор)О-специфическая цепь

Рисунок 2 - Строение липополисахаридного комплекса [21]

Наиболее заметную биологическую активность проявляет Липид А, отделенный от полисахаридного участка он сохраняет свою биологическую активность, хотя и несколько уменьшенную по сравнению с целой молекулой липополисахарида [64].

В настоящее время в технологии приготовления лекарственных средств предусмотрены меры, позволяющие свести к минимуму содержание примесей бактериальных пирогенов. Существует множество способов устранения БЭ, которые могут быть применены как для растворов, так и для устранения их с твердых поверхностей [50].

Согласно работе N.Tours наиболее надежным способом устранения БЭ является сухожаровая обработка. Это самый простой способ депирогенизации стеклянной посуды и металлического инструмента. Эффективность обработки напрямую зависит от времени всего процесса и температуры. Нормой считается нагрев до 240 - 250 0С не менее 30 минут. Температура ниже 175 0С может оказаться неэффективной, и время экспозиции уже не будет иметь никакого значения [106].

Автоклавирование в режиме стерилизации лекарственных средств не уничтожает пирогены. Депирогенизация раствора может быть достигнута при автоклавировании в атмосфере азота в течение 3 часов. Способствует

депирогенизации также длительное автоклавирование при значении рН раствора ниже 4,0 или выше 8,0.

Влияние на пирогены ионизирующих излучений изучено недостаточно: было установлено, что у-лучи могут разрушить пирогены. Однако необходимые для этого дозы облучения так велики, что метод не имеет практического значения и не может быть использован для обработки жидкостей, предназначенных для внутривенных инъекций [111].

В настоящее время основными методами удаления пирогенов из растворов являются ультрафильтрация и адсорбция. Для этих целей используют алюминий, асбест, угли, целлюлозу, каолин, кизельгур, крахмал, а также ионообменные смолы и фильтры. Угли используют для обработки воды и растворов различных лекарственных средств. Недостатком применения углей считается высокая адсорбция лекарственных веществ [110].

Одним из путей предотвращения пирогенности лекарственных средств может быть гораздо более широкое использование стерилизации с помощью фильтров не только на конечном этапе производства, но и на промежуточных этапах, а также контроль микробной загрязненности в процессе их производства [54]. Необходимо отметить, что для этой цели идеальными были бы глубинные фильтры, однако последние данные об опасности применения асбеста делают их крайне нежелательными. Следовательно, должны применяться мембранные фильтры. Кроме того, в ряде случаев глубинные фильтры могут быть заменены ультрафильтрами с порогом задержания, соответствующим минимальной массе пирогена. В последнем случае, естественно, речь может идти только о лекарственных средствах, не содержащих высокомолекулярных веществ. Применение фильтров при решении проблемы депирогенизации лекарственной продукции обусловлено еще и тем, что при использовании большинства сорбентов и ионообменных смол возникает необходимость очистки растворов от механических примесей [92,110].

Наиболее эффективным способом депирогенизации воды по-прежнему является дистилляция. По мнению многих российских и зарубежных специалистов метод дистилляции должен использоваться на конечной стадии получения воды требуемого качества [20,99].

Кроме перечисленных способов инактивации БЭ может быть использовано гидролитическое разложение молекулы липополисахарида при нагревании в щелочной или кислой среде или обработка перекисью водорода. Эффективность разрушения прямо зависит от концентрации, температуры и времени [50].

Устойчивость и высокая биологическая активность БЭ, большая вероятность присутствия в лекарственных препаратах для инъекций из-за весьма возможного попадания бактерий с сырьем, водой, либо из воздуха, делают необходимым обязательное исследование на наличие БЭ не только в лекарственных препаратах, но и в АФС, в воде, используемых для их приготовления [6,99].

1.2 Пирогенная реакция и ее последствия для организма

По мнению Е.П. Шуваловой попадая с различными лекарственными веществами, вводимыми парентерально в организм больного, пирогены могут вызывать очень тяжелые реакции [57].

Пирогенная реакция, в ответ на введение токсинов, связана с их способностью вызывать высвобождение эндогенного пирогена из полиморфно-ядерных лейкоцитов хозяина. Эндогенный пироген прямо активирует терморегулирующий центр мозга. Пирогенная реакция может быть также следствием реакции «антиген-антитело» [51].

Липополисахариды обладают токсическим действием и высокоактивны в иммунологическом отношении. Биологические свойства БЭ непосредственно связаны со структурой и конформацией определенных группировок в молекуле липополисахарида, а её отдельные структурные компоненты проявляют различные биологические свойства. Эта концепция

оказалась весьма плодотворной в выяснении взаимосвязи между структурой липополисахарида и её биологической функцией [15,92].

Известно, что молекула липополисахарида действует практически на все системы организма высших животных, вызывая серьезные патофизиологические изменения.

Прежде всего, следует отметить их высокую токсичность. Так, энтеробактериальные липополисахариды в дозах, составляющих сотые доли микрограмма, вызывают гибель куриных эмбрионов, что позволило этот эффект рассматривать как биотест на БЭ [50].

Другое характерное проявление токсических свойств липополисахарида - высокая пирогенность этих соединений.

Инъекция липополисахарида приводит к существенному изменению крови, а их накопление может привести к эндотоксическому шоку [53].

В связи с вышеизложенным у человека различают 3 степени пирогенной реакции: легкую, среднюю и тяжелую. Легкая степень характеризуется незначительными субъективными расстройствами и повышением температуры до 37 °С При реакции средней тяжести наблюдают выраженный озноб, головную боль и повышение температуры до 39 °С Объективные и субъективные расстройства исчезают в течение нескольких часов. Тяжелой степени пирогенной реакции соответствует сильный озноб, рвота, боль в пояснице, цианоз, одышка, температура при этом достигает 40 °С Симптомы реакции носят затяжной характер и прекращаются лишь через сутки.

Описано немало случаев смертельного исхода после вливания пирогенных лекарственных препаратов, вызвавших тяжелую реакцию у больных. Помимо повышения температуры тела, пирогены вызывают сложный комплекс изменений в организме: расстройства деятельности сердечно-сосудистой системы, нарушения углеводного обмена, кровоизлияния в желудочно-кишечном тракте и другое [15,92].

1.3 Методы определения пирогенных примесей

Согласно требованиям международного и отечественного стандарта, содержащих свод правил безопасного и качественного изготовления лекарственных средств [10,80], в инъекционных лекарственных препаратах должно быть сведено к минимуму количество пирогенных примесей. Необходимый контроль за уровнем этих примесей может быть осуществлен с помощью трех методов.

Первый метод - традиционный, который существует почти восемьдесят лет. Для определения пирогенности этот метод предполагает использование животных - кроликов. Второй метод, занимающий доминирующее значение во всем мире - это высокочувствительный и специфичный ЛАЛ-тест, созданный для определения содержания БЭ - in vitro. В последние годы разработан еще один метод, позволяющий оценить наличие пирогенности -тест активации моноцитов (MAT), который сочетает в себе особенности обеих «традиционных» тест-систем [97].

Каждый из методов имеет свои достоинства и недостатки.

1.3.1. Испытание на пирогенность

Биологический метод испытания лекарственных средств на пирогенность предусмотрен фармакопеями всех стран и основан на измерении температуры тела кроликов до и после введения им испытуемых лекарственных средств [13,70,77,13].

В опытах на животных используют стерильные и апирогенные материалы (посуда для разведения, шприцы, иглы для инъекций), что обеспечивается нагреванием при температуре 250°С в течение 30 минут или 200°С в течение 60 минут.

Испытание лекарственных средств проводят на группе из трех кроликов с исходной температурой 38,5-39,5 °С. Ректальную температуру у кроликов измеряют с точностью до 0,10С медицинским максимальным ртутным или электронным термометром с термочувствительным датчиком. Термометр или

датчик вводят в прямую кишку кролика на глубину от 5 до 7,5 см в зависимости от массы тела животного [23,28].

Растворы испытуемых лекарственных средств вводят в ушную вену кролика в объеме не менее 0,2 мл и не более 10 мл на 1,0 кг массы тела животного, при этом раствор подогревают до температуры 37,0 + 2°С.

Величина тест-дозы, а также объём вводимого раствора, растворитель, скорость введения и другие указания приводятся в нормативной документации испытуемого лекарственного средства [10, 24].

Учет результатов проводят поэтапно в соответствии с требованиями 0ФС.1.2.4.0005.15 [13].

Основным недостатком метода in vivo является использование в эксперименте животных, чувствительность которых к пирогенам в 3 - 4 раза ниже, чем у человека. Кроме того, многие лекарственные вещества в дозах, близких к терапевтическим, могут вызвать токсические реакции, и даже гибель животных. К недостаткам метода можно также отнести относительную длительность (4-5 часов) опыта, отсутствие четких количественных характеристик полученных результатов, значительную вариабельность результатов, связанную с индивидуальной чувствительностью животных, сезонностью и так далее [110].

Еще одна проблема контроля пирогенности лекарственных средств — это недостаточная величина тест-доз, используемых в настоящее время при испытаниях. Так, терапевтическая доза лекарственных препаратов для инфузий таких, как глюкоза 5%, реополиглюкин и другие, составляет 500 мл и более, и, следовательно, необходимая тест-доза для кролика должна составлять не менее 25 мл/кг (1/20). Тест-доза, используемая в настоящее время равняется — 10 мл/кг, то есть в 2,5 раза меньше требуемого уровня. Эта тест-доза гарантирует безопасность больного только при введении объема инфузионного раствора, равного 200 мл. Та же проблема существует и для антибиотиков: их тест-дозы в ряде случаев значительно меньше 1/10 от величины не только максимальной, но и средней разовой дозы для человека.

Например, бензилпенициллина натриевую соль применяют в клинике в дозе 1 млн. ед., а испытание на пирогенность проводится с использованием тест-дозы 5000 ед/кг. Кролики прекрасно переносят лекарственные средства в дозе 20 000 ед/кг, принятой в зарубежной практике. Однако и эта тест-доза недостаточна, так как она в 5 раз ниже необходимой величины. Тест-доза линкомицина гидрохлорида равна 0,5 мг/кг и составляет 1/600 терапевтической дозы этого препарата. Таким образом, она не надежна и не обеспечивает безопасность применения линкомицина гидрохлорида. Казалось бы, что положение можно исправить, повысив тест-дозы до требуемого уровня, но сразу же возникнет вопрос о переносимости кроликами указанных лекарственных препаратов в новых высоких дозах. Известно, что повышение доз антибиотиков ведет к возникновению дисбактериоза у животных и их гибели в течение недели после опыта [17].

Однако, у биологического метода испытания на пирогенность есть неоспоримые преимущества. Так, использование млекопитающих, то есть вида, близкого к человеку, позволяет установить влияние испытуемого лекарственного препарата на организм в целом. С помощью испытания на животных возможно определять действие обоих классов пирогенов - «экзо» и «эндо»-токсинов, а также пирогенов не бактериальной природы, в то время как применяя однонаправленный метод контроля ЛАЛ-тест, можно обнаружить только БЭ[49].

1.3.2 ЛАЛ-тест

ЛАЛ-тест - это метод определения БЭ в инъекционных лекарственных препаратах и АФС для их приготовления. Основанием для использования данного метода служит тот факт, что пирогенными примесями в готовых лекарственных препаратах наиболее часто являются БЭ [6,110].

Существует три методики ЛАЛ-теста:

- гель-тромб тест, основанный на образовании геля в присутствии БЭ;

- турбидиметрический тест, где по степени мутности раствора оценивается наличие БЭ;

- хромогенный тест, основанный на изменении цвета раствора после расщепления синтетического пептидно-хромогенного субстрата [32,106].

Все методы основаны на использовании ЛАЛ-реактива, а точнее его реакции с БЭ [68].

Началом разработки ЛАЛ-теста можно считать работу Банга Ф. Б. [85], в которой он опубликовал результаты исследований реакции мечехвостов Limulus polyphemus на введение им в кровь морских бактерий. После введения бактерий большинство животных погибало от обширного внутрисосудистого свертывания крови. Такое свертывание вызывали не только живые бактерии, но и их «термостабильный экстракт» - убитые кипячением бактерии. Исследования этого феномена были продолжены Бангом Ф. Б. через 8 лет совместно с Дж. Левиным. В 1962 году они опубликовали статьи, которые по праву считаются основой ЛАЛ-теста [50].

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Шаповалова, Ольга Владимировна, 2018 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Анастасиев, В.В. Пирогенные вещества в препаратах внутривенных иммуноглобулинов / В.В. Анастасиев, Т.Б. Змачинская, Т.В. Короткова, Л.М. Ефремова // Вестник службы крови России. - 2002. - № 2. - С. 35 - 37.

2. Багирова, В.Л. Тест на активацию моноцитов как альтернатива тесту Пирогенность на кроликах / В.Л. Багирова, О.Д. Митькин, Л.И. Митькина // Фармация. - 2010. - №7. - С. 40 - 42.

3. Багирова, В. Л. Фармацевтические субстанции / В. Л. Багирова, Е. Л. Ковалева, К. С. Шаназаров // Химико-фармацевтический журнал. - 2007. - Т. 41. -№ 1. - С. 35 - 37.

4. Беликов, В.Г. Фармацевтическая химия. Учебное пособие.- 4-е изд, перераб и доп. - М.: МЕДпресс-инфрм, 2007. - 624 с.

5. Буданов, С.В. Совершенствование методологии фармацевтической (фармакопейной) экспертизы - путь к повышению качества лекарственных средств / С.В. Буданов, Н.Д. Бунятян, В.Л. Багирова // Вестник Росздравнадзора - 2009 -№ 4. - С. 66 - 70.

6. Будников, Г.К. Фармацевтический анализ. Монография / Г.К. Будников, С.Ю. Гармонов // Проблемы аналитической химии - М.: Аргамак-Медиа, - 2013. -С. 23 - 26.

7. Глазова, Н.В. Оценка методов определения пирогенности в воде для инъекций /Н.В. Глазова В.Л. Багирова А.С.Крашенинников А.В.Караваева // Фармация - 2005. - № 4. - С. 9 - 11.

8. Гланц, С. Медико-биологическая статистика / С. Гланц. Пер. с англ., М: Практика, 1999. - 459 с.

9. Гойзман, М.С. Оценка качества препарата «Терафтал». Сообщение 1. О компонентном составе препарата / М. С. Гойзман, Евгений Викторович Дегтерев,

К. Ф. Турчин, А. П. Арзамасцев // Химико-фармацевтический журнал - 2007. - № 12 (41). - С. 48 - 53.

10. ГОСТ Р 52249-2009. Правила производства и контроля качества лекарственных средств. — М.: Стандартинформ, 2009. - 139 с.

11. ГОСТ Р ИСО 29701-2015 Нанотехнологии. Наноматериалы для испытаний в тест-системах in vitro. Метод определения содержания эндотоксинов с использованием лизата амёбоцитов Limulus (ЛАЛ-тест).

12. ГОСТ 3652-69. Реактивы. Кислота лимонная моногидрат и безводная. Технические условия.

13. Государственная фармакопея Российской Федерации XIII издания. Том 1.

— М.: ФЭМБ, 2015. - 1469 с.

14. Государственный реестр лекарственных средств. Официальное издание: в 2 т. - М.: Медицинский совет, 2009. - Т.2, ч.1 - 568 с.; ч.2 - 560 с.

15. Гюлазян, Н.М. Липополисахариды/эндотоксины грамотрицательных бактерий: роль в развитии интоксикации / Н.М. Гюлазян, О.Ф. Белая, В.А. Малов, С.Г. Пак, Е.В. Волчкова // Эпидемиология и инфекционные болезни. - 2014. - №2.

- С.11 - 16.

16. Дёрффель, К. Статистика в аналитической химии / К. Дёрффель перевод с немецкого Л.Н. Петровой. - М: Мир, 1994. - 258 с.

17. Долгова, Г. В. Контроль пирогенности инъекционных препаратов / Г. В. Долгова, Н. П. Неугодова, Г. А. Сапожникова // Материалы научно -практического семинара Система контроля качества лекарственных препаратов в стратегии GMP. — М., 2000. — С. 18 - 22.

18. Долгова, Г. В. Бактериальные эндотоксины: определение с помощью ЛАЛ-теста гель-тромб методом (пособие для практических занятий) / Г. В. Долгова, Н. П. Неугодова, А. Г. Ситников и др. - М., 2001. - С. 8 - 17.

19. Долгова, Г.В. Определение бактериальных эндотоксинов в фармацевтических субстанциях, используемых для изготовления инфузионных

растворов / Г.В. Долгова, Н.П. Неугодова, О.В. Шаповалова, Г.А. Сапожникова , Ж.И. Аладышева // Ведомости Научного Центра экспертизы средств медицинского применения. - 2006. - №2. - С.67 - 74.

20. Журавко, А.С. Свойства бактериальных эндотоксинов и методы их удаления из биофармацевтических препаратов / А.С. Журавко, В.И. Швец // Вестник МИТХТ- 2014 -№ 4 (9). - С. 27 - 33.

21. Энтеросорбция в практике инфекциониста / С.М. Захаренко // Регулярные выпуски РМЖ. - 2010. - Том 18, № 30. - 1829 с.

22. Игнатьева, Е. В. Химико-фармацевтическое изучение и стандартизация лекарственных форм новых противоопухолевых комплексных соединений платины, меди, кобальта (Циклоплатам, Сетремед, Терафтал): 15.00.02: 04.2002. -Москва. - 156 с.

23. Каркищенко, Н.Н. Руководство по лабораторным животным и альтернативным моделям в биомедицинских исследованиях / Н.Н. Каркищенко, С.В. Грачева - М.: Профиль-2С, 2010. - 241 с.

24. Кипор, С.Г. Разработка системы качества медицинских изделий по параметру Пирогенность / С.Г. Кипор, Н.П. Неугодова, Г.В. Долгова , Г.А. Сапожникова , Н.В. Люлина, И.М. Тимонин, И.Ю. Адамова // Химико-Фармацевтический журнал - 2003. - №11 (37). - С. 52 - 56.

25. Калинюк, Т.Г. Перспективы усовершенствования биологического контроля стерильных лекарственных средств для парентерального применения / Т.Г. Калинюк, Н.В. Дилай // Фармацевтична технолопя та бюфармащя - 2012. - №1-2. -С. 102 - 107.

26. Ковалева, Е.Л. Совершенствование методологических подходов к стандартизации фармацевтических субстанций / Е.Л. Ковалева, В.Л.Багирова , К.С. Шаназаров // Химико-Фармацевтический Журнал. - 2010. - №1. - С. 35 - 42.

27. Краснюк, И.И. ЛАЛ-тест: современное состояние / И.И. Краснюк, Г.П. Матюшина, М.Ю. Цой // Фармация - 2008. - № 3. - С. 49 - 52.

28. Крылов, Ю.Ф. Биологический контроль безопасности лекарственных средств / Ю.Ф. Крылов, Г.Я. Кивман - М.: Медицина, 1985. - 144 с.

29. Кушнарева, М.А. Производство лекарств по GMP / М.А. Кушнарева, Л.И. Крячко, Т.Б. Оглодкова. - М.: Медицинский бизнес, 2005. - 344 с.

30. Лавренчук, Р.А. Контроль качества лекарственных форм для парентерального применения: современное состояние / Р.А. Лавренчук, И.В. Сакаева, Е.И. Саканян // Ведомости Научного Центра Экспертизы Средств Медицинского Применения - 2012. - № 2. - С.40 - 42.

31. ЛАЛ-тест в России - итоги пяти лет внедрения метода в практику фармацевтического производства // ЛАЛ-тест - 2003. - №1, - С. 1 - 4.

32. Львова, Л.В. В начале пути: заметки с международного семинара «Лабораторные животные — возможности альтернативы в экспериментальной фармакологии». [Электронный ресурс] / Л.В. Львова //Провизор: науч.-метод. журн. - 2002. — № 22. - Режим доступа: http://www.provisor.com.ua/archive/2002/N22/art_22.php - (Дата обращения: 22.02.2017).

33. Машковский, М.Д. Лекарственные средства / М.Д. Машковский. - 15-е изд. - М.: РИА Новая волна: Издатель Умеренков, 2008. - 1206 с.

34. Меркулова, Ю.В. Использование буферных растворов в испытании «Бактериальные эндотоксины» / Ю.В. Меркулова, Л.А. Чайка, О.Н. Гомон // Фармаком. - 2009. - №3. - С. 40 - 48.

35. Меркулова, Ю. В. Мешающие факторы в испытании качества лекарственных средств по показателю «Бактериальные эндотоксины». В кн.: Современная фармация: проблемы и перспективы развития: Материалы V Межрегиональной научно-практической конференции с международным участием (29-30 мая 2015 г.) — Владикавказ: 2015. - С. 93 - 94.

36. Меркулова, Ю.В. Особенности проведения испытания на бактериальные эндотоксины лекарственных средств в виде масляных растворов / Ю.В. Меркулова, Г.В. Долгова, Л.А. Чайка, О.Н. Гомон, Н.П. Неугодова, О.В. Шаповалова // Фармаком. - 2008. - №1. - С. 67 - 73.

37. Меркулова, Ю.В. Мешающее влияние двухвалентных катионов на ЛАЛ-реакцию и его устранение в условиях турбидиметрического кинетического метода / Ю.В. Меркулова, Л.А. Чайка, О.Н. Гомон // Фармаком. - 2008. - №3. - С. 10 - 16.

38. Миронов, А.Н. Правила составления, изложения и оформления нормативной документации на фармацевтические субстанции. Методические рекомендации / А.Н. Миронов, И.В. Сакаева, Н.Д. Бунятян, Е.И. Саканян, Е.Л. Ковалева, Л.И. Митькина, К.С. Шаназаров, А.И. Лутцева, Н.П. Неугодова, О.В. Гунар, Г.В. Долгова, Р.А. Лавренчук, О.В. Шаповалова, О.А. Матвеева, Ю.П. Бекурова. - М. - 2009. - 68 с.

39. Митькина, Л.И. Лекарственные средства для парентерального применения / Митькина Л.И., Шпрах З.С., Ковалева Е.Л. // Фармация - 2011. - № 1. - С. 3 - 5.

40. Неугодова, Н.П. Контроль пирогенности инъекционных препаратов / Н.П. Неугодова, Г.В. Долгова, Г.А. Сапожникова // Система контроля качества лекарственных препаратов в стратегии GMP: Материалы науч.-практ. семинара. М., 2000. - С.18 - 22.

41. Неугодова, Н.П. Основные положения общей фармакопейной статьи Бактериальные эндотоксины / Н.П. Неугодова, Г.В. Долгова, А.Г. Ситников // ЛАЛ-тест. - 2002. - №1. - С.1 - 5.

42. Неугодова, Н.П. Определение содержания бактериальных эндотоксинов в препарате Урографин 76 % раствор для инъекций с помощью ЛАЛ-Теста в модификации гель-тромб тест / Н.П. Неугодова, Г.В. Долгова , Уколов В.А., Сапожникова Г.А. // // Химико-Фармацевтический журнал - 2003. - №10 (37). - С. 54 - 56.

43. Неугодова, Н.П. Основные требования к биологическим показателям при оценке качества лекарственных средств. Возможности валидации биологических методов контроля / Н.П. Неугодова, М.С. Рябцева, Г.А.Сапожникова // Ведомости Научного Центра Экспертизы Средств Медицинского Применения - 2016. - № 3 -С. 3 - 7.

44. Патент Способ получения реактива для определения бактериальных эндотоксинов: пат. 2332458 Рос.Федерация: МПК7 02Q1/00, 02Q 1/25 / Г.М.

Воскобойников, В.А. Галынкин, Н.В. Глазова, А.В. Караваева; заявитель и патентообладатель ООО Научно-производственная фирма Биотехнологический комплекс.- №2006119803/13; заявл.07.06.2003;опубл.27.08.2008, Бюл. № 24. - 9 с.

45. Портал Медицинская наука [Электронный ресурс] - Режим доступа: http://medica1-science.ru/?p=8776 - Откуда берутся мифы о качестве российских лекарств - (Дата обращения: 11.04.2017).

46. Правила составления, изложения и оформления стандартов качества на фармацевтические субстанции: Метод. рекомендации. - М., 2009. - 68 с.

47. Предельное содержание бактериальных эндотоксинов в лекарственном препарате// ЛАЛ-тест - 2003. - №3. - С. 1 - 4.

48. Рябко, Ю.С. Применение кинетического - хромогенного метода определения бактериальных эндотоксинов (ЛАЛ-тест) в технологии очистки генно-инженерного человеческого инсулина / Ю.С. Рябко, О.В. Лукин, Е.Н. Шепель, Е.Д.Шибанова, Д.И.Баирамашвили // Биофармацевтический журнал - 2009. - №1 (1). - С. 34 - 37

49. Рябцева, М.С. История развития и современное состояние биологических тестов в России / М.С. Рябцева, Т.А. Батуашвили, Г.А.Сапожникова, Н.П. Неугодова, Ю.В. Олефир, В.А. Меркулов // Ведомости Научного Центра Экспертизы Средств Медицинского Применения - 2016. - № 1 - С. 11 - 14.

50. Ситников, А. Г. ЛАЛ - тест. Современные подходы к определению пирогенности / А. Г. Ситников, Л.А. Травина, В.Л. Багирова - М.: 1997. - 93 с.

51. Соловьева, Т. Ф. Биологические свойства эндотоксинов грамотрицательных бактерий / Т. Ф. Соловьева, Ю. С. Оводов // Успехи современной биологии. - М.: Наука, 1980. - Т. 90. - В. 1(4). - С.62 - 69.

52. Стандарты эндотоксина // ЛАЛ-тест - 2003. - №4. - С. 1 - 5.

53. Студенческая библиотека онлайн [Электронный ресурс] - Режим доступа: http://studbooks.net/1575247/meditsina/bakteria1nye_endotoksiny - Инфекционные заболевания: взгляд через призму времени. Бактериальные эндотоксины - (Дата обращения: 22.02.2017).

54. Тарасов, А.В. Мембранные микрофильтры для удаления бактериальных эндотоксинов с целью получения апирогенной воды и водных растворов / А.В. Тарасов, А.Г. Ситников, В.В. Демидова, Е.С. Яворская // Фармацевтические технологии и упаковка. - 2013. - №5. - С.110 - 111.

55. Тест «Бактериальные эндотоксины» и анализ «Пирогенность». Пирогены немикробного происхождения // ЛАЛ-тест - 2003. - №2. - С. 1 - 6.

56. Чайка, Л.А. ЛАЛ-тест - надежная замена контроля пирогенности на животных [Электронный ресурс] / Л.А. Чайка, О.Н. Гомон, Ю.В. Меркулова // Центр защиты прав животных «ВИТА» - Режим доступа: http://www.vita.org.ru/exper/articles-alternatives/LAL%20test.htm - (Дата обращения: 06.02.2017).

57. Шувалова, Е. П. Инфекционные болезни. Учебник. / Е. П. Шувалова , Е. С. Белозеров , Т.В. Беляева. - Спб: СпецЛит., 2015. - С. 33 - 46.

58. Цой, М.Ю. Гель-тромб-тест в анализе парентеральных растворов аптечного изготовления / М.Ю. Цой, И.И. Краснюк // Фармация. - 2008. - №7. - С.21 - 23.

59. Юргель, Н.В. Руководство по валидации методик анализа лекарственных средств/Н.В. Юргель, А.Л. Младенцев. -М., 2007. - 187 с.

60. Дшай, Н.В. (1-3)-Р- D- глюкани - заважаючий фактор для проведення ЛАЛ-тесту Н.В. Дшай, Т.Г. Калинюк // Украшський Бюфармацевтичний журнал - 2015. - № 1 (36) -С. 4 - 8.

61. Коцюмбас, 1.Я. Проблема визначення ендотоксишв, як основно! причини шрогенност / 1.Я. Коцюмбас, Г.Ю.Тесляр, А.О. Костюк // Ветеринарна медицина Укра!ни. - 2001. - №8. - С. 34 - 36.

62. ACC Limulus: Associates of Cape Cod, Inc.: Limulus Amebocyte Lysate CHROMO-LAL for the Detection and Quantitation of Gram-negative Bacterial Endotoxins (Lipopolysaccharides). Cat. No. C0031. ACC, Falmouth 2007.

63. Akbar John, B. Mechanism in the Clot Formation of Horseshoe Crab Blood during Bacterial Endotoxin Invasion / B. Akbar John, K.C.A. Jalal, Y.B. Kamaruzzaman, K. Zaleha // Journal of Applied Sciences. -2010. - 10 (17). - Р. 1930 - 1936.

64. Akers, Michael K. Parenteral Quality Control: Sterility, Pyrogen, Particulate, and Package Integrity Testing, Third Edition / Michael K. Akers, Dan Larrimore, Dana Guazzo. - CRC Press.: 2003. - P. 140 - 189.

65. Barnard Health Care [Электронный ресурс] - Режим доступа: https://www.barnardhealth.us/limulus-amebocyte/overview-of-prominent-lal-tests.html -Overview Of Prominent LAL Tests - (Дата обращения: 23.02.2017).

66. Berzofsky, Ronald N. Endotoxin Detection in Pharmaceuticals and Medical Devices with Kinetic-QCL, a Kinetic-Quantitative Chromogenic Limulus Amebocyte Lysate Assay / Ronald N. Berzofsky // ALTEX - 1995. - 12(2). - P. 93 - 97.

67. Bioprocess Online [Электронный ресурс] - Режим доступа: https://www.bioprocessonline.com/doc/the-lal-assay-for-pyrogen-testing-of-parenteral-products-evolution-challenges-0001 - The LAL Assay for Pyrogen Testing Of Parenteral Products: Evolution & Challenges - (Дата обращения: 18.01.2018).

68. Brandberg, K. Conformation of lipid A. the endotoxic center of bacterial lipopolysaccharide / K. Brandberg et al // Journal of Endotoxin Research. -1996. -№3. -P. 173 - 178.

69. Branderburg, K. Endotoxins: relationships between structure, function, and activity / K. Branderburg, A. Wiese // Curr Top Med Chem. -2004. -4. - Р. 1127 - 1146.

70. British Pharmacopeia, London - 2017.

71. Cambrex: Limulus Amebocyte Lysate (LAL) Kinetic - QCL. Cat. № 50-650. Cambrex, Walkersville 2008.

72. Dawson, Michael E. A Wealth of Options Choosing an LAL Test Method / Michael E. Dawson // LALUpdate. - 1995. - V. 13, number 3. - 6 p.

73. Dawson, Michael E. A Interference with the LAL test and how to address it / Michael E. Dawson // LALUpdate. - 2005. - V. 22, number 3. - 6 p.

74. Ding, Jeak L. A new era in pyrogen testing / Jeak L. Ding, Bow Ho // Research Update TRENDS in Biotechnology. - 2001. - Vol.19 - No.8 - P. 277 - 281.

75. Dullah, Elvina C. Current trends in endotoxin detection and analysis of endotoxin-protein interactions / Elvina C. Dullah, Clarence M. Ongkudon // Critical Reviews in Biotechnology. - 2015. - P. 251-261.

76. Fritsch A. Low Endotoxin Recovery is today one of authorities serious concerns regarding pyrogen testing / A. Fritsch // La Vague - 2017. - №53. - C.48 - 50.

77. European pharmacopoeia 9, 2017.

78. Good Manufacturing Practices (GMP) Guidelines for Active Pharmaceutical Ingredients (APIs) GUI-0104 - 2013. - 95 p.

79. Hasiwa, N. Evidence for the Detection of Non-Endotoxin Pyrogens by the Whole Blood Monocyte Activation Test / N. Hasiwa et al // ALTEX 30. - 2013- №2. - P. 169208.

80. Hurley, J.C. Quantitative Limulus lysate assay for endotoxin and the effect of plasma / J.C. Hurley, F.A. Tosolini, W.J. Louis. // Clin. Pathol - 1991. -44(10). - P. 849

- 854.

81. Japanese Pharmacopoeia, 17th edition. - 2016.

82. Joiner, Timothy J. Comparison of Endotoxin Testing Methods for Pharmaceutical Products / Timothy J. Joiner, Paul F. Kraus, Thomas C. Kupiec, PhD // International Journal of Pharmaceutical Compounding. - 2002/ - Vol. 6 No. 6 - P. 408 - 409.

83. Kaszowska, M. Chemical structure and biosynthesis of lipopolysaccharide -important component of the cell envelope of Gram-negative bacteria / M. Kaszowska //Adv. Hyg. Exp. Med. - 2004. - 58. - P. 333 - 342.

84. Lawniczek-Walczyk, A. Endoto xins and ß-glucans as markers of microbiological contamination - Characteristics, detection, and environmental exposure / A. Lawniczek-Walczyk // Annals of agricultural and environmental medicine. - 2010. - 17. - P. 193 -208.

85. Levin, J. The role of endotoxin in the extracellular coagulation of Limulus blood / J. Levin, FB. Bang // Bull Johns Hopkins Hosp. - 1964. - P. 265 -274.

86. Lonza: Limulus Amebocyte Lysate (LAL) PYROGENT ®- 5000. Cat. No. N383, N384, N588, N688. Lonza, Walkersville 2007.

87. Low Endotoxin Recovery (LER): A Review // LALUpdate. - 2014. - Volume 30.

- number 2 - 8 p.

88. Loyd, V. Calculating the Endotoxin Load in Compounded Sterile Preparations / V. Loyd, Jr. Allen // Science & Technology for the hospital Pharmacist.- 2003. - V. 3, Issue 7. - P. 12 - 13.

89. Nagarajan, K. Inhibition and Enhancement BET / K. Nagarajan at al // Newsletter A Charles River Private Limited Communication. - 2010. - V. 1, Issue 4. - 5 p.

90. Nagarajan, K. Part II: Enhancement BET / K. Nagarajan, P. K. Chitnis // Newsletter A Charles River Private Limited Communication. - 2010. - V. 1, Issue 5. - 5 P.

91. Overcome Your Inhibitions // LAL review. Published by Bio Whittaker. -1994. -4 p.

92. Pearson, F. C. Pyrogens. / F. C. Pearson - NY.: 1985. - P. 105 - 117.

93. Pennamareddy, R. Sorting out of interference in detection of endotoxins in biotherapeutic drugs / Ramesh Pennamareddy, K. Prabakar1, J. Pandiyan // Indian Journal of Science and Technology. - 2009. - V.2, No. 11 - P. 20 - 22.

94. Potu, A. Monocyte activation test: a new pharmacoepial quality control test for pyrogens -a review / Apparao Potu, Shashidher Burra, Ajay Kumar Patil // Journal of Advanced Pharmaceutical Sciences. - 2011. - V.1 Issue 1. - P. 123 - 131.

95. Rebello Lourenc, F. How pH, Temperature, and Time of Incubation Affect False-Positive Responses and Uncertainty of the LAL Gel-Clot Test / F. Rebello Lourenc, Tu' Lia De Souza Botelho, Terezinha De Jesus Andreoli Pinto // PDA J Pharm Sci and Tech. - 2012. - P. 542 - 546.

96. Richardson, K. Simple Statistics for the LAL User - Standard Deviation, Repeatability, Reproducibility and a Clarification of the Coefficient of Variation / K. Richardson, T.J. Novitsky // LAL Update. - 2002. - V. 20, No.4. - 6 p.

97. Rosamund, M. Handbook of Microbiological Quality Control: Pharmaceuticals and Medical Devices / M. Rosamund, A. Norman - CRC Press. - 2000. - P. 144 - 167.

98. Sandle, T. Pharmacopeial changes in relation to pyrogens and endotoxin / T. Sandle // GMP Review. - 2014. - V.13, No.3. - P. 10 - 12.

99. Sandle, T. Variability and Test Error with the LAL Assay / T. Sandle // Search American Pharmaceutical Review. -2014. - 17(6). - P. 22 - 28.

100. Sandle, T. Pyrogens, Endotoxin and the LAL Test: An Introduction in Relation to Pharmaceutical Processing / T. Sandle // Global BioPharmaceutical Resources Newsletter. - 2012. - P. 1 - 16.

101. Silva C. C. Applicability of the Monocyte Activation Test (MAT) for hyperimmune sera in the routine of the quality control laboratory: Comparison with the Rabbit Pyrogen Test (RPT) / C. C. Silva, O. A. Franfa Presgrave, T. Hartung , A. M. Lage de Moraes , I. F. Delgado // Toxicology in Vitro - 2016. - №32. - P.70 - 75.

102. Silveira, Rosimar L. Comparative evaluation of pyrogens tests in pharmaceutical products / Rosimar L. Silveira; Simone S. Andrade; Cleber A. Schmidt at al. // Brazilian Journal of Microbiology. - 2004. - 35. - P. 48 - 53.

103. Sushruta, M. An overview of Limulus Amoebocyte Lysate (LAL) test / Mulay Sushruta, Khale Anubha // International Research Journal Of Pharmacy. - 2011. - P. 67 -71.

104. Tasiu, M. Review on methods for biological assays of pharmaceutical products / Mahmud Tasiu, M.D. Mukhtar, Ibrahim A. Sabo, Dauda Danlami, Naziru Dahiru. // International Journal of Innovation Sciences and Research. - 2015. - V.4, No, 5. - P. 175 - 182.

105. The United States Pharmacopoeia. - 40-th ed. - 2017.

106. Tours, N. Comparison of dry-heat depyrogenation using three different types of Gram-negative bacterial endotoxin / N. Tours, T. Sandle // European Journal of Parenteral and Pharmaceutical Sciences. - 2008. - V. 13, No.1. - P. 17 - 20.

a. Troja, E. The methods for determination of the evolution of pyrogenic substances / Troja E. // Bulletin of Medical Sciences. - 2010. - №2. - P. 111 - 124.

107. Tsuji, K. Use of magnesium to increase sensitivity of Limulus Amoebocyte Lysate for detection of endotoxin / Kiyoshi Tsuji, Kathy A. Steindler // Applied and environmental microbiology. - 1983. - Vol. 45, No. 4 - P. 1342 - 1350.

108. United States Patent Limulus lysate procedure for determining endotoxins: US4273557 / David L. Juranas; Mallinckrodt, Inc. - US 06/135,810; declared 31 Map 1980; published 16 hwh 1981. - 8 p.

109. United States Patent Reagent for endotoxin-specific assay US 5550030 A / Shigenori Tanaka, Hiroshi Tamura, Makoto Ohki; Seikagaku Kogyo Kabushiki Kaisha (Seikagaku Corporation); declared 14 сен 1993; published 27 авг 1996. - 18 p.

110. Williams, Kevin L. Endotoxins Pyrogens, LAL Testing and Depyrogenation third Edition (Drugs and the Pharmaceutical Sciences) / Kevin L. Williams. - CRC Press.: 2007. - 419 p.

111. Williams, Kevin L. Microbial contamination control in parenteral manufacturing (Drugs and the pharmaceutical sciences v. 140) / Kevin L. Williams. - NY.: Marcel Dekker. - 2004. - P. 461 - 518.

112. Wong, J. A comparative study of blood endotoxin detection in haemodialysis patients / J. Wong, N. Davies, H. Jeraj et al // Journal of Inflammation. - 2016. - 9 p.