Разработка метода верификации диагноза бластоцистоза при диарее неясной этиологии тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.02.11, кандидат медицинских наук Тихонова, Дина Валерьевна

• Тихонова, Дина Валерьевна
• кандидат медицинских наук
• 2013

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Тихонова, Дина Валерьевна

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

Глава 1. АНАЛИЗ ДАННЫХ ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Проблема бластоцитоза в мире

1.2. Молекулярно-биологические основы и методологические принципы полимеразной цепной реакции

1.3. Преимущества метода ПЦР в диагностике паразитозов

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Общая характеристика обследованных пациентов

2.2.Микроскопическое исследование клинического материала

2.3. Метод полимеразной цепной реакции

2.4. Статистические методы исследования

Глава 3. ПОДБОР ПРАЙМЕРОВ И ОПТИМИЗАЦИЯ ПАРАМЕТРОВ РЕАКЦИИ АМПЛИФИКАЦИИ

3.1. Анализ нуклеотидных последовательностей и конструирование видоспецифических праймеров

3.2. Экспериментальное определение оптимальных условий проведения полимеразной цепной реакции для детекции нуклеиновых

кислот В1азШсузШ Брр

Глава 4. ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ ДЛЯ ОБНАРУЖЕНИЯ БЛАСТОЦИСТ В КЛИНИЧЕСКОМ

МАТЕРИАЛЕ

4.1. Выбор оптимального метода выделения ДНК Ыаз^суБйх Брр.

для проведения ПЦ Р из клинических образцов

4.2. Сравнительная характеристика микроскопического и молекулярно-биологического методов детекции бластоцист

в клиническом материале

Глава 5. ОСОБЕННОСТИ КЛИНИЧЕСКОГО ТЕЧЕНИЯ БЛАСТОЦИСТНОЙ ИНВАЗИИ

5.1. Результаты клинического обследования пациентов с диарейным синдромом

5.2. Результаты клинического обследования носителей бластоцист,

у которых отсутствовал диарейный синдром

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

ПРИЛОЖЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

AJIAT - аланинаминотрансфераза

АСАТ - аспартатаминотрансфераза

ВИЧ - вирус иммунодефицита человека

ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота

ЖКТ - желудочно-кишечный тракт

ПЦР - полимеразная цепная реакция

РНК - рибонуклеиновая кислота

рРНК - рибосомальная рибонуклеиновая кислота

СПИД - синдром приобретенного иммунодефицита

СРК - синдром раздраженного кишечника

spp. - species

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Разработка метода верификации диагноза бластоцистоза при диарее неясной этиологии»

ВВЕДЕНИЕ

Большинство паразитозов выявляется и учитывается значительно хуже, чем острые инфекционные болезни [74]. Известно, что кишечные паразиты оказывают выраженное действие на макроорганизм, в частности снижают и угнетают формирование и сохранение иммунитета [31, 73]. Доказана роль некоторых простейших (лямблий, криптоспоридий) в развитии нарушений биоценотических взаимоотношений между патогенными бактериями и нормальной кишечной микрофлорой, что влияет на развитие многих заболеваний, особенно, имеющих хроническое течение.

В последние годы выявлены высокие показатели зараженности Blastocystis hominis у различных групп населения [6]. На протяжении последних лет ведется изучение биологии паразита [125, 160, 167]. Показано, что В. hominis обладают способностью продуцировать токсические продукты метаболизма, которые всасываются в кишечнике, поступают в кровоток и способны оказывать цитотоксический эффект [110]. Установлено, что бластоцистная инвазия на фоне иммунодефицита сопровождается нарушениями микробиоценоза кишечника. Это проявляется увеличением частоты встречаемости транзиторной микрофлоры на фоне снижения доминирования основных симбионтов, повышением показателей плотности колонизации патогенных и условно-патогенных микроорганизмов, повышением их вирулентности [38].

В связи с этим, актуальной является проблема диагностики широко распространенной протозойной инвазии, обусловленной паразитированием в толстом кишечнике простейших В. hominis. Получены эпидемиологические, клинические и лабораторные данные, подтверждающие этиологическую роль В. hominis в патологии, развивающейся на фоне снижения резистентности организма [31]. Бластоцисты существенно чаще, чем у практически здоровых людей обнаруживаются при хронических дерматозах [52], гастроэнтерологической патологии, диарейном синдроме [99]. Особенно

актуальной проблема бластоцистоза становится в связи с резким увеличением ВИЧ-инфицированных, т.к. у иммунокомпрометированных лиц В. hominis могут вызывать хронические поражения пищеварительной системы [135].

В постановке диагноза бластоцистоза ведущую роль играет обнаружение бластоцист в кале микроскопическим и культуральным методом. Однако диагностика бластоцистоза затруднена обилием различных морфологических форм бластоцист [32, 96]. В качестве альтернативных и наиболее перспективных методов обнаружения В. hominis рассматриваются амплификационные методы, в частности, полимеразная цепная реакция (ПТ TP) [112, 115].

Развитие большинства современных научных дисциплин напрямую связано с развитием применяемых исследователями методов. Это особенно актуально в области медицины, где правильная диагностика играет ключевую роль в выборе стратегии и тактики лечения, а впоследствии определяет его успешность. В последние десятилетия именно новые методические подходы определяли прорыв в области биохимии и молекулярной генетики [66]. Одним из таких способов стала ПЦР, являющаяся высокочувствительным диагностическим методом, позволяющим обнаружить ДНК паразита даже при ее очень низком содержании в данном материале [26, 47, 119, 158]. Это достигается подбором праймеров, комплементарных специфическому участку ДНК возбудителя [47, 91].

Для детекции возбудителей таких паразитарных болезней как малярия, лейшманиозы, токсоплазмоз, дирофиляриоз активно применяют ПЦР, однако, для определения бластоцист в клиническом материале (фекалии) отечественных тест-систем на территории РФ не существует.

Приведенные литературные данные свидетельствуют о том, что изучение проблемы бластоцистоза и разработки методов лечения этой инвазии в значительной степени сдерживается отсутствием эффективных стандартизованных методов лабораторной диагностики этой нозоформы [53].

Цель нашей работы - разработка оригинальных праймеров для верификации ШаяЮсуяНя Брр. в клиническом материале на основе метода ПНР и их апробация, а также изучение клинических особенностей диарейного синдрома у лиц с бластоцистной инвазией.

Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи:

1) провести анализ данных международного интернет-банка генов, подобрать и синтезировать праймеры, оценить их лабораторную перспективность для использования при детекции ярр. методом классической ПЦР;

2) определить оптимальный для проведения ПЦР метод выделения ДНК из биологического материала (кал), апробировать работу выбранных праймеров и оптимизировать временные и температурные режимы реакции;

3) провести сравнение эффективности идентификации бластоцист в клиническом материале (кал) микроскопическим методом и методом ПЦР;

4) определить частоту встречаемости бластоцист у больных с диарейным синдромом и клинически здоровых, жителей Москвы, а также выявить особенности клинического течения диарейного синдрома, ассоциированного с В^^суБШ ярр.

Научная новизна результатов исследования:

Впервые в России разработаны и апробированы праймеры, перспективные для разработки отечественной тест-системы с целью идентификации ДНК бластоцист в клиническом материале (фекалии), в том числе оптимизированы температурные режимы амплификации, определены параметры применения метода ПЦР, подобрана методика выделения ДНК бластоцист.

Уточнена частота встречаемости бластоцист у больных с диарейным синдромом и у лиц из группы «декретированные контингенты», жителей Москвы и Московской области, определен симптомокомплекс для проведения

целенаправленного паразитологического обследования больных с диарейным синдромом.

Установлено, что обнаружение генома бластоцист молекулярно-биологическим методом в испражнениях больных с диарейным синдромом не уступает микроскопическим методам исследования. В случаях низкой численности бластоцист в исследуемом материале, он может служить дополнительным методом исследования.

Практическая значимость:

Впервые в России разработаны и апробированы праймеры, перспективные для разработки отечественной тест-системы для идентификации ДНК бластоцист в клиническом материале (фекалии).

Подобрана и оптимизирована методика выделения ДНК бластоцист как из культурального материала, так и из фекалий человека.

Показано, что молекулярно-биологический метод подтверждения бластоцистной инвазии может быть рекомендован при популяционных обследованиях, в том числе при обследовании групп организованных мигрантов, при расследовании вспышек ОКИ на предприятиях общественного питания, благодаря высокой чувствительности, специфичности и быстроте получения результата.

Личное участие автора в получении результатов. Автор принимал непосредственное участие в клиническом обследовании 414 пациентов, лично проводил лабораторную подготовку 231 пробы и исследовал их методом ПЦР, организовал проведение лабораторных и инструментальных исследований. Диссертантом выполнена статистическая обработка и обобщение полученных результатов.

ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ:

1) Амплификационный метод для идентификации генома бластоцист, сконструированный на основе специфических праймеров №Ь2 и гВЬ2 для выявления рода ЫаБЮсузНз ярр. обладает чувствительностью 94,4 % при

анализе клинического материала. Экстракция ДНК бластоцист сорбентным методом является наиболее эффективным способом подготовки проб при исследовании клинического материала методом ПЦР.

2) Повышение эффективности лабораторной диагностики бластоцистной инвазии при использовании комплексного подхода диктует необходимость применения как амплификационного, так и микроскопического методов, что наиболее целесообразно при проведении обследования больших групп населения, в том числе профилактических осмотрах декретированных лиц.

Внедрение результатов исследования в практику.

Полученные результаты внедрены в диагностических целях при консультации пациентов в отделении медицинской паразитологии КДЦ ГБОУ ВПО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова; используются в научно-педагогической работе на кафедре тропической медицины и паразитарных болезней МПФ Первый МГМУ им. И.М. Сеченова для подготовки студентов лечебного и медико-профилактического факультетов; в работе специализированной клинико-диагностической лаборатории по паразитарным болезням КЦ Первый МГМУ им. И.М. Сеченова.

Апробация работы.

Работа выполнена на базе Научно-исследовательского Института медицинской паразитологии и тропической медицины имени Е.И. Марциновского Первый МГМУ им. И.М. Сеченова.

Тема диссертационной работы является частью комплексной темы кафедры тропической медицины и паразитарных болезней МПФ Первый МГМУ им. И.М. Сеченова «Совершенствование образовательных технологий додипломного и постдипломного медицинского и фармацевтического образования» 01201168237.

Основные положения диссертации опубликованы в 5 научных работах в журналах, 2 из них включены в перечень ВАК.

Материалы диссертационной работы были доложены на X съезде Всероссийского научно-практического общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов «Инфекция и иммунитет» (Москва, апрель 2012 г.) и на заседании кафедры тропической медицины и паразитарных болезней МПФ Первый МГМУ им И.М. Сеченова.

Диссертация была представлена и обсуждена на заседании апробационного совета по экспертизе кандидатских и докторских диссертаций в Научно-исследовательском Институте медицинской паразитологии и тропической медицины имени Е.И. Марциновского Первый МГМУ им. И.М. Сеченова (протокол № 2 от 19 марта 2013).

Структура и объем работы. Диссертация изложена на 109 страницах машинописного текста и состоит из введения, 5 глав, заключения, выводов, практических рекомендаций, приложения и списка литературы. Последний содержит 167 публикаций, из которых 94 отечественных и 73 зарубежных. Работа иллюстрирована 17 рисунками и 15 таблицами, приведено 2 клинических примера.

Заключение диссертации по теме «Паразитология», Тихонова, Дина Валерьевна

ВЫВОДЫ

1. Подобранные и сконструированные праймеры ВЫ и ВЪ2 перспективны при использовании в отечественных тест-системах на основе метода ПЦР для идентификации Л/о^осу^/я ярр. в клиническом материале (кал).

2. Оптимизированные параметры временных и температурных режимов амплификации при проведении ПЦР с оригинальными праймерами обеспечивают синтез специфичных фрагментов и позволяют с высокой чувствительностью и специфичностью верифицировать бластоцисты в клиническом материале.

3. Доказана более высокая чувствительность разработанного амплификационного метода при исследовании клинического материала на основе праймеров ВЪ2 (94,4%) по сравнению с праймерами ВЫ (88,8%) и показана возможность выявления ДНК В^^суБШ эрр. в микроскопически отрицательных пробах при использовании праймеров В1т2 (21,9%), что является детекцией субмикроскопического присутствия бластоцист.

4. Применение ПЦР для верификации Я/ги^осу^м: Брр. с использованием сконструированных праймеров ВЫ и ВЬ2, позволяющих выявлять возбудителя на субмикроскопическом уровне, расширяет диагностические возможности для обследования больных с диарейным синдромом.

5. Использование микроскопического и молекулярно-биологического методов обследования позволило установить, что у больных с диарейным синдромом ВШШсуБНз эрр. обнаруживались у каждого второго (58,4%), в группе здоровых лиц бластоцисты встречались только в 9,2% случаев, что указывает на возможную этиологическую роль бластоцист в развитии диарейного синдрома при отсутствии других инфекционных и паразитарных факторов.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Для повышения качества лабораторной идентификации бластоцист в клиническом материале рекомендуется использовать полимеразную цепную реакцию с праймерами ffih2 (5 -GGAGGTAGTGACААТАААТС-3 ') и rBh2 (5'-TAAGACTACGAGGGTATCTA-3'), комплементарными к участку гена 18S рРНК.

2. При верификации бластоцист методом ПЦР для выделения ДНК бластоцист в клиническом материале рекомендуется использовать метод аффинной сорбции на силикагеле с предшествующим лизированием пробы в гуанидинтиоционате.

3. Больных с диарейным синдромом, эозинофилией, наличием полиморфных высыпаний на коже туловища и конечностей необходимо обследовать паразитологическими методами с целью поиска кишечных простейших, в том числе - Blastocystis spp.

4. С целью увеличения диагностической эффективности в комплексном обследовании больных с диарейным синдромом при анализе фекалий рекомендуется сочетать микроскопический метод с молекулярно-биологическим (ПЦР), что наиболее целесообразно при массовых профилактических осмотрах декретированных лиц, детей в организованных коллективах, при расследовании вспышек ОКИ на предприятиях общественного питания.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Тихонова, Дина Валерьевна, 2013 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Анализ простых межмикробных взаимоотношений в микробиоценозе толстой кишки человека / Ю.В. Несвижский, A.A. Воробьев, С.С. Белоносов и др. // Вестн. РАМН. - 2002. - № 3. - С. 23-25.

2. Багрянцева О.В. Дисбактериоз у детей с заболеваниями желудочно-кишечного тракта // Педиатрия. - 1999. - № 9. - С. 73-77.

3. Бактериальная колонизация и сукцессия у новорожденных детей в аспекте проблемы госпитальных инфекций / B.C. Костюк, Т.М. Меронов, К.Е. Самсонова и др. // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. - 1998. - №10. - С. 19-22.

4. Барановский А.Ю., Кондрашин Э.А. Дисбактериоз и дисбиоз кишечника. - СПб: Питер, 2000. - 209 с.

5. Безжонова О.В. Комплексы видов кровососущих комаров рода Anopheles (.Díptera, Culicidae) России и ближнего зарубежья: Автореф. дис. ... канд. биол. наук. - М., 2011. - 22 с.

6. Бластоцисты у людей в Тульской области / Т.Ю. Державина, В.В. Болдырева, E.H. Говорова и др. // Материалы III Ежегодного Всероссийского Конгресса по инфекционным болезням. - М.: «Династия», 2011. - С. 101.

7. Бондаренко В.М., Грачева Н.М., Мацулевич Т.В. Дисбактериозы кишечника у взрослых. - М.: КМК, 2003. - 224 с.

8. Бугеро Н.В. Ассоциации простейших Blastocystis hominis с некоторыми условно-патогенными микроорганизмами при дисбиозе кишечника у пациентов разных возрастных групп // Сборник научных трудов «Фундаментальные науки и практика». - Томск, 2010. - С. 25.

9. Вертиев Н.Д. Дисбактериоз кишечника в клинике соматических заболеваний // Врач. - 1996. - № 11. - С. 18-19.

10. Генетические варианты риккетсий группы клещевой пятнистой лихорадки из различных эпидемически активных очагов / Т.П. Микрюкова,

М.Ю. Карташов, E.B. Протопопова и др. // Материалы IV Ежегодного Всероссийского Конгресса по инфекционным болезням. - М.: «Династия», 2012.-С. 249.

11. Генодиагностика глубоких микозов / В.А. Антонов, В.В. Алексеев, A.B. Липницкий и др. // Сборник трудов 5-ой Всероссийской научно-практической конференции Генодиагностика инфекционных болезней. - М.: Медицина для всех, 2004. - Т. 2. - С. 157-158.

12. Геномика Bacillus antracis / Е.И. Еременко, А.Г. Рязанова, О.И. Цыганкова и др. // Сборник трудов 5-ой Всероссийской научно-практической конференции Генодиагностика инфекционных болезней. - М.: Медицина для всех, 2004. - Т. 2. - С. 172-175.

13. Генотипирование Yersinia pestis: вариабельность локуса (СФФФ)п у природных штаммов, выделенных на территории бывшего СССР / И.Ю. Сучков, Б.Н. Мишанькин, С.О. Водопьянов и др. // Молекулярная генетика. -2002.-№4.-С. 18-21.

14. Гигани О.О., Азова М.М., Гигани О.Б. Основные вопросы биологии. - М.: ООО «ПЦК Альтекс», 2010.- 103 с.

15. Гинцбург А.Л., Романова Ю.М. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) и ее применение в бактериологии: Учебно-методическое пособие для врачей-бактериологов. - М., 2006. - 142 с.

16. Глебова Н. С. Особенности микробиоценозов кожи и кишечника при экземе на фоне Blastocystis hominis: Автореф. дис. ... канд. биол. наук. — Ульяновск, 2007. - 24 с.

17. Глик Б., Пастернак Дж. Молекулярная биотехнология. Принципы и применение. — М.: Мир, 2002. - 589 с.

18. Детекция генов антибиотикоустойчивости возбудителя чумы и энтеропатогенной кишечной палочки / К.А. Никифоров, Л.В. Анисимова, Г.Н. Одинокова и др. // Материалы IV Ежегодного Всероссийского Конгресса по инфекционным болезням. - М.: «Династия», 2012. - С. 276.

19. Диагностика висцерального лейшманиоза методом полимеразной цепной реакции / E.H. Жеренкина, E.H. Понировский, E.H. Морозов, М.С. Баранец // Сборник трудов 7-ой Всероссийской научно-практической конференции молекулярная диагностика - 2010. - М.: ООО «Типография Момент», 2010. - Т. 2. - С. 292-293.

20. Диагностические возможности ПЦР и специфических серологических методов в верификации диагноза краснухи / О.В. Дарвина, О.Ю. Шипулина, В.П. Чуланов и др. // Материалы II Ежегодного Всероссийского Конгресса по инфекционным болезням. - М.: «Династия», 2010.-С. 88.

21. Дирофиляриозы в Московском регионе - зоне низкого риска передачи инвазии / В.Г. Супряга, H.H. Дарченкова, A.M. Бронштейн и др. // Медицинская паразитология и паразитарные болезни - 2011. - №1. - С. 3-7.

22. Дисбактериоз: современ. возможности профилактики и лечения / Бондаренко В.М., Учайкин В.Ф., Мурашева А.О. и др. М.: АО «Партнер», 1997.-22 с.

23. Дисбактериозы у детей: Учебное пособие для врачей и студентов. / A.A. Воробьев, С.Г. Пак, К.И. Савицкая и др. - М. : «КМК Лтд.», 1999. - 64 с.

24. ДНК-диагностика микст-инвазий Opistorchis felineus и Metorchis bilis с помощью метода ПЦР / И.И. Брусенцов, А.В.Катохин, З.В.Сахаровская и др. // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. - 2010.- № 2. - С. 10-13.

25. Дрынов Г. И. Современная методология диагностики и терапии аллергических и аллергопаразитарных заболеваний: Автореф. Дис. ... д-ра мед.наук. - М., 2010. - 45 с.

26. Дубинина И.Г. Использование метода ПЦР в клинико-диагностических лабораториях // Лаборатория. - 1996. - №4. - С. 3-6.

27. Жеребко H.H., Шипулина О.Ю., Глушкевич Т.Г. Применение полимеразной цепной реакции для диагностики дифтерии // Сборник трудов

5-ой Всероссийской научно-практической конференции Генодиагностика инфекционных болезней. - М.: Медицина для всех, 2004. - Т. 2. - С. 23-26.

28. Идентификация генов патогенности условно-патогенных Enterobacteriaceae методом ПЦР / Б.Р. Кулуев, Д.Н. Дубровская, Д.Я. Хайдарова и др. // Материалы III Ежегодного Всероссийского Конгресса по инфекционным болезням. - М.: «Династия», 2011. - С. 201.

29. Изучение полиморфизма генов белков внешней мембраны в разработке схем индикации и типирования лептоспир / А.П. Самсонова, Е.М. Петров, М.С. Земская и др. // Сборник трудов 5-ой Всероссийской научно-практической конференции Генодиагностика инфекционных болезней. - М.: Медицина для всех, 2004. - Т. 2. - С. 123-126.

30. Изучение популяций возбудителя трехдневной малярии и возможность ее укоренения на территории Кыргызстана / Н.Т. Усенбаев, A.M. Баранова, М.И. Гордеева и др. // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. - 2010. - №1. - С. 36-39.

31. Ильина H.A. Микробиоценоз кишечника человека при бластоцистной инвазии и воздействие Blastocystis hominis на макроорганизм: Автореф. дис. ... д-ра биол. наук. - Ульяновск, 2005. - 37 с.

32. Инфекция В. hominis у грудного ребенка с пищевой аллергией / М.О. Смирнова, Е.А. Ружицкая, А.Н. Пампура и др. // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. - 2010. - №3. - С. 11-15.

33. Кафтырева JI.A., Макарова М.А., Егорова С.А. Генодиагностика факторов патогенности эшерихий как метод достоверной лабораторной диагностики острых кишечных инфекций // Сборник трудов 5-ой Всероссийской научно-практической конференции Генодиагностика инфекционных болезней. - М.: Медицина для всех, 2004. - Т. 2. - С. 45-46.

34. Киселева Е.Ю., Бренева Н.В. Лабораторный скрининг лептоспирозов у людей // Материалы III Ежегодного Всероссийского Конгресса по инфекционным болезням. - М.: «Династия», 2011. - С. 167.

35. Клинико-этиологическая характеристика острых вирусных диарей у детей / Т.Г. Филатова, JI.A. Калиниченко, А.И. Коваленко и др. // Материалы IV Ежегодного Всероссийского Конгресса по инфекционным болезням. - М.: «Династия», 2012. - С. 402.

36. Клиническое значение обнаружения ДНК микобактерий туберкулеза методом ПЦР из диагностических жидкостей у больных туберкулезом в сочетании с ВИЧ-инфекцией / A.B. Кравченко, В.Н. Зимина, A.A. Попова и др. // Материалы IV Ежегодного Всероссийского Конгресса по инфекционным болезням. - М.: «Династия», 2012. - С. 202.

37. Коничев A.C., Севастьянова Г.А. Молекулярная биология. - М.: Издательский центр «Академия», 2003. - 400с.

38. Красноперова Ю.Ю., Симонова A.A. Ассоциации простейших Blastocystis hominis с микроорганизмами при дисбиозе кишечника // Вестник ОГУ. - 2010. - №1. - С. 103-105.

39. Крылов A.A. // Определитель паразитических простейших. - М. -2004.-150 с.

40. Кудрявцева Т.Ю., Лапин A.A., Мокриевич А.Н. Разработка генодиагностических тест-систем и характеристики штаммов возбудителя туляремии // Материалы IV Ежегодного Всероссийского Конгресса по инфекционным болезням. - М.: «Династия», 2012. - С. 205.

41. Кузьмина Г.В., Пелевина Е.П. Полимеразная цепная реакция в диагностике коклюша // Сборник трудов 5-ой Всероссийской научно-практической конференции Генодиагностика инфекционных болезней. - М.: Медицина для всех, 2004. - Т. 2. - С. 57-59.

42. Кучеренко В.З. Применение методов статистического анализа для изучения общественного здоровья и здравоохранения: Учебное пособие для вузов. - М.: «Гэотар-Медиа», 2007. - 192 с.

43. Лабораторная характеристика бластоцистной инвазии у больных с хроническими вирусными гепатитами / A.C. Сигитаев, B.C. Сукачев, М.В. Куртуков и др. // Журнал инфектологии. - 2011. - Том 3. - №. 4. - С. 62-66.

44. Ласкин A.B. Клинико-лабораторные особенности течения острых кишечных диарейных инфекций, ассоциированных с Blastocystis hominis: Автореф. дис. ... канд. мед. наук. - СПб., 2006. - 19 с.

45. Лукманова Г.И. Идентификация штамма Echinococcus granulosus и генетические факторы риска гидатидозного эхинококкоза на южном Урале: Автореф. дис. .. .докт. мед. наук. - М., 2008. - 42 с.

46. Методики клинических лабораторных исследований: Справочное пособие. Том 3 / Под редакцией В.В. Меньшикова. - М.: Лабора, 2009. - 880 с.

47. Молекулярные методы клинической диагностики / Под редакцией С. Херрингтона и Дж. Макги. - М.: Мир, 1999. - 558 с.

48. Морозов E.H. Перспективы применения методов молекулярной паразитологии в мониторинге за социально-значимыми паразитозами // Сборник трудов 7-ой Всероссийской научно-практической конференции молекулярная диагностика-2010. - М.: ООО «Типография Момент», 2010. - Т. 2. - С. 304-307.

49. МУ 1.3.2569-09. Организация работы лабораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим микроорганизмы I-IV групп патогенности. - М.: Федеральный центр Госсанэпиднадзора Минздрава России, 2009. - 53 с.

50. МУК 4.2.735-99. Паразитологические методы лабораторной диагностики гельминтозов и протозоозов. - М.: Федеральный центр Госсанэпиднадзора Минздрава России, 1999. - 72 с.

51. МУК 3.2.987-00. Паразитологическая диагностика малярии: Методические указания. - М.: Федеральный центр Госсанэпиднадзора Минздрава России, 2001. - 36 с.

52. Нестеров A.C. Особенности патогенеза и терапии хронических дерматозов при бластоцистной инвазии: Автореф. дис. ... д-ра мед.наук. -СПб., 2009.-41 с.

53. Письмо Руководителя Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека от 30 июня 2006 г. N 0100/7174-06-32 "О заболеваемости редкими гельминтозами в российской федерации в 2005 году"

54. Обнаружение хантовирусов во внешней среде природных очагов геморрагической лихорадки с почечным синдромом / Т.В. Кушнарева, P.A. Слонова, О.В. Иунихина и др. // Материалы IV Ежегодного Всероссийского Конгресса по инфекционным болезням. - М.: «Династия», 2012. - С. 215.

55. Особенности микрофлоры толстого кишечника при инфекционном эндокардите / A.A. Воробьев, JT.O. Иноземцева, Ю.В. Несвижский и др. // Микробиология, эпидемиология и иммунология. - 1996. - № 1. - С. 70-74.

56. Особенности эпидемиологии висцерального лейшманиоза в Папском районе Наманганской области Узбекистана, выявленные при обследовании детей методом ПЦР / E.H. Жиренкина, E.H. Понировский, М.В. Стрелкова и др. // Медицинская паразитология и паразитарные болезни - 2011. -№3.-С. 37-41.

57. Оценка эффективности дифференциальной диагностики гриппа методом мультиплексной ПЦР / С.А. Лободанов, Е.Б. Фуйзулоев, C.B. Трушакова и др. // Материалы III Ежегодного Всероссийского Конгресса по инфекционным болезням. - М.: «Династия», 2011. - С. 214-215.

58. Паразитарные болезни человека (протозоозы и гельминтозы): Руководство для врачей / под ред. В. П. Сергиев, Ю. В. Лобзин, С. С. Козлов. -СПб: Изд-во «Фолиант», 2008. - 586 с.

59. Паразитологические методы лабораторной диагностики гельминтозов и протозоозов: Методические указания. - 2-е изд. - М.: Федеральный центр Госсанэпиднадзора Минздрава России, 2003. - 72 с.

60. Первый опыт VURU-VNTR типирования М. tuberculosis: анализ изолятов, выделенных на территории г. Екатеринбурга / С.Ю. Ковалев, Е.Ю. Камаев, М.А. Кравченко и др. // Сб. тезисов 4-й Всероссийской научно-практической конференции Генодиагностика инфекционных болезней. - М.: Медицина для всех, 2002. - С. 115-117.

61. Перспективы метода «Molecular because» для генной диагностики возбудителей особо опасных инфекций / A.C. Водопьянов, Н.В. Павлович, С.О. Водопьянов и др. // Мол. генетика, микробиология, вирусология. - 2004. -№ 2. - С. 24-28.

62. Применение RAPD-анализа для выявления видов различных микромицетов / С.М. Игнатьева, Д.Т. Маркозашвили, К.В. Богданов и др. // Материалы III Ежегодного Всероссийского Конгресса по инфекционным болезням. - М.: «Династия», 2011. - С. 148-149.

63. Продеус Т.В., Федянина JI.B., Волкова И.В. Медицинское значение инфекции Blastocystis spp. II Медицинская паразитология и паразитарные болезни. - 2012. - №3. - С. 59-62.

64. ПЦР-диагностика гриппа и других острых респираторных вирусных инфекций в Санкт-Петербурге в осеннее-зимний период 2010-2011 гг. / М.П. Грудинин, М.М. Писарева, Ж.В. Бузицкая и др. // Материалы III Ежегодного Всероссийского Конгресса по инфекционным болезням. - М.: «Династия», 2011. - С. 93.

65. ПЦР-диагностика клинических случаев боррелиозов и реккетсиозов / JI.C. Карань, H.A. Рудникова, Т.В. Булгакова и др. // Сборник трудов 5-ой Всероссийской научно-практической конференции Генодиагностика инфекционных болезней. - М.: Медицина для всех, 2004. - Т. 2. - С. 35-37.

66. ПЦР «в реальном времени» / Д.В. Ребриков, Г.А. Саматов, Д.Ю. Трофимов и др. - М.: БИНОМ. Лаборатория знаний, 2009. - 223 с.

67. Разработка системы консенсунсных праймеров для детекции методом ПЦР хаитавирусов, циркулирующих на территории РФ, оценка ее эффективности при работе с полевым и клиническим материалом / С.Б. Гранина, Г.А. Шипулин, В.И. Журавлев и др. // Сборник трудов 5-ой Всероссийской научно-практической конференции Генодиагностика инфекционных болезней. - М.: Медицина для всех, 2004. - Т. 2. - С. 168-171.

68. Ракова В.М. Возвращающиеся зоонозы: дирофиляриозы Средиземноморья // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. -2012. -№1.- С. 55-59.

69. Романенко H.A. Современные задачи санитарной паразитологии // Мед. паразитология и паразитарные болезни. - 2001. - №4. - С. 25-29.

70. Сароянц JI.B. Разработка лабораторной диагностики лепры с помощью полимеразной цепной реакции // Материалы IV Ежегодного Всероссийского Конгресса по инфекционным болезням. - М.: «Династия», 2012.-С. 336.

71. Сахарова Т.В., Гордеева JIM., Сергиев В.П. Изучение морфологии бластоцист низших обезьян с помощью световой микроскопии // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. - 1997. - № 2. - С. 24-27.

72. Селянинов Ю.О., Егорова И.Ю. ПЦР в диагностике Сибирской язвы: преимущества и недостатки // Материалы III Ежегодного Всероссийского Конгресса по инфекционным болезням. - М.: «Династия», 2011.-С. 339.

73. Сергиев В.П., Лебедева М.Н. Распространение паразитарных болезней и их профилактика в России // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. - 1997. - №3. - С. 5-9.

74. Сергиев В.П., Филатов H.H. Инфекционные болезни на рубеже веков. - М.: Наука, 2006. - 572 с.

75. Скрининг муниципальной системы водоснабжения в г. Ла-Плата (Аргентина) с целью выявления кишечных паразитов человека. Программа

эпиднадзора ВОЗ. Борьба с инфекциями, передающимися через пищу, и интоксикациями в Европе / Н. Кистеманн, Ф. Дангендорф, Л. Кризек и др. -Берлин, 2000. № 66. - С. 10-11.

76. Современные методы диагностики коклюша у детей / Л.М. Коноплина, И.Г. Чурикова, Ю.Н. Анохина и др. // Материалы III Ежегодного Всероссийского Конгресса по инфекционным болезням. - М.: «Династия», 2011.-С. 179.

77. Сорокина Е.Ю., Чернышева О.Н., Левицкая А.Б. ПЦР-анализ в системе надзора за оборотом ГМ-пищевых продуктов // Сборник трудов 5-ой Всероссийской научно-практической конференции Генодиагностика инфекционных болезней. - М.: Медицина для всех, 2004. - Т. 2. - С. 256-267.

78. Трофимов Д.Ю. Создание отечественной инновационной технологической платформы для решения актуальных фундаментальных и прикладных задач современной иммунологии на основе ПЦР в реальном времени: Автореф. дис. ... д-ра биол. наук. - М., 2009 - 44 с.

79. Трякина И.П. Токсоплазмоз: Учебное пособие. - М.: РМАПО, 2008.-20 с.

80. Трякина И.П. Микоплазменная инфекция: Учебное пособие. - М.: РМАПО, 2008. - 20 с.

81. Турбабина H.A., Морозов E.H. Разработка метода идентификации ооцист криптоспоридий в питьевой воде и водных объектах окружающей среды // Сборник трудов 7-ой Всероссийской научно-практической конференции молекулярная диагностика - 2010. - М.: ООО «Типография Момент», 2010. - Т. 2. - С. 313-315.

82. Туркадзе К. А. Значение определения генов инвазивности шигаподобных и энтеротоксинов методом ПЦР для клиники и диагностики острой дизентерии: Автореф. дис. ... канд. мед. наук - М., 2003 - 24 с.

83. Уездина A.B. ПЦР-диагностика криптоспоридиоза кур: Автореф. дис. ... канд. биол. наук - М., 2008 - 23 с.

84. Фалова O.E. Особенности микрофлоры кишечника при псориазе на фоне инвазии Blastocystis hominis: Автореф. дис. ... канд. биол. наук. -Ульяновск, 2004. - 23 с.

85. Федянин Ю.П. Микрофлора кишечника при неспецифическом язвенном колите // Казанский медицинский журнал. - 1997. - № 3. - С. 202-204.

86. Федянина JI.B., Продеус Т.В., Волкова И.В. Blastocystis hominis, Brumpt 1912 - загадочный организм, относящийся к простейшим кишечника // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. - 2011. - №2. - С. 47-52.

87. Характеристика кишечного микробиоценоза людей, инвазированных бластоцистами / Ю.Ю. Красноперова, Н.И. Потатуркина-Нестерова, H.A. Ильина и др. // Материалы Восьмой Российской Гастроэнтерологической Недели, 18-21 ноября 2002. - М., 2002. - Т. XII, № 5. - С.216.

88. Цветков И.Л., Сердобинский Л.А. Использование ПЦР в реальном времени для количественного определения генетически модифицированной сои // Сборник трудов 5-ой Всероссийской научно-практической конференции Генодиагностика инфекционных болезней. - М.: Медицина для всех, 2004. - Т. 2.-С. 269-271.

89. Частота встречаемости бластоцистной инвазии у больных хроническими вирусными гепатитами в Санкт-Петербургском мегаполисе / A.C. Сигидаев, A.B. Ласкин, К.В. Жданов и др. // Материалы IV Ежегодного Всероссийского Конгресса по инфекционным болезням. - М.: «Династия», 2012.-С. 343.

90. Чайка H.A. Бластоцистоз и СПИД // Медицинская паразитология. -1992. -№4,- С.48-51.

91. Щипков В.П., Карасева Н.В. Материалы лекций по разделу «Молекулярная генетика». - М.: ООО «ПИК Альтекс», 2010. - 52 с.

92. Эллиот В., Эллиот Д. Биохимия и молекулярная биология. - М.: МАИК «Наука Интерпиреодика», 2002. - 445 с.

93. Экспресс-геноиндикация шигел Зоне, сорбированных на магнитных антителах / В.М. Бондаренко, А.Т. Латкин, С.В. Фиалкина и др. // Сборник трудов 5-ой Всероссийской научно-практической конференции Генодиагностика инфекционных болезней. - М.: Медицина для всех, 2004. - Т. 2. - С. 6-8.

94. Blastocystis hominis и непатогенные простейшие кишечника у больных туберкулезом легких и ВИЧ-инфицированных / H.A. Давис, Ж.И. Исламова, Х.З. Гиясов и др. // Медицинская паразитология и паразитарные болезни - 2010. - №3. - С. 8-11.

95. A case-control study of Blastocystis hominis among Iranian population / M. Rostami Nejad, E. Nazemalhosseini Mojarad, H. Dabiriet et al. // East African Journalof Public Health. - 2010. - Vol. 7. - № 1. - P. 101-104.

96. A multiple fission-like mode of asexual reproduction in Blastocystis hominis / M. Suresh, J. Howe, G.C. Ng et al. // Parasitology Research. - 1994. -Vol.80. -№ 6. -P. 523-527.

97. An improved PCR method for detection of HIV-1 proviral DNA of a wide range of subtypecs and recombinant forms circulating globally/ J. Weidner, U. Cassens, W. Gohde et al. // Journal of Virological Methods. - 2011. - Vol. 172. -№1. - P. 22-26.

98. A real-time quantitative polymerase chain reaction method for hepatitis В virus in patients with chronic hepatitis В treated with lamivudine / T. Ide, R. Kumashiro, Y.Koga et al. // American Journal of Gastroenterology.- 2003. - Vol. 98. -№9.-P. 2048-2051.

99. Blastocystis hominis and Dientamoeba fragilis in patients fulfilling irritable bowel syndrome criteria / J. Yakoob, W. Jafri, M.A. Beg et al. // Parasitology Research. - 2010. - Vol. 107. - № 3. - P. 679-684.

100. Blastocystis hominis infection: a real pathohen? / de Silva, D.G. Harendra, L.N. Mendis et al. // Journal of Pediatric Gastroenterology and Nutrition. - 1997. - Vol. 27. - № 2. - P. 243.

101. Blastocystis hominis: phylogenetic affinities determined by rRNA sequence comparison / A.M. Johnson, A.A. Thanou, P.F. Boreham et al. // Exp. Parasitol.- 1989.- V.68.- P.283-289.

102. Blastocystis: a new disease in patients with leikemia / P. Garavelli, L. Scaglione, M. Rossi et al. // Haematologica. - 1991. - V.76. - P.76-80.

103. Blastocystosis in patients with gastrointestinal symptoms: a case-control study / A.H. Cekin, Y. Cekin, Y.Adakan et al. // BMC gastroenterology. - 2012. -Vol. 12.-P. 122.

104. Characterisation of small double stranded RNA molecule in Cryptosporidium hominis, Cryptosporidium felis and Cryptosporidium meleagridis / F. Leoni, Ch. Gallimore, J. Green et al. // Parasitology International - 2006. - Vol. 55.-№4. -P. 299-306.

105. Chen T.L., Chan C.C., Chen H.P. Clinical characteristics and endoscopic findings associated with Blastocystis hominis in healthy adults // American Journal of Tropical Medicine and Hygiene. - 2003. - V.69. - № 2. - P. 213-216.

106. Clark C. G., Diamond L. S. Methods for Cultivation of Luminal Parasitic Protists of Clinical Importance // Clinical Microbiology Reviews. - 2002. - V.15. -№. 3. - P.329-341.

107. Clinical significance of Blastocystis hominis: experience from a medical center in northern Taiwan / Han-Yueh Kuo, Dung-Hund Chiang, Chien-Chun Wang et al. // Journal of Microbiol. Immunol. Infect. - 2008. - V. 41. - P. 222-226.

108. Comparison of short-term and long-term protocols for stabilization and preservation of RNA and DNA of Leishmania, Trypanosoma, and Plasmodium // F.L. Basiye, G.J. Schoone, M. Beld et al. // Diagnostic Microbiology and Infectious Disease.- 2011. - Vol. 69. - № 1. - P. 66-73.

109. Conventional and molecular methods to detect bacterial pathogens in mussels / C. Gugliandolo, V. Lentini, A. Spano et al. // Lett Appl Microbiol. - 2011. -Vol. 52.-№ l.-P. 15-21.

110. Cytopathic effect of Blastocysts hominis after intramuscular inoculation into laboratory mice / K. T. Moe, M. Singh, P. Gopalakrishnakone et al. // Parasitology research. - 1998. - V.84. №. 6. - P.450-454.

111. Detection of Blastocysts from stool samples using real-time PCR / M.S. Jones, R.D. Ganac, G.Hiseretal // Parasitology Research. - 2008. - Vol. 103. - № 3. -P. 551-557.

112. Detection of Blastocysts hominis in unpreserved stool specimens by using polymerase chain reaction / R. Stensvold, A. Brillowska-Dabrowska, H.V. Nielsen et al. // The journal of parasitology. - 2006. - Vol. 92. - № 5. - P. 10811087.

113. Detection of malaria in Malaysia by nested polymerase chain reaction amplification of dried blood spots on filter papers / B. Singh, J.Cox-Singh, A.O. Miller et al. // Transactions of the Royal Society of Tropical Medicine and Hygiene. - 1996. - Vol. 90. - № 5. - P. 519-521.

114. Development and evaluation of a real-time PCR assay for detection and quantification of Blastocysts parasites in human stool samples: prospective study of patients with hematological malignancies / P. Poirier, I. Wawrzyniak, A. Albertetal. // J. Clin.Microbiol. - 2011. - Vol. 49. - № 3. - P. 975-983.

115. Direct characterization of Blastocysts from faeces by PCR and evidence of zoonotic potential / U. Parkar, R.J. Traub, S. Kumaret et al. // Parasitology. -2007. - Vol. 134. - № 3. - P. 359-367.

116. Effect of trimethoprim-sulfamethaxazole in Blastocysts hominis infection / U.Z. Ok, N. Girginkardesler, C. Balciogluet. et al. it The American Journal of Gastroenterology. - 1999. - Vol. 94. - № 11. - P. 3245-3247.

117. Elwakil H.S., Talaat R.M. Genetic analysis of Blastocysts hominis isolated from symptomatic and asymptomatic human hosts in Egypt // Journal of the Egyptian society Parasitology. - 2009. - Vol. 39. - №. 1. - P. 99-109.

118. Emerging Microsporidia Infections in Russian HIV-infected Patients /

0.1. Sokolova, A.V. Demyanov, L.C. Bowers et al. // Journal of Clinical microbiology. - 2011. - Vol. 49. - P. 2102-2108.

119. Enzymatic amplification of beta-globin genomic sequences and restriction site analysis for diagnosis of sickle cell anemia / R.K. Saiki, S. Scharf, F. Faloona et al. // Science. - 1985. - Vol. 230. - P. 1350-1354.

120. Epidemiology, clinical, immune, and molecular profiles of microsporidiosis and cryptosporidiosis among HIV/AIDS patients / R. Wumba , B. Longo-Mbenza, J. Menotti et al. // International Journal of General Medicine — 2012.-Vol. 5.-P. 603-611.

121. Eroglu F., Koltas I.S. Evaluation of the transmission mode of Blastocystis hominis by using PCR method // Parasitology Research. - 2010. - Vol. 107.-№4.-P. 841-845.

122. Evaluation and improvement of two PCR targets in molecular typing of clinical samples of Leishmania patients / J.H. Roelfsema, N. Nozari, T. Herremans et al. // Experimental Parasitology.- 2011. - Vol. 127. - № 1. - P. 36-41.

123. Experimental Blastocystis hominis infection in laboratory mice / K.T. Moe, M. Singh, J. Howe et al. // Parasitology Research. - 1997. - Vol. 83. - № 4. -P. 267-268.

124. Garavelli P.L. Blastocystis-. a new disease in the acquired immundeficiency syndrom // International journal of STD and AIDS. 1990. - Vol.

1. - № 2. - P. 134-135.

125. Garavelli P.L. Blastocystosis or Zierdt-Garavelli disease // Presse medicale. - 1996. - V.25. - № 16. - P. 777.

126. Garcia L.S., Shimizu R.Y. Evaluation of intestinal protozoan morphology in human fecal specimens preserved in EcoFix: comparison of Wheatley's trichrome stain and EcoStain // Clin. Microbiol. - 1998. - Vol. 36. -№.7.-P. 1974-1976.

127. Genetic variability of Blastocystis hominis isolates in China / Y. Yan, S. Su, R. Lai et al. // Parasitology Research. - 2006. - Vol.99. - №5. - P.597-601.

128. Gupta R., Parsi K. Chronic urticarial due to Blastocystis homihis II Australas J. Dermatol. - 2006. - Vol.47. - № 2. - P. 117-119.

129. Hameed D.M., Hassanin O.M., Zuel-Fakaar N.M. Association of Blastocystis homihis genetic subtypes with urticarial // Parasitology Research. -2011.-Vol. 108. -№3. -P. 553-560.

130. Identification and characterization of variable-number tandem repeats in the Yersinia pestis genome / A.M. Klevytska, L.B. Price, J.M. Schupp et al. // J. Clin. Microbiol. -2001. - Vol. 39. - № 9.-P. 3179-3185.

131. Identification of Blastocystis hominis isolates from asymptomatic and symptomatic patients by PCR // F. Eroglu, A.Genc, G.Elgunetal// Parasitology Research.-2009.-Vol. 105.-№6.-P. 1589-1592.

132. Identification of Blastocystis subtype 1 variants in the Home for Girls, Bangkok, Thailand / U. Thathaisong , S. Siripattanapipong, M. Mungthin et al. // American Journal of Tropical Medicine and Hygiene. - 2013. Vol. 88.- №2. - P. 352-358.

133. Infective etiology of diarrhea in adults with HIV infection in Dakar: a case-control study on 594 patients / A. Gassama, B.Thiaw, N.M.Diaet. et al. // Dakar medical.- 2001. - Vol. 46. - № 1. - P. 46-50.

134. Intestinal microsporidiosis in diarrheal patients infected with human immunodeficiency virus-1 in Addis Ababa, Ethiopia / T. Endeshaw , A. Kebede , J.J. Verweij et al. // Japanese Journal of Infectious Diseases - 2006. - Vol. 59. - №5. -P. 306-310.

135. Intestinal parasitic infections in HIV/AIDS patients presenting with diarrhoea in Jakarta, Indonesia / A. Kurniawan, T. Karyadi, S.W. Dwintasari et al. // Transactions of the royal society of tropical medicine and hygiene. - 2009. - Vol. 103.-№9.-P. 892-898.

136. Intestinal parasites infections in hospitalized AIDS patients in Kinshasa, Democratic Republic of Congo / R. Wumba, B. Longo-Mbenza, M. Mandina et. al. // Parasite. - 2010. - Vol. 17. - № 4. - P. 321-328.

137. Intestinal parasites in immigrants in the city of Naples (southern Italy) / L. Gualdieri, L. Rinaldi, L. Petrullo et al. // Acta Tropica.- 2011. - Vol. 117. - № 3. -P. 196-201.

138. Intestinal parasitic infections: prevalences in HIV/AIDS patients in a Thai AIDS-care centre / W. Saksirisampant, J.Prownebon, P. Saksirisampant et al. // Annals of tropical medicine and parasitology. - 2009. - Vol. 103. - № 7. - P. 573581.

139. Irritable bowel syndrome: in search of an etiology: role of Blastocysts hominis / J. Yakoob, W.Jafri, N. Jafri et al. //Am. J. Trop. Med. Hyg. - 2004. - Vol. 70.-№4.-P. 383-385.

140. Jarra W., Snounou G. Only viable parasites are detected by PCR following clearance of rodent malarial infections by drug treatment or immune responses // Infect. Immun. - 1998. - V.66. - №.8. - P. 3783-3787.

141. Jula G.M, Sattari M, Banihashemi R. The phenotypic and genotypic characterization of Bacillus anthracis isolates from Iran // Trop. Anim. Health. Prod. -2011.- Vol. 43. -№3.- P. 699-704.

142. Leishmania (Viannia) braziliensis identification by PCR in the state of Para, Brazil / H. A. Bacha, F.F. Tuon, R.A.Zampieri et al. // Transactions of the Royal Society Tropical Medicine and Hygiene - 2011. - Vol. 105. - № 3. - P. 173178.

143. MacPherson D.W., MacQueen W.M. Morphological diversity of Blastocystis hominis in sodium acetate-acetic acid-formalin-preserved stool samples stained with iron hematoxylin // Journal of Clinical Microbiology. - 1994. - V.32. №. 1. - P.267-268.

144. Pathogenicity of Blastocystis hominis, a clinical réévaluation / S. Kaya, E.S. Cetin, B.C. Aridogan et al. // Turkiye Parazitolojii Dergisi. - 2007. - Vol. 31. -№3.- P. 184-187.

145. PCR detection of Dirofilaria immitis in Aedes aegypti and Culex pipiens from urban temperate Argentina / D. Vezzani, M. Mesplet, D.F. Eiras et al. II Parasitology Research. - 2011. - Vol. 108. - № 4. - P. 985-989.

146. PCR detection of pathogenic Leptospira genomospecies targeting putative transcriptional regulator genes / D. Liu, M.L. Lawrence, F. W. Austin et al. // Canadian Journal Microbiology. - 2006. - Vol. 52. - № 3. - P. 272-277.

147. PCR fingerprinting of Blastocystis isolated from symptomatic and asymptomatic human hosts / T.C. Tan, K.G. Suresh, K.L. Thong, H.V. Smith et al. // Parasitology Research. - 2006. - Vol. 99. - № 4. - P. 459-456.

148. Phillips B.P., Zierdt C.H. Blastocystis hominis', pathogenic potential in human patients and in gnotobiotes // Experimental Parasitology. - 1976. - Vol. 39. -№3. -P. 358-364.

149. Phylogenetic position of Blastocystis hominis that contains cytochrome-free mitochondria, inferred from the protein phylogeny of elongation factor 1 alpha / Y. Nakamura, T. Hashimoto, H. Yoshikawa et al. // Mol. Biochem. Parasitol. -1996. - Vol.77. - №2. - P. 241-245.

150. Phylogenetic relationships within the cyst-forming nematodes {Nematoda, Heteroderidae) based on analysis of sequences from the ITS regions of ribosomal DNA / S.A. Subbotin, A. Vierstraete, P. De Ley et al. // Mol. Phylogenet. Evol. -2001. - Vol. 21. - №1. -P. 1-16.

151. Prevalence and clinical relevance of Blastocystis hominis in diverse patient cohorts / O. Cirioni, A. Giacometti, D. Drenaggi et al. II Eur. J. Epidemiol. -1999.-V.15.-P.389-393.

152. Protozoon infections and intestinal permeability / H. Dagci, S. Ustun, M.S. Taneretal. // Acta Tropica. - 2002. - Vol. 81. - №. l. - p. 1-5.

153. Reinthaler F.F., Mascher F., Marth E. Blastocysts hominis-'mtQstmal parasite or commensal ? // Wiener medizinische wochenschrift. - 1988. - VI5. -P.545-552.

154. Sapierzynski R., Fabisiak M., Salamaszynska A. Several cases of Dirofilariosis accidentally diagnosed in dogs from Poland, including two PCR positive Dirofilaria repens cases // Polish Journal of Veterinary sciences Research.

- 2010. - Vol. 13. - № 3. - P. 545-547.

155. Seroprevalence of toxoplasmosis in Korean pregnant women / K.J. Song, J.C. Shin, H.J. Shin et al. // Korean Journal of Parasitology - 2005. - Vol. 43. - № 2. -P. 69-71.

156. Snounou G. Detection and identification of the four malaria parasite species infecting humans by PCR amplification // Methods Mol. Biol. - 1996. -V.50.-P. 263-291.

157. Stenzel D.J., Boreham P. F. L. Blastocysts hominis Revisited // Clinical Microbiol. Reviews. - 1996. - Vol.9. - №.4. - P. 563 - 583.

158. Studies on polynucleotides. XCVI. Repair replications of short synthetic DNA's as catalyzed by DNA polymerases / K. Kleppe, R. Ohtsuka, I. Molineux et al. //Journal of Molecular Biology. - 1971. - Vol. 1071. - № 56. - P. 341-361.

159. Study on the biological characteristic of Blastocysts hominis'. morphology, mode of reproduction and the relation to bacteria / J.Y. Qiao, X. Zhang, Z.C. Wei et al. // Journal of Hygiene Research. - 2006. - Vol. 35. - № 6. - P. 739-742.

160. Tan K.S.W., Singh M., Yap E.H. Recent advances in Blastocysts hominis research: hot spots in terra incognita // International journal of Parasitology.

- 2002. - Vol. 32. - № 7. - P. 789-804.

161. Tan K.S.W., Suresh K.G. Predominance of amoeboid forms of Blastocysts hominis in isolates from symptomatic patients II Parasitology Research.

- 2006. - Vol. 98. - JVb 3. - P. 189-193.

162. Watson J.D., Crick F.H. Molecular structure of nucleic acids. A structure for deoxyribose nucleic acid. 1953 // Annals of internal medicine. - 2003. - V.138. №. 7. - P.581-582.

163. Zierdt C.H., Rude W.S., Bull B.S. Protozoan characteristics of Blastocystis hominis II American journal of clinical pathology.- 1967. - V.48.- № 5. -P.495-501.

164. Zierdt C.H. Studies of Blastocystis hominis 11 Journal of protozoology. -1973.-Vol. 20.-№ l.-P. 114-121.

165. Zierdt C.H., Swan J.C. Generation time and growth rate of the human intestinal parasite Blastocystis hominis II Journal of protozoology. - 1981. - Vol. 28.

- № 4. - P. 483-485.

166. Zierdt C.H. Blastocystis hominis, a long-misunderstood intestinal pathogen // Parasitol. Taday.-1988. - V.4. - P. 15-19.

167. Zierdt C.H. Blastocystis hominis: Past and future // Clin. Microbiol. Rev.

- 1991.-V.4.-P. 61-79.

ПРИЛОЖЕНИЕ 1 Выделение ДНК сорбентным методом

Предложенный метод осуществляли следующим способом. Лизирующий раствор перед работой прогревали до полного растворения кристаллов при температуре 65 °С.

Отбирали необходимое количество одноразовых пробирок, маркировали, в каждую вносили по 300 мкл лизирующего раствора.

В пробирки с лизирующим раствором вносили по 100 мкл фекальной суспензии, используя наконечники с аэрозольным барьером.

Пробы тщательно перемешивали на вортексе, прогревали в течение 5 мин. при 65 °С и центрифугировали 5 сек. при 5 тыс. об/мин на микроцентрифуге. Для выделения ДНК использовали надосадочную жидкость.

Тщательно ресуспендировали сорбент на вортексе. В каждую пробирку отдельным наконечником добавляли 25 мкл ресуспендированного сорбента. Перемешивали на вортексе, ставили в штатив на 2 минуты.

На следующем этапе осаждали сорбент в пробирках центрифугированием при 5 тыс. об/мин в течение 30 секунд. Удаляли надосадочную жидкость, используя отдельный наконечник для каждой пробы.

В пробирки с пробами добавляли по 300 мкл раствора для отмывки №1, перемешивали на вортексе до полного ресуспендирования сорбента, осаждали сорбент универсальный центрифугированием при при 5 тыс. об/мин 30 сек. на микроцентрифуге. Удаляли надосадочную, используя отдельный наконечник для каждой пробы.

Добавляли в пробирки с пробами по 500 мкл раствора для отмывки №2, перемешивали на вортексе до полного ресуспендирования сорбента универсального, центрифугировали 30 сек. при 10 тыс. об/мин на микроцентрифуге. Удаляли надосадочную жидкость, используя отдельный наконечник для каждой пробы.

Отмывку раствором №2 проводили двукратно с полным удалением супернатанта.

Помещали пробирки в термостат (65°С на 10 мин) для подсушивания сорбента универсального. Далее в пробирки добавляли по 50 мкл ТЕ-буфера для элюции ДНК, перемешивали на вортексе и помещали в термостат при 65°С на 5 мин. Пробирки центрифугировали при 12 тыс. об/мин в течение 1 мин. на микроцентрифуге.

Надосадочную жидкость, содержащую ДНК, помещали в чистые промаркированные пробирки и хранили при температуре -20°С.

Выделение ДНК лизирующим методом с реагентом для преципитации

Перед работой прогревали лизирующий раствор до полного растворения осадка при температуре 65°С в течение 10 минут.

Отбирали необходимое количество одноразовых пробирок, маркировали, в каждую вносили по 300 мкл лизирующего раствора.

В пробирки с лизирующим раствором добавляли по 100 мкл фекальной суспензии, используя наконечники с аэрозольным барьером.

Плотно закрывали крышки и встряхивали на вортексе в течение 5 секунд.

Термостатировали пробирки при температуре 65°С в течение 15 минут, осаждали конденсат центрифугированием при 13 тыс. об/мин в течение 30 сек. при комнатной температуре.

В пробирки с пробами добавляли по 400 мкл реагента для преципитации, встряхивали на вортексе в течение 5 секунд.

Вновь центрифугировали пробирки при 13 тыс. об/мин в течение 15 минут при комнатной температуре.

Не задевая осадок, полностью удаляли надосадочную, используя отдельный наконечник для каждой пробы. Добавляли к осадку в каждую пробирку по 500 мкл промывочного раствора №1, закрывали крышки и перемешивали, 5 раз аккуратно перевернув пробирки.

Центрифугировали пробирки при 13 тыс. об/мин в течение 5 минут при комнатной температуре. Не задевая осадок, полностью удаляли надосадочную, используя отдельный наконечник для каждой пробы. Добавляли к осадку в каждую пробирку по 300 мкл промывочного раствора №2, закрывали крышки и перемешивали, 5 раз аккуратно перевернув пробирки.

Центрифугировали пробирки при 13 тыс. об/мин в течение 5 минут при комнатной температуре. Не задевая осадок, полностью удаляли надосадочную, используя отдельный наконечник для каждой пробы.

Высушивали осадок при температуре 65°С в течение 5 минут, оставляя крышки открытыми.

Далее в пробирки к осадку добавляли по 50 мкл буфера для растворения и помещали в термостат при 65°С на 10 мин. Встряхивали пробирки на вортексе в течение 5 секунд.

Осаждали конденсат центрифугированием при 13 тыс. об/мин в течение 30 сек. на микроцентрифуге.

Надосадочная жидкость, содержащая ДНК, помещалась в чистые промаркированные пробирки и хранилась при температуре -20°С не более 30 дней.

Выделение ДНК сорбентным методом с гуанидинтиоционатом

Метод основан на использовании сильного хаотропного агента -гуанидинтиоционата, входящего в состав комплекта «ПРОБА-ГС», произведенного научно-производственной фирмой ДНК-Технология. При использовании реагентов происходит лизис микроорганизма, одновременно инактивация нуклеазы и последующая сорбция ДНК на носителе (стеклянные шарики). Высвобождаемая нуклеиновая кислота под действием высоких концентраций гуанидинтиоционата адсорбируется на частицах двуокиси кремния, а белки разрушаются. Образовавшиеся комплексы нуклеиновая кислота/двуокись кремния осаждают центрифугированием. После отмывок в пробе остается ДНК, сорбированная на носителе, с которого она легко снимается с помощью элюирующего раствора. Для ПЦР-анализа использовали 5 мкл надосадочной жидкости. Обработанные пробы хранили при -20°С. Для проведения ПЦР брали 5 мкл препарата ДНК.