Разработка метода идентификации сырья и продуктов животного и растительного происхождения на основе SDS-электрофореза тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 16.00.06, кандидат биологических наук Горожанина, Елена Сергеевна

• Горожанина, Елена Сергеевна
• кандидат биологических наук
• 2007

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Горожанина, Елена Сергеевна

ВВЕДЕНИЕ.

1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР.

1.1. Техническое регулирование и подтверждение соответствия продукции.

1.2. Дополнительные источники белка, используемые при 12 изготовлении пищевых продуктов.

1.3. Аспекты фальсификации пищевых продуктов.

1.4. Методические приемы идентификации и контроля качества сырья и пищевых продуктов.

1.5. Метод электрофоретического разделения белков: принципы и использование в экспертизе пищевых продуктов.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Разработка метода идентификации сырья и продуктов животного и растительного происхождения на основе SDS-электрофореза»

Актуальность темы.

Проблема многостороннего изучения пищевых продуктов, в частности, их идентификация, является наиболее актуальной, поскольку современная технология их производства претерпела существенные изменения. Они касаются исходного сырья и вспомогательных материалов, используемых на всех этапах производства продукции. Это и новые технологии производства белковых продуктов из растительного сырья, а также введение в продовольственное сырье и продукты питания пищевых добавок искусственного происхождения.

В последние годы широко применяются белковые добавки животного (субпродукты, кровь и ее фракции, казеинаты, меланж и др.) и растительного (соевые белки, белки масличных культур) происхождения. Введение соевых белков позволяет стабилизировать функционально-технологические свойства мясного сырья, обогащает продукт полноценным белком и улучшает консистенцию, внешний вид и сочность готовых мясных изделий. Уменьшение потерь при термообработке и хранении, увеличение выхода готовой продукции при использовании соевого белка значительно снижает ее себестоимость. Избыточное содержание добавок растительного происхождения приводит к снижению качества мясных изделий, а низкая себестоимость становится причиной фальсификации продуктов.

Увеличение поступления на потребительский рынок различной по составу мясной продукции требует всестороннего комплексного контроля её качества, соответствия её потребительским требованиям и представленной технической документации.

Все продукты, поступающие на потребительский рынок, проходят проверку на безопасность и подтверждение соответствия. Идентификация продукции в свете закона «О техническом регулировании» является одним из главных и основных элементов сертификации, которая не должна «вводить в заблуждение потребителя».

Поэтому в практике при оценке качества мясного продукта возникает необходимость проведения идентификации его реального состава в соответствии с декларированными нормативными документами.

Целью подобной идентификации является определение и подтверждение подлинности конкретного вида и наименования товара, а также соответствие определенным требованиям или информации, указанной на этикетке или в товарно-сопроводительных документах.

Применение химических, физико-химических и биохимических методов позволяет получить только часть необходимой информации о качестве мясопродуктов.

В мировой практике для выяснения состава пищевых продуктов опробованы различные методы: иммуноферментного анализа, обладающего высокой специфичностью и чувствительностью, хроматографического анализа, обладающий большой чувствительностью и быстротой исполнения. Однако они не позволяют выявить замену мышечной ткани другими животными компонентами - легкими, печенью, выменем.

Ценную информацию о качестве продукта позволяет получить гистологический метод - метод прямого определения состава сырья. Микроскопические исследования позволяют судить как о составе продукта в целом, так и дифференцировать особенности тканевых и клеточных структур. Работа с биологическими объектами в пищевых продуктах имеет определенную специфику, поскольку исследованию подвергаются материалы после различных технологических воздействий. Гистологический метод трудоемок и требует специального оборудования, что вызывает определенные трудности его использования.

Проблема видовой идентификации может быть решена с использованием современных электрофоретических методов. Эти методы давно используются в научных исследованиях. Однако для применения их с целью экспертизы пищевых продуктов и внедрения в практику экспертных лабораторий необходима разработка и стандартизация оптимальных условий экстракции белков из нативных и термообработанных продуктов, использование определенных видов гелей и разработка условий проведения процесса электрофореза.

Это направление весьма перспективно в практике ветеринарной санитарии и экологии и дает возможность наиболее качественного анализа продуктов питания. Решение этой проблемы имеет научное и практическое значение.

Цель настоящей работы - разработка метода идентификации сырья и продуктов животного и растительного происхождения на основе SDS-электрофореза.

Задачи исследования:

1. Разработка оптимальных способов экстракции белков из нативных и термообработанных пищевых продуктов для последующего анализа их электрофоретическим методом.

2. Разработка метода видовой идентификации по выявлению видоспецифических маркерных белковых зон на электрофоретических спектрах.

3. Разработка методики количественной оценки компонентов смешанных фаршей.

4. Разработка метода качественного и количественного определения сои в смешанных фаршах.

5. Идентификация сои в составе колбасных изделий.

6. Идентификация сои в составе стерилизованных мясорастительных консервов на основе ДНК-диагностики.

7. Разработка схемы анализа видовой принадлежности продуктов животного и растительного происхождения.

8. Проведение лабораторных мониторинговых исследований пищевой продукции с использованием разработанных методов.

Научная новизна:

На основе использования электрофореза в присутствии ионного детергента додецилсульфата натрия (SDS) разработан способ анализа мясных продуктов, позволяющий проводить определение видовой принадлежности белка, количественно оценивать составляющие многокомпонентного фарша, в том числе белковые добавки растительного происхождения.

Определены характерные видоспецифические маркерные белковые зоны, по которым может быть проведена идентификация видовой принадлежности белка в составе пищевого продукта. Создана коллекция электрофореграмм белков животного и растительного происхождения.

Проведена адаптация метода полимеразно-цепной реакции с детекцией гибридизационно-иммуноферментным анализом (ПЦР-ГИФА) для анализа мясных и мясорастительных консервов с целью идентификации в них сои.

Практическая ценность.

Разработанные методы расширяют возможности ветеринарных и сертификационных лабораторий и позволяют определять видовую принадлежность сырья, выявлять наличие белковых добавок животного и растительного происхождения в многокомпонентных нативных и термообработанных пищевых продуктах и оценивать их количество.

Результаты работы используются при проведении исследований пищевых продуктов в Главном экспертно-аналитическом центре «СОЭКС» Автономной некоммерческой организации «Союзэкспертиза» Торгово-промышленной палаты РФ.

На основании результатов исследований разработаны:

- методические рекомендации «Определение видового состава продуктов методом SDS-электрофореза» (утверждены отделением ветеринарной медицины РАСХН 19.01.2007 г.),

- методические рекомендации «Определение видового состава продуктов методом SDS-электрофореза» (утверждены Торгово-промышленной палатой РФ 10.04.2007 г.)

Апробация работы. Материалы диссертации доложены и обсуждены на:

- Международной конференции «Актуальные проблемы ветеринарной патологии и морфологии животных», посвященной 100-летию со дня рождения профессора Авророва А. А. (Воронеж, 2006 г.)

- заседании Ученого совета ГНУ ВНИИВСГЭ (2007 г.)

Публикации. Результаты исследований отражены в 8 научных статьях.

Положения, выносимые на защиту.

1. Разработка оптимальных способов экстракции белков из нативных и термообработанных пищевых продуктов для последующего анализа их электрофоретическими методами.

2. Оптимизация электрофоретического разделения белков с использованием различных гелей с целью высокой степени воспроизводимости.

3. Идентификация белков животного и растительного происхождения по видоспецифическим маркерным белковым зонам.

4. Разработка метода количественного определения компонентов в многокомпонентных пищевых системах с использованием метода SDS-электрофореза в сочетании с денситометрией.

5. Идентификация сои в составе стерилизованных мясорастительных консервов на основе ДНК-диагностики.

6. Проведение мониторинговых исследований по видовой идентификации и выявлению фальсифицирующих примесей в пищевых продуктах.

1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР

Заключение диссертации по теме «Ветеринарная санитария, экология, зоогигиена и ветеринарно-санитарная экспертиза», Горожанина, Елена Сергеевна

ВЫВОДЫ:

1. Использование метода SDS-электрофореза позволяет с высокой точностью идентифицировать видовую принадлежность белков животного и растительного происхождения в сырье и термообработанных колбасных изделиях.

2. Подобраные оптимальные способы экстракции белков из нативных и термообработанных пищевых продуктов (трис-HCI буфер рН 8,0, содержащий 1% додецилсульфата и 5% В-меркаптоэтанола) обеспечивают оптимальную экстракцию белков, необходимую для анализа в системе PhastSystem. Наилучшее разделение достигается с использованием гелей с градиентом 10-15 при апликации образцов вблизи катода.

3. На основании метода SDS-электрофореза в сочетании с денситометрией разработан способ качественной оценки различных составляющих в многокомпонентных пищевых продуктах (фаршевые изделия и термообработанные пищевые продукты) по выявлению на электрофореграмме видоспецифических маркерных белковых зон, по которым может быть проведена идентификация видовой принадлежности белка в составе пищевого продукта.

4. Разработанные модифицированные методики качественного и количественного анализа белков позволяют определять сою в многокомпонентных пищевых системах.

5. Для определения наличия соевых добавок в стерилизованных мясных и мясорастительных консервах показана необходимость использования ПЦР-метода.

6. На основании полученных результатов предложена последовательная система методов идентификации видовой принадлежности продуктов животного и растительного происхождения на основе SDS-электрофореза, изоэлектрофокусировки и ПЦР.

7. Мониторинговые исследования пищевой продукции с применением разработанных методов исследования видовой идентификации показали возможность выявления недекларированных компонентов растительного и животного происхожденияих.

8. Разработанные методы могут быть использованы для скрининговых тестов и количественного определения отдельных составляющих в многокомпонентных смесях животного и растительного происхождения.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Горожанина, Елена Сергеевна, 2007 год

1. Аксюк И.Н., Пятницкая И.Н., Сомин В.И. Химический состав новых источников пищи и их биологическая ценность. Журнал всесоюзного химического общества им. Д.И. Менделеева. - 1978, Т. 23, №4, с. 435-442.

2. Александрова Н.А. и др. Методы оценки качества мяса и мясопродуктов за рубежом // М., 1997, с. 156.

3. Антипова Л.В., Глотова И.А. Основы рационального использования вторичного коллагенсодержащего сырья мясной промышленности. -Воронеж. ВГТА, 1997, 37 с.

4. Антипова Л.В., Глотова И.А., Рогов И.А. Методы исследования мяса и мясных продуктов. М.: Колос, 2001, с.31.

5. Ахмичева О.В. Использование энзимов при производстве мясных изделий. // Мясная индустрия, 2005, №1, с. 35.

6. Алехина Л.В., Андреенко В.И., Ивашов В.И. Современные методы анализа качества мяса и мясопродуктов // Мясная промышленность, АгроНИИТЭИММП, М„ 1991, с. 35.

7. Базарнова Ю.Г., Соскин В.И. Повышение пищевой ценности мясных продуктов. // Мясная индустрия, 2005, №2, с. 42-43.

8. Белова В.Ю. Пищевые ингредиенты забота о качестве. // Мясная индустрия, 2005, №1, с. 69-72.

9. Браудо Е.Е. Растительный белок: новые перспективы / Под ред. Е.Е. Браудо М.: Пищепромиздат, 2000, 27 с.

10. Бутко М.П., Шапкина Л.П. Санитарно-гигиенические проблемы экспертизы мяса пернатой дичи // Сб. трудов 7-го Всероссийского конгресса «Здоровое питание населения России» Москва, 2003, с. 90.

11. Вильфрид Штельтер, Николаев А.С. Представляем новые комплексные пищевые ингредиенты. // Мясная индустрия, 2005, №1, с. 41.

12. Витт С.В., Сапоровская М.Б., Беликов В.Н. Об анализе аминокислот методом газо-жидкосткой хроматографии // Журнал аналитической химии, 1966, т. 21, №2, с. 227-231.

13. Галкин А.В., Комаров В.Н., Иванова Е.А. Иммуноферментный метод экспресс контроля продовольственного сырья и пищевых продуктов на содержание потенциально опасных химических соединений. // Хранение и переработка сельхозсырья., №5, 1998, с. 21-24.

14. Горовой В.И., Есейчик В.И., Хиль Г.Н. Основные направления использования вторичных ресурсов на предприятиях пищевой промышленности. В: Пищевая промышленность, Агро НИИТЭИММП, М., 1987, с. 14-17.

15. ГОСТ 23392-78 Мясо. Методы химического и микроскопического анализа свежести.

16. ГОСТ 23481-79 Мясо птицы. Метод гистологического анализа.

17. ГОСТ 25011-81 Мясо и мясные продукты. Методы определения белка.

18. ГОСТ 7269-79 Мясо. Методы отбора образцов и органолептические методы определения свежести.

19. ГОСТ Р 50453-92 ИСО 937-78 Мясо и мясные продукты. Определение содержания азота (арбитражный метод).

20. Гутник Б.Е., Сметанина Л.Б. и др. Соевая мука стабильного качества для мясных продуктов. // Мясная индустрия, 2005, №2, с. 63-65.

21. Дэвени Т., Гергей Я. Аминокислоты, пептиды и белки. М., Мир, 1976, 364 с.

22. Долгов В.А., Лавина С.А. Методические аспекты оценки качества и безопасности пищевой продукции и продовольственного сырья // Сб.трудов 7-го всероссийского конгресса «Здоровое питание населения России» Москва, 2003, с. 162.

23. Донченко J1.B., Надыкта В.Д. Безопасность пищевого сырья и продуктов питания М., Пищепромиздат, 1999, с. 352.

24. Донченко J1.B., Надыкта В.Д. Безопасность пищевой продукции // М., Пищепромиздат, 2001, с.525.

25. Доценко С.М., Скрипко О.В. Парфенова С.Н. Полуфабрикаты из мясорастительного фарша. // Мясная индустрия, 2005, №2, с. 28-30.

26. Жаринов А.И., Хлебников И.В., Мадалиев И.К. Вторичное белоксодержащее сырье: способы обработки и использования. // Мясная промышленность, 1993, №2, с. 22-24.

27. Журавская Н.К., Алехина J1.T., Опряшенкова J1.M. Исследование и контроль качества мяса и мясопродуктов // М., Агропромиздат, 1985, с. 296.

28. Заяс Ю.Ф. Качество мяса и мясопродуктов М., Легкая и пищевая промышленность, 1981, с. 312.

29. Красуля О.Н., Краснов А.Е. и др. Моделирование рецептур мясных продуктов в условиях информационной неопределенности. // Мясная индустрия, 2005, №1, с.43-46.

30. Икач М., Маликова В.И., Гутник Б.Е. и др. Рекомендации по применению соевой муки нового поколения компании «Сояпротеин». // Мясная индустрия, 2005, №1, с. 35.

31. Кудряшов J1.C., Грикшас, Орлова Г.В. Перспективы использования сыворотки в реструктурированных изделиях. / Мясная индустрия, 2005, №2, с.20-22.

32. Кузнецова Т.Г. Оценка морфологических свойств мясного сырья и колбасных изделий по микроструктурным показателям // М., Автореферат диссертации кандидата ветеринарных наук, 1997.

33. Кузнецова Т.Г., Белоусов А.А. и др. Микроструктурные изменения свинины при биотехнологических воздействиях. // Мясная индустрия, 2001, №6, с. 33-35.

34. Лабораторные исследования в ветеринарии: химико-токсикологические методы. Под ред. Антонова Б.И. // М.: Агропромиздат, 1989, с. 319.

35. Ленинджер А. Биохимия, М., Мир, 1974, с.94-99.

36. Лори Т.А. Наука о мясе // М., Пищевая промышленность, 1973, с.198.

37. Лугас Э.В., Ки Чун Ри Руководство по переработке и использованию сои. М.: Колос, 2001, 31 с.

38. Лушников К.В., Патрушев М.В., Возняк М.В., Возняк В.М. Использование иммуноферментного анализа для определения генетически-модифицированных источников в пищевой продукции. // Партнеры и конкуренты, 2004, № 9 , с. 36-39.

39. Маурер Г.Р. Диск-электрофорез. М., Мир, 1969, 247 с.

40. Николаева М.А., Лычников Д.С., Неверов А.Н. Идентификация и фальсификация пищевых продуктов М., Экономика, 1996, с. 84-95.

41. Остерман М.Б. Методы исследования белков и нуклеиновых кислот. М., Наука, 1981, 288 с.

42. Остерман М.Б. Исследование биологических макромолекул электрофокусированием, иммуноэлектрофорезом и радиоизотопными методами М., Наука, 1983, с. 4-45.

43. Переплетчик P.P. Замораживание, упаковка и хранение мороженой рыбы. ППИ, М„ 1957, с. 12-15.

44. Писарева В.М. Электрофоретический метод в анализе пищевых продуктов // Вопросы питания, 1998, №3, с. 41-42.

45. Писарева В.М. Способы выделения соевого белка в колбасныхизделиях //Вопросы питания, 1998,№4, с. 43-44.

46. Писарева В.М. Идентификация белков животного происхождения в пищевых продуктах электрофоретическим методом // Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук. Москва 1999.

47. Покровский А.А. Некоторые проблемы биохимии питания. // Журнал Всесоюзного химического общества им. Д.И. Менделеева, 1965, Т. 10, №3, с. 247-256.

48. Попелло И.А., Гурова Н.В. О роли нативности соевых белков при оценке функционально-технологических свойств белковых препаратов. // Мясная индустрия. 1999, №5, с. 12-13.

49. Производственно-технический контроль и методы оценки качества мяса и птицепродуктов. Под ред. Горбатова В.М. М., «Пищевая промышленность», 1974, с. 274.

50. Руководство по методам анализа качества и безопасности пищевых продуктов. Под редакцией Скурихина И.М., Тутеляна В.А. М., Изд. «Брандес», « Медицина», 1998, с. 232.

51. Румянцева Г.Н., Осадько М.И. Свойства белков сои и гороха, полученных биотехнологическим способом. // Мясная индустрия, 2005, №2, с. 44-45.

52. Серкл С.Д., Смит А.К. Соевые бобы: переработка и продукты. В.: «Источники пищевого белка», М.: Колос, 1979, с. 67-87.

53. Скалинский Е.И., Белоусов А.А. Микроструктура мяса. // Пищевая промышленность, 1978, с. 155-175.

54. Сметанин Н.А. Основные показатели мирового рыболовства. // Рыбное хозяйство, 1967, №10, с. 69-74.

55. Соколов А А. Физико-химические и биохимические основы технологии мясопродуктов. М.: Пищевая промышленность, 1965, 490 с.

56. Стрекозов Н.И., Фомичев Ю.П., Горбунов В.И., Никанова JI.A., Маркелова В.Н., Веротченко М.А., Шайдуллина Р.Г., Кошелева Г.Н., Чернушенко В.К., Панкина Г.В., Поповец Г.И., Кораблина Л.В., Гуденко

57. Н.Д., Пышечкин Н.П. Сертификация и требования к качеству продукции агропромышленного комплекса России Дубровицы, 1998, с. 357.

58. Тертон М., Бангхем Д.Р., Колкотт К.А. и др. Новые методы иммуноанализа. Пер. санг. - М.: Мир, 1991, 280 с.

59. Толстогузов В.Б. Искусственные продукты питания. М.: Наука, 1979, 232 с.

60. Толстогузов В.Б. Новые формы белковой пищи. М.: Агропромиздат, 1987, 303 с.

61. Хвыля С.И., Авилов В.В., Кузнецова Т.Г. Практическое применение гистологических методов анализа // Мясная промышленность, 1994, №6, с. 911.

62. Хубертус Вагнер. Химия мяса как пищевого продукта. // Новое мясное дело, 2005, №1, с. 48-50.

63. Шляпников С.В., Карпейский М.Я. и др. Применение метода газожидкостной хроматографии для количественного анализа аминокислот. // Биохимия, 1965, т. 30, №3, с. 457-462.

64. Araki Н. Et al. Histochemical properties of muscle fiber in breiler chickens // Jap. Soc of Sci Fish. 1993, v.34, № 2, p. 137-144.

65. Baldwin A.R. Summary of the world soy protein conference. J.American Chem. Oil Soc., vol. 48, 1971, p. 484.

66. Beisiegel U. Protein blotting. // Electrophoresis, №7, 1986, p. 1-18.

67. Bennet H.S. The structure and functional muscle // Academic Press, New York, v. 1, 1960, p. 137.

68. Blay K., Darbe A. Getting of flu amino acids for gas chromatography. // Biochemical J., v. 60, 1964, № 7, p. 8327-8333.

69. Blay K., Darbe A. Some problems quantity aminoacid analysis by gas chromatography. // Chem. Analyt., v. 47, 1965, №12, p. 631-633.

70. Codex Alimentarius // Vol. 10, FAO, WHO, 1991, 223 p.

71. Codex Alimentarius Volume Thirteen. Methods of analysis and sampling // Vol. 13, FAO, WHO, 1994, 134 p.

72. Codex Alimentarius Volume Ten. Meat and meat products including soups and broths // Vol. 10, FAO, WHO, 1994, 222 p.

73. Cruickshank P. A, Sheehan J.C. The gas chromatography of methyl ether from amino acids. // Analyt. Chem., v. 36, 1964, №7, p. 1191-1197.

74. FAO-WHO. Amino acid content of food and biological date on protein. -//Nutritional Stud., 1970, №24, p. 24-32.

75. Fleming I., Lumbley J. Validation of new techniques for the analysis of foods // Food Sciens and technology today, v. 9., № 2, 1995, p. 84-85.

76. Gershoni J.M., Palade G.E. Electrophoretic transfer of Proteins from sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gels to positively charged membrane filter. - Anal. Biochem., v. 124, 1982, p. 396-405.

77. Gershoni J.M., Palade G.E. Protein blotting: Principles and applications. //Anal. Biochem., v.131, 1983, p. 1-15.

78. Hauri H.P., Bucher K. Immunoblotting with monoclonal antibodies: Importance of the blocking solution. Anal. Biochem., v. 159, 1986, p.386-389.

79. Hermansson A.M., Akesson C. Functional properties of added proteins correlated with properties of meat system. // J. Food Sci., v. 40, 1975, p. 595-610.

80. Hermansson A.M. Physico-chemical aspects of soy proteins structure formation. // J.Texture Stud., 1978, №9, p. 33-37

81. Hoffmann K. Identification and determination of meat and foreign proteins by means of dodecylsulfat poliacrylamid gel electrophoresis // Ann. Nutr. Alim., v. 31, № 2, 1997, p. 207-215.

82. Hoffmann K., Penny I.T. Methode zur identifizierung und quantitatizen Bestimmund von Fleisch und Fremdeiness mit Hilfe de SDS. Polyacrylamid -Electrophorese anf Flachgelen. // Fleischwirtschafi, v.53, 1973, p. 252-254.

83. ISO 9001. Quality systems models for quality assurance in design, 1987, pp. 6-8.

84. Jannsen E. Method adapted to PhastSystem // Z. Lebensm. Unterrs. Forsh.-1986.-v. 182,-p.479-483.

85. King N.L. Kurt L. Analysis of raw beef samples for adulterant meat species by enzyme staining of isoelectric focusing gels // J. Food Sci.,—1982.-v.47, p. 1608-1612.

86. Kofoth M. Aktuelles aus der international Fleischforschung // Fleischwirtschaft, 1999, № 8, p. 68-69.

87. Laemmli U.K. Cleavade of structural proteins during the assembly of the head ofbacteriofage TH. // Nature, v. 227, 1970, p. 680.

88. Lamaire W.A. Food in the year 2000. Food Ingineering, v. 90,1985, № 5, p. 34-38.

89. Ludke H., Bargholz J., Leiterer M. Wertbestimmende und Einige toxische Inhaltsstoffe in Fleisch und Verarbeitungsprodukten von Pute und Schwein. Schr.-R // Verb. Dt. Landw. Unters. Forsch. -Anst., Darmstadt, 1993, № 37, S. 669672.

90. Marchylo B.A. Fast gorizontal sodium dodecil sulphat gradient polyacrilamide gel electrophoresis for rapid wheat cultivar identification and analysis of high molecular weight glutenin subunits. // Cereal Chem., 1989, v. 66, № 3, p. 186-192.

91. Mattil F. Karl. Compositional, nutritional and functional properties, and quality criteria of soy protein concentrates and soy protein isolates. J. American Oil Chem. Soc., v. 51, 1974, p. 81 A.

92. Meyer J.A., Brown W.L. et al. Effects of emulsifiers on stability of sausage emulsions. // Food Techol., v.8 1964, p. 1796-1800.

93. Moio L., DiLuccia A., Addeo F. Fast isoelectric focusing of milk proteins on small ultrathin polyacrylamide gel containing urea // Electrophoresis. 1989, v.10, p.535-539.

94. Moio L., Sasso M.L., Chianese L., Addeo F. Rapid detection of bovin milk in ovine, caprine and water buffalo milk or cheese by gel isoelectric focusing on PhastSystem. // Ital. J. Food Sci., 1990, v.3, p. 71-176.

95. Moor S., Stein W.H. Detection of protein composition by colon chromatography. // J. Biol. Chem., v. 211, 1954. p. 893

96. Morei M.H. Separation of durum wheat proteins by ultrathin layer isoelectric focusing. // Electrophoresis, 1990, v.l 1, p. 392-399.

97. New analytical system to improve food quality management // Int. Labmate, 2001, 25, № 7, p. 36.

98. Patterson R.M., Whittaker R.H., Spencer T.L. Improved species identification of raw meat by double sandwich enzyme-linked immunosorbent assay. // J. Sci. Food Agric., vol. 35, 1984, p. 1018-1023.

99. Righetty P.G., Drysdale J.W. Isoelectric focusing in gels. J. Chromatogr., v.98, 1974, p. 271-321.

100. Rehben H. Electrophoretic techniques for species identification of fichery products. // Z, Lebensm. Unters Forsch., 1990, v. 191, p. 1-10.

101. Ronald G. Berger, Richard P. Magean et al. Detection of Poultry and Pork in Cooked and Canned Meat Foods by Enzyme-linlked Immunosorbent Assays. //J. Assoc. off Anal. Chem, vol. 71, №2, 1988, p. 406-409.

102. Sarivis C.A. Improved blocking of monospecific antibody binding sites on nitrocellulose membranes. // Electrophoresis, №5, 1984, p. 54-55.

103. Seymour C. Electrophoresis technology: food and reverage analysis. // Food Tech. Europe, 1993, Sept/Nov., p. 127-152.

104. Scorpes R.K., Penny I.F. Subunit sizes of muscle proteins as determined by sodium dodecylsulfat gel electroforesis. // Biochim. Biophys. Alta, 1979, p. 409-415.

105. Towbin H. et al. Electrophoretic transfer of proteins from polyacrylamide gels to nitrocellulose sheets: Procedure and some applications. // Proc. Natl. Acad., v. 76, 1979, p. 4350-4354.

106. Van-Heekken D.L., Thompson M.P. Application of PhastSystem to the resolution of bovine mill proteins on urea-polyacrylamide gel electrophoresis. // J. Dairy Sci., 1992, v.75, p. 204-210.

107. Weiss H., Postel J., Gorg H. Barley cultivar discrimination: 2. Sodium dodecyl sulphate-polyacrylamide gel electrophoresis and isoeletric focusing with immobilized pH gradients. Electrophoresis, 1991, v.12, p. 323-338.

108. Williams K.W., Soderberg L. A carrier ampholyte for isoelectric focusing. // International Laboratory, № 96, 1979, h. 263-278.

109. Wilson C.M. Studies and critique of Amido Black 10B, Coomassie Blue R and Fast Green FCF as stain for proteins after polyacrylamide gel electrophoresis. // Anal. Biochem., № 96, 1979, p. 263-278

110. Winter L. M. The identification of amino asids by gas chromatography. // Gas chromatogr., v. 2, № 1, 1964, p. I -6.

111. Wolf W.I. Soybean proteins: their production, properties and food uses. // J. Amer. Oil Chem. Soc., 1971, p. 484.

112. Yman I. M. Meat and fish species identification by isoelectric focusing // Food laboratory news, v.6, №2, 1990, p. 28-31.

113. СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ

114. Горожанина Е.С. / Идентификация белковых добавок в составеколбасных изделий // Практик: научно-практический информационный журн. / Учредитель и издатель НПО «Петролазер»/ двухмес., 2005, № 7-8, с. 4-7, 5000 экз.

115. Тихомирова Т.А., Горожанина Е.С. / Проблемы мониторинга ГМО: практика лаборатории // Методы оценки соответствия: научно-практический журн./ Учредитель и издатель ООО «РИА «Стандарты и качество»/ ежемес. ISSN 1990-7850, 2006, №10(4), с. 17-19, 1500 экз.

116. Горожанина Е.С., Нохрина Н.В., Крючкова Ю.Г. /

117. Экспериментальные подходы к оценке безопасности и качества мясной продукции // Мясные технологии: журн./ Издатель: ЗАО «Отраслевые ведомости», 2006, №11, с. 4-6,4000 экз.

118. РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ НАУК Отделение ветеринарной медицины1. УТВЕРЖДАЮ

119. Академик-секретарь отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемииr^XU m1. К^ЬШщг/.о1. A.M. Смирнов1. СЗ 200 ^г.

120. МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ по видовой идентификации белков животного и растительного происхождения методом SDS-электрофореза1. Москва 2007 г.

121. АНО «Союзэкспертиза» ТПП РФ Л^^^^В.А. Голицын1. О » a h-jUu+A- 2007 г.1. МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИпо определению видового состава продуктов методом SDS-электрофореза1. Москва 2007 г.s s 31. Общие положения.

122. Для определения количественного состава многокомпонентных смесей проводят денситометрию полученных электрофореграмм.

123. Методика идентификации белков животного и растительного происхождения методом SDS-электрофореза.

124. Центрифугаты наносят на гребенку с шестью ячейками по 3,5 мкл каждого образца. Использование гребенки с большим количеством ячеек усложняет количественный обсчет результатов.

125. Для определения доли каждого компонента в многокомпонентном фарше (мясном, мясорастительном) проводят денситометрию электрофореграмм экстрактов фарша и индивидуальных его компонентов с использованием лазерного сканирующего денситометра.

126. По соотношению пиков маркерных видоспецифических белков виндивидуальных образцах мяса и в образцах смешанных фаршей можно вычислить долю каждого компонента (в процентах) по формуле: С=В/А х 100%, где:

127. За результат принимается среднее арифметическое значение определений, выполненных для 3-х параллельных электрофореграмм исследуемого продукта.