Разработка культуральной инактивированной вакцины против вирусной лейкемии кошек тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 16.00.03, кандидат ветеринарных наук Раев, Сергей Алексеевич

• Раев, Сергей Алексеевич
• кандидат ветеринарных наук
• 2009

Оглавление диссертации кандидат ветеринарных наук Раев, Сергей Алексеевич

Оглавление.

Список используемых сокращений.

1. Введение.

2. Обзор литературы.

2.1. Характеристика возбудителя вирусной лейкемии кошек

2.1.1 История.

2.1.2 Таксономия и классификация возбудителя.

2.1.3 Вирион и структура генома.

2.2. Эпизоотология заболевания.

2.3. Особенности патогенеза.

2.4. Клинические симптомы.

2.5. Методы диагностики вирусной лейкемии кошек.

2.6. Лечение.

2.7. Средства специфической профилактики.

3. Собственные исследования.

3.1 Материалы и методы.

3.1.1 Вирусы, культуры клеток и питательные среды.

3.1.2 Определение количества и жизнеспособности клеток.

3.1.3 Криоконсервация культуры клеток.

3.1.4 Инактивация вируса.

3.1.5 Адъюванты.

3.1.6 Определение стерильности.

3.1.7 Экспериментальные животные.

3.1.8 Выделение РНК.•.

3.1.9 Амплификация и клонирование гена gp70 в E.coli.

3.1.10 Приготовление питательной среды LB и L-arapa.

3.1.11 Получение компетентных клеток.

3.1.12 Трансформация компетентных клеток E.coli.

3.1.13 Наращивание.

3.1.14 Индукция.

3.1.15 Сыворотки.

3.1.16 Очистка рекомбинантного белка rgp70 методом металло-хелатной аффинной хроматографии (МХАХ).

3.1.17 Определение концентрации белка.

3.1.18 Оценка иммунологической активности белка rgp70.

3.1.19 Учет и интерпретация результатов ИФА.

3.1.20 Электрофорез в полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия (ПААГ-ДСН).

3.1.21 Статистическая обработка результатов.

3.2 Результаты собственных исследований.

3.2.1 Изучение условий культивирования культуры клеток F422.

3.2.2 Инактивация вируса.

3.2.3 Определение антигенной активности культуральной инактивированной вакцины против ВЛК на лабораторных животных.

3.2.4 Определение антигенной активности культуральной инактивированной вакцины против ВЛК на кошках.

3.2.5 Изготовление и контроль опытных серий вакцины против вирусной лейкемии кошек.

3.2.6 Получение и характеристика рекомбинантного оболочечного гликопротеина ВЖ gp70 (rgp70).

3.2.7 Разработка тест-системы по определению антител к оболочечному гликопротеину вируса лейкемии кошек gp70.

4. Обсуждение.

5. Выводы.

6. Практические предложения.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Разработка культуральной инактивированной вакцины против вирусной лейкемии кошек»

1.1.Актуальность работы. Вирус лейкемии кошек (Feline leukaemia virus, FeLV или BJIK) - РНК-содержащий вирус семейства Retroviridae, является одним из наиболее распространенных возбудителей инфекционных заболеваний кошек. В США, где система по обнаружению и изоляции инфицированных животных, а также профилактической вакцинации кошек действует в течение 20 лет, распространенность данного заболевания (среди клинически здоровых животных) составляет 2%. У больных особей, и кошек, принадлежащих к группе риска, эта цифра варьируется от 6 до 33% (Hartmann С., 2006). Инфицированность животных вирусом лейкемии в Центрально-Черноземном районе Российской Федерации достигает 12,6% (Федосов Д.В., 2007). В связи с этим профилактика вирусной лейкемии кошек является актуальной проблемой.

Основной путь передачи вируса - горизонтальный, также возможно трансплацентарное инфицирование плода. В организме животных вирус вызывает дегенеративные, пролиферативные и неопластические процессы в клетках гемопоэтического ряда. У персистентно инфицированных кошек это приводит к лейкемии, фибросаркомам или, чаще всего, к супрессии иммунной системы животного, на фоне которой проявляются оппортунистические инфекции (Hardy W.D., 1980).

Основной метод контроля за распространением инфекции, вызываемой ВЖ - выявление и изоляция инфицированных животных (Hartmann С., 2006), а также профилактическая вакцинация кошек. Вакцинированные кошки, у которых происходит синтез вируснейтрализующих антител к поверхностному гликопротеину gp70 ВЛК подгруппы А, устойчивы к заражению вирулентным штаммом вируса (Russell Р.Н., 1978).

За рубежом для специфической профилактики вирусной лейкемии кошек разработано несколько видов вакцин, причем установлено, что культуральная инактивированная и рекомбинантная субъединичная вакцины обладают наибольшей эффективностью (Sparkes А.Н., 1997).

1.2.Цель и задачи исследований. Целью настоящей работы является разработка культуральной инактивированной вакцины против вирусной лейкемии кошек и методов определения ее антигенной активности.

Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи:

1. Оптимизировать условия культивирования культуры клеток F422 для получения максимального выхода поверхностного гликопротеина gp70 ВЛК.

2. Отработать условия инактивации культурального ВЛК.

3.Приготовить экспериментальные серии культуральной инактивированной вакцины против вирусной лейкемии кошек.

4. Изучить безвредность, реактогенность и антигенную активность экспериментальных серий4 культуральной* инактивированной вакцины против ВЛК на кошках и лабораторных животных.

5. Определить оптимальную иммунизирующую дозу, способ и схему введения культуральной инактивированной вакцины для получения напряженного и длительного иммунитета к ВЛК у иммунизированных животных.

6. Получить рекомбинантный белок rgp70 вируса лейкемии кошек и использовать его в иммуноферментном анализе для определения уровня антител к gp70 ВЛК в сыворотке крови кошек.

1.3.Научная новизна. Изысканы оптимальные условия культивирования перевиваемой хронически инфицированной вирусом лейкемии кошек культуры клеток и определены оптимальные условия его накопления.

Отработаны режимы инактивации вируса.

Разработана схема изготовления культуральной инактивированной вакцины против ВЛК.

Определена безвредность и антигенная активность культуральной инактивированной вакцины против ВЛК на кроликах и кошках.

Изучено влияние хранения на антигенную активность вакцины.

Подобраны праймеры для амплификации гена gp70.

Получен и охарактеризован рекомбинантный оболочечный гликопротеин вируса лейкемии кошек (rgp70).

Разработана иммуноферментная тест-система для выявления вирус-специфических антител к оболочечному гликопротеину gp70 ВЛК в сыворотке крови кошек.

1.4.Практическая ценность работы. Разработана безвредная и эффективная инактивированная вакцина против вирусной лейкемии кошек.

Научно обоснованы принципы изготовления и.биологического контроля инактивированной вакцины против вирусной лейкемии кошек.

Экспериментально установлена иммунизирующая доза препарата, показана возможность оценки антигенной активности на лабораторных и естественно-восприимчивых животных.

Разработана нормативная документация на культуральную инактивированную вакцину против вирусной лейкемии кошек.

Разработана иммуноферментная тест-система для определения уровня антител к gp70 BJIK в сыворотке крови кошек.

1.5,Основные положения, выносимые на защиту. Полученные экспериментальные данные позволяют вынести на защиту следующие основные положения: схема изготовления и методы биологического контроля вакцины против вирусной лейкемии кошек,

- результаты исследований по изучению антигенных свойств культуральной инактивированной вакцины против ВЛК на лабораторных и естественно-восприимчивых животных,

- разработка иммуноферментной тест-системы по определению уровня антител к оболочечному гликопротеину gp70 BJIK в сыворотке крови кошек.

1.6.Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на: 6-ой Международной конференции студентов и молодых ученых «Живые системы и биологическая безопасность населения» (2007); 7-ой Международной конференции студентов и молодых ученых «Живые системы и биологическая безопасность населения» (2008); 2-ой ежегодной конференции молодых ученых ГУ НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского РАМН; заседании Ученого совета МГУПБ (2009), межлабораторном совещании МГУПБ.

1.7.Публикация результатов исследований. По теме диссертации опубликовано 5 печатных работ.

1.8,Объем и структура работы. Работа выполнена на базе НПО «НАРВАК». Диссертация изложена на 102 страницах машинописного текста и включает: введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение результатов, выводы, практические предложения и список литературы. Работа иллюстрирована 8 таблицами и 8 рисунками. Список использованной литературы включает 135 отечественных и зарубежных авторов.

Заключение диссертации по теме «Ветеринарная эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология», Раев, Сергей Алексеевич

5. ВЫВОДЫ

1 .Оптимизировании параметры выращивания хронически инфицированной вирусом лейкемии кошек культуры клеток лимфомы кошки. Установлено, что максимальное накопление оболочечного гликопротеина gp70 ВЛК наблюдается при культивировании культуры клеток F422 в роллерах с использованием в качестве питательной среды

RPMI 1640 с 10% фетальной сыворотки крупного рогатого скота и j добавлением 100 ЕД пенициллина и 100 jxg стрептомицина на 1см среды, при этом концентрация клеток достигает максимума через 72 часа культивирования (1-1,2x106), а титр оболочечного гликопротеина gp70 ВЛК в ИФА - 1:32.

2. Отработаны условия инактивации ВЛК формалином с целью получения безопасных и антигенно активных препаратов. Формалин в конечной концентрации 0,3% полностью инактивирует вирус лейкемии кошек в течение 72 часов при 37°С.

3. Разработан способ изготовления инактивированной вакцины против ВЛК, обеспечивающий изготовление препарата со стабильными значениями показателей качества.

4. Определена безвредность, реактогенность и антигенная активность экспериментальных серий инактивированной вакцины против ВЛК на кроликах и кошках. Иммунизация кошек различными вариантами, вакцины против ВЛК показало, что вакцина, содержащая в качестве адъюванта Montanide Gel в конечной концентрации 20% при двукратном подкожном или внутримышечном введении, является, безвредной и ареактогенной и вызывает у вакцинированных кошек синтез специфических антител к поверхностному гликопротеину gp70 ВЛК, сохраняющийся на уровне 1:270 не менее 12 месяцев (срок наблюдения) со дня вакцинации.

5. Определены оптимальные условия синтеза рекомбинантного белка rgp70 ВЖ в рЕТ экспрессионной системе. Отработаны оптимальные условия выделения rgp70 ВЛК методом металло-аффинной хроматографии, при этом выход очищенного белка составил 0,04% от веса сырой клеточной массы. Методами ИФА и иммуноблоттинга определена активность и специфичность очищенного продукта.

6. На основе рекомбинантного белка rgp70 ВЛК разработана тест-система ИФА для определения уровня антител к gp70 у кошек.

6. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛДОЖЕНИЯ

Результаты исследований, изложенных в диссертации, использованы при разработке проекта СТО 76418883-0002-2009 Вакцина «ЛЕОМИНОР».

Список литературы диссертационного исследования кандидат ветеринарных наук Раев, Сергей Алексеевич, 2009 год

1. Вирусология методы. 1988. Под редакцией Мейхи Б.// Москва, Мир.

2. Гуненков В.В. 1978. О лабораторной диагностике вирусных пневмо-энтеритов телят. // Ветеринария. 8: 90-93.

3. Жданова В.М., Гайдамович С.Я. 1982. Общая вирусология. // Москва, Медицина 2: 186-220.

4. Иванов Ю.И., Погорелюк О.Н. 1990. Статистическая обработка результатов медико-биологических исследований на микрокалькуляторах. // Москва. 40-43.

5. Инфекционные болезни животных. 1987. Под редакцией Осидзе Д.Ф. // Москва, Агропромиздат.

6. Коляков Я.Е. 1986. Ветеринарная иммунология.// Москва, Агропомиздат.

7. Ларски З.И. 1980. Диагностика вирусных болезней животных.// Москва, Колос.

8. Методы исследования в иммунологии. 1981. Под редакцией Лефковитса И., Перниса Б.// Москва, Мир 95-118.

9. Орлянкин Б.Г. 1998. Классификация и номенклатура вирусов позвоночных. // Методичекое пособие. Россельхозакадемия, ВИЭВ 34-36.

10. Сергеев В.А. 1976. Репродукция и выращивание вирусов животных. // Москва, "Колос".

11. Сюрин В.Н. 1966. Руководство по ветеринарной вирусологии. // Москва, "Колос".

12. Сюрин В.Н., Фомина Н.В. 1990. Частная ветеринарная вирусология. // Москва.

13. Сюрин В.Н., Белоусова Р.В., Фомина Н.В. 1991. Диагностика вирусных болезней животных.// Справочник. Москва, В.О. Агропромиздат.

14. Феннер Ф., Мак-Ослен Б., Миме С., Сембрук Д., Уайт Д. 1977. Биология вирусов животных. // Москва.

15. Федосов Д.В. 2007. Исследование ретровирусных инфекций кошек. // Сб. трудов 6-ой Всероссийской' научно-практической конференции с международным участием. Москва. 111-115.

16. Фримель Г.М. 1987. Иммунологические методы.// Медецина.

17. Babyak S.D., Groves M.G., Dimski D.S. 1996. Evaluation of a saliva test kit for feline leukemia virus antigen. // J!. Am. Anim. Hosp. Assoc. 32:397-400.

18. Barr M.C. 1996. FIV, FeLV, and FIPV: interpretation and misinterpretation of serological test results. // Semin. Vet. Med. Surg. Small. Anim. 11:144-153.

19. Bucher MH, Evdokimov AG, Waugh DS. Differential effects of short affinity tags on the crystallization of Pyrococcus furiosus maltodextrin-binding protein.// Biol Cryst -2002-Vol.5-p.392-397.

20. Carroll E.E., Dubielzig R.R., Schultz R.D. 2002. Cats differ from mink and ferrets in their response to commercial vaccines: a histologic comparison of early vaccine reactions. // Vet. Pathol. 39:216-227.

21. Cattori V., Hofmann-Lehmann R. 2008. Absolute quantitation of feline leukemia virus proviral DNA and viral RNA loads by TaqMan real-time PCR and RT-PCR. // Methods Mol. Biol. 429:73-87.

22. Chaga G, Bochkariov DE, Jokhadze GG, Hopp J, Nelson P Natural poly-histidine affinity tag for purification of recombinant proteins on cobalt(II)-carboxymethylaspartate crosslinked agarose. //J.Chromatogr.A.-1999b-Vol.864-p.257-256.

23. Clark N., Kushner N.N., Barrett C.B. 1991. Efficacy and*safety.field trials of a recombinant DNA vaccine against feline leukemia virus infection. // J. Am: Vet. Med. Assoc. 199:1433-1443.

24. Coffin J.M. 1979. Structure, replication, and recombination of retrovirus genomes: some unifying hypotheses. // J. Gen. Virol. 42, 1-26.

25. Cotter S.M. 1979. Anaemia associated with feline leukemia virus infection. 1979. //J. Am. Vet. Med. Assoc. 175(11):1191-4.

26. Cotter S.M. 1990. Feline viral neoplasia. // In Greene CE (ed), Infectious diseases of the dog and cat, ed l. WB Saunders, Philadelphia, PA: 316-334.

27. Cotter S.M. 1996. Unpublished data. Tufts University, North Grafton, MA.

28. Cotter S.M. 1997. Changing epidemiology of FeLV. Proceedings of the 15th Annual ACVIM Forum, Lake Buena Vista, FL.

29. Cotter S.M. 1998. Feline viral neoplasia, pp 71 84. // In Greene CE (ed), Infectious diseases of the dog and cat, ed 2. WB Saunders, Philadelphia, PA.

30. Cummins J.M., Tompkins M.B., Olsen R.G. 1988. Oral use of human alpha interferon in cats. // J. Biol. Response. Mod. 7:513-523.

31. Donner L., Fedele L.A., Garon C.F., Anderson S.J., Sherr C.J. 1982. McDonough feline sarcoma virus: characterization of the molecularly cloned provirus and its feline oncogene (v-fms). // J Virol. 1982. 41(2):489-500.

32. Ellis J.A., Jackson M.L., Bartsch R.C. 1996. Use of immunohistochemistry and polymerase chain reaction for detection of leukemia'viruses in formalin-fixed, paraffin-embedded fibrosarcomas from cats. // J. Am. Vet. Med. Assoc. 204:767771.

33. Ettinger S.N. 2003. Principles of treatment4 for feline lymphoma: // Clin. Tech. Small. Anim. Pract. 18: 98-102.

34. Francis D.P., Cotter S.M., Hardy W.D. Jr. 1979. Comparison of virus-positive and virus-negative cases of . feline leukemia and lymphoma. // Cancer Res. 39:3866-3870.

35. Fulton R., Gasper P.W., Ogilvie G.K., Boone T.C., Dornsife R.E. 1991. Effect of recombinant human granulocyte colony-stimulating factor on hematopoiesis in normal cats. // Exp. Hematol. 1991. 19(8):759-67.

36. Gabor L.J., Jackson M.L., Trask B. 2001. Feline leukaemia virus status of Australian cats with lymphosarcoma. // Aust .Vet. J. 79:476-481.

37. Gobar G.M., Kass P.H. 2002. World Wide Web-based survey of vaccination practices, postvaccinal reactions, and vaccine site-associated sarcomas in cats. // J. Am. Vet. Med. Assoc. 220:1477-1482.

38. Hardy W.D. Jr., Geering G., Old L.J., de Harven E., Brodey R.S., McDonough S.K. 1970. Serological studies of the feline leukemia virus. // Bibl. Haematol. 36:343-54.

39. Hardy W.D. Jr., Hirshaut Y., Hess P. 1973. Detection of the feline leukemia virus and other mammalian oncornaviruses by immunofluorescence. Unifying concepts of leukemia. // Bibl. Haemat. 39:778-799. •

40. Hardy W.D. Jr., Zuckerman E.E. 1991. Ten-year study comparing enzyme-linked immunosorbent assay with the immunofluorescent antibody test for detection of feline leukemia virus infection in cats. // J. Am: Vet. Med: Assoc. 199:1365-1373.

41. Griessmayr P., Egberink Hi, Jarrett O. 20021 Comparison of different new tests for feline immunodeficiency virus and feline leukemia virus infection, p 25. //

42. Abstracts from the 6th International Feline Retrovirus Research Symposium, Amelia Island, FL.

43. Hardy W.D. Jr. 1991. General principles of retrovirus immunodetection tests. //J. Am. Yet. Med. Assoc. 10:1282-1286.

44. Hardy W.D., Hess P.W., MacEwen E.G. 1976. Biology of feline leukemia virus in natural environment. // Cancer Res. 36: 582-88.

45. Hardy W.D. Jr. 1981. The feline sarcoma viruses. // J. Am. Anim. Hosp. Assoc. 17:981.

46. Hardy W.D. Jr. 1981. The feline leukemia virus. // J. Am. Anim. Hosp. Assoc. 17:951-980.

47. Hartmann C. 2006. Infectious diseases of the dog and cat. 105.

48. Hartmann K., Block A., Ferk G., Vollmar A., Goldberg M., Lutz H. 1998. Treatment of feline leukemia virus-infected cats with paramunity inducer. // Vet. Immunol. Immunopathol. 65:267-75.

49. Hartmann K., Gerle K., Leutenegger C. 1998b. Feline leukemia virus—most important oncogene in cats, p 39. // In Abstracts from the 4th International Feline Retrovirus Reseach Symposium, Glasgow, Scotland, UK.

50. Hartmann K., Werner R.M., Egberink H. 2001. Comparison of six in-house tests for the rapid diagnosis of feline immunodeficiency and feline leukaemia virus infections. //Vet. Rec. 149:317-320.

51. Hartmann K. 2005. FeLV treatment strategies and prognosis. // Suppl. Compend. Contin. Educ. Pract. Vet. 27:14-26.

52. Hartmann K. 2006. Antiviral and immunodulatory chemotherapy. In: Greene CE (Ed). // Infectious Diseases,of the Dog and. Cat. 3rd edition. Elsevier Saunders, St. Louis, USA,: 10-25.

53. Hawkins E.C. 1991. Saliva and tear tests for feline leukemia virus. // J. Am. Vet. Med. Assoc. 199:1382-1385.

54. Hayes К.A., Rojko J.L., Mathes L.E. 1992. Incidence of localized feline leukemia vims infection in cats. // Am. J. Vet. Res. 53:604-607.

55. Hendrick M.J., Goldschmidt M.H., Shofer F.S. 1992. Postvaccinal sarcomas in the cat: epidemiology and electron probe microanalytical identification of aluminum. // Cancer Res. 52:5391-5394.

56. Hendrick M.J., Shofer F.S., Goldschmidt M.H. 1994. Comparison of fibrosarcomas that developed at vaccination sites and at nonvaccination sites in cats: 239 cases (1991-1992 ). //J. Am. Vet. Med. Assoc. 205:1425-1429.

57. Hines D.L., Cutting J.A., Dietrich D.L. 1991. Evaluation of efficacy and safety of an inactivated virus vaccine against feline leukemia virus infection. // J. Am. Vet. Med. Assoc. 199:1428-1430.

58. Hisasue M., Okayama H., Okayama T. 2001. Hematologic abnormalities and outcome of 16 cats with myelodysplastic syndrome. // J. Vet. Intern. Med. 15:471477.

59. Hochuli E, Bannwarth W, Dbeli H, Gentz R, Stber D. Genetic approach to facilitate purification of recombinant proteins with a novel metal chelate adsorbent. //Bio/Technology-1988-Vol. 6-p.1321-1325.

60. Hochuli E, D. and H, Schacher A New metal chelate adsorbent selective for proteins and peptide containing neighbouring histidine residues. // J Chromatogr -1987-Vol.411 -p. 177-184.

61. Hofinann-Lehmann R., Huder J.B., Gruber S. 2001. Feline leukaemia provirus load during the course of experimental infection and in naturally infected cats. //J. Gen: Virol: 82:1589-1596:

62. Hoover E.A., Mullins J.I.1991. Feline leukemia virus infection and diseases. // J: Am. Vet. Med: Assoc. 199:1287-1297.

63. Hoover E.A., Olsen R.G., Hardy W.D. Jr. 1976: Feline leukemia virus infection: age-related variation in response of cats to experimental infection. // J. Natl. Cancer. Inst. 57:365-369.

64. Hoover E.A., Rojko J.L., Olsen R.G. 1980. Factor influencing host resistance to feline leukemia virus. // In: Olsen R.G., ed. Feline leukemia. Boca Raton, 69-76.

65. Hoover E.A., Rojko J.L., Olsen R.G. 1979. Pathogenesis of experimental feline leukemia virus infection. // J.Natl. Cancer Inst. 63: 759-768.

66. Hoover E.A., Olsen R.G., Mathes L.E. 1977. Relationship between feline leukemia vims antigen expression and viral infectivity in blood, bone marrow, and saliva of cats. // Cancer Res.37: 3707-3710.

67. Jackson M.L., Haines D.M., Meric S.M. 1993. Feline leukemia virus detection by immunohistochemistiy and polymerase chain reaction in formalin-fixed, paraffin-embedded tumor tissue from cats with lymphosarcoma. // Can. J. Vet. Res. 57:269-276.

68. Jackson M.L., Haines D.M., Meric S.M. 1993. Feline leukemia virus detection by immunohistochemistry and polymerase chain reaction in formalin-fixed, paraffin-embedded tumor tissue from cats with lymphosarcoma. // Can. J. Vet. Res. 57:269-276.

69. Jackson M.L., Haines D.M., Taylor S.M. 1996. Feline leukemia virus detection by ELISA and PCR in peripheral blood from 68 cats with high, moderate, or low suspicion of having FeLV-related disease. // J. Vet. Diagn. Invest. 8:25-30.

70. Jarrett O., Golder M.C., Steward M.F. 1982. Detection of transient and persistent feline leukaemia virus infections. // Vet. Rec. 110:225-228.

71. Jarrett O., Pacitti A.M., Hosie M.J. 1991. Comparison of diagnostic methods for feline leukemia virus and feline immunodeficiency virus. // J. Am. Vet. Med. Assoc. 1991:1362-1364.

72. Jarrett O. 1995. Detection of FeLV antigen. // Vet. Rec. 137:127.

73. Jarrett W.F.H., Crawford E.M., Martin W.B. 1964. A virus-like particle associated with leukemia (lymphosarcoma ). //Nature 202:567-568.

74. Kass P.H., Barnes W.G., Spangler W.L. 1993. Epidemiologic evidence for a causal relation between vaccination and fibrosarcoma tumorigenesis in cats. // J. Am. Vet. Med. Assoc. 203:396-405.

75. Kass P.H., Spangler W.L., Hendrick M.J. 2003. Multicenter case-control study of risk factors associated with development of vaccine-associated sarcomas in cats. // J. Am. Vet. Med. Assoc. 223:1283-1292.

76. Katti SK, LeMaster DM, Eklund H Crystal structure of thioredoxin from Escherichia coli at 1.68 resolution. //J Mol Biol. -1990-Vol.212-p. 167-184.

77. Knowles J.O., Gaskell R.M., Gaskell C.J., Harvey C.E., Lutz H. 1989. Prevalence of feline leukaemia virus and antibodies to FIV in cats with chronic stomatitis. //Vet. Rec. 124(13):336-8.

78. Kociba G.J. 1986. Hematologic consequences of feline leukaemia virus infection p448. // In Kirk RW (Ed): Current Veterinary Therapy. Vol XIII. WB Saunders, Philadelphia.

79. Lafrado L.J. 1994. Evaluation of a feline leukemia virus vaccine in a controlled natural transmission study. // J. Am. Vet. Med. Assoc. 204:914-917.

80. LaVallie ER, Lu Z, Diblasimo-Smith EA, Collins-Racie LA, McCoy JM Thioredoxin as a fusion partner for production of soluble recombinant proteins in Escherichia coli. //Methods Enzymol.- 2000-Vol. 326-p.322-340.

81. Lauring A.S., Anderson M.M., Overbaugh J. 2001. Specificity in receptor usage by T-cell-tropic feline leukemia viruses: implications for the in vivo tropism of immunodeficiency-inducing variants. // J Virol. 75(19):8888-98.

82. Legendre A.M., Hawks D.M., Sebring R. 1991. Comparison of the efficacy of three commercial feline leukemia virus vaccines in a natural' challenge exposure. //J. Am. Vet. Med. Assoc. 199:1456-1462.

83. Legendre A.M., Mitchner K.L., Potgieter L. 1990. Efficacy of a feline leukemia virus vaccine in a natural exposure challenge. // J. Vet. Intern. Med. 4:9298.

84. Levy J., Richards J., Edwards D. 2001. Feline retrovirus testing and management. // Compend. Cont. Educ. Pract. Vet. 22:652-657.

85. Levy J.K. 2000. FeLV and non-neoplastic FeLV-related disease. In Ettinger SJ, Feldman EC (eds). //Textbook of veterinary internal medicine. WB Saunders, Philadelphia, PA: 424-432.

86. Lopez N.A., Jacobson R.H., Scarlett J.M. 1989. Sensitivity and specificity of blood test kits for feline leukemia virus antigen. // J. Am. Vet. Med. Assoc. 195:747-751.

87. Lopez N.A., Jacobson R.H., Scarlett J.M. 1989. Sensitivity and specificity of blood test kits for feline leukemia virus antigen. // J. Am. Vet. Med. Assoc. 195:747-751.

88. Lopez N.A., Jacobson R.H. 1989a. False-positive reactions associated with anti-mouse activity in serotests for feline leukemia virus antigen. // J. Am. Vet. Med. Assoc. 195:741-746.

89. Louwerens M., London C.A., Pedersen N.C., Lyons L.A. 2005. Feline lymphoma in the post- -feline leukemia virus era. // J. Vet. Intern. Med. 19(3):329-35.

90. Lutz H., Pedersen N.C., Durbin R. 1983' Monoclonal antibodies to three epitopic regions of feline leukemia virus p27. and their use in enzyme-linked immunosorbent assay of p27. // J. Immunol. Methods. 56:209-220.

91. Macy D.W. 1991. Testing cats for feline leukemia virus. // Vet. Med. Mar:278 288.

92. Macy D.W. 1995. The potential role and mechanisms of FeLV vaccine-induced neoplasms. // Semin. Vet. Med. Surg . 10:234-237.

93. Madewell B.R., Griffey S.M., McEntee M.C. 2001. Feline vaccine-associated fibrosarcoma: an ultrastructural study of 20 tumors (1996-1999 ). // Vet. Pathol. 38:196-202.

94. Marciani D.J., Kensil C.R., Beltz G.A., Hung C., Cronier J., Aubert A. 1991. Genitically-engineered subunit vaccine against feline leukemia virus: protective immune response in cats. // Vaccine. 9: 89-96.

95. Marker L., Munson L., Basson P.A. 2003. Multicentric T-cell lymphoma associated with feline leukemia virus infection in a captive Namibian cheetah (Acinonyx jubatus ). //J. Wildl. Dis. 39:690-695.

96. Maruyama S., Kabeya H., Nakao R. 2003. Seroprevalence of Bartonella henselae, Toxoplasma gondii, FIV and FeLV infections in domestic cats in Japan. // Microbiol. Immunol. 47:147-153.

97. Mathes L.E., Olsen R.G., Hebebrand L.C. 1978. Abrogation of lymphocyte blastogenesis by a feline leukemia virus protein. // Nature. 274: 687689.

98. McCaw D.L., Boon G.D., Jergens A.E., Kern M.R., Bowles M.H., Johnson J.C. 2001. Immunomodulation therapy for feline leukemia virus infection. //J. Am. Anim. Hosjb. Assoc. 37:356-63.

99. Miyazawa Т., Jarrett O. 1997. Feline leukaemia vims proviral DNA detected by polymerase chain reaction in antigenaemic but non-viraemic ('discordant) cats. // Arch. Virol. 142:323-332.

100. Ogilvie G.K., Tompkins M.B. 1988. Clinical and immunologic aspects of FeLV-induced immunosuppression: // Vet: Microbiol. 17:287-296.

101. Orosz C.G., Zinn N.E., Olsen R.G., Mathes L.E.1985. Retrovirus-mediated immunosuppression. II. FeLV-UV alters in vitro murine T lymphocytebehavior by reversibly impairing lymphokine secretion. I I J. Immunol. 135(1):583-90.

102. Orosz C.G., Zinn N.E., Olsen R.G., Mathes L.E. 1985. Retrovirus-mediated immunosuppression. I. FeLV-UV and specific FeLV proteins alter T lymphocyte behavior by inducing hyporesponsiveness to lymphokines. // J. Immunol. 134(5):3396-403.

103. Pacitti A.M., Jarrett O. 1985. Duration of the latent state in feline leukaemia virus infections. // Vet. Rec. 117:472-474.

104. Pacitti A.M., Jarret O., Hay D. 1986. Transmission of feline leukaemia virus in the milk of a non-viremic cat. // Cancer Res. 118: 381-84.

105. Pedersen N.C., Meric S.M., Ho E. 1984. The clinical significance of latent feline leukemia virus infection in cats. // Feline. Pract. 14:32-48.

106. Pedersen N.C. 1988. Feline leukemia virus infection, p 83. In Pedersen NC (ed). // Feline infectious diseases. American Veterinary Publications, Santa Barbara, CA.

107. Perryman L.E., Hoover E.A., Yohn D.S. 1972. Immunologic reactivity of the cat: immunosuppression in experimental feline leukemia. // J. Natl. Cancer Inst. 49(5):1357-65.

108. Phipps A.J., Hayes K.A., Al-dubaib M. 2000. Inhibition of feline leukemia virus; subgroup. A infection by coinoculation with subgroup B. // Virology. 277:40-47.

109. Porath J, Carlsson J, Olsson I, Belfrage G Metal chelate affinity chromatography, a new approach to protein fractionation. // Nature -1975-Vol.258-p.598-599.

110. Poulet H., Brunet S., Boularand C. 2003. Efficacy of a canarypox virus-vectored vaccine against feline leukaemia. // Vet. Rec. 153:141-145.

111. Quackenbush S.L., Dean G.A., Mullins J.I. 1996. Analysis of FeLV-FAIDS provirus burden and productive infection in lymphocyte subsets in vivo. // Virology. 223:1-9.

112. Quigley J.G., Burns C.C., Anderson M.M. 2000. Cloning of the cellular receptor for feline leukemia virus subgroup С (FeLV-C), a retrovirus that induces red cell aplasia. //Blood. 95:1093-1099.

113. Reinacher M., Theilen G. 1987. Frequency and significance of feline leukemia virus infection in necropsied cats. // Am. J. Vet. Res. 48(6):939-45.

114. Reinacher M. 1987. Feline leukemia virus-associated enteritis—a condition with features of feline panleukopenia. // Vet. Pathol. 24(1): 1-4.

115. Rojko J.L., Hoover E.A., Quackenbush S.L. 1982. Reactivation of latent feline leukaemia virus infection. // Nature. 298:385-388.

116. Salerno R.A., Lehman E.D., Larson V.M., Hilleman M. 1978: Feline leukemia virus vaccine: Preparation and evaluation of immunizing potency in guinea pig and cat.// Jl Natl. Cancer Inst, 61,1487.

117. Sarma P.S;, Log "Т., Skuntz S; 19781 Experimental horizontal transmission of feline leukemia viruses of subgroups А, В and C. // J. Natl. Cancer Inst. 60:871-874.

118. Scott D.W., Schultz R.D., Post J.E., Bolton G.R., Baldwin: C.A. 19731 Autoimmune haemolytic anemia in the.cat. // J.Am. Anim. Hosp. Assoc. 9: 530-47.

119. Sleeman J.M;, Keane J.M., Johnson J.S. 2001. Feline leukemia virus in a captive bobcat.//J. Wildl. Dis. 37:194-200:

120. Sparkes A.H. 2003. Feline leukaemia virus and vaccination. // J. Feline Medicine and surgery. 5, 97-100.

121. Stewart, E. J., Aslund, F. & Beckwith, J. Disulfide bond formation in the Escherichia coli cytoplasm: an in vivo role reversal for the thioredoxins. // EMBO J -1998-Vol.l7-p. 5543-5550.

122. Tartaglia J., Jarrett O., Neil J.C. 1993. Protection of cats against feline leukemia virus by vaccination with a canarypox virus recombinant, ALVAC-FL. // J. Virol. 67:2370-2375.

123. Tenorio A.P., Franti C.E., Madewell B.R., Perdersen N.C. 1991. Chronic oral infections of cats and their relationship to persistent oral carriage of feline calici-, immunodeficiency, or leukemia viruses. // Vet. Immunol. ImmunopathoL 1-2:1-14.

124. Uthman A., Moestl K., Zetner K. 1996. Detection of sequences of feline leukemia virus in chronically'inflamed oral tissue of FeLV-non-viremic cats by using polymerase chain reaction. // Hematol. 19(8):759-67.)

125. Weijer K, van Herwijnen R. 1995. Detection of FeLV antigen. // Vet. Rec. 137:127.

126. Zenger E. 2000. FIP, FeLV, FIV: making a diagnosis. // Feline Pract. 28:16-18.