Повышение эффективности искусственного осеменения коров криоконсервированной спермой тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 06.02.01, кандидат сельскохозяйственных наук Добровольский, Геннадий Александрович

• Добровольский, Геннадий Александрович
• кандидат сельскохозяйственных наук
• 2009

Оглавление диссертации кандидат сельскохозяйственных наук Добровольский, Геннадий Александрович

ВВЕДЕНИЕ.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Воздействие повреждающих факторов при криоконсервацин семени сельскохозяйственных животных.

1.2. Приемы повышения устойчивости спермы быков к замораживанию.

1.3. Основные синтетические среды для криоконсервацин семени быков.

1.4. Способы прогнозирования устойчивости спермы быков к глубокому замораживанию.

2. МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЙ.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

3.1 Изучение защитного влияния сухого соевого лецитина на устойчивость семени быков к глубокому замораживанию.

3.1.1. Анализ криозащитного влияния на сперму быков различных видов сухого соевого лецитина.

3.1.2. Влияние срока хранения спермы быков, замороженной с лецитином, на биологическую полноценность сперматозоидов.

3.1.3. Результативность искусственного осеменения коров спермой, замороженной в усовершенствованной среде с сухим соевым лецитином.

3.1.4. Эффективность осеменения коров спермой, замороженной в усовершенствованной трис-фруктозо-лимоннокислой среде с желтком.

3.2. Изучение воздействия низкоинтенсивного лазерного излучения на криоустойчивость семени быков.

3.2.1. Влияние лазерного излучения на устойчивость сперматозоидов быков к холодовому шоку.

3.2.2. Влияние лазерного излучения на устойчивость сперматозоидов быков к глубокому замораживанию.

3.3. Исследование возможности прогнозирования криоустойчивости спермы быков.

3.3.1. Содержание уровня АТФ в сперме быков с различной фертильностью.

3.3.2. Уровень пероксидации липидов в сперматозоидах быков с различной устойчивостью к замораживанию.

3.3.3. Активность антиоксидантных ферментов в сперматозоидах быков с различной устойчивостью семени к замораживанию.

3.3.4. Анализ фосфолипидного состава' сперматозоидов с различной криоу стойчивостью.

4.0БСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.

5. ВЫВОДЫ.

6. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Повышение эффективности искусственного осеменения коров криоконсервированной спермой»

Актуальность работы. В настоящее время для искусственного осеменения крупного рогатого скота во многих странах в основном применяется криоконсервированная сперма. Но несмотря на широкое применение, результативность осеменения коров всё ещё остается не достаточно высокой. При этом имеется целый ряд недостаточно изученных вопросов, которые смогли бы повысить эффективность осеменения коров и тёлок замороженной спермой. Например, в процессе замораживания спермы быков погибает более половины сперматозоидов. Изучение причин данного явления и разработка более совершенных синтетических разбавителей для спермы быков позволило бы повысить выживаемость сперматозоидов в процессе замораживания - оттаивания и их оплодотворяющую способность.

Слабо изучен также вопрос прогнозирования криоустойчивости спермы быков. Решение данной проблемы могло бы помочь в подборе производителей для племпредприятий с высокой устойчивостью спермы к замораживанию.

Как известно, имеются производители с высокой и пониженной устойчивостью половых клеток к процессу замораживания, что проявляется в различной подвижности и живучести сперматозоидов после процесса замораживания-оттаивания, а также в их оплодотворяющей способности.

В этой связи необходимы дальнейшие углубленные исследования в области совершенствования синтетических сред для замораживания спермы быков и изучения причин неодинаковой устойчивости половых клеток к криообработке.

Цель и задачи исследований. Целью данной работы является изучение эффективности осеменения коров спермой, замороженной в различных средах и выяснение возможности прогнозирования криоустойчивости сперматозоидов у быков.

Для достижения этой цели в диссертации были поставлены следующие задачи:

• изучить криозащитное влияние на сперму быков различных видов сухого соевого лецитина;

• выяснить влияние срока хранения спермы быков, замороженной в среде с соевым лецитином, на биологическую полноценность половых клеток;

• изучить эффективность искусственного осеменения коров спермой, замороженной в усовершенствованной трис-фруктозо-лимоннокислой среде с сухим соевым лецитином и нативным желтком куриного яйца;

• проанализировать воздействие низкоинтенсивного лазерного излучения на криоустойчивость сперматозоидов быков;

• исследовать возможность прогнозирования криоустойчивости сперматозоидов быков с помощью различных биологических методов.

Научная новизна исследований. Впервые изучено криозащитное влияние на сперму быков различных видов сухого соевого лецитина. Выяснено влияние разных сроков хранения спермы быков, замороженной с сухим соевым лецитином, на биологическую полноценность половых клеток. Проведены научно-производственные испытания эффективности искусственного осеменения коров спермой, замороженной в усовершенствованной трис - фруктозо - глицериновой среде с соевым лецитином и желтком куриного яйца. Проанализировано криопротективное влияние на сперму быков низкоинтенсивного лазерного излучения. Изучена взаимосвязь между уровнем АТФ в сперматозоидах быков и их оплодотворяющей способностью. Исследована возможность прогнозирования криоустойчивости сперматозоидов быков по содержанию в них продуктов перекисного окисления липидов, антиокислительных ферментов и фосфолипидов.

Практическая значимость. Усовершенствованная трис - фруктозо -лимоннокислая среда способствует повышению фертильности спермы быков, замороженной как с сухим соевым лецитином, так и с нативным желтком куриного яйца в сравнении с использованием лактозо - желточно — глицериновой среды. Изучение уровня антиокислительных ферментов в сперме быков может быть полезно с целью прогнозирования её криоустойчивости.

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены на:

• Ученом Совете ВНИИплем, 2007-2008 гг;

• Научно- производственной конференции на ВВЦ, 2007 г;

• Расширенной межотдельской конференции ВНИИплем, 2009 г.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 5 научных работ, в том числе 1 в рецензируемом журнале.

Основные положения , выносимые на защиту:

- Сухой соевый лецитин обладает высокими криопротективными свойствами при замораживании семени быков.

Осеменение коров спермой, замороженной с сухим соевым лецитином, не снижает результативности искусственного осеменения.

Замораживание семени быков в усовершенствованной трис-фруктозо- лимоннокислой среде с желтком куриного яйца способствует повышению результативности искусственного осеменения коров по сравнению с ЛГЖ средой.

Изучение активности антиокислительных ферментов в сперме быков может быть полезным для отбора производителей с высокой устойчивостью семени к глубокому замораживанию.

Объем работы. Диссертация изложена на 112 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, методики исследований, результатов исследований, выводов и практических предложений. Диссертация включает 23 таблицы. Список литературы содержит 192 источника, в том числе 105 на иностранном языке.

Заключение диссертации по теме «Разведение, селекция, генетика и воспроизводство сельскохозяйственных животных», Добровольский, Геннадий Александрович

5. ВЫВОДЫ

1. Установлено, что все изученные марки сухого соевого лецитина, за исключением «Sternpur PC-гранулированный, обезжиренный», оказывают высокий защитный эффект при замораживании семени быков.

2. Изучение динамики изменений концентрации АТФ в замороженных сперматозоидах быков в связи со сроками хранения спермы, не выявили отрицательного влияния замораживания семени с сухим соевым лецитином на энергетический метаболизм в половых клетках.

3. Показано, что результативность осеменения коров спермой, замороженной с сухим соевым лецитином практически одинакова с группой, где использовали сперму, замороженную с желтком куриного яйца ( 46,9 % против 47.7 %).

4. Выяснено, что замораживание семени быков в усовершенствованной трис-- фруктозо-лимоннокислой среде с добавлением желтка куриного яйца, способствует повышению подвижности, живучести и фертильности сперматозоидов по сравнению с использованием лактозо-глицерино-желточной среды. Оплодотворяемость при использовании усовершенствованной среды была выше на 7% по сравнению с ЛГЖ средой.

5. Облучение семени быков перед замораживанием с помощью гелий-неонового и арсенид-галлиевого лазеров не оказало положительного влияния на устойчивость сперматозоидов к холодовому шоку и замораживанию при всех изученных режимах обработки.

6. Изучение взаимосвязи между содержанием АТФ в нативной и криоконсервированной сперме быков и ее оплодотворяющей способностью, не выявило достоверной связи между этими показателями.

7. Установлено, что различия в устойчивости сперматозоидов разных быков к глубокому замораживанию не связаны с уровнем перекисного окисления липидов в оттаянных образцах семени.

8. Анализ содержания антиокислительных ферментов в сперме быков с различной устойчивостью к замораживанию показал, что в группе производителей с повышенной криоустойчивостью семени отмечается более высокая активность в половых клетках фермента глутатионпероксидазы.

9. Изучение фосфолипидного состава в семени быков с высокой и низкой криоустойчивостью не выявило заметных различий по данному показателю между сравниваемыми группами.

6. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Предлагаем племпредприятиям для проведения широких производственных испытаний усовершенствованную трис-фруктозо-лимоннокислую среду с сухим соевым лецитином для замораживания спермы быков следующего состава: вода дистиллированная - 100 мл; трис-(оксиметил)-аминометан - 2,75 г; фруктоза - 0,8 г; лимонная кислота - 1,4 г; сухой соевый лецитин - 6 - 7 г; глицерин - 6 мл; полиген - 30 мг.

2. Рекомендуем племпредприятиям для замораживания семени быков использовать вместо лактозо-глицерино-желточной среды усовершенствованную трис-фруктозо-лимоннокислую среду с 20% желтка куриного яйца.

Список литературы диссертационного исследования кандидат сельскохозяйственных наук Добровольский, Геннадий Александрович, 2009 год

1. Аветисян Б.Н., Манасян А.С., Саакян Ш.С. О значении двойного лучепреломления и ориентации молекул в мембранах в оценке качества семени быка /Аветисян Б.Н., Манасян А.С., Саакян Ш.С.// Армянский биологический журнал. 1985. - т.38 - 33. - с. 272 - 273.

2. Антонюк B.C. Биохимический контроль за качеством спермы хряков /Антонюк B.C.// Доклады ВАСХНИЛ. 1980. - №1. - с, 27 - 30.

3. Афанасьев И.Б. Свободнорадикальные ингибиторы и промоторы в биологических процессах /Афанасьев И.Б. //Кислородные радикалы в химии, биологии и медицине. Рига. - РМИ. - 988. - с. 9 - 25.

4. Белоус А.Н., Бондаренко В.А. Структурные изменения биологических мембран при охлаждении /Белоус А.Н., Бондаренко В.А.//Киев.: Наукова Думка. 1982.-256 С.

5. Бернштейн А.Д., Петропавловский В.В. Влияние неэлектролитов на переживание сперматозоидов /Бернштейн А.Д.,.Петропавловский В.В.// Бюл. Экспер; Биологии и Медицины. 1937. — вып. 1. - с. 21 - 25.

6. Бородин И.Ф., Будаковский А.В., Будаковская О.Н. и др. Использование когерентного электромагнитного излучения в производстве продукции растениеводства /Бородин И.Ф., Будаковский А.В., Будаковская О.И; и др. // Доклады РАСХН. 1996. - № 5. - с. 41 - 44.

7. Бугров , А.Д. Способ оттаивания замороженной спермы- быков в различной упаковке /Бугров А.Д. //Животноводство!- 1976.-№ 2 — с.57 — 59.

8. Бугров А.Д. Способ оттаивания замороженной спермы быков в различной упаковке /Бугров А.Д. // Животноводство. — 1976. № 12. - с. 57-59.

9. Ю.Бугров А.Д., Осташко Ф.И., Олесенко Т.И. Сверхбыстрое оттаивание спермы быков-производителей /Бугров А.Д., Осташко Ф.И., Олесенко Т.И. // Молочное и мясное скотоводство. 1978. - № 12.-е. 24 -25.

10. Варнавский А.Н. Влияние метода замораживания и глицерина на подвижность и ультраструктуру живчиков /Варнавский А.Н. // Овцеводство. 1970. - № 8. - с. 22-23.

11. Варнавский А.Н. Изучение акросомы спермиев барана с помощью фазовоконтрастной микроскопии /Варнавский А.Н.//Доклады ВАСХНИЛ. 1978. - № 8. - с. 33 - 34.

12. Вишневский В.И., Скорняков Б.А. Низкотемпературное криоконсервирование спермы сельскохозяйственных животных. // Актуальные проблемы криобиологии /Вишневский В.И., Скорняков Б.А.// Киев: Наукова Думка. -1981.-е. 248 - 280.

13. Вишневский В.И. Повышение качественных показателей спермы быков УЗ обработкой /Вишневский В.И.//УЗ в сельском хозяйстве. Межвуз. сб. н. тр. - Москва. - 1988. - с. 55 - 57.

14. Владимиров Ю.А., Рощупкин Д.И., Потапенко Л.Я. Биофизика /Владимиров Ю.А., Рощупкин Д.И., Потапенко Л.Я.//— М. Медицина. -1983.

15. Владимиров Ю.А., Азизова О.А., Деев О.А. и др. Свободные радикалы в живых системах /Владимиров Ю.А., Азизова О.А., Деев О.А. и др. // Итоги науки и техники. ВИНИТИ. Сер. Биофизика. 1991. - т. 29.

16. Гаврилов В.Б., Мишкорудная М.И. Спектрофотометрическое определение содержания гидроперекисей липидов в плазме крови /Гаврилов В.Б., Мишкорудная М.И. // Лабораторное дело. 1983. - № 3.-е. 33-35.

17. Гуськов A.M. Криогенные изменения липидов и функциональная полноценность гамет хряков и быков /Гуськов А.М.//Автореф. дисс. канд. биол. наук. Львов. - 1984.

18. Гуськов A.M., Дмитриенко Н.Г., Букарчук М.Г. Особенности криогенных изменений липидов плазматических мембран и функционального состояния гамет быка и хряка /Гуськов A.M., Дмитриенко Н.Г., Букарчук М.Г. //Доклады ВАСХНИЛ. 1989.- № 2. -с. 26-28.

19. Данов Д.Т., Ковачев К., Попов Д.В. Исследования ввъерху ультраструктурните изменения на сперматозоидите на коча при криоконсервация /Данов Д.Т., Ковачев К., Попов Д.В.// Криобиология на половите клетки. София. - 1983. - с. 155 — 179.

20. Девятков Н.Д., Зубкова С.М., Лапрун И.Б. и др. Физико химические механизмы биологического действия лазерного излучения /Девятков Н.Д., Зубкова С.М., Лапрун И.Б. и др.// Успехи совр. биологии. - 1987. — Вып. 1 - т. 103.-с. 31-43.

21. Деряженцев В.И. Синтетическая среда для замораживания спермы быков в соломинках /Деряженцев В.И.// Биология воспроизведения и технология искусственного осеменения сельскохозяйственных животных. М. - 1986. - с.31 - 37.

22. Евтух В.П. Совершенствование метода криоконсервации семени крупнорогатого скота с использованием биологически активных веществ /Евтух В.П. // Автореф. дисс.канд. биол. наук. Лесные Поляны. М.О. -2004. 20 с.

23. Ерохин А.С., Платов Е.М., Тимофеев К.Н. Структурное состояние мембраны сперматозоидов барана и быка после криовоздействия /Ерохин А.С., Платов Е.М., Тимофеев К.Н.// Доклады ВАСХНИЛ- 1989. № 3. - с. 19-21.

24. Ерохин А.С., Деряженцев В .И. Перекисное окисление липидов в сперме баранов /Ерохин А.С., Деряженцев В.И.// Овцеводство. 1991. - № 3. - с. 17-19.

25. Ерохин А.С. Изучение пероксидации липидов в компонентах • разбавителей спермы животных /Ерохин А.С.// Доклады ВАСХНИЛ.1992.-№6.-с. 42-44.

26. Ерохин А.С. Физиологические аспекты криорезистентности. спермы баранов и быков /Ерохин А.С.// Автореф. дисс. . докт. биол. наук. Дубровицы. 1994.

27. Ерохин А.С., Коган И.Г., Барсель В.А. Активность супероксиддисмутазы в сперме барана и быка при криоконсервации /Ерохин А.С., Коган И.Г., Барсель В.А.//Сельскохозяйственная биология. 1995.-№4.-с. 50-51.

28. Ерохин А.С., Лехмус И.А. Определение содержания АТФ биолюминисцентным методом в сперматозоидах барана после криообработки /Ерохин А.С., Лехмус И.А.// Доклады РАСХН. 1996. -№ 1. — с. 32-34.

29. Ерохин А.С., Дунин И.М., Евтух В.П. и др. Синтетическая среда для замораживания спермы быков /Ерохин А.С., Дунин И.М., Евтух В.П. и др. // Патент на изобретение № 2323701.- Бюлл. № 13 2008.

30. Журавлев А.И. Биоантиокислители и их роль в регуляции окислительных процессов /Журавлев А.И.// М. - 1968 - с. 7 - 14.f

31. Зверева Г.В., Чухрий В.Н., Клевец JI.A. Сукцинатдегидрогеназная активность спермы быков и качество спермы /Зверева Г.В., Чухрий В.Н., Клевец JI.A.// Сельскохозяйственная биология. 1989. -№ 6.-с. 30-33.

32. Ковалев М.Г. Способ удлинения переживаемости и повышения оплодотворяющей способности спермы /Ковалев М.Г.// Описание изобретения к авт. свид. № 402365 — 19.10. 1973 г.

33. Кононов В.П. Замораживание семени хряка. Теория и практика /Кононов В.П. //Автореф. дисс.докт. биол. наук. Дубровицы. - 1982.

34. Кононов В.П. Глубокое замораживание семени хряков. Новое в теории и практике /Кононов В.П.//Теория и практика воспроизведения животных. М.: Колос. - 1984. - с. 241 - 256.

35. Курбатов А.Д., Платов Е.М., Корбан Н.В. Криоконсервация спермы сельскохозяйственных животных /Курбатов А.Д., Платов Е.М., Корбан Н.В.// Л.: Агропромиздат - 1988. - 256 С.

36. Ленинджер А. Митохондрия. Молекулярные основы структуры и функции /Ленинджер А.// М.: Мир. - 1966.

37. Лозино-Лозинский Л.К. Очерки по криобиологии: адаптация и устойчивость организмов и клеток к низким и сверхнизким температурам /Лозино-Лозинский Л.К.// Л.: Наука. - 1972. - 288 С.

38. Лопатко М.И., Тюпина К.Ф. Замораживание спермы быка без глицерина /Лопатко М.И., Тюпина К.Ф.// Молочное и мясное скотоводство. 1971. - № 4. - с. 24.

39. Луговой В.И., Моисеев В.А. Влияние низких температур на растворимые ферменты /Луговой В.Н.3 Моисеев В.А.// Итоги науки и техники. ВИНИТИ. Сер. Биофизика. 1978. - т. 9. - с. 53 - 79.

40. Лянсберг Э.С. Изучение защитного действия гипертонических сред и полиолов при замораживании семени барана /Лянсберг Э.С.// Направления' и новые результаты исследований' по биологии воспроизведения. Дубровицы-. - 1974.- ч. 1. — с. 27 - 30i

41. Максудов Г.Ю., Артюшенкова В.А., Трошко Е.В. Оценка качества семени животных. Консервация генетических ресурсов /Максудов Г.Ю., Артюшенкова В.А., Трошко Е.В.// - Пущино. - 1987. - 43 С.

42. Малиновская В.А. Оптимальные режимы замораживания спермы быков в соломинках /Малиновская В.А.//Совершенствование методов воспроизводства и искусственного осеменения сельскохозяйственных животных. М. 1983. - с. 100 - 108.

43. Маринов П.И., Златарев С.Т., Грудова Ч.Н. Среды за консервация на овчи сперматозоиди /Маринов П.И., Златарев С.Т., Грудова Ч.Н.// Криобиология на половите клетки. София. — 1983. — с. 86 101.

44. Милованов В.К., Соколовская И.И. Теория холодового удара живчиков млекопитающих /Милованов В.К., Соколовская И.И.// Доклады ВАСХНИЛ. 1959. - № 8. - с. 3 - 9

45. Милованов В.К. Биология воспроизведения и искусственного осеменения животных /Милованов В.К.// М. - 1962.

46. Милованов В.К., Жильцова JI.C. Комплексонаты металлов в средах для семени сельскохозяйственных животных /Милованов В.К., Жильцова JI.C. //Вестник сельскохозяйственной науки. 1982 - № 2. - с. 58 - 66.

47. Милованов В.К., Соколовская И.И. Теория и практика воспроизведения животных /Милованов В.К., Соколовская И.И.// М. 1984.

48. Мороз Л.Г. Значение серосодержащих соединений в устойчивости спермы к замораживанию /Мороз Л.Г. // Доклады ВАСХНИЛ. 1990. -№9.-с. 51-55.

49. Нарижный А.Г., Ерохин А.С., Рогачев Н.В. Влияние антиоксидантов и способов криоконсервацин на пероксидацию липидов в сперме хряка /Нарижный А.Г., Ерохин А.С., Рогачев Н.В. //Доклады РАСХН. 1993. -№ 6. - с. 32-34.

50. Нарижный А.Г., Ерохин А.С. Активность супероксиддисмутазы в нативной и криоконсервированной сперме хряков /Нарижный А.Г., Ерохин А.С. // Доклады РАСХН. 1995. - № 1. - с. 37 - 38.

51. Наук В.А. Синтетическая среда для разбавления и замораживания семени сельскохозяйственных животных /Наук В.А.//Бюлл. изобретений и открытий. 1976. - № 4.

52. Наук В.А. Криоконсервация семени животных. Консервация генетических ресурсов /Наук В.А.// -Пущино. 1982.

53. Наук В.А., Гуськов A.M. Особенности перекисного окисления липидов при замораживании спермы быков и хряков /Наук В.А., Гуськов A.M. // Доклады ВАСХНИЛ. 1983. - № 2. - с. 27 - 29.

54. Николаев И., Георгиев С., Чизмаров К. Влияние на лазерного изльчване въерху семена течност от бици при технологиятаза криоконсервация /Николаев И., Георгиев С., Чизмаров К.// Животновъдни науки. София.- 1986.-т. 23.-№ 11.-с. 3-7.

55. Николов И. Нестерова Ю. Ефект на нискоинтензивно лазерно лъчение въерху биологичните качества и оплодителната способност на сперматозоиди от кочове /Николов И. Нестерова Ю.//Животновъдни науки. София. - 1994. - № 1 - № 4 - с. 210 - 212.

56. Осташко Ф.И. Причины и механизмы холодового удара клеток /Осташко Ф.И.// Международный сельскохозяйственный журнал. 1964.- № 3 с. 106- 109.

57. Осташко Ф.И., Строна В.И, Кузнецов Г.Н. Влияние Р глюкуронидазы на качественные показатели спермы производителей /Осташко Ф.И., Строна В.И, Кузнецов Г.Н.// Животноводство. - 1974. - № 4. - с. 53 - 54.

58. Осташко Ф.И. Глубокое замораживание и длительное хранение спермы производителей /Осташко Ф.И.// Киев. Урожай. 1978. - 254 С.

59. Пакенас П.И. Исследование сперматогенеза и усовершенствование технологии взятия и обработки семени /Пакенас П.И. // Автореф. дисс. .докт. биол. наук. Таллин. 1972.

60. Пакенас П.И., Гинкявичус Г., Ленкутис В. Байсогальская технология кормления, содержания, подготовки быков к взятию семени, его криоконсервации и использования /Пакенас П.И., Гинкявичус Г., Ленкутис В.// Вильнюс. - 1980. - 89 С.

61. Панасенко О.М. Перекисное окисление липидов влияет на перенос холестерина между липопротеинами высокой плотности и биомембранами /Панасенко О.М. // Биологические мембраны. 1987. -т. 12-№4.-с. 1319- 1324.

62. Платов Е.М. Теоретические и практические основы замораживания семени производителей сельскохозяйственных животных /Платов Е.М. // Автореф. дисс.докт.биол.наук. Дубровицы. - 1973.

63. Пушкарь Н.С., Белоус A.M., Цветков И.Д. Теория и практика криогенного и сублимационного консервирования /Пушкарь Н.С., Белоус A.M., Цветков И.Д.// Киев: Наукова Думка. - 1984.

64. Рэ JI. Консервация жизни холодом /Рэ JI.// М. - 1962.

65. Семаков В.Г. Активность сукцинатдегидрогеназы в процессе замораживания и оттаивания спермы быков и хряков /Семаков В.Г. // Доклады ВАСХНИЛ. 1984.- № 2. - с. 26 - 27.

66. Семенова В.А. Защитные свойства отдельных факторов желтка куриного яйца при замораживании семени животных /Семенова В.А. // Автореф. дисс. .канд. биол. наук. Дубровицы. - 1987.

67. Смирнов И.В. Сохранение спермы сельскохозяйственных животных посредством глубокого охлаждения /Смирнов И.В.// Дисс. канд. биол. наук. -М. 1949.

68. Смирнов И.В. К теории глубокого охлаждения спермы /Смирнов И.В.// Животноводство. 1974. - № 11. - с. 65 - 70.

69. Смит О. Биологическое действие замораживания и переохлаждения /Смит О.// М.: И.Л. - 1963.

70. Соколовская И.И., Ойвадис Р.Н., Абилов А. О значении акросомы в оценке семени самцов /Соколовская И.И., Ойвадис Р.Н., Абилов А.//Животноводство. 1981. - № 9. - с. 45 - 46.

71. Солсбери Г.У., Ван Демарк Н.Л. Теория и практика искусственного осеменения коров в США /Солсбери Г.У., Ван - Демарк Н.Л. // М.: Колос. - 1966.

72. Угарова Н.Н., Бровко Л.Ю., Трдян И.О. и др. Биолюминисцентные методы анализа в микробиологии /Угарова Н.Н., Бровко Л.Ю., Трдян И.О. и др. //Прикладная биохимия и микробиология. 1991. - т. 21 - № 1. — с. 134-141.

73. Успенский А.Н. Углеводно-белковые соединения и воспроизводительная функция животных /Успенский А.Н.//Автореф. дисс .докт. биол. наук. — Дубровицы. — 1991.

74. Ушатинская Р.С. Скрытая жизнь и анабиоз /Ушатинская P.C.//-ML: Наука. 1990.

75. Федина Н.И. Криозащитное влияние различных антиоксидантов и БАД при хранении спермы хряков в охлажденном и замороженном состоянии /Федина Н.И.// Автореф. дисс.канд. биол. наук. Лесные Поляны. -2007. - 20 С.

76. Хабибуллин И.Х., Каримов Л.Г., Цуканов Д.Ш. и др. Синтетические соломинки для хранения семени быков /Хабибуллин И.Х., Каримов Л.Г., Цуканов Д.Ш. и др. // Животноводство. 1973. - № 1. - с. 24 - 25.

77. Чухрай Б.Н., Клевец Л.А. Физиологические показатели спермы быков и оплодотворяющая способность сперматозоидов /Чухрай Б.Н., Клевец Л.А.// Сельскохозяйственная биология. — 1992. № 6. — с. 50 — 58.

78. Ющенко Н.П., Семаков В.Г., Левин К.Л. Замораживание спермы быков в гранулах без применения сухого льда /Ющенко Н.П., Семаков В.Г., Левин К.Л. // Молочное и мясное скотоводство. 1968. - № 5. - с. 32 -37.

79. Ющенко Н.П. Методические рекомендации по криоконсервацин, хранению и использованию семени быков, замороженного в гранулах жидким азотом /Ющенко Н.П. //- М. 1979.

80. Ahmad K., Foote R.H. Motility and ferbility of frozen^ bull spermatozoa in tris yolk and milk extenders containing amicacin sulphate /Ahmad K., Foote R.H.// J.Dairy Sci. - 1985. - v. 68. - p. 2083 - 2086.

81. Ahmad K., Foote R.H. Post-thaw survival and fertility of frozen bull spermatozoa treated with antibiotics /Ahmad K., Foote R.H. // J. Dairy Sci. -1986.-v. 69.-p. 535-541.

82. AI-Hanak X., Грудова Ч., Захариев Э е.а. Влияние на витамин А въерху някои показатели сперматозоидите от бик при криоконсервации /Al-Hanak X., Грудова Ч., Захариев Э е.а.// Животновъдни науки 1989. - т. 26. - № 5. - с. 80-83.

83. Almquist J.O. Effect of cold shock after thawing on acrosomal maintenance and mobility of bovine spermatozoa frozen in plastic straws /Almquist J.O.// J. Dairy Sci. 1976. - v. 59. - p. 1825 - 1829.

84. Amann R.P. Can the fertility potential of a seminal sample be predicted accurately /Amann R.P. // J. Androl. 1989. - v. 10. - p. 89-98.

85. Arriola J., Foote R. Glycerolation and thawing effect on bull spermatozoa frozen in deterdent treated egg-yolk and whole egg extenders /Arriola J., Foote R. // J. Dairy Sci, 1987. - v. 70. - p. 1664 - 1670.

86. Belorkar P.M., Dhami A.J., Kodagali S.B. Physico-biochemical semen haracteristics of good and poor freezability crossbred bulls /Belorkar P.M., Dhami A.J., Kodagali S.B. // Indian J. Anim. Sci. 1988. - v. 58. - № 12. - p. 14-16.

87. Brooks D.E. Observation on the content of ATP and ADP in bull spermatozoa using the firefly luciferase system /Brooks D.E.// J. Reprod. Ferttil. 1970. - v. 23. - p. 525-528.

88. Cassou R. La method des paillettes en plastique adapt a la generalization de la congelation /Cassou R.//5lh proc. Int. Cong. Anim. Reprod. And A.I. Trento - 1964-p. 14-17.

89. Chen Y., Foote R.H., Brockett C.C. Effect of sucrose, trehalose, hypotaurine, taurine and blood serum on survival of frozen bull sperm /Chen Y., Foote R.H., Brockett C.C. //Cryobiology. 1993. - v. 30. - p. 223-231.

90. Christensen P., Guo Z., Pedersen K.M. e.a. The viability, motility and fertility of bovine semen frozen in Triladyl and Biociphos plus /Christensen P., Guo Z., Pedersen K.M. e.a.// ESDAR Newsletter. 2000. - № 5. - p. 25.

91. Comhair F., Vermeubn L., Chedira К. e.a. ATP in humansemen /Comhair F., Vermeubn L., Chedira K. e.a. // Fertil. Steril. 1984. - v. 40. - № 3-4. - p. 500-504.

92. Curry M.R., Watson P.F. Osmotic effects on ram and human sperm membranes in relation to thawing injury /Curry M.R., Watson P.F.// Cryobiology. 1994. - v. 31. - p. 39 - 46.

93. Darin Bennet A., Poulos A., White J. The effect of cold shock and freeze - thawing on release of phospholipids by ram, bull and boar spermatozoa /Darin - Bennet A., Poulos A., White J. // Austr. J. Biol . Sci. - 1973. - v. 26.-p. 1409-1420.

94. Darin- Bennet A., Poulos A., White J. The fatty acid composition of the major phosphoglycerides of ram and human spermatozoa /Darin- Bennet A., Poulos A., White J. // Andrologia. 1976. - v. 8. - p. 37-45.

95. Davis I.I., Bratton R.W. Foote R.H. Livability of bovine spermatozoa at 5 -25 and 85 С in Tris — buffered and citrate — buffered yolk — glycerol extenders /Davis I.I., Bratton R.W. Foote R.H. // J. Dairy Sci. - 1963. - v. 46 -p. 333 -336.

96. Elliot F.J., Sherman J.K. A photographic method of measuring percentage of progressively motile sperm cell using Dark-Field microscopy /Elliot F.J., Sherman J .K.// 8 Int. Simp. Zoot. Milan, - 1973. - p. 160-169.

97. I.Evans R.W., Setchell B.P. Association of exogenousphospholipids with spermatozoa /Evans R.W., Setchell B.P.//J. Reprod. Fertil.- 1978. v. 53. - № 2. - p. 357 - 362.

98. Evenson D.P., Darzynkiewich Z., Melamed M.R. Relation of mammalian sperm chromatin heterogeneity to fertility /Evenson D.P., Darzynkiewich Z., Melamed M.R.// Science. 1980. - v. 210. - p. 1131-1133.

99. Fahy G.M. The relevance of cryoprotectant toxicity to cryobiology /Fahy G.M. // Cryobiology. 1986. - v. 23. - p. 1-13.

100. Folch J., Lees M., Sloane -Stanley G. A simple method for the isolation and purification of total lipids from animal tissues /Folch J., Lees M., Sloane -Stanley G. // J. Biol. Chem. 1957. - v. 226. - p. 497-509.

101. Foote R.H., Chen Y., Brockett C.C. Fertility of bull spermatozoa frozen in whole milk extenders with thehalose, taurine or blood serum /Foote R.H., Chen Y., Brockett C.C.// J.Daily Sci. 1993. - v. 76. - p. 1908 - 1913.

102. Foote R., Kaproth M.T. Sperm numbers inseminated in dairy cattle and non- return rates revisited /Foote R., Kaproth M.T. // J. Dairy Sci. 1997. - v. 80.- p: 3072-3076.

103. Foote R., Brockett C.C., Kaproth M.T. Motility and fertility of bull sperm in whole milk extender containing antioxidants /Foote R., Brockett C.C., Kaproth M.T. // Animal Reprod. Sci. 2002. - v. 71. - p. 13-23.

104. Foulkes J. The separation of lipoproteins from egg yolk and their effect on the motility and integrity of bovine spermatozoa /Foulkes J.// J. Reprod. Fertil.- 1977 v. 49.-p. 277-284.

105. Foulkes J.A., MacDonald B.J. The relationship between ATP content and motility of bovine spermatozoa /Foulkes J. A., MacDonald B.J.// Theriogenology. 1979. - v. 11. -№>4.-p. 313-319.

106. Garner D.L. Assessment of spermatozoal function using dual fluorescent staining and flow cytometric analyses /Garner D.L. // Biol. Reprod. 1986. -v. 34. - № Г.-p. 127-138.

107. Gamer D.L., Johnson L.A. Viability assessment of mammalian sperm using SYBR-14 and propidium iodide /Garner D.L., Johnson L.A. // Biol. Reprod. 1995. - v. 53. - p. 276-284.

108. Grafter Т. Effect of catalase on fertility results of frozen bull semen /Grafter Т. // 11 Int. Congr. Anim. Reprod. and A.I. Dublin, Ireland.- 1988.-v. 3. p. 264.

109. Graham J.K., Hammersteadt R.H. Differential effects of butylated hydroxytoluence analogs on bull sperm subjected to cold-induced membrane stress /Graham J.K., Hammersteadt R.H. // Cryobiology. 1922. - v. 29. - p. 106-117.

110. Graham j.k., Foote R.H. Effect of several lipids, fatty acyl chain length and degree of unsaturation of the motility of bull spermatozoa after cold shock and freezing /Graham J.K., Foote R.H.// Cryobiology. 1987. - v. 24. - p. 42-52.

111. Graham J.K., Kunze E., Hammerstedt R.H. Analysis of sperm cell viability, acrosomal integrity and mitochondrial function using flow cytometry /Graham J.K., Kunze E., Hammerstedt R.H.// Biol. Reprod. 1990. -v. 43. -№ l.-p. 55-64.

112. Hammerstedt R.H., Parks J.E. Changes in sperm surfaces associated with epididymal transit /Hammerstedt R.H., Parks J.E. // J. Reprod. Fert. 1987. -suppl. 34.-p. 133-149.

113. Harrison R.A., Hancock D.D., Conrad H.R. Vitamin E and selenium for reproduction of the dairy cows /Harrison R.A., Hancock D.D., Conrad H.R. // J. Dairy Sci. 1984. - v. 67. - p. 123-132.

114. Jeyendran R. Development of an assay to assess the functional integrity of the human sperm membrane and its relationship to their semen characteristics /Jeyendran R.// J. Reprod. Fert. 1984. - v. 70. - №1. - p. 218-219.

115. Jones R.C. Influence of diluents and processing times after ejaculation on the survival of deep-frozen ram spermatozoa /Jones R.C.// Austr. J. Biol. Sci.- 1969. v. 22. - № 4. - p. 995 - 1004.

116. Jones R., Mann T. Lipid peroxidation in spermatozoa /Jones R., Mann T.// Proc. R. Soc. Lond. 1973 - v. 184. - p. 103-107.

117. Jones R., Mann T. Lipid peroxidation in spermatozoa : formation, role of plasmologen and physiological significance /Jones R., Mann T.// Proc. R. Soc. Lond. В.-1976.-v. 193.-p. 317-333.

118. Jones R., Stewart D. The effect of cooling to 5°C and freezing and thawing on the ultrastructure of bull spertizoa /Jones R., Stewart D.// J. Reprod. Fert. -1979.-v. 56.-№ l.-p. 233-238.

119. Junca A.M., Man delblaun G., PlachotM. Test de fecondance du sperme human : iteret, limites, perspectives /Junca A.M., Man delblaun G., Plachot M. // Contr. Fertil. Sexual. 1984. - v. 12. - № 3. - p. 491-494.

120. Kampachmidt R.F., Meyer D.T., Herman H.A. Lipid and lipoprotein constituents of edg — yolk in the resistence and storage of bull spermatozoa /Kampachmidt R.F., Meyer D.T., Herman H.A. // J.Daily Sci. 1953. - v. 36. - № 3 - p. 733 - 742.

121. Killian G., Honadel Т., McNutt Т. e.a. Evaluation of butylated hydroxytoluence as a cryopreservative added to whole or skim milk diluent for bull sperm /Killian G., Honadel Т., McNutt T. e.a. // J. Dairy Sci. 1989. -v. 72.-p. 1291 - 1295.

122. Kjaestad H., Ropstad E., Andersen Berg K. Evaluation of spermatological parameters used to predict the fertility of frozen bull semen /Kjaestad H., Ropstad E., Andersen Berg K. // Acta Vet. Scand. 1993. - v. 34. - p. 299303.

123. Kreider J.L., Tindall W.C., Potter G.D. Inclusion of bovine serum albumin in semen extenders to enhance maintenance of stallion sperm viability /Kreider J.L., Tindall W.C., Potter G.D. // Theriogenology. 1985. - v. 23. -p. 399-408.

124. Kruu V.J., Keith A.D. The importance of cell membrane lipids in cryobiology /Kruu V.J., Keith A.D.// Cryobiology. -1975. -v. 12. № 6.- p. 553.

125. Kunze C., Peter W., Mudra K. e.a. Vergleich ende Untersuchungen zur Gefrierkonservirung von Ebersperma /Kunze C., Peter W., Mudra K. e.a.// Arch. Exper. Vet Med. 1982. - v. 36. - № 1. - p. 133-139.

126. Levitt J.A. Sulphydril disulfide hypothesis of frost ihjurity and resistance in plants /Levitt J.A. // J. Theoret. Biol. - 1962. - № 3. - p. 183

127. Linford E. The relationship between semen evaluation methods and fertility in the bull /Linford E. // J. Reprod. Fert. 1976. - v. 47. - p. 283-291.

128. Lovelock J.E., Bishop M.W. Preventation of fruziny damage to living cell by dimethyl sulphoxide /Lovelock J.E., Bishop M.W.// Nature. -1959.-v. 183.-p. 1384- 1395.

129. Luyet B.J., Gehenio P. Life and death at low temperatures /Luyet B.J., Gehenio P. // Biodynamica. 1940 - p. 1 - 341.

130. Mahmoud M.F. Comparative study of the phosphatases activity in fresh and frozen semen of bovine /Mahmoud M.F. // Ind . Vet. J.- 1986. -v. 63. № 5.-p. 393-396.

131. Mann T. The biochemistry of semen and of the male reproduction tract. /Mann T.//-N-Y. —1964.

132. Maryman H.T., Williams R.J., Douglas M.S. Freezing injurey from "Solution effect" and its prevention by natural or artificial cryoprotection /Maryman H.T., Williams R.J., Douglas M.S.// Cryobyology. 1977. - v. 14. - № 3. - p. 287-302

133. Mazur P. Kinetics of water loss from sell at subzero temperatures and the likelihood of intracellular freezing /Mazur P.// J. Gen. Physiol. 1963. - v. 47.-p. 347-369.

134. Mazur P. Cryobiology: the freezing of biological systems /Mazur P.// Science. 1970. - v. 168. - № 5153 - p. 939-959.

135. Mazur P. The role of intracellulare fruzing in the death of cell cooled at supraoptimal rates /Mazur P. // Cryobiology. 1977. - v. 14. - p. 251 - 272.

136. Mazur P. Freezing of living cells : mechanisms and implications /Mazur P. // Am. J. Physiol. 1984. - v. 247. - p. 125 - 142.

137. Melrose D.R. Artificial insemination in cattle /Melrose D.R.// In: Maule J.P. (Ed). The semen of animals and artifitial insemination. Commowealth Agricultural Bureau, Farnham Royal, Bucks, England. 1962. — p. 1 - 181.

138. Mohan G., Sahni K.L., Dhami A.J. e.a. Prediction of freezability on the basis of seminal plasma enzymatic profiles in Murrah, Friesian and crossbred bulls /Mohan G., Sahni,K.L., Dhami A.J. e.a. // Ind. J. Anim. Sci. 1992. - v. 62;-№ 9.-p; 811-815.

139. Nagase H., Niwa N; Deep- freezing bull semen in concentrated pellet form /Nagase H., Niwa N. // 5 Int. Congr. Animal Reprod. Trento. 1964. - v. 4 -p. 410-415.

140. Nagase H. Protective effect of poliols against freezing injury of bull spermatozoa /Nagase H. // 6 Int. Congr. Anim. Reprod. and A.I. Paris. -1968.-v. 2.-p. 1103.

141. Nath J. Correlative biochemical and ultrastructural studies on the mechanism of freezing damage the ram semen /Nath J.// Cryobiology. 1972. - v. 9. - p. 240-246.

142. Pace M., Graham E. Components in egg yolk wich protecr bovine spermatozoa during freezing /Расе M., Graham E. // J.Anim.Sci. 1974. - v. 39.-p. 1144-1149.

143. Pangawkar G.R., Sharma R.D. Phosphatase and transaminase activity in the seminal plasma of bull in relation to freezability of semen /Pangawkar G.R., Sharma R.D. // Theriogenology. 1988. - v. 29. - № 6 - p. 1393 -1399.

144. Parkinson T. J., Whitfield C. Optimisation of freezing condition for bovine spermatozoa /Parkinson T. J., Whitfield C. // Theriogenology. 1987. - v. 27. -p. 781-797.

145. Phillips P.H., Lardy H.A. A yolk buffer pabulum for the preservation of bull semen /Phillips P.H., Lardy H.A. // J. Dairy Sci. - 1940. - v. 23. - p. 339404.

146. Philpott M. The dangers of disease transmission by artificial insemination and embryo transfer /Philpott M. // Br. Vet. J. 1993. - v. 149. - p. 339 -369.

147. Pickett В., Hall R.C., Lucas J.J.e.a. Investigations on thawing frozen bovine spermatozoa /Pickett В., Hall R.C., Lucas J.J.e.a.// Fertil. Steril. 1965. - v. 16.-p. 642-651.

148. Plammer J.M., Robertson L., Watson P.F. Accumulation' of calcium in cold-shocked spermatozoa of the ram and its intracellular localization using pyroantimonate /Plammer J.M., Robertson L., Watson P.F. // J. Physiology. -1985.- v. 365. -№ l.-p. 65.

149. Polge С., Smith A.I., Parkers A.S. Revival of spermatozoa after vitrification and degidratation at low temperature /Polge C., Smith A.I., Parkers A.S. // Nature. ~ 1949. v. 164. - № 4172.- p. 666-667.

150. Polge C., Rowson L.E. Fertilization capacity of bull spermatozoa after freezing at -79°C /Polge C., Rowson L.E. // Nature. 1952. - v. 169. - № 4307. - p. 626-627.

151. Prendergast E., Vishwanath R., Shannon P. e.a. Charged lipoprotein fractions of egg yolk in bovine semen diluents /Prendergast E., Vishwanath R., Shannon P. e.a. // Proc. 26 Ann. Conf. Austr. Soc. Reprod. Biol. -Brisbane. 1994. - v. 26. - p. 113.

152. Robertson L., Watson P. Calcium transport in diluted or cooled ram semen /Robertson L., Watson P. // J. Reprod. Fertil. 1986. - v. 77. - p. 177-185.

153. Rodrigues Martinez H. Optimization of sperm quality in A.I. bulls /Rodrigues - Martinez H. // Reprod. Domest. Animals - 1998. - v. 33. - p. 233-237.

154. Salisbury G.W., Van Demark N. L. Physiology of reproduction and artificial insemination of cattle /Salisbury G.W., Van Demark N. L.// Freeman, San Francisko. 1961.

155. Saton K. Serum lipid peroxide in celebrovascular disorders determined by a new colorimetric method /Saton K. // Clinica Chemica Acta. 1978. - v. 90. -p. 37-43.

156. Skripsky V.P., Barclay M. Methods of phospholipids analysis /Skripsky V.P., Barclay M. II Meth. Enzym. 1982. - v. 14. - p. 530.

157. Slaweta R., Laskowska T. The effect of glutathione on the motility and fertility of frozen bull sperm /Slaweta R., Laskowska T. // Anim. Reprod. Sci. 1987. - v. 4.-p. 249-253.

158. Steinbach J., Foote R. Effect of catalase and anaerobic conditions upon the post thawing survival of bovine spermatozoa frozen in citrate and tris -buffered yolk extenders /Steinbach J., Foote R. //J. Dairy Sci. - 1964. - v. 47. -p. 812-815.

159. Taylor M.J., Richardson T. Antioxidant activity of skim milk: effect of sonification /Taylor M.J., Richardson T. // J. Dairy Sci. 1980. — v. 63. - p. 1939-1942.

160. Thibier M., Guerin B. Hygienic aspects of storage and use of semen for artificial insemination /Thibier M., Guerin B. // Anim. Reprod. Sci. 2000. -v. 62.-p. 233-251.

161. Thomson J.G., Cummins J.M. The effect of washing and protein supplementation on the acrosome reaction of ram spermatozoa in vitro /Thomson J.G., Cummins J.M. // Anim. Reprod. Sci. 1985. -v. 9. - № 1. ~ p. 75-78.

162. Upreti G.C., Oliver D.M., Dyganzich D.M. e.a. Development of a chemically ram semen diluent (RSD-1) /Upreti G.C., Oliver D.M., Dyganzich D.M. e.a. //Anim. Reprod. Sci. 1995. - v. 37. - p. 143-157.

163. Urban F., Zizlavsky J. Vliv laseroveno zareni na reprodukci scotu /Urban F., Zizlavsky J.// Acta Universitatis agriculturae. 1993. - v. 41. - p. 261 -271.

164. Vishwanath R.Results of LIC research; Trial 2. Straw thawing /Vishwanath R. // N Z. Dairy Exporter. - 1998. - v. 73. - p. 122.

165. Watson P.F. The preservation of semen in mammals /Watson P.F. // Oxford Rev. Reprod. Biol. 1979. - v. l.-p. 283-350.r>

166. Watson P.F. The roles of lipid and protein in the protection of ram spermatozoa at 5°C by egg yolk lipoprotein /Watson P.F. // J. Reprod. Fertil. 1981. - v. 62. - p. 482-492.

167. Wishart G. Maintenance of ATP of fertilizing ability of fowl sperm /Wishart G. // J. Reprod. Fert. 1982.- v. 66. - p. 457-462.

168. Woelders H. Fundamental and recent development in cryopreservation of bull and boar semen /Woelders H. // Vet, Q. -1997. v. 19. - p. 135-138.

169. Wrathall A.E. Risks of transmitting scrapic and bovine spongiform encephalopathy by semen and embryos /Wrathall A.E. // Rev. Sci. Tech. OIE. 1997.-v. 16.- p. 240-264.

170. Yanagimachi R., Yanagimachi H., Rogers B.J. The use of zona-free animal ova as a test-system for the assessment of the fertilizing capacity of human spermatozoa /Yanagimachi R., Yanagimachi H., Rogers B.J. // Biol. Reprod. 1976. - v. 15.-p. 471-476.