Биологические особенности и криоустойчивость спермы собак тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 06.02.01, кандидат биологических наук Квичко, Илья Львович

• Квичко, Илья Львович
• кандидат биологических наук
• 1999

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Квичко, Илья Львович

СОДЕРЖАНИЕ

Стр.

ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Физиологические и биохимические особенности спермы собак

1.2. Механизмы повреждений сперматозоидов животных при криоконсервации

1.3. Криопротекция семени животных при замораживании

1.4. Криоконсервация спермы и искусственное осеменение собак

2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЙ

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Морфологические и физиологические показатели

спермы собак

3.2. Фосфолипидный состав сперматозоидов собак

3.3. Жирнокислотный состав липидов сперматозоидов собак

3.4. Устойчивость спермы собак к перекисному окислению липидов

3.5. Активность антиоксидантных ферментов в нативной

и криоконсервированной сперме собак

3.6. Содержание АТФ в нативной и криоконсервированной

сперме собак

3.7. Влияние различных веществ и факторов на устойчивость

спермы собак к замораживанию

3.7.1. Влияние концентрации лактозы

3.7.2. Влияние концентрации глицерина

3.7.3. Эффективность замораживания спермы в зависимости

от концентрации желтка

3.7.4. Криопротективное влияние низкомолекулярных тиолов

3.7.5. Влияние синтетических жирорастворимых антиоксидантов

3.7.6. Протективная эффективность поверхностно-

активных веществ

3.7.7. Криоустойчивость спермы собак в зависимости от

состава среды

3.8. Криовыживаемость сперматозоидов собак в зависимости

от температуры и способа оттаивания

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

ВЫВОДЫ

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Биологические особенности и криоустойчивость спермы собак»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность работы. Искусственное осеменение животных является высокоэффективным методом улучшения породных и продуктивных качеств животных. В настоящее время метод искусственного осеменения сельскохозяйственных животных применяется во всем мире для ускорения генетического прогресса в животноводстве.

Однако, данный метод пока недостаточно широко используется в племенной работе с собаками, хота в последние годы во многих странах мира возрос интерес к проблемам их искусственного осеменения с использованием замороженной спермы.

С помощью метода искусственного осеменения можно решить ряд проблем в собаководстве. В частности, при использовании замороженной спермы, возможно её накопление от выдающихся производителей и длительное хранение в криобанке в течение многих лет. Использование крио-консервированной спермы позволяет производить её международный обмен без необходимости перевозки самих собак. При этом появляется возможность заказного осеменения сук спермой любого производителя.

Искусственное осеменение позволяет предотвращать возникновение многих заболеваний, передающихся половым путём, так как в состав синтетических разбавителей спермы обязательно вводятся антибиотики и исключается половой контакт животных.

Слабое внедрение в практику данного метода обусловлено низкой фертильностью замороженно-оттаянной спермы собак. В частности, при обычном влагалищном введении криоконсервированной спермы, опло-дотворяемость сук не превышает 30-40%.

Биологические причины данного явления изучены пока очень слабо и требуют дальнейших всесторонних исследований.

В этой связи особую актуальность приобретают вопросы изучения биологических особенностей спермы собак в связи с её криоустойчи-востью.

Кроме того, не менее важное значение имеют вопросы разработки более совершенных методов повышения устойчивости спермы собак к

глубокому замораживанию.

Цель и задачи исследований. Целью данной работы является изучение биологических особенностей спермы собак и влияние ряда факторов на её устойчивость к глубокому замораживанию.

Для достижения этой цели в диссертации были поставлены следующие задачи:

- изучить биохимические особенности спермы собак;

- определить устойчивость спермы собак к перекисному окислению ли-пидов в процессе криоконсервации;

- выяснить содержание антиоксидантных ферментов в нативной и крио-консервированной сперме собак;

- определить влияние криообработки на содержание АТФ в сперматозоидах;

- изучить влияние ряда факторов на устойчивость спермы собак к глубокому замораживанию;

- исследовать криопротективное влияние низкомолекулярных тиолов, жирорастворимых антиоксидантов и некоторых поверхностно-активных веществ;

- выяснить оптимальные режимы оттаивания спермы собак в гидроот-таивателе.

Научная новизна исследований. Впервые изучено содержание антиоксидантных ферментов в сперме собак и её устойчивость к перекисному окислению липидов в процессе криоконсервации. Выяснено содержание АТФ в нативных и криоконсервированных сперматозоидах собак.

Впервые проведено сравнительное изучение влияния на устойчивость сперматозоидов к замораживанию низкомолекулярных тиолов и жирорастворимых антиоксидантов. Определено влияние некоторых факторов на криоустойчивость спермы собак. Доказана более высокая эффективность повышенных температур оттаивания спермы собак, замороженной в виде гранул.

Практическая значимость. Использование низкомолекулярных тиолов - восстановленного глутатиона и унитиола, повышает подвижность и

живучесть оттаянных сперматозоидов. Введение в состав замораживающей среды для спермы собак жирорастворимых антиоксидантов ИХФГАН-3 и БОТ, повышает криоустойчивость сперматозоидов. Оттаивание спермы собак при повышенных температурах (60-80°С) способствует повышению подвижности и живучести сперматозоидов.

Хемилюминесцентный метод определения концентрации АТФ в сперматозоидах собак может использоваться в качестве лабораторного экспресс-метода оценки биологической полноценности криоконсервиро-ванной спермы.

Апробация работы. Основные материалы диссертации доложены

на:

- учёном совете ВНИИплем, 1998;

- научно-производственной конференции "Повышение конкурентоспособности животноводства и задачи кадрового обеспечения". РАМЖ. 1998;

- расширенной межотдельской конференции ВНИИплем, 1999.

Публикации по результатам исследований. По теме диссертации опубликовано 4 статьи.

Заключение диссертации по теме «Разведение, селекция, генетика и воспроизводство сельскохозяйственных животных», Квичко, Илья Львович

ВЫВОДЫ

1. Установлено, что у собак крупных пород объём эякулята был выше соответственно в 1,6 и 2,4 раза по сравнению со средними и мелкими породами. У собак средних пород была выше концентрация сперматозоидов: 280 млн/мл против 210 и 180 млн у крупных и мелких пород.

2. В сперматозоидах собак выявлено более высокое содержание фосфати-дилхолина и докозапентаеновой жирной кислоты по сравнению со сперматозоидами других сельскохозяйственных животных.

3. Глубокое замораживание спермы собак индуцирует реакцию перекис-ного окисления липидов. Концентрация малонового диальдегида в образцах оттаянных сперматозоидов повышалось на 22% по сравнению с нативными образцами.

4. Установлено, что в сперматозоидах и семенной плазме собак отсутствует антиоксидантный фермент - глутатионредуктаза. Основным ан-тиоксидантным ферментом в сперме собак является супероксиддисмута-за.

5. Процесс замораживания-оттаивания индуцирует выход супероксид-дисмутазы из сперматозоидов собак. Через 15 мин. после оттаивания, активность данного фермента в инкубационной среде повысилась в 2,3 раза по сравнению с незамороженными образцами (Р<0,01).

6. Выявлено более высокое содержание АТФ в нативных сперматозоидах собак (25,2 ± 1,9 нмоль/108 клеток) по сравнению с другими сельскохозяйственными животными. После замораживания-оттаивания концентрация АТФ в сперматозоидах снижалась на 51% (Р<0,01).

7. Низкомолекулярные тиолы - восстановленный глутатион и унитиол оказали высокое защитное влияние при замораживании спермы собак в ЛГЖ среде.

8. Показано, что введение в состав ЛГЖ среды синтетического жирорастворимого антиоксиданта ИХФГАН-3 в дозе 0,04 мг/мл, повысило на 22% подвижность оттаянных сперматозоидов и на 52% их живучесть (Р<0,05).

9. При замораживании спермы собак в ЛГЖ среде получены лучшие результаты подвижности и живучести сперматозоидов по сравнению с желточно-трисовой средой.

Ю.Выяснено, что оптимальными условиями оттаивания спермы собак, замороженной в виде гранул, является оттаивание в гидроотгаивателе при температуре 60-80°С.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Предлагаем кинологическим организациям для практических испытаний лактозо-глицерино-желточно-антиоксидантную среду для замораживания спермы собак, содержащую: вода дистиллированная - 100 мл; лактоза - 11 г; глицерин - 6 мл; желток куриного яйца - 20 мл; ан-тиоксидант ИХФГАН-3 или восстановленный глутатион - 6 мг.

2. Для оттаивания спермы собак, замороженной в виде гранул, предлагаем использовать гидроотгаиватель с рабочей температурой оттаивания 60-80°С.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Квичко, Илья Львович, 1999 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Афанасьев И.Б. Свободно-радикальные ингибиторы и промоторы в биологических процессах .//Кислородные радикалы в химии, биологии и медицине. Рига, РМИ.- 1988.- С. 9-25.

2. Антонюк B.C. Биохимический контроль за качеством спермы хряков.// Доклады ВАСХНИЛ.- 1980.- № 1.- С. 27-30.

3. Белоус A.M., Гордиенко Е.А., Розанов Л.Ф. Замораживание и крипро-текция. М. Высшая школа.- 1987.

4. Белоус A.M., Бондаренко В.А. Структурные изменения биологических мембран при охлаждении. Киев. Наукова Думка.- 1982.-256 с.

5. Бугров А.Д., Шинкаренко Н.И., Дистанов Б.Г. Исследование криофи-лактических свойств диметилформамида при замораживании спермы быков.// Тез. докл. научно-произв. конференции по теории и практике воспроизводения животных.- Харьков.- 1972.- С. 58-61.

6. Владимиров Ю.А. Свободные радикалы в живых системах.// ВИНИТИ. Итоги науки и техники. Серия Биофизика.- 1991.- Т. 29.- С. 18-20.

7. Варнавский А.Н. Влияние метода замораживания и глицерина на подвижность и ультраструктуру живчиков.//Овцеводство.- 1970.- № 8.- С. 22-23.

8. Варнавский А.Н., Турбин В.Ф., Осадчук B.C. Подвижность и ультраструктура живчиков быка в процессе технологической обработки.// Технология искусственного осеменения и биология воспроизведения с.-х. животных.- М.-Колос.- 1972.-С. 162-175.

9. Гаврилов В.Б., Мишкорудная М.И. Спектрофотометрическое определение содержания гидроперекисей липидов в плазме крови.// Лабораторное дело.-1983.- № 3.- С. 33-35.

Ю.Голубь B.C. Липиды семенника, придатка и живчиков барана и быка.// Автореф. дисс... канд. биол. наук.- Дубровицы.- 1972.- 16 с.

И.Гуськов A.M., Дарий Г.Е., Пузына Г.И. Повышение репродуктивной способности животных методом ингибирования перекисного окисления липидов.//Доклады ВАСХНИЛ.- 1993.- № 2.- С. 71-73.

12.Гуськов A.M. Криогенные изменения липидов и функциональная пел ноценность гамет хряков и быков.// Автореф. дисс.... канд. биол. наук.-Львов.- 1984.- 24 с.

1 З.Грэхем Е.Ф. Криоконсервация и биохимическая оценка спермы быков и баранов.// Физиология воспроизведения с.-х. животных.- Харьков.-1977.-С. 25-51.

14.Данов Д.Т., Ковачев К.Д., Попов Д.В. Изследования въерху ультрас-труктурните изменения на сперматозоидите на коча при криоконсерва-ция.//Криобиология на половите клетки.- София.- 1983.- С. 155-173.

15.Ерохин A.C., Платов Е.М., Тимофеев К.Н. Структурное состояние мембраны сперматозоидов барана и быка после криовоздей-ствия .//Доклады ВАСХНИЛ.- 1989.- №3.- С. 19-21.

16.Ерохин A.C., Деряженцев В.И. Перекисное окисление липидов в сперме баранов.// Овцеводство.- 1991.- № 3,- С. 17-19.

17.Ерохин A.C., Чернова И.Е. Влияние тиолов на криоустойчивоеть спермы баранов.// Овцеводство.- 1992.- № 4.- С. 22-23.

18.Ерохин A.C. Физиологические аспекты криорезистентности спермы баранов и быков.// Автореф. дисс... докт. биол. наук. Дубровицы.- 1994.

19.Ерохин A.C., Деряженцев В.И., Аксютина М.С. Изучение перекисного окисления липидов в сперматозоидах барана и быка методом индуцированной хемилюминесценции.//Доклады ВАСХНИЛ,- 1992.- № 1.- С. 50-53.

20.Ерохин A.C., Коган И.Г., Барсель В.А. Активность суперокеиддисму-тазы в сперме барана и быка при криоконсервации.// Сельскохозяйственная биология.- 1995.- № 4.- С. 50-54.

21.Ерохин A.C., Сейдахметов Б.С., Ланкин В.З. Изменение активности антиоксидантных ферментов в сперме баранов и быков при криообра-ботке.//Доклады РАСХН.- 1996.- № 5.- С. 30-32.

22.Ерохин A.C., Лехмус И.А. Определение содержания АТФ биолюминесцентным методом в сперматозоидах барана после криообработки.// Доклады РАСХН.- 1996.- № 1.-С. 32-34.

23.Ерохин A.C., Нарижный А.Г., Крук H.B. Влияние метода криоконсер-вации на содержание АТФ в сперматозоидах хряков и их фертиль-ность.// Консервация генетических ресурсов. Пущино.- 1996.- С. 52-53.

24.Ерохин A.C., Никифоров Г.А., Епишина Т.М. Криозащитное действие новых синтетических антиоксидантов при криоконсервации спермы баранов.// Сельскохозяйственная биология.- 1996.- № 6.- С. 62-67.

25.3верева Г.В., Чухрий В.Н., Клевец Л .А. Сукцинадегидрогеназная активность спермы быков и качество спермы.// Сельскохозяйственная биология.- 1989.- № 6.- С. 30-33.

26.Иванов PI .И., Андреев H.H. Исследование на ферменты семенной жидкости собак.// Архив ветеринарных наук.- 1916.- Кн. 5.- С. 39.

27.Кононов В.П. Глубокое замораживание семени хряков. Новое в теории и практике./ЛГеория и практика воспроизведения животных. М.-Колос.- 1984.

28.Кононов В.П. Замораживание семени хряка. Теория и практи-ка.//Автореф. дисс... докт. биол. наук. Дубровицы.- 1982.

29.Кононов В.П. Достижения и перспективы замораживания семени в свиноводстве.// Обзорная информация. М.- 1983.- 75 с.

30.Касымов К.Т. Оплодотворяемость и плодовитость овец, осеменённых глубокозамороженной спермой .//Доклады ВАСХНИЛ.- 1978.- № 7.- С. 50-53.

31.Курбатов А.Д., Платов Е.М., Корбан Н.В. и др. Криоконсервация спермы с.-х. животных. Л.: Агропромиздат.- 1988.

32.Ланкин В.З., Гуревич С.М. Доклады АН СССР.- 1976.- Т. 22.- № 3.- С. 705-710.

33.Милованов В.К. Биология воспроизведения и искусственное осеменение животных. М.- 1962.

34.Милованов В.К., Соколовская И.И. Теория и практика воспроизведения животных. М.- 1984.

35.Милованов В.К., Соколовская И.И. Теория холодового удара живчиков млекопитающих.//Доклады ВАСХНИЛ.- 1959.- № 8.- С. 3-9.

36.Милованов В.К., Жильцова Л .С. Комплексонаты в средах для семени сельскохозяйственных животных.// Вестник с.-х. науки.- 1982,- № 2.- С. 58-66.

37.Милованов В.К., Парамонова Л.И., Лизунков А.Ф. Использование каратиноидов при криоконсервации спермы // Доклады ВАСХНИЛ.-1988.-№ 11.-С. 33-35.

38.Мороз Л.Г., Рустенов А.Р., Шапиев И.Ш. и др. Значение серосодержащих соединений в устойчивости спермы к замораживанию.// Доклады ВАСХНИЛ.- 1990.- № 9.- С. 51-56.

39.Маринов П.И., Грудова Ч.Н., Семков П.М. и др. Изпитване влиянисто на разредители, съдържащие антиоксиданты, върху замразяемостта на овчи сперматозоиди.// Криобиология на половите клетки. София.-1983.-С. 102-111.

40.Наук В.А., Гуськов A.M. Особенности перекисного окисления липидов при замораживании спермы быков и хряков.//Доклады ВАСХНИЛ.-1983.-№2.-С. 27-29.

41.Наук В.А. Криоконсервация семени животных. Криоконсервация генетических ресурсов. Пущино.- 1982.

42.Наук В.А. Структурно-биохимические особенности гамет самцов сельскохозяйственных животных при криоконсервации.// Известия АН МССР.- 1987.- № 5.- С. 49-54.

43.Нарижный А.Г., Ерохин A.C. Активность супероксиддисмутазы в на-тивной и криоконсервированной сперме хряков.// Доклады РАСХН.-1995.-№1.-С. 37-38.

44.0сташко Ф.И. Глубокое замораживание и длительное хранение спермы производителей. Киев: Урожай.- 1978.- 254 с.

45.0сташко Ф.И. Причины и механизмы холодового удара клеток.// Международный сельскохозяйственный журнал,- 1964.- № 3.- С. 106109.

46.0йвадис Р.Н., Соколовская И.И., Абилов А. Морфология гамет самцов сельскохозяйственных животных как критерий биологической

полноценности.// Морфологические исследования в практике здраво хранения и животноводства. М.: Наука.- 1984.- С. 114-148.

47.Платов Е.М. Теоретические и практические основы замораживания семени производителей с.-х. животных.// Дисс... докт. биол. наук. Дуб-ровицы.- 1973,- 34 с.

48.Пушкарь Н.С., Белоус A.M., Цветков Ц.Д. Теория и практика криогенного и сублимационного консервирования. Киев: Наукова Думка.-1984.

49.Парамонова Л.И., Ревина A.A., Лизунков А.Ф. Взаимодействие каро-тиноидов с супероксиданион-радикалом в связи с их стабилизирующим действием при криоконсервации спермы.//Доклады ВАСХНИЛ,- 1989.-№11.-С. 33-34.

ЗО.Смирнов И.В. Сохранение спермы сельскохозяйственных животных посредством глубокого охлаждения.// Дисс... канд. биол. наук.- М.-1949.

51.Смит О. Биологическое действие замораживания и переохлаждения. М.- 1963.

52.Соколовская И.И., Оивадис Р.Н., Абилов А. О значении акросомы в оценке семени самцов.// Животноводство.- 1981.- № 3.- С. 45-51.

53.Соколовкская И.И. Может ли замороженная сперма оплодотворять и давать нормальное потомство.// Доклады ВАСХНИЛ- 1947.- № 6.-С.21-23.

54.Семаков В.Г. Активность сукцинатдегидрогеназы в процессе замораживания и оттаивания спермы быков и хряков.// Доклады ВАСХНИЛ.-1984.-№2.-С. 26-27.

55.Станева Л.Л., Бояджиева-Михайлова А.Г., Манова-Тодоркова К.О. Ролята на цикличните нуклеотиди в регулацията на метаболизма и мо-тилитета на сперматозоидите.// Криобиология на половите клетки. София.- 1983.-С. 72-83.

56.Солсбери Г.У., Ван-Демарк Н.Л. Теория и практика искусственного осеменения коров в США.- М.:Колос.- 1966.

57.Семёнова В.А. Защитные свойства отдельных факторов желтка куриного яйца при замораживании семени животных.// Автореф. дисс... канд. биол. наук. Дубровицы. -1987.

58.Угарова Н.И., Бровко Л.Ю., Трдян И.Ю. Оптимизация биолюминесцентного метода определения микробной биомассы.// Прикладная биохимия и микробиология.- 1991.- Т. 27.- № 1.- С. 134-141.

59.Шайдуллин И.Н. Усовершенствование метода замораживания семени барана путем применения антиоксидантов.// Автореф. дисс... канд. биол. наук. Дубровицы. - 1980.

60.Amann R.P. Reproductive physiology and endocrinology of the dog.// Current therapy in theriogenology. 2 nd.ed. Philadelphia: Saunders.- 1986.-P. 532-538.

61 .Abu-Erreish G., Magnes L., Li Т.К. Isolation and properties of superoxide dismutase from ram spermatozoa and erytrocytes.// Biology of Reproduction.- 1978.- V. 18.- P. 554-560.

62.Alvarez J., Storey B. Role of superoxide dismutase in protecting rabbit spermatozoa from O2 toxicity due to lipid peroxidation.// Biology of Reproduction.- 1983.- V. 28.- P. 1129-1136.

63.Aalbers J.G., Jonson L.A., Aalbares-Smith E.A. e.a. ATP content of fresh and frozen-thawed boar semen and its relationship to sperm concentration and fertility.// First Int. Conf. Deep Freezing Boar Semen. Uppsala.- 1985.-P. 38-45.

64.Andersen K. Fertility of frozen dog semen.// Acta Vet. Scand.- 1972.- V. 13.- P. 128-130.

65.Andersen K. Insemination with frozen dog semen based on a new insemination technique.//Zuchthygiene.- 1975.-V. 10.-P. 1-4.

66.A1-Khanak H., Visberg C., Zahariew Z. Studies on the protective effect of some fat-soluble vitamins during cryopreservation of bull semen.// Proc. 12 Int. Cong. Anim. Reprod.- 1992.- V. 3.- P. 1381 -1383.

67.Bamba K., Miyagawa N. Protection action of aromatic compounds against cold-schok injuries in boar spermatozoa.// Ciyobiology.- 1992.- V. 29.- P. 533-536.

68.Brzezinska-Slebodzinska E., Slebodzinski A.B., Pietras B. Antioxidant effect of vitamin E and glutathione on lipid peroxidation in boar semen plasma.// Biological Trace Element Research.- 1995.- V. 47.- № 1-3.- P. 6974.

69.Bartlett D J. Glycolytic enzymes in the spermatozoa and their leakage after shock//J. Reprod. Fert.- 1962.-V. 3.- P. 190

70. Benigni L. La capacitazione e la reazione acrosomiale negli spermatozoi di cane valutate con il test della clortetraciclina.// Tesi di Laurea. Pisa University. Italy.- 1997.

71.Battista M., Parks J., Concannon P. Canine sperm post-thaw survival following freezing in straws or pellet using pipes, lactose, tris or test extender.//11th Int. Congr. Anim. Reprod. and A.I. Dublin.- 1988.- V. 3.- P. 229-231.

72.Brown R. An update of artificial insemination with fresh, chilled and frosen semen. // Problems Veterinaiy Medecine.- 1992.- V. 4.- P. 445-453.

73.Brian B. The use of frozen semen from dogs in Canada. // The Canadian Veterinaiy Journal. -1986.- V. 27.- P. 161 -163.

74.Bouchard G.F., Morris J.K., Sikes J.D. et al. Effect of storage temperature, cooling rates and two different semen extenders on canine spermatozoal motility.//Theriogenology.- 1990.-V. 34.-P. 147-157.

75.Boucher J.H., Foote R.H., Kirk R.W. The evaluation of semen quality in the dog and the effect of frequency of ejaculation upon semen quality, libido and depletion of sperm reservs.// Cornell Vet.- 1958.- V. 48.- P. 67-86.

76.Conchie J., Mann T. Diacyl and alkyl ether phospholipids in ejaculated porcine of spermatozoa. // Nature. Lond.- 1957.- V. 179.- P. 1190.

77.Christiansen J. Reproduction in small mammals. Artificial insemination in dogs.// Dansk Veterinartidssk rift.- 1990.- V.73.- P. 638-652.

78.Concannon P.W., McCann J.P., Temple M. Biology and endocrinology of ovulation, pregnancy and parturition in the dog.// J. Reprod. Fert. Suppl.-1989.-V. 39.- P. 3-25.

79.Concannon P.W., Batista M. Canine semen freezing and artificial insemination.//In: Current Veterinaiy Therapy X. Philadelphia, W B Saunders.- 1989.- P. 1248-1258.

80.Darin-Bennet A., White I. influence of the cholesterol content of mammalian sperm on susceptibility to cold-schok.// Ciyobiology.- 1977.- V. 14.- P. 466-470.

81 .Darin-Bennet A., Poulos A., White I.G. The fatty acids and aldehydes of spermatozoan phospholipids.// Proc. Austr. Biochem. Soc.- 1973.- V. 6.- P. 29-34.

82.Doak R.L., Hall A., Dale H.E. Longevity of spermatozoa in the reproductive tract of the bitch.//J. Reprod. Fert.- 1967.- V.13.- P.51-58.

83.Dabas Y.P. A note on artificial insemination in dog.// Ind. Vet. Med. J.-1991.-V. 15.-P. 15:64.

84.England G.C.W. The cryopreservation og dog semen. Thesis Royal Vet. College, University of London. U.K.- 1992.- 155 p.p.

85.England G.C.W., Allen W.E., Factors affecting the viability of canine spermatozoa.// Theriogenology.- 1992.- V. 37.- P. 363-371.

86.England G.C.W., Edwards A.W., Blythe S.A. Variability of the time of calculated LH release in 218 canine pregnancy.//Veter. Record.- 1989.- V. 125.- P. 624-625.

87.Folch J., Lees M., Sloan-Stanley G. A simple method for the isolation and purification of total lipids from animal tissues.// J. Biol. Chem.- 1957.- V. 226.- P. 497-509.

88.Foulkes J.A., Mc Donalnd B.J. The relationship between ATP content and motility of bovine spermatozoa.// Theriogenology.- 1979.- V. 11.- P. 313319.

89.Foulkes J.A., Watson P.A. Hyaluronidase activity in seminal plasma as a method of assessing bull sperm integrity.// J. Reprod. Fertil.- 1975.- V. 43.-№2.- P. 349-353.

90.Farstad W. Bitch fertility after natural mating and artificial insemination with fresh or frozen semen.// J. Small Anim. Pract.- 1984.- V. 25.- P. 561565.

91.Farstad W. Semen cryopreservation on dogs and foxes.// Animal Reprodution Science.- 1996.- V. 42.- P. 251-260.

92.Froman D.P., Amann R.P., Riek P.M. Acrosin activity of canine spermatozoa as an index of cellular damage.// J. Reprod. Fert.- 1974.-V.70.-P. 301-308.

93.Foote R.H. Extenders for freezing dog semen.// Amer. J. Vet. Res.- 1964.-V. 25.- № 104.- P. 37-39.

94.Foote R.H. The effect of electrolytes, sugars, glycerol and catalase on survival of dog sperm stored in buffered-yolk mediums.// Am. J. Vet. Res.-1964.-V. 25.- P. 32-36.

95.Graham E.F., Rajamannan A.H., Schmehl M.K. Fertility studies with frozen boar spermatozoa.// A.I .Dig.- 1971.-V. 19.-P. 16-18.

96.Graham J.K., Hammersted R.H. Differential effects of butylated hydroxytoluence analog on bull sperm subjected to cold-induced membrane stress.// Ciyobiology.- 1992.- V. 29.- P. 106-117.

97.Gill H.P., Kaufman C.F., Foote R.H. et al. Artificial insemination of beagles bitches with freshly collected, ligued-stored and frozen-stored semen. // Am. J. Vet. Res.- 1970.- V. 31.- P. 1807-1813.

98.Huu F.P., Marquetly C., Pasquier C. Luminol assay for microdetermination of superoxide dismutase activity: its application to human fetal blood.//Anal. Biochem.- 1984.-V. 142.- P. 467-472.

99.Holt W.V., North R.D. Determination of lipid composition and thermal phase transition temperature in an enriched plasma membrane fraction from ram spermatozoa.//J. Reprod. Fertil.- 1985.- V. 73.- P. 287-293.

100.Hofmo P.O., Berg K.. Electron microscopical studies of membrane injuries an blue fox spermatozoa subjected to the process of freezing and.// Cryobioloy.- 1989.-V. 26.- P. 124-131.

101.Hammerstedt R.N., Amann R.P., Rucinsky T. e.a. Use of spin labels and elecrton spin resonance spectroscopy to characterize membranes of bovine sperm: effect of butylated hydroxytoluence and cold shock.// Biology of Reproduction.- 1976.- V. 14.- P. 381-397.

102.Healew P. Effect of freezing on the infrastructure of the spermatozoa of some domestic animal.// J. Reprod. Fertil.- 1969.- V. 18.- № 1.- P. 21-27.

103.Hewiit D.A., England G.C. An investigation of capacitation and the acrosome reaction in dog spermatozoa using a dual fluorescent staining technique.// Anim. Reprod. Sci.- 1997.- V. 51.- P. 321 -322.

104.Hendrikse J. De voortplanting en kunstmatige inseminative bij honden.// Tijdschr Diergeneesk.- 1962.-V. 87.- P. 1553-1565.

105.Harrop A.E. Artificial insemination of a bith with preserved semen.// Brit. Vet. J.- 1954.- P. 110: 424.

106.1vanova M.G., Nicolov I.I., Dacheva D.P. e.a. Testing of different media for cryopreservation of dog semen.// 12th Int. Congr. Anim. Reprod. Hague.- 1992.-V. 4.- P. 1776-1778.

107.1naba T., Matsui N., Shimizu R. e.a. Use of echography in bitches for detection of ovulation and pregnancy.// Vet. Record.- 1984.- V. 115.- P. 276-277.

108.Jones R., Mann T. Lipid peroxidation in spermatozoa : formation, role of plasmologen and physiological significance.// Proc. R. Soc. Lond. B.- 1976.-V. 193.- P. 317-333.

109.Jones R., Stewart D. The effect of cooling to 5°C and freezing and thawing on the ultrastructure of bull spermatozoa.// J. Reprod. Fertil.-1979.- V. 56.- JMe 1.- P. 233-238.

HOJones R., Playmate S.R. Evidence for the regulation of fatty acid in human sperm by docosahexaenoic acid.// Biol. Reprod.- 1988.- V. 39.- № 1 .P. 76-80.

lllJalkanen L. Artificial insemination of dog in Finland, 1991-1992.// Suomen Elainlaarilehti.- 1994.-V. 100.-P. 450-455.

112.Jeffcoate J.A., Lindsay F.E. Ovulation detection and timing of insemination based on hormone concentrations, vaginale cytology and the endoscopic appearance of the vagina in domestic bitches.// Reprod. Fert. Suppl.- 1989.- V. 39.- P. 277-287.

113.Kahn V.W., Pfetsh J., Leidi W. ATP, ADP und AMP Gehalt von Spermien Haustiere und des Mensehen sowie von Bullenspermien Wahrend der Tiefgef rierkonservierung.// Zuchthig.- 1982.-V. 17.- P. 49-55.

114-Killian G., Honadel T., McNutt T. e.a. Evaluation of butylated hydroxytoluene as a ciyopreservative added to whole or skin milk diluent for bull semen.// J. Daily Sei.- 1982.- V. 72.- P. 1291 -1295.

115.Kunze C., Peter W., Mudra K. e.a. Vergleich ende Untersuchungen zur Gefrierkonservierung von Ebersperma.// Arch. Exper. Vet. Med.- 1982.- V. 36.-№ l.-P. 133-139.

1 lö.Krogenaes A., Berg K.A., Hafne A.L. e.a. Membrane alterations in bulls spermatozoa after in vitro fertilization.// Acta Veter. Scand.- 1994.- V. 35.-№1.- P. 17-26.

117.Kreider J.L. Inclusion of bovine serum albumin in semen extenders to enhance maintenance of stallion sperm viability.// Theriogenology.- 1985.-V. 23.-№2.- P. 399-408.

118.King T.E., Marin T. Studies on the structure and function of lysozymes in animal semen. // Proc. Roy. Soc. B.- 1959.- V. 151.- P. 226.

119.Kawakami E., Vandevoort C.A., Mahi-Brown C.A. e.a. Introduction of acrosome reaction of canine sperm by homologous zona pellucida.// Biol. Reprod. - 1993.- V. 48.- P. 841-845.

120.Li T.K. The glutathione and thiol content of mammalian spermatozoa and seminal plasma.// Biology of Reproduction.- 1975.- V. 12.- P. 641-646.

121 .Linde-Forsberg C., Forsberg M. Fertility in dogs relation to semen qualite and the time and site of insemination with fresh and frozen semen.// J. Reprod. Fert. Suppl.- 1989.- V. 39.- P. 300.

122.Linde-Forsberg C. Artificial insemination with fresh, chilled extended and frozen-thawed semen in the dog.// Sem. Vet. Med. Surgeiy. (Small Anim.).-1995.-V. 10.-P. 48-58.

123.Linde-Forsberg C. Achieving pregnancy by using frozen or chilled extended semen. // Vet. Clin. Nort Am. Small Anim. Prac.- 1991- V.21.- P. 467-485.

124. Linde-Forsberg C. New regulation for the artificial insemination of dogs.// Svensk Veterinartidink.- 1989.-V. 41.- P. 973-978.

125.Levitt J. A sulphydril-disulfide hypothesis of frost injury and resistance in plants.//J. Theor. Biol.- 1962.- № 3.- P. 182.

126. Lovelock J.E. Denaturation of lipid-protein complex as a cause of damage by freezing.// Proc. Roy. Soc.B.- 1957.- V. 147.- № 2.- P. 427-433.

127.Luyet B.J., Gehenio P.M. Life and death at low temperatures.// Biodynamica.- 1940.- P. 1-340.

128.Morton D.B., Bruce S.G. Semen evaluation, cryopreservation and factor relevent to the use of frozen semen in dogs.// J. Reprod. Fert. Suppl.- 1989.-V. 39.- P. 311-314.

129.Morton D.B. Review on use of frozen semen in dog breeding.// Animal Technology.- 1986.- V. 37.- P. 67-71.

130.Maiyman H.T., Williams R.J., Douglas M.S. Freezing injurey from "solution effect" and its prevention by natural or artificial cryoprotection.// Ciyobiology.- 1977.- V. 14.- № 3.- P. 287-302.

131.Mazur P. Causes of injury in frozen and thawed cell.// Fed. Proc.- 1965.-Suppl.-V. 24.-P. 175-182.

132.Mann T. The biochemistry of semen and of the male reproductive tract. N.Y.- 1964.

133.Mahmud M.F. Comparative study of the posphatases activity on fresh and frozen semen of bovine.// Ind. Vet. J.- 1986.- V. 63.- № 5.- P. 393-396.

134.Mahi C.A., Yanagimachi R. Capacitation. acrosome reaction and egg penetration by canine spermatozoa in a simple defined medium.// Gamete Research.- 1978.-V. 1.- P. 101-109.

135.Martin J.G. The deep-freezing of spermatozoa in diluents containing skim milk.// Res. Vet. Sci.- 1963.- V. 4.- № 2.- P. 315-322.

136.Muller A. Effect of different diluents on sperm motility and acrosome integrity in fresh stored dog semen. // Anim. Breed. Abstr.- 1993.- V. 3.- P. 332-410.

137. Nath J. Correlative biochemical and ultrastructural studies on the mechanism of freezing damage the ram semen.// Ciyobiology.- 1971.- V. 9.-P. 240-246.

138.Nishimura K., Morri H. Effect of glutathione on the motility of frozen-thawed boar spermatozoa.// Anim. Sei. Technol.- 1993.- V. 64.- № 5.- P. 433.-439.

139.0lar T.T., Bowen R.A, Pickett B.W. Influence of extender, cryopreservative and seminal processing procedures on postthaw motility of canine spermatozoa a frozen in straw.// Theriogenology.- 1989.- V. 31.- P. 451-461.

140.0ettle E.E., Bowen R.A., Pickett B.W. Influence of extender, ciyopreservative and seminal processing procedures on postthaw motility of canine spermatozoa frozen in straws.// Theriogenology.- 1989,- V. 31.- № 2.- P. 451-461.

141 .Olson P.N., Nett T.M. Reproductive endocrinology and physiology of the bitch. // Current Therapy in Theriogenology.- 1986.- P. 453-457.

142.Pringle M.J., Chapman D. Biomembrane srtucture and effect of temperature.// Effect of low temperatures on biological membranes. London.- 1981.- P. 21-37.

143.Poulos A., Darin-Bennet A., White I.G. The phospholipid-bound fatty acids and aldehydes of mammalian spermatozoa.// Comp. Biochem. Physiol.- 1973.- V. 46 B.- P. 541-545.

144.Pursel V.G., Schulmann L.L., Johnson L.A. Effect of orvus es paste on acrosome morphology, motility and fertilizing capacity of frozen-thawed boar sperm.//J. Anim. Sei.- 1979.- V. 47.- P. 198-202.

145.Polge C., Smith A.U., Parkes A.S. Revival of spermatozoa after vitrification and degidratation at low temperature.// Nature.- 1949.- V. 164.- №4172.- P. 666-667.

146.Polge C., Rowson L.E. Fertilisation capacity of bull spermatozoa after freezing at -79°C.// Nature.- 1952.-V. 169.-JSfo 4307.- P. 626-627.

147.Pangawkar G.R„, Sharma R.D., Sharma R. Phosphatase and transaminase activity in the seminal plasma of bull in relation to freezability of semen.// Theriogenology.- 1988.-V. 29.-№6.- P. 1393-1399.

148.Plummer J.M., Robertson L., Watson P.F. Accumulation of calcium in cold-shocked spermatozoa of the ram and its intracellular localization using pyroantimonate.// J. Physiology.- 1985.- V. 365.- № 1.- P. 65.

149.Parks J., Meocham T.N., Saacke R.G. Cholesterol and phospholipids of bovine spermatozoa.// Biol. Reprod.- 1981.- V. 24.- № 2.- P. 399-404.

150.Province C.A., Amann R.P., Pickett B.W. et al. Extenders for preservation of canine and equine spermatozoa at 5°C. // Theriogenology.- 1984.- V. 22.-P. 409-415.

151.Quinn P.J. A lipid-phase separation model of low-temperature damage to biological membranes.// Ciyobiology.- 1985.- V. 22.- P. 128-146.

152.Quinn P.J., White I.G. The effect of cold shock and deep-freezing on the concentration of major cations in spermatozoa.// J. Reprod. Fertil.- 1966.-V. 12.- P. 263-270.

153.Rota A., Strom B., Linde-Forsberg C. e.a. Effects of equex STM paste on viability of frozen-thawed spermatozoa during in vitro incubation at 38°C.// Theriogenology.- 1997.-V. 47.-P. 1093-1101.

154.Rota A., Strom B., Linde-Forsberg C. Effect of seminal plasma and three extenders on canine semen stored at 4°C.// Theriogenology.- 1995,- V. 44.-P. 885-900.

155.Rota A., Iguer-Ouada M., Verstegen J. e.a. Fertility after vaginal or uterine deposition of dog semen frozen in a tris extender with or withaut equex STM paste.//Veterinaria.(Swed.).- 1998-V. 37.- P. 1-16.

156.Royere D., Hamamash S., Nicole J.C. e.a. Freezing and thawing alter chromatin stability of ejaculated human spermatozoa: fluorescence acridine orange staining and feulgen - DNA Cytophotometric studies.// Gamete Res.- 1988.-V. 21.- P. 51-57.

157.Robertson L., Watson P.F. Calcium transport in diluted or cooled ram semen.//J. Reprod. Fert.- 1986.-V. 77.-P. 177-185.

158 .Sa ton K. Serum lipid peroxide in cerebrovascular disorders determined by a new colorimetric method.// Clinica Chemica Acta.- 1978.- V. 90.- № 1.- P. 37-43.

159.Skripsky V.P., Barclay M. Methods of phospholipids analysis.// Teth. Emym. N. Y.: Acad. Press.- 1982.- V. 14.- P. 530.

160-Schafer S., Holzmann A., Arbeiter K. Beeinflussung der Qualitats merk male des Ejakulates bei Beagle-Ruden durch Dauerbelastung.// Tierarztl. Prax.- 1966.- V. 24.- P. 385-390.

161.Smith D.G., Senger P.L., McCutehan J.F. Selenium and glutathione peroxidase distribution in bovine semen and selenium-75 retention by the tissues of the reproduction tract in the bull.// Biology of Reproduction.-1979.- V. 20.- P. 377-383.

162.Smith F.O. Update on freezing canine semen.// In:. Current Veterinaiy Therapy. IX. Philadelphia P.A.: W. B. Saunders.- 1986.- P. 1243.

163.Seager S.W. Successful pregnancies utilizing frosen dog semen.// A. J. Digest.- 1969.-V. 17.- P. 6-16.

164.Seager S.W., Platz C.C., Fletcher W.S. Conception rates and related data using frozen dog semen.//J. Reprod. Fert.- 1975.-V. 45.- P. 189-192.

165.Soderquist L., Rodrigues-Martines H., Ianson L. Post-thaw motility, ATP content and cytochrome-c oxidase activity of A.I. bull spermatozoa relation to fertility.// J. Vet. Med. A.- 1991.-V. 38.- P. 165-174.

166.Salamon S., Visser D., Effect of composition of tris-based diluent and thawing solution on survival of ram spermatozoa frozen by the pellet methods.// Austr. J. Biol. Sei.- 1972.- V. 25.- № 3.- P. 605-618.

167.Stockner P.K., Bardwick C. The relationship of semen parameters to fertility in the dog.// Canine Practice.- 1991.- V. 16.- P. 15-23.

l68.Swyer G.I. Metabolism of spermatozoa. //Biochem. J.- 1947- V. 41.- P. 409-413.

169.Syarez S.S. Hyperactivated motility in sperm.// J. Andrology.- 1996.- V. 17.- P. 331-335.

170.Schutte A.P. Practical aspects of A. I. in dogs. Insemination of the bitch.// J. S. African V. M. A.- 1965.- V. 38.- P. 349-354.

171.Silva D., Onclin K., Snaps F. et al. Laparoscopic intrauterine insemination in the bitch.//Theriogenology.- 1995.- V. 43.- P. 615-623.

172.Stoekman M. Artificial insemination of dogs.// Vet. Rec.- 1985.- V.l 16.-P. 503.

173.Thomas P.G., Larsen R.E., Burns J.M. e.a. A comparison of three packaging techniques using two extenders for the eiyopreservation of canine semen.//Theriogenology.- 1993.- V. 40.- P. 1199-1205.

174.Tasseron F., Amir D., Schindler H. Acrosome damage of rame spermatozoa during dilution, cooling and freezing.// J. Reprod. Fertil.-1977.- V. 51.- № 2.- P. 461 -462.

175.Tash J.S., Means A.R. Cyclic adenosine 3' 5' Monophsphate, calcium and protein phosphorylation in flagellar motility.// Biology of Reproduction.-1983.-V. 28.-№ 1.- P. 75-104.

176.Tsutsui T. Gamete physiology and timing of ovulation and fertilization in dogs.//J. Reprod. Fert.- 1989.-V. 39.- P. 269-275.

177. Tsutsui T., Shimizu T., Ohara N. et al. Relationship between the member of sperm and the rate of implantation in bittches inseminated in to unilateral uterine hom. // Jpn. J. Vet.Sci.- 1989.- V. 51.- P. 257.

178.Vishwanath R., Munday R., Curson B. e.a. The effect of chelating agents and free radical scavengers on survival of bull spermatozoa at ambient temperature.// Proc. 12 Int. Congr. on Animal Reprod.- 1992.- V. 1.- P. 547549.

179.Watson P.F., Martin J.C. Effect of egg yolk, glycerole and the freezing rate on the viability and acrosomal structure of frozen ram sperm.// AustrJ. Biol. Sci.- 1975.-V. 28.-№2.- P. 153-159.

180.Watson P.F., Plummer I.M. The responses of boar sperm membranes to cold shock and cooling.// Deep freezig of boar semen. Sweden.- 1985.- P. 113-127.

181.Weitze K.F., Muller E. Prinzipien der spermauntersuchung + spermienmorphologie.// Kunstliche Besamung bei Nutztieren. Ed. Bush. W. Iena.- 1991.- P. 287-294.

182.White J.G., Darrin-Bennet A. The lipid of sperm in relation to cold shock.// Proc. VIII Int. Congr. Anim. Reprod. A.I. Krakow.- 1976.- V. 4.-P. 951-954.

183.Wilson M. Non-surgical intrauterine artificial insemination in bitches using frozen semen.//J. Reprod. Fert.- 1993 (Suppl).-V. 47.- P. 307-311.

184.Woolgar A.E. Hemolysis of human red blod cells by freezing and thawing in solution containing sucrose : relationship with post-hypertonic hemolysis and solute movement.// Cryobiology.- 1971.- V. 11.- № 1.- P. 44-51.

185.White J.I., Darine-Bennet A. The lipids of sperm in relation to cold shock.// Proc 8th Int.Congr. Anim. Reprod. A.I. Krakow.- 1976.- V. 4.- P. 951-954.

186.White I.G. Lipids and calcium uptake of sperm in relation to cold shock and preservation: a review.// Reprod. Fert. Dev.- 1993.- V. 5.- P. 639-658.

187.Wales R.G., White T.G. The susceptibility of spermatozoa to temperature shock. // J. Physiol.- 1958.- V. 141.- P. 273.

188.Wales R.G., White I.G. Viability of diluted dog spermatozoa in vitro.// J. Reprod. Fert.- 1963.- V. 5.- № 1P. 67-76.

189.Wright P.J. Practical aspects of estimation of the of ovulation and of insemination in the bitch.// Austr. Vet. J.- 1991.-V. 68.-P. 10-13.

190.Wilson M. Non-surgical intrauterine artificial insemination in bitches using frozen semen.// J. Reprod. Fertil.- 1993.- Suppl.- V. 47.- P. 307-311.

191.Yubi A.C. Investigations of dog semen with particular reference to freezing techniques. M.V.M. Thesis. University of Glasgow.- 1984.

192.Yubi A.C., Ferguson J.M., Renton J.P. e.a. Some observation on the dilution, cooling and freezing of canine semen.// J. Small. Anim. Pract.-1987.-V. 28.- P.- 753-761.