Криозащитное влияние различных антиоксидантов и БАВ при хранении спермы хряков в охлаждённом и замороженном состоянии тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 06.02.01, кандидат биологических наук Федина, Наталья Игоревна

• Федина, Наталья Игоревна
• кандидат биологических наук
• 2007

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Федина, Наталья Игоревна

ВВЕДЕНИЕ.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Современные синтетические среды для хранения спермы хряков в охлажденном состоянии.

1.2. Влияние различных факторов на живучесть сперматозоидов хряков в охлаждённом состоянии.

1.3. Основные повреждающие факторы при глубоком замораживании спермы хряков.

1.4. Способы повышения устойчивости сперматозоидов хряков к глубокому замораживанию.

1.5. Современные синтетические среды для глубокого замораживания спермы хряков.

2. МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЙ.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

3.1. Изучение защитного влияния различных антиоксидантов на сперму хряков, сохраняемую в охлаждённом состоянии.

3.1.1. Влияние антиоксиданта кверцетина на живучесть спермы хряков при 4 и 16°С.

3.1.2. Анализ защитного влияния на охлаждённую сперму хряков эфира поливинилового спирта с фенозаном.

3.1.3. Изучение влияния сукцината хитозана на живучесть охлаждённой спермы хряков.

3.1.4. Выяснение защитного влияния антиоксидантов ИХФГАН при хранении спермы хряков в охлаждённом состоянии.

3.2. Результативность осеменения свиней охлаждённой спермой, разбавленной усовершенствованной ГХЦС средой с бычьим сывороточным альбумином и тиольным соединением.

3.3. Разработка синтетической среды для глубокого замораживания спермы хряков.

3.3.1. Выявление оптимальных соотношений веществ, входящих в состав усовершенствованной среды для замораживания спермы хряков.

3.3.2. Влияние синтетических антиоксидантов на устойчивость сперматозоидов хряка к замораживанию.

3.3.3. Изучение криозащитного влияния тиольных соединений.

3.3.4. Анализ криозащитного влияния сухого соевого лецитина.

3.3.5. Устойчивость сперматозоидов хряка к замораживанию при использовании метилового эфира глицерина и других заменителей глицерина.

3.3.6. Результативность осеменения свиней при использовании для замораживания спермы усовершенствованной среды.

4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.

5. ВЫВОДЫ.

6. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Криозащитное влияние различных антиоксидантов и БАВ при хранении спермы хряков в охлаждённом и замороженном состоянии»

Актуальность работы. Одним из важных технологических вопросов в свиноводстве является улучшение воспроизводства стада путём использования искусственного осеменения. Искусственное осеменение животных является высокоэффективным методом улучшения породных и продуктивных качеств животных путём использования высокоценных племенных производителей. Важным фактором, определяющим результативность искусственного осеменения свиней, является совершенствование методов хранения спермы хряков в охлаждённом и замороженном состоянии.

При технологической обработке спермы, разбавлении её синтетическими средами и хранении в охлаждённом и замороженном состоянии происходят заметные структурные и биологические повреждения сперматозоидов, что значительно снижает их фертильность. Поэтому весьма актуальной задачей является применение более современных технологических разработок, способствующих повышению биологической полноценности криоконсервированной спермы хряков. Кроме того, необходима разработка синтетических сред для спермы хряков, позволяющих сохранять биологическую полноценность сперматозоидов при хранении в охлаждённом состоянии в течение 5-7 дней.

Причины снижения фертильности охлаждённой и замороженной спермы хряков до настоящего времени окончательно не выяснены. Одной из них является активация процессов перекисного окисления липидов при криоконсервации спермы. В этой связи проводятся исследования по повышению защитных свойств синтетических разбавителей для этого вида животных, путём введения в их состав различных натуральных или синтетических антиоксидантов, а также других биологически активных веществ. Поэтому разработка более совершенных синтетических сред для хранения спермы хряков в охлаждённом и глубоко замороженном состоянии путём использования новых БАВ представляет значительный научный и практический интерес.

Цель и задачи исследований. Целью данной работы является изучение защитного влияния различных антиоксидантов при хранении спермы хряков в охлаждённом и замороженном состоянии, а также разработка усовершенствованной среды для замораживания их спермы.

Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи:

- изучить влияние различных антиоксидантов на подвижность и живучесть сперматозоидов хряка, сохраняемых в охлаждённом до 4 или 16°С состоянии;

- выяснить результативность осеменения свиней охлаждённой спермой, сохраняемой в усовершенствованной ГХЦС среде с бычьим сывороточным альбумином и тиольным соединением;

- разработать новую синтетическую среду для глубокого замораживания спермы хряков;

- проанализировать влияние различных антиоксидантов на криоустойчивость сперматозоидов хряка при замораживании в новой среде;

- изучить возможность замены желтка куриного яйца в составе разбавителей для криоконсервации семени хряка на сухой соевый лецитин;

- выяснить криопротективное влияние при замораживании спермы хряков монометилового эфира глицерина и других заменителей глицерина.

Научная новизна исследований. Впервые изучено влияние ряда синтетических и натуральных антиоксидантов на устойчивость сперматозоидов хряка к хранению в охлажденном состоянии. Выяснена результативность осеменения свиней охлаждённой спермой, сохраняемой при 16°С в течение 3-5 дней с использованием усовершенствованной ГХЦС среды. Усовершенствована синтетическая среда для глубокого замораживания спермы хряков. Проведено сравнительное изучение влияния различных антиоксидантов на криоустойчивость спермы хряков при замораживании. Впервые изучена возможность замены желтка куриного яйца в составе сред для криоконсервации спермы хряков на сухой соевый лецитин. Проанализирована эффективность замораживания спермы хряков с монометиловым эфиром глицерина и другими заменителями глицерина.

Практическая значимость. Введение в состав усовершенствованной синтетической ГХЦС среды для хранения спермы хряков в охлаждённом до 16°С состоянии бычьего сывороточного альбумина и тиольного соединения способствует повышению результативности осеменения свиней и продолжительности хранения спермы. Разработанная синтетическая среда для глубокого замораживания спермы хряков позволяет стабильно получать после оттаивания подвижность сперматозоидов в пределах 40-45%. Введение в состав усовершенствованной синтетической среды для глубокого замораживания спермы хряков восстановленного глутатиона способствует повышению подвижности и живучести оттаянных сперматозоидов.

Апробация работы. Основные материалы диссертации доложены на:

- Международной научной конференции: «Прошлое, настоящее и будущее зоотехнической науки», ВИЖ Дубровицы, 2004 г.;

- Учёных Советах ВНИИплем, 2004-2006 гг.;

- Расширенной межотдельской конференции ВНИИплем, 2007г.

Публикации по результатам исследований. По теме диссертации опубликовано 6 статей.

Объём работы. Диссертация изложена на 112 стр. машинописного текста и включает 23 таблицы. Состоит из введения, обзора литературы, методики исследований, собственных результатов, обсуждения, выводов и практических предложений. Список литературы включает 188 источников, в том числе 109 на иностранном языке.

Заключение диссертации по теме «Разведение, селекция, генетика и воспроизводство сельскохозяйственных животных», Федина, Наталья Игоревна

ВЫВОДЫ

1. Установлено, что введение в состав синтетической среды для хранения спермы хряков в охлаждённом состоянии антиоксидантов кверцетина, сукцината хитозана и поливинилового спирта с фенозаном в различных дозировках не оказывает положительного влияния на подвижность и живучесть сперматозоидов, сохраняемых при 4 и 16°С состоянии.

2. Синтетические фенольные антиоксиданты ИХФГАН-2 и ИХФГАН-3 оказывают заметное протективное влияние на сохранение подвижности сперматозоидов, подвергнутых холодовому шоку.

3. Антиоксидант ИХФГАН-3 в дозе 0,004 мг/мл среды, повышает живучесть сперматозоидов хряка при 16°С, но оказывает отрицательное влияние на их фертильность.

4. Использование для хранения охлаждённой спермы хряков усовершенствованной ГХЦС среды, содержащей бычий сывороточный альбумин и тиольное соединение, способствует повышению оплодотворяемости свиноматок на 5-11%, в зависимости от сроков хранения спермы.

5. Разработанная синтетическая среда для глубокого замораживания спермы хряков способствует получению 40-45% подвижных сперматозоидов после процесса замораживания-оттаивания и 40% оплодотворяемости свиноматок.

6. Применение изученных синтетических и натуральных антиоксидантов в составе усовершенствованной среды для замораживания спермы хряков, не оказало положительного влияния на подвижность и живучесть оттаянных сперматозоидов.

7. Введение в состав усовершенствованной среды для замораживания спермы хряков цистеина и восстановленного глутатиона в дозах 0,02-0,08 мг/мл среды, способствует повышению живучести оттаянных сперматозоидов.

8. Замена желтка куриного яйца на сухой соевый лецитин в составе синтетической среды для замораживания спермы хряков оказала отрицательное влияние на подвижность и живучесть оттаянных сперматозоидов.

9. Замораживание спермы хряков с монометиловым эфиром глицерина не оказало положительного влияния в сравнении с глицерином на криоустойчивость сперматозоидов хряка.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Предлагаем свиноводческим хозяйствам использовать для длительного хранения спермы хряков при 16°С усовершенствованную глюкозо-хелатно-цитратно-сульфатную среду следующего состава: вода дистиллированная - 1000мл; глюкоза - 60г; трилон-Б - 3,7 г; бикарбонат натрия - 1,2 г; цитрат натрия - 3,6 г; бычий сывороточный альбумин - 2 г; тиольное соединение - 0,02 г; полиген - 0,3 г.

2. С целью глубокого замораживания спермы хряков предлагаем свиноводческим хозяйствам для практического испытания синтетическую среду следующего состава: вода дистиллированная - 1000 мл; трис-(оксиметил)-аминометан - 4 г; глюкоза - 13,2 г; трилон-Б - 28 г; восстановленный глутатион - 0,04 г; желток куриного яйца - 200 мл; полиген - 0,3 г.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Федина, Наталья Игоревна, 2007 год

1. Антонюк B.C. Биохимический контроль за качеством спермы. // Доклады ВАСХНИЛ 1980. - №1 - с. 27-30.

2. Антонюк B.C. Изменение содержания липидов в сперме хряка в процессе глубокого замораживания. // Доклады ВАСХНИЛ 1982. - №4. -с. 31-34.

3. Антонюк B.C. Усовершенствование методов замораживания спермы хряков. // Сб. тр. БелНИИЖ 1982. - т. 22. - с. 22-36.

4. Балашов Н.Г., Силаева М.В. Новая среда для сохранения спермы хряков. // Труды Всесоюзного института экспериментальной ветеринарии. -1970.-т. 37.-с. 97-101.

5. Балашов Н.Г., Смирнов В., Манько Ю. Новая среда ГХЦС -Н РУ-1. // Свиноводство. - 1987. - №6. - с.39-40.

6. Баранов Ф.А. Впервые получены поросята от искусственного осеменения замороженным семенем. // Животноводство. 1972. - №2 -с. 68-69.

7. Белоус A.M., Гордиенко Е.А., Розанов Л.Ф. Замораживание и криопротекция. -М.: Высшая школа. 1987. - 251 с.

8. Берилло И.М., Пухальский Л.Х. Вопросы длительного сохранения спермы быка и барана. // Проблемы животноводства. 1936 - №10 -с. 24-40.

9. Вишневский В.И., Марющенко А.В. Влияние УЗ колебаний на кристаллизацию спермы быков-производителей. // Криобиология и криомедицина. Киев: Наукова Думке. 1975. - №1. - с. 48-50.

10. Вишневский В.И. Повышение качественных показателей спермы быков УЗ обработкой. // УЗ в сельском хозяйстве. Межвуз. сб. н. тр. Москва. - 1988.-с. 55-57.

11. Гайворонский Г., Ирицян Г. Удачный опыт. // Свиноводство. 1973. -№7.-с. 23.

12. Гуськов A.M., Дмитриенко Н.Г., Букарчук М.Г. Особенности криогенных изменений липидов плазматических мембран и функционального состояния гамет быка и хряка. // Доклады ВАСХНИЛ.- 1989.-№2-с. 26-28.

13. Евтух В.П. Совершенствование метода криоконсервации семени крупного рогатого скота с использованием биологически активных веществ.// Дисс. канд. биол. наук. Лесные Поляны. 2004.

14. Ерохин А.С., Жуковская Н.В., Кузнецов Ю.В. Влияние воднорастворимых антиоксидантов на устойчивость спермы хряков к охлаждению. // Свиноводство. 1998. - №3 - с. 22-24.

15. Ерохин А.С., Жуковская Н.В., Пырикова С.И. Влияние лазерного облучения на криоустойчивость спермы животных. // Бесплодие, вспомогательные репродуктивные технологии. Сб. науч. трудов межд. симпозиума. Киев. 1997. - с. 171.

16. Ерохин А.С., Семёнова В.А., Тимофеев К.Н. О влиянии компонентов синтетических сред на плазматические мембраны сперматозоидов быка и барана. // Сельскохозяйственная биология. Серия биология животных.- 1989-№6.-с. 35-38.

17. Ерохин А.С., Чернова И.Е., Епишина Т.М. Действие эфиров глицерина на криоустойчивость спермы баранов. // Доклады РАСХН. 1998. - №3. -с. 39-41.

18. Загорски Д., Бобадов Н., Кичева М. Достижения и перспективы развития криобиологии и криомедицины. // Межд. конференция. Тезисы докладов. Харьков,- 1988.-с. 67-68.

19. Ильинская Т. Замораживание спермы на поверхности жидкого азота. // Свиноводство. 1976. - №7. - с. 29-30.

20. Квасницкий А.В. Искусственное осеменение свиней. Киев: Урожай. -1983.-с. 187.

21. Кичева М.Г., Загорски Д.Т., Бобадов Н.Д. Исследование криопротективного действия ЕНГ-20 на замораживание, реанимацию и морфологию сперматозоидов хряка. // Biol, et Immund. Reprod. 1989. -v. 15.-p. 45-51.

22. Кононов В.П., Галич B.H., Осадчук B.C. и др. Современное оснащение криоконсервации спермы хряков. // Зоотехния. 1990. - №1. - с. 68-71.

23. Кононов В.П., Голышев Н.А., Нарижный А.Г. Выход трансаминаз из живчиков как показатель оплодотворяющей способности. // Сельскохозяйственная биология. 1978. - т. 13. - с.104-108.

24. Кононов В.П., Голышев Н.А., Осадчук B.C. и др. Методические рекомендации по криоконсервации семени хряков. // Дубровицы. 1991.

25. Кононов В.П. Замораживание семени хряка. Теория и практика. // Дисс. докт. биол. наук. Дубровицы. 1982.

26. Кононов В.П. Значение слабодиссоциирующих катионов при охлаждении семени. // Доклады ВАСХНИЛ. 1977. - №5. - с. 25-26.

27. Кононов В.П. Криопротективное действие плазмы спермы на сперматозоиды хряков. // Доклады ВАСХНИЛ. 1984. - №6. - с. 29-31.

28. Кононов В.П., Нарижный А.Г. Защитное действие антиоксидантов при замораживании семени хряка. // Вестник с-х. науки. 1985. - №5. -с. 123-128.

29. Кононов В.П. Повышение функциональной и морфологической устойчивости живчиков хряка при замораживании. // Сельскохозяйственная биология. 1980. - т. 15. - №6. - с. 914-917.

30. Кононов В.П., Хачапуридзе Э. Оптимальные режимы глубокого охлаждения и оттаивания семени хряка. // Доклады ВАСХНИЛ. 1975. -№8. - с. 23-24.

31. Корбан Н.В., Мороз Л.Г., Шапиев И.Ш. Оценка замороженно-оттаянной спермы по морфологическим и биохимическим показателям. // Сб. научн. трудов ВНИИРГЖ. 1979. - №27. - с. 24-30.

32. Корбан Н.В., Мороз Л.Г., Шапиев И.Ш. Совершенствование технологии замораживания спермы хряков. // Животноводство. 1980. - №7. -с. 23-25.

33. Кузнецова Н.А. Первый опыт применения искусственного осеменения в каракулеводстве. // Проблемы животноводства. 1932. - №2. - с. 27-28.

34. Левин К.Л., Бабенко Г., Поздняков А. и др. Среда для разбавления спермы хряков. // Свиноводство. 1988. - №2. - с. 33-34.

35. Левин К.Л. Искусственное осеменение свиней. М.: Россельхозиздат. -1986.-с. 192.

36. Левин К.Л, Ющенко Н. Замораживание спермы хряков. // Свиноводство. 1973.-№7.-с. 23.

37. Ленинджер А. Митохондрия. Молекулярные основы, структуры и функции. М: Мир. - 1966 - с. 325.

38. Луговой В.И., Моисеев В.А. Влияние низких температур на растворимые ферменты. // Итоги науки и техники. ВИНИТИ. Сер. Биофизика. 1978. -т. 9.-с. 53-79.

39. Милованов В.К. Биология воспроизведения и искусственного осеменения животных. М. 1962. - с. 696.

40. Милованов В.К., Семёнова В.А., Кононов В.П. Химическая структура и криозащитное действие липопротеидов желтка куриного яйца на живчиков животных. // Вестник с.-х. науки. 1988. - №5. - с. 133-139.

41. Милованов В.К., Соколовская И.И. Теория холодового удара живчиков млекопитающих. // Доклады ВАСХНИЛ. 1959. - №8. - с. 3-9.

42. Морозов В.А. О защитной роли глицерина при замораживании семени с.-х. животных. // Труды Дагестанского НИИ сельского хозяйства. -1965. т. 3,-№2.-с. 54-60.

43. Мороз Л.Г., Корбан Н.В., Шапиев И.Ш. К вопросу прогнозирования оплодотворяющей способности замороженной спермы хряков. // Бюлл. ВНИИРГЖ. 1979. - В. 39. - с. 23-26.

44. Мороз Л.Г., Рустенов А.Р., Шапиев И.Ш. и др. Значение серосодержащих соединений в устойчивости спермы к замораживанию. // Доклады ВАСХНИЛ. 1990. - №9. - с. 51-55.

45. Мороз Л.Г., Шапиев И.Ш. Влияние состава сред и охлаждения на содержание НАД.Н и ФАД в сперме хряков. // Бюлл. ВНИИРГЖ. 1987. - № 94. - с. 5-6.

46. Мороз Л.Г., Шапиев И.Ш., Корбан Н.В. Криоконсервация гамет и эмбрионов с.-х. животных. Л. - 1988. - 48 с.

47. Нарижный А.Г., Галич С.К., Ерохин А.С. Влияние способа криоконсервации спермы хряков на ПОЛ. // Генетика, селекция. и воспроизводство с.-х. животных. 1994. - вып. 1.-е. 135-140.

48. Нарижный А.Г. Интенсификация воспроизведения в условиях промышленного свиноводства. Теория и практика // Дисс. док. биол. наук. Дубровицы. - 1995.

49. Наук В.А., Буга Н.Ф. Глубокое замораживание семени хряков-производителей в гранулах. // Животноводство на промышленную основу. Кишинёв. 1975. - с. 58-67.

50. Наук В.А., Гуськов A.M. Особенности перекисного окисления липидов при замораживании спермы быков и хряков. // Доклады ВАСХНИЛ. -1983.-№2.-с. 27-29.

51. Наук В.А. Криогенные изменения аминокислотного состава спермиев. // Свиноводство. 1971. - №11. - с. 21-22.

52. Наук В.А. Криоконсервация семени животных. Консервация генетических ресурсов. Пущино. 1982.

53. Наук В.А. Среда для разбавления и замораживания спермы хряков. // Автор, свидет. № 1143413. БИ №9. - 1985.

54. Николов И., Георгиев С., Чизмаров К. Влияние на лазерното излъчване върху семена течност от бици при технологията за криоконсервация. // Животновъдни Науки. София. - 1986. - т. 23. - №11. - с. 3-7.

55. Николов И., Нестерова Ю. Ефект на нискоинтенсивно лазерно лъчение въерху биологичните качества и оплодителната способност на сперматозоиди от кочове. //. Животновъдни Наука. София. - 1994. -№1.-с. 210-212.

56. Осташко Ф.И. Глубокое замораживание и длительное хранение спермы производителей. Киев: Урожай. 1978. - с. 254.

57. Осташко Ф.И. Причины и механизмы холодового удара клеток. // Международный с-х. журнал. 1964. - №3. - с. 106-109.

58. Паршутин Г.В., Смирнов-Угрюмов Д.М., Михайлов Н.Н. Искусственное осеменение сельскохозяйственных животных. М: Колос. 1970.

59. Платов Е.М. Теоретические и практические основы замораживания семени производителей с-х. животных. // Дисс. докт. биол. наук. Дубровицы. 1973.

60. Плишко Н., Вельможный Б., Лисовенко А. Получено потомство при использовании замороженной спермы. // Свиноводство. 1973. - №4. -с. 24.

61. Плишко Н.Т. Среды для хранения спермы хряков. // Свиноводство. -1968.-№3.-с. 19-21.

62. Прокопцев В.М., Рустенов А., Мороз Л.Г. Действие унитиола на сперму хряков. // Сельскохозяйственная биология. 1974. - т. 9. - №4. -с. 581-584.

63. Пухтинов О.Н. Влияние различных факторов на устойчивость семени хряков к хранению в охлаждённом состоянии и оплодотворяемость свиноматок. // Дисс. канд. биол. наук. Лесные Поляны. 2004.

64. Пушкарь Н.С., Белоус A.M., Цветков Ц.Д. Теория и практика криогенного и сублимационного консервированного. Киев: Наукова Думка.-1984.-с. 350.

65. Рустенов А.Р., Мороз Л.Г. Влияние серосодержащих соединений на устойчивость спермы хряков к замораживанию. // Бюлл. ВНИИРГЖ. -1989.-№116.-с. 7-10.

66. Рэ Л. Консервация холодом. М. - 1962. - 390 с.

67. Семаков В.Г., Рыжков Т.Ф. Проницаемость цитоплазматических мембран сперматозоидов быка и хряка для натрия, калия, кальция и фосфора под влиянием низких температур. // Сельскохозяйственная биология. 1971. - №2. - с. 200-204.

68. Сердюк С.И., Беликов А.А. Исследования по замораживанию спермы хряков. // Теория и практика воспроизводства с-х. животных. Харьков. -1972.-с. 81-86.

69. Сердюк С.И. Искусственное осеменение в промышленном свиноводстве. М: Колос. 1977. - 160 с.

70. Сердюк С.И. Среда для спермы хряков. // Доклады Советских учёных к 6 международному конгрессу по размножению и искусственному осеменению животных. М. - 1968. - с. 138-141.

71. Скаткин Н.П. Температурный шок сперматозоидов жеребца. // Доклады ВАСХНИЛ. 1940. - №8. - с. 29-34.

72. Скрябин К.Г., Вихорев Г.А., Варламова В.П. Хитин и хитозан. Получение, свойства и применение. М. 2002.

73. Смирнов И.В., Елец А.З. Осмотическое давление в сперме животных и его значение при замораживании. // Мат. 5-го Межд. конгресса по размнож. и искусств, осем. животных. Мюнхен. 1972. - с. 1394-1397.

74. Смирнов И.В. Влияние температуры на осмотическую устойчивость спермиев. // Животноводство. 1976. - №1. - с. 61-64.

75. Смирнов И.В. К теории глубокого охлаждения спермы. // Животноводство. 1974. - №11. - с. 65-70.

76. Хачапуридзе Э., Церетели П. Применение замороженной спермы. // Свиноводство. 1987. - №6. - с. 40-42.

77. Шапиев И.Ш., Мороз Л.Г., Корбан Н.В. К вопросу технологии замораживания спермы хряков. // Животноводство. 1976. - №12. -с. 60-62.

78. Aalbers I.G., Johnson L.A. Rademaker I.H. Motility, acrosom morphology and fertilizing capacity of boar spermatozoa frozen in pellets and strows.// Deep Freezing of Boar Semen. Uppsala. Sweden. 1985. - p. 277-281.

79. Aitken R. J., Clarkson L.S., Fishel S. Generation of reactive oxygen species, lipid peroxidation and human sperm function. // Biol. Reprod. 1989. -v. 40.-p. 183-197.

80. Baier W. Erfahrungen in der ktinstlichen Besamung des Hausschweines einschlisslich der Verwendung von Tiefkuhlsamen. // Zootecnica e veterinaria la fecondazione artificiale. 1962. - v. 17. - №5-6. - p. 94-99.

81. Bamba K., Cran D.G. Effects of treatment with butylated hydroxytoluene on the susceptibility of boar spermatozoa to cold stress and dilution. // J. Reprod. Fertil. 1992. - v. 95. - p. 69-77.

82. Bamba K., Kojima Y., Iida I. Studies of deep-freezing of boar semen. 5. The effect of honey-yolk diluent on the livability of frozen boar spermatozoa. // Jap. J. Zootechn. Sci. 1968. - v. 39. - №10. - p. 415-421.

83. Berger Т., Clegg E.D. Effect of male accessory gland secretion on sensitivity of porcine sperm acrosomes to cold shock, initiation of motility and loss of cytoplasmic droplets. // J. Anim. Sci. 1985. - v. 60. - №5. - p. 1295-1302.

84. Best P. Extending the life fresh semen. // Pig. Amer. 1982. - v.7. - p. 24-26.

85. Boehko H. Zur Tiefgefrierung von Ebersperma. 3. Weitere Labor und weitere Besamungsversuche unter Verwendung von TEST und TESNaK Verdunner sowie, verschiedenen Auftaumethoden. // Dtsch. Tierarztl. Wschr. - 1974. -v. 81.-№14.-p. 336-340.

86. Bower R.E. Effect of dilution and glycerol on the release of glutamic oxaloacetic transaminase (GOT) from boar spermatozoa. // J. Anim Sci. -1973. v. 36. - №2. - p. 319-334.

87. Brass K.E. Die Sonographie in der andrologishen Untersuchung bei verschiedenen Haussaugetierarten. // Inaug. Diss. Hannover. - 1987. -p. 102.

88. Canvin A.T., Buhr M.M. Effect of temperature on the fluidity of boar sperm membranes. // J. Reprod. Fert. 1989. - v. 85. - p. 533-540.

89. Christensen P., Guo Z., Pedersen K.M. e.a. The viability, motility and fertility of bovine semen frozen in Triladyl and Biociphos plus. // ESDAR NEWSLETTER. 2000. - №5. - p. 25.

90. Courtens I.L., Paquignon M. Ultrastructural aspects of stored boar semen. // Deep freezing of boar semen. Uppsala. Sweden. Ed. Johnson L., Larsson K. -1985.-p. 37-61.

91. Crabo B.G., Bower R.E., Graham E.F. The effect of glycerol on bull and boar spermatozoa in vitro measured as loss of intracellular glutamic transaminase (GOT). // Abstr. 11. Nord. Vet. Congr. Bergen. 1970. - p. 242-245.

92. Crabo В., Brown K.I., Graham E.F. Effect of some hydrogen ion buffers on storage and freezing of spermatozoa. // J. Anim. Sci. 1972. - v. 35. - №2. -p. 377-382.

93. Crabo B.G. Einarsson S. Fertility of deep-frozen boar spermatozoa. // Acta Vet. Scand.- 1971.-v. 12.-p. 125-127.

94. Dalrymple I.R., Macpherson I.W. Low temperature preservation of boar spermatozoa. // Canad. J. Anim. Sci. 1969. - v. 19. - №1. - p. 45-49.

95. Darin-Bennet A. Influence of the cholesterol content of mammalian sperm on susceptibility to cold-shock. // Cryobiology. 1977. - v. 14. - p. 466-470.

96. Darin-Bennet A., Poulos A., White I.G. The effect of cold shock and freeze-thawing on release of phospholipids by ram, bull and boar spermatozoa. // Austr. J. Biol. Sci. 1973. - v. 26. - p. 1409-1420.

97. Dukelow W.R., Graham E.F. Freezing of porcine semen. // J. Anim. Sci. -1962. v. 21. -№4. - p. 1020-1024.

98. Einarsson S., Viring S. Distribution of frozen-thawed spermatozoa in the reproductive tract of gilts at different time intervals after insemination. // J. Reprod. Fertil. 1973. - v. 32. - p. 117-120.

99. Enne G., Beccaro P. Congelamento del materiale spermatiko di verm // Riv. Suinic. 1982. - v. 23. - №9. - p. 65-72.

100. Foulkes I.A. The separation of lipoproteins from egg-yolk and their effect on the motility and integrity of bovine spermatozoa. // J. Reprod. Fertil. 1977. -v. 42.-p. 277-284.

101. Gorovoj L., Kosjakov V. Advances in chitin science. // Proc. 7 th Int. Conf. on Chitin-Chitosan. Lyon, France. - 1997. - v.2. - p. 858-863.

102. Graham E.F., Rajamannan A.N., Schmehl M.K. Fertility studies with frozen boar spermatozoa.//A.I. Dig. 1971.-v. 19.-p. 16-18.

103. Hahn R., Lorrman W., Zoder H. Zur Tiefgefrierung von Ebersperma 2. Mitteilung: Besamung versuche unter Verwendung von TEST- und TESNaK

104. Verdunner sowie, verschiedenen Aufiaumethoden. // Dtsch. Tierarztl. Wschr. - 1974. - v. 81. - № 12. - p. 281-283.

105. Hammerstedt R.H., Keith A., Snipes W. e.a. Use of spin labeles to evaluate effect of cold chock and osmolarity on sperm. // Biol. Reprod. 1978. - v. 18. - №4. - p. 685-696.

106. Hanstein W.G., Hatefi Y., Tejada P. Lipid oxidation in biological membranes. 2. Kinetics and mechanism of lipid oxidation in submitochondrial particles. // Arch. Biochem. Biophys. 1970. - v. 138. - №1. - p. 87-95.

107. Harrison R.A., White I.G. Glycolytic enzymes in the spermatozoa and cytoplasmic droplets of bull, boar and ram, and their leakage after shock. // J. Reprod. Fertil. 1972. - v. 30. - p. 105-115.

108. Hernandes I.I., Moya A., Duverger O. Algunos resultados en la cjngelacion del semen porcino en Cuba. // Rev. Cub. Cienc. Vet. 1988. - v. 19. - №1. -p. 39-45.

109. Hess E.A., Ludwick T.M., Teagua H.S. Motility of boar spermatozoa as influenced by semen freezing procedures. // J. Anim. Sci. 1960. - v. 19. -№3. - p. 926-931.

110. Iida I., Adachi I. Studies on deep-freezing of boar semen. 1. Effect of various diluents, glycerol levels and glycerol equilibration period on deep-freezing of boar spermatozoa. //Jap. J. Zoot. Sci. 1966. -v. 37. -№11. - p. 411-416.

111. Johnson L. Fecundity of boar spermatozoa stored in Beltsville Liqued and Kiev extenders for three days at 18°C. // J. Anim. Sci. 1982. - v. 54. - №1. -p. 132-136.

112. Johnson L.A., Pursel V.G. Effect of cold shock and freezing on acrosomal proteinase of porcine spermatozoa. // Cryobiology. 1974. - v. 11. - №6. -p. 558-560.

113. Jones R.C. Changes occurring in the head of boar spermatozoa: vesiculation of the acrosome.// J. Reprod. Fertil.- 1973. -v. 33,- №1,- p. 113-118.

114. Kampachmidt R.F., Meyer D.T., Herman H.A. Lipid and lipoprotein constituents of egg yolk in the resistence and storage of bull spermatozoa. // J. Dairy. Sci. 1953. - v. 36. - №3. - p. 733-742.

115. Kato S., Miyano Т., Nanjo I. Effect of concentration of sodium laurylsulfate on motility and acrosome morphology of frozen boar spermatozoa. // Japan J. Anim. Reprod. 1990. - v. 36. - №1. - p. 26-30.

116. King G.I., Macpherson I.W. Boar semen studies. 2. Laboratory and fertility results of method for deep freezing. // Canad. J. Compar. Med. Vet. Sci. -1967.-v. 31.-№2.-p. 46-47.

117. Kovacs L. A sertessperma molyhutes hazai tapasztataj. // Magy allat. lapja. -1981. v. 36. - №6. - p. 398-403.

118. Kozumplic I. Velikost pellet a individualni viaatnost semen kancu ve vztanu к postu pohyblivjoh spermii po roznirazeni. // Vet. Med. 1978. - v. 23. - №8. -p. 457-463.

119. Larsson K. Current research on the deep freezing of boar semen. // World Rev. Anim. Prod. 1978. - v. 14. - №4. - p. 59-64.

120. Lee A. G. Lipid phase transition and phase diagrams. // Biochem. Biophys. Acta. 1977. - v. 472. - №2. - p. 237-281.

121. Levitt I. A Sulphydryl-disulfide hypothesis of frost injury and resistance in plants. //J. Theor. Biol. 1962.-№3. - p. 183-185.

122. Lavelock J.E. Denaturatien of lipid-protein complex as a cause of damage by freezing. // Proc. Roy. Soc. 1957. - v. 147. - №2. - p. 427-433.

123. Luyet B.I., Gehenik P.M. Life and death of low temperatures. // Biodynamica. 1940.-p. 1-341.

124. Luyet B.I., Hodapp E.L. Revival of frogs spermatozoa vitrified in liquid air! // Proc. Soc. Exp. Biol, and Med. 1938. - v. 39. - p. 433-434.

125. Lyczynski A., Martin Rillo S. Fertilizing ability of boar semen stored for five days in MR-A diluent. // J. of Physiology and Pharmacology. 1996. -Supplement 1. - v. 47. - №2. - p. 156.

126. Lormann W., Hahn R. Our experiences with deep frozen boar semen. // Deep freezing of boar semen. Uppsala. Sweden. 1985. - p. 295-298.

127. Maryman H.T., Williams R.I., Doiglas M.S. Freezing injurey from „Solution effect" and its prevention by natural or artificial cryoprotection. // Cryobiology. 1977. - v. 14. - №3. - p.287-302.

128. Masuda H., Sonohara K. Effect of magnetic field on frozen-thawed boar spermatozoa. // Japan. J. of Swine Sci. 1995. - v. 32. - №3. - p. 203-205.

129. Maxwell W.M., Salamon S. Fertility of boar semen after long term frozen storage. // Theriogenology. 1977. - v. 8. - №4. - p. 206-208.

130. Mazur P. Basic concepts in freezing cell. // Deep freezing of boar semen. Uppsala. Sweden. 1985. - p. 91-112.

131. Moore H.D., Hibbitt K.G. Fertility of boar spermatozoa after freezing in the absence of seminal vesicular proteins. // J. Reprod. Fertil. 1977. - v. 50. -p. 349-352.

132. Mounib M.S. Cryogenic preservation of fish and mammalian spermatozoa. // J. Reprod. Fertil. 1978. -v. 53. - p. 13-18.

133. Neville W.I., Macperson I.W., King G.I. The contraceptive action of glycerol in gilts. // J. Anim. Sci. 1970. - v. 31. - p. 227-229.

134. Niva Т., Taguchi K. Cryomicroscopic observation on processer of freezing and thawing of boar semen. // Iwate Univ. Morioka. Jap. Artif. Insem. Lab. Bull.- 1962.-№1.-p. 21-35.

135. Obando H., Tamaus Т., Almaro C. Evaluation of some factors affecting swine spermatozoa during freezing. // 10 th Int. Congr. Anim. Reprod. A.I. Urbana. 1984. - v. 11.-p. 193-195.

136. Osinovo O., Salamon S. Fertility test of frozen boar semen. // Austr. J. Biol. Sci. 1976. - v. 29. - №4. - p. 336-339.

137. Pacova I. Overeni droee rordilnyeh technologikych postupu zmrazovani kaciho spermatu ve vztahv к laboratornim vysledkum, zabrezavanni a plodnosti plemenici. // Zivozisnna Vyroba. 1983. - v. 28. - №10. -p. 765-767.

138. Paquignon M. Freezing and thawing extendere for boar spermatozoa. // In: Deep freezing of boar semen. Uppsala. Sweden. 1985. - p. 129-145.

139. Park C.S., Pursel V.G. Effect of cooling rate and duration of freezing point plateau on boar sperm frozen in maxistraws. // Deep freezing of boar semen. Uppsala. Sweden. 1985. - p. 267-276.

140. Phillips P.H., Lardy H.A. A yolk buffer pabulum the preservation of bull semen. // J. Dairy Sci. 1940. - v. 23. - №15. - p. 339-404.

141. Pickett B.W., Komarek R.I. Effect of cold shock and freezing on loss of lipid from spermatozoa. // J. Dairy. Sci. 1967. - v. 50. - p. 753-757.

142. Polge C., Salamon S., Wilmut I. Fertilizing capacity of frozen boar semen following surgical insemination. // Vet. Rec. 1970. - v. 87. - p. 424-428.

143. Polge C., Rowson L. Fertilization capacity of bull spermatozoa after freezing at -79°C. // Nature. 1952. - v. 169. - №4307. - p. 626-627.

144. Polge C., Smith A.U., Parkes A.S. Revival of spermatozoa after vitrification and dehydration at low temperature. // Nature. 1949. - v. 164. - №4172. -p. 666-667.

145. Polge C. The fertilizing capacity of boar spermatozoa following freezing and thawing. // 8 th Int. Congr. Animal Reprod. A.I. Krakow. 1976. - v. 4. -p. 1081-1084.

146. Pursel V.G. Advances in preservation of swine spermatozoa. // Agric. Res. -1979.-v. 3.-p. 145-157.

147. Pursel V.G., Johnson L.A. Freezing of boar spermatozoa, fertilizing capacity with concentrated semen and a new thawing procedure. // J. Anim. Sci. -1974.-v.38.-№l.-p. 113-116.

148. Pursel V.G., Johnson L.A. Procedure for the preservation of boar spermatozoa by freezing. // U S. Dept. Agric. A.R.S. 1971. - v. 44. - p. 227-229.

149. Pursel V.G., Johnson L.A., Schulman L.L. Interaction of extender composition and incubation period on cold shock susceptibility of boar spermatozoa. //J. Anim. Sci. 1972. - v. 35. -№3. - p. 580-584.

150. Pursel V.G., Park C.S. Duration of thawing on post-thaw acrosome morphology and immotility of boar spermatozoa frozen in 5-ml maxi-straws. // Theriogenology. 1987. - v. 28. - p. 683-690.

151. Pursel V.G., Schulmann L.L., Johnson L.A. Effect of orvus es paste on acrosome morphology, motility and fertilizing capacity of frozen-thawed boar sperm. // J. Anim. Sci. 1979. - v. 47. - p. 198-202.

152. Rapatz L.I., Menz B.I., Luyet B.I. Anatomy of the freezing process in biological materials. // Cryobiology. N.Y.: 1966. - p. 139-162.

153. Revell S.G. Diluent for longer semen storage. // Pig International. 1990. -v. 30. - p. 73-75.

154. Richter L., Liedecke A. Ein Verfahren zum Tiefgefrieren von Ebersperma. // 7 th Int. Congr. Tierisch. Fortpflanz KB Munchen. 1972. - v. 2. - p. 16171619.

155. Rillo M.S., Sanchez R., Garena Casado P. Current situation of swine artificial insemination technique with liquid semen in Spain. // Proceed. 2 nd Int. Conf. on Boar Semen Preservation. 1991. - p. 321-324.

156. Rohloff D., Allmeling C. Beitrag zur Ebersperma Tiefgefrierung. // Zuchthygiene. 1970. - v. 5. - №2. - p. 88-90.

157. Romeny E., Hillmann K., Richter L. Zur Tiefgefrierung von Ebersamen. 4. Mitteilung: Labor- und Besamungsversuche mit dem Htilsenberg-Verdiinner. // Dtsch. Tierarztl. Wschr. 1974. - v. 81. - №1. - p. 353-354.

158. Salamon S. Deep freezing of boar semen. 3. Effect of centrifugation diluent and dilution rate, pellet volume and method. // Austr. J. Biol. Sci. 1973. -v. 26. - p. 239-247.

159. Salamon S., Wilmut I., Polge C. Deep freezing of boar semen. 1. Effect of diluent composition, protective agents and method of thawing on survival of spermatozoa. // Austr. J. Biol. Sci. 1973. - v. 26. - p. 219-230.

160. Salisbury G.W., Hart R.G. The spermatozoan. // Persp. Biol. Med. 1977. -v. 2.-p. 372-395.

161. Samouilidis S.G., Saoulidis K.I., Kohler-Samoulidis G. Kunstliche Besamung mit in Pailletten und Pellets tiefgefrorenem Ebersamen. // Zuchthygiene. -1987. v. 22. -№l.-p. 34-36.

162. Sandford L.M., King G.J., Macpherson J.W. Influence of glycerol concentration and freezing to -79°C on oxygen uptake and livability of boar and bull spermatozoa. // Canad. J. Anim. Sci. 1972. - v.52. - №1. - p.65-72.

163. Schaap P. Verlangerung der Haltezeit von Frischsperma. // Zuchtwahl u. Besamung. 1987. - v. 114. - p. 26-29.

164. Schmidt D. Der Einflusse des Einfriez- und Auftauer Regimes auf die verlebenstate Gefrierkonservierter Eberspermien. // Vort. Anla Int. Sym. Zur Gefr. von Sperm. Schonow. (DDR). 1978. - p. 211-218.

165. Schmidt D. Die Konservierung in Tabletten. // Tierzucht. 1982. - v. 25. -№3. - p. 209-220.

166. Senegacnic I., Vengust M., Bajt G. The influence of some freezing and thawing buffers on liveability of thawed boar spermatozoa. // 9 th Int. Congr. Anim. Reprod. A.I. Madrid. 1980. - v. 5. - p. 445-448.

167. Tamann G., Bucher A. Die Unterkuh Lungsfanigkeit des Wassers und die linlare Kristallisations Geschwindigkeit des Eises in Wasseringen Losungen. // Ztschr. Anorg. und Allg. Chem. 1935. - №4. - p. 85-92.

168. Taupin C., Dvolaitzky M., Santerey C. Osmotic pressure induced pores in phospholipids vesicle. // J. Biochem. 1975. - v. 14. - №21. - p. 4771-4776.

169. Thibier M., Guerin B. Hygienic aspects of storage and use of semen for artificial insemination. // Anim. Reprod. Sci. 2000. - v. 62. - p. 233-251.

170. Toniolli R. Effect of indole-3-acetic acid (plant auxin) on the preservation at 15°C of boar semen for artificial insemination. // Reprod. Nutr. Dev. 1996. -v. 36.-p. 503-511.

171. Upreti G.C., Oliver J.E., Duganzich D.M. e.a. Development of a chemically defined ram semen diluent (RSD-1). // Animal Reproduction Sci. 1995. -v. 37.-p. 143-157.

172. Urban F., Zizlavsky J. Vliv laseroveno zareni na reprodukci Skotu. // Acta Universitatis Agriculturae. 1993. - v. 41. - №3-4. - p. 261-271.

173. Vazques I.A., Graham E.F. Effect of dialysis and glycerol on diluents for freezing boar semen. // 9 th Int. Congr. Anim. Repr. A.I. Madrid. 1980. -v. 5.-p. 442-444.

174. Vengust M., Tomsic M., Senegacnik I. Neue Erfahrungen in der Verwendung von Tiefgefriersamen von Ebern. 1978. - v. 22. - №3. - p. 123-125.

175. Vicente A. Technology of freezing boar semen. // 7 th Int. Congr. Anim. Reprod. A.I. Munchen. 1972. - v. 2. - p. 1623-1626.

176. Visser D., Salamon S. Effect of composition of Tris-based diluent on survival of boar spermatozoa following deep-freezing. // Austr. J. Biol. Sci. 1974. -v. 27.-p. 485-497.

177. Waberski D., Weitze K.F., Rath D. e.a. Wirkung von bovinen Serumalbumin und Zweitterionenpuffer auf fliissigkonservierten Ebersamen. // Zuchthygiene. 1989. - v. 24.-p. 128-133.

178. Waide Y., Soejema A., Masuda H. Studies on deep freezing of boar semen. 2. Survival and fertility of sperm in the rapid freezing of boar semen. // Jap. J. Zoot. Sci. 1969. - v. 39. - p. 142-143.

179. Watson P.F., Plummer I.M. The response of boar sperm membranes to cold shock and cooling. // Deep freezing of boar semen. Uppsala. Sweden. 1985. -p. 113-129.

180. Watson P.F. Recent development and concepts in the cryopreservation of spermatozoa and the assessment of their post-thawing function. // Reprod. Fertil. Devel. 1995. - v. 7. - p. 871-891.

181. Watson P.F. The interaction of egg yolk and ram spermatozoa. Studies with a fluorescent probe. // J. Reprod. Fertil. 1975. - v. 42. - №1. - p. 105-111.

182. Weitze K.F., Rath D., Baron G. Neue Aspekte der Tiefgefrierkonservierung von Ebersperma in Plastikrohren. // Deutsche Tierarztliche Wochen. Schrift. -1987.-v. 94.-p. 485-487.

183. Westendorf P., Richter L., Treu H. Zur Tiefgefrierung von Ebersperma: Labor- und Besamungsergebnisse mit dem Hiilsenberger Pailletten-Verfahren. // Dtsch. Tierarztl. Wschr. 1975. - v. 82. - p. 261-267.

184. Wilmut I., Polge C. Recent progress in the deep-freeze preservation of boar semen. // J. Reprod. Fertil. 1971. - v. 25. -№2. - p. 301-302.

185. Wilmut I., Polge C. The freezing of boar spermatozoa. // 7 th Int. Congr. Anim. Reprod. Munchen.- 1972.-v. 2.-p. 1611-1615.

186. Wilmut I., Polge. C. The low temperature preservation of boar spermatozoa. 2. The motility and morphology of boar spermatozoa frozen and thawed in diluent which contained only sugar and egg-yolk. // Cryobiology. 1977. -v.14. -p. 479-482.