Потенцирование NO-зависимой активации растворимой гуанилатциклазы тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.04, кандидат медицинских наук Щеголев, Алексей Юрьевич

• Щеголев, Алексей Юрьевич
• кандидат медицинских наук
• 2010

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Щеголев, Алексей Юрьевич

Введение .4 стр.

Цель и задачи исследования.7 стр.

Обзор литературы.8 стр.

Глава 1. О растворимой гуанилатциклазе.8 стр.

1. Основные характеристики растворимой гуанилатциклазы.8 стр.

2. Субъединичная структура и изоформы растворимой гуанилатциклазы.10 стр.

3. Активная форма растворимой гуанилатциклазы.14 стр.

4. Структурные особенности субъединиц фермента.15 стр.

5. -N-концевой гем-связывающий домен.17 стр.

6. -центральный димеризационный домен.21 стр.

7. -С-концевой каталитический домен.23 стр.

8. Механизм каталитической активности растворимой гуанилатциклазы.26 стр.

Глава 2. Оксид азота - эндогенный активатор растворимой гуанилатциклазы.28 стр.

1. Растворимая гуанилатциклаза-как основной внутриклеточный рецептор оксида азота.28 стр.

2. Механизм взаимодействия оксида азота с растворимой гуанилатциклазой.

3. Основные физиологические эффекты оксида азота.

30 стр. .32 стр.

Глава 3. YC-1 - NO-независимый активатор растворимой гуанилатциклазы.34 стр.

Материалы и методы исследований.40 стр.

1. Использованные реактивы.40 стр.

2. Объект исследования.41 стр.

3. Выделение тромбоцитов из крови человека.41 стр.

4. Определение концентрации белка.41 стр.

5. Ферментативная реакция.42 стр.

6. Имму но ферментный анализ.43 стр.

7. Статистическая обработка результатов.46 стр.

Результаты исследований.47 стр.

1. Потецирование NO-зависимой активации растворимой гуанилатциклазы производными протопорфирина IX: (2,4-ди -(1-метоксиэтил)-дейтеропорфирин

IX) - димегин и гематопорфирин.47 стр.

2. Потенцирование NO-зависимой активации растворимой гуанилатциклазы полиамииами: путресцин, спермидин, спермин.52 стр.

3. Потенцирование NO - зависимой активации растворимой гуанилатциклазы производными изатина (эндогенного индола): 5-нитроизатин и арбидол.56 стр.

4. Потенцирование NO-зависимой активации растворимой гуанилатциклазы антибиотиками: левомицетином, тетрациклином и противовирусным препаратом оксолином.66 стр.

Обсуждение результатов.74 стр.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Потенцирование NO-зависимой активации растворимой гуанилатциклазы»

Одним из значительных открытий последних лет, имеющих фундаментальное значение и позволивших по-новому подойти к пониманию молекулярных основ ряда физиологических процессов в клетке, является открытие оксида азота (N0) и установление его роли в регуляции различных физиологических и биохимических процессов (Нобелевская премия в области физиологии и медицины, 1998 г).

Эндогенный оксид азота (N0) образуется из L-аргинина за счет окисления аминогруппы гуанидинового фрагмента под действием L-аргинин- NO-синтетазы и идентичен эндотелиальному фактору релаксации (ЭДФР) [1]. Эндогенный оксид азота участвует в процессах нейротрансмиссии, является цитотоксическим агентом и мощным фактором гемостаза [2]. Кроме того, оксид азота ингибирует агрегацию тромбоцитов и рассматривается в настоящее время как эндогенный вазодилататор. Антиагрегантные свойства и сосудорасширяющее действие оксида азота связаны с активацией растворимой гуанилатциклазы и накоплением циклического 3,5-гуанозинмонофосфата (цГМФ) [3].

Гуанилатциклаза катализирует биосинтез цГМФ из гуанозин-5-трифосфата (ГТФ). Гуанилатциклаза существует в двух формах: растворимой и мембраносвязанной. В настоящее время достоверно установлено, что эти формы не только самостоятельные белки, но и ферменты, с различными механизмами регуляции [4]. Растворимая гуанилатциклаза является гетеродимером, состоящим из двух иммунологически различных субъединиц. Мембранная форма представляет собой трансмембранный фермент, состоящий из одной полипептидной цепи [5;6] и служит рецептором для натрий уретических пептидов [7]. В данной работе будет рассматриваться только растворимая форма гуанилатциклазы, так как именно этот фермент лежит в основе молекулярных механизмов действия оксида азота.

Интерес к гуанилатциклазе резко возрос в конце 80-х годов после идентификации оксида азота в качестве эндотелиального фактора релаксации (ЭДФР) [8]. Именно тогда появилась новая внутриклеточная сигнальная система оксид азота - растворимая гуанилатциклаза - цГМФ [8].

Важная роль повсеместно распространенной сигнальной системы: N0 - растворимая гуанилатциклаза - цГМФ в функции клеток, нарушение активности этой системы при многих патологических состояниях (гипертония, астма, сепсис, септический шок, злокачественные новообразования) требуют создания препаратов, которые бы направленно регулировали активность этой системы и таким образом устраняли бы возникшие нарушения. Подобные модуляторы активности гуанилатциклазы не только способствовали бы выяснению физиологической значимости этого фермента, но и, что не менее существенно, могли бы использоваться в качестве терапевтических средств [9].

Наиболее известными лекарственными средствами, которые долгие годы используются для лечения сердечно-сосудистых заболеваний: стенокардии, тяжелых форм гипертонии, комплексного лечения инфаркта миокарда и сердечной недостаточности и связанных с недостаточностью образования эндогенного оксида азота, являются органические нитраты (нитроглицерин, изосорбитдинитрат и др.) [9]. Однако механизм действия этих соединений был установлен только в конце 70-х годов, когда было обнаружено, что в результате их метаболизма образуется оксид азота, активирующий растворимую гуанилатциклазу, что приводит к накоплению цГМФ. Последний активирует цГМФ-зависимые протеинкиназы, а также кальций-зависимую АТФазу, участвующих в дефосфорилировании легких цепей миозина, что приводит к выходу ионов кальция из мышечных волокон и в конечном итоге к вазодилятации. Несмотря на накопленное к настоящему времени достаточно большое число активаторов гуанилатциклазы, относящихся к донорам оксида азота, поиск новых соединений, которые могли бы избирательно стимулировать активность этого фермента, продолжается. В то же время, в последние годы, стали высказываться предположения, что использование лекарств, аналогичных органическим нитратам и другим донорам оксида азота, может стать проблематичным. Во-первых, это связано с феноменом толерантности, развивающимся при продолжительном применении нитратов. Механизм, лежащий в основе этой толерантности, остается невыясненным, но он может быть связан со сниженной метаболической активностью этих соединений [10]; с избыточным уровнем синтеза ряда эндогенных веществ, регулирующих тонус и состояние сосудистой стенки (эндотелина, ангиотензина 2, супероксид радикала и т.д.) в ответ на лечение [11]; или со снижением чувствительности растворимой гуанилатциклазы к оксиду азота [12]. Во-вторых, при использовании подобных соединений in vivo возможно высвобождение из них оксида азота, его свободная диффузия, прямое взаимодействие с другими молекулами и образованием токсических веществ. В связи с этим поиск соединений, способных активировать гуанилатциклазу по NO-независимому механизму, представлял бы значительный интерес и мог способствовать появлению новых эффективных лекарственных средств.

Таким соединением оказался YC-1 (3-(5'-оксиметил-2'-фурил)-1-бензил индазол) который является не только NO-независимым активатором фермента, но и усиливает активацию фермента донорами оксида азота [13]. В присутствии YC-1 и донора оксида азота наблюдается (в зависимости от концентрации соединений) аддитивная или синергичная активация фермента. Этот эффект имеет большое фармакотерапевтическое и физиологическое значение. Использование соединений, аналогичных по своему действию YC-1, позволило бы значительно снижать дозы нитровазодилятаторов без снижения эффективности их лечебного действия. Это в свою очередь снизило бы возникновение нежелательных побочных эффектов, в том числе и толерантность при их длительном применении. В последнее время обращается особое внимание на возможность существования эндогенных соединений, аналогичных по своему действию YC—1.

Известно, что YC-1 усиливает NO-зависимую активацию гуанилатциклазы и при физиологических концентрациях оксида азота и таким образом повышает эффективность эндогенного N0 в проявлении своих физиологических эффектов. В связи с этим выявление эндогенных соединений, аналогичных по своему действию YC-1, заслуживает особого внимания. Однако данные о них пока отсутствуют.

Цель исследования

Выявление, изучение и анализ соединений, способных усиливать активацию растворимой гуанилатциклазы NO-донорами.

Задачи исследования

Были изучены следующие группы соединений:

1. Производные протопорфирина IX: (2,4-ди-(1-метоксиэтил)-дейтеропорфирин IX) - димегин и гематопорфирин.

2. Полиамины (путресцин, спермидин, спермин)

3. Производные изатина (эндогенного индола): 5-нитроизатин и арбидол противовирусный препарат)

4. Лекарственные средства: антибиотики - левомицетин и тетрациклин, и противовирусный препарат - оксолин.

Обзор литературы

Заключение диссертации по теме «Биохимия», Щеголев, Алексей Юрьевич

Выводы

1) Димегин и гематопорфирин активировали фермент. Соединения не конкурировали с YC-1, но вызывали синергичное усиление активации фермента донором N0, что впервые указывало на их новый биохимический эффект.

2) Полиамины увеличивали активность фермента. Соединения потенцировали N0-зависимую активацию фермента: путресцин и спермин вызывали аддитивный эффект, а спермидин синергично усиливал стимуляцию гуанилатциклазы нитропруссидом натрия. Выявленные конкурентные отношения между полиаминами и YC-1 указывали на то, что механизм потенцирующего влияния полиаминов может быть связан с возможностью их взаимодействия с теми же участками фермента, с которыми взаимодействует YC-1.

3) Производные изатина: 5-нитроизатин и арбидол не влияли на базальную активность гуанилатциклазы, но синергично усиливали индуцированную NO-донорами активацию фермента. 5-нитроизатин и арбидол не конкурировали с YC-1, что исключает возможность их взаимодействия с теми же участками, с которыми взаимодействует YC-1. В наших опытах изатин не конкурировал с 5-нитроизатином и арбидолом.

4) Лекарственные средства: левомецитин, тетрациклин и оксолин не влияли на базальную активность гуанилатциклазы, синергично усиливали индуцированную NO-донором активацию фермента. Использованные препараты не конкурировали с YC-1, что исключало возможность их взаимодействия с теми же участками фермента, с которыми взаимодействует YC-1.

Исследования проведены при финансовой поддержке РФФИ (грант 05-04-48577)

Заключение

Открытие оксида азота, идентификация его в качестве эндотелиального фактора релаксации (ЭДФР), установление роли растворимой гуанилатциклазы как основного внутриклеточного рецептора оксида азота, ответственного за реализацию его физиологических эффектов, привели к появлению новой внутриклеточной сигнальной системы оксид азота - растворимая гуанилатциклаза — цГМФ, выполняющей важную роль в регуляции функции клетки. Нарушение активности этой системы при многих патологических состояниях требует создания препаратов, которые бы направленно регулировали активность этой системы и таким образом устраняли бы возникшие нарушения. Таким соединением оказался YC-1 (производное бензил индазола). YC-1 является NO-независимым активатором растворимой гуанилатциклазы, обладающим гипотензивным и антиагрегантным действием. При этом, что особенно важно, YC-1 потенцирует и синергично усиливает активацию фермента NO-донорами и другими нитровазодилататорами. В результате YC-1 позволяет снижать дозы нитровазодилататоров без изменения эффективности их леченого действия. Это, в свою очередь, снижает или устраняет возможность возникновения нежелательных побочных эффектов, в том числе и развитие толерантности, при их длительном применении. Несмотря на отсутствие в настоящее время единого представления о механизме активации фермента оксидом азота в присутствии YC-1, сам факт открытия YC-1 и соединений аналогичных ему по своему действию, имеет огромное значение для решения задач практической медицины.

В обзоре Тулис [114], посвященному рассмотрению важной роли YC-1 при нарушениях функций сердечно-сосудистой системы, автор обращает особое внимание на возможность существования эндогенных соединений, аналогичных по своему действию YC-1. Выявление и исследование подобных соединений представляется автору важным и заслуживающим особого внимания. Потенцирующее влияние YC-1 на стимуляцию растворимой гуанилатциклазы NO-донорами наблюдается и при физиологических концентрациях оксида азота порядка от 1 до 100 нМ [72]. Поэтому, выявление соединений эндогенной природы, аналогичных по своему действию YC-1, приобретает особое значение. В нормальных условиях, образующийся эндогенный оксид азота, в присутствии подобных соединений, может быть более эффективным в проявлении своих физиологических эффектов. При патологических состояниях, накопление эндогенных соединений, обладающих свойствами YC-1, может привести к тяжелым последствиям, связанным с падением артериального давления и развитием септического шока. Благодаря вездесущей природе внутриклеточной сигнальной системы N0 -растворимая гуанилатциклаза - цГМФ передача внутри и внеклеточных сигналов имеет глубокое (пато)физиологическое значение. Соединения эндогенной природы, аналогичные по действию YC-1, могут служить в качестве потенциальных терапевтических средств и быть использованными в медицинской практике.

YC-1 был впервые описан в конце 80-х, начале 90-х годов прошлого века. Однако, интерес и внимание к этому соединению не ослабевают и в настоящее время. В последние годы, накопились данные, свидетельствующие о многофункциональных свойствах YC-1. Так, появились сообщения об антимитотическом и проапоптическом действии YC-1 [115,116]. Недавно было показано, что YC-1 не только усиливает NO-зависимую активацию растворимой гуанилатциклазы, но и стимулирует экспрессию индуцибельной NO-синтазы [117]. В то же время, продолжается поиск, выявление и исследование соединений, способных (аналогично YC-1) потенцировать NO-зависимую активацию растворимой гуанилатциклазы [118-120].

В представленной работе впервые были выявлены и исследованы соединения эндогенной природы, обладающие способностью YC-1, синергично усиливать NOзависимую активацию гуанилатциклазы. Такими соединениями оказались производные протопорфирина IX - гематопорфирин IX и полиамины (путресцин, спермидин, спермин). Хотя молекулярный механизм усиления NO-зависимой активации гуанилатциклазы этими соединениями не был выяснен, полученные результаты впервые указывают на новый биохимический эффект этих соединений, который позволит более глубоко понять их специфические, биологические функции. Помимо использованных эндогенных соединений, способных аналогично YC-1 усиливать стимуляцию гуанилатциклазы N0-донорами, аналогичной способностью обладали и некоторые фармакологические средства: антивирусные препараты — арбидол и оксолин и антибиотики - левомицетин и тетрациклин. Также как и в случае исследованных эндогенных соединений, механизм действия использованных лекарственных препаратов не выяснен. Однако, сам факт проявления этими соединениями способности синергично усиливать NO-зависимую активацию гуанилатциклазы имеет большое фармакотерапевтическое значение. Все изученные лекарственные препараты широко используются в медицинской практике. Как правило, лечение ими достаточно продолжительно. Поэтому, вполне возможно возникновение дополнительных эффектов, связанных с резким усилением NO-зависимой активации растворимой гуанилатциклазы. Последнее обстоятельство необходимо принимать во внимание.

Таким образом, представленные в настоящей работе данные о способности соединений, как эндогенной природы, так и являющихся лекарственными препаратами, усиливать (аналогично YC-1) стимуляцию растворимой гуанилатциклазы N0-донорами, являются актуальными и представляют значительный интерес не только в плане широких энзимологических исследований, но и для решения задач практической медицины.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Щеголев, Алексей Юрьевич, 2010 год

1. Palmer R., Ashton D., Moncada S. Vascular endothelial cells synthesize nitric oxide from L-arginine. //Nature.-1988.-333, 664-666.

2. Palmer R., Ferrige A., Moncada S. Nitric oxide induces cultured cortical neuron apoptosis. //Nature.-1987.-327, 524-526.

3. Северина И.С. Растворимая гуанилатциклаза в молекулярном механизме физиологических эффектов оксида азота. // Биохимия.- 1998.- 63, выпуск 7.-е. 939 -947.

4. Северина И.С. Оксид азота. Роль растворимой гуанилатциклазы в механизмах его физиологических эффектов. // Вопросы мед. Химии.-2002.- 48, 3 35.

5. Lucas К.А., Pitari G.M., Kazerounian S., Ruiz-Stewart I., Park J., Schulz S., Chepenik K.P., Waldman S.A. Guanylyl cyclases and signaling by cyclic GMP. // Pharmacol. Rev.-2000.-52, 375-413.

6. Chinkers M., Garbers D., Chang M., Lowe D., Chin H., Goeddel D., Schulz S. A membrane form of guanylate cyclase is an atrial natriuretic peptides receptor. // Nature.-1989.-338, 78-83.

7. Ignarro L.J. Haem dependent activation of cytosolic guanylate cyclase by nitric oxide: a widespread signal transduction mechanism. // Bioch. Society Transductions.-1993.-20, 465469.

8. Hobbs A.J., Ignarro L.J. Nitric oxide-cyclic GMP-signal transduction system. // Methods Enzymol.-1996.-269, 134-148.

9. Buchmuller Rouiller Y., Mauel J. Macrophage activation for intracellular killing as induced by a Ca2+ ionophore. Dependence on L-arginine-derived nitrogen oxidation products. //J. Immunol.-1991.-146, 217-223.

10. Munzel Т., Kurs S., Heitzer Т., Harrison D. New insights into mechanism underlying nitrate tolerance. // Am. J. Cardiology.- 1996.-77,24C 30C.

11. Straub A., Stasch J.P., Alonso-Alija C., Benet-Buchholts J., Ducke В., Feurer A., Furstner C. NO-independent stimulators of soluble guanylate cyclase. // Bioorg. Med. Chem. Lett.- 2001.-11,781 -784.

12. Friebe A., Koesling D. Mechanism of YC-l-induced activation of soluble guanylyl cyclase. // Molecular Pharmacology.-1998.-53, 123 127.

13. Walter U. Cyclic-GMP-regulated enzymes and their possible physiological functions. // Adv. Cyclic Nucleotide Protein Phosphorylation Res.-1984.-17,249 258.

14. Hobbs A.J. Soluble guanylate cyclase: the forgotten sibling. // TiPS.-1997.-18, 484 -491.

15. Hardman J., Sutherland E. Guanyl cyclase, an enzyme catalyzing the formation of guanosine 3',5'-monophosphate from guanosine trihosphate. // J.Biol.Chem.-1969.-244, 6363-6370.

16. Ishikawa E., Ishikawa S., Davis Y., Sutherland E. Determination of guanosine 3',5'-monophosphate in tissues and of guanyl cyclase in rat intestine. // J.Biol.Chem.-l969.-244, 6371-6376.

17. Schultz G., Bohme E., Munske K. Guanyl cyclase. Determination of enzyme activity. // Life Sci.-1969.- 8, 1323-1332.

18. White A., Aurbach G. Detection of guanyl cyclase in mammalian tissues. // Biochem. Biophys. Acta.-1969,- 191, 686-697.

19. Furchgott R., Zawadski J. The obligatory role of endothelial cells in the relaxation of arterial smooth muscle by acetylcholine. //Nature.-1980.-288, 373-376.

20. Ignarro L.J. Nitric oxide-mediated vasorelaxation. // Thromb. Haemost.- 1993.- 70, 148-151.

21. McDonald L., Murad F. Nitric oxide and cGMP signaling. // Adv. Pharmacol.- 1995.34, 263-275.

22. Ignarro L.J., Wood K.S. Activation of purified soluble guanylate cyclase by arachidonic acid requires absence of enzyme-bound heme. // Biochem. Biophys. Acta.- 1987.928, 160-170.

23. Gerzer R., Garbers D. The separation of the heme and apoheme forms of soluble guanylate cyclase. // Fed. Proc.-1982.-41, 1410-1413.

24. Craven R., DeRuberties F. Requirement for heme in the activation of purified guanylate cyclase by nitric oxide. // Biochem. Biophys. Acta.-1983.-745, 310-321.

25. Buechler W.A., Nakane M., Murad F. Expression of soluble guanylate cyclase activity requires both enzyme subunits. // Biochem. Biophys. Res. Coramun.-1991.-174, 351-357.

26. Yuen P.S.T., Potter L.R., Garbers D.L. A new form of guanylyl cyclase is preferentially expressed in rat kidney. // Biochemistry.-1990.-29, 10872-10878.

27. Harteneck C. Molecular cloning and expression of a new alpha-subunit of soluble guanylyl cyclase. Interchangeability of the alpha-subunits of the enzyme. // FEBS Lett.-1991,-292, 217-222.

28. Gupta G., Azam M., Yang L. The beta2 subunit inhibits stimulation of the alphal/betal form of soluble guanylyl cyclase by nitric oxide. Potential relevance to regulation of blood pressure. // J.Clin.Invest.-1997.-100, 1488.

29. Mayer В., Koesling D. cGMP signalling beyond nitric oxide. // Trends Pharmacol. Sci.- 2001.-22, 546-548.

30. Zabel. U., Weeger. M., La M ., Schmidt. H.H. Human soluble guanylate cyclase: functional expression and revised isoenzyme family. // Biochem. J.-1998.-335, 51-57.

31. Lyer L.M., Anantharaman V., Aravind L. Ancient conserved domains shared by animal soluble guanylyl cyclases and bacterial signaling proteins. // BMC Genomics.- 2003.-4, 5.

32. Nioche P., Berka V., Vipond J., Minton N., Tsai A.L., Raman C.S. Femtomolar sensitivity of a NO sensor from Clostridium botulinum. // Science.-2003.-306, 1550-1553.

33. Chhajlani V., Frandberg P.A., Ahlner J., Axelsson K.L., Wikberg J.E. Heterogeneity in human soluble guanylate cyclase due to alternative splicing. // FEBS Lett.-1991.-290, 157-158.

34. Giuili G., Scholl U., Bulle F., Guellaen G. Molecular cloning of the cDNAs coding for the two subunits of soluble guanylyl cyclase from human brain. // FEBS Lett.- 1992.-304, 8388.

35. Simpson P.J., Nighorn A., Morton D.B. Identification of a novel guanylyl cyclase that is related to receptor guanylyl cyclases, but lacks extracellular and transmembrane domains. // J.Biol.Chem.-1999.-274,4440-4446.

36. Papapetropoulos A., Pyriochou A. Soluble guanylyl cyclase: more secrets revealed. // Cellular Signaling. 2005.-17, 407 413.

37. Wolin M., Wood K., Ignarro L. Guanylate cyclase from bovine lung. A kinetic analysis of the regulation of the purified soluble enzyme by protoporphyrin IX, heme and nitrosyl-heme. //J.Biol.Chem.-1982.-257, 13312.

38. Foerster J.,Harteneck C., Malkewitz J. A functional heme-binding site of soluble guanylyl cyclase requires intact N-termini of alpha 1 and beta 1 subunits. // Eur.J.Biochemistry.- 1996.-240, 380-386.

39. Zhao Y., Marietta M. A. Localization of the heme binding region in soluble guanylate cyclase. //Biochem.-l 997.-36, 15959-15964.

40. Evgenov О., Pacher P., Schmidt P., Hasko G, Schmidt H.H., Stasch J.P. N0-independent stimulators and activators of soluble guanylate cyclase: discovery and therapeutic potential. // Nat. Rev. Drug Discov.-2006.-5, 755-768.

41. Zhao Y., Schelvis J., Babcock G., Zhao Y., Schelvis J.P., Babcock G.T., Marietta M.A. Identification of histidine 105 in the betal subunit of soluble guanylate cyclase as the heme proximal ligand. // Biochemistry.- 1998.-37, 4502-4509.

42. Friebe A., Wedel В., Harteneck C., Foerster J., Schultz G., Koesling D. Functions of conserved cysteines of soluble guanylyl cyclase. // Biochemistry.-1997.-36, 1194-1198.

43. Martin E., Sharina I., Kots A. A short history of cGMP, guanylyl cyclases, and cGMP-dependent protein kinases. // Handb Exp Pharmacol.-2009.-191, 1-14.

44. Schmidt P., Schramm M., Schroder H. Identification of residues crucially involved in the binding of the heme moiety of soluble guanylate cyclase. // J.Biol. Chem.-2004.-279, 3025-3032.

45. Tesmer J.J., Sunahara R.K., Gilman A. Crystal structure of the catalytic domains of adenylyl cyclase in a complex with Gsalpha.GTPgammaS. // Science.-1997.-278, 1907-1916.

46. Sase K., Michel T. Caveolin versus calmodulin. Counterbalancing allosteric modulators of endothelial nitric oxide synthase. J.Biol. Chem.-1997.-272(41), 25907-25912.

47. Minushkina L.O., Zateishchikov D.A., Zateishchikova A.A., Zotova I.V., Kudriashova O.Y., Nosikov V.V., Sidorenko B.A. NOS3 gene polymorphism and left ventricular hypertrophy in patients with essential hypertension. // Kardiol.-2002.-42(3), 42-43.

48. Ко F.N., Wu C.C., Kuo S.C., Lee F.Y., Teng C.M. YC-1, a novel activator of platelet guanylate cyclase. // Blood.-1994.-84,4220-4233.

49. Rothermund L., Friebe A., Paul M., Koesling D., Kreutz R. Acute blood pressure effects of YC-1-induced activation of soluble guanylyl cyclase in normotensive and hypertensive rats. // Br. J. Pharmacology.-2000.-130, 205-208.

50. Friebe A., Schultz G., Koesling D. Sensitizing soluble guanylyl cyclase to become a highly СО-sensitive enzyme. // EMBO J.-1996.-15, 6863-6868.

51. Wu C.C., Ко F.N., Kuo S.C., Lee F.Y., Teng C.M. YC-1 inhibited human platelet aggregation through NO-independent activation of soluble guanylate cyclase. // Br. J.Pharmacology.-1995.-116, 1973-1978.

52. Mayer В., Brunner F., Schmidt K. Novel actions of methylene blue. // Eur. Heart. J.- 1993.-14 (Suppl.l), 22-26.

53. Martin E., Lee Y.C., Murad F. YC-1 activation of human soluble guanylyl cyclase has both heme-dependent and heme-independent components. // Proc. Natl. Acad. Sci.-2001.-98, 12938-12942.

54. Mayer В., Koesling D. GMP signalling beyond nitric oxide. // Trends Pharmacol. Sci.-2001.-22, 546-548.

55. Kharitonov V.G, Russwurm M., Magde D., Sharma V.S., Koesling D. Dissociation of Nitric Oxide from Soluble Guanylate Cyclase. // Biochem. Biophys. Res. Commun.-1997.-239,284-286.

56. Russwurm M., Mergia E., Mullerschusen F., Koesling D. Inhibition of deactivation of NO-sensitive guanylyl cyclase accounts for the sensitizing effect of YC-1. // J.Biol.Chem.-2002.-28, 24883-24888.

57. Cary S.P., Winger J.A., Marietta M.A. Tonic and acute nitric oxide signaling through soluble guanylate cyclase is mediated by nonheme nitric oxide, ATP, and GTP. // Proc.Natl.Acad. Sci.-2005.-102, 13064-13069.

58. Russwurm M., Koesling D. NO activation of guanylyl cyclase. // EMBO J.-2004.-23, 4443-4450.

59. Stone J.R., Marietta M.A. Soluble guanylate cyclase from bovine lung: activation with nitric oxide and carbon monoxide and spectral characterization of the ferrous and ferric states. //Biochemistry.-1994.-33, 5636-5640.

60. Denninger J.W., Schelvis J.P., Brandish P.E., Zhao Y., Babcock G.T., Marietta M.A. Interaction of soluble guanylate cyclase with YC-1: kinetic and resonance Raman studies. // Biochemistry.- 2000.-39,4191-4198.

61. Galle J., Zabel U., Hubner U., Hatzelmann A., Wagner В., Wanner C., Schmidt H.H. Effects of the soluble guanylyl cyclase activator, YC-1, on vascular tone, cyclic GMP levels and phosphodiesterase activity. //Br. J. Pharmacology.-1999.-127,195-203.

62. Hurley J.H. The adenylyl and guanylyl cyclase superfamily. // Curr.Opin.Struct.Biol.-1998.-8,770-777.

63. Liu Y., Ruoho A.E., Rao V.D., Hurley J.H. Catalytic mechanism of the adenylyl and guanylyl cyclases: modeling and mutational analysis. // Proc.Natl.Acad. Sci.-1997.-94, 13414-13419.

64. Friebe A., Russwurm M., Koesling D. A point-mutated guanylyl cyclase with features of the YC-1-stimulated enzyme: implications for the YC-1 binding site? // Biochemistry.-1999.-38, 15253-15257.

65. Lamothe M., Fu-Jung Chang., Balashova N., Shirokov R., Beuve A. Functional characterization of nitric oxide and YC-1 activation of soluble guanylyl cyclase: structural implication for the YC-1 binding site? // Biochemistry.-2004.-43, 3039 3048.

66. Sopkova-De Olivera Santos J., Collot V., Bureau I. YC-1, an activation inductor of soluble guanylyl cyclase. Acta Cristallogr.-2000.-56, 1035-1036.

67. Северина И.С. Оксид азота. Потенцирование NO-зависимой активации растворимой гуанилатциклазы (пато)физиологическое и фармакотерапевтическое значение. // Биомедицинская химия.-2007.- том 53, вып.4, с. 385-399.

68. Waldman S.A., Murad F. Cyclic GMP syntesis and function. // Pharmacol. Rev.-1987.-39(3), 163-196.

69. Yazawa S., Tsychita H., Makino R. Functional characterization of two nucleotide-binding sites in soluble guanylate cyclase. // J.Biolog.Chem.-2006.-281, 21763-21770.

70. Stasch J.P., Dembowsky К., Perzborn E., Stahl E., Schramm M. Cardiovascular actions of a novel NO-independent guanylyl cyclase stimulator, BAY 41-8543: in vivo studies. // Br. J. Pharmacology.-2002.-135, 344 355.

71. Doggrell S.A. Clinical potential of nitric oxide-independent soluble guanylate cyclase activators. // Curr. Opin.Investig. Drugs.-2005.-6, 874-878.

72. Bradford H.M. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding // Analytical Biochemistry.-1976.-72, 248-254.

73. Garbers D.L., Murad F. Guanylate cyclase assay: methods // Adv. Cycl. Nucleotide Res. .-10, 57-67.

74. Чирков Ю.Ю., Тыщук И.А., Белушкина H.H., Северина И.С. Гуанилатциклаза тромбоцитов крови человека. // Биохимия.-1987.-52, 956-963.

75. Кирилова Г.В., Яшунский В.Г., Бабушкина Т.А., Пономарев Г.В. // БИ, А.с.857138 СССР.-1981 .-№31,115.

76. Жамкочан Г.А., Кирилова Г.В., Пономарев Г.В., Сухин Г.М., Романычев Ю.А., Черненко О.В., Ярцев Е.И., Яшунский В.Г. // БИ, А.с.1160710 СССР.-1984.

77. Ignarro L.J., Ballot В., Wood K.S. Regulation of soluble guanylate cyclase activity by porphyrins and metalloporphyrins. //J.Biolog.Chem.-l 984.-259, 6201-6207.

78. Perachi M., Toschi V., Bamonti-Catena F., Lombardi L., Baregg В., Catelezzi A., Colombi M., Maiole А.Т., Polli E.E. Plasma cyclic nucleotide levels in acute leukemia patients. // Blood.-l 987.-69, 1613-1616.

79. Schmidt H.H., Lohmann S.M., Walter U. The nitric oxide and cGMP signal transduction system: regulation and mechanism of action. // Biochim Biophys Acta.-1993.-1178(2), 153-175.

80. Morbidelli L., Chang C.H., Douglas J.G., Granger H.J., Ledda F., Ziche M. Nitric oxide mediates mitogenic effect of VEGF on coronary venular endothelium. // Am. J. Physiol. 1996.-270, H411-415.

81. Clo C., Tantini В., Pignatti C., Caldarera C.M. Increased cyclic GMP content in confluent and serum-restricted heart cell cultures exposed to polyamines. // J. Mol. Cell Cardiol.- 1983.-15(2), 139-143.

82. Clow A., Davidson J., Glover V., Halket J.M., Milton A.S., Sandler M., Watkins P.J. Isatin and tribulin concentrations are increased in rabbit brain but not liver following pentylenetetrazole administration. //Neurosci Lett.-1989.- 107(1-3),327-30.

83. Medvedev A.E., Glover V. Tribulin and endogenous MAO-inhibitory regulation in vivo. //Neurotoxicology.-2004.-25(l-2), 185-192.

84. Medvedev A.E., Buneeva O.A., Glover Y. Interaction of pyruvate kinase with isatin and deprenyl. // Biologies Targets a Therapy .- 2007.- (2), 1-12.

85. Medvedev A.E., Sandler M., Glover V. The influence of isatin on guanylyl cyclase of rat heart membranes. // Eur. J. Pharmacol.-1999.-384, 239-241.

86. Glover V., Medvedev A., Sandler M. Isatin is a potent endogenous antagonist of guanylate cyclase-coupled atrial natriuretic peptide receptors. // Life Sci.- 1995.- 57 , 20732079.

87. Medvedev A.E., Clow A., Sandler M., Glover V. Isatin: a link between natriuretic peptides and monoamines? // Biochem Pharmacol.-1996.- 52, 385-391. •

88. Medvedev A.E., Bussygina O.G., Pyatakova N.V., Sandler M., Severina I. Effect of isatin on nitric oxide-stimulated soluble guanylate cyclase from human platelets. // Biochem. Pharmacol., 63, 763-766.

89. Chapman J.G., Magee W.P., Stukenbrok H.A., Beckius G.E., Milici A.J., Tracey W.R. A novel nonpeptidic caspase-3/7 inhibitor, (S)-(+)-5-l-(2-methoxymethylpyrrolidinyl)sulfonyl]isatin reduces myocardial ischemic injury. // Eur. J.Pharmacol., 456, 59-68.

90. Verma M., Pandeya S.N., Singh K.N., Stables J.P. Anticonvulsant activity of Schiff bases of isatin derivatives. // Acta Pharm.-2004.-54,49-56.

91. Sriram D., Bal T.R., Yogeeswari P. Aminopyrimidinimino isatin analogues: design of novel non- nucleoside HIV-1 reverse transcriptase inhibitors with broad-spectrum chemotherapeutic properties. // J.Pharm. Pharmaceut. Sci., 8, 565-577.

92. Chohan Z.H., Pervez H., Rauf A., Khan K.M., Supuran C.T. Isatin-derived antibacterial and antifungal compounds and their transition metal complexes. // J.Enzyme Inhib. Med. Chem.- 2004.- 19, 417-423.

93. Severina I.S., Bussygina O.G., Pyatakova N.V., Khropov Y.V., Krasnoperov R.A. Ambroxol as an inhibitor of nitric oxide-dependent activation of soluble guanylate cyclase. // Eur.J. Pharmacol.-2000.- 407, 61-64.

94. Северина И.С. NO: Новый взгляд на механизм действия старых лекарств. // Биомед. химия.-2005.-51, 19-29.

95. Григорьев Н.Б., Левина В.И., Азизов О.В., Пятакова Н.В., Паршин В.А., Арзамасцев А.П., Северина И.С., Граник В.Г. NO-донорные свойства химиотерапевтического средства "Метронидазол". // Вопр. биол. мед. фармацевт. химии.-2002.- 4,10-14.

96. Левина В.И., Азизов О.В., Пятакова Н.В., Северина И.С., Арзамасцев А.П., Григорьев Н.Б. Генерация оксида азота при гидролитических превращениях химиотерапевтического препарата "Нитазол". // Вопр. биол. мед. фармацевт, химии.-2002.- 4,6-10.

97. Левина В.И., Трухачева Л.А., Пятакова Н.В., Арзамасцев А.П., Северина И.С., Григорьев Н.Б., Граник В.Г. Исследование NO-донорной активности антимикробного препарата тинидазол. // Химико-фармацевтический журнал.-2004.-38, 15-18.

98. Северина И.С., Пятакова Н.В., Щеголев А.Ю., Пономарев Г.В. YC-1-аналогичное потенцирование NO-зависимой активации растворимой гуанилатциклазы производными протопорфирина IX. // Биохимия.-2006.-том 71,вып.3,с.426-431.

99. Северина И.С., Пятакова H.B., Щеголев А.Ю. Потенцирование NO-зависимой активации растворимой гуанилатциклазы полиаминами. // Биохимия.-2007.-53,1,44-49.

100. Hoenicka М., Becker Е.М., Apeler Н., Sirichoke Т., Schroder Н., Gerzer R., Stasch J.P. Purified soluble guanylyl cyclase expressed in a baculovirus/Sf9 system: stimulation by YC-1, nitric oxide, and carbon monoxide. // J.Mol. Med., 77, 14-23.

101. Блинов Н.П., Громова Е.Г. Современные лекарственные препараты. // 3-е издание, Спб: Питер (2003), с.881-882,884.

102. Щеголев А.Ю., Сидорова Т.А., Северина И.С. Потенцирование NO-зависимой активации растворимой гуанилатциклазы левомицетином, тетрациклином и оксолином. // Биомед. химия.-2009.-55, 331-337.

103. Tulis D.A. Salutery properties of YC-1 in the cardiovascular and haematological systems. // Curr. Med. Chem. Cardiovasc. Hematol. Agents.-2004.-2, 343-359.

104. Tsai I.F., Lin C.Y., Huang C.T., Lin Y.C., Liao C.H. Modulation of human monocyte-derived dendritic cells maturation by a soluble guanylate cyclase activator, YC-1, in a cyclic nucleotide independent manner. // Int. Immunopharmacol.-2007.-7,1299-1310.

105. Resvani A.N., Peyton K.J., Durante W., Schafer A.I., Tulis D.A. The cyclic GMP modulators YC-1 and zaprinast reduce vessel remodeling through antiproleferative and proapoptotic effects. //J. Cardiovasc. Pharmacol. Ther.-2009.-14, 116-124.

106. Liu X.M., Peyton K.J., Mendelev N.N., Wang H., Tulis D.A., Durante W. YC-1 stimulates the expression of gaseous monoxide-generating enzymes in vascular smooth muscle cells. И Mol. Pharmacol.-2009.-75,208-217.

107. Martin N.I., Derbyshire E.R., Marietta M.A. Syntesis and evaluation of phosphonate analogue of the soluble guanylate cyclase activator YC-1. // Biorg. Med. Chem. Lett.-2007.-17,4938-4941.

108. Stasch J.P., Hobbs A.J. NO-independent, haem-dependent soluble guanylate cyclase stimulators. // Handb. Exp. Pharmacol.-2009.-191, 277-308.