Новый потенциометрический способ оценки антирадикальной емкости тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 02.00.02, кандидат наук Газизуллина Елена Ринатовна

• Газизуллина Елена Ринатовна
• кандидат наук
• 2019

Оглавление диссертации кандидат наук Газизуллина Елена Ринатовна

ВВЕДЕНИЕ

Глава 1. Литературный обзор

1.1 Активные формы кислорода

1.2 Антиоксидантная система организма

1.3 Методы исследования антиоксидантных/антирадикальных свойств соединений и кинетики реакций генерирования и ингибирования радикалов

1.3.1 Методы исследования антиоксидантных свойств на модели окислителей нерадикальной природы

1.3.2 Методы исследования антиоксидантных совйств и кинетики реакций генерирования и ингибирования радикалов на модели окислителей радикальной

природы

Глава 2. Аппаратура и техника эксперимента

2.1 Оборудование и средства измерения

2.2 Реактивы и рабочие растворы

2.3 Объекты исследования

2.4 Методики проведения экспериментов

2.4.1 Потенциометрический метод исследования антиоксидантной емкости

2.4.2 Определение остаточной концентрации антиоксидантов

2.4.3 Определение противорадикальной активности спектрофотометрическим методом с использованием радикала DPPH

2.4.4 Определение общего содержания полифенолов спектрофотометрическим методом с использованием реактива Folin-Ciocalteu

2.4.5 Статистическая обработка результатов

2.4.6 Оценка предела обнаружения потенциометрического способа

Глава 3. Исследование кинетики генерирования свободных радикалов

потенциометрическим методом

3.1 Выбор акцептора радикалов

3.2 Исследование кинетики генерирования пероксильных радикалов с

использованием K4[Fe(CN)6]

Глава 4. Разработка потенциометрического способа определения антирадикальной емкости

4.1 Исследование закономерности изменения окислительно-восстановительного потенциала в процессах генерирования радикалов и ингибирования их антиоксидантами

4.2 Выбор условий проведения эксперимента

4.3 Определение периода индукции

4.4 Определение антирадикальной емкости модельных антиоксидантов

Глава 5. Определение антирадикальной емкости экстрактов лекарственного растительного сырья

5.1 Определение антирадикальной емкости экстрактов чая

5.2 Определение антирадикальной емкости экстрактов лекарственного

растительного сырья

Глава 6. Определение показателей точности потенциометрического способа

исследования антирадикальной емкости

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

135

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. Во всех живых организмах постоянно протекают реакции с образованием свободных радикалов, которые представляют собой реакционноспособные окислители, играющие важную роль в процессах метаболизма клеток в условиях нормы. Образование же их в избыточных количествах является фактором разрушения макромолекул, структур клеток, что может привести к развитию различных заболеваний и патологических состояний, сопровождающихся генерированием свободных радикалов. Ингибиторами свободнорадикальных реакций являются вещества -антиоксиданты, способные взаимодействовать с ними с образованием неактивных продуктов. В организме человека антиоксидантная система представлена достаточно большим разнообразием соединений. Однако в условиях агрессивного действия окружающей среды, например, в условиях повышенного радиационного фона, при действии токсичных соединений, в период инфекционных заболеваний и т.д., действия этой системы недостаточно. Для поддержания окислительно-восстановительного равновесия на стационарном уровне все большее применение находит использование синтетических и природных ингибиторов радикалов в составе продуктов питания, БАДов и лекарственных препаратов. Таким образом, с одной стороны, для мониторинга состояния организма необходимо проводить исследования антирадикальных свойств биологических объектов, с другой стороны, существует необходимость в изучении антирадикальных свойств пищевых и фармацевтических объектов, используемых для поддержания оксидант -антиоксидантного баланса в организме и лечения заболеваний, связанных с действием свободных радикалов.

В литературе, на сегодняшний день, описано достаточно большое разнообразие способов исследования антиоксидантных / антирадикальных свойств соединений, базирующихся на изучении реакций антиоксидантов с модельными окислителями, которые можно подразделить на соединения

радикальной и нерадикальной природы. Среди методов исследования большое разнообразие представляют способы, базирующиеся на моделях окислителей нерадикальной природы, в то время как способы, базирующиеся на моделях окислителей радикальной природы, заслуживают большего внимания, поскольку они позволяют интерпретировать результаты анализа по отношению к живому организму.

Существующие способы оценки антирадикальных свойств соединений позволяют изучать реакции ингибирования радикалов антиоксидантами, однако, не многие из них имеют возможность исследовать кинетику радикальных реакций, а имеющиеся недостатки и ограничения, такие как сложность методики и аппаратуры, высокая стоимость приборов препятствуют их широкому использованию.

Таким образом, создание более универсального и информативного способа оценки антирадикальных свойств соединений разной химической природы, а также изучение кинетики радикальных реакций является актуальной задачей не только аналитической химии, но и современной медицины.

Поскольку в организме протекает множество реакций с образованием радикальных частиц, одним из основных критериев, предъявляемых к методам исследования ингибирующего действия объектов, является использование радикал - генерирующих систем с образованием свободных радикалов подобных радикалам организма.

Целесообразность использования электрохимических методов анализа обусловлена природой протекаемых реакций ингибирования радикалов антиоксидантами, сопровождающиеся электронно-протонным переносом. Активное развитие электрохимических методов обосновано, прежде всего, преимуществами данной группы, такими как чувствительность, экспрессность, использование простого и недорогого оборудования, с возможностью реализации его как в портативном, так и в on-line оформлении, возможность исследования мутных и окрашенных образцов.

Перенос электрона с молекулы антиоксиданта на радикал должен сопровождаться изменением окислительно-восстановительного потенциала системы, что позволяет использовать потенциометрию в качестве способа регистрации этих процессов.

Степень разработанности темы исследования

Исследование антирадикальных свойств модельных антиоксидантов и многокомпонентных объектов, таких как продукты питания, фармацевтические препараты, специально синтезированные лекарственные средства является актуальной задачей при поддержании оксидант-антиоксидантного баланса в организме, особенно в условиях влияния неблагоприятных факторов окружающей среды и при лечении заболеваний, связанных с окислительным действием свободных радикалов на макромолекулы. Для исследования антирадикальных свойств объектов разработаны оптические, электрохимические методы анализа и метод ЭПР-спектроскопии, которые достаточно подробно описаны в литературе. Однако использование этих методов может быть затруднено ввиду некоторых их недостатков: сложность методик, использование дорогостоящего и трудного в рутинном анализе оборудования, невозможность, в ряде случаев, исследования окрашенных проб, использование сильных окислителей, проведение процедуры анализа в кислой или щелочной среде и сложность интерпретации результатов по отношению к живым организмам. Наибольший интерес представляют способы, позволяющие проводить исследования не только антирадикальных свойств соединений, но и изучать кинетику радикальных реакций.

Поскольку процесс взаимодействия антиоксидантов с радикалами сопровождается протонно-электронным переносом, для изучения этих процессов можно использовать простые и надежные электрохимические способы. Однако в литературе мало уделяется внимания электрохимическим методам исследования антирадикальных свойств, особенно способам с использованием радикал-генерирующих систем.

Поскольку реакции ингибирования радикалов антиоксидантами могут сопровождаться изменением потенциала, это дает возможность использовать потенциометрию в качестве метода исследования этих процессов. Среди электрохимических методов потенциометрия является достаточно простым и экспрессным методом анализа, которая позволяет использовать универсальные и недорогие приборы, исследовать мутные и окрашенные образцы, проводить анализ в разных средах.

Настоящая работа посвящена созданию нового потенциометрического способа определения антирадикальной емкости соединений разной химической природы с использованием радикал-генерирующей системы в качестве модели окислителя. Предлагаемый потенциометрический способ позволяет проводить исследования как реакции генерирования свободных радикалов, так и процессов ингибирования их антиоксидантами.

Потенциометрическим методом определена антирадикальная емкость соединений разной химической природы и оценены кинетические параметры реакции генерирования свободных радикалов, а именно скорость и константа скорости генерирования свободных радикалов.

Новый способ определения антирадикальной емкости основан на установлении закономерностей изменения потенциала системы в процессах генерирования радикалов и ингибирования их антиоксидантами. Антирадикальная емкость (АРЕ) оценивается как произведение константы скорости генерирования свободных радикалов, концентрации ингибитора радикалов и периода индукции, то есть времени взаимодействия радикалов с антиоксидантом до полного расходования последнего. В качестве модели радикал-генерирующей системы выбрано соединение 2.2'-азобис(2-амидинопропан) дигидрохлорида (AAPH), который при температурном воздействии генерирует в раствор пероксильные радикалы, схожие по своей реакционной активности радикалам, образующимся в результате окислительных процессов в организме.

Следует отметить, что потенциометрия позволяет проводить исследования реакций ингибирования напрямую при взаимодействии радикалов и антиоксидантов без использования дополнительных реагентов, как в случае хемилюминесценции, ЭПР-спектроскопии, что делает способ достаточно простым в исполнении и более точным с точки зрения исключения возможных конкурирующих реакций.

Потенциометрическим способом исследована кинетика реакции генерирования пероксильных радикалов, определены значения скорости и константы скорости этой реакции. Новым потенциометрическим способом на модели радикал-генерирующей системы ААРН определена АРЕ модельные антиоксидантов с разным числом и положением активных групп в молекуле. Полученные результаты согласуются с литературными данными. Кроме того, новым потенциометрическим способом определена АРЕ экстрактов растительного сырья. Высокая степень корреляции полученных результатов антирадикальной емкости с результатами известных оптических и электрохимических методов исследования, а также высокие показатели точности способа указывают на достоверность результатов анализа и позволяют использовать новый способ при исследовании модельных антиоксидантов и сложных многокомпонентных объектов.

Диссертационная работа является частью исследований, проводимых на кафедре Аналитической химии УрФУ им. Б.Н. Ельцина в рамках грантов РНФ № 16-13-00008 и № 17-13-01096, гранта молодых ученых У.М.Н.И.К

Цель работы: создание нового потенциометрического способа определения антирадикальной емкости соединений на модели радикал-генерирующих систем.

Достижение поставленной цели требует решения следующих задач:

1. Исследование и выбор модельной системы, включающей окислитель радикальной природы, позволяющий моделировать радикальные процессы, протекающие в живых организмах, и акцептор этих радикалов; изучение реакций взаимодействия свободных радикалов с акцептором;

2. Разработка потенциометрического способа изучения кинетических характеристик реакции генерирования радикалов: скорости и константы скорости генерирования, на примере реакции термического распада 2,2'-азобис(2-амидинопропан) дигидрохлорида (ААРН) с использованием восстановленной формы металла в составе комплексного соединения в качестве акцептора, включающего выбор условий проведения исследований (температура, концентрации);

3. Разработка потенциометрического способа определения антирадикальной емкости (АРЕ) объектов с использованием AAPH в качестве модели окислителя на основании изученных закономерностей изменения потенциала системы в процессах генерирования свободных радикалов и ингибирования их антиоксидантами;

4. Описание алгоритмов процедуры анализа, выбор оптимальных условий формирования аналитического сигнала (влияние буферной емкости, ионной силы, рН раствора и концентраций соединений на результат анализа);

5. Определение антирадикальной емкости модельных антиоксидантов с разным числом и положением функциональных групп в молекуле;

6. Определение АРЕ экстрактов растительного сырья; проведение корреляционных исследований с известными методами анализа (потенциометрическим методом с использованием системы Kз[Fe(CN)6]/K4[Fe(CN)6], спектрофотометрическими методами с использованием реактива Folin-Ciocalteu и с использованием стабильного хромоген-радикала DPPH);

7. Оценка аналитических характеристик потенциометрического способа (расчет показателей точности и предела определения АРЕ).

Научная новизна работы

Впервые показана возможность изучения реакций ингибирования свободных радикалов антиоксидантами с использованием потенциометрического метода.

Предложен способ исследования кинетики реакции генерирования пероксильных радикалов потенциометрическим методом на модели радикал-генерирующей системы 2.2'-азобис(2-амидинопропан) дигидрохлорида (ААРН) с использованием восстановленной формы металла в составе комплексного соединения. С помощью данного способа рассчитаны значения скорости и константы скорости генерирования пероксильных радикалов в условиях проведения исследования АРЕ. Полученные значения согласуются с данными, описанными в литературе.

Разработан новый потенциометрический способ определения антирадикальной емкости природных антиоксидантов, основанный на реакции взаимодействия пероксильных радикалов, образованных в результате распада ААРН, с антиоксидантами образца. Разработанным способом исследованы модельные растворы индивидуальных антиоксидантов и объектов со сложной многокомпонентной матрицей. Показана высокая корреляция результатов определения антирадикальной емкости новым потенциометрическим способом с известными потенциометрическим и оптическими методами на моделях окислителей радикальной и нерадикальной природы.

Теоретическая и практическая значимость работы

В работе представлены термодинамическое и кинетическое обоснование выбора акцептора радикалов при исследовании реакций генерирования пероксильных радикалов. Установлен порядок реакции акцептора с радикалами. Оценены кинетические характеристики реакции генерирования пероксильных радикалов на модели ААРН в условиях близких к физиологическим.

Разработан способ определения скорости и константы скорости реакции образования пероксильных радикалов в результате термического распада молекулы инициатора потенциометрическим методом с использованием комплекса восстановленной формы металла в качестве акцептора свободных радикалов.

Теоретически обоснован и предложен простой и экспрессный потенциометрический способ определения антирадикальной емкости соединений разной химической природы с использованием радикал-генерирующих систем.

Оценен предел обнаружения антирадикальной емкости и основные метрологические характеристики потенциометрического способа.

Определены антирадикальная емкость и коэффициенты ингибирования модельных антиоксидантов. Полученные данные согласуются с литературными.

Показано и обосновано использование потенциометрического способа для исследования антирадикальных свойств сложных многокомпонентных объектов на примере экстрактов растительного сырья.

Положения, выносимые на защиту:

1. Результаты исследования взаимодействия пероксильных радикалов с акцептором, полученные потенциометрическим методом;

2. Потенциометрический способ исследования кинетики реакции генерирования свободных радикалов на примере 2.2'-азобис(2-амидинопропан) дигидрохлорида (ААРН) с использованием восстановленной формы металла в составе комплексного соединения;

3. Результаты определения скорости и константы скорости генерирования пероксильных радикалов предложенным потенциометрическим способом;

4. Результаты исследования закономерностей изменения потенциала в процессах генерирования свободных радикалов и ингибирования их антиоксидантами;

5. Новый потенциометрический способ определения АРЕ соединений с использованием радикал-генерирующей системы 2.2'-азобис(2-амидинопропан) дигидрохлорида (ААРН);

6. Результаты определения антирадикальной емкости модельных антиоксидантов, полученных предложенным потенциометрическим способом;

7. Результаты определения антирадикальной емкости объектов со сложной матрицей, исследованных предложенным потенциометрическим способом.

Методология и методы исследования

Методологической основой при выполнении диссертационного исследования послужили теоретические знания и современные методы исследования антиоксидантных / антирадикальных свойств соединений с использованием моделей окислителей радикальной и нерадикальной природы.

При выборе радикала руководствовались современными наработками в области исследования радикальных реакций, для этого использовали мировые научные библиографические базы.

При выборе реагента в качестве акцептора радикалов для оценки обратимости и окислительно-восстановительных свойств соединений использовали метод циклической вольтамперометрии.

В качестве основного метода исследования антирадикальных свойств и кинетики генерирования радикалов был выбран потенциометрический, как наиболее простой, информативный, более полно отвечающий природе изучаемых процессов.

В качестве методов сравнения выбраны спектрофотометрический метод исследования антиоксидантной активности на модели стабильного радикала DPPH, спектрофотометрический метод оценки общего содержания полифенолов, как наиболее точные, утвержденные ГОСТ методы анализа.

Степень достоверности результатов

Высокая степень достоверности работы обеспечена использованием современных методов исследования и современного оборудования для электрохимических измерений, а также статистической обработкой результатов. Достоверность полученных результатов подтверждена проведенными корреляционными исследованиями с общепринятыми оптическими и электрохимическими методами анализа: спектрофотометрический способ определения противорадикальной активности

с использованием радикала DPPH, спектрофотометрический способ определения общего содержания полифенолов с использованием реактива Folin-Ciocalteu, потенциометрический способ определения антиоксидантной емкости с использованием системы K3[Fe(CN)6] / K4[Fe(CN)6] в качестве модели окислителя.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Новый потенциометрический способ оценки антирадикальной емкости»

Апробация работы

Результаты исследований, выполненные в рамках данной диссертационной работы, представлены на XX Менделеевском съезде по общей и прикладной химии (Екатеринбург, 2016), XXVI Российской молодежной научной конференции «Проблемы теоретической и экспериментальной химии» (Екатеринбург, 2016), IX Всероссийской конференции по электрохимическим методам анализа с международным участием и Молодежной научной школой (Екатеринбург - Леневка, 2016), XXVII Российской молодежной научной конференции «Проблемы теоретической и экспериментальной химии» (Екатеринбург, 2017), Третьем съезде аналитиков России (Москва, 2017), XXVIII Российской молодежной научной конференции «Проблемы теоретической и экспериментальной химии» (Екатеринбург, 2018), World conference on Analytical and Bioanalytical Chemistry (Барселона, 2018).

Публикации. По материалам диссертации опубликованы 3 статьи, входящие в мировые базы Scopus и Web of Science, тезисы 8 докладов на всероссийских и международных научных конференциях. По результатам работ получены патенты на изобретение: № 2618426 (Дата приоритета 31.12.2015) и № 26121132 (Дата приоритета 16.07.2015) (общее число публикаций автора -34, из них 5 статей, 2 патента, тезисы 27 докладов).

Личный вклад автора состоял в постановке и решении основных задач, проведении экспериментальных исследований потенциометрического определения скорости и константы скорости генерирования пероксильных радикалов и потенциометрического определения антирадикальной емкости модельных антиоксидантов и многокомпонентных образцов, интерпретации и анализе полученных результатов.

Автор выражает искреннюю благодарность своему научному руководителю к.х.н., доц. Ивановой Алле Владимировне, а также к.х.н., доц. Герасимовой Елене Леонидовне (УрФУ им. Б. Н. Ельцина, кафедра Аналитической химии) за помощь в работе; д.х.н., проф. Касаикиной Ольге Тарасовне (Институт химической физики им. Н. Н. Семенова Российской академии наук, РФ) за помощь в постановке некоторых задач исследования и интерпретации результатов и всему научному коллективу кафедры аналитической химии ХТИ УрФУ им. Б.Н. Ельцина.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа состоит из введения, 6 глав, заключения, списка литературы из 161 наименования. Содержит 154 страницы, 20 таблиц, 51 рисунок.

Во Введении обоснована актуальность темы исследования, изложена степень разработанности темы диссертационной работы, сформулированы цели и задачи работы, определены научная новизна, практическая значимость и положения, выносимые на защиту диссертации.

В Литературном обзоре (Глава 1) рассмотрены основные достижения в области исследования оксидантной и антиоксидантной системы организма, возможные механизмы тушения радикалов антиоксидантами. Описаны основные методы оценки антирадикальных / антиоксидантных свойств соединений, а также методы исследования кинетики генерирования свободных радикалов. Оценены их возможные достоинства и недостатки. В Экспериментальной части (Глава 2) описаны оборудование, реактивы, объекты исследования, методики выполнения эксперимента, приведены используемые способы сравнения. Глава 3 посвящена исследованию кинетики реакции генерирования пероксильных радикалов потенциометрическим методом. Представлены исследования выбора реагента в качестве акцептора радикалов, оценен диапазон концентраций реагента при стационарной скорости генерирования радикалов. Оценены значения скорости и константы скорости генерирования пероксильных радикалов. Глава 4 посвящена изучению закономерностей изменения потенциала в процессах генерирования

пероксильных радикалов и ингибирования их антиоксидантами. На основании полученных закономерностях разработан потенциометрический способ определения антирадикальной емкости соединений разной химической природы. Описаны алгоритмы анализа определения антирадикальной емкости. Рассчитан предел обнаружения антирадикальной емкости потенциометрическим способом. Определена антирадикальная емкость модельных антиоксидантов и коэффициенты ингибирования. В Главе 5 представлены исследования антирадикальных свойств экстрактов растительного сырья. Описаны сравнительные исследования антирадикальных свойств экстрактов с известными оптическими и электрохимическими методами, использующие в качестве модели окислителей соединения радикальной и нерадикальной природы. Представлены сравнительные исследования антирадикальных свойств экстрактов чая предложенного потенциометрического способа с потенциометрическим способом исследования антиоксидантной емкости с использованием системы Кз[Бе(СК)6] / К4[Ре(С^6] в качестве модели окислителя. Приведены сравнительные исследования антирадикальных свойств водных и этанольных экстрактов лекарственного растительного сырья нового потенциометрического способа с известными оптическими методами: спектрофотометрический метод определения противорадикальной активности с использованием радикала DPPH и спектрофотометрический метод определения общего содержания полифенолов с использованием реактива Folin-Ciocalteu. В Главе 6 определены показатели точности антирадикальной емкости выбранных экстрактов растений.

Глава 1. Литературный обзор 1.1 Активные формы кислорода

В организме человека кислород главным образом вступает в окислительные реакции с образованием АТФ и выделением тепла [1]. Кроме 4-х электронного восстановления О2 до Н2О в дыхательной цепи митохондрий, происходит и 1-, 2-, 3-электронное восстановление с образованием активных форм кислорода (АФК) по реакции (1) [1, 2]:

О2 (+ё) ^ ^ (+ё, 2Н+) ^ Н2О2 (+ё) ^ НО^ ^ (+ё, 2Н+) ^ 2Н2О (1)

Донорами электронов являются металлы переменной валентности (главным образом Fe2+, Си+ и другие), входящие в состав ряда ферментов [2].

Следует различать понятия «свободные радикалы» и «активированные кислородные метаболиты» (АКМ). Соединения типа Я/, N0^ ЯО2 и др. называют свободными радикалами, которые имеют на внешней электронной оболочке неспаренный электрон и являются сильными окислителями. В процессе восстановления молекулярного кислорода до воды или при изменении направления спина одного из электронов на внешней орбитале образуются активированные кислородные метаболиты (АКМ), к которым относятся О2-, О21, Н2О2, НО\ ОС1-, ЯО2 и др. Активные кислородные метаболиты и свободные радикалы условно объединяют в одну группу - «активные формы кислорода» (АФК) [3].

В организме образование АФК может происходить в результате протекания эндогенных и экзогенных процессов. В биологических системах АФК образуется, например, в митохондриях при окислении молекулярным кислородом НАД-Н, при этом образуется АТФ и выделяется энергия в виде тепла, в процессах метаболизма омега-6-ненасыщенной жирной кислоты и др. Кроме того, АФК может возникать при влиянии на организм таких внешних факторов как ультрафиолетовое и ионизирующее излучение, токсичные соединения, озон, вирусные заболевания и др. [1, 4].

Основной функцией АФК является разрушение старых и синтез новых молекул. Кроме того, АФК стимулируют и ускоряют процесс деления клеток соединительной ткани организма фибробластов, синтез и распад коллагена, участвуют в метаболизме железа. С использованием кислорода и АФК некоторые оксигеназы принимают участие в разрушении и удалении из организма липофильных ксенобиотиков. АФК способны взаимодействовать с внутриклеточным оксидом азота и, тем самым, регулировать длительное возбуждение гладкомышечного слоя сосудистой стенки. Кроме того, АФК выполняют функцию регулирования клеточного и гуморального иммунитета [1].

Поскольку свободные радикалы являются высоко активными соединениями, в больших концентрациях они могут вступать в реакции с биологическими молекулами, к которым относятся структурные белки, фосфолипиды клеточных мембран и нуклеиновые кислоты [1, 5, 6].

Результатом протекания энзиматических реакций является образование супероксидного анион-радикала Ю2_, перекиси водорода Н2О2, оксида азота N0^. Эти соединения являются малоактивными, не способными непосредственно инициировать процессы ПОЛ. Однако при дальнейшем вовлечении данных соединений в реакции с ферментами или металлами переменной валентности могут привести к образованию высокореационного гидроксильного радикала (ОЩ, гипогалогенводородов (Н0С1, НОВг), синглетного кислорода ОО2), оксида азота (N02^ [3, 4].

Супероксидный анион-радикала С02") практически не проникает через клеточную мембрану, поскольку имеет заряд. Время его жизни в биологических субстратах составляет 10-6 с. Основными источниками его образования являются ферментативные системы [3]. Ю2_ является слабоактивным радикалом, не влияет на работу большинства ферментов. Поскольку Ю2" является нуклеофильным соединением, он активно вступает в процессы окисления комплексов белков и липидов сыворотки крови и фосфолипидов

мембран, что может привести к разрушению эритроцитов [3, 7]. Кроме того, •02" вступает в реакцию с оксидом азота N0^ с образованием реакционного пероксинитрита ^N00") (2) [3, 5, 8]:

•02" + N0^ ^ 0Ш0" (2)

Константа скорости реакции (2) по оценке, выполненной методом импульсного фотолиза, составляет (6.7±0.9)109М-1с-1 [3].

Среднее время жизни пероксинитрита в физиологических условиях (1 -2 с) позволяет ему проникать через мембраны клеток и, таким образом, мигрировать в тканях. Пероксинитрит способен окислять КН2- и БН-группы белков, индуцировать процессы перикисного окисления липидов (ПОЛ) в мембранах и др. [3, 8].

В живых организмах перекись водорода Н2О2 образуется в результате процесса переноса двух электронов на кислород под действием ферментов оксидаз. При протекании воспалительного процесса большая часть перекиси водорода образуется в реакции дисмутации •02" супероксиддисмутазой. Перекись водорода обладает цитотоксическим действием, может вызывать гибель опухолевых клеток, эндотелиоцитов, Т-лимфоцитов ВИЧ-инфецированных людей посредством апоптоза. Н2О2 является источником высокореакционного гидроксильного радикала и гипогалоидов [3].

Из всех АКМ гидроксильный радикал Н0^ является наиболее сильным окислителем с высокой скоростью взаимодействия с биологическими молекулами. ОН-радикал может разрывать любую С-Н- или С-С- связь со скоростью равной скорости диффузии, в результате чего время жизни его в биологических субстратах достигает от 2 -10-9 до 8 -10-9 с. Основным источником образования Н0^ в живых организмах является реакция взаимодействия перекиси с ионами маталлов переменной валентности, такими как Бе2+, Си+, Со2+, Мп2+ или реакция Фентона (3) [3, 5]:

Н2О2 + Бе2+ ^ Бе3+ + Н0^ + Н0" (3)

Гипогалоиды в организме человека образуются в результате ферметативной реакции перекиси водорода с галоидами, катализируемой пероксидазами, различающиеся субстратной специфичностью (4) [3]:

Н2О2 + X" + Н+ ^ НОХ + Н2О

(4)

где X" = С1", Вг", I", БС^.

Гипогалоиды, проникая в поверхностный фосфолипидный слой, способны окислять липопротеины низкой плотности, ингибируя процессы ПОЛ

[3].

Таким образом, в организме человека постоянно образуются АФК, участвующие в ряде физиологических функций и во многих патологических процессах. Наиболее важным в изучении радикальных процессов в организме являются свободнорадикальные реакции перекисного окисления липидов (ПОЛ).

Свободнорадикальные окислительные процессы, протекающие в аэробных организмах, можно разделить на три стадии: зарождение цепей, развитие цепных реакций и обрыв цепей [3, 9]. Все стадии описаны последовательностью реакций, представленные на Рисунке 1 [4, 9].

Зарождение цепей окисления: (0) КН —> 1Г

Продолжение цепей окисления:

Вырожденное разветвление цепей: Обрыв цепей окисления:

(1)Е:- 02^1102*

(2) ЯСь' + 1Ш 1ЮОН - 1Г

(3)ЫООН^КСГ+ЧЖ'

(5) ЯСК + Я' ИОСЖ

(6) ЯСь' + ЯО:* ЫОСЖ - 02

(7) ЯСК + 1пН ЯООН - Ы (7') Е1СГ + 1пН ЕЮН + 1п* (7") Я* + 1пН —4 ЕН - ЬГ

(8) ЯСь' + 1п- ЯООТп

ЯН - углеводород (липид), Я/ - алкильный радикал, - алкоксильный радикал, - пероксильный радикал, Я00Н - органический гидропероксид,

1пН - ингибитор, 1п - радикал ингибитора Рисунок 1 - Схема реакций окисления углеводорода (ЯН) в присутствии

кислорода и ингибитора (1п) В аэробных условиях алкильные радикалы взаимодействуют с молекулярным кислородом с образованием пероксильных радикалов Я02 (Рисунок 1, реакция 1). Константа скорости данной реакции составляет 109 М-1с-1. Ввиду высокой реакционной способности пероксильный радикал может вступать в реакции окисления биологических молекул: белков, ферментов, нуклеиновых кислот (Рисунок 1, реакция 2). В результате реакций окисления образуются высокотоксичные для клеток продукты ПОЛ (органические перекиси, альдегиды, кетоны, эпоксиды и др.).

Поскольку энергия связи О-О перекисных соединений в 2-3 раза меньше энергии связей С-С или С=С, липидные перекиси являются неустойчивыми соединениями, склонными к гомолитическому распаду (Рисунок 1, реакция 3), в следствии чего происходит разветвление цепей окисления. В разложении гидропероксидов немаловажную роль играют ионы металлов переменной валентности (железо и медь) (5-6):

Я00Н + Бе2+ ^ RO• + 0Н- + Бе3+ (5)

Я00Н + Бе3+ ^ RO2• + Н+ + Бе2+ (6)

Образующиеся свободные радикалы могут рекомбинировать с образованием неактивных продуктов (Рисунок 1, реакции 4-6), однако в реальных условиях вероятность протекания таких реакций крайне мала ввиду низкой концентрации свободных радикалов. Таким образом, ингибирование радикалов соединениями, присутствующими в клетках и межклеточных жидкостях, является основным процессом перевода их в неактивные формы и выведения из организма (Рисунок 1, реакции 7-8) [4]. К ингибиторам свободнорадикальных реакций относятся вещества антиоксиданты.

1.2 Антиоксидантная система организма

Антиоксидант - это любое вещество, которое, присутствуя в низких по сравнению с окисляемым субстратом концентрациях, существенно задерживает или ингибирует его свободнорадикальное окисление [10].

Первоначально понятие «антиоксидант» ассоциировалось с веществами, способными прерывать цепные процессы ПОЛ, взаимодействуя с органическими радикалами. Классическими примерами таких соединений являются витамины Си Е. В дальнейшем появилось более общее понятие «биоантиокислители», включающее в себя три основных типа соединений, которые могут непосредственно подавлять свободные радикалы: ингибиторы свободнорадикальных реакций - вещества, взаимодействующие с органическими радикалами; хелаторы - соединения, способные связывать ионы металлов переменной валентности в прочные комплексы, к таким соединениям можно отнести полифенолы [11], десферриоксамин, деферипрон [5], карнозин

[12]; тушители - соединения, инактивирующие возбужденные триплетные состояния молекул (1О2) [4], в качестве примера можно привести Р-каротин

[13].

Антиоксиданты (АО) являются важнейшим и широким классом ингибиторов свободных радикалов (Рисунок 2).

с

Лктяокснлнты

(АО)

С

Нашиа*п.1>ртк АО

Хслашруюшнг рсягсн|Ы

Мочсаая »СИ слои Молочная кислота Ферритин Гсыосилсрин

АльЛлиш Трансфгррнн

Примые АО

Пгрокснааза

Кататна С>1КрОКС||Д шкыутаы

Всооштышк АО

Ксштиноксила»

1

>и кхгнимг

АО

ЭкюггямыгАО Продукты

Каропоюнлы менбашпм

Токоферолы Мочевая кислота

НАДФ Глутатио« Цнстям Кармоши

Полифенолы Аскорбиновая кислота Лнпоеия кислота

Рисунок 2 - Классификация антиоксидантов

Все АО можно подразделить на две большие группы - синтетические и природные.

Поскольку настоящее время можно охарактеризовать быстрым темпом антропогенного прогресса, а, следовательно, сильным влиянием факторов окружающей среды на организм человека (излучение, загрязнение тяжелыми металлами, психологические и физические перегрузки), все больший интерес направлен на синтез новых соединений, проявляющих антирадикальные свойства для поддержания оксидантного - антиоксидантного баланса в условиях окислительного стресса, профилактики и лечения различных свободнорадикальных патологий. Синтез новых соединений направлен на улучшение противорадикальных свойств природных аналогов. В организме синтетические АО могут усиливать действие эндогенных АО и предотвращать их окисление [4, 14].

Наиболее известным синтетическим АО является тролокс -водорастворимый аналог а-токоферола, у которого отсутствует изопреноидная цепь в молекуле. Несмотря на разницу в структурах, соединения имеют схожий механизм ингибирования радикалов и, соответственно, сопоставимые антиоксидантные свойства [15-17].

Производные пространственно затрудненных фенолов (ионол (дибунол) [18, 19], пробукол [20]) используют в качестве антиоксидантов, а также при лечении атеросклероза, гиперхолестеринемии и гиперлипопротеинемии для улучшения липидного обмена, связанного с повышением содержания холестерина, в качестве наружного противоожогового и противовоспалительного средства и др. [21, 22].

Фенольные соединения бутилгидроксианизол (ВНА), трет-бутилгидрохинон (TBHQ) и пропилгаллат (PG) часто используют в качестве консервантов в продукции пищевой и фармацевтической отраслях промышленности. Ввиду токсичного и канцерогенного действия данных соединений на организм было решено ограничить использование ВНА и ионола

[23].

Интересным направлением исследований является создание комплексных «гибридных» молекул, сочетающих в структуре фрагменты различных антиоксидантов, например, а-токоферола и аскорбиновой кислоты

[24]. Такой подход позволяет получать вещества с синергичными эффектами противоокислительной активности и направленным в отношении определенных клеток или клеточных органелл антиоксидантным действием [4, 25, 26].

Синтезированные новые соединения могут обладать более сильными антирадикальными свойствами, чем их природные аналоги, и научный интерес растет в этом направлении. Ограничениями при использовании таких препаратов для профилактики и лечения заболеваний, в качестве пищевых добавок, увеличивающих срок хранения готовой продукции, является их возможное токсическое действие на организм. Поэтому природные антиоксиданты не уступают синтетическим и до сих пор представляют особый интерес ученых в качестве объекта исследования их свойств и функций в организме [4].

Человек с пищей каждый день потребляет множество различных соединений, обладающих антирадикальными свойствами. Большинство природных антиоксидантов экзогенного происхождения представляют собой

фенольные соединения, а к наиболее важным группам природных антиоксидантов относятся токоферолы, флавоноиды и фенольные кислоты, каротиноиды и аскорбиновая кислота.

Аскорбиновая кислота (витамин С) считается одним из самых сильных, наименее токсичных природных антиоксидантов, в плазме крови человека содержится около 20 - 60 мкМ. Аскорбиновая кислота (АК) является сильным восстановителем, вступает в реакцию со свободными радикалами, тормозя тем самым цепные радикальные процессы путем переноса электронов. Окисление АК происходит в 2 ступени. При отдаче одного электрона образуется относительно стабильный и нереакционноспособный радикал аскорбата (Рисунок 3), период полужизни которого составляет 10-5 с. После передачи второго электрона образуется дигидроаскорбиновая кислота [27].

он он

Радикал аскорбата

Рисунок 3 - Стадии окисления аскорбиновой кислоты В живых организмах аскорбиновая кислота способна ингибировать супероксидный радикал O2-, синглетный кислород 1О2, гидроксильный радикал HO•, перекись водорода Н2О2 [5] и пироксинитрит ONOO- [28].

Кроме того, в гетерогенных системах АК и а-токоферол являются веществами сенергистами. При ингибировании перекисного окисления липидов а-токоферолом образуется а-токоферильный радикал, который далее может быть восстановлен АК (7-9) [3, 5, 28, 29].

^Аф + (а-Toc-OH)лф ^ (ROOH)лф + (а-Toc-O•)лф (7)

(а-Toc-O•)лф + ^ (а-Toc-OH)лф + (OH-Asc-O•)вф (8)

(а-Toc-O•)лф + (OH-Asc-O•)вф ^ (а-Toc-OH)лф + (O=Asc=O)вф (9) Аскорбат способен проявлять прооксидантные свойства в присутствии ионов металлов Fe3+ или Cu2+, поскольку в результате реакции ионов металлов с АК, ионы переходят в восстановленное состояние Fe2+ или и, таким образом, инициировать реакцию Фентона (10-11) [3, 5, 30, 31].

OH-Asc-OH + Fe3+ ^ OH-Asc-O• + Fe2+ + H+ (10)

Fe2+ + ROOH ^ RO• + OH- + Fe3+ (11)

Интересно, что эффективность АК в лечении цинги обусловлена ее «прооксидантными» свойствами, поскольку АК необходима для восстановления ионов активного центра гидроксилазы и оксигеназы, участвующие в биосинтезе проколлагена, карнитина и нейротрансмиттеров. Уменьшение концентрации АК в плазме снижает активность этих ферментов и вызывает развитие цинги [3, 32].

Токоферолы (витамин Е) в природе представляют собой класс химических соединений, в котором представители класса отличаются между собой степенью метилирования и местоположением метильных групп в ядре 6-оксихромана. По насыщенности боковой изопреноидной цепи токоферолы могут быть классифицированы как токоферолы и токотриенолы [4, 3, 33, 34].

В биологических субстратах токоферолы способны взаимодействовать с супероксидным анион-радикалом, синглетным кислородом,

пероксирадикалами, гидроксильным радикалом [3].

а-токоферол является наиболее известным представителем данного класса. Поскольку а-токоферол является липофильным антиоксидантом, основная его часть присутствует во внешней мембране клеток, защищая таким образом мембраны от действия свободных радикалов в липидной фазе [4, 33].

Антирадикальная активность а-токоферола обусловлена переносом протона и электрона от ОН- группы молекулы антиоксидантна на радикал. Находящиеся в фенольном кольце четыре алкильных заместителя и атом кислорода хроманового ядра усиливают электронную плотность в

ароматическом ядре. При образовании а-токоферильных радикалов возникают резонансные структуры с возможностью частичной делокализации спиновой плотности неспаренного электрона на кислород хроманового кольца (Рисунок 4) [4, 34].

Рисунок 4 - Схема окисления а-токоферола Константа скорости взаимодействия а-токоферола с пероксильными радикалами составляет значение k = (104 - 5 108) М-1с-1, а с перекисными радикалами основных жирных кислот клеточных мембран - k = 2.35 1 06 М-1 с-1 [3, 4]. На практике токоферолы характеризуются высоким коэффициентом ингибирования 3.5 - 4.5, что можно объяснить реакцией окисления -ОН группы молекулы а-токоферола феноксильными радикалами [4].

Флавоноиды - это группа природных антиоксидантов, входящая в класс полифенолов.

Молекулы флавоноидов имеют флавоновое ядро, два ароматических кольца которого соединены трехуглеродным мостиком. Флавоноиды подразделяют на флавонолы, флавоны, флаваноны, катехины, антоцианидины, изофлавоны, дигидрофлавонолы, халконы (Рисунок 5) [35].

Флавонолы Антоцианидины Халконы

Рисунок 5 - Структурные формулы некоторых классов флавоноидов Антирадикальные свойства соединений во многом определяет наличие ОН-заместителей в ароматических кольцах. На рисунке 6 выделены структурные элементы флавоноидов, отвечающие за антирадикальные свойства [4, 11, 35].

он

Рисунок 6 - Структурные фрагменты флавоноидов, отвечающие за

антирадикальные свойства Существуют два общепринятых механизма антирадикального действия фенольных антиоксидантов (ArOH), а именно перенос атома водорода (НАТ) и одноэлектронный перенос, сопряженный с передачей протонов (SET-PT) [7, 36].

Реакции НАТ могут осуществляться за счет орто-дигидрокси замещения в B-кольце, по C2-C3 двойной связи и карбонильной группе С4 в С-кольце.

Способность флавоноида к делокализации неспаренного электрона приводит к образованию устойчивого феноксильного радикала, который далее активно вступает в реакции диспропорционирования с другими радикалами. При этом сам флавоноид переходит в стабильный хинон (Рисунок 7) [11].

0« о .

он о ом о

Рисунок 7 - Механизм антирадикального действия 3',4'-диОН флавоноидов В молекулах моногидроксифлавонов антирадикальные свойства проявляются по механизму БЕТ-РТ (Рисунок 8). Структура А является исходной молекулой 3-гидроксифлавона, В - исходный катион радикал, образованный после передачи электрона от молекулы, а С - его более стабильная таутомерная форма. Таутомерная форма С катион-радикала образуется в результате переноса протона с С3 ОН-группе к карбонильной С4 группе [11].

Рисунок 8 - Оксиление С3-ОН и С5-ОН групп гидроксифлавонов по

радикальному механизму Флавоноиды способны предупреждать процессы перикисного окисления липидов (ПОЛ). На стадии зарождения процессов ПОЛ флавоноиды могут восстанавливать О2- и ОН радикалы, на стадии продолжения цепи они являются ингибиторами перекисных радикалов. Константа скорости

взаимодействия флавоноидов с гидроксильными радикалами составляет около к = 109 М-1с-1, тогда как с пероксильными радикалами составляет к = (0.1 -1)107 М-1с-1. Кроме того, флавоноиды могут ингибировать супероксид-анион радикал (к = (0.1 - 5)104 М-1с-1), защищая клетки организма от опосредованного радикального повреждения, что имеет большое значение при лечении заболеваний, основной причиной возникновения которых является окислительное действие свободных радикалов [4, 5].

Некоторые флавоноиды проявляют хелатирующие свойства, могут связывать ионы металлов переменной валентности и, тем самым, предотвращать процессы ПОЛ на стадии разветвления цепей (Рисунок 9). Металл-хелатообразующая способность сильно зависит от расположения гидроксильных и карбонильной групп молекулы, наличия электронодонорных заместителей, способных ингибировать свободные радикалы [4, 11, 37].

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Газизуллина Елена Ринатовна, 2019 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Улащик, В. С. Активные формы кислорода, антиоксиданты и действие лечебных физических факторов / В. С. Улащик // Вопросы курортологии, физиотерапии и лечебной физической культуры. - 2013. - № 1. - С. 60 - 69.

2. Донцов, В. И. Активные формы кислорода как система: значение в физиологии, патологии и естественном старении / В. И. Донцов, В. Н. Крутько, Б. М. Мрикаев, С. В. Уханов // Труды ИСА РАН. - 2006. - Т. 19. - С. 50 - 69.

3. Зенков, Н. К. Окислительный стресс: Биохимический и патофизиологический аспекты / Н. К. Зенков, В. З. Ланкин, Е. Б. Менщикова // М.: МАИК «Наука / Интерпериодика», 2001. - 343 с.

4. Меньшикова, Е. Б. Фенольные антиоксиданты в биологии и медицине. Строения, свойства, механизмы действия / Е.Б. Меньшикова, В.З. Ланкин, Н.В. Кандалинцева // LAP LAMBERT Academic Publishing, 2012. - 488 с.

5. Denisov, E. T. Oxidation and antioxidants in organic chemistry and biology / E. T. Denisov, I. B. Afanas'ev // Taylor & Francis Group, 2005. - 992 p.

6. Maritim, A. C. Diabetes, Oxidative stress, and antioxidants: a review / A. C. Maritim, R. A. Sanders, J. B. Watkins // Journal biochem molecular toxicology. -2003. - Vol. 17. - No. 1. - P. 24 - 38.

7. Fridovich, I. Superoxide anion radical (O2-), superoxide dismutases, and related matters / I. Fridovich // The journal of biological chemistry. - 1997. - Vol. 272. - No. 30. - P. 18515 - 18517.

8. Ferrer-Sueta, G. Biochemistry of peroxynitrite and protein tyrosine nitration / G. Ferrer-Sueta, N. Campolo, M. Trujillo, S. Bartesaghi, S. Carballal, N. Romero, B. Alvarez, R. Radi // Chemical Reviews. - 2018. - Vol. 118. - No. 3. - P. 1338 - 1408.

9. Пискарев, И. М. Инициирование и исследование свободно-радикальных процессов в биологических экспериментах: монография / И. М. Пискарев, И. П. Иванова, А. Г. Самоделкин, М. Н. Иващенко. — Н. Новгород: ФГБОУ ВО Нижегородская ГСХА, 2016. — 140 с.

10. Gutteridge, J. M. C. Signal, messenger and trigger molecules from free radical reactions and their control by antioxidants / J. M. C. Gutteridge // NATO ASI Series. - 1995. - Vol. H92. - P. 157 - 164.

11. Amic, D. SAR and QSAR of the antioxidant activity of flavonoids / D. Amic, D. Davidovie-Amie, D. Beslo, V. Rastija, B. Lucic, N. Trinajstic // Current Medicinal Chemistry. - 2007. - Vol. 14. - P. 827 - 845.

12. Lanza, V. New glycoside derivatives of carnosine and analogs resistant to carnosinase hydrolysis: Synthesis and characterization of their copper(II) complexes / V. Lanza, F. Bellia, R. D'Agata, G. Grasso, E. Rizzarelli, G. Vecchio // Journal of Inorganic Biochemistry. - 2011. - Vol. 105. - P. 181 - 188.

13. Rodrigues, E. Scavenging capacity of marine carotenoids against reactive oxygen and nitrogen species in a membrane-mimicking system / E. Rodrigues, L. R. B. Mariutti, A. Z. Mercadante // Marine Drugs - 2012. - Vol. 10. - P. 1784 - 1798.

14. Minenkova, E. A. Dose-dependent effects of the combination of antioxidants of various classes, dibunol and P-carotene, taken as examples / E. A. Minenkova, V. A. Barsel', V. V. Pichugin, A. B. Gagarina, N. M. Evteeva, M. Yu. Paramonova, G. G. Maikova // Biology Bulletin. - 1996. - Vol. 23. - No. 2. - P. 116 - 120.

15. Albertini, R. Prooxidant and antioxidant properties of Trolox c, analogue of vitamin e, in oxidation of low-density lipoprotein / R. Albertini, P. M. Abuja // Free Radical Research - 1999. - Vol. 30. - P. 181 - 188.

16. Barclay, L. R. C. Autoxidation in micelles. Synergism of vitamin C with lipid-soluble vitamin E and water-soluble Trolox / L. R. C. Barclay, S. J. F. Locke, J. M. Macneil // Canadian Journal of Chemistry - 1985. - Vol. 63. - P. 366 - 374.

17. Scott, J. W. 6-Hydroxychroman-2-carboxylic acids: novel antioxidants / J. W. Scott, W. M. Cort, H. Harley, D. R. Parrish, G. Saucy // Journal of the American Oil Chemists Society. - 1973. - Vol. 51. - P. 200 - 203.

18. Osipova, V. P. Polysubstituted ionol derivatives as inhibitors of lipid peroxidation / V. P. Osipova, M. N. Kolyada, K. V. Kudryavtsev, N. T. Berberova,

Y. T. Pimenov, E. R. Milaeva // Russian Journal of General Chemistry. - 2017. -Vol. 87. - No. 13. - P. 3144 - 3150.

19. Koltover, V. K. Antioxidant biomedicine: from free radical chemistry to systems biology mechanisms / V. K. Koltover // Russian Chemical Bulletin January. -2010. - Vol. 59. - No. 1. - P. 37 - 42.

20. Bisby, R. H. Quenching of reactive oxidative species by probucol and comparison with other antioxidants / R. H. Bisby, S. A. Johnson, A. W. Parker // Free Radical Biology and Medicine. - 1996. - Vol. 20. - No. 3. - P. 411 - 420.

21. Зарудий, Ф. С. 2,6-ди-трет-бутил-4-метилфенол (дибунол, ионол, тонарол) классический антиоксидант (обзор) // Ф. С. Зарудий, Г. З. Гильмутдинов, Р. Ф. Зарудий, М. А. Мышкин, Ф. Б. Гершанов, Т. А. Новиков // Химико-фармацевтический журнал. - 2001. - Т. 35. - № 3. - С. 42 - 48.

22. Kuzuya, M. Probucol as an antioxidant and antiatherogenic drug / M. Kuzuya, F. Kuzuya // Free Radical Biology and Medicine. - 1993. - Vol. 14. - P. 67 -77.

23. Ziyatdinova, G. Simultaneous determination of TBHQ and BHA on a MWNT-Brij® 35 modified electrode in micellar media / G. Ziyatdinova, K. Os'Kina, E. Ziganshina, H. Budnikov // Analytical Methods. - 2015. - Vol. 7. - No. 19. - P. 8344 - 8351.

24. Muripiti, V. a-tocopherol - ascorbic acid hybrid antioxidant based cationic amphiphile for gene delivery: Design, synthesis and transfection / V. Muripiti, L. Brijesh, H. K. Rachamalla, S. K. Marepally, R. Banerjee, S.V. Patri // Bioorganic Chemistry. - 2019. - Vol. 82. - P. 178 - 191.

25. Bao, L.-L. Hybrid of resveratrol and glucosamine: an approach to enhance antioxidant effect against DNA oxidation / L.-L. Bao, Z.-Q. Liu // Chemical Research in Toxicology. - 2018. - Vol. 31. - No. 9. - P. 936 - 944.

26. Pérez-Cruz, K. Synthesis and antioxidant study of new polyphenolic hybrid-coumarins / K. Pérez-Cruz, M. Moncada-Basualto, J. Morales-Valenzuela, G.

Barriga-González, P. Navarrete-Encina, L. Núñez-Vergara, J. A. Squella, C. Olea-Azar // Arabian Journal of Chemistry. - 2018. - Vol. 11. - No. 4. - P. 525 - 537.

27. Padayatty, S. J. Vitamin C as an antioxidant: evaluation of its role in disease prevention / S. J. Padayatty, A. Katz, Ya. Wang, P. Eck, O. Kwon, Je-H. Lee, Sh. Chen, Ch. Corpe, A. Dutta, S. K. Dutta, M. Levine // Journal of the American College of Nutrition. - 2003. - Vol. 22. - No. 1. - P. 18 - 35.

28. Castanheira, J. R. P. T. Paradoxical effects of vitamin C in chagas disease / J. R. P. T. Castanheira, R. E. P. Castanho, H. Rocha Jr, C. Pagliari, M. I. S. Duarte, A. L. S. Therezo, E. F. B. Chagas, L. P. A. Martins // Parasitology International. - 2018. -Vol. 67. - No. 5. - P. 547 - 555.

29. Becker, E. M. Antioxidant evaluation protocols: food quality or health effects / E. M. Becker, L. R. Nissen, L. H. Skibsted // European Food Research and Technology. - 2004. - № 219. - P. 561 - 571.

30. Ivanova, I. P. Evaluation of prooxidant properties of ascorbic acid / I. P. Ivanova, S. V.Trofimova, I. M. Piskarev // Biophysics (Russian Federation). - 2013.

- Vol. 58. - No. 4. - P. 453 - 456.

31. Du, J. Ascorbic acid: chemistry, biology and the treatment of cancer / J. Du, J. J. Cullen, G. R. Buettner // Biochimica et Biophysica Acta - Reviews on Cancer.

- 2012. - Vol. 1826. - No. 2. - P. 443 - 457.

32. Aghajanian, P. The roles and mechanisms of actions of vitamin C in bone: new developments / P. Aghajanian, S. Hall, M. D. Wongworawat, S.Mohan // Journal of Bone and Mineral Research. - 2015. - Vol. 30. - No. 11. - P. 1945 - 1955.

33. Dutta, A. Vitamin E and its role in the prevention of atherosclerosis and carcinogenesis: A Review / A. Dutta, S. K. Dutta // Journal of the American College of Nutrition. - 2003. - Vol. 22. - No. 4. - P. 258 - 268.

34. Kamal-Eldin, A. The chemistry and antioxidant properties of tocopherols and tocotrienols / A. Kamal-Eldin, L.-Á. Appelqvist // Lipids. - 1996. - Vol. 31. -No. 7. - P. 671 - 701.

35. Меньшикова, Е. Б. Окислительный стресс. Прооксиданты и антиоксиданты / Е. Б. Меньшикова, В. З. Ланкин, Н. К. Зенков и др // М.: Фирма «Слово», 2006. - 556 с.

36. Gulcin, I. Antioxidant activity of food constituents: an overview / I. Gulcin // Archives Toxicology. - 2012. - Vol. 86. - P. 345 - 391.

37. Perron, N. R. A review of the antioxidant mechanisms of polyphenol compounds related to iron binding / N. R. Perron, J. L. Brumaghim // Cell Biochemistry and Biophysics. - 2009. - Vol. 53. - P. 75 - 100.

38. Ribeiro, D. Antioxidant and pro-oxidant activities of carotenoids and their oxidation products / D. Ribeiro, M. Freitas, A.M.S. Silva, F. Carvalho, E. Fernandes // Food and Chemical Toxicology. - 2018. - Vol. 120. - P. 681 - 699.

39. Ha, D.-O. Antioxidant and prooxidant activities of ß-carotene in accelerated autoxidation and photosensitized model systems / D.-O. Ha, C. U. Park, M.-J. Kim, J. H. Lee // Food Science and Biotechnology. - 2012. - Vol. 21. - No. 2. -P. 607 - 611.

40. Erdman, Jr. J. W. Are the health attributes of lycopene related to its antioxidant function? / Jr. J. W. Erdman, N. A. Ford, B. L. Lindshield // Archives of Biochemistry and Biophysics. - 2009. - Vol. 483. - No. 2. - P. 229 - 235.

41. He, R.-R. Antioxidant properties of lutein contribute to the protection against lipopolysaccharide - induced uveitis in mice / R.-R. He, B. Tsoi, F. Lan, N. Yao, X.-S. Yao, H. Kurihara // Chinese Medicine. - 2011. - Vol. 6. - P. 38 - 46.

42. Kishimoto, Y. Potential anti-atherosclerotic properties of astaxanthin / Y. Kishimoto, H. Yoshida, K. Kondo // Marine Drugs. - 2016. - Vol. 14. - No.35. - P. 1 - 13.

43. Zareba, M. Nitroxide free radicals protect macular carotenoids against chemical destruction (bleaching) during lipid peroxidation / M. Zareba, J. Widomska, J. M. Burke, W. K. Subczynski // Free Radical Biology and Medicine. - 2016. - Vol. 101. - P. 446 - 454.

44. Müller, L. Comparative antioxidant activities of carotenoids measured by ferric reducing antioxidant power (FRAP), ABTS bleaching assay (aTEAC), DPPH

assay and peroxyl radical scavenging assay / L. Müller, K. Fröhlich, V. Böhm // Food Chemistry. - 2011. - Vol. 129. - No. 1. - P. 139 - 148.

45. Mortensen, A. Scavenging of acetylperoxyl radicals and quenching of triplet diacetyl by ß-carotene: mechanisms and kinetics / A. Mortensen // Journal of Photochemistry and Photobiology B: Biology.- 2001. - Vol. 61. - P. 62 - 67.

46. Сирота, Т. В. Активность цитоплазматической супероксиддисмутазы -чувствительный показатель состояния антиоксидантной системы печени и мозга крыс / Т. В. Сирота, М. В. Захарченко, М. Н. Кондрашова // Биомедицинская химия. - 2014. - Т. 60. - № 1. - С. 63 - 71.

47. Azadmanesh, J. A review of the catalytic mechanism of human manganese superoxide dismutase / J. Azadmanesh, G. E. O. Borgstahl // Antioxidants. - 2018. -Vol. 7. - No. 25. - P. 1 - 16.

48. Abreu, I. A. Superoxide dismutases - a review of the metal-associated mechanistic variations / I. A. Abreu, D. E. Cabelli // Biochimica et Biophysica Acta -Proteins and Proteomics. - 2010. - Vol. 1804. - No. 2. - P. 263 - 274.

49. Miller, A.-F. Superoxide dismutases: ancient enzymes and new insights / A.-F. Miller // FEBS Letters. - 2012. - Vol. 586. - No. 5. - P. 585 - 595.

50. Korotkova, E. I. Voltammetric study of the antioxidant properties of catalase and superoxide dismutase / E. I. Korotkova, O. I. Lipskikh, M. A. Kiseleva, V. V. Ivanov // Pharmaceutical Chemistry Journal. - 2008. - Vol. 42. - No. 8. - P. 485 - 487.

51. Zhang, Y. A novel omega-class glutathione S-transferase gene in apis cerana cerana: molecular characterisation of GSTO2 and its protective effects in oxidative stress / Y. Zhang, H. Yan, W. Lu, Y. Li, X. Guo, B. Xu // Cell Stress and Chaperones. - 2013. - Vol. 18. - No. 4. - P. 503 - 516.

52. Niki, E. Mechanisms and dynamics of antioxidant action of ubiquinol / E. Niki // Molecular Aspects of Medicine. - 1997. - Vol. 18. - P. 63 - 70.

53. Prakash, Sh. Role of coenzyme Q10 as an antioxidant and bioenergizer in periodontal diseases / Sh. Prakash, J. Sunitha, M. Hans // Indian Journal of Pharmacology. - 2010. - Vol. 42. - No. 6. - P. 334 - 337.

54. Bentinger, M. The antioxidant role of coenzyme Q / M. Bentinger, K. Brismar, G. Dallner // Mitochondrion. - 2007. - Vol. 7. - P. 41 - 50.

55. Zinatullina, K. M. Pro- and antioxidant characteristics of natural thiols / K. M. Zinatullina, O. T. Kasaikina, V. A. Kuzmin, N. P. Khrameeva // Russian Chemical Bulletin, International Edition. - 2018. - Vol. 67. - No. 4. - P. 726 - 730.

56. Anderson, M. E. Glutathione and glutathione delivery compounds / M. E. Anderson // Advances in Pharmacology. - 1996. - Vol. 38. - P. 65 - 78.

57. Zhou, X. J. Nitric oxide synthase expression in hypertension induced by inhibition of glutathione synthase / X. J. Zhou, N. D. Vaziri, X. Q. Wang, F. G. Silva, Z. Laszik // The journal of pharmacology and experimental therapeutics. - 2002. -Vol. 300. - No. 3. - P. 762 - 767.

58. Vatassery, G.T. Oxidation of vitamin E, vitamin C, and thiols in rat brain synaptosomes by peroxynitrite / G.T. Vatassery // Biochemical Pharmacology. - 1996. - Vol. 52. - No. 4. - P. 579 - 586.

59. Davies, K. J. A. Uric acid-iron ion complexes. A new aspect of the antioxidant functions of uric acid / K. J. A. Davies, A. Sevanian, S. F. Muakkassah-Kelly, P. Hochstein // Biochemical Journal. - 1986. - Vol. 235. - No. 3. - P. 747 -754.

60. Acuna-Castroviejo, D. New developments in melatonin research / D. Acuna-Castroviejo, I. Rusanova, G. Escames // Nova Science Publishers, Inc., 2013. -330 p.

61. Benzie, I. F. F. The ferric reducing ability of plasma (FRAP) as a measure of ''Antioxidant Power'': the FRAP assay / I. F. F. Benzie, J. J. Strain // Analytical biochemistry. - 1996. - Vol. 239. - P. 70 - 76.

62. Цюпко, Т. Г. Определение суммарного содержания антиоксидантов методом FRAP / Т.Г. Цюпко, И.С. Петракова, Н.С. Бриленок, Н.А. Николаева, Д.А. Чупрынина, З.А. Темердашев, В.И. Вершинин // Аналитика и контроль. -2011. - Т. 15. - № 3. - С. 287 - 298.

63. Apak, R. Comparative evaluation of various total antioxidant capacity assays applied to phenolic compounds with the CUPRAC assay / R. Apak, K. Guçlu,

B. Demirata, M. Özyürek, S. E. Qelik, B. Bekta§oglu, K. I. Berker, D. Özyurt // Molecules. - 2007. - Vol. 12. - P. 1496 - 1547.

64. Ozyurt, D. Determination of total antioxidant capacity by a new spectrophotometric method based on Ce(IV) reducing capacity measurement / D. Ozyurt, B. Demirata, R. Apak // Talanta - 2007. - V. 71, № 3. - P. 1155 - 1165.

65. Gül?m, I. Fe3+-Fe2+ transformation method: An important antioxidant assay / I. Gül?m // Methods in Molecular Biology. - 2015. - Vol. 1208. - P. 233 - 246.

66. Singleton, V. L. Analysis of total phenols and other oxidation substrates and antioxidants bymeans of folin-ciocalteu reagent / V. L. Singleton, R. Orthofer, R. M. Lamuela-Ravento's // Methods Enzymology. - 1999. - Vol. 299. - P. 152 - 178.

67. Tsvetkova, D. Estimation of an antioxidant activity of new peptide esters of galanthamine by applying ferric-reducing antioxidant power (FRAP) method / D. Tsvetkova, D. Zheleva-Dimitrova, D. Obreshkova // Comptes Rendus de L'Academie Bulgare des Sciences. - 2013. - Vol. 66. - No. 3. - P. 445 - 450.

68. Gonzalez-Rivera, M. L. Validated and rapid measurement of the ferric reducing antioxidant power in plasma samples / M. L. Gonzalez-Rivera, F. Martinez-Morales, A. J. Alonso-Castro, J. F. Lopez-Rodriguez, J. R. Zapata-Morales, S. Aranda Romo, O. H. Aragon-Martinez // Chemical Papers. - 2018. - Vol. 72. - No. 10. - P. 2561 - 2574.

69. Raudonis, R. Comparative evaluation of post-column free radical scavenging and ferric reducing antioxidant power assays for screening of antioxidants in strawberries / R. Raudonis, L. Raudone, V. Jakstas, V. Janulis // Journal of Chromatography A. - 2012. - Vol. 1233. - P. 8 - 15.

70. Bolanos De La Torre, A. A. S. A universally calibrated microplate ferric reducing antioxidant power (FRAP) assay for foods and applications to Manuka honey / A. A. S. Bolanos De La Torre, T. Henderson, P. S. Nigam, R. K. Owusu-Apenten // Food Chemistry. - 2015. - Vol. 174. - P. 119 - 123.

71. Apak, R. Methods of measurement and evaluation of natural antioxidant capacity/activity (IUPAC Technical report) / R. Apak, Sh. Gorinstein, V. Böhm, K. M.

Schaich, M. Ozyurek, K. Gu?lu // Pure and Applied Chemistry. - 2013. - Vol. 85. -No. 5. - P. 957 - 998.

72. Apak, R. Measurement of antioxidant activity and capacity: recent trends and applications / R. Apak, E. Capanoglu, F. Shahidi // Wiley, 2017. - 337 p.

73. Ozyurt, D. Modified cerium(IV)-based antioxidant capacity (CERAC) assay with selectivity over citric acid and simple sugars / D. Ozyurt, B. Demirata, R. Apak // Journal of Food Composition and Analysis. - 2010. - Vol. 23. - No. 3. - P. 282 - 288.

74. Ozyurt, D. Determination of total antioxidant capacity by a new spectrofluorometric method based on Ce(IV) reduction: Ce(III) fluorescence probe for CERAC assay / D. Ozyurt, B. Demirata, R. Apak // Journal of Fluorescence. - 2011. - Vol. 21. - No. 6. - P. 2069 - 2076.

75. Ivanova, A. V. Potentiometric study of antioxidant activity: development and prospects / A. V. Ivanova, E. L. Gerasimova, Kh. Z. Brainina // Critical reviews in analytical chemistry. - 2015. - Vol. 45. - No. 4. - P. 311 - 322.

76. Tougas, T. P. Theoretical and experimental response of biamperometric detector for flow injection analysis / T. P. Tougas, J. M. Jannetti, W. G. Collier // Analytical Chemistry. - 1985. - Vol. 57. - P. 1377 - 1381.

77. Moreno Galvez, A. Study of various indicating redox systems on the indirect flow-injection biamperometric determination of pharmaceuticals / A. Moreno Galvez, J. V. Garcia Mateo, J. Martinez Calatayud // Analytica Chimica Acta. -1999. - Vol. 396. - No. 2. - P. 161 - 170.

78. Pisoschi, A. M. Electrochemical methods for total antioxidant capacity and its main contributors determination: A review // A. M. Pisoschi, C. Cimpeanu, G. Predoi // Open Chemistry. - 2015. - Vol. 13. - P. 824 - 856.

79. Ziyatdinova, G. Coulometric titration with electrogenerated oxidants as a tool for evaluation of cognac and brandy antioxidant properties / G. Ziyatdinova, I. Salikhova, H. Budnikov // Food Chemistry. - 2014. - Vol. 150. - P. 80 - 86.

80. Ziyatdinova, G. Surfactant media for constant-current coulometry. Application for the determination of antioxidants in pharmaceuticals / G. Ziyatdinova, E. Ziganshina, H. Budnikov // Analytica Chimica Acta. - 2012. - Vol. 744. - P. 23 -28.

81. Arts, M. J. T. J. A critical appraisal of the use of the antioxidant capacity (TEAC) assay in defining optimal antioxidant structures / M. J. T. J. Arts, J. S. Dallinga, H.-P. Voss, G. R. M. M. Haenen, A. Bast // Food Chemistry. - 2003. - Vol. 80. - No. 3. - P. 409 - 414.

82. Van Den Berg, R. Applicability of an improved Trolox equivalent antioxidant capacity (TEAC) assay for evaluation of antioxidant capacity measurements of mixtures / R. Van Den Berg, G. R. M. M. Haenen, H. Van Den Berg, A. Bast // Food Chemistry. - 1999. - Vol. 66. - No. 4. - P. 511 - 517.

83. Brand-Williams, W. Use of a free radical method to evaluate antioxidant activity / W. Brand-Williams, M. E. Cuvelier, C. Berset // Lebensmittel-Wissenschaft und-Technologie. - 1995. - Vol. 28. - P. 25 - 30.

84. Molyneux, Ph. The use of the stable free radical diphenylpicrylhydrazyl (DPPH) for estimating antioxidant activity / Ph. Molyneux // Songklanakarin Journal of Science and Technology. - 2003. - Vol. 26. - No. 2. - P. 211 - 219.

85. Mishra, K. Estimation of antiradical properties of antioxidants using DPPH assay: A critical review and results / K. Mishra, H. Ojha, N. K. Chaudhury // Food Chemistry. - 2012. - Vol. 130. - P. 1036 - 1043.

86. Fogliano, V. Method for measuring antioxidant activity and its application to monitoring the antioxidant capacity of wines / V. Fogliano, V. Verde, G. Randazzo, A. Ritieni // Journal of Agricultural and Food Chemistry. - 1999. - Vol. 47. - P. 1035 - 1040.

87. Tougas, T. P. Theoretical and experimental response of biamperometric detector for flow injection analysis / T. P. Tougas, J. M. Jannetti, W. G. Collier // Analytical Chemistry. - 1985. - Vol. 57. - P. 1377 - 1381.

88. Milardovic, S. A novel method for flow injection analysis of total antioxidant capacity using enzymatically produced ABTS^+ and biamperometric detector containing interdigitated electrode / S. Milardovic, I. Kerekovic, R. Derrico, V. Rumenjak // Talanta. - 2007. - Vol. 71. - P. 213 - 220.

89. Milardovic, S. Use of DPPH / DPPH redox couple for biamperometric determination of antioxidant activity / S. Milardovic, D. Ivekovic, V. Rumenjak, B. S. Grabaric // Electroanalysis. - 2005. - Vol. 17. - P. 1847 - 1853.

90. Tyurin, V. Yu. Electrochemical antioxidative activity assay of metalloporphyrins bearing 2,6-di-tert-butylphenol groups based on electrochemical DPPH-test / V. Yu. Tyurin, J. Zhang, A. Glukhova, E. R. Milaeva // Macroheterocycles. - 2011. - Vol. 4. - No. 3. - P. 211 - 212.

91. Tyurin, V. Yu. Complexes of organotin compounds with biss- and trisphosphonate derivatives of 2,6-di-tert-butylphenol having antioxidant activity / V. Yu. Tyurin, Wu. Yaohuan, A. A. Prishchenko, D. B. Shpakovsky, Yu. A. Gracheva, T. A. Antonenko, V. A. Tafeenko, D. V. Alrbov, L. A. Aslanov, E. R. Milaeva // Russian Chemical Bulletin, International Edition. - 2015. - Vol. 64. - No. 6. - P. 1419 - 1429.

92. Гелетий, Ю.В. Определение суммарной концентрации и активности антиоксидантов в пищевых продуктах / Ю.В. Гелетий, Ж. Ж. А. Балавуэн, О. Н. Ефимов, В. С. Куликова // Биоорганическая химия. - 2002. - Т 28. - № 6. - С. 551 - 566.

93. Патент РФ 2614365 Способ определения антиоксидантной активности с использованием метода электронно-парамагнитной резонансной спектроскопии / А.В. Иванова, А.С. Петров, Е.А. Вежливцев, А.И. Матерн. Дата приоритета 31.12.2015.

94. Ou, B. Development and validation of an improved oxygen radical absorbance capacity assay using fluorescein as the fluorescent probe / B. Ou, M. Hampsch-Woodill, R. L. Prior // Journal of Agricultural and Food Chemistry. - 2001. - 49. - P. 4619 - 4626.

95. Dorta, E. Use of the oxygen radical absorbance capacity (ORAC) assay to predict the capacity of mango (Mangifera indica L.) by-products to inhibit meat

protein oxidation / E. Dorta, E. M. Rodríguez-Rodríguez, A. Jiménez-Quezada, E. Fuentes-Lemus, H. Speisky, E. Lissi, C. López-Alarcón // Food Analytical Methods. -2017. - Vol. 10. - No. 2. - P. 330 - 338.

96. Oki, T. Oxygen radical absorbance capacity and tocopherol content in pressed oils made from sesame (Sesamum indicum L.) cultivar maruhime and rapeseed (Brassica napus L.) cultivar nanaharuka / T. Oki, M. Sato-Furukawa, J. Watanabe, J. Takebayashi, N. Ogata // Nippon Shokuhin Kagaku Kogaku Kaishi. - 2017. - Vol. 64. - No. 9. - P. 464 - 470.

97. Altinterim, B. Effects of different plant oils having different oxygen radical absorbance capacity (ORAC) on hematological parameters of rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) at high stocking density / B. Altinterim, F. Kutluyer, O. Aksu // Ataturk Universitesi Veteriner Bilimleri Dergisi. - 2018. - Vol. 13. - No. 1. - P. 63 - 69.

98. Wayner, D. D. M. Quantitative measurement of the total, peroxyl radical-trapping antioxidant capability of human blood plasma by controlled peroxidation / D.D.M. Wayner, G. W. Burton, K. U. Ingold, S. Locke // Febs letters. - 1985. - Vol. 187. - No. 1. - P. 33 - 37.

99. Alho, H. Total antioxidant activity measured by chemiluminescence methods / H. Alho, J. Leinonen // Method Enzymology. - 1999. - Vol. 299. - P. 3 -15.

100. Krasowska, A. The antioxidant activity of BHT and new phenolic compounds PYA and PPA measured by chemiluminescence / A. Krasowska, D. Rosiak, K. Szkapiak, M. Oswiecimska, S. Witek, M. Lukaszewicz // Cellular and Molecular Biology Letters. - 2001. - Vol. 6. - No. 1. - P. 71 - 81.

101. Rusina, I. F. Chemiluminescent methods for studying inhibited oxidation / I. F. Rusina, O. N. Karpukhin, O. T. Kasaikina // Russian Journal of Physical Chemistry B. - 2013. - Vol. 7. - No. 4. - P. 463 - 477.

102. Tubaro, F. Analysis of plasma antioxidant capacity by competition kinetics / F. Tubaro, A. Ghiselli, P. Papuzzi, M. Maiorino, F. Ursini // Free Radic. Biol. Med. - 1998. - Vol. 24. - P. 1228.

103. Notas, G. Patients with primary biliary cirrhosis have increased serum total antioxidant capacity measured with the crocin bleaching assay / G. Notas, N. Miliaraki, M. Kampa, F. Dimoulios, E. Matrella, A. Hatzidakis, E. Castanas, E. Kouroumalis // World Journal of Gastroenterology. - 2005. - Vol. 11. - P. 4194 -4198.

104. Terpinca, P. A kinetic model for evaluation of the antioxidant activity of several rosemary extracts / P. Terpinca, M. Bezjakb, H. Abramovica // Food Chemistry. - 2009. - Vol. 115. - P. 740 - 744.

105. Воронова, О. А. Имунноферментный и вольтамперометрический методы анализа суммарной активности антиоксидантов в плазме крови при сердечно-сосудистой патологии / О. А. Воронова, Е. И. Короткова, Е. В. Плотников, А. М. Гусакова, Т. Е. Суслова, Е. В. Дорожко, Е. В. Петрова, А. А. Кустова // Фундаментальные исследования. - 2013. - №8. - C. 570 - 574.

106. Патент РФ № 2426109 Вольтамперометрический способ определения активности антиоксидантов / В. Н. Лисецкий, В. Н. Баталова, Т. А. Лисецкая. Дата приоритета 18.05.2010.

107. Chumakov, A. Electro-fenton-like reactions of transition metal ions with electrogenerated hydrogen peroxide / A. Chumakov, V. Batalova, Yu. Slizhov // AIP Conference Proceedings. - 2016. - Vol. 1772. - No. 040004. - P. 1 - 6.

108. Wingston, G. W. A rapid gas chromatographic assay for determining oxyradical scavenging capacity of antioxidants and biological fluids / G. W. Wingston, F. Regoli, A. J. Dugas et al. // Free Radical Biology and Medicine. - 1998. - Vol. 24. -P. 480 - 493.

109. Перевозкина, М. Г. Тестирование антиоксидантной активности полифункциональных соединений кинетическими методами / М. Г. Перевозкина // Новосибирск: Изд. СибАК, 2014. — 240 c.

110. Шишкина, Л. Н. Определение антиокислительной активности индивидуальных веществ и липидов на метилолеатной окислительной модели / Л. Н. Шишкина // Исследование синтетических и природных антиоксидантов in vitro и in vivo. -1992. — С. 26 - 30.

111. Zivkovic, J. EPR spin-trapping and spin-probing spectroscopy in assessing antioxidant properties: example on extracts of catkin, leaves, and spiny burs of castanea sativa / J. Zivkovic, Z. Zekovic, I. Mujic, D. Godevac, M. Mojovic, A. Mujic, I. Spasojevic // Food Biophysics. - 2009. - Vol. 4. - P. 126 - 133.

112. Spasojevic, I. Free radicals and antioxidants at a glance using EPR spectroscopy / I. Spasojevic // Critical Reviews in Clinical Laboratory Sciences. -2011. - Vol. 48. - No. 3. - P. 114 - 142.

113. Pisarenko, L. M., A kinetic model for limonene oxidation / L. M. Pisarenko, D. A. Krugovov, A. N. Shchegolikhin, O. T. Kasaikina // Russian Chemical Bulletin. - 2008. - Vol. 57. - No. 1. - P. 83 - 89.

114. Lissi, E. Luminol luminescence induced by 2,2'-azo-bis(2-amidinopropane) thermolysis / E. Lissi, C. Pascual, M. D. Castillo // Free Radical Research Communications. - 1992. - Vol. 17. - No. 5. - P. 299 - 311.

115. Храпова, Н. Г. Определение антирадикальной активности веществ природного происхождения методом хемилюминесценции / Н.Г. Храпова // Исследование синтетических и природных антиоксидантов in vivo и in vitro. М.: Наука, 1992. — C. 8 - 15.

116. Владимиров, Ю. А. Свечение, сопровождающее биохимические реакции / Ю.А. Владимиров // Соросовский образовательный журнал. - 1999. -№ 6. - C. 25 - 32.

117. Владимиров, Ю. А. Свободные радикалы и Клеточная хемилюминесценция / Ю. А. Владимиров, Е. В. Проскурнина // Успехи биологической химии. - 2009. - Т. 49. - C. 341 - 388.

118. Valgimigli, L. Mesasurement of antioxidative stress by EPR radical-probe technique / L. Valgimigli, G.F. Pedulli, M. Paolini // Free Radical Biology and Medicine. - 2001. - Vol. 31. - P. 708 - 716.

119. Castro, J. A. Hydroxyl and 1-hydroxyethyl radical detection by spin trapping and GC-MS / J. A. Castro, G. D. Castro // Methods in Molecular Biology. -2002. - Vol. 186. - P. 89 - 99.

120. Tribble, D. L. Oxidative susceptibility of low density lipoprotein subfractions is related to their ubiqunol-10 and a-tocopherol content / D.L. Tribble, J. J. M. Berg, P. A. Motchnic et al. // Proceedings of the National Academy of Sciences. - 1994. - Vol. 91. - P. 1183 - 1187.

121. Yoshida, Y. Application of water-soluble radical initiator, 2,20-azobis-[2-(2-imidazolin-2-yl)propane] dihydrochloride, to a study of oxidative stress / Y. Yoshida, N. Itoh, Y. Saito, M. Hayakawa, E. Niki // Free Radical Research. - 2004. -Vol. 38. - No. 4. - P. 375 - 384.

122. ГОСТ Р ИСО 14502-1-2010 Чай. Метод определения общего содержания полифенолов. - М. : Стандартинформ, 2012. - 10 с.

123. ОФС.1.4.1.0018.15 Настои и отвары. - М. : Стандартинформ, 2015. -

6 с.

124. Floegel, A. Comparison of ABTS/DPPH assays to measure antioxidant capacity in popular antioxidant-rich US foods / A. Floegel, D-O. Kim, S-J. Chung, S. I. Koo, O. K. Chun // Journal of Food Composition and Analysis. - 2011. - Vol. 24. -No. 7. - P. 1043 - 1048.

125. ISO 14502-1:2005 Determination of substances characteristic of green and black tea - Part: Content of total polyphenols in tea - Colorimetric method using Folin-Ciocalteu reagent. - Organization for Standardization, 2005. - 10 р.

126. Иванова, А. В. Исследование антиоксидантной активности и суммарного содержания полифенолов лекарственного растительного сырья / А. В. Иванова, Е. Л. Герасимова, Е. Р. Газизуллина, К. Г. Попова, А. И. Матерн // Журнал аналитической химии. - 2017. - Т. 72. - № 4. - С. 363 - 368.

127. Экспериандова, Л. П. Еще раз о пределах обнаружения и определения / Л. П. Экспериандова, К. Н. Беликов, С. В. Химченко, Т. А. Бланк // Журнал аналитической химии. - 2010. - Т. 65. - № 3. - С. 229 - 234.

128. Werber, J. Analysis of 2,2'-azobis (2-amidinopropane) dihydrochloride degradation and hydrolysis in aqueous solutions / J. Werber, Y. J. Wang, M. Milligan,

X. Li, J. A. Ji // Journal of pharmaceutical sciences. - 2011. - Vol. 100. - No. 8. - P. 3307 - 3315.

129. Krainev, A.G. Comparison of 2,2'-azobis(2-amidinopropane) hydrochloride (AAPH) and 2,2'-azobis(2,4-dimethylvaleronitrile) (AMVN) as free radical initiators: a spin-trapping study / A.G. Krainev, D.J. Bigelow // Journal of the chemical society-perkin transactions 2. - 1996. - Vol. 2. - P. 747 - 754.

130. Brainina, Kh. Z. Antioxidant activity evaluation assay based on peroxide radicals generation and potentiometric measurement / Kh. Z. Brainina, E. L. Gerasimova, О. Т. Kasaikina, A.V. Ivanova // Analytical Letters. - 2011. - Vol. 44. -No. 8. - P. 1405 - 1415.

131. Betigeri, S. Use of 2,2'-azobis(2-amidinopropane) dihydrochloride as a reagent tool for evaluation of oxidative stability of drugs / S. Betigeri, A. Thakur, K. Raghavan // Pharmaceutical Research. - 2005. - Vol. 22. - No. 2. - P. 310 - 317.

132. Иванова, А.В. Исследование кинетики термического распада 2,2'-азобис(2-метилпропионамидин)дигидрохлорида потенциометрическим методом с использованием комплексов металлов / А.В. Иванова, Е.Л. Герасимова, Е.Р. Газизуллина, А.Н. Козицина, А.И. Матерн // Известия АН. Серия химическая. -2016. - № 2. - С.419-424.

133. Иванова, А.В. Потенциометрический метод определения кинетических характеристик радикальных реакций в водных средах / А.В. Иванова, Е.Л. Герасимова, Е.Р. Газизуллина, А.Г. Давлетчурина, А.Н. Козицина, О.Т. Касаикина // Известия АН. Серия химическая. - 2017. - № 8. - С. 1428-1432.

134. Патент 26121132 РФ Способ потенциометрического определения скорости генерирования пероксильных радикалов / А.В. Иванова, Е.Л. Герасимова, Е.Р. Газизуллина, А.И. Матерн. Дата приоритета 16.07.2015.

135. Roginsky, V. A. Chain-breaking antioxidant activity of natural polyphenols as determined during the chain oxidation of methyl linoleate in Triton X-100 micelles / V. A. Roginsky // Archives of Biochemistry and Biophysics. - 2003. -Vol. 414. - No. 2. - P. 261 - 270.

136. Тюрин, В. Ю. Использование электрохимического метода для определения антиоксидантной активности на примере ферроценовых производных / В.Ю. Тюрин, Н.Н. Мелешонкова, А.В. Долганов, А.П. Глухова, Е.Р. Милаева // Известия Академии Наук. Серия химическая. - 2011. - № 4. - С. 633 - 640.

137. Kara?elik, A. A. Antioxidant components of Viburnum opulus L. determined by on-line HPLC-UV-ABTS radical scavenging and LC-UV-ESI-MS methods / A.A. Kara?elik, M. Kü?ük, Z. ískefiyeli, S. Aydemir, S. De Smet, B. Miserez, P. Sandra // Food Chemistry. - 2015. - Vol. 175. - P. 106 - 114.

138. Крешков, А. П. Основы аналитической химии. Теоретические основы. Количественный анализ / А.П. Крешков // М.: Химия, 1971. - 456 с.

139. Bard, A. J. Standard potentials in aqueous solution / A. J. Bard, R. Parsons, J. Jordan // M. Dekker, New York, 1985. - 848 p.

140. Kancheva, V. D. Lipid oxidation in homogeneous and micro-heterogeneous media in presence of prooxidants, antioxidants and surfactants / V. D. Kancheva, O. T. Kasaikina // Lipid Peroxidation. - 2012. - P. 31 - 62.

141. Zinatullina, K. M. Reaction of polymethine dyes with hydroperoxides and free radicals // K. M. Zinatullina, V. A. Kuzmin, N. P. Khrameeva, B. I. Shapiro, O. T. Kasaikina // Russian Chemical Bulletin. - 2016. - Т. 65. - № 12. - Р. 2825 - 2831.

142. Патент РФ № 2618426 Способ определения антиоксидантной активности с использованием радикальных инициаторов / А. В. Иванова, Е. Л. Герасимова, Е. Р. Газизуллина, А. И. Матерн. Дата приоритета 31.12.2015.

143. Ivanova, A.V. New antiradical capacity assay with the use potentiometric method / A.V. Ivanova, E. L. Gerasimova, E. R. Gazizullina // Analytica Chimica Acta. - 2018. - Vol. 1046. - P. 69 - 76.

144. Krasovska, A. Chemiluminescence detection of peroxyl radicals and comparison of antioxydant activity of phenolic compounds / A. Krasovska, D. Rosiak, K. Czkapiak, M. Lukaszewicz // Current topics in Biophysics. - 2000. - Vol. 24. - P. 89 - 95.

145. Baranova, V. S. The antiradical activity of plant extracts and their health-improving and prophylactic combinations with a phosholipid complex / V. S. Baranova, I. F. Rusina, D. A. Guseva, N. N. Prozorovskaya, O. M. Ipatova, O. T. Kasaikina // Biochemistry (Moscow) Supplement Series B: Biomedical Chemistry. -2013. - Vol. 7. - No. 2. - P. 165 - 174.

146. Mueller, L. Antioxidant activity of P-carotene compounds in different in vitro assays / L. Mueller, V. Boehm // Molecules. - 2011. - Vol. 16. - P. 1055 - 1069.

147. Shpigun, L. K. Flow injection potentiometric determination of total antioxidant activity of plant extracts / L. K. Shpigun, M. A. Arharova, Kh. Z. Brainina, A. V. Ivanova // Analytica Chimica Acta. - 2006. - Vol. 573-574. - P. 419 - 426.

148. Dresch, M. T. K. Optimization and validation of an alternative method to evaluate total reactive antioxidant potential / M. T. K. Drech, S. Rossato, V. D. Kappel, R. Biegelmeyera, M. L. M. Hoff, P. Mayorga, J. A. S. Zuanazzi, A. T. Henriques, J. C. F. Moreira // Analytical Biochemistry. - 2009. - Vol. 385. - P. 107 - 114.

149. Zinatullina, K. M. Kinetic characteristics of the reaction of natural thiols with peroxyl radicals and hydrogen peroxide / K. M. Zinatullina, N. P. Khrameeva, O. T. Kasaikina, B. I. Shapiro, V. A. Kuzmin // Russian Chemical Bulletin. - 2017. -Vol. 66. - No. 7. - P. 1300 - 1303.

150. Cao, Q. - Q. Improving the taste of autumn green tea with tannase / Q.-Q. Cao, C. Zou, Y.-H. Zhang, Q. - Z. Du, J. - F. Yin, J. Shi, S. Xue, Y. - Q. Xu // Food Chemistry. - 2019. - Vol. 277. - P. 432 - 437.

151. Mattoli, L. Experimental evidence of the presence of bimolecular caffeine/catechin complexes in green tea extracts / L. Mattoli, V. Mercati, M. Burico, S. Bedont, M. Porchia, F. Tisato, S. D'Aronco, S. Crotti, M. Agostini, P. Traldi // Journal of natural products. - 2018. - Vol. 81. - No. 11. - P. 2338 - 2347.

152. Lewis, J. R. Theaflavate B, isotheaflavin-3'-O-gallate and neotheaflavin-3-O-gallate: Three polyphenolic pigments from black tea / J. R. Lewis, A. L. Davis, Y.

Cai, A. P. Davies, J. P. G. Wilkins, M. Pennington // Phytochemistry. - 1998. - Vol. 49. - No. 8. - P. 2511 - 2519.

153. Del Rio, D. HPLC-MSn analysis of phenolic compounds and purine alkaloids in green and black tea / D. Del Rio, A. J. Stewart, W. Mullen, J. Burns, M. E. J. Lean, F. Brighenti, A. Crozier // Journal of Agricultural and Food Chemistry. -2004. - Vol. 52. - No. 10. - P. 2807 - 2815.

154. Jiménez-Zamora, A. Antioxidant capacity, total phenols and color profile during the storage of selected plants used for infusion / A. Jiménez-Zamora, C. Delgado-Andrade, J. A. Rufián-Henares // Food Chemistry. - 2016. - Vol. 199. - P. 339 - 346.

155. Мисин, В. М. Измерение содержания фенолов в экстрактах лекарственных трав и их смесях амперометрическим методом / В. М. Мисин, Н. Н. Сажина, А. Ю. Завьялов, Я. И. Яшин // Химия растительного сырья. - 2009. -№4. - С. 127 - 132.

156. Stadlbauer, S. Impact of green tea catechin ecg and its synthesized fluorinated analogue on prostate cancer cells and stimulated immunocompetent cells / S. Stadlbauer, C. Steinborn, A. Klemd, F. Hattori, K. Ohmori, K. Suzuki, R. Huber, P. Wolf, C. Gründemann // Planta Medica. - 2018. - Vol. 84. - No. 11. - P. 813 - 819.

157. Jaeger, B. N. Mechanisms of dietary flavonoid action in neuronal function and neuroinflammation / B. N. Jaeger, S. L. Parylak, F. H. Gage // Molecular Aspects of Medicine. - 2018. - Vol. 61. - P. 50 - 62.

158. Marrassini, C. Comparative study of the polyphenol content-related antiinflammatory and antioxidant activities of two Urera aurantiaca specimens from different geographical areas / C. Marrassini, I. Peralta, C. Anesini // Chinese Medicine (United Kingdom). - 2018. - Vol. 13. - No. 1. - P. 1 - 12.

159. Tu, Y. - J. A theoretical study of ascorbic acid oxidation and HOO / O2 -Radical scavenging / Y. - J. Tu, D. Njus, H. B. Schlegel // Organic and Biomolecular Chemistry. - 2017. - Vol. 15. - No. 20. - P. 4417 - 4431.

160. РМГ 61-2010 Государственная система обеспечения единства измерений. Показатели точности, правильности, прецизионности методик количественного химического анализа. Методы оценки. - М. : Стандартинформ, 2010. - 58 с.

161. ГОСТ Р ИСО 5725-4-2002 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 4. Основные методы определения правильности стандартного метода измерений. - М. : Стандартинформ, 2002. - 23 с.