Подходы к моделированию иммуногенных пептидов тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 02.00.10, кандидат химических наук Титова, Майя Адольфовна

• Титова, Майя Адольфовна
• кандидат химических наук
• 2003

Оглавление диссертации кандидат химических наук Титова, Майя Адольфовна

Введение

1. Обзор литературы: «Определение структуры Т-хелперных эпитопов 7 и создание синтетических пептидных конструкций, содержащих эпитопы В-клеток и Т-хелперных клеток»

1.1. Развитие иммунного ответа на введение пептидного фрагмента

1.2. Определение структуры Т-хелперных эпитопов.

1.2.1. Определение структуры Т-эпитопов с помощью 10 рентгеноструктурного анализа.

1.2.2. Изучение связывания природных и синтетических пептидов с 18 молекулой МНС II для определения структуры Т-эпитопов.

1.2.3. Теоретические методы предсказания потенциальных Т-эпитопов.

1.3. Синтетические пептидные конструкции, включающие в себя 31 эпитопы В-клеток и Т-хелперных клеток

1.3.1. Введение Т-хелперных эпитопов в состав линейных пептидов.

1.3.2. Мультиантигенные пептидные комплексы, содержащие 35 Т-хелперные эпитопы

1.3.3. Липопептидные конструкции, содержащие Т-хелперные эпитопы. 42 2. Результаты и обсуждение

2.1. Разработка метода предсказания аминокислотной 47 последовательности пептидов, способных индуцировать образование антител у мышей.

2.1.1. Анализ данных литературы о структуре Т-хелперных эпитопов и 47 выявление общих закономерностей.

2.1.2. Применение условия 1-9 для анализа базы данных МНСРЕР 49 Т-хелперных эпитопов.

2.1.3. Применение условия 1-9 для анализа структуры ранее описанных 51 пептидов.

2.2. Выбор иммуногенных пептидов в последовательностях белков 54 ОраВ и NspA Nesseria meningitidis и белков Е и NS1 вируса клещевого энцефалита.

2.3. Моделирование иммуногенных пептидов из неактивных белковых 57 последовательностей с использованием условия 1-9.

2.3.1. Создание высокоиммуногенных пептидов на основе неактивного 57 фрагмента 223-242 и низкоактивного фрагмента 233-252 белка

РогА Nesseria meningitidis.

2.3.2. Создание высокоиммуногенного пептида на основе низко 59 активного фрагмента 346-363 белка РогА Nesseria meningitidis.

2.3.3. Создание иммуногенного пептида на основе неактивного 60 фрагмента 178-199 белка РогА Nesseria meningitidis.

2.3.4. Создание иммуногенных пептидов на основе неактивного 61 фрагмента 197-213 белка VPi вируса ящура

2.3.5. Исследование активности укороченного фрагмента 130-143 белка 64 РогА Nesseria meningitidis, содержащего участок 1-9.

2.3.6. Создание иммуногенных пептидов на основе неактивного 65 фрагмента 273-292 белка РогА Nesseria meningitidis.

2.4. Создание пептидных конструкций на основе иммуноактивных 68 фрагментов белка VPi вируса ящура

2.5. Иммуногенные и протективные свойства синтетических 72 пептидных конструкций.

2.5.1. Способность пептидных конструкций индуцировать образование 72 антител у мышей.

2.5.2. Сравнение иммуногенных и протективных свойств пептидных 73 конструкций на морских свинках.

2.5.3. Изучение протективной активности пептидной конструкции III на 76 свиньях.

2.5.4. Изучение иммуногенных и протективных свойств синтетической 77 пептидной конструкции IV.

3. Экспериментальная часть

3.1. Химические реагенты и биологические препараты

3.2. Оборудование

3.3. Животные

3.4. Приготовление растворов пептидов для иммунизации

3.5. Получение сывороток крови

3.6. Иммунизация животных

3.7. Твердофазный иммуноферментный анализ (непрямой метод)

3.8. Антигензависимая пролиферация клеток периферических 97 лимфоузлов мышей, праймированных конструкцией IV.

3.9. Определение титра вируснейтрализующих антител

3.10. Исследование протективной активности.

3.11. Определение величины ПДм конструкции IV.

4. Выводы

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Подходы к моделированию иммуногенных пептидов»

Способность пептидных фрагментов белков в свободном виде индуцировать образование антител имеет большое значение для создания пептидных противовирусных и антибактериальных вакцин, разработки диагностических тест-систем, а также получения противобелковых антител для научных исследований [1-4]. Обычно используемый для индукции противопептидных антител метод конъюгации пептидов с белком или другим высокомолекулярным носителем сопровождается рядом нежелательных процессов, таких как высокий уровень образования антител к носителю и индукция долговременной Т-клеточной памяти на чужеродный белок-носитель [5]. В связи с этим особый интерес вызывают пептидные последовательности, способные вызывать образование антител in vivo без конъюгации с белковым носителем.

В соответствии с представлениями современной иммунологии необходимым условием образования противопептидных антител является наличие в пептидной последовательности белкового антигена Т-хелперного эпитопа. Т-хелперный эпитоп участвует в образовании тройного комплекса с молекулой МНС II1 и Т-клеточным рецептором, что приводит к активации Т-хелперных клеток и к стимуляции продукции антител В-клетками. Существующие на данный момент способы теоретического предсказания расположения Т-хелперных эпитопов в белковых последовательностях основаны на результатах опытов in vitro, а в опытах ш vivo не всегда обладают достаточной эффективностью и достоверностью. Поэтому одним из наиболее важных подходов к моделированию иммуногенных пептидов, способных в свободном виде индуцировать образование антител, является разработка простых и доступных методов предсказания расположения Т-хелперных эпитопов в молекуле белка, которые позволили бы быстро и эффективно выявлять в последовательности иммуногенные

МНС II - молекула главного комплекса гистосовместимости класса II. участки, а также открыли бы возможности повышения иммуногенных свойств пептидов путем точечных изменений в их структуре.

Другим подходом к моделированию иммуногенных пептидов является создание пептидных конструкций, включающих известные В-клеточные и Т-хелперные эпитопы белка, с помощью которых можно имитировать развитие протективного иммунитета к различным патогенам. Для применения этого подхода необходимы знания о локализации иммуноактивных участков в аминокислотных последовательностях белков изучаемого патогена и сравнительный анализ свойств различных вариантов конструкций для выбора соединений, наиболее эффективно имитирующих развитие протективного иммунитета.

Настоящее исследование посвящено моделированию иммуногенных пептидов, заключающемуся в разработке эффективного метода предсказания последовательности пептидов, способных индуцировать выработку противопептидных антител у мышей без конъюгации с белком-носителем; применению разработанного метода для выбора иммуногенных фрагментов в последовательностях белков различных возбудителей и моделированию иммуноактивных пептидов на основе неактивных. Целью исследования также являлась разработка конструкций на основе иммуноактивных пептидных фрагментов белка VPi вируса ящура, обеспечивающих эффективный противовирусный иммунитет.

В обзоре литературы рассмотрены данные о современном состоянии методов идентификации участков последовательностей белковых молекул, способных взаимодействовать с молекулами МНС II и активировать Т-хелперные лимфоциты. Также рассмотрены описанные в литературе основные подходы к созданию иммуногенных пептидных конструкций, содержащих В- и Т-хелперные эпитопы.

Заключение диссертации по теме «Биоорганическая химия», Титова, Майя Адольфовна

Выводы

Разработан метод предсказания последовательности пептидов, способных в свободном виде без конъюгации с белком-носителем индуцировать выработку противопептидных антител у мышей.

Показана высокая эффективность предложенного метода при выборе иммуногенных фрагментов в последовательности белков ОраВ и NspA из бактерии Neisseria meningitidis, белков Е и NS1 из вируса клещевого энцефалита. Показана возможность применения предложенного метода для моделирования иммуногенных пептидов из неактивных белковых последовательностей. Перспективность подхода продемонстрирована на примере создания иммуногенных аналогов фрагментов белков Рог А менингококка и VPi вируса ящура.

Предложена структура четырех пептидных конструкций, включающих иммуноактивные фрагменты белка VPi вируса ящура.

На основе анализа иммуногенных и протективных свойств синтетических пептидных конструкций, а также специфичности индуцируемых ими антител, выявлены высокоактивные конструкции, моделирующие индукцию противоящурного иммунитета.

Список литературы диссертационного исследования кандидат химических наук Титова, Майя Адольфовна, 2003 год

1. Francis M.J. in New generation vaccines: The role of basic immunology Eds G.

2. Gregoriadis, B. McCormack, A.C. Allison and G. Poste (Plenum Press, NY), 1993, p.23.

3. Steward M.W., Stanley C.M., Dimarchi R., Mulcahy G., Doel T.R. High-affinity antibodyinduced by immunization with a synthetic peptide is associated with protection of cattle against foot-and-mouth disease. // Immunology, 1991, v.12, p.99.

4. Sood A., Venugopalan P., Mysore N. and Vyas S.P. Synthetic peptides: A modernapproach to vaccination. // Indian J. Exp. Biol., 1998, v. 35, p. 846-861.

5. Townsend A.R.M. Recognition of influenza virus proteins by cytotoxic T lymphocytes. //1.munol. Res. 1987. V. 6. № 1-2. P. 80-100.

6. Ben-Yedidia T. and Arnon R. Design of peptide and polypeptide vaccines. // Curr. Opin.

7. Biotechol., 1997, v. 8, p. 442-448.

8. Brodsky F.M., Guagliardi L. The cell biology of antigen processing and presentation. //

9. Annu. Rev. Immunol., 1991, v. 9, p. 707-44

10. Barber L.D. and Parham P. Peptide binding to major histocompatibility complexmolecules. //Annu. Rev. Cell Biol., 1993, v. 9, p. 163-206.

11. Петров P.B. Иммунология, M., «Медицина», 1983, с.

12. А.А. Ярилин. Основы иммунологии. M. «Медицина». 1999

13. Madden D.R The three-dimensional structure of peptide-МНС complexes. // Annu. Rev. Immunol., 1995, v. 13, p. 587-622.

14. Ройт А., Бростофф Дж., Мейл Д. Иммунология, М., «Мир», 2000, с. 195-215.

15. Cresswell P. Assembly, transport, and function of МНС class П molecules. // Annu. Rev. Immunol., 1994, v. 12, p. 252-293.

16. Mouritsen S., Meldal M., Werdelin O., Hansen A.S., Buus S. MHC molecules protect T cell epitopes against proteolytic destruction. //J. Immunol., 1992, v. 149, p. 1987-1993.

17. Janeway C.A.J, and Travers P., Eds. Immunobiology: the immune system in health and disease. Curr. Biol. Ltd./Garland Publ. Inc., 1994.

18. Babbit B.P., Allen P.M., Matsueda G., Harber E., Unanue E.R. Binding of immunogenic peptides to la histocompatibility molecules. // Nature, 1985, v. 312, p. 359.

19. Rosental A.S. Determinant selection and macrophage function in genetic control of the immune response. // Immunol. Rev., 1978, v. 40, p. 136.

20. Abbas A.K. A reassessment of the mechanisms of antigen-specific T-cell-depended B-cell activation. // Immunol. Today, 1988, v. 9, p. 89-94.

21. Hoop T. and Woods K. Prediction of protein antigenic determinants from aminoacid seqences. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1981, v. 78, p. 3824-3828.

22. Welling G., Weijer W., Zee R. and Welling-Wester S. Prediction of sequential antigenic regions in proteins. // FEBS Lett., 1985, v. 188, p. 215-218.

23. Hoop T. Prediction of protein surfaces and interaction sites from amino acid sequences.

24. Synthetic Peptides in Biology and Medicine, Eds K.Alitalo, P. Partanen, A. Vahery,

25. Amsterdam, Elsevier Science Publishers, 1985, p. 3-11.

26. Novotny J., Handschumacher M., Harber E. Location of antigenic epitopes on antibody molecules. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA., 1986, v.83, p. 226-230.

27. Евстигнеева P., Палькеева M. Методы поиска антигенных детерминант для белков с известной первичной структурой. // Биоорганическая химия, 2000, № 26, с. 243-262.

28. Stern L.J. and Wiley D.C. Antigenic peptide binding by class I and class П histocompatibility proteins. // Structure, 1994, v. 2, p. 245-251.

29. Stern L.J., Brown J.H., Jardetzky T.S., Gorga J.C., Urban R.G., Strominger J.L., Wiley D.C. Crystal structure of the human class П MHC protein HLA-DR1 complexed with an influenza virus peptide. // Nature, 1994, v. 368, p. 215-221.

30. Brown J.H., Jardetzky T.S., Gorga J.C., Stern L.J., Urban R.G., Strominger J.L., Wiley D.C. Three-dimensional structure of the human class П histocompatibility antigen HLA-DR1. // Nature, 1993, v. 364, p. 33-39.

31. Vasmatzis G., Cornette J., Sezerman U. and DeLisi C. TcR recognition of the MHC-peptide dimer: structural properties of a ternary complex. // J. Mol. Biol., 1996, v. 261, p. 72-89.

32. Hare B.J., Wyss D.F., Osburne M.S., Kern P.S., Reinherz E.L., Wagner G. Conformational isomers of a class П МНС-peptide complex in solution. // J. Mol. Biol,. 1999, v. 286, p. 207-218.

33. Fremont D.H., Hendrickson W.A., Marrack P. and Kappler J. Structures of an MHC class П molecule with covalently bound single peptides. // Science, 1996, v. 272, p. 1001-1004.

34. Nomenclature and Symbolism for Amino Acids and Peptides. Recommendation 1983, Eur. J. Biochem. v. 138, p. 9-37.

35. Rammensee H.-G., Friede Т., Stevanovic S. MHC ligands and peptide motifs: first listing. // Immunogen. 1995, v. 41, p. 178-228.

36. Falk K., Rotzschke 0., Stevanovic S., Jung G., Rammensee H.G. Allele-specific motifs revealed by sequencing of self-peptides eluted from MHC molecules. // Nature, 1991, v. 351, p. 290-296.

37. Nakagawa T.Y., Von Grafenstein H., Sears J.E., Williams J., Janeway C.A., Flavell R.A. The use of the polymerase chain reaction to map CD4+ T cell epitopes. // Eur. J. Immunol., 1991, v. 21, p. 2851-2855.

38. Adler S., Frank R., Lanzavecchia A. and Weiss S. T cell epitope analysis with peptides simultaneously synthesized on cellulose membranes: fine mapping of two DQ dependent epitopes. // FEBS Lett., 1994, v. 352, p. 167-170.

39. Buus S., Sette A., Colon S.M., Miles C., Grey H.M. The relation between major histocompatibility complex (MHC) restriction and the capacity of la to bind immunogenic peptides. // Science, 1987, v. 235, p. 1353-1358.

40. Townsend A., Ohlen C., Bastin J., Ljunggren H.G., Foster L., Karre K. Association of class I major histocompatibility heavy and light chains induced by viral peptides. // Nature, 1989, v. 340, p. 443-448.

41. Moudgil K.D., Sercarz E.E. and Grewal I.S. Modulation of the immunogenicity of antigenic determinants by their flanking residues. // Immunol. Today, 1998, v. 19, p. 217-220.

42. Gogolak P., Simon A., Horvath A., Rethi В., Simon I., Berkics K., Rajnavolgyi E., Toth

43. G.K. Mapping of a protective helper T cell epitope of human influenza A virus hemagglutinin. // Biochem. Biophys. Res. Commun., 2000, v. 2, p. 190-198.

44. Brusic V., Rudy G., Кипе A.P. and Harrison L.C. MHCPEP, a database of MHC-binding peptides: update 1997. // Nucleic Acids Res. 1998, v. 26, p. 368-371. http://wehih.wehi.edu.au-/mhcpep/

45. DeLisi C., Berzofsky J.A. T-cell antigenic sites tend to be amphipathic structures. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1985, v. 82, p. 7048-7052.

46. Berzofsky J.A. Features of T-cell recognition and antigen structure useful in the design of vaccines to elicit T-cell immunity. // Vaccine, 1988, v. 6, p. 89-93.

47. Cease K.B., Margalit H., Cornette J.L., Putney S.D., Robey W.G., Ouyang C., Streicher

48. Margalit H., Spouge J.L., Cornette J.L., Cease K.B., Delisi C., Berzofsky J.A. Prediction of immunodominant helper T cell antigenic sites from the primary sequence. // J. Immunol., 1987, v. 138, p. 2213-2229.

49. Rothbard J.R. Synthetic peptides as vaccines // Nature, 1987, v. 330, p. 106-107.

50. Rothbard J.R., Taylor W.R. A sequence pattern common to T cell epitopes. // EMBO J., 1988, v. 7, p. 93-100.

51. Stille C.J., Thomas L.J., Reyes V.E., Humphreys R.E. Hydrophobic strip-of-helix algorithm for selection of T cell-presented peptides. // Mol. Immunol., 1987, v. 24, p. 1021-1027.

52. Roberts C.G.P., Meister G.E., Jesdale B.M., Lieberman J., Berzofsky J.A., De Groot A.S. Prediction of HIV peptide epitopes by novel algorithm. // AIDS Res. Hum. Retroviruses, 1996, v. 12, p. 593-610.

53. Cornette J.L., Margalit H., DeLisi C. and Berzofsky J.A. The amphipathic helix as a structural feature involved in T cell recognition. // The Amphipatic Helix. (Ed). CRC Press, Boca Raton, FL, 1993.

54. Reyes V.E., Fowlie E.J., Lu S., Phillips L., Chin L.T., Humphreys R.E., Lew R.A. Comparison of three related methods to select T cell-presented sequences of protein antiges. // Mol. Immunol., 1990, v. 27, p. 1021-1027.

55. Rammensee H.-G., Bachmann J., Emmerich N.P.N, Bachor O.A., Stevanovic S. SYFPEITHI: database for MHC ligands and peptide motifs. // Immunogenetics, 1999, v.50, p. 213-219. http://www.uni-tuebingen.de/uni/kxi/.

56. Honeyman M.C., Brusic V., Stone N.L. and Harrison L.C. Neural network-based prediction of candidate T-cell epitopes. //Nat. Biotechnol., 1998, v. 16, p. 966-969.

57. Arnon R. Synthetic peptides as basis for future vaccines. // Trens Biochem. Sci., 1986, v. 11, p. 521-524.

58. Dreesman G., Sparrow J., Frenchik P., Kennedy R. Synthetic hepatitis В surface antigen peptide vaccine. // Adv. Exp. Med. Biol., 1985, v. 185, p. 129-137.

59. Emini E., Jameson В., Wimmer E. Priming for and induction of anti-poliovirus neutralizing antibodies by synthetic peptides. // Nature, 1983, v. 304, p. 699-703.

60. Shupp J.W., Jett M., Pontzer C.H. Identification of a transcytosis epitope on staphylococcal enterotoxins. // Infect Immun., 2002, v. 70, p. 2178-2186.

61. Meng J., Dai X., Chang J.C., Lopareva E., Pillot J., Fields H.A., Khudyakov Y.E. Identification and characterization of the neutralization epitope(s) of the hepatitis E virus. // Virology, 2001, v. 30, p. 203-211.

62. Wu H.C., Yeh C.T., Huang Y.L., Tarn L.J., Lung C.C. Characterization of neutralizing antibodies and identification of neutralizing epitope mimics on the Clostridium botulinum neurotoxin type A. // Appl. Environ. Microbiol., 2001, v. 67, p. 3201-3207.

63. Kirkley J.E., Goldstein A.L. and Naylor P.H. Effect of peptide-carrier coupling on peptide-specific immune responses. // Immunobiology, 2001, v. 203, p. 601-615.

64. Gonzalez S., Alvarez A., Caballero E., Vina L., Guillen G., Silva R. P64k meningococcal protein as immunological carrier for weak immunogens. // Scand. J. Immunol., 2000, v. 52, p.113-116.

65. Lu Y., Xiao Y., Ding J., Dierich M., Chen Y.H. Immunogenicity of neutralizing epitopes on multiple-epitope vaccines against HIV-1. // Int. Arch. Allergy Immunol., 2000, v. 121, p. 80-84.

66. Kim S.K., Ragupathi G., Cappello S., Kagan E., Livingston P.O. Effect of immunological adjuvant combinations on the antibody and T-cell response to vaccination with MUC1-KLH and GD3-KLH conjugates. // Vaccine, 2000, v. 15, p. 530-537.

67. Laisney I.L. and Strosberg A.D. Dual specificity of a human neutralizing monoclonal antibody, specific for the V3 loop of GP120 (HIV-1). II Immunol. Lett., 1999, v. 15, p. 185-192.

68. Ijaz M.K., Alkarmi Т.О., el-Mekki A.W., Galadari S.H., Dar F.K. Babiuk L.A. Priming and induction of anti-rotavirus antibody response by synthetic peptides derived from VP7 and VP4. // Vaccine, 1995, v. 13, p. 331-338.

69. Иванов Б.Б., Мещерякова Е.А., Андронова Т.М. и Иванов В.Т. Использование синтетических носителей и адъювантов для повышения иммуногенности синтетического пептида белка CS Plasmodium falciparum. // Биоорган, химия, 1991, т.17, с. 732-746.

70. Muller G.M., Shapira М., Arnon R. Anti-influenza response achieved by immunization with a synthetic conjugate. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1982, v. 81, p. 2461-2465.

71. Schutze M.-P., Leclerc C., Jovilet M., Audibert F., Chedid L. Carrier-induced epitopic suppression, a major issue for future synthetic vaccine. // J. Immunol., 1985, v. 135, p. 2319-2324.

72. Steward M.W., Stanley C.M. and Obeid O.E. A mimotope from a solid-phase peptide library induced a measles virus- neutralizing and protective antibody response. // J. Virol., 1995, v.69, p. 7668-7673.

73. Obeid O.E., Partidos C.D. and Steward M.W. Identification of helper T cell antigenic sites in mice from the heamagglutinin glycoprotein of measles virus. // J. Gen. Virol., 1993, v.74, p. 2549-2557.

74. Obeid O.E., Partidos C.D. and Steward M.W. Analysis of the antigenic profile of measles virus heamagglutinin in mice and humans using overlapping synthetic peptides. // Virus Res., 1994, v.32, p. 69-84.

75. Obeid O.E. and Steward M.W. The potential of immunization with synthetic peptides to overcome the immunosuppressive effect of maternal anti-measles virus antibodies in young mice. // Immunology, 1994, v.82, p. 16-21.

76. Steward M.W., Partidos C.D., D'Mello F. and Howard C.R. Specificity of antibodies reactive with hepatitis и surface antigen following immunization with synthetic peptides. //Vaccine, 1993, v.ll,p. 1405-1414.

77. Shaw D.M., Stanley C.M., Partidos C.D. and Steward M.W. Influence of the T-helper epitope on the titre and affinity of antibodies to B-cell epitopes after co-immunization. // Mol. Immunol., 1993, v.30, p. 961-968.

78. Sedlik C., Sarraseca J., Rueda P., Leclerc C., Casal I. Immunogenicity of poliovirus В and T cell epitopes presented by hybrid porcine parvovirus particles. // J. Gen. Virol., 1995, v.76, p. 2361-2368.

79. Francis M.J., Hastings G.Z., Syred A.D., McGinn В., Brown F., Rowlands D.J. Non-responsiveness to a foot-and-mouth disease virus peptide overcome by addition of foreign helper T-cell determinants. //Nature, 1987, v. 300, p. 168-170.

80. Leclerc C., Przewlocki G., Schutze M.-P., Chedid L.A. A synthetic vaccine constructed by copolymerization of В and T cell determinants. // Eur. J. Immunol., 1987, v. 17, p. 269-273.

81. Volpina O., Surovoy A., Ivanov V. Protection against viral infections with the aid of synthetic peptides. Foot-and-mouth disease as a example. // Biomed. Sience, 1990, v. 330, p.168-170.

82. Francis M.J., Fry C.M., Rowlands D.J., Bittle J.L., Houghten R.A., Lerner R.A., Brown F. Immune response to uncoupled peptides of foot-and-mouth disease virus. // Immunology, 1987, v. 61, p. 1-6.

83. Hervas-Stubbs S., Berasain C., Golvano J.J., Lasarte J.J., Prieto I., Sarobe P., Prieto J., Borras-Cuesta F. Overcoming class П-linked non-responsiveness to hepatitis В vaccine. // Vaccine, 1994, v. 12, p. 867-871.

84. Milich D.R., Hughes J.L., McLachlan A., Thornton G.B., Moriarty A. Hepatitis В synthetic immunogen comprised of nucleocapsid T-cell sites and envelope B-cell epitope. //Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1988, v. 85, p. 1610-1614.

85. Tam J.P. Synthetic peptide vaccine design: synthesis and properties of a high-density multiple antigenic peptide system. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1988, v. 85, p. 5409-5413.

86. Tam J.P. Recent advances in multiple antigen peptides. // J. Immunol. Methods, 1996, v. 196, p. 17-32.

87. Hewer R. and Meyer D. Producing a highly immunogenic synthetic vaccine construct active against HIV-1 subtype C. // Vaccine, 2002, v. 20, p. 2680-2683.

88. Toth G.K., Varadi G., Nagy Z., Monostori E., Репке В., Hegedus Z., Ando I., Fazekas G., Kurucz I., Мак M. Branched polypeptides as antigens for influenza virus hemagglutinin and T-cell receptor subunits. // Pept. Res., 1993, v. 6, p. 272-280.

89. Tam J.P., Lu Y.-A. Vaccine engineering: enhancement of immunogenicity of synthetic peptide vaccines related to hepatitis in chemically defined models consisting of T- and B-cell epitopes. //Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1989, v. 86, p. 9084-9088.

90. Pinto R.M., Gonzalez-Danaart J.F., Sanchez G., Guix S., Gomara M.J., Garcia M., Haro I., Bosch A. Enhancement of the immunogenicity of a synthetic peptide bearing a VP3 epitope of hepatitis A virus. // FEBS Letters, 1998, v. 438, p. 106-110.

91. Joshi M.B., Gam A.A., Boykins R.A., et al. Immunogenicity of Well-characterized Synthetic Plasmodium falciparum Multiple Antigen Peptide Conjugates. - Infect Immun., 2001, v. 69, pp. 4884-4890.

92. Taubman M.A., Smith D.J., Holmberg C.J., Eastcott J.W. Coimmunization with complementary glucosyltransferase peptides results in enhanced immunogenicity and protection against dental caries. // Infect Immun, 2000, v. 68, p. 2698-2703.

93. Rose K., Zeng W., Brown L.E., Jackson D.C. A synthetic peptide-based polyoxime vaccine construct of high purity and activity. // Mol. Immunol., 1995, v.32, p. 1031-1309.

94. Wiesmuller K.-H., Freund S., Jung G. Novel FMDV vaccine consisting of a T-cell epitope and B-cell activating terminus of E. coli lipoprotein: synthesis, results of vaccination and molecular dynamics. // Immunobiol., 1988, v. 177, p. 158-161.

95. Prass W., Ringsdorf H., Bessler W., Wiesmuller K.H., Jung G. Lipopeptides of the N-terminus of E. coli lipoprotein: synthesis, mitogenicity and properties in monolayer experiments. // Biochim. Biophis. Acta, 1987, v. 900, p. 116-128.

96. Jung G. Synthesis and perspectives of new adjuvants and carriers systems for potential application for synthetic vaccines. Synthetic antigens. // Ann. Scalvo., 1984, N 2, p. 191-208.

97. Hoffman P., Heihle S., Shade U., Loppnow H., Ulmer A.J., Flad H.D., Jung G., Bessler W.G. Stimulation of human and murine adherent cells by bacterial lipoproteinvand synthetic lipopeptide analogues.//Immunobiol., 1988, v. 177, p. 158-170.

98. Петров P.B., Хаитов P.M. Искусственные антигены и вакцины. М., Медицина, 1988, с. 288.

99. Wiesmuller К.-Н., Bessler W., Jung G. Synthesis of the mitogenic S-2,3-bis(palmitoyloxy)propyl.-N-palmitoylpentapeptide from Escherihia coli lipoprotein. // Hoppe-Seyler s Z. Phisiol. Chem., 1983, v. 364, p. 593-606.

100. Nardelli В., Defoot J.-P., Huang W., Tam J. Design of a complete synthetic peptide-based AIDS vaccine with a built-in adjuvant. // AIDS Res. Hum. Retroviruses, 1992, v. 8, p. 1405-1407.

101. Langhans В., Braunschweiger I., Schweitzer S., Jung G., Inchauspe G., Sauerbruch Т., Spengler U. Lipidation of T helper sequences from hepatitis С virus core significantly enhances T- cell activity in vitro. // Immunology, 2001, v. 102, p. 460-465.

102. Wiesmuller K.-H., Jung G. and Hess G. Novel low-molecular-weight synthetic vaccine against foot-and-mouth disease containing a potent B-cell and macrophage activator. // Vaccine, 1989, v. 7, p. 29-33.

103. Beck-Sickinger A.G., Rotering H., Wiesmuller K.H., Dorner F., Jung G. Mapping of antigenic and immunogenic sites of Haemophilus influenzae outer membrane protein P6 using synthetic lipopeptides. // Biol. Chem. Hoppe Seyler, 1994, v. 375, p. 173-182.

104. Deres K., Schild H., Wiesmuller K.-H., Jung G., Rammensee H.G. In vivo priming of virus-specific cytotoxic T limphocytes with synthetic lipopeptide vaccine. //Nature, 1989, v. 342, p. 561-564.

105. Rouaix F., Grass-Masse H., Mazingue C., Diesis E., Ridel P.R., Estaquier J., Capron A., Tartar A., Auriault C. Effect of a lipopeptidic formulation on macrophage activation and peptide presentation to T cells. // Vaccine, 1994, v. 12, p. 1209-1214.

106. Huang W., Nardelli В., Tam J. Lipophillic multiple antigen peptide system for peptide immunogen and synthetic vaccine. // Mol. Immunol., 1994, v. 31, p. 1191-1199.

107. Benmohamed L., Krishnan R., Auge C., Primus J.F., Diamond D.J. Intranasal administration of a synthetic lipopeptide without adjuvant induces systemic immune responses. // Immunol., 2002, v. 106, p. 113-121.

108. Gomara M.J., Riedemarm S., Vega I., Ibarra H., Ercilla G., Наго I. Use of linear and multiple antigenic peptides in the immunodiagnosis of acute hepatitis A virus infection. // J. Immunol. Methods, 2000, v. 3, p. 23-34.

109. Horvath A., Olive C., Wong A., Clair Т., Yarwood P., Good M. and Toth I. Lipoamino acid-based adjuvant carrier system: enhanced immunogenicity of group a streptococcal peptide epitopes. //J. Med. Chem., 2002, v. 45, p.1387-1390.

110. P.M. Хаитов, И.С. Гущин, Б.В. Пинегин, А.И. Зебрев. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ, М., «Медицина», 2000, с.257.

111. Volpina О.М., Gelfanov V.M., Yarov A.V., Surovoy A.Yu., Chepurkin A.V., Ivanov V.T. New virus-specific T-helper epitopes of foot-and-mouth disease viral VPi protein. // FEBS Let. 1993. V. 333. P. 175-178.

112. Волкова Т.Д., O.M. Вольпина, B.T. Иванов, С.Г. Рубин , И.В. Семашко, А.С. Караванов. Изучение антигенной структуры вируса клещевого энцефалита с помощью синтетических пептидов. // Биоорган, химия. 1998. Т.24. С. 100-111.

113. Волкова Т.Д., Вольпина О.М., Жмак М.Н., Иванов В.Т., Ворович М.Ф., Тимофеев А.В. Синтез, иммуногенные и антигенные свойства фрагментов гликопротеина Е вируса клещевого энцефалита. // Биоорган, химия, 2001. Т.27. С.174-179.

114. Дельвиг А.А., Семенов Б.Ф. // Журн. микробиол. 1997. № 6. С. 92-96.

115. Christodoulides M., Heckels J.E. Immunization with a multiple antigen peptide containing defined B- and T-cell epitopes: production of bactericidal antibodies against group В Neisseria meningitidis. II Microbiol., 1994, v. 140, p. 2951-2960.

116. Strohmaier K., Franze R., Adam K.H. Location and characterization of the antigenic portion of the FMDV immunizing protein. // J. Gen. Virol., 1982, v.59, p.295-306.

117. Brett S.J., Cease К.В., Berzofsky A.J. Influences of antigen processing on the expression of the T cell repertoire. Evidence for МНС-specific hindering structures on the products of processing. //J.Exp. Med. 1988. V. 168. P. 357-373

118. Collen Т., Dimarchi R, Doel T.R. A T cell epitope in VPI of foot-and-mouth disease virus is immunodominant for vaccinated cattle. // J. Immunol. 1991. V.146 P. 749-755.

119. Mulcahy G., Gale C., Robertson P., Iyisan S., DiMarchi R.D., Doel T.R. Isotype responses of infected, virus-vaccinated and peptide-vaccinated cattle to foot-and-mouth disease virus. // Vaccine 1990. V.8. P. 249-256.

120. DiMarchi R., Brooke G., Gale C., Cracknell V., Doel Т., Mowast N. Protection of cattle against foot-and-mouth disease by a synthetic peptide. // Science 1986. V.232. P. 639-641.

121. Малярец П.В. Сельское хозяйство за рубежом. Животноводство. 1973. №2. С. 29-33.

122. A.V. Chepurkin, A.S. Toloknov, V.T. Ivanov. A peptide construct containing B-cell and T-cell epitopes from the foot-and-mouth disease viral VPi protein induces efficient antiviral protection, // Vaccine, 1999, 17,577-584

123. M.A. Куприянова, M.H. Жмак, Д.О. Короев, А.В. Чепуркин, О.М. Вольпина,

124. B.Т. Иванов. Синтетические пептидные конструкции на основе иммуноактивных фрагментов белка VPi вируса ящура штамма А22. // Биоорган, химия, 2000,26,926.

125. Mishel В.В., Shady С.М. Selected methods in cellular immunology, Ed. W.H. Freeman, San Francisko. 1979. P. 281-296.