Первичная лекарственная резистентность вируса гепатита В тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.02.02, кандидат медицинских наук Кожанова, Татьяна Викторовна

• Кожанова, Татьяна Викторовна
• кандидат медицинских наук
• 2010

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Кожанова, Татьяна Викторовна

Список сокращений

Содержание

Введение

Глава 1. Определение, методы выявления, распространенность лекарственной резистентности вируса гепатита В обзор литературы)

1.1. Вирусный гепатит В — возбудитель, патогенез, клиника (краткая характеристика)

1.2. Противовирусные препараты в терапии ХГВ

1.3. Механизм действия аналогов нуклеозидов/нуклеотидов - ИОТ

1.4. Определение лекарственной резистентности и механизм ее формирования

1.5. Разнообразие мутаций в гене полимеразы ВГВ, 28 ассоциированных с развитием лекарственной устойчивости

1.6. Взаимное влияние гена полимеразы и поверхностного гена ВГВ

1.7. Методы определения лекарственной устойчивости ВГВ

1.8. Распространенность первичной лекарственной устойчивости

Собственные исследования

Глава 2. Материалы и методы исследования

1. Материалы исследования

1.1. Характеристика пациентов с ВГВ - моноинфекцией

1.2. Характеристика пациентов с коинфекцией ВИЧ/ВГВ

2. Методы исследования

2.1. Серологические маркеры ВГВ-инфекции

2.2. Молекулярные маркеры ВГВ-инфекции

2.3. Сравнительная оценка методов определения генотипа ВГВ и 57 мутаций в гене полимеразы ВГВ (1№Ю-1лРА НВУ БЯ у2,

ШЖ)-1лРА НВУ genotypmg и метода прямого секвенирования)

2.4. Методы статического анализа результатов исследований Результаты исследований

Глава 3. Распространенность первичной лекарственной устойчивости ВГВ в регионах Российской Федерации

3.1. Распространенность первичной лекарственной устойчивости ВГВ в регионах Российской Федерации среди ВГВ-моноинфицированных пациентов

3.2. Распространенность первичной лекарственной устойчивости ВГВ в регионах Российской Федерации среди ВГВ/ВИЧ -коинфицированных пациентов

3.3. Частота выявления маркеров инфицирования ВГВ и распространенность первичной лекарственной устойчивости ВГВ среди «условно здорового» населения гиперэндемичного по ГВ региона (Республика Тыва)

Глава 4. Анализ аминокислотных замен перекрывающегося участка Р-гена и Б-гена

Глава 5. Эпидемиологическая, вирусологическая и клинико-биохимическая характеристика пациентов с наличием и отсутствием первичной лекарственной резистентности ВГВ

Глава 6. Сравнительная характеристика двух диагностических тестов (ШМ)-1ЛРА НВУ БЯ у2, ШШ-ПРА НВУ genotyping и метода прямого секвенирования), предназначенных для определения генотипа ВГВ и мутаций в гене полимеразы ВГВ Обсуждение полученных результатов Выводы

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Первичная лекарственная резистентность вируса гепатита В»

Вирусный гепатит В (ГВ) является глобальной медицинской и социальной проблемой. Это обусловлено его повсеместным распространением среди различных групп населения, многообразием клинических форм и исходов (включая цирроз печени (ЦП) и первичный рак печени), стабильно-высокими показателями заболеваемости [7].

В терапии хронического гепатита В (ХГВ) применяются интерфероны-а (стандартные, пегилированные) и аналоги нуклеоз(т)идов - ингибиторы обратной транскриптазы (ИОТ).

В настоящее время эффективность терапии ХГВ невысока. Основные проблемы противовирусной терапии (ПВТ) связаны с неопределенностью сроков прекращения лечения HBeAg-нeгaтивнoгo гепатита и невысокой продолжительностью сохранения результата после лечения из-за вероятности рецидива. При отсутствии лечения ХГВ может с большой вероятностью приводить к развитию ЦП, печеночной недостаточности (ПН), гепатоцеллюлярной карциноме (ГЦК) и смерти.

Длительная терапия аналогами нуклеоз(т)идов ассоциирована с риском формирования лекарственной устойчивости и, вследствие этого, с прогрессированием течения заболевания [117,120].

Продолжительная персистенция генома вируса гепатита В (ВГВ) в инфицированных гепатоцитах и высокая частота возникновения спонтанных мутаций являются основой для селекции мутантных вариантов ВГВ, ассоциированных с формированием лекарственной устойчивости к ИОТ. Показано, что некоторые спонтанно возникающие мутации ВГВ могут длительное время персистировать, а мутации ВГВ, связанные с лекарственной резистентностью, возникать до начала проведения ПВТ ИОТ [21,28].

Выявление до начала проведения терапии вариантов ВГВ с мутациями в гене полимеразы (Р-ген), ассоциированных с развитием лекарственной устойчивости, является клинически важным аспектом при ведении пациентов, нуждающихся в терапии аналогами нуклеоз(т)идов. Анализ мутантных вариантов ВГВ, связанных с лекарственной резистентностью, позволит предупредить обострение заболевания у таких пациентов, связанное с неэффективностью противовирусных препаратов. При высоком риске прогрессировать вирусного ГВ, особенно у пациентов с коинфекцией ВГВ/ВИЧ, ранее выявление устойчивых к терапии вариантов ВГВ является наиболее значимым. Используемый для детекции мутантных вариантов ВГВ метод должен быть достаточно чувствительным, чтобы применяться как до начала терапии нуклеоз(т)идными аналогами, так и в процессе лечения, когда уровень виремии может быть очень низким и/или мутантные варианты ВГВ присутствуют в общей вирусной популяции в меньшей доле [31,82].

Резистентность ВГВ к аналогам нуклеоз(т)идов часто развивается на фоне длительного приема препаратов. Однако мутации в гене полимеразы ВГВ, связанные с лекарственной резистентностью, могут возникать до начала проведения ПВТ ИОТ, и инфицирование такими вариантами вируса могут приводить к формированию первичной лекарственной устойчивости. Данные о частоте первичной лекарственной резистентности ВГВ среди пациентов с острым и хроническим ГВ ограничены, поэтому в настоящее время все больше внимания уделяется изучению распространенности мутантных вариантов ВГВ среди ВГВ-инфицированных пациентов, не получающих терапию ИОТ.

Эпидемиологические и вирусологические аспекты первичной лекарственной устойчивости ВГВ к терапии аналогами нуклеоз(т)идов среди ВГВ-инфицированных пациентов в Российской Федерации (РФ) ранее не изучались. Отсутствуют сведения о спектре мутаций, приводящих к развитию лекарственной устойчивости ВГВ, об их распространенности в регионах РФ с различной интенсивностью циркуляции ВГВ.

В связи с этим актуальным является определение эпидемиологических и вирусологических характеристик вариантов ВГВ, устойчивых к терапии аналогами нуклеоз(т)идов, среди пациентов, ранее не получавших ПВТ. Вышеизложенное определило цели и задачи исследования.

Цель исследования

Изучить распространенность вариантов ВГВ с наличием мутаций, связанных с лекарственной устойчивостью, среди лиц, инфицированных ВГВ, ранее не получавших противовирусную терапию аналогами нуклеоз(т)идов, в регионах Российской Федерации с различной степенью интенсивности циркуляции ВГВ.

Для достижения поставленной цели определены следующие задачи:

1. определить частоту выявления мутаций в Р-гене ВГВ, связанных с лекарственной устойчивостью среди пациентов с ВГВ-моноинфекцией и ВГВ/ВИЧ-коинфекцией, ранее не получавших терапию аналогами нуклеоз(т)идов;

2. охарактеризовать аминокислотные замены в Р-гене ВГВ;

3. сравнить вирусологические и клинико-биохимические показатели у лиц с наличием и отсутствием первичной лекарственной устойчивости ВГВ;

4. выбрать метод скрининга мутаций в Р-гене ВГВ, ассоциированных с развитием лекарственной устойчивости к аналогам нуклеоз(т)идов;

5. разработать алгоритм выявления лекарственной устойчивости ВГВ для оптимизации выбора противовирусного препарата.

Научная новизна работы

Впервые в регионах Российской Федерации, различающихся по интенсивности циркуляции ВГВ, определена частота выявления вариантов ВГВ с наличием мутаций, ассоциированных с первичной лекарственной резистентностью к аналогам нуклеоз(т)идов, среди ВГВ-инфицированных и ВГВ/ВИЧ-коинфицированных пациентов, не получавших противовирусной терапии,.

Впервые при анализе аминокислотных последовательностей домена обратной транскриптазы изолятов ВГВ, выделенных на территории

Российской Федерации, определены 2 группы мутаций: клинически значимые аминокислотные замены (М2041, А1818, Т1841, Ь199\¥, А194Т) и замены, в тех же значимых позициях гена полимеразы, но еще не описанные в научной литературе (Т184Р, 1Л798, 8213Р, М204Ь, Ь82Р, Ъ2\ЗУ, 1Л798, У214У). Данные мутации рассматриваются как потенциально значимые, поскольку находятся в позициях гена полимеразы ВГВ, имеющих решающие значение для диагностики лекарственной устойчивости ВГВ.

Впервые при выборе метода скрининга с целью обнаружения мутаций в гене полимеразы ВГВ установлена более высокая информативность прямого секвенирования и высокая чувствительность коммерческого теста 1№чГО-ЫРА БЯ у2.

Впервые на основании проведенного исследования разработаны два алгоритма выявления мутаций в гене полимеразы ВГВ среди пациентов с ВГВ-инфекцией:

- для проведения научных скрининговых исследований;

- для оптимизации выбора аналога нуклеоз(т)идов в клинической практике с целью уменьшения прогрессирование ХГВ и предупреждения развитие тяжелых осложнений.

Практическая значимость и внедрение результатов работы

Результаты, полученные в процессе работы, позволили разработать и рекомендовать для использования в клинической практике алгоритм выявления мутаций в Р-гене ВГВ, ассоциированных с развитием лекарственной устойчивости, который позволит оптимизировать выбор противовирусного препарата (аналога нуклеоз(т)идов) у пациентов с ВГВ-инфекцией.

Данный алгоритм внедрен и применяется в научно-исследовательской работе отдела вирусных гепатитов ИГТВЭ им. М.П. Чумакова РАМН.

Проблема и методы диагностики лекарственной резистентности ВГВ к аналогам нуклеоз(т)идов среди ВГВ-инфицированных пациентов изложены в проекте методических рекомендаций Министерства здравоохранения и социального развития РФ «Выявление мутаций, связанных с лекарственной устойчивостью вируса гепатита В среди пациентов с коинфекцией вируса иммунодефицита человека и вируса гепатита В».

Апробация работы

Материалы диссертационной работы доложены и обсуждены на международном конгрессе по вирусным гепатитам (13th International Symposium on Viral Hepatitis and Liver Disease (март 2009 г., Вашингтон), на конференции молодых ученых Института полиомиелита и вирусных энцефалитов им. М.П. Чумакова РАМН (апрель 2009 г., Москва), на Российской научно-практической конференции с международным участием «Вирусные гепатиты - эпидемиология, диагностика, лечение и профилактика» (май 2009 г., Москва), на научно-практической конференции

Актуальные проблемы медицинской вирусологии» (ноябрь 2009 г., Москва). i

Апробация диссертации состоялась 30 июля 2010 г. на заседании Ученого совета Института полиомиелита и вирусных энцефалитов им. М.П. Чумакова РАМН (протокол №1 от 30 июля 2010 г.).

Научные положения, выносимые на защиту

1. Частота выявления первичной лекарственной устойчивости ВГВ к налогам нуклеоз(т)идов в группе пациентов с ВГВ-моноинфекцией составила 6,2% (17/273), с ВГВ/ВИЧ-коинфекцией - 10,0% (3/30). Анализ распространенности мутантных вариантов ВГВ в изучаемых регионах Российской Федерации показал, что наибольшее число случаев первичной лекарственной резистентности ВГВ регистрируется среди ВГВ-инфицированных пациентов Московский области (15%; 9/60, р<0,01) в сравнении с другими регионами что, по-видимому, связано с внедрением в данном регионе в программу противовирусной терапии ХГВ аналогов нуклеоз(т)идов.

2. При анализе нуклеотидных последовательностей гена полимеразы ВГВ определены 2 группы мутаций: клинически значимые аминокислотные замены (M204I, A181S, T184I, L199W, А194Т) и потенциально значимые мутации - Т184Р, L179S, S213F, M204L, L82P, S213Y, L179S, V214Y - замены в тех же значимых позициях гена полимеразы, но еще не описанные в научной литературе. 3. При выборе метода скрининга мутаций в гене полимеразы ВГВ установлена более высокая информативность прямого секвенирования, тогда как коммерческий тест INNO-LiPA DR v2 более чувствителен, поскольку выявляет мутантные варианты ВГВ, присутствующие в общей вирусной популяции в минорном количестве (около 5%). Однако тест INNO-LiPA DR v2 имеет ограниченный спектр выявляемых мутаций.

Публикации по теме диссертации По теме диссертации опубликовано 6 научных работ, в том числе 2 статьи - в реферируемых журналах ВАК.

Объем и структура диссертации Диссертация изложена на 121 страницах текста, состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, 4 глав собственных исследований и обсуждения полученных результатов, заключения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы, включающего 7 отечественных и 123 зарубежных источников. Диссертационная работа иллюстрирована 30 таблицами, 13 рисунками.

Заключение диссертации по теме «Вирусология», Кожанова, Татьяна Викторовна

106 ВЫВОДЫ

1. Частота выявления первичной лекарственной резистентности ВГВ к аналогам нуклеоз(т)идов у пациентов с ВГВ-моноинфекцией составила 6,2% (17/273), с ВГВ/ВИЧ-коинфекцией - 10,0% (3/30).

2. Анализ распространенности мутантных вариантов ВГВ в обследованных регионах Российской Федерации показал, что наибольшее число случаев первичной лекарственной резистентности ВГВ регистрируется среди ВГВ-инфицированных пациентов Московской области (15%; 9/60) в сравнении с другими регионами, что, по-видимому, связано с внедрением в данном регионе в программу противовирусной терапии ХГВ аналогов нуклеоз(т)идов.

3. При анализе нуклеотидных последовательностей гена полимеразы ВГВ определены 2 группы мутаций: клинически значимые аминокислотные замены (М2041, А1818, Т1841, Ь199\¥, А194Т) и потенциально-значимые мутации - Т184Р, Ы798, 8213Р, М204Ь, Ь82Р, 8213У, Ы798, У214У -замены в тех же значимых позициях гена полимеразы, но еще не описанные в научной литературе.

4. При выборе метода скрининга мутаций в гене полимеразы ВГВ установлена более высокая информативность прямого секвенирования, тогда как коммерческий тест ШКЮ-1лРА БЯ у2 оказался более чувствителен при выявлении минорных вариантов в вирусной популяции.

5. На основании проведенного исследования разработаны два алгоритма выявления мутаций в гене полимеразы ВГВ среди пациентов с ВГВ-инфекцией:

- для проведения научных скрининговых исследований;

- для оптимизации выбора аналога нуклеоз(т)идов в клинической практике.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. С целью оптимизации выбора ИОТ для лечения ХГВ рекомендуется применение более чувствительных и специфичных методов ранней диагностики лекарственной резистентности ВГВ (1№ГО-1лРА НВУ, прямое секвенирования генома ВГВ).

2. Включение в стандартную схему диагностики ГВ (HBsAg, анти-НВс, ДНК ВГВ) определения генотипа вируса и аминокислотных замен в Р-гене позволит оценить распространенность мутантных вариантов ВГВ в регионах РФ, оптимизировать выбор ИОТ, что будет способствовать замедлению прогрессирования заболевания печени и развития его осложнений, а также улучшению прогноза ВГВ-инфекции.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Кожанова, Татьяна Викторовна, 2010 год

1. Галимова С.Ф., Маевская М.В., Ивашкин В.Т. Новый аналог нуклеозидов телбивудин в лечении хронического гепатита В // Рос. журн. гастроэнтерол. гепатол. колопроктол. 2007. - № 5. - С. 55-60.

2. Де Клерк Э. Перспективы лечения вирусного гепатита В // Клин, микробиол. антимикроб, химиотер. 2000. - № 3. - С. 4-18.

3. Жданов К.В. в. Новые рекомендации по лечению хронического вирусного гепатита В: прогнозируем эффективность терапии, следуя «дорожной карте»? // Клин, гастроэнтерол. гепатол. — 2008. № 1. — С. 48-49.

4. Ильченко Л.Ю. Проблемы резистентности терапии хронического гепатита В // Мир вирусных гепатитов. 2007. - №. 2. - С. 2-9.

5. Сологуб Т.В., Романцов М.Г., Кремень Н.В. Терапия больных хроническим вирусным гепатитом В, резистентных к ламивудину // Современные проблемы науки и образования. — 2007. № 6. - С. 9-13.

6. Рудакова A.B., Лобзин Ю.В., Хвещук П.Ф. Противовирусная терапия хрониченского гепатита В: анализ эффективности затрат // Клин, микроб, антимикроб, химиотер. 2002. - № 1. — С. 49-59.

7. Шахгильдян И.В., Михайлов М.И., Онищенко Г.Г. Парентеральные вирусные гепатиты (эпидемиология, диагностика, профилактика). М.: ФГОУ «ВУНМЦ Роздрава», 2003. - С. 22-27.

8. Aggarwal R., Ranjan P. Preventing and treating hepatitis В infection // BMJ. -2004. Vol. 329. - P. 1080-1086.

9. Alvarado-Esquivel C., Carrera-Gracia M., Conde-Gonza ' lez С. Genotypic resistance to lamivudine among hepatitis В virus isolates in Mexico // J. Antimicrob. Chemother. 2006. - Vol. 57. - P. 221-223.

10. Amini-Bavil-Olyaee S., Hosseini S.Y., Sabahi F. Hepatitis В virus (HBV) genotype and YMDD motif mutation profile among patients infected with HBV and untreated with lamivudine // J. Infect. Dis. 2008. - Vol. 12. - P. 83-87.

11. Arauz-Ruiz P., Norder H., Robertson B.H. et al. Genotype H: a new Amerindian genotype of hepatitis B virus revealed in Central America // J. Gen. Virol. 2002. - Vol. 83. - P. 2059-2073.

12. Bang L., Scot L. Emtricitabine // Drugs 2003. - Vol. 63. - P. 2413-2424.

13. Bartholomeusz A., Locarnini S.A. Antiviral drug resistance: clinical consequences and molecular aspect // Semin Liver Dis. 2006. - Vol. 26. -P. 162-170.

14. Bottecchia M., Souto F., Kycia M. et al. Hepatitis B virus genotypes and resistance mutations in patients under long term lamivudine therapy: characterization of genotype G in Brazil // BMC Microbiol. 2008. - Vol. 8. -P. 11.

15. Bozdayi- A., Uzunalimog Ô., TürkyHmaz A.R. et al. YSDD: a novel mutation in HBV DNA polymerase confers clinical resistance to lamivudine // J. Viral Hepat. 2003. - Vol. 10. - P. 256-265.

16. Carman W.F. The clinical significance of surface antigen variants of hepatitis B virus // J. Viral Hepat. 1997. - N. 4. - P. 11-20.

17. Chaudhuri V., Tayal R., Nayak B. et al. Occult hepatitis B virus infection in chronic liver disease: full-length genome and analysis of mutant surface promoter//Gastroenterol.-2004.-Vol. 127.-P. 1356-1371.

18. Colonno R., Rose R., Baldick C. Entecavir Resistance Is Rare in Nucleoside Naiive Patients With Hepatitis B // Hepatol. 2006. - Vol. 44. - P. 1656-1665.

19. Dan Y., Wai C., Lee Y. Outcome of lamivudine-resistant hepatitis B virus is generally benign except in cirrhotics // World J. Gastroenterol. 2005. - Vol. 11.-P. 4344-4350.

20. Durantel D., Brunelle M., Gros E. et al. Resistance of human hepatitis B virus to reverse transcriptase inhibitors: from genotyping to phenotyping testing // J. Clin. Virol. 2005. - Vol. 34. - P. 34-43.

21. Fung S.K., Chae H.B., Fontana R.J. et al. Virologic response and resistance to adefovir in patients with chronic hepatitis B // J. Hepatol. 2006. - Vol. 44. -P. 283-290.

22. Fung S.K., Lok A.S. Management of hepatitis B patients with antiviral resistance // Antivir. Ther. 2004. - Vol. 9. - P. 1013-1026.

23. Ganem D., Prince A.M. Hepatitis B virus infection-natural history and clinical consequences // N. Engl. J. Med. 2004. - Vol. 350. - P. 1118-1122.

24. Gerolami R., Bourliere M., Colson P. Unusual selection of rtA181V HBV mutants cross-resistant to adefovir following prolonged lamivudinen monotherapy: report of two cases // Antivir. Ther. 2008. - Vol. 11. - P. 1103-1106.

25. Ghany M., Liang T.J. Drug targets and molecular mechanisms of drug resistance in chronic hepatitis B // Gastroenterol. 2007. - Vol. 132. - P. 1574-1585.

26. Guenther S., Fischer L., Pult I. et al. Naturally occurring variants of hepatitis B virus // Adv. Virus Res. 1999. - Vol. 52. - P. 25-37.

27. Guenther S., Mark N., Thomas L. et al. Combination of tenofovir and lamivudine versus tenofovir after lamivudine failure for therapy of hepatitis B in HIV-coinfection // AIDS 2006. - Vol. 20. - P. 1951-1954.

28. Heo J., Cho M., Kim H.H. Detection of YMDD Motif Mutants by Oligonucleotide Chips in Lamivudine-Untreated Patients with Chronic Hepatitis B Virus Infection // J. Korean Med. Sci. 2004. - Vol. 19. - P. 541546.

29. Hie-Won H., Dixon J. A review of the one-year incidence of resistance to lamivudine in the treatment of chronic hepatitis B // Hepatol. Int. 2008. -Vol. 2.-P. 440-456.

30. Honkoop P., Niesters H.G, Osterhaus A.D. Lamivudine resistance in immunocompetent chronic hepatitis B. Incidence and patterns // J. Hepatol. -1998.-Vol. 28.-P. 169.

31. Hsieh C.C., Tzonou A., Zavitsanos X. et al. Age at first establishment of chronic hepatitis B virus infection and hepatocellular carcinoma risk. A birth order study // Am. J. Epidemiol. 1992. - Vol. 136. - P. 1115-1121.

32. Hua R., Tanaka Y., Fukai K. Rapid detection of the hepatitis B virus YMDD mutant using TaqMan-minor groove binder probes // Clin. Chimie. 2008. -Vol. 6.-P. 4560-4571.

33. Huang Z.M., Huang Q.W., Qin Y.Q. YMDD mutations in patients with chronic hepatitis B untreated with antiviral medicines // World J. Gastroenterol. 2005. - Vol. 11. - P. 867-870.

34. Hussain M., Fung S., Libbrecht E. Sensitive Line Probe Assay That Simultaneously Detects Mutations Conveying Resistance to Lamivudine and Adefovir // J. Clin. Microbiol. 2006. - Vol. 44. - P. 1094-1097.

35. Iacomi F., Vincenti D., Vairo F. et al. Effect of HIV co-infection on mutation patterns of HBV in patients with lamivudine-resistant chronic hepatitis B // J. Med. Virol.-2009.-Vol. 81.-P. 1151-1156.

36. Jang H., Cho M., Heo J. et al. Oligonucleotide Chip for Detection of Lamivudine-Resistant Hepatitis B Virus // J. Clin. Microbiol. 2004. - Vol. 42. - P. 4181-4188.

37. Jardi R., Buti M., Rodríguez-Frías F. et al. Rapid detection of lamivudine-resistant hepatitis B virus polymerase gene variants // J. Virol. Methods — 1999.-Vol. 83.-P. 181-187.

38. Jardi R., Rodriguez-Frias F., Schaper M. et al. Hepatitis B Virus Polymerase Variants With Entecavir Drug Resistance: Results // J. Viral. Hepat. 2007. -Vol. 14.-P. 835-840.

39. Jones R., Nelson M. Novel anti-hepatitis B agents: a focus on telbivudine // Int. J. Clin. Pract. 2006. - Vol. 60. - P. 1295-1299.

40. Kang J.A., Park J.C. Identification of Lamivudine-resistant Hepatitis B Virus by Oligonucleotide Microarray // J. Biochip 2007. - Vol. 1. - P. 273-280.

41. Kao J.H., Wu N.H., Chen P.J. et al. Hepatitis B genotypes and the response to interferon therapy // J. Hepatol. 2000. - Vol. 33. - P. 998-1002.

42. Kazim S., Sarin S., Sharma B. et al. Characterization of Naturally Occurring and Lamivudine-Induced Surface Gene Mutants of Hepatitis B Virus in Patients with Chronic Hepatitis B in India // Intervirol. 2006. - Vol. 49. -P.152-160.

43. Kobayashi S., Ide T., Sata M. Detection of YMDD motif mutations in some lamivudine-untreated asymptomatic hepatitis B virus carriers // J. Hepatol. -2001.-Vol. 34.-P. 584-586.

44. Ladner S., Miller T., King R. et al. The M539V Polymerase Variant of Human Hepatitis B Virus Demonstrates Resistance to 29-Deoxy-39-Thiacytidine and a Reduced Ability to Synthesize Viral DNA // Antimicrob. Agents Chem. 1998. - Vol. 42. - P. 2128-2131.

45. Ladner S.K., Miller T.J., Otto M.J. The hepatitis B virus M539V polymerase variation responsible for 3TC resistance also confers cross-resistance to other nucleoside analogues // Antivir. Chem. Chemother. 1998. - Vol. 9. - P. 6572.

46. Laoi B., Herra C., Norris S. et al. Hepatitis B virus resistance to adefovir in a nucleotide naive patient with chronic hepatitis B virus infection // J Antimicrob. Chemother. 2007. - Vol. 59. - P. 807-809.

47. Laoi B., Herra C., Norris S. First report of genotypic resistance to adefovir in chronic HBV in the Republic of Ireland // J. Antimicrob. Chemother. 2006. -Vol. 57.-P. 1009-1010.

48. Lau D., Bleibel W. Current status of antiviral therapy for hepatitis B // Therap. Advan. Gastroenterol. 2008. - Vol. 1. - P. 61-75.

49. Lee S., Choi M. Overlapping Gene Mutations of Hepatitis B Virus in a Chronic Hepatitis B Patient with Hepatitis B Surface Antigen Loss during Lamivudine Therapy // J. Korean Med. Sci. 2005. - Vol. 20. - P. 433-437.

50. Lee K.O., Lee H.J., Byun J.Y. Detection of Lamivudine-Resistant Mutations of HBV DNA Polymerase Gene Using PCR-Direct Sequencin // J. Virol. Methods 2006. - Vol. 3. - P. 89-94.

51. Lee C.Z., Lee H.S., Huang G.T. Detection of YMDD mutation using mutant-specific primers in chronic hepatitis B patients before and after lamivudine treatment // World J. Gastroenterol. 2006. - Vol. 12. - P. 5301-5305.

52. Lee Y.S., Lim Y.S. Increased risk of adefovir resistance in patients with lamivudine-resistant chronic hepatitis B after 48 weeks of adefovir dipivoxil monotherapy // Hepatol. 2006. - Vol. 43. - P. 1385-1391.

53. Leemans W., Janssen H., de Man R. Future prospectives for the management of chronic hepatitis B // World J. Gastroenterol. 2007. - Vol. 13. - P. 25542567.

54. León P., Pozo F., Echevarría J. Detection of hepatitis B virus variants resistant to lamivudine and famciclovir among randomly selected chronic carriers from Spain // Enferm. Infec. Microbiol. Clin. 2004. - Vol. 2. - P. 133-137.

55. Li M.W., How W., Liu K.Z. Character of HBV (hepatitis B virus) polymerase gene rtM204V/I and rtL180M mutation in patients with lamivudine resistance // J. Zhejiang Univ. Sci. 2007. - Vol. 6. - P. 664-667.

56. León P., Pozo F., Echevarría J. Detection of hepatitis B virus variants resistant to lamivudine and famciclovir among randomly selected chronic carriers from Spain // Enferm. Infec. Microbiol. Clin. 2004. - Vol. 22. - P. 133-137.

57. Lindh M., Uhnoo I., Blackberg J. Treatment of chronic hepatitis B infection: An update of Swedish recommendations // Scand. J. Infect. Dis. 2008. -Vol. 40.-P. 436-450.

58. Lindstrom A., Odeberg J. Pyrosequencing for Detection of Lamivudine-Resistant Hepatitis B Virus // J. Clin. Microbiol. 2003. - Vol. 42. - P. 47884795.

59. Ling R., Ahmed M. Selection of mutation in hepatitis B virus polymerase during therapy of transplant recipients with lamivudine // J. Hepatol. 2006. -Vol. 24.-P. 711-713.

60. Ling R., Mutimer D., Ahmed M. et al. Selection of mutations in the hepatitis B virus polymerase during therapy of transplant recipients with lamivudine // Hepatol. 1996. - Vol. 24. - P. 711-713.

61. Liu K., Hou W., Ni Q. Clinical features of chronic hepatitis B patients with YMDD mutation after lamivudine therapy // J. Zhejiang Univ. Sci. 2005. -Vol. 6.-P. 1182-1187.

62. Locarnini S. Primary resistance, multidrug resistance, and cross-resistance pathways in HBV as a consequence of treatment failure // Hepatol. Int. -2008.-Vol. 2.-P. 147-151.

63. Locarnini S., Mason W.S. Cellular and virological mechanisms of HBV drug resistance // J. Hepatol. 2006. - Vol. 44. - P. 422-431.

64. Locarnini S., Warner N. Major causes of antiviral drug resistance and implications for treatment of hepatitis B virus monoinfection and coinfection with HIV // Antivir. Ther. 2007. - Vol. 12. - P. 15-23.

65. Lok A., Brian J., McMahon L. Chronic Hepatitis B // Hepatol. 2007. - Vol. 45.-P. 1225-1241.

66. Lu H., Zeng Z., Xu X. et al. Mutations in surface and polymerase gene of chronic hepatitis B patients with coexisting HBsAg and anti-HBs // World J. Gastroenterol. 2006. - Vol. 12. - P. 4219-4223.

67. McMahon B.J., Alward W.L., Hall D.B. et al. Acute hepatitis B virus infection: relation of age to the clinical expression of disease and subsequent development of the carrier state // J. Infect Dis. 1985. - Vol. 151. - P. 599602.

68. Malmstrôm S., Hannoun C., Lindh M. Mutation analysis of lamivudine resistant hepatitis B virus strains by TaqMan PCR // J. Virol. Methods 2007. -Vol. 143.-P. 147-152.

69. Masaadeh H., Hayajneh W., Alqudah E. Hepatitis B virus genotypes and lamivudine resistance mutations in Jordan // World J. Gastroenterol. 2008. -Vol. 14.-P. 7231-7234.

70. Moriconi F., Colombatto P., Coco B. Emergence of hepatitis B virus quasispecies with lower susceptibility to nucleos(t)ide analogues during lamivudine treatment // J. Antimicrob. Chemother. 2007. - Vol. 60. - P. 341-349.

71. Motta J.S., Mello F.C., Lago B.V. Occult hepatitis B virus infection and lamivudine-resistant mutations in isolates from renal patients undergoing hemodialysis // J. Gastroenterol. Hepatol. 2010. - Vol. 25. - P. 101-106.

72. Nagasaki F., Nitsuna H. The high of the emergene of entecavir-resistance mutants among patients infected with lamivudine-resistance hepatitis virus // J. Exp.Med. 2007. - Vol. 213. - P. 181-186.

73. Nelson M., Portsmouth S., Stebbing J. An open-label study of tenofovir in HIV-1 and hepatitis B virus coinfected individuals // AIDS 2003. - Vol. 17. -P. 7-10.

74. Norder H., Courouce A.M., Magnius L.O. Complete genomes, phylogenetic relatedness, and structural proteins of six strains of the hepatitis B virus, four of which represent two new genotypes // J. Virol. — 1994. Vol. 198. - P. 489-503.

75. Ogura Y., Kurosaki M., Asahina Y. Prevalence and Significance of Naturally Occurring Mutations in the Surface and Polymerase Genes of Hepatitis B Virus //J. Infect. Dis.- 1999.-Vol. 180.-P. 1444-1451.

76. Ono S., Shiratori Y. The polymerase L528M mutation cooperates with nucleotide binding-site mutations, increasing hepatitis B virus replication and drug resistance // J. Clin. Invest. 2001. - Vol. 107. - P. 449-455.«

77. Park H., Woo H., Kim B. et al. Evaluation of dual priming oligonucleotide-based multiplex PCR for detection of HBV YMDD mutants // Arch. Virol. -2008.-Vol. 153.-P. 2019-2025.

78. Pas S.D., Fries E., Robert A. Development of a Quantitative Real-Time ' Detection Assay for Hepatitis B Virus DNA and Comparison with Two Commercial Assays // J. Clin. Microbiol. 2000. - Vol. 38. - P. 2897-2901.

79. Pastor R., Habersetzer F., Faf-Kremer S. Hepatitis B virus mutations potentially conferring adefovir/tenofovir resistance in treatment-naive patients // World J. Gastroenterol. 2009. - Vol. 15. - P. 753-755.

80. Pisarev V., Lee S., Connelly M. Intracellular Metabolism and Action of Acyclic Nucleoside Phosphonates on DNA Replication // Mol. Pharmacol. -1997. Vol. 52. - P. 63-68.

81. Quarleri J., Morett F., Bouzas B. Hepatitis B Virus Genotype Distribution and Its Lamivudine-Resistant Mutants in HIV-Coinfected Patients with Chronic and Occult Hepatitis B // AIDS 2007. - Vol. 23. - P. 525-531.

82. Reddy C.M., Martin P. Preventing HBV antiviral drug resistance to the oral antivirals and appropriate management when resistance occurs is crucial in the treatment of hepatitis B // Drs. Reddy and Martin review the issues — 2008.-Vol. 9.-P. 67-78.

83. Rossana M., Ulisses B., Rodriguez A. et al. Hepatitis B Virus Mutants // Intervirol. 1999. - Vol. 42. - P. 69-80.

84. Sayan M., Akhan S., Meric M. Naturally occurring amino-acid substitutions to nucleos(t)ide analogues in treatment naive Turkish with chronic hepatitis B // J. Viral. Hepat. 2010. - Vol. 17. - P. 23-27.

85. Schaefer S. Hepatitis B virus taxonomy and hepatitis B virus genotypes // World J. Gastroenterol. 2007. - Vol. 13. - P. 14-21.

86. Schildgen O., Sirma H., Funk A. Variant of Hepatitis B Virus with Primary Resistance to Adefovir //N. Engl. J. Med. 2006. - Vol. 354. - P. 1807-1812.

87. Shaw T., Bartholomeusz A., Locarnini S. HBV drug resistance: Mechanisms, detection and interpretation // J. Hepatol. 2006. - Vol. 44. - P. 593-606.

88. Sheldon J., Rodes B., Bartholomeusz A. Selection of hepatitis B virus polymerase mutations in HIV-coinfected patients treated with tenofovir // Antivir. Ther. 2005. - Vol. 10. - P. 727-734.

89. Sheldon J., Soriano V. Hepatitis B virus escape mutants induced by antiviral therapy // J. Antimicrob. Chemotherap 2007. - Vol. 24. - P. 1-3.

90. Shin H.J., Rho H.M. Release of the hepatitis B virus-associated DNA polymerase from the viral particle by the proteolytic cleavage // J. Biol. Chem. 1995. -Vol. 270.-P. 11047-11050.

91. Soriano V., Sheldon J., Ramos B. Confronting chronic hepatitis B virus infection in HIV: new diagnostic tools and more weapons // AIDS. 2006. -Vol. 20.-P. 451-453.

92. Stuyver L., De Gendt S., Van Geyt C. et al. A new genotype of hepatitis B virus: complete genome and phylogenetic relatedness // J. Gen. Virol. 2000. -Vol. 81.-P.67-74.

93. Stuyver L., Van Geyt C., De Gendt S. Line Probe Assay for Monitoring Drug Resistance in Hepatitis B Virus-Infected Patients during Antiviral Therapy // J. Clin. Microbiol. 2000. - Vol. 38. - P. 702-707.

94. Tillmann H.L. Antiviral therapy and resistance with hepatitis B virus infection // World J. Gastroenterol. 2007. - Vol. 13. - P. 125-140.

95. Thompson A., Ayres A., Yuen L. et al. Lamivudine resistance in patients with chronic hepatitis B: Role of clinical and virological factors // J. Gastroenterol. Hepatol. 2007. - Vol. 22. - P. 1078-1085.

96. Torresi J. Hepatits B antiviral resistance and vaccine escape: two sides of the same coin // Antiviral. Therapy 2008. - Vol. 13. - P. 337-340.

97. Torresi J. The virological and clinical significance of mutations in the overlapping envelope and polymerase genes of hepatitis B virus // J. Clin. Virol. 2002. - Vol. 25. - P. 97-106.

98. Tsuda F., Sakugawa H., Sastrosoewignjo R. et al. Typing hepatitis B virus by homology in nucleotide sequence: comparison of surface antigen subtypes // J. Gen. Virol. 1988. - Vol. 69. - P. 2575-2583.

99. Tuncblek S., Kose F., Elaldi A. Lamivudine resistance in untreated chronic hepatitis B patients in Turkey // Turk J. Gastroenterol. 2008. - Vol. 19.- P. 99-103.

100. Vairo F., Iacomi F., et al. Analysis of HBV lamivudine-resistance mutations in a cohort of HBV infected subjects with or without HIV+ co-infection // 4th International HIV and Hepatitis Co-infection workshop 2008. - Vol. 2. - P. 45-56.

101. Vernet G., Tran N. The DNA-Chip technology as a new molecular tool for the detdctiin of HBV mutants // J. Clin. Virol. 2005. - Vol. 34. - P.49-53.

102. Villeneuve J., Durantel D., Durantel S. et al. Selection of a hepatitis B virus strain resistant to adefovir in a liver transplantation patient // J. Hepatol. -2003. Vol. 39.-P. 1085-1089.

103. Wai C.T., Chu C.J., Hussain M. HBV genotype B is associated with better response to interferon therapy in HBeAg(+) chronic hepatitis than genotype C //Hepatol. -2002. Vol. 36. - P. 1425-1430.

104. Wang Y.Z., Wu G.X. Oligonucleotide chip, real-time PCR and sequencing for genotyping of hepatitis B virus // World J. Gastroenterol. 2007. - Vol. 13. -P. 4260-4263.

105. Wang Y., Yan Y., Jiang J. et al. RtL164V, a mutation possibly associated with lamivudine resistant HBV // Zhonghua Gan Zang Bing Za Zhi 2008. -Vol. 16.-P. 490-493.

106. Wen H., Li Q. Real-time PCR detection of multiple lamivudine-resistant mutations with displacing probes in a single tube // J. Clin. Virol. 2007. -Vol. 38. - P. 334-340.

107. Wong V., Chan H. Molecular Virology and Drug Resistance in Antiviral Therapy of Chronic Hepatitis B // Current Hepatitis Reports 2005. - Vol. 4. -P. 27-33.

108. Xu X-W., Chen Y-G. Current therapy with nucleoside/nucleotide analogs for patients with chronic hepatitis B // Hepatobil. Pancreat. Dis. Int. 2006. - Vol. 5.-P. 350-359.

109. Yamazhan T., Sertoz R., Pulluk?u H. A case of chronic hepatitis B with primary adefovir resistance // Mikrobiyol. Bui. 2007. - Vol. 41. - P. 297301.

110. Yoshida S., Hige S., Yoshida M. et al. Quantification of lamivudine-resistant hepatitis B virus mutants by type-specific TaqMan minor groove binder probe assay in patients with chronic hepatitis B // Ann Clin. Biochem. 2008. -Vol. 45.-P. 59-64.

111. Younger M., Bathgate A. Review article: nucleoside analogues for the treatment of chronic hepatitis B // Aliment. Pharmacol. Ther. 2004. - Vol. 20.-P. 1211-1230.

112. Zaaijer H., Hemert F. Independent evolution of overlapping polymerase and surface protein genes of hepatitis B virus // J. Gen. Virol. 2007. - Vol. 88. -P. 2137-2143.

113. Zhao J., Bai Y., Zhang Q. et al. Detection of YMDD mutants using universal template real-time PCR // World J. Gastroenterol. 2006. - Vol. 12. - P. 1308-1311.

114. Zhao J.R., Bai Y.J., Zhang Q. Detection of hepatitis B virus DNA by realtime PCR using TaqMan- MGB probe technology // World J. Gastroenterol. -2005.-Vol. 11.-P. 508-510.

115. Zhi-ying O., Zhou R., HE Y. YVDD Mutation of Hepatitis B Virus, a Dominant Lamivudine-Resistant Type in Guangzhou, South China // Virol. Sinica. 2008. - Vol. 23. - P. 218-225.

116. Zhou T., Saputelli J., Aldrich C.E. et al. Emergence of drug-resistant populations of woodchuck hepatitis virus in woodchucks treated with the antiviral nucleoside lamivudine // Antimicrob. Agents Chemother. 1999. -Vol. 43.-P. 1947-1954.

117. Zöllner B., Petersen J., Puchhammer-Stock E. Viral features of lamivudine resistant hepatitis B genotypes A and D // Hepatol. 2004. - Vol. 39. - P. 4250.

118. Zoulim F., Buti M., Lok A. Antiviral-resistant hepatitis B virus: can we prevent this monster from growing? // J. Vir. Hepat. 2007. - Vol. 14. - P. 29-36.

119. Zoulim F., Degos F., Slama A. A prospective study of the evolution of lamivudine resistance mutations in patients with chronic hepatitis B treated with lamivudine // J. Viral. Hepat. 2006. - Vol. 13. - P. 278-288.