Персистенция патогенных микоплазм и ее молекулярно-генетические механизмы тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.07, доктор биологических наук Зигангирова, Наиля Ахатовна

• Зигангирова, Наиля Ахатовна
• доктор биологических наук
• 2001

Оглавление диссертации доктор биологических наук Зигангирова, Наиля Ахатовна

ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

Глава 1. Роль микоплазм в инфекционной патологии человека.

1.1. Молекулярно-биологические особенности микоплазм.

1.2. Факторы патогенности микоплазм.

Глава 2. Механизмы персистенции микоплазм.

2.1. Биологические особенности микоплазм, способствующие персистенции.

2.2. Взаимодействие микоплазм с иммунной системой макроорганизма.

2.3. Генетически детерминированная антигенная изменчивость.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Глава 3. Материалы и методы.

Глава 4. Создание методической базы для изучения дифференциальной активности генов у патогенных микоплазм.

4.1. Создание модели респираторного микоплазмоза у экспериментальных животных для изучения острой и персистентной инфекции.

4.2. Разработка модельных систем для изучения молекулярно-генетических механизмов персистенции М.рпеитотае.

4.3. Разработка методов для выявления дифференциальной экспрессии генов микоплазм.

Глава 5. Идентификация генов М.рпеитотае, дифференциально экспрессирующихся на различных стадиях перехода микоплазм в персистирующее состояние.

5.1. Анализ активности генов М.рпеитотае при разных формах инфекционного процесса методом "молекулярного портрета".

5.2. Ген, кодирующий синтез фактора патогенности и основной антигенной детерминанты.

5.3. Ген рибосомной РНК.

5.4. Ген, кодирующий синтез фермента участвующего в процессах метилирования ДНК.

5.5. Ген, кодирущий фермент I фосфотрансферазной системы.

5.6. Ген, кодирующий синтез липопротеина.

5.7. Ген, кодирующий синтез нейраминидазы.

5.8. Ген, кодирующий белок-шаперон.

Глава 6. Изучение организации и экспрессии гена, детерминирующего синтез белка адгезии PI.

6.1. Экспрессия гена, кодирующего синтез белка Р1, при острой форме инфекции.

6.2. Экспрессия гена, кодирующего синтез белка Р1, при персистентной инфекции.

6.3. Выявление белка, связывающегося с ДНК M.pneumoniae и ответственного за подавление экспрессии гена, кодирующего синтез белка Р1, при персистентной инфекции.

6.4. Картирование мест связывания белка с ДНК M.pneumoniae.

6.5. Действие факторов биологической и физико-химической природы на экспрессию гена, кодирующего синтез белка Р1.

Глава 7. Разработка молекулярно-генетических методов выявления персистирующих микоплазм.

7.1. Применение ПЦР для диагностики острой и хронической формы респираторного микоплазмоза.

7.2. Диагностика урогенитальных микоплазмозов.

7.3. Сравнительная оценка микробиологического, иммунологического и молекулярно-биологического методов диагностики урогенитальных микоплазмозов.

Глава 8. Изучение патогенеза хронических микоплазмозов с помощью молекулярно-биологических методов.

Глава 9. Разработка молекулярно-генетических методов для определения антибиотикорезистентных штаммов микоплазм.

9.1. Выявление генов устойчивости к тетрациклину у клинических изолятов микоплазм и изучение закономерностей их наследования.

9.2. Изучение генетических механизмов устойчивости к эритромицину у клинических изолятов уреаплазм и разработка методов их выявления.

Глава 10. Обсуждение результатов.

ВЫВОДЫ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Персистенция патогенных микоплазм и ее молекулярно-генетические механизмы»

Персистирование или длительное переживание возбудителя в организме хозяина лежит в основе развития атипичных, хронических патологических состояний, частота которых, соизмерима с частотой распространенности острых форм инфекции. Доказательство того, что большинство патогенов способно к персистенции, стимулировало изучение молекулярно-генетических основ этого явления как одной их важнейших проблем современной медицинской микробиологии (8, 26).

До последнего времени исследование молекулярно-генетических механизмов персистенции не представлялось возможным из-за неадекватности микробиологических методов для исследования персистирующих форм микробов. Появление новых методических подходов, в основе которых лежит амплификация нуклеиновых кислот, позволило с одной стороны создать эффективные способы диагностики, а с другой предложить методы исследования генной активности у микроорганизмов, находящихся в персистирующем состоянии. Благодаря этому в настоящее время формируется представление о том, что патогены при развитии острой и хронической форм инфекции используют различные стратегии взаимодействия с организмом хозяина.

Новый методологический уровень исследований позволил сформулировать актуальное направление медицинской микробиологии, связанное с пониманием природы патогенности. Таким направлением является выяснение молекулярно-генетических механизмов дифференциальной активности генов патогенных микроорганизмов при острой и хронической формах инфекции. В данном направлении представляет интерес исследование механизмов, позволяющих глобально перестраивать работу генома патогенов в процессе персистенции.

Особой группой возбудителей, способных к длительной персистенции, являются микоплазмы, вызывающие хронические, вяло текущие, и порой тяжелые инфекционные заболевания. В лаборатории микоплазм и Л-форм бактерий НИИЭМ им. Н.Ф.Гамалеи РАМН в течение многих лет проводятся исследования по изучению патогенеза микоплазменных инфекций и механизмов, обеспечивающих возможность длительного персистирования микоплазм в организме хозяина (26, 28, 29, 32). При моделировании инфекционного процесса на животных, а также в результате исследования большого клинического материала от больных с респираторными и урогенитальными микоплазмозами, артритом микоплазменной природы получены доказательства персистенции этих прокариот. Тем не менее, молекулярно-генетические механизмы, с помощью которых микоплазмы «уходят» от действия защитных сил макроорганизма и сохраняют способность длительно в нем выживать, до сих пор еще мало изучены.

Имеющиеся данные позволяют обсуждать два возможных молекулярно-генетических механизма, способствующих патогенным микроорганизмам противостоять защитным силам макроорганизма. Это, во-первых, генетически детерминированная изменчивость поверхностных антигенов и, во-вторых, целенаправленное выключение экспрессии генов, кодирующих синтез антигенных детерминант. Можно предположить, что классический механизм антигенного дрейфа, основанный на внутрихромосомной генной конверсии, работает во время активно протекающего инфекционного процесса. По мере образования антител к вариабельным участкам антигена, т.е. на поздних стадиях инфекционного процесса, на первый план может выступать иной механизм, способный выключать экспрессию генов, кодирующих некоторые антигенные детерминанты.

Целью работы явилось исследование механизмов персистенции как функции дифференциальной активности генов патогенных микоплазм.

В связи с намеченной целью были определены следующие задачи:

1. Разработка модельных систем персистенции, включающая получение изогенных штаммов микоплазм, отличающихся степенью вирулентности и вызывающих различные формы инфекционного процесса.

2. Разработка методических подходов для изучения дифференциальной экспрессии генов у микоплазм.

3. Идентифицикация генов М.рпеитотае, дифференциально экспрессирующихся при острой и хронической формах инфекции.

4. Исследование роли продуктов идентифицированных генов в развитии инфекционного процесса.

5. Изучение влияния факторов внешней среды на активность дифференциально экспрессирующихся генов.

Помимо вопросов теоретического характера в работе решаются задачи, имеющие практический выход:

1. Разработка методов диагностики острых и хронических микоплазмозов человека на основе принципов генодиагностики.

2. Оценка эффективности разработанных методов при изучении патогенеза микоплазменных инфекций и для выявления персистирующих микоплазм.

3. Разработка методов выявления антибиотикорезистентных штаммов микоплазм.

Научная новизна работы.

• впервые разработана модельная система для изучения дифференциальной активности генов у патогенных микоплазм, включающая изогенные штаммы М.рпеитотае, вызывающие различные формы инфекционного процесса, и метод «молекулярного портрета» как адекватный подход для изучения генной активности у персистирующих микоплазм;

• идентифицированы гены M.pneumoniae, дифференциально экспрессирующиеся при острых и хронических формах инфекции;

• впервые показано, что при аттенуации у M.pneumoniae происходит выключение экспрессии многих генов, активность которых индуцируется в условиях макроорганизма, что приводит к восстановлению вирулентности и развитию острого инфекционного процесса;

• впервые показано, что при персистенции у микоплазм происходит выключение экспрессии генов, кодирующих синтез антигенных детерминант и факторов патогенности, что позволяет микробу длительно сосуществовать с макроорганизмом;

• впервые показано наличие у микоплазм системной регуляции транскрипции генов в ответ на внешние сигналы;

• впервые показано, что контроль генной экспрессии у M.pneumoniae в процессе перехода в персистирующие формы осуществляют ДНК-связывающие белки.

Практическая значимость работы.

• Оформлены Методические рекомендации «Оценка вирулентности штаммов M.pneumonia и моделирование инфекционного процесса в клеточных культурах»(Москва 1998), «Разработка метода фингерпринтирования ДНК по матрице мРНК для изучения механизмов патогенности M.pneumoniae» (Москва, 1998) и «Разработка метода идентификации генов, дифференциально экспрессирующихся у вирулентного и авирулентного штаммов M.pneumoniae» (Москва, 1998).

• Показана диагностическая эффективность разработанных тест-систем на основе ПЦР для выявления патогенных микоплазм (.M.pneumoniae, M.genitalium, М.hominis, U.urealyticum) в клиническом материале, оценки множественности инфекции и контроля элиминации возбудителя в ходе лечения.

• Разработанные тест-системы на основе ПЦР для выявления генов, детерминирующих устойчивость микоплазм и уреаплазм к тетрациклину и эритромицину рекомендованы в качестве экспресс-метода определения устойчивых клинических изолятов непосредственно в клиническом материале без необходимости их культивирования.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение диссертации по теме «Микробиология», Зигангирова, Наиля Ахатовна

выводы

1. Получены изогенные штаммы M.pneumoniae, вызывающие острую и персистентную формы инфекции, при моделировании инфекционного процесса в культуре клеток и у экспериментальных животных.

2. Создана экспериментальная модель, позволяющая получать острую форму респираторного микоплазмоза у экспериментальных животных с индуцированным иммунодефицитным состоянием при заражении аттенуированным штаммом M.pneumoniae за счет восстановления вирулентности возбудителя.

3. Для изучения дифференциальной активности генов патогенных микоплазм при острой и хронической формах инфекции разработан метод "молекулярного портрета". Идентификация дифференциально экспрессирующихся генов, кодирующих вариабельные антигенные детерминанты, компоненты системы транспорта метаболитов и ферменты, участвующие в метилировании ДНК и инвазии микоплазм позволила предложить модель, объясняющую на молекулярном уровне роль продуктов идентифицированных генов в процессе индукции персистирующих форм М. pneumoniae.

4. Выявлено подавление экспрессии значительного числа генов у аттенуированного штамма M.pneumoniae при сравнении с изогенным вирулентным штаммом. Установлено, что при взаимодействии с эукариотическими клетками и в макроорганизме у аттенуированного штамма происходит включение активности многих генов, экспрессирующихся у вирулентного штамма.

5. Показано, что воздействие различных факторов в условиях in vitro (увеличение осмотического давления, тепловой и холодовой шок) вызывают активизацию транскрипции гена, кодирующего синтез основного фактора патогенности M.pneumoniae, - белка адгезии PI. Тем самым, на примере гена PI впервые показано, что регуляция экспрессии генов у M.pneumoniae осуществляется под действием сигналов внешней среды.

6. Впервые показано, что контроль генной экспрессии у M.pneumoniae в процессе перехода в персистирующее состояние осуществляют ДНК-связывающие белки, аналогичные гистоноподобным белкам бактерий.

7. Разработаны амплификационные тест-системы, позволяющие выявлять патогенные для человека микоплазмы, M.pneumoniae, М. hominis, M.genitalium и U.urealyticum, оценивать множественность инфекции, осуществлять контроль элиминации возбудителя в процессе лечения и определять генотипы штаммов для клинических и эпидемиологических целей.

8. Показано преимущество разработанных амплификационных тест-систем для диагностики хронических и латентных форм микоплазмозов по сравнению с микробиологическим и серологическими методами в опытах по воспроизведению экспериментальной персистентной инфекции, вызванной M.fermentans, а также при выявлении микоплазм в клиническом материале.

9. Доказано, что одним из генов, определяющим устойчивость клинических изолятов LJ. urealyticum к эритромицину, является ген егтВ . Определение его нуклеотидной последовательности позволило разработать амплификационную тест-систему для выявления устойчивых к эритромицину уреаплазм в клиническом материале.

10. Разработана тест-система на основе ПНР для выявления в клинических образцах генов tet М и tet О, детерминирующих, устойчивость микоплазм и уреаплазм к тетрациклину, с помощью которой выявлено широкое распространение устойчивых к тетрациклину клинических изолятов

M.hominis (22%) и U. urealyticum (27%) при хронических урогениталъных микоплазмозах.

Список литературы диссертационного исследования доктор биологических наук Зигангирова, Наиля Ахатовна, 2001 год

1. Аксенов М.Ю., Гинцбург A.JI. Диагностика инфекционных заболеваний с помощью метода полимеразной цепной реакции // Молекул, генетика.-1993.- № 4.- С.3-9.

2. Александрова Н.М.,. Бевова.М.Р., Говорун В.М, Трансформация Mycoplasma hominis плазмидой рАМ120 с помощью электропорации // Генетика.- 2000.- т.36.- №3.- С.309-313.

3. Бароян О.В., Васильева В.И., Каган Г.Я., Прозоровский С.В. Эпидемиология M.pneumoniae инфекции в Советском Союзе // Вестник АМН СССР.- 1969,- № 5- С. 14-18.

4. Боринская С.А., Янковский Н.К. Структура прокариотических геномов. // Молекулярная биология 1999.- т.ЗЗ.- №6.- С.941-957.

5. Борхсениус С.Н., Чернова О.А. «Микоплазмы : молекулярная и клеточная биология, патогенность, диагностика». // Л.- Наука.- 1989.- 156 с.

6. Бухарин О.В. Биомедицинские аспекты персистенции бактерий. // ЖМЭИ.- 1994.-Приложение.-С.4-13.

7. Бухарин О.В. Персистенция патогенных бактерий. // 1999.- Москва.-Медицина.- 366 с.

8. Бухарин О.В. Персистенция патогенных бактерий: теория и практика // ЖМЭИ.- 2000.- № 4,- С.4-7.

9. Васильева В.И. Этиология и эпидемиология острых респираторных заболеваний. // Дисс.докт.- 1972

10. Вонский М.С., Аствацатурянц Г.В., Борхсениус С.Н. Экспрессия белков теплового шока у микоплазм. // Доклады Академии Наук.- 1993.- т.331.- № 1.-С. 112-115.

11. Н.Вульфович Ю.В.// Артритогенность микоплазм и микоплазменные артриты человека. // Вестн.АМНССР.-1991.- № 6.- С.6-9.

12. Гельфанд М.С. Компьютерный анализ последовательностей ДНК. // Молекул. Биология.- 1998.- т. 32.- № 1.- С. 103-120.

13. Гершанович В.Н. ФТС и ее роль в физиологии грамотрицательных бактерий. // Молекул.генетика,- 1998.- № 4,- С. 12-18.

14. Гершанович В.Н. Транспортная система углеводов у E.coli и регуляция метаболизма. // Вестн.РАМН.- 2000.- №3,- С.40-53

15. Головлев Е. J1. Метастабильность фенотипа у бактерий. // Микробиология.- 1998.- т. 67.- С. 149-155.

16. Каган Г.Я. M.pneumoniae и респираторные микоплазмозы. // Микоплазмы в патологии человека.- Москва.- 1981.- С.3-24.

17. Кондратьева Т.К. Приобретенные иммунодефициты. Новые принципы моделирования и механизмы формирования. // Дисс.докт,- Москва.- 1993.

18. Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбрук Дж. Методы генетической инженерии: молекулярное клонирование. // Пер. с англ.- Москва.- Мир.- 1984.24.0бгольц А.А. Механизмы персистирования бактерий. // ЖМЭИ.- 1992.- № 4,- С.70-72.

19. Прозоровский С.В. Проблема патогенности JI-форм бактерий и микоплазм. // Докт.дисс,- 1970.- Москва.

20. Прозоровский С.В., Вульфович Ю.В., Раковская И.В., Горина Л.Г. Некоторые механизмы персистенции in vivo микоплазм и Л-форм бактерий. // ЖМЭИ.- 1994.- Приложение.- С.14-18.

21. Прозоровский С.В., Покровский В.И., Васильева В.И. Микоплазма пневмонии инфекция. // М.- Медицина. -1978.- 312 с. •

22. Прозоровский С.В., Пронин А.Р., Санин А.Б. Иммунологические механизмы персистенции микоплазм. // Вестн .АМН СССР.- 1985.- №10.-С.43-51.

23. Прозоровский С.В., Раковская И.В., Вульфович Ю.В. Медицинская микоплазмология. //М.- Медицина.- 1995.- 288 с.

24. Прозоровский С.В. Проблемы инфектологии. //М.- 1991.- 399с

25. Раковская И.В., Горина Л.Г. Колейкемогенный эффект отдельных компонентов клетки Mycoplasma arthritidis. // Микоплазмы и микоплазмозы.- Москва.- 1985.- С. 100-105.

26. Раковская И.В., Горина Л.Г., Гончарова С.А. и др. Механизмы персистенции урогенитальных микоплазм и методы их выявления. // ЖМЭИ.- 2000.- № 4.- С.47-52.

27. Салахетдинова О.Я., Пшеничнов М.Р., Нестерова Л.Ю. с соавт. Топологические изменения ДНК как отражение адаптации E.coli к окислительному стрессу в условиях голодания по глюкозе и при переходе к росту. // Микробилогия.- 2000.- т.69.- № 1.- С.70-74.

28. Терновская JI.H. Стафилококковое носительство : Метод.рекомендации. // Свердловск.- 1983.- 15 с.

29. Тимаков В.Д., Каган Г.Я. Семейство Mycoplasmataceae и L-формы бактерий. // Москва.- 1973. -392 с.

30. Хесин Р.Б. Непостоянство генома. // Москва.- Наука.- 1985.

31. Чернова O.A. Биохимические аспекты патогенеза при персистенции микоплазм у человека. Автореферат докт. Диссертации. // Москва.- 1997

32. Abele-Horn М., Busch U., Nitschko Н. et al. Molecular approaches to diagnosis of pulmonary diseases due to Mycoplasma pneumoniae. // J.Clin.Microbiol.-1998.- v.36.- P.548-551.

33. Andrews C.E., Hopewell P., Burrell R.E., Olson N.O., Chick E.W. An epidemic of respiratory infection due to mycoplasma pneumoniae in a civilian population. //Amer.Rev.Resp.Dis.- 1967.- v.95.- P.972-979.

34. Arthur M., Molinas C., Courvalin P. Detection of erythromycin resistance by the polymerase chain reaction using primers in conserved regions of erm rRNA methylase genes. //Antim.Agents Chemoth.- 1990.- v.34.- P. 2024-2026.

35. Atllung Т., Ingmer H. H-NS : a modulator of environmentally regulated gene expression. // Molecular Microbiology.- 1997.- v.l. 24- P.7-17.

36. Aviv M., Giladi H., Oppenheim A.B., Glaser G. Analysis of the shut-off of ribosomal RNA promoters in Escherichia coli upon entering the stationary phase of growth. // FEMS Microbiol.Lett.- 1996.- v. 140.- P.71-76.

37. Baseman J.B. Tully J.G. Mycoplasmas : sophisticated, reemerging, and burdened by their notoriety. // Emerg.Infect.Dis.- 1997.- v.3.- P.21-32.

38. Baseman, J. B., M. Lange, N. L. Criscimagna, J. A. Giron, and C. A. Thomas. Interplay between mycoplasmas and host target cells. // Microb. Pathog.- 1995.-v.19.- P.105-116

39. Baseman, J. B., S. P. Reddy, and S. F. Dallo. 1996. Interplay between mycoplasma surface proteins, airway cells, and the protean manifestations of mycoplasma-mediated human infections. // Am. J. Respir. Crit. Care Med.-V.154.- S137-S144.

40. Bhugra, B., and K. Dybvig. 1992. High-frequency rearrangements in the chromosome of Mycoplasma pulmonis correlate with phenotypic switching. // Mol. Microbiol.- V.6.- PI 149-1154.

41. Bhugra, B., L. L. Voelker, N. Zou, H. Yu, and K. Dybvig. 1995. Mechanism of antigenic variation in Mycoplasma pulmonis: interwoven, site-specific DNA inversions. //Mol. Microbiol.- v. 18.- P.703-714.

42. Biberfeld, G. Infection sequelae and autoimmune reactions in Mycoplasma pneumoniae infection// 1985-p. 293-311. In S. Razin, and M. F. Barile (ed.), The mycoplasmas, vol. IV. Mycoplasma pathogenicity. Academic Press, Inc., Orlando, Fla.

43. Boesen, T., Emmersen, J., Jensen, L.T. et al. The Mycoplasma hominis vaa gene displays a mosaic gene structure. // Mol.Microbiol.- 1998.- v.29.- P.97-110.

44. Brunner H. Models of mycoplasma respiratory and genital tract infections. // Wien Klin Wochenschr.- 1997.- v.109.- P.569-73.

45. Cassell, G. H., W. A. J. Clyde, and J. K. Davis. Mycoplasmal respiratory infections //1985, p. 69-106. In S. Razin, and M. F. Barile (ed.), Themycoplasmas, vol. IV. Mycoplasma pathogenicity. Academic Press, Inc., Orlando, Fla.

46. Cedar H. DNA methylation and gene activity. // Cell.- 1988.- v.53.- P.3-4.

47. Chanock R.M., Mufson M., Somerson N. Role of mycoplasma in human respiratory disease. // Amer.Rev.Resp.Dis.- 1963.- 88- 3- part 2.

48. Citti C., Rosengarten R. Mycoplasma genetic variation and its implication for pathogenesis. // Wien Klin Wochenschr.- 1977.- V.109.P. 562-568.

49. Citti C., Wise K.S. Mycoplasma hyorhinis vlp gene transcription: critical role in phase variation and expression of surface lipoproteins. // Mol.Microbiol.-1995.- V.18.- P.649-660.

50. Citti, C., M. F. Kim, and K. S. Wise. 1997. Elongated versions of Vlp surface lipoproteins protect Mycoplasma hyorhinis escape variants from growth-inhibiting host antibodies. // Infect. Immun v.65.- PI773-1785.

51. Clerc M., Renauldin H., Bebear C.M. Biovar distribution of Ureaplasma urealyticum in clinical isolates. //J.Clin.Microbiol.- 1993.- v.31.- P.824-830.

52. Clyde W.A. An experimental model for human Mycoplasma disease. // Yale Journal of Biological Mediciene.- 1968.- v.40.- P.436-443.

53. Cole B.C., Ward J.R., Martin C.H. Hemolysin and peroxide activity of mycoplasma species. // J.Bacteriology.- 1968.- v.95.- P.2022-2030.

54. Colman S.D., Hu P.C., Litaker W. Et al. Prevalence of novel repeated sequences in and around the P1 operon in the genome of Mycoplasma pneumoniae. // Gene.- 1990.- v.87.- P.91-96.

55. Dallo, S. F., A. Chavoya, and J. B. Baseman. 1990. Characterization of the gene for a 30-kilodalton adhesin-related protein of Mycoplasma pneumoniae. // Infect- Immun.- v.58.- P.4163-4165.

56. Dandecar T., Huynen M., Regula j.t. et al. Re-annotating the Mycoplasma pneumoniae genome seguence: adding value, function and reading frames. // Nucleic Acids Res.- 2000.- v.28.- P.3278-88.

57. Deuerling E. Et al. The ftsH gene of Bacillus subtilis is transiently induced after osmotic and temperature upshift. // J. Bacterid.- 1995.- v. 177.- P.4105-4112.

58. Dorman Ch.j., Bhrian N.N., Higgins Ch.F. Supercoiling and environmental regulation of virulence gene expression in Shigella flexnery. // Nature.- 1990.-v.344.- P.789-792.

59. Dorman CJ, Hinton JC, Free A. Domain organization and oligomerization amohg H-NS-like nucleoid-associated proteins in bacteria. // Trends Microbiol.-1999.-v.7.-P. 124-7.

60. Dramsi, S., P. Dehoux, and P. Cossart. 1993. Common features of grampositive bacterial proteins involved in cell recognition. // Mol. Microbiol.- v.9.-P.l 119-1121.

61. Drilca K., Rouviere-Yaniv J. Histone -like proteins of bacteria. // Microbiol.Rev.- 1987.-v.51.-P.301-319.

62. Dybvig, K., and L. L. Voelker. Molecular biology of mycoplasmas. // Annu. Rev. Microbiol.- 1996.- v.50.- P.25-57

63. Eaton M.D., Farham A.E. Cytopathic effect of the atypical pneumonia organism in culture of human tissue. // J.Bacteriology.- 1962.- v.84.- P.1330-1337.

64. Feldner J., Bredt W., Razin S. Role of energy metabolism in Mycoplasma pneumoniae attachment to glass surfaces. // Infec.Immun.- 1981.- v.31.- P. 107113.

65. Fernald G.W. Immunologic aspects of experimental mycoplasma pneumoniae infection. // J.Infect.Dis.- 1969.- 119-3- P.255-266.

66. Fogh J. , Han E., Fogh H. Effects of pleuropneumoniae-like organisms on cultured human cells. // Exp.Cell.Res.- 1965.- v.39.- P.554-566.

67. Fogh J., Fogh H. Chromosomal changes in cell culture induced by mycoplasma infection. //Ann.N.Y.Acad.Sci.- 1973.- v.225.- P.311-319.

68. Foy H.M., Grayston J.T., Kenny G.E., Alexander E.R., McMahan R. Epidemiology of mycoplasma pneumonia infection in femilies. // JAMA.-1996.-v.197,- P.859-866.

69. Free A., Dorman C.J. Coupling of Escherichia coli hns mRNA levels to DNA synthesis by autoregulation: implications for growth phase control. // Mol.Microbiology.- 1995.- v.l 8(1).- P.101-113.

70. Gabridge M.G., Taylor-Robinson D., Davies H.A., Dourmashkin R.R. Interaction of M.pneumoniae with Human Lung Fibroblasts: Characterization of the In Vitro Model. // Infection and Immunity.- 1979.- v.25.- N1.- P.446-454.

71. Goulet, M., R. Dular, J. G. Tully, G. Billowes, and S. Kasatiya. Isolation of Mycoplasma pneumoniae from the human urogenital tract. // J. Clin. Microbiol.- 1995.- v.33.- P.2823-2825Abstract.

72. Hahn T-W., Krebes K.A., Krause D.C. Expression in Mycoplasma pneumoniae of the recombinant gene encoding yhe cytadherenceassociated protein HMW1 and identigication og HMW4 as a product. // Mol.Microbiology.- 1996.-v.19(5).- P.1085-1093.

73. Hayflick L. Tissue cultures and mycoplasmas. // Texas Rep.Biol.Med.Suppl.-1965.-V.23.-P.285-303.

74. Himmelreich R., Hilbert, H., Plagens, H., and Herrmann.R. DNA Sequence of the complete genome of the bacterium M.pneumoniae. // Nucleic Acids Res.-1996.-v.24.- P.628-639.

75. Himmelreich, R., H. Plagens, H. Hilbert, B. Reiner, and R. Herrmann. 1997. Comparative analysis of the genomes of the bacteria Mycoplasma pneumoniae and Mycoplasma genitalium. // Nucleic Acids Res v.25.- P.701-712

76. Howard, C. J., and G. Taylor. Humoral and cell mediated immunity //1985, p. 259-292. In S. Razin, and M. F. Barile (ed.), The mycoplasmas, vol. IV. Mycoplasma pathogenicity. Academic Press, Inc., Orlando, Fla.

77. Hu P.C., Collier A.M., Baseman J.B. Interaction of virulent M.pneumoniae with Hamster Tracheal Organ Cultures. // Infection and Immunity.- 1976.-v.14.-N1.- P.217-224.

78. Hu P.C., Collier A.M., Clyde W.A. Antigenic analysis of Mycoplasma pneumoniae attachment protein using monoclonal antibodies. The VI Intern. Congr. Of IOM. Birmingham.- 1986.- P. 104.

79. Hulton C.S., Seirafi A., Hinton J.C. et al. Histone-like protein Hl, DNA supercoiling, and gene expression in bacteria. // Cell.- 1990.- v.63.- P.631-642.

80. Inamine J.M., Loechel S., Hu P.C. Analysis of the nucleotide sequence of PI operon of Mycoplasma pneumoniae. // Gene.- 1988.- v.73.- P.175-183.

81. Jacobs E. Differences in the induction of adherence inhibiting antibodies during Mycoplasma pneumoniae infections due to variations within the PI adhesins. // Abstracts of IOM Congress.- 1996.- P.362.

82. Kahane I. Pathogenic mycoplasmas cause oxidative stress in the host cells. // The VI Intern. Congr. Of IOM. Birmingham.- 1986.- P.70.

83. Kenri T., Sasaki T., Kano Y. Identification and characterization of HU protein from Mycoplasma gallisepticum. // Bioch. Bioph.Res.Comm.- 1998.- v.249.-P.48-52.

84. Kim, J. J., P. A. Quinn, and M. A. Fortier. Ureaplasma diversum infection in vitro alters prostaglandin E2 and prostaglandin F2a production by bovine endometrial cells without affecting cell viability. // Infect. Immun.- 1994.-v.62.- P.1528-1533.

85. Krause D.C. A concept map of Mycoplasma pneumoniae pathogenesis. // Abstracts of IOM Congress.- 1996,- P. 17.

86. Krause D.C. Mycoplasma pneumoniae cytadherence: organization and assembly of the attachment organelle. // Trends Microbiol.- 1998.- v.6.- P.15-18.

87. Krause, D. C. 1996. Mycoplasma pneumoniae cytadherence: unravelling the tie that binds. // Mol. Microbiol.- v.20.- P.247-253.

88. Krause, D. C., T. Proft, C. T. Hedreyda, H. Hilbert, H. Plagens, and R. Herrmann. 1997. Transposon mutagenesis reinforces the correlation between Mycoplasma pneumoniae cytoskeletal protein HMW2 and cytadherence. // J. Bacterid.- v. 179.- P.2668-2677.

89. Ladefoged S.A. Molecular dissection of Mycoplasma hominis. // APMIS.-2000,- v.108.-no.97.

90. Larin N.M., Saxby N.V., Buggey D. Quantitative aspects of mycoplasma pneumoniae-cell relationships in cultures of lung diploid fibroblasts. // J.Hyg.-1969.- v.62.- P.199-219

91. Layh-Schmitt, Herrman R. Spatial arrangement of gene products of the PI operon in the membrane of Mycoplasma pneumoniae. // Infect.Immun.- 1994.-v.62.- P.974-979.

92. Ligon, J. V., and G. E. Kenny. 1991. Virulence of ureaplasmal urease for mice. //Infect. Immun.- v.59.- P. 1170-1171.

93. Lipman D. Basic local alignment search tool. // J. Mol.Biol.- 1990.- v.215.-P.403-410.

94. Lipman R.P., Clyde W.A. The interrelationship of virulence, cytadsorption and peroxide formation in mycoplasma pneumoniae. // Proc.Soc.Exp.Biol.Med.- 1969.- v. 131.- P. 1163-1167.

95. Manna D., Gowrishankar J. Evidence for involvement of proteins HU and RpoS in transcription of the osmoresponsive proU operon in E.coli. // J.Bacteriol.- 1994.- v. 176.- P.5378-5384.

96. Mathieu-Daude F., Cheng R., Welsh J. Et al. Screening of differentially amplified cDNA products from RNA arbitrarily primed PCR fingerprints using single strand conformation polymorphism (SSCP) gels. // Nuc.Acids Res.-1996.-v.24.- P.1504-1507.

97. Mushegian, A., and E. V. Koonin. A minimal gene set for cellular life derived by comparison of complete bacterial genomes. // Proc. Natl. Acad. Sei. USA.- 1996.- v.93.- P.10268-10273

98. Neyrolles O. Et al. Phase variation of the Mycoplasma penetrans main surface lipoprotein increase antigenic diversity. // Infec. Immun.- 1999.- v.67.-P.1569-1578.

99. Nicholson B, Low D. DNA methylation-dependent regulation of pef expression in Salmonella typhimirium. // Mol .Microbiol.- 2000.- v.35.- P.728-42.

100. Nishimura, M., T. Saida, S. Kuroki, T. Kawabata, H. Obayashi, K. Saida, and T. Uchiyama. Post infections encephalitis with anti-galactocerebroside antibody subsequent to Mycoplasma pneumoniae infection. // J. Neurol. Sci.-1996.-V.140.-P.91-95.

101. Popham P.L., Krause D.C. Transcription analysis of the hmw operon of Mycoplasma pneumoniae. //Abstracts of IOM Congress.- 1996.- P.413.

102. Povlsen K., Jensen J.S., Lind I. Detection of Ureaplasma urealyticum by PCR and biovar determination by liquid hybridization. // J.Clin.Microbiol.-1998.-V.36.-P.3211-3216.

103. Rainey, P. B., E. R. Moxon, and I. P. Thompson. Intraclonal polymorphism in bacteria. // Adv. Microb. Ecol.- 1993.- v.13.-P.263-300.

104. Razin S., Jacobs E. Mycoplasma adhesion. // J.of General Microbiology.-1992.- v. 138,- P.407-422.

105. Razin S., Yogev D., Naot Y. Molecular biology and pathogenicity of mycoplasmas. // Microbiol. Mol. Biol. Rev.- 1998.- v.62.- P.1094-1156.

106. Razin, S. Mycoplasma taxonomy and ecology //1992, p. 3-22. In J. Maniloff, R. N. McElhaney, L. R. Finch, and J. B. Baseman (ed.), Mycoplasmas: molecular biology and pathogenesis. American Society for Microbiology, Washington, D.C.

107. Razin, S. Peculiar properties of mycoplasmas: the smallest self-replicating prokaryotes. // FEMS Microbiol. Lett.- 1992,- v. 100.- P.423-432.

108. Razin, S. DNA probes and PCR in diagnosis of mycoplasma infections. // Mol. Cell. Probes.- 1994.- 8,- P.497-511.

109. Razin, S. Molecular properties of mollicutes: a synopsis //1995, p. 1-25. In S. Razin, and J. G. Tully (ed.), Molecular and diagnostic procedures in mycoplasmology, vol. I. Molecular characterization. Academic Press, Inc., San Diego, Calif.

110. Razin, S., and E. A. Freundt. The Mollicutes, Mycoplasmatales, and Mycoplasmatacae //1984, p. 740-742. In N. R. Krieg, .and J. G. Holt (ed.), Bergey's manual of systematic bacteriology, vol. 1. The Williams & Wilkins, Baltimore, Md.

111. Razin, S., and E. Jacobs. Mycoplasma adhesion. // J. Gen. Microbiol.-1992.-V.138.-P.407-422.

112. Razin, S., and J. G. Tully (ed.). Molecular and diagnostic procedures in mycoplasmology, 1995,vol. I. Molecular characterization. Academic Press, Inc., San Diego, Calif.

113. Razin, S., and M. F. Barile (ed.). The mycoplasmas //1985, vol. 4. Mycoplasma pathogenicity. Academic Press, Inc., Orlando, Fla.

114. Razin, S., B. J. Cosenza, and M. E. Tourtellotte. Variations in mycoplasma morphology induced by long-chain fatty acids. // J. Gen. Microbiol.- 1966.-v.42.-P. 139-145.

115. Roberts M.C. Epidemiology of tetracycline resistance determinants. // Trends in Microbiology.- 1994.- v.2.- P.353-357.

116. Roberts M.C. Genetic mobility and distribution of tetracycline resistance determinants. // Simposium on Antibiotic Resistance.- London.-1996. Jul. 16-18.-P.206.

117. Roberts M.C. Characterization of the Tet M determinants in urogenital and respiratory bacteria. // Antimicrob.Agents Chemoth.- 1990.- P.476-478.

118. Roberts M.C., Pang Y., Riley D.E. et al. Detection of Tet M and TetO tetracycline resistance genes by polymerase chain rection. // Molec.Cell.Probes.- 1993.- v.7.- P.387-393.

119. Robertson, B. D., and T. F. Meyer. Genetic variation in pathogenic bacteria. // Trends Genet.- 1992.- v.8.- P.422-427

120. Rosengarten, R., and D. Yogev. Variant colony surface antigenic phenotypes within mycoplasma strain populations: implications for species identification and strain standardization. // J. Clin. Microbiol.- 1996.- v.34.-P.149-158

121. Rosengarten, R., and K. Wise. Phenotypic switching in mycoplasmas: phase variation of diverse surface lipoproteins. // Science.- 1990.- v247.- P.315-318

122. Rosengarten, R., and K. Wise. The VIp system of Mycoplasma hyorhinis: combinatorial expression of distinct size variant lipoproteins generating high-frequency surface antigenic variation. // J. Bacteriol.- 1991.- v. 173.- P.4782-4793.

123. Ruland K., Wenzel R., Herrmann R. Analysis of three different repeated DNA elements present in the PI operon of Mycoplasma pneumoniae. // Nucl.Asids Res.- 1990.-v. 18.-P.6311-6317.

124. Ruland, K., R. Himmelreich, and R. Herrmann. Sequence divergence in the ORF6 gene of Mycoplasma pneumoniae. II J. Bacteriol.- 1994.- v. 176.- P.5202-5209

125. Sasaki, Y., R. A. Cunha, M. L. Gougeon, L. Montagnier, and A. Blanchard. M. penetrans cytopathic effects: an in vitro study using human peripheral blood mononuclear cells. // IOM Lett.- 1996.- v.4.- P.6-7.

126. Schwarz S., Hess D., Jost J-P. The methylated DNA binding protein-2-Hl consists of histone HI subtypes which are truncated at the C-terminus. // Nucl.Acids Res.- 1997.- v.25.- P.5052-5056.

127. Shen W.H., Hohn B. DMSO improves PCR amplification of DNA with comlex secondary structure. // TIG.- 1992.- v.8.- P.227.

128. Simon M., Palmetshofer A., Schwarz T. From RNA to sequenced clones within three days: a complete protocol. // BioTechniques.- 1994.- v. 16.- P.633-637.

129. Sobeslavsky O., Chanock R.M. Peroxide formation by mycoplasmas which infect man. // Proc.Soc.Exptl.Biol.Med.- 1968.- v. 129.- 2531-2535.

130. Sobeslavsky O., Prescott B., Chanock R.M. Adsorption of mycoplasma pneumoniae to neuraminic acid receptors of various cells and possible role in virulence. // J.Bact.- 1968,- 96-3-P.695-705.

131. Stanbridge E. Mycoplasmas and cell cultures. // Dfct.Rev.- 1971.- 35-.2. P. 206-227.

132. Stewart, S. D., H. L. Watson, and G. H. Cassell. Investigation of the clastogenic potential of Ureaplasma urealyticum on human leukocytes. // IOM. Lett.- 1994.- v.3.- P.662-663.

133. Su C.J., Tryon V.V., Baseman J.B. Cloning and sequence analysis of cytadhesin PI gene from M.pneumoniae. // Infection and Immunity.- 1987.-v.55.- N12.- P.3023-3029.

134. Su, C. J., A. Chavoya, and J. B. Baseman. Spontaneous mutation results in loss of the cytadhesin (PI) of Mycoplasma pneumoniae. // Infect. Immun.-1989.- v.57.- P.3237-3239.

135. Su, C. J., S. F. Dallo, A. Chavoya, and J. B. Baseman. Possible origin of sequence divergence in the PI adhesin gene of Mycoplasma pneumoniae. II Infect. Immun.- 1993.- v.61.- P.816-822

136. Su, C. J., S. F. Dallo, J. B. Baseman. Molecular distinction among clinical isolates of Mycoplasma pneumoniae . // J.Clin.Microbiol.- 1990.- v.28.-P.1538-1540.

137. Swanson, J., R. J. Belland, and S. A. Hill. Neisserial surface variation: how and why? // Curr. Opin. Genet. Dev.- 1992,- v.2.- P.805-811.

138. Taylor-Robinson D. The history and role of Mycoplasma genitalium in sexually transmitted diseases. // Genitourin Med 1995.- v.71.- P. 1-8.

139. Taylor-Robinson D. Infections due to species of Mycoplasma and Ureaplasma: an update. // Clin.Infec.Dis.- 1996.- v.23.- P.671-684.

140. Tsai, S., D. J. Wear, J. W.-K. Shih, and S.-C. Lo. Mycoplasma and oncogenesis: persistent infection and multistage malignant transformation.7/ Proc. Natl. Acad. Sei. USA.- 1995.- v.92.- P. 10197-10201

141. Tully, J. G., and S. Razin (ed.). Molecular and diagnostic procedures in mycoplasmology //1996, vol. II. Diagnostic procedures. Academic Press, Inc., San Diego, Calif. 460.

142. Ussery D.W. et al. The chromatin-associated protein H-NS. // Biochimie.-1994,- v.76.- P.968-980.

143. Vu A.C., Kenny G.E., Foy H.M. The protein antigens of isolates of Mycoplasma pneumoniae. // The VI Intern. Congr. Of IOM. Birmingham.-1986,-P.- 178.

144. Waris M., Toikka P., Saarinen T., et al. Diagnosis of Mycoplasma pneumoniae in children. // J.Clin. Microbiol.- 1998 v.36.- P.3155-3159.

145. Welsh J., Chada K., Dalai S.S., Cheng R. Arbitrarily primed PCR fingerprinting of RNA. // Nucleic Acids Research.- 1992,- v.20.- N19,- P.4965-4970.

146. Widjojoatmodjo M.N., Fluit A.C., Verhoef J. Rapid identification of bacteria by PCR-single-strand conformation polymorphism. // J.Clin.Microb.- 1994.-v.32.- P.3002-3007.

147. Wise, K. S. 1993. Adaptive surface variation in mycoplasmas. // Trends Microbiol.-V.1.-P.59-63.

148. Woese, C. R. Bacterial evolution. Microbiol. Rev. // 1987.- v.51.- P.221-271

149. Wong K.K., McClelland M. Stress-inducible gene of Salmonella typhimurium identified by arbitrarily primed PSR of RNA. // Natl.Acad. Sci.-1994.- v.91.- P.639-643.

150. Zhang, Q., and K. S. Wise. Molecular basis of size and antigenic variation of a Mycoplasma hominis adhesin encoded by divergent vaa genes. // Infect. Immun.- 1996,- v.64.- P.2737-2744.

151. Zhang, Q., and K. S. Wise. Localized reversible frameshift mutation in an adhesin gene confers a phase-variable adherence phenotype in mycoplasma. // Mol. Microbiol.- 1997,- v25.- P.859-869