Особенности некоторых биологических свойств штаммов Escherichia coli, выделенных от онкологических больных с инфекционными осложнениями тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.07, кандидат биологических наук Билалов, Фаниль Салимович

• Билалов, Фаниль Салимович
• кандидат биологических наук
• 2007

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Билалов, Фаниль Салимович

ВВЕДЕНИЕ.4

1.0 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.10

1.1. Этиологическая роль штаммов Escherichia coli при инфекционных осложнениях у онкологических больных.10

1.2. Факторы патогенности бактерий Escherichia coli.14

2.0 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.29

3.0 СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

3.1. Частота встречаемости штаммов E.coli у онкологических больных с инфекционными ослоэюнениями.41

3.2. Серологический пейзаж штаммов E.coli, выделенных от онкологических больных с инфекционными осложнениями.44

4.0 Факторы патогенности штаммов E.coli, выделенных от онкологических больных с инфекционными осложнениями.45

4.1. Адгезивные свойства.45

4.2. а-гемолитическая активность.47

4.3. Тиол-зависимая гемолитическая активность.49

4.4. Лецитиназная активность.50

5.0 Персистирующие свойства штаммов E.coli, выделенных от онкологических больных с инфекционными осложнениями.52

5.1. Антилизоцимная активность.52

5.2. «Антиинтерфероновая» активность.53

5.3. Антикомплементарная активность.55

6.0 Тестирование факторов вирулентности штаммов E.coli, выделях. б. 1. Легочная модель

6.2. Отек лапки мышей.58

6.3. Лигированная петля тонкого кишечника кролика. 59

6.4. Кожно-некротическая проба.61

6.5. Протистоцидный тест.65

7.0 7.7. Устойчивость штаммов E.coli, выделенных от онкологических больных с инфекционными осложнениями к антибактериальным препаратам.66

7.2. Фагочувствителъность штаммов E.coli, выделенных от онкологических больных с инфекционными осложнениями.70

8.0 Генетические детерминанты некоторых факторов патоген-ности штаммов E.coli, выделенных от онкологических больных с инфекционными осложнениями.72

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Особенности некоторых биологических свойств штаммов Escherichia coli, выделенных от онкологических больных с инфекционными осложнениями»

Актуальность проблемы.

Одной из актуальных проблем современной онкологии является разработка эффективных методов профилактики и лечения инфекционных осложнений [6,46,47,49], поскольку это связано повышением риска присоединения инфекционно-воспалительных осложнений бактериальной природы у онкологических больных. В основе механизмов развития инфекционных осложнений, по мнению многих исследователей, лежит угнетение иммунной системы, повреждение естественных защитных барьеров организма, наличие об-структивных изменений, интоксикации и обширных оперативных вмешательств, что часто сопровождается массивной кровопотерей [50,114,180].

В спектре осложнений, наблюдаемых у онкологических больных, бактериальные инфекции встречаются примерно в 50% случаев и часто носят хронический рецидивирующий характер и являются причиной ранней гибели больных [15,68,180].

В последние годы произошли значительные изменения в спектре возбудителей, вызывающих инфекционные осложнения у онкологических больных. По данным литературы известно, что в 60-70-х годах прошлого столетия возникновение инфекционных осложнений у онкологических больных было обусловлено грамположительными бактериями, в частности стафилококками и стрептококками, а в настоящее время частой причиной инфекционных осложнений являются условно-патогенные грамотрицательные энтеробактерии (кишечные палочки, синегнойные палочки, протеи, цитробактеры, энтеро-бактеры, клебсиеллы) [6,43,69,89,180]. Особый интерес в изучении причин инфекционных осложнений у онкологических больных заслуживает Escherichia coli, которая часто, является причиной инфекций кишечного тракта, мочевыделительной и дыхательной систем, JIOP-органов, кожи и мягких тканей [43,117,121,143,180,186].

По мнению некоторых исследователей E.coli, выделенные при инфекционных процессах у онкологических больных несут комплекс генетически детерминированных кластеров (pap, hly, Ith, stx, eae, ehxA, astA, eaf plasmid, bfp), локализованных в структурных элементах хромосомной природы и коньюга-• тивных плазмидах, относятся к патоварам и являются этиологически значимыми [61,147,155,207]. В этой связи, возникает настоятельная необходимость изучения этиологической роли условно-патогенных энтеробактерий, в частности E.coli при инфекционных осложнениях у онкологических больных.

Чувствительность к развитию инфекционного процесса связана не только с изменением иммунного статуса организма, но и с изменением биологических свойств бактериальной флоры [6,221]. Поэтому для эффективного лечения больных с осложнениями бактериальной природы помимо поиска новых эффективных антибактериальных препаратов возникает необходимость изучить биологические свойства выделенных бактерий, которые позволяют в каждом конкретном случае определить этиологическую значимость возбудителя [21,33,172]. Особенно большое внимание заслуживают клоны микроорганизмов с множественной лекарственной резистентностью, которые одновременно обладают комплексом факторов патогенности. Комплексное изучение генетических детерминант и фенотипических признаков у E.coli будут способствовать более детальному выяснению этиологической значимости возбудителей инфекционных осложнений у онкологических больных.

Исходя из выше изложенного, возникает настоятельная необходимость проведения комплексных исследований, направленных на профилактику и лечение инфекционных осложнений у онкологических больных, на основе изучения некоторых биологических свойств условно-патогенных энтеробактерий, в частности E.coli.

Цель исследования.

Изучение некоторых биологических свойств штаммов E.coli, выделенных у онкологических больных с инфекционными осложнениями.

Задачи исследования.

1. Изучить частоту встречаемости штаммов E.coli при инфекционных осложнениях у онкологических и неонкологических больных.

2. Дать сравнительную характеристику некоторых биологических свойств штаммов E.coli, выделенных от онкологических и неонкологических больных с инфекционными осложнениями.

3. Определить спектр лекарственной устойчивости, выделенных штаммов E.coli и провести поиск перспективных антибактериальных биологических препаратов, на примере поливалентных фагов.

4. Изучить природу генетических детерминант, контролирующих адгезивную, гемолитическую, LT-энтеротоксигенную активности E.coli, выделенных от онкологических и неонкологических больных с инфекционными осложнениями.

Научная новизна.

При изучении частоты встречаемости E.coli, у онкологических и неонкологических больных с инфекционными осложнениями выявлено превалирование E.coli этиологически значимых штаммов у онкологических больных.

Установлено, что штаммы бактерий E.coli, выделенные от онкологических больных с инфекционными осложнениями обладают широким спектром лекарственной устойчивости.

Бактерии E.coli, выделенные от онкологических больных с инфекционными осложнениями, чаще обладали персистирующими (АЛА, АИА, АКА), адгезивной, LT- энтеротоксигенной, а-, тиол-зависимой гемолитической, лецитиназной активностями, что доказывает их этиологическую значимость.

Гены JlT-энтеротоксигенной, а-гемолитической активностей у E.coli входят в состав «островов патогенности», локализованных в хромосоме и плазмидах. Детекция фрагментов генов факторов патогенности показала превалирование их частоты встречаемости у штаммов E.coli, выделенных от онкологических больных с инфекционными осложнениями, чем у неонкологических больных.

Штаммы Escherichia coli №280 и Escherichia coli №281, выделенные от онкологических больных с инфекционными осложнениями в ассоциации с Serratia marcescens и Staphylococcus aureus, обладающие комплексом факторов патогенности были депонированы в ФГУН ГНИИСК им. JI.A. Тара-севича (соответственно положительная справка №01 - 07/472 от 13.12.2005г. и №01 - 07/473 от 13.12.2005г.) и запатентованы в ФГУ ФИПС (патенты №2293764 и №2293765 от 26.01.2006).

Практическая и теоретическая значимость.

Отработаны оптимальные подходы выяснения этиологической значимости бактерий E.coli, выделенных от онкологических больных с инфекционными осложнениями.

Выяснение маркеров вирулентности у штаммов E.coli позволяют целенаправленно провести профилактику и лечение инфекционных осложнений у онкологических больных.

В качестве антиэшерихиозного препарата рекомендован «Поливалентный пиобактериофаг жидкий» производства ФГУП НПО «Микроген «Иммунопрепарат» г. Уфа.

Результаты исследований внедрены в практические и лекционные курсы кафедры микробиологии, вирусологии иммунологии ГОУ ВПО «Башкирского государственного медицинского университета» Росздрава.

Депонированные в ФГУН ГНИИСК имени J1.A. Тарасевича штаммы E.coli рекомендуются в качестве эталонных культур и суперпродуцентов термолабильного ЛТ — энтеротоксина при получении биологических препаратов.

Положения, выносимые на защиту:

1. Штаммы бактерий E.coli чаще выделяются у онкологических больных при инфекционных осложнениях, чем у неонкологических больных, и обладают более выраженными адгезивной, антилизоцимной, антиинтерфероновой, антикомплементарной, JIT - энтеротоксигенной, а-, тиол-зависимыми гемолитическими активностями и вирулентностью.

2. У штаммов E.coli, выделенных от онкологических больных генетическими детерминантами вирулентности являются структурные элементы хромосомной природы и конъюгативная плазмида массой 60 МДа.

3. «Поливалентный пиобактериофаг очищенный жидкий», выпускаемый ФГУП «НПО «Микроген» филиал «Иммунопрепарат» г. Уфа является перспективным антиэшерихиозным биологическим препаратом.

Апробация работы.

Диссертация обсуждена на совместном заседании кафедр микробиологии, общей гигиены, биологии и медицинской генетики, инфекционных болезней с курсом эпидемиологии, ЦНИЛ БГМУ, ведущих научных сотрудников ФГУП «НПО «Микроген» филиал «Иммунопрепарат», Института биохимии и генетики УНЦ РАН и правления Башкирского отделения Всероссийского общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов, Уфа (2006). Материалы диссертации доложены на Всероссийской научной конференции с международным участием «Медицинские иммунобиологические препараты в XXI веке: разработка производство и применение» посвященная 100-летию «Иммунопрепарат», г. Уфа (2005); на 70-й юбилейной итоговой Республиканской научной конференции студентов и молодых ученых с международным участием «Вопросы теоретической и практической медицины» Ч. 1. Уфа (2005); на VI Общероссийской научной конференции с международным участием «Успехи современного естествознания», «Дагомыс» г. Сочи (2005); на X международной научной конференции «Здоровье семьи-ХХ1 век», Бангкокк-Паттайя, Тайланд (2006).

Работа выполнена на кафедре микробиологии, вирусологии и иммунологии ГОУ ВПО «Башкирского государственного медицинского университета» Росздрава (ректор, член-корр. РАМН, д.м.н. Тимербулатов В.М.), и в Институте биохимии и генетики Уфимского научного центра РАН (директор, профессор, д.б.н., Вахитов В.А.).

Публикации.

По материалам диссертации опубликовано 11 научных работ.

Объем и структура диссертации.

Диссертация изложена на 127 страницах, состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов, 6 глав собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы, содержащего 221 источника, из них 101 отечественных и 120 иностранных авторов и приложения. Работа иллюстрирована 17 рисунками, 11 таблицами.

Заключение диссертации по теме «Микробиология», Билалов, Фаниль Салимович

выводы.

1. Штаммы E.coli чаще выделяются от онкологических больных с инфекционными осложнениями, чем от неонкологических больных. При этом культуры, выделенные от онкологических больных преимущественно принадлежали к Об, 08, 080, 025 серогруппам, тогда как штаммы изолированные от неонкологических больных - к 055, 085, 025, 0128ав, что необходимо учитывать их роль при оценке этиологической и эпидемиологической значимости.

2. Штаммы E.coli, изолированные при инфекционных осложнениях у онкологических по сравнению с неонкологическими больными, чаще обладают выраженной адгезивной, JIT - энтеротоксигенной, а- и тиол-зависимой-гемолитической, антилизоцимной, «антиинтерфероновой», антикомплементарной активностями и вирулентностью, что характеризует их более выраженную этиологическую значимость.

3. Штаммы E.coli, выделенные от онкологических больных чаще обладали множественной лекарственной устойчивостью и чувствительностью к «Поливалентному пиобактериофагу жидкому» производства ФГУП НПО «Микроген» филиал «Иммунопрепарат» г. Уфа, что указывает на возможное его использования в качестве антиэшерихиозного препарата.

4. У штаммов E.coli, выделенных от онкологических и неонкологических больных с инфекционными осложнениями генетическими детерминантами адгезивности являются структурные элементы хромосомной природы, продукции LT-энтеротоксина - плазмида массой 60 МД, а-гемолизина -возможно хромосома и плазмида массой 120 МД.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ.

1. Полученные результаты позволяют в каждом конкретном случае оценить этиологическую значимость штаммов E.coli, выделенных от онкологических больных с инфекционными осложнениями.

2. Материалы исследований, освещающие некоторые биологические свойства штаммов E.coli и их генетический контроль, внедрены в лекционные курсы на кафедре микробиологии, вирусологии иммунологии ГОУ ВПО «Башкирского государственного медицинского университета» Росздрава.

3. В виду широко распространенной лекарственной устойчивостью среди штаммов E.coli, «Поливалентный пиобактериофаг очищенный жидкий» (пр-во ФГУП НПО «Микроген» филиал «Иммунопрепарат», г. Уфа) рекомендуется для лечения инфекционных осложнений у онкологических больных.

4. Штаммы E.coli №280 и №281 депонированные в ФГУН ГНИИСК имени JI.A. Тарасевича могут быть использованы в качестве эталонных культур при идентификации выделенных штаммов от больных и в биотехнологии в качестве суперпродуцентов термолабильного энтеротоксина.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

На фоне успешного лечения многих онкологических заболеваний в последние годы повсеместно отмечается увеличение удельного веса инфекционных осложнений и особенно возрастание роли последних в смерти больных. Выраженный клинический полиморфизм, связанный со вторичным иммунодефицитом у онкологических больных, определяет большую значимость изучения биологических свойств возбудителей инфекционных осложнений [6,43,46,47,49,161].

Бактериальный сепсис и септический шок являются, безусловно, основной причиной летальности среди онкологических больных. Инфекционные осложнения значительно чаще развиваются у онкологических больных на III-IV стадиях заболевания. Причём, особую роль в этиологической структуре занимают условно-патогенным энтеробактерии, к которым относится и E.coli [70,80,216,220].

Этиологическая роль кишечной палочки в инициации ряда инфекцион-но - воспалительных заболеваний у человека показана многими исследователями [43,49,155]. Появление E.coli в вышележащих отделах желудочно-кишечного тракта, в крови, в мочеполовой и дыхательной системах, расценивается как признак дисбактериоза или симптом внекишечных эшерихиозов [19,28,43,149].

Риск развития внекишечного эшерихиоза у онкологических больных на порядок выше в связи с наличием взаимно сопряженных факторов: опухолевая интоксикация, истощение, анемия, длительностью оперативных вмешательств, обширной кровопотерей в ходе операций, а также предшествующей химио- и лучевой терапии [6,48,49,50,51].

По данным Дмитриевой Н.В. и соавт. [50] спектр инфекционных осложнений у онкологических больных включает: пневмонии (39%), глубокие и поверхностные раневые инфекции (31%), мочевые инфекции (8%), лихорадку неясного генеза (6%), сепсис (4%) и другие. Зачастую определить причину инфекционного осложнения невозможно, однако некоторые авторы считают, что наиболее частыми возбудителями являются: E.coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus spp., Pseudomonas spp., Staphylococcus epidermidis, Enterococcus spp., Candida albicans, Aspergillus spp. [52].

Изучив микробный пейзаж штаммов выделенных от онкологических и неонкологических больных, мы выявили, что E.coli является частой причиной инфекционных осложнений у онкологических больных, чем у неонкологических больных. Так если удельный вес E.coli в инфекционных осложнениях у онкологических-больных составил 33,1 ±4,7% (56), то у неонкологических больных - 23,8±4,6% (67) (р<0,05).

По мнению некоторых исследователей из множества факторов патогенности ни один из них не может быть достаточным в проявлении патогенности микроорганизмов, поскольку они часто могут изменяться независимо друг от друга [36,92]. Нами была изучена частота проявления некоторых биологических свойств УПЭ, на примере клинических штаммов E.coli, выделенных от онкологических и неонкологических больных с инфекционными осложнениями.

Все выделенные штаммы E.coli на поверхности МПА в течение суток вырастали в виде полупрозрачных колоний с гладкой поверхностью и ровными краями размером около 3-4 мм. На среде Эндо давали рост в виде красно-малиновых колоний с металлическим блеском, при этом лишь два штамма были лактозонегативными и вырастали в виде бледновато-матовых выпуклых колоний с ровными краями. При культивировании штаммов бактерий E.coli в жидкой питательной среде, образовывалось равномерное помутнение, с выпадением слабого осадка в течение 20-24 часов. Бактериоскопия в раздавленной и висячей капле показала, что клетки обладают поступательными и маятникообразными движениями.

При посеве на полужидкий агар, бактерии диффундировали в среду через 12-24 часов при температуре 37° С. На окрашенных по Граму препаратах, бактериальные клетки представляли собой мелкие грамотрицательные палочки.

Штаммы бактерий E.coli обладают весьма пестрой антигенной структурой. Для внутривидовой дифференциации штаммов разработаны ряд схем, основанных на изучении О -, К - и Н - антигенов.

Мы провели исследования по изучению поверхностных антигенов путем применения коммерческих поливалентных ОК-сывороток и типовых О-сывороток (НПО «Биомед») в реакции агглютинации на стекле.

При изучении реакции агглютинации с типовыми эшерихиозными О-сыворотками было выявлено, что среди штаммов E.coli, выделенных от онкологических больных с инфекционными осложнениями, 12 штаммов относились к серогруппе Об, 8 - к 08, 4 - к 080, 3 - к 025, по 1 - к 0128ас, 085, 0111, 0119 соответственно, тогда как среди культур E.coli, изолированных от неонкологических больных, 10 штаммов относились к серогруппе 055, 8 -085, 5 - к 025, 4 - 0128ав, 2 - к 08, 2 - 06 и 1 к 027.

Данные этих исследований показывают, что наибольшую эпидемиологическую значимость в развитии инфекционных осложнений у онкологических и неонкологических больных представляют ОКА, ОКВ и ОКЕ серо-группы. При этом штаммы выделенные от онкологических больных преимущественно принадлежали к Об, 08, 080, 025 серогруппам, тогда как штаммы изолированные от неонкологических больных - к 055, 085, 025, 0128ав. Вероятно, штаммы этих серогрупп чаще обладают необходимым комплексом факторов патогенности для развития инфекционного процесса.

Все микроорганизмы обладают способностью прикрепляться к органическим и неорганическим поверхностям [85,131,138]. Учитывая, что у патогенных бактерий первым этапом развития инфекционного процесса является лиганд - рецепторное взаимодействие, обусловленное адгезией микроорганизмов на специфических рецепторах чувствительных клеток макроорганизма, для выявления адгезинов у бактериальных клеток используют реакцию гемагглютинации с эритроцитами различных видов животных и птиц. Исходя из этого, мы сочли необходимым провести сравнительное изучение адгезив-ности E.coli, выделенных от онкологических больных и неонкологических больных. В качестве клеток-мишеней для выявления адгезинов, и выяснения природы структур бактериальной клетки, определяющих у E.coli адгезивную активность, использовали эритроциты цыпленка [36].

Было выявлено, что из 56 культур E.coli, выделенных от онкологических больных с инфекционными осложнениями, 41 (73,2±5,9%) обладали способностью давать Д-маннозочувствительную реакцию гемагглютинации (MS), тогда как среди 67 культур E.coli, изолированных от неонкологических больных, 31 (46,2±6,1%) давали положительную реакцию (р<0,05).

Изучение Д-маннозорезистентной гемагглютинирующей активности (MR) показало, что среди 56 штаммов E.coli, выделенных при инфекционных осложнениях от онкологических больных 32 (57,1±6,6%) обладали этим свойством, в то время как из 67 культур, изолированных от неонкологических больных лишь 24 (35,8±5,8%) штамма вызывали MR - гемагглютина-цию.

Одновременно было проведено изучение среднего показателя адгезив-ности (СПА) в опытах на формалинизированных эритроцитах I группы крови человека при микроскопическом учете результатов в соответствии с методом Брилиса В.И. с соавт. [20]. Результаты исследований показали, что среди 56 штаммов E.coli, выделенных от онкологических больных с инфекционными осложнениями 23 (41,1 ±6,5%) культуры проявляли высокий уровень адгезивной активности, 12 (21,4±5,4%) - средний, 6 (10,7±4,1) % - низкий и 15 (26,8±5,9%) - не проявляли адгезивную активность, тогда как среди 67 культур, выделенных от неонкологических больных 10 (14,9±4,2%) случаев проявлялся высокий уровень адгезивной активности, 11 (16,5±4,5%) - средний, 10 (14,9±4,2%) - низкий и 36 (53,8±6,1%) - не проявляли адгезивную активность (р< 0,05).

Для преодоления иммунобиологических барьеров многие бактерии продуцируют ряд продуктов жизнедеятельности, которые способствуют их проникновению, существованию и колонизации в тканях макроорганизма [43,56,92]. Исследования последних лет показывают, что к числу важнейших таких продуктов относятся бактериальные гемолизины [82,118,144]. Гемолизины относят к факторам патогенности, наличие которых может быть использовано в качестве показателя потенциальной цитотоксичности, выделенных условно-патогенных энтеробактерий. Функционально определяют несколько групп гемолизинов, среди которых у энтеробактерий превалирует а-гемолизин, тиолзависимый гемолизин и энтерогемолизин [118,171]. Исходя из этого, мы провели сравнительное изучение а-гемолитической активности бактерий E.coli, выделенных от онкологических и неонкологических больных с инфекционными осложнениями.

Результаты исследований показали, что среди 56 штаммов E.coli, изолированных от онкологических больных с инфекционными осложнениями 18 (32,1±6,3%) штаммов обладали высокой а - гемолитической активностью, 10 (17,9±5,1%) штаммов - средней, 16 (28,6±4,6%) - слабой и не обладали гемолитической активностью 12 (21,4±6,5%) культур, тогда как, из 67 штаммов E.coli, выделенных от неонкологических больных 13 (19,4±2,2%) культур обладали высокой а - гемолитической активностью, 6 (8,9±3,1%) - средней, 9 (13,4±4,2%) - слабой и не обладали гемолитической активностью 39 (58,2±5,2%). Проведенные исследования показали, что штаммы E.coli, обладающие а-гемолитической активностью чаще выделялись от онкологических больных с инфекционными осложнениями, чем от неонкологических больных страдающих, гнойно-воспалительными заболеваниями (р<0,05).

Корреляцию между способностью культур продуцировать а-гемолизин и вирулентностью in vivo в опытах интраназального заражения белых мышей и на модели инфузорий туфелек выявила, что из 20 штаммов 6 (30±6,5%) культур проявляли высокую вирулентность, 3 (15±4,7%) - среднюю, 4 (20±5,3%) - низкую, 7 (25±5,7%) штаммов были авирулентными. а-гемолитически - активные штаммы в опытах на лигированной петле тонкого кишечника кролика не вызывали дилатацию кишечника.

Наряду с а - гемолизином некоторые бактерии кишечной группы синтезируют тиолзависимый гемолизин, который лизирует эритроциты в присутствии цистеина и может быть использован при изучении патогенного потенциала возбудителя [36,221].

Среди 56 штаммов E.coli, выделенных от онкологических больных, 29 культур обладали способностью синтезировать тиолзависимый гемолизин, из которых 7 (12,5±4,4%) проявляли высокую активность, 12 (21 ±5,4%)- среднюю и 10 (33,4±6,0%)- обладали слабой тиол-зависимой гемолитической активностью, в то время как из 67 культур E.coli, выделенных от неонкологических больных 26 штаммов обладали способность продуцировать тиолзависимый гемолизин, из которых 5 (7,4±3,2%) обладали высокой активностью, 13 (19,4±4,8%)- средней и 8 (11,9±3,9%)-слабой активностью и не обладали активностью - 41 (61,2±5,9%) (р<0,05).

Лецитиназная активность-способность бактерий растворять липидные мембраны, наряду с гемолитическими и протеолитическими активностями микроорганизмов, относится к факторам патогенности, в связи, с чем является важным показателем вирулентности высеваемых клинических штаммов условно-патогенных энтеробактерий, в том числе и E.coli [36,38а,52].

Сравнительный анализ между двумя группами E.coli показал, что 56 штаммов, выделенных от онкологических больных 24 (42,9±6,6%) обладали лецитиназной активностью, тогда как у 67 культур, изолированных от неонкологических больных этот признак встречался 19 (28,4±5,5%) культур, что характеризует их менее низкую способность к растворению липидных мембран (р<0,05).

В целях сохранения возбудителя, находящегося в организме, от бактерицидных факторов сыворотки или фагоцитов микробная клетка располагает также средствами дистанционного действия, которые представляют многочисленную группу секретируемых бактериальных субстанций, направленных на инактивацию механизмов иммунитета [25,27].

По данным некоторых авторов антилизоцимная активность встречается у большинства видов микроорганизмов [22,24].

Результаты исследований показали, что штаммы среди 56 штаммов E.coli, выделенных от онкологических больных с инфекционными осложнениями 17 (30,4±6,1%) - обладали высокой АЛА, 7 (12,5±4,4%) - средней АЛА, 6 (10,7±4,1%) - низкой АЛА, в то время как из 67 культур E.coli, выделенные от неонкологических больных 10 (14,9±4,4%) - обладали высокой АЛА, 8 (11,9±4,0%) - средней АЛА, 9 (13,4±4,2%) - низкой АЛА (р<0,05). Таким образом, штаммы, выделенные от онкологических больных с инфекционными осложнениями, достоверно (р<0,05) чаще всего проявляли антилизо-цимную активность, чем штаммы, выделенные от неонкологических больных.

Антиинтерфероновая активность (АИА) - это автономное свойство микроорганизмов, предназначенное для целенаправленного, специфического инактивирования бактерицидной фракции человеческого лейкоцитарного интерферона [25,87]. Среди 56 штаммов E.coli, выделенных от онкологических больных АИА проявлялась у 30 (53,5±5,1%), в то время как у 67 культур, изолированных от неонкологических больных этот признак выявлялся у 27 (40,3±3,1%) культур (р<0,05), что говорит о частой встречаемости АИА у штаммов E.coli, выделенных от онкологических больных с инфекционными осложнениями.

Антикомплементарная активность (АКА) - это признак, обеспечивающий персистирование микробной клетки и характеризует способность инак-тивировать комплемент [23,26]. По анализу результатов можно сказать, что из 56 штаммов E.coli, выделенных от онкологических больных с инфекционными осложнениями 17 (30,4±6,1%) - обладали высокой АКА, 7 (12,5±4,4%) -средней АКА, 9 (16,1±4,9%) - низкой АКА, в то время как среди 67 культур E.coli, изолированных от неонкологических больных 10 (14,9±4,4%) штаммов проявляли высокую АКА, 6 (8,9±3,5%) - среднюю АКА, 11 (16,4±4,5%) - низкую АКА.

Данные исследований показывают, что AJIA, АИА, АКА могут быть использованы при оценке этиологической значимости E.coli, выделенных от онкологических больных с инфекционными осложнениями.

Вирулентность E.coli, тесным образом связана со способностью продуцировать токсины. Выделяют две группы энтеротоксинов по чувствительности к температурному фактору - термолабильные и термостабильные, а также выделяют шига-подобный токсин, продукция которых УПЭ определенным образом обусловливает развитие диарейного симптомокомплекса. Литературные данные о способности продуцировать энтеротоксины у E.coli многочисленны [120,134,143,198], однако вопрос об их роли в развитии инфекционных осложнений у онкологических больных крайне малочисленны. Поскольку бактерии E.coli относятся к условно-патогенным, то в каждом конкретном случае для выяснения их этиологической значимости необходимо исследовать свойства, характеризующие степень патогенности.

Использование легочной модели является наиболее подходящим методом определения вирулентности свежевыделенных штаммов, т.к. этот метод позволяет определять динамику размножения бактерий через различные интервалы времени с момента введения возбудителя, а по времени гибели и количеству погибших животных довольно быстро установить степень вирулентности бактерий [31].

Изучение вирулентности 56 штаммов E.coli, выделенных от онкологических больных показало, что 12 (21,4±5,5%) штаммов вызывали гибель животных, причём из них 3 (25±3,8%) штамма оказались высоковирулентными, 4 (33,3±4,4%) штамма - средневирулентными и 5 (41,7±6,6%) штаммов были слабовирулентными. В то время среди 67 культур, выделенных от неонкологических больных, вирулентность проявлялась в слабой степени. Так из 67 штаммов - 10 (15,0±3,7%) проявляли слабую вирулентность, 57 (85,1±3,9 %) штаммов были авирулентными.

По данным некоторых исследователей [93,115,117,123,164] у УПЭ существует прямая корреляция между вирулентностью и способностью продуцировать LT- энтеротоксин. В связи, с этим, мы провели изучение способности продуцировать LT- энтеротоксин у штаммов E.coli, выделенных от онкологических и неонкологических больных с инфекционными осложнениями. При этом мы использовали тест отека лап белых мышей [216].

Результаты исследований показали, что из 56 штаммов E.coli, выделенных от онкологических больных с инфекционными осложнениями, 15 (26,8±4,7%) культур давали положительную реакцию, в то время как из 67 культур E.coli, изолированных от неонкологических больных, 11 (16,4±4,5%) штаммов вызывали отек лап у мышей (р<0,05).

С целью выяснения природы веществ, обуславливающих «отек лап» мышей, центрифугаты 20 - часовых бульонных культур нагревали при 56 °С и 85°С в течение 45 минут и вводили субплантарно. При этом гретые при 56°С центрифугаты давали разницу между опытным и контрольными лапками в пределах от 25-40 мг, при 85 °С - от 15-25 мг, что указывает на термолабильность токсических веществ.

Было выявлено, что среди 56 штаммов E.coli, выделенных от онкологических больных с инфекционными осложнениями 13 (23,2±3,6%) обладали способностью продуцировать JlT-энтеротоксин, тогда как у 67 культур, выделенных от неонкологических больных, 7 (10,4±2,5%) обладали этим свойством (р<0,05).

Результаты изучения ЛТ-энтеротоксигенности в тесте отека лап показали, что культуры E.coli, выделенные от онкологических больных с инфекционными осложнениями чаще проявляли ЛТ-энтеротоксигенную активность чем штаммы, изолированные от неонкологических больных (р<0,05), что необходимо учитывать при оценке их этиологической значимости.

Ещё одним способом тестирования энтеротоксигенной активности использованный нами был метод «лигированная петля тонкого кишечника кролика», который позволяет обнаружить степень активности энтеротоксинов. Результаты показали, что центрифугаты 20 - часовых бульонных культур 56 штаммов E.coli, при введении в просвет тонкого кишечника, вызывали накопление экссудата, и отношение V/L (объёма экссудата к длине лигированного участка) варьировала в пределах от 1,0 до 1,2, что являлось подтверждением наличия энтеротоксин продуцирующей способности.

Было выявлено, что из 56 культур E.coli, выделенных от онкологических больных с инфекционными осложнениями 16 (28,6±6,1 %) штаммов вызывали накопление экссудата в просвете тонкого кишечника кролика (V/L 1,0-1,2), из которых у 5 (31,3±4,1%) штаммов V/L = 1,2, у 7 (43,8±7,8%) - 1,1, и у 4 (25,0±3,5%) - 1,0 .

В то время как среди 67 культур E.coli, изолированных от неонкологических больных, 11 (16,4±4,5%) штаммов обладали способностью вызывать накопление экссудата и V/L при этом составило 1,0-1,2, из которых у 2 (18,1±4,7%) штаммов V/L = 1,2, у 8 (72,7±5,4%) - 1,1, у 1 (9,1±3,5%) - 1,0. Необходимо также отметить, что из всех культур 4 штамма изолированные при кишечных инфекциях вызывали накопление серозно-геморрагического экссудата, что указывает на наличие у штаммов E.coli способности синтезировать новый энтеротоксин типа энтерогемолизина.

При введении центрифугата прогретой при 56°С 20 - часовой бульонной культуры среди 16 (28,6±6,0) штаммов E.coli, изолированных от онкологических больных у 13 (81,3±6,0%) соотношение V/L составило не более 0,5, что свидетельствовало о термолабильности энтеротоксина, в то время как среди 11 (16,4±4,5%) культур, выделенных от неонкологических больных этот признак сохранялся у 7 (63,6±5,9%) штаммов.

По результатам опытов «лигированная петля тонкого кишечника кролика» можно заключить, что JIT - энтеротоксигенную активность чаще проявляли штаммы E.coli, выделенные от онкологических больных с инфекционными осложнениями, чем культуры, изолированные от неонкологических больных (р<0,05).

Кожно-некротическая проба отражает потенциал бактериальной клетки вызывающий некроз кожи благодаря наличию ряда факторов патогенности необходимых для развития инфекционного процесса. Нами была предпринята попытка изучения кожно-некротической пробы на кроликах несколькими штаммами. Критериями оценки дермо-некротического действия штаммов явились два фактора:

3) Разница в размерах воспалительного фокуса (гнойника, некроза) индуцированного штаммами E.coli, выделенных от онкологических и неонкологических больных.

4) Разница в характере течения воспалительного процесса и степень тяжести состояния опытных животных.

При изучении кожно-некротической способности у 4 штаммов бактерий E.coli, выделенных от онкологических больных, максимальный размер воспалительного фокуса варьировал от 3x3,3 см до 3,6x3,8 см, который нарастал в течении 48 часов с характерной картиной интоксикации в виде повышения температуры тела до 43 °С и угнетения двигательной активности кроликов, в то время как среди 4 культур E.coli, изолированных от неонкологических больных максимальный размер воспалительного фокуса варьировал от 2,2x2,5 см до 2,8x3,2 см, который достигал своего пика в течении 72 часов, с менее выраженной интоксикацией и угнетением двигательной активности кроликов.

Таким образом результаты исследований кожно-некротической пробы показали, что штаммы E.coli, выделенные от онкологических больных оказались способными вызывать некроз кожи и формирование гнойника у кроликов в более короткие сроки с характерной тяжелой клинической картиной, в отличии от культур, изолированных от неонкологических больных.

Проведенные нами исследования на биологических моделях экспериментальной инфекции показали, что интраназальное заражение, плантарный тест, «лигированная петля тонкого кишечника» требуют значительного количества экспериментальных животных и времени, в связи, с чем они не всегда выполнимы в бактериологических лабораториях стационаров.

В связи с этим мы решили для сравнительного изучения цитотоксично-сти клинических штаммов E.coli, выделенных от онкологических и неонкологических больных использовать инфузории туфельки. Результаты исследований показали, что из 56 штаммов E.coli, выделенных от онкологических больных с инфекционными осложнениями, 16 (28,5±6,0%) обладали протис-тоцидной активностью, тогда как среди 67 культур, выделенных от неонкологических больных этот признак встречался у 13 (19Д±4,8%) (р<0,05).

Результаты сравнительного изучения некоторых биологических свойств штаммов E.coli, показали, что E.coli чаще выделяются от онкологических больных с инфекционными осложнениями, чем от неонкологических больных и обладали более выраженной адгезивной, а-гемолитической активностью, LT-энтеротоксин продуцирующей, антилизоцимной, антиинтерфе-роновой, антикомплементарной активностями и более высокой вирулентностью соответственно.

Широкое и не всегда рациональное использование антибактериальных препаратов в медицинской практике способствовало уменьшению чувствительных и увеличению резистентных штаммов микроорганизмов. Успехи антибактериальной терапии и профилактики у онкологических больных зависят от чувствительности микроорганизмов к назначаемым антибактериальным препаратам. Известно, что в настоящее время наблюдается тенденция снижения инфекционных осложнений, вызванных грамположительными микроорганизмами [6,48,50,170]. Имеющиеся литературные данные о множественной лекарственной устойчивости бактерий E.coli не подвергаются сомнению [21,79,107,130]. Тем не менее знание спектра лекарственной устойчивости является важным в плане выбора этиотропного лечения.

Анализ изучения антибиотикограммы показал, что культуры E.coli, выделенные от онкологических больных с инфекционными осложнениями, были чувствительными к ципрофлоксацину (76,5%), имипенему (99,5%), меро-нему (99,1%), ванкомицину (99,3%), фузидину (97,2%), налидиксовой кислоте (71,4%), цефамизину (78,5%), амикацину (76,8%), цефоперазону (74,2%), и устойчивыми к действию бензилпенициллина (98%), ампициллина (86,5%), оксациллина (90,3%), карбенициллина (78,5%), азитрамицину (77,8%), азлоциллину (74,5%), клиндамицину (92%), линкомицину (84,3%), оксациллину (90,3%), олеандомицину (98%), полимиксину (90%), ристомицину (90,3%), рокситромицину (98%), сизомицину (87%), стрептомицину (82%), тетрациклину (72%), тобрамицину (68%), фурагину (75%), цефаклору (89%), цефалек-сину (90%), цефамандолу (74%), цефуроксиму (74%), эритромицину (98%).

Штаммы E.coli, изолированные от неонкологических больных, были чувствительными к ципрофлоксацину (87,5%), имипенему (99,8%), меронему (98,6%), ванкомицину (98,8%), фузидину (94,5%), налидиксовой кислоте (87,2%), цефамизину (85,3%), амикацину (82,5%), цефоперазону (98,6%), ген-тамицину (70%), канамицину (62%), неомицину (67%), и устойчивыми к бен-зилпенициллину (95,8%), ампициллину (91,6%), оксациллину (85,4%), карбе-нициллину (62,5%), азитрамицину (60%), азлоциллину (68%), клиндамицину (85%), линкомицину (74%), оксациллину (85,4%), олеандомицину (85%), полимиксину (80%), ристомицину (80%), рокситромицину (74%), сизомицину (74%), стрептомицину (71%), цефамандолу (82%), цефуроксиму (80%), эритромицину (95%).

Среди штаммов E.coli, выделенных от онкологических больных и неонкологических больных, максимальная резистентность была отмечена к эритромицину, олеандомицину, ристомицину, бензилпенициллину, ампициллину и оксациллину, что вероятно обусловлено циркуляцией и селекцией штаммов, продуцирующих различного рода ферменты биодеградации антибиотиков.

Поскольку большинство штаммов обладали антибиотикорезистентно-стью ко многим антибактериальным препаратам, применяемым в практической медицине, мы сочли целесообразным с практической точки зрения изучить фагочувствительность к поливалентному пиобактериофагу производства ФГУП «НПО «Микроген» филиала «Иммунопрепарат», г. Уфа.

Пиобактериофаг поливалентный очищенный жидкий (pyobacteriophagum polyvalentum purum liquidum) представляет собой стерильную смесь очищенных фильтратов фаголизатов бактерий стафилококков, стрептококков, клебсиелл пневмонии, эшерихий коли, синегнойной палочки, протея в виде прозрачной жидкости желтого цвета различной степени интенсивности с зеленоватым оттенком. В целях использования пиобакте-риофага поливалентного очищенного жидкого в лечении инфекционных осложнений у онкологических больных, мы провели изучение фагочувстви-тельности 56 штаммов E.coli, выделенных от онкологических и 67 культур изолированных от неонкологических больных. «Пиобактериофаг поливалентный очищенный жидкий» производства ФГУП «НПО «Микроген» «Им-мунопрепарат» г. Уфа был любезно предоставлен профессором, д.м.н. Ворошиловой Н.Н.

Результаты показали, что из 56 штаммов E.coli, выделенных от онкологических больных с инфекционными осложнениями, 33 (58,9±6,6%) были чувствительными к поливалентному пиобактериофагу, 7 (12,5±4,4%) - уме-ренночувствительными, 16 (28,6±6,0%) - нечувствительными, в то время как среди 67 штаммов, изолированных от неонкологических больных 38 (56,7±2,0%) культур оказались чувствительны к этому препарату, 8 (11,9±4,0%) - умеренночувствительными и 21 (31,3±3,1%) - нечувствительными (р<0,05).

При проведении сравнительного анализа фагочувствительности штаммов с антибиотикочувствительностью было выявлено, что из 23 (41,1 ±6,6%) культуры E.coli, выделенных от онкологических (обладающих множественной лекарственной устойчивостью к 14 антибиотикам), 19 (82,6±4,2%) оказались чувствительными к поливалентному пиобактериофагу, 3 (13,0±2,1%) — умеренночувствительными и 1 (4,3±0,2%) - нечувствительным.

В группе штаммов E.coli, изолированных от неонкологических больных из 20 (29,8±5,6%) полирезистентных культур, которые были устойчивы к 9 и более антибактериальным препаратам, 12 (60±6,0%) были чувствительными к поливалентному пиобактериофагу, 5 (25±5,3%) - умеренночувствительными, 3 (15±4,4%)-нечувствительными.

Данные этих исследований дают основание полагать, что поливалентный пиобактериофаг может быть использован в комплексной антибактериальной терапии инфекционных осложнений у онкологических и неонкологических больных, вызванных полирезистентными штаммами E.coli. Необходимо также отметить, что этот препарат сочетает в себе широкий спектр микроорганизмов, что является важным аргументом для его использования при моно - и ассоциированных бактериальных инфекциях, обусловленных устойчивыми к антибактериальным препаратам штаммами.

Благодаря успехам в области изучения генетических и иммунологических маркеров вирулентности условно-патогенных микроорганизмов в настоящее время значительно улучшились диагностические подходы, позволяющие определить этиологическую значимость возбудителя [59,218,219,221].

Поскольку бактерии E.coli относятся к группе условно-патогенных грамотрицательных микроорганизмов, в каждом конкретном случае трудно объяснить этиологическую значимость возбудителя и провести при этом целенаправленную профилактику и лечение заболеваний, не зная природы генетического детерминанта «факторов патогенности», обуславливающие развитие инфекционного процесса.

Для этого мы в начале провели изучение профиля плазмидной ДНК у штаммов E.coli, выделенных от онкологических и неонкологических больных.

Адгезивность штаммов E.coli, выделенных как у онкологических, так и неонкологических больных была изучена в реакции гемагглютинации с использованием эритроцитов птиц. Мы отобрали по 15 штаммов из каждой группы, обладающие MS и MR гемагглютинирующей активностью, и изучили профиль их плазмидной ДНК.

При этом анализ профиля плазмидной ДНК обеих групп этих штаммов особых различий не выявил и оказалось, что 23 штамма оказались бесплаз-мидными, 3 штамма имели 4 плазмиды (120 МД, 60 МД, 3,2 МД, 1,4 МД), 3 штамма - по 3 плазмиды (60МД, 38МД, 1,4МД), 10 штаммов - по 2 плазмиды (120МД, 60МД), 8 штаммов - по 1 плазмиде: 3 штамма (60МД) и (1,4МД), 2 штамма - 40МД. Тестирование изогенных пар на их способность давать MS-и MR-реакции гемагглютинации с эритроцитами цыпленка показало, что штаммы в одинаковой степени агглютинируют эритроциты птиц. Полученные результаты наших исследований дают нам основание полагать, что генетической детерминантой, контролирующей MS и MR реакцию гемагглютинации с эритроцитами цыпленка у E.coli, видимо являются структурные элементы хромосомной природы.

Некоторые исследователи показали, что синтез LT-энтеротоксина у E.coli детерминируется Ent плазмидами, молекулярная масса которых колеблется в пределах от 55 до 61 МД [36,52,61,98]. В то же время энтеротоксин холерного вибриона, иммунологически родственный LT-энтеротоксину E.coli, контролируется структурными генами хромосомной природы [159а].

Исходя из этого мы попытались выяснить природу генетической детерминанты, контролирующей у E.coli продукцию LT-энтеротоксина. Для изучения данного признака были отобраны 2 группы штаммов: первую группу составили штаммы суперпродуценты LT-энтеротоксина, способные вызывать "отек лап" мышей 95 мг и более, вторую - культуры, не продуцирующие LT-энтеротоксин и в опытах "отек лапки" белых мышей разницу давали не более 35 мг. Изучали профиль их плазмидной ДНК. Из 6 изученных штаммов первой группы, 4 (173, 587, 581, 165) оказались несущими плазмиды массой 60 МД, 1 штамм (26) - 60 и 3,2 МД и 1 штамм (123) - 60, 40 и 1,4 МД. Среди 4 штаммов второй группы (611, 769, 795, 843) 2 культуры были, несущими плазмиды массой 38 МД и 2 - бесплазмидными.

Опыты по элиминированию плазмид у штаммов, продуцирующих высокоактивный LT-энтеротоксин показали, что бесплазмидные изогенные пары токсигенных штаммов не вызывали отек лапки у мышей.

Из 40 отобранных клонов каждого штамма, утративших свойство продуцировать LT- энтеротоксин у двух на фореграмме просматривалась плазмида массой 60 МД, остальные клоны оказались не несущими данной плазмиды и в биологических пробах также были отрицательны.

В дальнейшем изучали возможность конъюгативной передачи Ent плазмиды между бактериями E.coli и от E.coli к E.coli К)2 Ge2 Rif®. Для чего в качестве донора брали №587 E.coli (Ent+,Str®, Mons) и реципиента №256 E.coli (Ent", Strs, Monr). У штаммов изучали резистограмму и на основе этого готовили селективную среду, содержащую 300 мкг/мл мономицина и 500 мкг/мл стрептомицина. Полученные трансконъюгаты давали рост в селективной среде и были способны вызывать "отек, лапки" у опытных мышей с разницей 95 мг и более. Результаты проведенных исследований дают нам основание полагать, что генетической детерминантой, контролирующей у E.coli продукцию LT-энтеротоксина, является, по-видимому, конъюгативная плазмида массой 60 МД.

Опыты по фенотипическому определению гемолитической активности E.coli указывают на то, что гемолизины являются одним из ведущих факторов патогенности клинических штаммов. Для. выяснения роли плазмиды, контролирующей гемолитическую активность E.coli, нами изучен плазмидный профиль а - гемолитически активных культур. Исследование проводили на 22 штаммах E.coli, обладающих а - гемолитической'активностью, и 6 штаммах, не способных продуцировать а - гемолизин. В качестве эталона использовали штамм Proteus vulgaris Rts-1, обладающий гемолитической активностью и несущий плазмиду с массой 120 МД.

Результаты исследований показали, что среди 22 штаммов E.coli, у 17 (11 - штаммов от онкологических больных, 6 - от неонкологических больных) обнаружили плазмиду массой 120 МД, в то время как в группе штаммов, не обладающих гемолитической активностью, этой плазмиды не оказалось, что указывало на возможную роль данной плазмиды в продукции а -гемолизина.

Для уточнения роли 120 МД плазмиды в следующей серии опытов элиминировали у бактерий плазмиду, культивируя а-гемолитически активные штаммы E.coli в бульоне Хоттингера (рН 7,4-7,6), содержащем 75 мкг/мл акридин оранжевого и у полученных клонов изучали профиль плазмидной ДНК. При этом клоны 8 штаммов потеряли способность продуцировать а-гемолизин, а клоны штаммов E.coli №661 и E.coli №171 сохраняли свойство продуцировать а-гемолизин.

Данные этих исследований, на наш взгляд, свидетельствуют о вероятности существования у E.coli генетической детерминанты иной природы, контролирующий продукцию а - гемолизин. Не исключено, что часть штаммов способны продуцировать биологически активные вещества, вызывающие гемолиз эритроцитов, но по своей природе не относящиеся к а-гемолизину. По нашему мнению, выяснение этого вопроса является весьма актуальным и перспективным и вполне может быть предметом отдельных исследований. Все наши попытки осуществить конъгативную передачу плазмиды массой 120 МД между бактериями E.coli к универсальному реципиенту E.coli К12 G62 Riffe) не увенчались успехом. Это, возможно, связано с большой массой плазмиды, контролирующей гемолитическую активность.

В дальнейшем с целью конкретизации роли 120 МД плазмиды в а-гемолитической активности брали изогенные пары штаммов. При этом у большинства гемолитически активных штаммов 22, 131, 586 (соответственно 30, 29, 32 из 50) на фореграмме наблюдали наличие плазмиды массой 120 МД, а у мутантов 22-э, 131-э, 586-э не проявляющих гемолитической активности, не были обнаружены плазмиды массой 120 МД. Все эти данные являются дополнительным подтверждением роли 120 МД в а-гемолитической активности бактерий E.coli.

Проведенные нами опыты, по изучению профиля плазмидной ДНК, элиминации и конъюгативной передачи плазмид, позволили обнаружить новые плазмиды различной массы (1,4МД, 2,8МД, 3,2МД, 12МД, 26МД, 38МД, 40МД), возможно, контролирующие различные факторы вирулентности (синтез энтеро-гемолизина, ДНК-азную, лецитиназную, антилизоцимную и антиинтерфероно-вую активности, резистентность к некоторым антибиотикам) клинических штаммов E.coli, выделенных как от онкологических, так и неонкологических больных. Выяснение роли этих плазмид может быть новым перспективным в плане дальнейших исследований в области молекулярной биологии.

У 56 штаммов E.coli, выделенных от онкологических больных при инфекционных осложнениях, плазмиды массой 120 МДа встречались у 15 (26,8%), 60 МДа - у 25 (44,6%) и 40 МДа - у 5 (8,9%), в то время как у 67 культур, изолированных от неонкологических больных, плазмиды массой 120 МДа встречались у 10 (15,0%) культур, 60 МДа - 17 (25,4%) и 40 МДа - 4 (6,0%) (р<0,05), что свидетельствует о высокой частоте и значимости выявления этих маркеров у онкологических больных с инфекционными осложнениями во время проведения диагностических процедур и определения этиологической роли возбудителя.

Таким образом, результаты изучения профиля плазмидной ДНК дают основание полагать, что генетической детерминантой адгезивности бактерий E.coli, возможно, являются структурные элементы хромосомной природы, продукции LT-энтеротоксина - плазмида массой 60 МД, а-гемолизина — плазмида массой 120 МД.

Наличие у ряда клинических штаммов E.coli мобильных генетических элементов в виде плазмид может способствовать вертикальному и горизонтальному переносу в общей экологической нише, а наличие определенных хромосомных детерминант к выживанию клонов с необходимым набором генетических кластеров патогенности. Обнаружение генетических детерминант, контролирующих факторы патогенности свидетельствует о том, что среди культур E.coli встречаются штаммы, которые следует рассматривать не как условно-патогенные, а как конкретные патовары бактерий E.coli.

Локализация генетических элементов, ответственных за патогенность, часто остается не выясненной, однако, обнаружение ответственных участков генов тех или иных факторов патогенности во многом может помочь в проведении комплексной профилактики и терапии. В связи с этим мы провели исследования по обнаружению некоторых генов вирулентности методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) у штаммов E.coli, выделенных от онкологических и неонкологических больных с инфекционными осложнениями.

В серии амплификации были использованы 56 клинических штаммов E.coli, выделенных от онкологических больных с инфекционными осложнениями и 67 культур, изолированных от неонкологических больных, феноти-пически у которых заранее были определены некоторые факторы патогенности. Результаты исследований позволили установить факт превалирования частоты встречаемости генов рарС (пили адгезии Pap), hlyA (а-гемолизин) и Lth (LT-энтеротоксин) у штаммов E.coli, выделенных от онкологических больных с инфекционными осложнениями. Так у штаммов E.coli, выделенных от онкологических больных ген РарС обнаруживался у 21 (37,5±6,5%) штамма, ген hlyA - у 17 (30,4±6,1%), ген Lth - у 13 (23,2±3, 7%), в то время как у культур E.coli, изолированных от неонкологических больных ген РарС обнаруживался 12 (17,9±4,7%), ген hlyA - у 11 (16,4±4,5%), ген Lth - у 7 (10,4± 2,3%) (р<0,05). Частота встречаемости комбинации нескольких генов у штаммов E.coli, выделенных от онкологических больных была выше, чем у культур, изолированных от неонкологических больных (р<0,05). Вероятно, это обусловлено экологической экспансией наиболее патогенных сероваров E.coli у онкологических больных, что необходимо учитывать при оценке этиологической значимости штаммов E.coli, выделенных от онкологических больных с инфекционными осложнениями.

Обобщая результаты наших исследований, можно заключить, что данные по изучению адгезивной, лецитиназной, гемолитической, антилизоцим-ной, антиинтерфероновой, антикомплементарной, антибиотикоустойчивости, фагочувствительности, протистоцидной, JIT-энтеротоксигенной активностей и вирулентности, установленные в опытах на лабораторных животных и в совокупности могут служить теоретическим обоснованием для отнесения штаммов бактерий E.coli, выделенных от онкологических больных при инфекционных осложнениях, к обладающим выраженной патогенностью пато-генностью, чем изолированные от неонкологических больных, т.е. к патогенным и этиологически значимым, что должно учитываться при проведении мероприятий, направленных на профилактику и лечение инфекционных осложнений.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Билалов, Фаниль Салимович, 2007 год

1. Азнабаев Г.К. Биологические свойства бактерий рода Citrobacter, выделенных при моно и ассоциированных бактериальных инфекциях./ Азнабаев Г.К.// Дисс: канд. мед. наук. - 0ренбург-2003г. - 121 с.

2. Акар Ж.Ф. //Антибиотики и химиотерапия.-1991.-т. 36 (6).-С. 5-8.

3. Алмагамбетов К.Х., Горская Е.М., Бондаренко В.М. // Ж. микробиол. -1991.-№7.-С. 74-79.

4. Арион В.Я. Иммунология пептидов тимуса: Т-активин// Ж. микробиол. эпид. иммунол. 1987.-№4.-С. 98-104.

5. Арцимович Н.Г. Иммуномодуляторы, их природа и иммунотерапевтиче-ский эффект // Гематол. и трансфузиология.- 1988.-№10.-С. 37-41.

6. Ахатова Р.К. характеристика некоторых биологических свойств бактерий родов Enterobacter, Citrobacter, Proteus, выделенных от онкологических больных с инфекционными осложнениями. // Автореф. Дисс. Канд. мед. наук. Уфа - 2003. - 20 с.

7. Ахтариева А.А. Биологические свойства бактерий рода Enterobacter: Автореф. канд. мед. наук. Уфа. - 2000-39 с.

8. Ашмарин И.П. Статистические методы в микробиологии / И.П. Ашма-рин, А.А. Воробьев. // Л.: Медицина, - 1962. - 179 с.

9. Багирова Н.С. Дрожжевые грибы: идентификация и резистентность к противогрибковым препаратам в онкогематологическом стационаре. / Н.С. Багирова, Н.В.Дмитриева // Инфекции и антимикробная терапия. 2001.- Т. 6 № 3 С. 178-182.

10. Бакиров А.Б. Некоторые биологические свойства микрофлоры гнойно-воспалительных осложнений у гематологических больных. / А.Б. Бакиров, З.Г. Габидуллин //Гематология и трансфузиология 1995.-№3.-С. 32-34.

11. П.Баклаев И.Е. Иммунокоррекция онкологических больных препаратами тимусного происхождения. / И.Е. Баклаев, Е.К. Олейник // Тез. I всесоюз. Съезда иммунологов.- М.-1989.-Т.1. С. 272.

12. Белобородов В.Б. Роль современных рекомендаций по профилактике инфекций, связанных с катетеризацией сосудов.//Инфекции и антимикробная терапия. 2002.-Т.4 №6.-С. 48-54.

13. Белобородов В.Б. Антибактериальная терапия больных острыми кишечными инфекциями. / В.Б. Белобородов, Ю.С. Алятин // Consilium medi-cum -2002.- Т.4 №6, -С. 43-47.

14. Белобородова Н.В. Алгоритмы антибиотикотерапии/ Н.В. Белобородова, М.Б. Богданов, Т.В. Черненькая // Руководство для врачей.- М., 1999. -144с.

15. Беляков В.Д., Яфаев Р.Х. Эпидемиология. М.,-1989.- 423с.

16. Берг Р.Д. Медицинские аспекты микробной экологии. М., 1993-1994.-Т.7/8.-С. 53-69.

17. Бондаренко В.М. О значимости высеваемости клебсиелл, энтеробактерий, цитробактерий, и кишечных иерсиний при бактериологических исследованиях.// В.М. Бондаренко, И.Г. Тимофеева, С.А. Колесников и др. //Ж. Микробиол.-1987.-№6-С. 74-78.

18. Бондаренко В.М. Дисбиоз: современные возможности профилактики и лечения.- М.-1995. 43 с.

19. Бондаренко В.М., Петровская В.Г. // Вестник РАМН.-1997.-ЖЗ.-С. 34-40.

20. Брилис В.И. Методика определения адгезивного процесса микроорганизмов / В.И. Брилис, Т.А. Брилене, Х.П. Ленцер, А.А. Ленцер //Лаб. дело.- 1986.-№4.-С. 210-212.

21. Булгаков А.К. Факторы вирулентности и лекарственной устойчивости-некоторых представителей семейства Enterobacteriaceae, и их чувствительность к новому ряду азотсодержащих гетероциклов. Автореф. д-ра. мед. наук. Челябинск-2000.-47 с.

22. Бухарин О.В. Антилизоцимный тест как маркер персистенции микроорганизмов / О.В. Бухарин, Б.Я. Усвяцов // Теоретическая и прикладная иммунология: Тез. докл. 1 всесоюзн. конф. -М., 1982. С.58-34.

23. Бухарин О.В. Биология патогенных кокков / О.В.Бухарин, Б.Я. Усвяцов, О.Л. Чернова. // М.: Медицина, Екатеринбург: УрО РАН. 2002. С. 281-282.

24. Бухарин О. В. Бактерионосительство. / О.В. Бухарин, Б.Я. Усвяцов // Екатеринбург. 1996. - С. 78 - 89.

25. Бухарин О.В. Механизмы выживания бактерий./ О.В. Бухарин, А.Л. Гинцбург, Ю.М. Романова, Г.И. Эль-Регистан // М.Медицина. 2005.-367с.

26. Бухарин О. В. Изучение антикомплементарной активности стафилококков / О.В. Бухарин, Ю.А. Брудастов, Д.Т. Дерябин //Журн. Клин. Лаб. Диагн. -1992. № 11. - С. 68 - 70.

27. Валышев А.В. Факторы персистенции энтеробактерий фекальной флоры при дисбиозе кишечника. / А.В. Валышев, Ф.Г. Гильмутдинова, С.В. Фомичева // Ж. микробиол.-1996.-№3.-С. 96-98.

28. Ван- дер -Ваай Д. // Антибиотики и химиотерапия,-1992.- т.37, №6.-С. 36-41.

29. Вартанян Ю.П. Отек лап белых мышей-тест для оценки активности энтеро-токсинов / Ю.П. Вартанян, М.К. Северцева, О.И. Введенская, Е.С. Станиславский. // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. -1978. -№2.-С. 150-152.

30. Вертиев Ю.В. Бактериальные токсины: биологическая сущность и происхождение./Ю.В. Вертиев//Ж. микробиол.-1996.-№3.-С. 43-46.

31. Войно-Ясенецкая М.К. Опыт изучения дизентерейной инфекции у лабораторных животных / М.К. Войно-Ясенецкая // Журн. Микробиол. -1957. №4. - С. 65-69.

32. Воробьев А.А., Абрамов Н.А., Бондаренко В.М., Шендеров Б.А. // Вестник РАМН.-1997-№3 .-с. 4-7.

33. Воробьев А.А. Изменения микробиоценоза толстой кишки у больных различными заболеваниями. / А.А. Воробьев, Л.О. Иноземцева, Е.В. Буданова, Е.П. Пашков, Ю.В. Несвижский и др. // Вестн. РАМН. 1995.-№5.-С. 59-64.

34. Волкова З.В. Причины развития инфекций в онкологических боль-ных.//Материалы X Всероссийского конгресса онкологов. Москва-2005г.

35. Габидуллин З.Г. Биология О-форм протея: Дисс. канд. мед. наук.-Уфа.-1977.-25 с.

36. Габидуллин З.Г. Биологическая характеристика штаммов бактерий рода Proteus, выделенных при инфекционных процессах различной локализации: автореф. дисс. . д-ра мед. наук / З.Г. Габидуллин.// Саратов 198946 с.

37. Габидуллин З.Г., Хананова Р.К. Некоторые факторы патогенности и пер-систирующие свойства бактреиальной флоры, выделенных при инфекционных осложнениях от больных с острыми и хроническими лейкозами// Здравоохранение Башкортостана 2002. - №4 - С. 232-233.

38. Горелов В.Г. Острая дыхательная недостаточность при гемобластозах: типы диффузных поражений легких. / В.Г. Горелов, В.М. Городецкий, Э.Э. Мирзоян и др.// Тер. Архив. 1995. - т.67. - №7. - с. 52-57.

39. Горская Е.М. Механизмы развития микробиологических нарушений в кишечнике и новые подходы к их коррекции. Автореферат дис. Док-ра. мед. наук. М.-1994. - 42 с.

40. Гриценко В.А., Дерябин Д.Г., Брудастов Ю.А., Бухарин О.В. // Ж. мик-робиол. -1998.-№6.-С. 93-98.

41. Гриценко В.А., Вялкова А.А., Бухарин О.В. // Росс. Вест. Перинат. и педиатр.-1997.-№5.-С. 43-48.

42. Гриценко А.В. Экологические и медицинские аспекты симбиоза Escherichia coli и человека. / А.В. Гриценко, О.В. Бухарин // Журнал мик-робиол,- 2000.- №3.-С. 92-99.

43. Грузина В.Д. Коммуникативные сигналы бактерий. / В.Д. Грузина // Антибиотики и химиотерапия, -2003.- Т. 10 № 48 С. 32-39.

44. Дж. Миллер. Эксперименты в молекулярной генетике / Дж. Миллер. М.: Мир, 1976.-325 с.

45. Дмитриева Н.В. Антибиотикопрофилактика послеоперационных инфекционных осложнений у онкологических больных. / Н.В. Дмитриева, И.Н. Петухова //Клин, антимикроб, химиотерапия.-1999.-Т. ! №1.-С. 12-17.

46. Дмитриева Н.В. Этиологическая структура и чувствительность к антибиотикам основных возбудителей инфекционных осложнений в онкологической клинике. / Н.В. Дмитриева, И.Н. Петухова, А.З. Смолянская // М.,1999: 67 с.

47. Дмитриева Н.В. Применение клиндамицина и нетилмицина для профилактики послеоперационной раневой инфекции у больных раком верхних дыхательных и пищеварительных путей. / Н.В. Дмитриева, И.Н. Петухова, O.K. Борисова // Тер. Арх.-1993.-№10.-С. 55-58.

48. Дмитриева Н.В. Антимикробная химиотерапия и профилактика инфекционных осложнений у онкологических больных: Автореф. дис. Д-ра. мед. наук. М., 1995.-39 с.

49. Дмитриева Н.В. Инфекционные осложнения у онкологической клинике. / Н.В. Дмитриева, И.Н. Петухова, А.З. Смолянская // Практическая онко-логия-2001 .-N1 .-С. 18-20.

50. Дмитриева Н.В. Антибиотикопрофилактика послеоперационных инфекционных осложнений у онкологических больных. / Н.В. Дмитриева, И.Н. Петухова // Клиническая антимикробная химиотерапия. -1999. Т. 1 №1-С. 12-17.

51. Езепчук Ю.В. Патогенность как функция биомолекул.//Ю.В. Езепчук.-М. :Медицина, 1985.-145 с.

52. Карпов О.И. Антибиотикопрофилактика имипинемом при абдоминальной гистерэктомии у онкологических больных. / О.И. Карпов, И.Ю. Ко-лесниченко, А.Х. Халиков и др. // Инфекции и антимикробная терапия.-1999.-№3.-С. 45-48.

53. Клясова Г.А. Диагностика и лечение грибковых инфекций у больных ге-мобластозами. Автореф. дисс. канд. мед. наук. Москва-1995.- 24 с.

54. Комаров Ф.Н. О неспецифической противовоспалительной фармакотерапии больных инфекционно-воспалительными заболеваниями органов дыхания / Ф.Н. Комаров, И.Г. Данилян, Ф.Е. Гуляев и др. // Тер. Архив.-1979.-№10.-С. 104-108.

55. Куваева И.Б. Микроэкология и иммунные нарушения у детей. Диетическая коррекция./ И.Б. Куваева, К.С. Ладодо // М.-1991. 123 С.

56. Кулсков В.И. Антибактериальная терапия инфекций мочевыводящих путей у беременных. // Клин, микроб, антимикроб. химиотерапия.-2004.-Т. 6. №3.-С. 218-223

57. Лопухов Л.В. Полимеразная цепная реакция в клинической микробиологической диагностике. / Л.В. Лопухов, М.В. Эйделыптейн // Клин, мик-робиол. и антмикроб. химиотер. 2000. Т. 2. №3 -С. 96-106.

58. Мамонтова Т.Н. Методические рекомендации по обнаружению и классификации R плазмид у шигелл / Т.Н. Мамонтова, С.С. Белокрысенко, Е.Д. Тихомиров, Ю.П. Солодовников, М.В. Турчинская // М. - 1983. -МЗ СССР.

59. Мавзютов А.Р. Молекулярно-генетические основы токсигенности условно-патогенных представителей Enterobacteriaceae: Автореф дис. . д-ра мед. наук / А.Р. Мавзютов. Челябинск. 2000. - 43 с.

60. Медицинская микробиология. Под ред. В.И. Покровского, O.K. Поздее-ва. М.: ГЭОТАР-Медицина, 1998. 183-92.

61. Митрохин С.Д. Инфекции половых органов: Современный алгоритм микробиологического исследования.// Инфекция и антимикробная терапия. Т. 4 №5.- 2002.-С. 24-26.

62. Митрохин С.Д. Цефепим в лечении тяжелых инфекций у онкологических больных.// Инфекции и антимикробная терапия. 2001; 3(3):82 89.

63. Митрохин С.Д. Значимость микробиологической лаборатории в современной системе инфекционного контроля многопрофильного стационара (в плане профилактики и лечения госпитальных инфекций).// Consilium medicum. 2002. T.l №4 - С. 42 - 45.

64. Михна М.Г. Оценка действия Т-активина на различные стадии созревания Т-лимфоцитов. / М.Г. Михна, И.В. Мирошниченко, М.Ф. Никифорова//Бюлл. экспер. биол. и мед.-1988.-№2.-С. 189-191.

65. Навашин С.М. Макро- и микроорганизм взаимодействие в инфекционном процессе при антибактериальной терапии.//Антибиотики и химиотерапия.- 1998.-№11,- С. 3-5.

66. Наврузов С.Н., Корнеева Т.К., Воробьев Г.И. и др.// Клин. мед. 1988.-№2.-С. 106-109.

67. Наумова О.В. Аутофлора человека в норме и патологии и ее коррекция./ О.В. Наумова, И.Н. Блохина, К.Я. Соколова. Е.Е. Белова, Т.И. Хабазова //- Горький, 1988.- С. 36-40.

68. Нехаев И.В. Сепсис у онкологических больных в раннем послеоперационном периоде: взгляд клинициста. / И.В. Нехаев, С.П. Свиридова, О.Г. Мазурина, А.В. Сытов, А.В. Ломидзе // Инфекция и атимикробная терапия. -1999. Т. 5.-№1.-С. 7-12.

69. Определитель бактерий Берджи. В 2-х т. пер с англ. //Под ред. Дж. Хоул-таидр. -М.-1997. -432 с.

70. Папко А.Г. К оценке иммунодепрессивного действия пенициллина у больных пневмонией / А.Г. Папко, Е.Н. Шмелев // Лаб. дело.-1983.-№11.-С. 33-35.

71. Перепанова Т.С. Неосложненная инфекция мочевых путей. / Т.С. Перепанова, Ю.В. Кудрявцев, П.Л. Хазан // Cons med. прил.-2003.-Т. 5 №1.-С. 14-17

72. Петровская В.Г. Микрофлора человека в норме и патологии. / В.Г. Петровская, О.П.Марко // -М.,-1976.- 98 с.

73. Петухова И.Н. Опыт применения имипенема/циластатина при инфекционных осложнениях онкологических больных. / И.Н. Петухова, Н.В. Дмитриева, О.М. Дронова// Ibid.-1993.-№1.- С. 27-30.

74. Пинегин Б.В. / Б.В.Пинегин, В.М. Коршунов, А.В. Бодрягина //Ж. мик-робиол.-1982.-№11.-С. 34-39.

75. Польнер А.А. Исследование влияния пенициллина на хемотаксис лейкоцитов периферической крови / А.А. Польнер, С.М. Орлов // М.,1987.-с.10- Рук. деп. ВНИИМ и МЗ СССР.-№12 С. 640-78.

76. Применение иммунокоррегирующей терапии при гемобластозах. //Тез. докл. III Всесоюзного съезда гематол. и трансфузиол.-Киров.-1991.-Т. 1.-С. 192

77. Руднов В.А. Современное клиническое значение синегнойной инфекции и возможностей её терапии у пациентов отделений реанимации / В.А. Руднов // Инф. и антимикроб, терапия.- Т. 4 №6.-2002. С. 45-49.

78. Сазыкин Ю.О. П.Эрлих и начало современной антимикробной химиотерапии. / Ю.О. Сазыкин //Антибиотики и химиотер.- 1999.- Т. 12 №44.- С. 5-14.

79. Саркисян Б.Г. Агамалян С.С., Элоян Д.И.и др. // Клин. мед. -1989.- №2.-С. 123-125.

80. Сергеев А.Ю. Кандидоз. Природа инфекции, механизмы агрессии и защиты, лабораторная диагностика, клиника и лечение. / А.Ю. Сергеев, Ю.В. Сергеев // М: Триада-Х,-2000.-472 с.

81. Сибиряк С.В. Иммуностимуляторы и аутоиммунитет.// Фармакол. и ток-сикол.-1990.-№3.-С. 67-72.

82. Сидоренко С.В. Бета-лактамные антибиотики /Сидоренко С.В., Яковлев С.В. //РМЖ.- 1997.-Т. 5 № 21 С. 1367-1381.

83. Сидоренко С.В. Инфекционный процесс как «диалог» между хозяином и паразитом / С.В. Сидоренко // Клин, микробиол. и антимикробная хи-миотерапия.-2001.-Т. 3 №4. С. 301-315.

84. Смолянская А.З. Природа устойчивости к антибактериальным препаратам / А.З. Смолянская, Т.Е. Егорова // Сб. Госпитальная инфекция и лекарственная устойчивость микроорганизмов. -М. 1992.-С. 65-67.

85. Соколов В.Ю. Антиинтерфероновая активность микроорганизмов / В.Ю.Соколов // Персистенция микроорганизмов. Куйбышев, 1990. - С. 83-93.

86. Соловых Г.Н., Бухарин О.В., Немцева Н.В.// Экология.-1994.-№6.-С.82-85.

87. Сомов Г.М. Сапрофитизм и паразитизм патогенных бактерий. Экологические аспекты./ Г.М. Сомов, В.Ю. Литвин //- Новосибирск, 1988.

88. Страчунский Л.С. Consilium medicum Экстра выпуск 2002. - С. 6-9.

89. Тимаков В.Д. Биологические и генетические характеристики бактерий рода Shigella / В.Д.Тимаков, В.Г.Петровская, В.М.Бондаренко. М., 1980.-210 с.

90. Туйгунов М.М. Роль Энтеротоксина бактерий рода Citrobacter в исходе взаимодействия «патоген-хозяин»: Автреферат д-ра. мед. наук. -Челябинск-2003. 41 с.

91. Тупицын Н.Н. Клиническое значение иммунофенотипа острых миелоб-ластных лейкозов. / Н.Н. Тупицын, А.В. Попа, И.Г. Маркина // Гематология и трансфузиология.-1999.-№3.-С. 3-8.

92. Хмелевская Г.В. Факторы патогенности некоторых условно-патогенных бактерий вызывающие диареи. / Г.В. Хмелевская, Л.В. Девтерева, Э.А. Яговкин // Ж. микробиол. 1990. - №4. - С. 97-101.

93. Чахава О.В. Паразитоценология на начальном этапе /Чахава О.В., Горская Е.М. //Тр. II Всес. Съезда паразитоценологов-Киев.- 1985. С. 229236.

94. Шабалин В.Н., Серова Л.Д. Клиническая иммуногематология //М: медицина, 1988-310 с.

95. Шубатидзе А.Э. Антибиотикочувствительность госпитальных штаммов стафилококков. / А.Э. Шубатидзе, И.А. Мараушвили, Т.Г. Габисония // Антибиотики и химиотерапия. 1995. - №8. - С. 23-26.

96. Яковлев С.В. Госпитальные инфекции, вызванные резистентными гра-мотрицательными микроорганизмами: клиническое значение и современные возможности терапии. / С.В. Яковлев //Инфекция и антимикробная терапия.-2004.- Т. 6 №4. С. 133-136.

97. Яковлев В.П. Клинико-лабораторное обоснование назначения цефо-перазон/сульбактама больным с тяжелыми госпитальными инфекциями /Яковлев В.П., Щавелев Д.Л., Яковлев С.В.//Инфекц. и антимикробная химиотерапия.-2002.-Т.4 №5. С. 56-62.

98. Ярбо Дж. У. Срочная медицинская помощь в онкологии. / Под ред. Дж. У. Ярбо, Р. С. Борнстейна. Пер. с англ. М., Медицина, 1985. С. 264 -91.1. Иностранная литература:

99. Aktories К. Rho proteins: targets for bacterial toxins. Trends Microbiol 1997;5:282-8.

100. Allesio M.et al. Interspecific plasmid transferand modification of heat stable enterotoxin expression by Klebsiella pneumoniae from infants with diarrhea/ M. Allesio, F. Albano, L. Tarralo, A. Guarino// Pediatr. Res.- 1993.-Vol. 33.-P. 205-208.

101. Alexander J.W., Boyce S.T., Badcock G.F., et al. //Ann. Surg.-1990.-V.212.-P.496-512.

102. Appelbaum P.C. Transductional analysis of nonmotile mutants in Proteus mirabilis / P.C. Appelbaum, O.W. Prozecky // T. of Gen. Microbiology. -1973.-77. -№1. P. 89-97.

103. Bagirova N. Pattern of fungal infectionsin patientswith hematologicals malignancies./ Bagirova N., Dronova O., Volkova M. //HIS-EHA Combined Haematology Congress., Amsterdam, The Netherlands, 4-8 July,-1998.-p.90.

104. Bauer M.E. Characterization of an RTX toxin Enterohaemorragic Escherichia coli 0157:H7// Bauer M.E., Welch R.A.//Methods enzymol.-1994.-V.325.-P.667-678

105. Beutin L. Enterohemolysin, a new type hemolysin produced by some strains of enteropathogenic E.coli (EPEC) / L. Beutin, J. Prada, S. Zamermann et al. // Zbl. Bakt. Hyg. A. -1988. -Bd.267. -S.576-88.

106. Bhakdi, S. Effects of Escherichia coli hemolysin on human monocytes. /Bhakdi, S., M. Muhly, S. Korom, and G. Schmidt.//J. Clin. Investig. 1990.85:1746-1753.

107. Blanco M. Serotypes, Virulence Genes, and Intimin Types of Shiga Toxin (Verotoxin)-Producing Escherichia coli Isolates from Healthy Sheep in Spain. /Blanco M.,. Blanco J. E, Mora A.//J.of Clin. Microbiol.- 2003.- Vol. 41, No. 4.-p. 1351-1356.

108. Boogaerts M.A. J Antimicrob Chemother 1995, 36, Suppl A, 167-78

109. Brion J.P. Etude progrective et comparative de deux protocoles antibio-therapie chez 66 malades neutropeniques febriles. Ceftazidim- vancomycine ticarcelline /Brion J.P., Bru J.P., Michaelet M. // Pressemed. 1988.-vol.4-№7.-p. 1964-1967.

110. Boyce TG. Escherichia coli 0157:H7 and the hemolytic-uremic syndrome. / Boyce TG, Swerdlow DL, Griffin PM. //N Engl J Med 1995;333:364-8.

111. Cavalieri, S. J. Escherichia coli alpha-hemolysin: characteristics and probable role in pathogenicity. /Cavalieri, S. J., G. A. Bohach, and I. S. Snyder.// Microbiol. Rev. -1984.-48:326-343.

112. Cavalieri, S. J. Effect of Escherichia coli alphahemolysin on human peripheral leukocyte viability in vitro./Cavalieri, S. J., and I. S. Snyder, infect. Immun.-1982.- 36:455-461.

113. Centers for Disease Control. Isolation of E.coli 0157:H7 from sporadic cases of hemorrhagic colitis United States. MMWR Morb Mortal Wkly Rep 1982;31:580-5.

114. Chambers S.T. Cystitis and urethral syndromes 11 In Armstrong D. Cohen J., editors.//Infect. Dis.-1999.-V.l.-P.1571-1578

115. Chong, C. Y. Infections in acute lymphoblastic leukaemia./ Chong, C. Y., A. M. Tan, and J. Lou. //Ann. Acad. Med. Singapore.-1998.-V.27-P.491-495.

116. ClarceA.I. The prevalence of gentamicin 2, -IV- acetyltransferase in the Peroteae and its rale in the O-acetylation of peptidoglycan./ A.I Clarce, D. Framci, W.I. Keenleuside // FEMS. Microbiol. Lett.-1996.-vol. 145-№12.-P.201-207.

117. Coetzee J.N. Fimbriae and Haemaglutining properties in strains of Proteus/ Coetzee J.N. Perhet G., Nheron J.J. //Nature(London)-1962.-V.196.-P.-497-498.

118. Collier RJ. ADP-ribosylating toxins and g proteins./ Collier RJ, In: Moss J, Vaughan M, editors.// Am Soc Microbiol; 1990.- p.3-19.

119. Cooke E.M. Ewins S., Shooter R.A.// Brit. Med. J.-1969.-№l-P.593-595.

120. Cooke, E. M. Properties of strains of Escherichia coli isolated from faeces of patients with ulcerative colitis, patients with acute diarrhea and normal persons.//J. Pathol. Bacteriol. -1968-.95:101-113.

121. Cooke, E. M. Properties of strains of Escherichia coli isolated from a variety of sources./Cooke, E. M., and S. P. Ewins.// J. Med. Microbiol. -1975.8:107-111.

122. Cordonnier, C. Cefepine/amikacin versus ceftazidime/amikacin as empirical therapy for febrile episodes in neutropenic patients: a comparative stu-dy./Cordonnier, C., R. Herbrecht, J. L. Pico, M. //Clin. Infect. Dis. -1997.-V.24-P.41-51.

123. Cullman W., Comparative evalution of orally active antibiotics against community-acquired pathogens a multi center study in five Mediterranean countries// J. Chemother.-1995.- V. 7.- P. 21-25

124. David G. The PapC usher forms an oligomeric channel: Implications for pilus biogenesis across the outer membrane/ David G. Thannasi, Evan T.

125. Saulino, Mary-Jane Lombardo, Robyn- Roth, John Heuser, Scott J.Hultgren. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1998 -V 95 - p. 3146-3151

126. Duquid J.P., Ocol D.C. Adhesive properties in Enterobacteriaceae.//In bac-teriae Adherence series 13.-V.6.-1980.-P. 185-217.

127. Eisner H.A. Fatal pulmonary hemorrhage in patients with acute leukemia and fulminant pneumonia caused by Stenotrophomonas maltophilia. /Eisner

128. H.A., Duhrsen U., Hollwitz В., Kaulfers P.M.,Hossfeed D.K.// Ann-hematal.-1997. Apr., 74(4): 155-161.

129. Endo Y. Site of action of a Vero toxin (VT2) from Escherichia coli. 0157:147 and Shiga toxin in eucaryotic ribosomes./Endo Y, Tsurngi K, Yutsucio T, Takeda Y, Ogasawara Y, Igarashi K.// Eur J Biochem 198;171:45-50.

130. Falbo V. Isolation and nucleotide sequence of the gene encoding cytotoxic necrotizing factor 1 of Escherichia coli. / Falbo V, Pace T, Picci L, Pizzi E, Caprioli A. //Infect Immun 1993 61: 4909-14.

131. Frasier ME. Crystal structure of the holotoxin from Shigella dysenteriae at 2.5 A resolution. / Frasier ME, Chernaia MM, Kozlov YV, James MNG.//Nature Structural Biol.- 1994.-1:59-64.

132. Gabriel E. Bacterial Adhesins: Common Themes and Variations in Architecture and Assembly/ Gabriel E. Soto, Scott J.Hultgren.// J. of Bacteriol. -1999 -V.181 N4-P. 1056-1071

133. Gadeberg, O.V. Cytotoxic effect of an alpha-hemolytic Escherichia coli strain on human blood monocytes and granulocytes in vitro./ Gadeberg, О. V.,

134. Orskov, and К. M. Rhodes. // Infect. Immun.- 1983.-41:358-364.

135. Gianella R.A. E.coli heat- stabile enterotoxins, gunilins and their receptors: whatare they and what do theydo?/J. Lab. Clin. Med.- 1995.- Vol. 125.- P. 173-81.

136. Gilbert DN.et al. The Sanford Guide to antimicrobial therapy. USA 1998; 136.

137. Giron R. Characterization of fimbriae produced by enteropathogenic E.coli /Giron R. A.S.Y. Ho Schoonik G.K.// J.Bacteriology.-1993.-v.l75.-P.7391-7403.

138. Given R. Peritonsillar abscess, retripharyngeal abscess, mediastinitis, and nonclostridial anaerobie myonecrosis a case report // R. Given, M.L. Vai-sanen, S.M. Finegold//Clin. Infect. Dis.-1993.-V.16.-P.299-303.

139. Goyal J. Studies on the mechanism of Escherichia coli heat-stable entero-toxin-induced diarrhoea in mice./ Goyal J, Ganguly NK, Mahajan RC, Garg UC, Walia BN.//Biochim Biophys Acta.- 1987.-№11;925(3):341-6.

140. Gregor R. Bacterial adherence in the pathogenesis of urinary tract infection a review/ Gregor R., Jack S.D.//Rev. Infect. Dis.-1987.-V.9.-№3-P.470-487.

141. Grouford J. Reduction by granulocyte colony- stimulating factor of fever and neutropenia / Grouford J., Ozer H., Stoller R., Johnsin D., Lyman G., Tabbara I., Kris M., //New end J. Med. 1991.-Vol.325.-№3-p.l64-170.

142. Hackford A. Polymicrobial intraabdominalinfection: medical /surgical therapy. Infections in surgery 1990; a(suppl 1): 40-6

143. Hilali F. Prevalence of Virulence Genes and Clonality in Escherichia coli Strains That Cause Bacteremia in Cancer Patients./ Hilali F.,Ryimy R.// Infect and Immun.-2000.- Vol. 68, No. 7-p. 3983-3989

144. Hoepelman A.I.M. Bacteriuria in men infected with HIV-l is related to their immune status (CD4+ cell count). / Hoepelman A.I.M, van Buren M., van den Broek J., Borleffs J.C.C //Aids 1992; 6:179-84.

145. Holmgren J. Action of cholera toxin and the prevention and treatment of cholera//J. Holmgren//Nature.-1981.- Vol.292.- P. 413-417.

146. Johnson J.R. P fimbriae and other virulence factors in E.coli urosepsis: association with patients' characteristics. / Johnson J.R., Roberts P.L., Stamm W.E.//J Infect Dis 1987; 156:225-9.

147. Jones R.N. Important and emerging betalactamose- mediatod resistantes in hospitallosed pathogens: the AmpC enzymes/ Jones R.N.// Diagn. Microbiol. Infect. Diseas-1998.-vol.31.-№3.-P.461-466.

148. Jorgenson, S. E. Studies on the origin of the alpha haemolysin produced by Escherichia coli. / Jorgenson, S. E., E. C. Short, H. J. Kurtz, H. K. Mussen, and G. K. Wu.//J. Med. Microbiol. -1975.-9:173-189.

149. Knutton, S. Actin accumulation at sites of bacterial adhesion to tissue culture cells: basis of a new diagnostic test for enteropathogenic Escherichia coli./Knutton, S., P. H. Williams, and A. S. McNeish.// Infect. Immun.- 1989.57:1290-1298.

150. Lally E.T. The interaction between RTX toxins and target cells/ Lally E.T., Hill R.B., Kieba J.R., Korostoff J.//Trends Microbiol.-1999.- V.7.-P.356-361

151. Lockman H. Nucleotide sequence analysis of the A2 and b subunits of the Vibrio cholerae enterotoxin / H. Lockman, J.B. Kaper// J. Biol.Chem.-1983.-Vol.258.-P. 13722-6.

152. Li JT, Lu Y, Hou J. et al.// Clin Inf Dis.- 1997.- 24.-p. 498-505

153. Lin CS. The detection and study on enterotoxigenic Escherichia coli in China// Lin CS, Zeng ZH, Zeng NM. Zhonghua Liu Xing Bing Xue Za Zhi. 1996 Oct;17(5):264-7.

154. Nealson, К. H., Piatt, T. & Hastings, J. W.// J. Bacteriol. -1970. 104, 313322.

155. Mackman, N. Functional characterization of acloned haemolysin determinant from E. coli of human origin, encoding information for the secretion of a 107L polypeptide./ Mackman, N., and I. B. Holland.// Mol. Gen. Genet. 1984.320:123-134

156. Mahlknecht U. Successful treatment of disseminated central nervous aspergillosis in a patient with acute myeloblastic leukemia. /Mahlknecht U., Lintig F., Mertelsmann R.//Leukemia and lymphoma. 1997; 27:191-4.

157. Mellata M. Role of Avian Pathogenic Escherichia coli Virulence Factors in Bacterial Interaction with Chicken Heterophils and Macrophages. /Mellata M., Maryvonne D., Lehoux В., Fairbrotherl J.//Infect. and Immun.- 2003.-Vol. 71, No. l.-p. 494-503.

158. Mellies, J. L., Elliott, S. J., Sperandio, V., Donnenberg, M. S. & Kaper, J. B. // Mol. Microbiol.-1999.- 33, 296-306

159. Mikhail M.S. Lower urinary tract dysfunction in pregnancy: a review /Mikhail M.S., Anyaegbunam A.// Obstet. Gynecol. Surv.-l995.-50: 675-683.

160. O-Brien AD. Escherichia coli 0157:H7 strains associated with hemorrhagic colitis in the United States produce a Shigella dysenteriae 1 (Shiga)like cytotoxin. /О-Brien AD, Lively ТА, Chen M, Rothman SW, Formal SB.//Lancet 1983; 1:702.

161. Oethinger M. Association of organic solvent tolerance and fluoroquinolone resistance in clinical isolates of Escherichia coli. /Oethinger M., Kern W.V., Goldman J.D., Levy SB.// J. of Antimicrob. Chem.-1998.-№ 41.-P. 111-114.

162. Orskov I., Orskov F. //Can J. Microbiol.-1992.-V. 38.-P.699-704.

163. Paton, J. C. Pathogenesis and diagnosis of Shiga toxin-producing Escherichia coli infections. /Paton, J. C., and A. W. Paton.// Clin. Microbiol. Rev.- 1998. 11:450-479.

164. Pauw B. Epidemiology and frequency of systemic fungal infections In book: Serious Candida infections: diagnosis, treatment, and prevention Ed /B.Pauw, G.Bodey 1998, p. 1-3.

165. Pfaller MA., Jones RN, Doern GV et al.//J. Clin Microbiol.-1998.-36(7).-p. 1886-96.

166. Pizzo P.A. Current issues in antibiotic primary management of the National cancer institute /Pizzo P.A.// J. Hosp. Infect.-I990.-Vol 15.-p.41-48/

167. Poolzobel B.L., Neudecker C.,Domizlaff J. et al. // Nutr. Cancer.-1996.-V.26.№3.-P.365-380.

168. Ragaieg R. Results and comlications of induction treatment of acute leucemia in chidren. A personal series of 79 cases (1988-1989). /Ragaieg R.,

169. Bertran Y., Mardini R., Manel A.M., Berthier J.C.//Pediatrie.-1992.-vol.47.-№l.-p.47-53.

170. Rahman M.M. The structure of the capsular polysaccharide from a swarming strain of pathogene Proteus vulgaris. Rahman M.M.,Guardpetter J.,Asokan K.,Carlson R.W.// Carbohydrat. Res.-1997.-№34.-P. 213-220

171. Ribaud P.// Eur. J. Cancer.-1997.-V.33.- P.50-54.

172. Richer H.M., Andremont A, Tanerede C., Pico J.L., Jarwis WR. Rev Infect. Dis.-1991.-13.-211-215

173. Rothbaum, R. A Clinicopathological study of enterocyte-adherent Escherichia coli: a cause of protracted diarrhea in infants. /Rothbaum, R., A. J. McAdams, R. Giannella, and J. C. Partin.//Gastroenterology -1982.-83:441-454.

174. Saha V. The treatment of Pseudomonas aeruginosa meningitis old regime or newer drugs? / Saha V., Stasfield R., Masterton R., Eden T.//Scand. J. Infect. Dis.- 1993.-vol.25-№l.-P.81-83.

175. Salonen J. Fungal colonisation and invasive fungal infections in patients with a hematological malignancy.// Medica-odontologica.- 2000.-T.47.-p. 3013-3014

176. Saurina G. Antimicrobial resistance in Enterobacteriaceae in Brooklyn, NY: epidemiology and relation to antibiotic usage patterns. /Saurina G., Quale J.M., Manikal V.M.//J Antimicrob Chemother 2000 Jun; 45(6): 895-8.

177. Saxena SK. Shiga toxin, Shiga-like toxin II variant, and ricin are all single-site RNA N-glycosidases of 28 S RNA when microinjected Xenopus oocytes. /Saxena SK, O-Brien AD, Ackerman KJ.// J Biol Chem 1989;264:596-601.

178. Schimpf S.C. Infections in the cancer patient-diagnosis, prevention and treatment. /Schimpf S.C.//Ibid.-1990.-2666-2675.

179. Scevola D, Marone P. Flora intestinale e salute dalla microbiologia alia clinica. /Scevola D, Marone P.//Milano, 2000; 120 p.

180. Sears C.L. Enteric bacterial toxins: mechanisms of action and lineage to intestinal secretion//C.L. Sears, J.B. Kaper// Microbiol. Reviews.-1996.-Vol.-60-P. 167-215.

181. Sears C.L. Enteric bacterial toxins: mechanisms of action and lineage to intestinal secretion//C.L. Sears, J.B. Kaper.//Microbiol. Rewiew.-1996.-V. 60.-P. 167-215.

182. Senior B.W., Loomes L.M., Kern M.A. The production and activity in vivo of Proteus mirabilis IgA protease in infections of the urinary tract. /Senior B.W., Loomes L.M., Kern M.A.// J. med. Microbiol. -1991.- №4.-P. 203-207.

183. So M. Molecular cloning of an E.coli plasmid determinant that encodes to the production of heat-stable enterotoxin / M. So, H.W. Royer, M. Bellach, S. Falkow // J. Bacterid. -1976. -Vol.128. -P.463-72.

184. Sixma TK. Redefined structure of Escherichia coli heat-labile enterotoxin, a close relative of cholera toxin. /Sixma TK, Kalk KH, van Zanten BA, Dauter Z, Kingma J, Witholt В //J Mol Biol.- 1993;230:890-918.

185. Song L. Structure of staphylococcal alpha-hemolysin, a heptameric transmembrane pore. /Song L, Hobaugh MR, Shustak C, Cheley S, Bayley H, Gouaux JE. //Science 1996;274:1859-66.

186. Spitzer E.D. Persistence of initial infection in recurrent Cryptococcus neo-formans meningitis / Spitzer E.D., Spitzer S.G., Freundlich L.F., Casadevall A.//Lancet.-1993 .-Vol.341 .-№45.-P.595-596

187. Stein PE. Crystal structure of the cell-binding В oligomer of verotoxin-1 from E coli. /Stein PE, Boodhoo A, Tyrell GT, Brunton J, Read RJ.//Nature -1992.-355:748-50.

188. Stein РЕ. The crystal structure of pertussis toxin. /Stein PE, Boodhoo A, Armstrong GD, Cockle SA, Klein MH, Read RJ. // Structure.- 1994.-2:45-57.

189. Suh J-K. Shiga toxin attacks bacterial ribosomes as effectively as eu-karyotic ribosomes. /Suh J-K, Hovde CJ, Robertus JD. //Biochemistry 1998;-37:9394-8.

190. Svanborg Eden, C., and P. de Man. Bacterial virulence in urinary tract./Svanborg Eden, C., and P. de Man.// Infect, immun. -1987.- 1:731-750.

191. Sznol M. Use of prefentiallyreplicating bacteria for the treatment of cancer. /Sznol M., Lin S., Bermudes D. // J. Clin invest.-2000.-105(8)-P.1027-1030.

192. Sulakvelidze A., Alavidze Z., Glenn Morris D.J. Bacteriophage Therapy. / Antimicrob. agents and chemoth. 2001. - Vol. 45. - N. 3. - P. 649-659.

193. TancreMe, C. Bacterial translocation and gramnegative bacteremia in patients with hematological malignancies. /TancreMe, C., and A. Andremont.// J. Infect. -1985.- Dis. 152:99-103.

194. Thomas Venetta S. Identification of Ure R binding sites in the Enterobac-teriaceae plasmid-encoded and P.mirabilisurease gene operons // Thomas Venetta S., M. Collins Carleen. // Mol. Microbiol.-1999.-Vol. 31.-№5.-p.1417-1428.

195. Todeschini G. Gram-negative septucemia in patients with hematologic ma-lignacies /Todeschini G., Vinante F., Benini F. // Eur. J. Cancer-1984. -Vol. 20 -№3.- 327-331.

196. Tomita T. Molecular biology of the pore-forming cytolysins from Staphylococcus aureus, alpha- and gamma-hemolysins and leukocidin. /Tomita T, Kamio Y.//Biosci. Biotechnol. Biocheml997;61:565-72.

197. Ulshen M. H. Pathogenesis of Escherichia coli gastroenteritis in man-another mechanism. /Ulshen, M. H., and J. L. Rallo.// N. Engl. J. Med.- 1980.302:99-101. VOL. 40, -2002 notes 297

198. Ungheri D. In-Vitro Susceptibility of Quinolon£-Resistant Clinical Isolates of Escherichia coli to Fosfomycin Trometamol /Ungheri D., Albini E., Bel-luco G.// J Chemother 2002; 14:237-40.

199. Welch R.A. Identification of two different hemolysin determinants in uro-pathogenic Proteus isolates /Welch R.A.// Infect. Immunol. 1987.-V. 55-P.2183-2190.

200. Wick M.J. Site of action of a Vero toxin VT(2) from E.coli 0157:H7 and Schiga-toxin in eucariotic ribosomes. /Wick M.J., Tsurugi K.,Jutsucio Т., Ta-ceda J., Ogasawara J., Jagarashi K.//Eur J. Biochem.-1998.-171:45-50.

201. Wick MJ. ADP-ribosylating toxins and g proteins./Wick MJ, Iglewski ВН. In: Moss J, Vaughan M, editors.// Am Soc Microbiol; 1990.p.l 1-43.

202. Yvonne M. Lee. P Pilus Assembly Motif Necessary for Activation of the CpxRA Pathway by PapE in Escherichia coli /Yvonne M. Lee, Patricia A. DiGiuseppe, Thomas J. Silhavy, Scott J. Hultgrenl. //J. of Bacteriol.-2004.-V. 186(13)-p. 4326-4337.