Особенности мутаций генов эпигенетической регуляции: ASXL1 и DNMT3A у больных миелодиспластическим синдромом тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 00.00.00, кандидат наук Липилкин Павел Викторович

• Липилкин Павел Викторович
• кандидат наук
• 2024

Оглавление диссертации кандидат наук Липилкин Павел Викторович

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Особенности заболеваемости и этиология МДС

1.1.1 Заболеваемость

1.1.2 Взаимосвязь этиологии и эпигенетических нарушений

1.2 Клиническая и лабораторная характеристика МДС

1.2.1 Диагностические критерии

1.2.2 Прогностические шкалы IPSS, IPSS-R, WPSS, LR-PSS и MDS-a

1.3 Молекулярно-генетическая характеристика МДС

1.3.1 Варианты эпигенетической регуляции

1.3.2 Роль мутаций в генах эпигенетической регуляции при МДС, ОМЛ и МПЗ

1.3.3 Лабораторное тестирование соматических мутаций эпигенетических регуляторов при МДС

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1 Характеристика исследуемых групп

2.1.1 Клинико-лабораторные обследования и забор биоматериала для молекулярно-генетических исследований

2.2 Молекулярно-генетические методы исследования

2.2.1 Выделение ДНК из периферической крови

2.2.2 Аллель-специфическая ПЦР для обнаружения мутации c.1934dupG в гене ASXL1

2.2.3 Рестрикционный анализ для обнаружения мутации R882H в гене DNMT3A

2.3 Очистка продуктов ПЦР для контрольного секвенирования и условия его проведения

2.4 Статистическая обработка данных

3.1 Адаптация к реальной клинической практике методики аллель-специфичной

ПЦР для обнаружения мутации c.1934dupG в гене ASXL1: дизайн праймеров, оптимизация проведения условий ПЦР

3.2 Результаты рестрикционного анализа мутации R882H в гене DNMT3A в исследуемых группах и проведение HRM-анализа

3.2.1 Оптимизация протокола рестрикционного анализа из работы Berenstem и соавт

3.2.2 HRM-анализ и его сравнение с рестрикционным анализом на химически синтезированной ДНК с различной концентрацией мутации R882H в гене DNMT3A

3.2.3 Разработка праймеров для HRM-анализа

3.2.4 Результаты HRM-анализа

3.3 Результаты сравнительного секвенирования по Сэнгеру

3.4 Результаты аллель-специфической ПЦР мутации c.1934dupG в гене ASXL1 у исследуемых групп

3.5 Анализ общей выживаемости пациентов с МДС

3.6 Анализ влияния мутации c.1934dupG в гене ASXL1 на прогноз и течение МДС

ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

ПУБЛИКАЦИИ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

ПЕРЕЧЕНЬ СОКРАЩЕНИЙ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

ПРИЛОЖЕНИЕ А. Наиболее изученные гены эпигенетической регуляции и частота их соматических мутаций

ПРИЛОЖЕНИЕ Б. Классификация МДС ВОЗ,

ПРИЛОЖЕНИЕ В. Пересмотренная прогностическая шкала IPSS-R (P.L.

Greenberg и соавт., 2012)

ПРИЛОЖЕНИЕ Г. Прогностическая шкала WPSS (L. Malcovati и соавт., 2011) 144 ПРИЛОЖЕНИЕ Д. Шкала коморбидности MDS-CI (Porta M. Della и соавт., 2011)

ПРИЛОЖЕНИЕ Е. Протоколы выделения ДНК из цельной венозной крови

ВВЕДЕНИЕ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Особенности мутаций генов эпигенетической регуляции: ASXL1 и DNMT3A у больных миелодиспластическим синдромом»

Актуальность темы исследования

Миелодиспластический синдром (МДС) (МКБ-046) - группа клональных заболеваний, которые возникают после воздействия негативных факторов на плюрипотентные гемопоэтические стволовые клетки (ПГСК), что приводит к их соматическим мутациям. Появление таких мутаций определяет формирование патологического клона гемопоэтических клеток за счет выключения в них процессов апоптоза и может привести к трансформации МДС в острый миелоидный лейкоз (ОМЛ), помимо этого, нарушения гемопоэза приводят к интенсификации апоптоза нормальных кроветворных клеток, формируя цитопении в периферической крови [1]. Наиболее частыми причинами смерти больных МДС являются последствия цитопении (инфекции, геморрагические осложнения), лейкозные поражения внутренних органов [2,3]. Наиболее трудной в диагностике и определении прогноза заболевания является группа больных МДС с нормальным кариотипом клеток красного костного мозга (КМ), что подтверждает вариабельность общей выживаемости этого контингента пациентов [4]. Диагностика МДС в большинстве случаев вызывает трудности, так как является результатом исключения других патологических состояний, сопровождающихся гемопоэтическими нарушениями и цитопенией в периферической крови. Наибольшие диагностические и прогностические сложности возникают в группе больных МДС с нормальным кариотипом клеток КМ, что подтверждает и вариабельность общей выживаемости этого контингента пациентов [5].

Ряд авторов предполагают, что в формировании патогенеза и клинической манифестации МДС важная роль отводится эпигенетическим нарушениям [6,7]. При этом нет единого консенсуса во мнении о том, какие нарушения (генетические или эпигенетические) в гемопоэтических клетках являются значимыми для изучения, так как клональная эволюция заболевания сопровождается совместным их наличием. Поэтому установить превалирующее влияние генетических или

эпигенетических нарушений на особенности течения МДС независимо друг от друга на сегодня не представляется возможным.

Эпигенетическое профилирование МДС может предоставить широкое понимание этиологии, патогенеза и закономерностей трансформации этого заболевания в ОМЛ.

Несмотря на наличие исследований в этой области, по-прежнему неизвестно, какие именно мутации в генах эпигенетической регуляции формируют особенности течения МДС [8]. Некоторые мутации генов эпигенетической регуляции (TET2, DNMT3A, ANSXL1) не всегда специфичны для МДС, так как могут встречаться при Ph-негативных миелопролиферативных заболеваниях (МПЗ) и, по мнению некоторых исследователей, определяют риск трансформации в ОМЛ [9,10].

Есть данные о соматических мутациях кроветворных клеток при МДС, что явилось попыткой создания новых прогностических маркёров этого заболевания [11,12], но не позволило значимо объективизировать прогнозирование этого патологического процесса.

Исследование C. A. Cargo и соавт. (2015) эпигенетического профиля в когорте пациентов с клональными нарушениями гемопоэза неопределенного потенциала (CHIP) показало ассоциацию эпигенетических нарушений со снижением общей выживаемости, но с неопределённой клинической точностью ввиду отсутствия контрольной группы [13]. Анализ мутационного ландшафта при МДС показал, что чаще всего можно обнаружить мутации в генах эпигенетической регуляции TET2, DNMT3A, ASXL1, но с наибольшей прогностической значимостью и возможностью выделения доминирующей мутации в генах DNMT3A и ASXL1 [14].

Таким образом, мутации генов DNMT3A и ASXL1, участвующих в эпигенетической регуляции функций кроветворных клеток и, вероятно, определяющих патогенез МДС, не являются достаточно изученными для широкого

применения в клинической практике, но возможность использования в комплексной диагностике и прогнозировании особенностей течения МДС остаётся и имеет как научный, так и практический интерес [15-17].

Актуальным является определение взаимосвязи точечных мутаций в генах эпигенетической регуляции DNMT3A и ASXL1 с прогнозом и тяжестью течения МДС, а также с трансформацией заболевания в ОМЛ и доработка лабораторной идентификации точечных мутаций.

Степень разработанности темы

За последние годы были достигнуты значительные успехи в исследовании механизмов развития МДС в части определения сопутствующих различных генетических нарушений. Но несмотря на то, что есть научные данные о распространенности и некоторой роли эпигенетических нарушений при МДС, практически отсутствуют достоверные данные о конкретном влиянии отдельных частых мутаций в эпигенетических регуляторах (или отсутствии влияния) на клинические особенности и прогноз заболевания.

Цель исследования: определить значимость различных методов выявления мутаций в генах, ответственных за метилирование ДНК (миссенс-мутация c.2645G>A ^882Н) в гене DNMT3A) и ремоделирование хроматина (мутация со сдвигом рамки считывания c.1934dupG в гене ASXL1), для диагностики и прогнозирования МДС.

Задачи исследования:

1. Адаптировать к реальной клинической практике и модифицировать методики молекулярно-генетического исследования венозной крови по детекции мутаций R882H в гене DNMT3A и c.1934dupG в гене ASXL1, а также сопоставить их с результатами секвенирования по Сэнгеру.

2. Выполнить при помощи модифицированных методик молекулярно-генетические исследования венозной крови у больных МДС, ОМЛ, МПЗ, а также у

лиц без гематологической патологии на наличие мутаций R882H в гене DNMT3A и c.1934dupG в гене ASXL1.

3. Проанализировать полученные в ходе исследования преимущества и недостатки методик молекулярно-генетического исследования венозной крови по детекции мутаций R882H в гене DNMT3A и c.1934dupG в гене ASXL1 и определить потенциал их лабораторного использования.

4. Оценить возможное влияние мутаций R882H в гене DNMT3A и c.1934dupG в гене ASXL1 на общую выживаемость и особенности течения МДС.

5. Разработать практические рекомендации по оптимизации клинико-лабораторной диагностики мутаций R882H в гене DNMT3A и c.1934dupG в гене ASXL1 с целью диагностики и прогнозирования МДС.

Научная новизна исследования: впервые определена роль мутаций R882H в гене DNMT3A и c.1934dupG в гене ASXL1 в формировании особенностей течения МДС. Исследована концепция прогнозирования тяжести течения МДС, основанная на молекулярно-генетической диагностике генных мутаций, которая может объективизировать риски у пациентов с этой патологией.

Научно обоснована клиническая информативность исследования ДНК из клеток венозной крови при помощи методик молекулярно-генетического выявления соматических мутаций R882H в гене DNMT3A и c.1934dupG в гене ASXL1, а также выявлены закономерности, позволяющие предположить их связи со степенью тяжести и особенностями течения МДС. Сопоставлены разные способы ПЦР-анализа мутации R882H в гене DNMT3A, оценены их качественные характеристики.

Было установлено, что мутация c.1934dupG в гене ASXL1 не является самостоятельным прогностическим фактором МДС.

Практическая значимость работы

В проведенном исследовании внедрены методики определения мутаций R882H в гене DNMT3A и c.1934dupG в гене ASXL1 при помощи ПЦР в реальном времени. Разработаны практические рекомендации определения мутаций R882H в гене DNMT3A и c.1934dupG в гене ASXL1, как возможных дополнительных

факторов прогноза МДС, что позволит оптимизировать молекулярно-генетические исследования в реальной клинической практике

Методология и методы исследования:

Диссертационная работа выполнена на базе ФГБОУ ВО РостГМУ Минздрава России и была одобрена Локальным независимым этическим комитетом (протокол №14/20 от 24 сентября 2020г.). В работе были использованы клинические, лабораторные и статистические методы исследования.

Основные научные положения, выносимые на защиту:

1. Определён предел обнаружения мутации R882H в гене DNMT3A для НЯМ-анализа - 40 %, а для рестрикционного анализа - в 20 % мутантной ДНК.

2. Установлено, что мутация R882H в гене DNMT3A отсутствует у выбранных пациентов с МДС, проживающих в Южном федеральном округе и Северо-Кавказском федеральном округе.

3. Определено, что расположение мутации с. 1934dupG в полигуаниновом участке гена ASXL1 снижает вероятность её идентификации при секвенировании по Сэнгеру.

4. Обнаружено, что мутация со сдвигом рамки считывания c.1934dupG в гене ASXL1 встречается чаще, чем совокупно все мутации в гене ASXL1 и наблюдалась у 56% пациентов с МДС.

5. Установлено, что мутация с. 1934dupG в гене ASXL1 встречается во всех вариантах МДС, чаще у мужчин и не является признаком тяжёлого течения заболевания или плохого прогноза.

Степень достоверности и апробация результатов

Основные положения диссертационной работы и результаты, полученные автором, были представлены и доложены на научных мероприятиях:

1. Научно-практическая конференция ученых России и Хорватии (4 октября 2019, Москва).

2. VII Международная конференция молодых ученых: биофизиков, биотехнологов, молекулярных биологов и вирусологов (27-29 октября 2020 г., Новосибирск.

3. Школа-конференция: генетические технологии в фундаментальных и прикладных исследованиях (2-4 декабря 2020 г., Москва).

4. IV Международный симпозиум «Единое здоровье» (28 апреля 2021 г., Ростов-на-Дону).

5. The EHA 2021 Virtual Congress (9-17 июня 2021 г., Гаага).

6. European Human Genetics Conference (28-31 августа 2021г., Вена).

7. 8-я итоговая научная сессия молодых учёных, проводимая в рамках XI Всероссийской научно-практической конференции «Непрерывное образование в России: состояние и перспективы» (29 сентября 2021г., Ростов-на-Дону).

8. 9-я итоговая научная сессия молодых учёных РостГМУ (19 декабря 2022г., Ростов-на-Дону).

9. Межрегиональная научно-практическая конференция «Оптимизация диагностики и лечения заболеваний системы крови» (25-26 ноября 2022 г., Ростов-на-Дону).

10. Выступление на заседании кафедральной конференции (27 февраля 2023 г., Ростов-на-Дону).

11. II Международный ЕвроАзиатский Форум врачей внутренней медицины (15-16 ноября 2023 г., Уфа).

По теме диссертации опубликованы 15 печатных работ, из них - 1 в журналах, рекомендованных ВАК РФ, 1 в международных базах Scopus/Web of science, 1 патент РФ.

Внедрение результатов исследования

Доработанные методики определения мутаций R882H в гене DNMT3A и c.1934dupG в гене ASXL1 используются в научно-исследовательской деятельности Академии биологии и биотехнологии им. Д. И. Ивановского ЮФУ. Используются при чтении лекций и проведении практических занятий кафедр «Биоинженерия» и

«Фундаментальная медицина» Донского государственного технического университета. Применяются в клинической работе гематологического отделения клиники при ФГБОУ ВО РостГМУ Минздрава России.

Личный вклад автора

Автор совместно с научным руководителем участвовал в выборе направления исследования и темы. Лично автором проведены анализ литературных источников, планирование исследования, постановка задач, сбор биологического материала, доработка методик молекулярно-генетического исследования венозной крови, ведение первичной документации и анализ информации из историй болезни, статистическая обработка и обобщение полученных результатов.

Структура и объем диссертации

Структура диссертации включает разделы: введение, обзор литературы, материалы и методы исследования, результаты, обсуждение, выводы, практические рекомендации, список литературы и приложения. Объём диссертации составляет 147 страниц машинописного текста и включает 22 рисунка, 29 таблиц, 229 источников литературы и 6 приложений.

Благодарно сти

Автор выражает огромную благодарность младшему научному сотруднику Академии биологии и биотехнологии им. Д. И. Ивановского ЮФУ Кулаевой Елизавете Дмитриевне за помощь на всех этапах выполнения научных исследований.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Особенности заболеваемости и этиология МДС

1.1.1 Заболеваемость

В Российской Федерации отсутствуют точные данные о заболеваемости МДС [18]. Главным эпидемиологическим критерием МДС считается плохой прогноз по 5-летней относительной выживаемости (<50 %), что обусловлено модифицируемыми и не модифицируемыми факторами риска, пожилым, как правило, возрастом пациентов и сопутствующей патологией [19,20]. Мужчины болеют чаще женщин [21]. По данным регистра программы эпиднадзора (SEER) Национального института рака Соединенных Штатов Америки (NCI), большинство случаев МДС обнаруживаются у пациентов от 60 лет и старше (медиана возраста -76 лет) на 2021 год [22,23].

Изначально МДС считался орфанным заболеванием. Так, в 1973 году в США было зарегистрировано лишь 150 случаев специфического состояния дисмиелопоэза, предшествующего ОМЛ [24]. Первые данные об особенностях заболеваемости населения МДС были опубликованы в 1990 году [25]. Причём тогда установили важные характеристики пациентов с этой патологией: пожилой и старческий возраст, мужчины болели чаще женщин. Была предложена числовая прогностическая система «Bournemouth scoring system», которая указывала совокупный риск в зависимости от уровня гемоглобина, числа нейтрофилов, тромбоцитов и бластных клеток в КМ. Несколько позднее в исследовании Aul C. и соавт. применили критерии Франко-Американо-Британской экспертной группы (классификация FAB) и определили, что точное число случаев МДС неизвестно, потому что долгий промежуток времени не существовало объективных диагностических критериев этого заболевания [26]. При этом исследователям удалось разработать собственную версию числовой прогностической системы МДС «Dusseldorf scoring system», которая отличалась от «Bournemouth scoring system» дополнительным учётом уровня лактатдегидрогеназы сыворотки крови (ЛДГ) [27].

В 2001 году ВОЗ предложит первую единую классификацию МДС на основе ранее существовавшей классификации FAB с последующим её пересмотром в 2008 году [28,29]. Позже, согласно классификационным критериям ВОЗ 2008 года, был проведён фундаментальный анализ заболеваемости МДС в Дюссельдорфе [30], где только 5,8 % пациентов были моложе 50 лет, а самая высокая заболеваемость была выявлена в возрастной группе от 80 до 90 лет. Важное уточнение данных было представлено в исследовании Strom S. и соавт., а именно учёт МДС у детей [31]. Однако фактическая заболеваемость МДС в отдельных странах, как и во всем мире, неизвестна и её текущую оценку по данным разных авторов широко варьируют: от 10 000 до 30 000-55 000 новых случаев в год [32,33].

МДС встречается во всем мире и везде имеет схожую характеристику заболеваемости. Обзор данных Великобритании выявил колебания заболеваемости МДС [34]. Например, при использовании стандарта регистра до 1996 года [35], то есть, когда МДС не входил в онкологические регистры, показатель заболеваемости оказался ниже практически в 2,5 раза, чем при использовании регистра с включением МДС в онкологические заболеваний при расчёте на 100 000 населения.

Точных эпидемиологических данных по заболеваемости МДС в Российской Федерации не представлено, хотя отдельные клинические случаи или наблюдения в лечебно-профилактических учреждениях, описанные исследователями, демонстрируют однородную с зарубежными данными характеристику пациентов.

1.1.2 Взаимосвязь этиологии и эпигенетических нарушений

Этиология МДС до настоящего времени остается неизвестной. Считается, что МДС является полиэтиологичным заболеванием. Развитию этой патологии предшествует реализация генетически обусловленной предрасположенности к факторам окружающей среды, которые каскадом запускают патологические процессы, воздействующие на геном ПГСК. До настоящего времени не разработан способ предотвращения развития и прогрессирования МДС и любые предлагаемые исследователями профилактические меры являются обобщёнными, хотя часть факторов риска являются модифицируемыми.

У молодых пациентов и детей необходимо принимать во внимание состояния с наследственными нарушениями гемопоэза. Анализ доступной литературы позволяет констатировать, что у пожилых пациентов МДС возникает на фоне совокупных факторов риска или приобретённых заболеваний крови и носит стохастический характер [36].

ПГСК участвуют в поддержании необходимого количества клеток крови за счет асимметричного деления и однонаправленной дифференциации [37,38]. Активное деление одной ПГСК может привести к вытеснению другой. Такая конкуренция в итоге может формировать участок (очаг) в КМ, который теряет клоны нормальных ПГСК, в то время как оставшиеся в участке клоны с генетическими нарушениями становятся все многочисленнее [39,40]. Риск развития и прогрессии МДС обусловлен генетическими, эпигенетическими и иммунными изменениями в ПГСК, которые приводят к формированию опухолевых клонов в КМ, менее чувствительных к регулирующим факторам (1Ь 3 и ГЬ 6, гранулоцитарные и макрофагальные колониестимулирующие факторы и т.д.), что закономерно повышает процессы апоптоза в зрелых клетках периферической крови [41,42].

Эпигенетические изменения экспрессии ДНК происходят без изменения генотипа за счёт внегеномных механизмов. Роль таких эпигенетических механизмов в процессах развития организма человека проявляется на стволовых клетках, ДНК которых одинаковы, но при этом в результате их пролиферации и дозревания возникает множество различающихся между собой специализированных клеток организма человека. Выявлено, что приобретенные в онтогенезе эпигенетические модификации, которые не всегда доброкачественны, могут передаваться по наследству, влияя на фенотипические проявления, у ближайших двух поколений [43].

В целом эпигенетический контроль поддерживает идентичность клеток и их репрограммирование. Исследования в области онкологии преимущественно сосредоточены на изучении нарушений разных эпигенетических механизмов

реализации, которые способствуют онкогенезу и ведут к приобретению ключевых признаков злокачественной опухоли [44]. При этом изучение реакций метилирования является преимущественным, поскольку такие реакции охватывают геном и протеом человека, в то время как ацетилирование происходит только в протеоме.

Рядом исследователей было выявлено потенциальное клиническое значение - нарушения посттрансляционной модификации гистонов при Т-клеточных лимфомах, что стало основанием для разработки эпигенетической терапии [45]. Обнаружено, что все малые РНК, которые вовлечены в процессы пролиферации, дифференцировки и апоптоза клеток, функционируют на основе механизма РНК-интерференции и их экспрессия сама по себе различная в тканях и может зависеть от сопутствующего патологического процесса [46].

Первое, с чем связывали причину возникновения МДС, было использование химиотерапии (особенно алкилирующие агенты или ингибиторы топоизомеразы) и\или радиотерапии в онкологии [47], которые улучшали выживаемость при злокачественных новообразованиях. Но эти методы лечения порой имели непреднамеренный побочный эффект индукции вторичного МДС, в том числе у лиц молодого возраста и детей. Латентный период для вторичного МДС после воздействия алкилирующих агентов или лучевой терапии составляет от 5 до 10 лет, и риск дозозависимый [48,49].

Рядом исследователей зарегистрирована корреляция возникновения МДС с воздействием некоторых химических агентов, таких как бензол [50,51], причём связь возрастала с увеличением интенсивности и количества лет воздействия, и некоторые авторы [52-55] сообщали о связи между пестицидами, гербицидами, а также высоким уровнем риска последующей трансформации МДС в ОМЛ. С другой стороны, эти вещества являются всеобщими канцерогенами и заведомо не могут быть специфическими для возникновения МДС, но, вероятно, могут нести негативное влияние на эпигенетический контроль кроветворных клеток.

В некоторых исследованиях была установлена ассоциация между табакокурением и развитием МДС [56,57], а также хромосомными аберрациями (делеции 5q и 7q) [58-60]. При анализе риска возникновения МДС от табакокурения и употребления алкоголя результаты были противоречивыми [61], поэтому нельзя утверждать наличие причинно-следственной связи между данными вредными привычками и наличием МДС. Однако МДС чаще встречается у мужчин, чем у женщин. Это может быть связано с тем, что прошлые поколения мужчин чаще курили и подвергались воздействию негативных условий труда (химических и физических факторов), что не противоречит сохранению негативных эпигенетических модификаций в последующих поколениях, несмотря на текущий образ жизни.

Редкие семейные случаи МДС были описаны в связи с делецией 5q или 7q, а также трисомией 8 хромосомы [62,63]. Особую категорию риска возникновения МДС составляют люди с нарушением гемопоэза на фоне гемоконтактных вирусных и бактериальных инфекций [64-68].

Для МДС в настоящее время не установлено различий в заболеваемости в зависимости от социальной идентичности (расовой и географической). Но в странах Восточной Азии регистрируется большее количество пациентов с хромосомными аномалиями (трисомия 8 хромосомы) [69-71].

Анемия, индуцируемая хроническим заболеванием (АХЗ), приводит к снижению физиологических уровней эритропоэтина и развитию гематологических злокачественных заболеваний [72]. Известно, что заболеваемость АХЗ, как и МДС, увеличивается с возрастом [73], а патогенез базируется на угнетении эритропоэза цитокинами: ^N-7, TGF-P и TNF-a [74]. Сам ^N-7 снижает количество и активность эритропоэтина, а также снижает экспрессию фактора роста стволовых клеток (SCF) [75,76]. Очевидно, что анемия в таких ситуациях сама по себе потенцирует гипоксию тканей, в том числе КМ (как кроветворных, так и стромальных клеток). Причём гипоксия является сопутствующим патологическим процессом при злокачественных заболеваниях [77,78]. Большинство больных МДС

имеют устойчивую к терапии эритропоэз-стимулирующими компонентами анемию [79].

Таким образом, можно выделить следующие факторы риска возникновения МДС с точки зрения влияния на эпигенетическую модификацию: пожилой и старческий возраст, мужской пол, наличие влияния в прошлых поколениях негативных условий труда и окружающей среды или определённых хронических инфекционных, гематологических заболеваний.

1.2 Клиническая и лабораторная характеристика МДС

1.2.1 Диагностические критерии

Необходимые диагностические критерии МДС [80] приведены в таблице 1. Таблица 1 - Диагностические критерии МДС ^геепЬе^ Р. L. и соавт., 2016)

Критерий Характеристика

Обязательный - регистрируемые анемии или цитопении более 6 месяцев

Критерий Характеристика

Решающий - дисплазия КМ не менее 10 % от всех клеток или 15 % кольцевых форм сидеробластов, или 5-19 % бластных клеток; - обнаружение цитогенетических нарушений (трисомия по 8 хромосоме, делеция 7q, 5q и 20q)

Дополнительный - молекулярно-генетические маркёры и иммунофенотипирование бластных клеток КМ

Любая цитопения клеток крови может соответствовать манифестации МДС. Гораздо важнее, чем степень цитопении - их продолжительность, особенно в группах МДС низкого риска, без четких цитогенетических или молекулярно-генетических особенностей - в этих случаях цитопения должна присутствовать не менее 6 месяцев для более достоверной диагностики [81]. Существующие методы лабораторной диагностики однозначно несут пользу для объективной верификации и контроля МДС. И всё же, несмотря на имеющиеся достижения в исследовании патогенеза и этиологии МДС, по-прежнему остаётся доля субъективности врача и применяемых им методов. Так, в исследовании Hods A. и соавт. [82] пришли к выводу о том, что с определённой частотой встречаются расхождения результата

расчёта бластов биоптата КМ с имеющимся цифровым эталоном, и это приводит к неверной интерпретации диагноза МДС или ОМЛ. Поскольку один и тот же врач может интерпретировать один и тот же препарат по-разному, необходимо принимать во внимание, что подсчёт бластов в аспирате КМ имеет значение в дифференциальной диагностике МДС и ОМЛ.

Более того, дисплазия КМ не обязательно сопровождается изменениями в периферической крови или наоборот, что негативно отражается на возможности скрининга при использовании рутинных гематологических исследований. У некоторых пациентов с МДС может присутствовать цитопения в периферической крови, но дисплазия КМ или аномалии кариотипа могут полностью отсутствовать. Это пациенты с идиопатической цитопенией неопределенного значения (ICUS) [83,84], которая проявляется анемией или нейтропенией, или тромбоцитопенией, или панцитопенией. Исход ICUS в большинстве случаев не ясен, но возможна эволюция в МДС [85,86]. С другой стороны, известны случаи с дисплазиями выше, чем в 10 % клеток КМ, но без цитопении в периферической крови. Этих пациентов относят к группе больных с идиопатической дисплазией неопределенного значения (IDUS). IDUS определены как реактивные незлокачественные состояния, но небольшая часть их может эволюционировать до МДС, ОМЛ или Ph- негативных МПЗ. Как только у пациента с ICUS развивается дисплазия или появляется аномалия кариотипа, диагноз верифицируется как МДС, и аналогично, когда пациент с IDUS приобретает цитопению в периферической крови (например, анемию) [87].

При этом, определяемые сегодня при МДС генетические нарушения, с помощью разных молекулярно-генетических методов, не являются самостоятельным диагностическим критерием, и их клиническая роль остаётся до конца неизученной.

1.2.2 Прогностические шкалы IPSS, IPSS-R, WPSS, LR-PSS и MDS-CI

На основе эпидемиологических данных пациентов с МДС можно условно разделить по возрасту на молодых и пожилых. Целью лечения у молодых является

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Липилкин Павел Викторович, 2024 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Makishima H. Sequential acquisition of mutations in myelodysplastic syndromes / H. Makishima // Rinsho Ketsueki. - 2017. - Т. 58, № 10. - С. 1828-1837. -DOI: 10.11406/rinketsu.58.1828

2. Грицаев С.В. Трансформация вторичного миелодиспластического синдрома в атипичный хронический миелолейкоз у больной острым миелоидным лейкозом / С.В. Грицаев, И.И. Кострома, И.М. Запреева и соавт. // Терапевтический архив. - 2016. - Т. 88, № 7. - С. 104-107. ISSN 2309-5342

3. Arber D.A. The 2016 revision to the World Health Organization classification of myeloid neoplasms and acute leukemia / D.A. Arber, A. Orazi, R. Hasserjian et al. // Blood. - 2016. -Т. 12, № 720. - С. 2391-2405. - DOI: 10.1182/blood-2016-03-643544

4. Hasle H. International prognostic scoring system (IPSS) for childhood MDS and JMML / H. Hasle, I. Baumann, E. Bergstrasser et al. // Leukemia. - 2004. - Т. 18, №12. - С. 2008-2013. - DOI: 10.1038/sj.leu.2403489

5. Abaigar M. Prognostic impact of the number of methylated genes in myelodysplastic syndromes and acute myeloid leukemias treated with azacytidine / M. Abaigar, F. Ramos, R. Benito et al. // Annals of Hematology. - 2013. -Т. 92, № 11. - С. 1543-1552. - DOI:10.1007/s00277-013-1799-9.

6. Heuser, M. Epigenetics in myelodysplastic syndromes / Heuser, M., Yun, H., & Thol, F. // Seminars in Cancer Biology. - 2018. - №51. - С. 170-173. - DOI: 10.1016/j.semcancer.2017.07.009

7. Malcovati L. European Leukemia Net. Diagnosis and treatment of primary myelodysplastic syndromes in adults: recommendations from the European LeukemiaNet / L. Malcovati, E. Hellström-Lindberg, D. Bowen et al. // Blood. -2013. - Т. 122, №17. - С. 2943-2964. - DOI: 10.1182/blood-2013-03-492884

8. Jhanwar, S.C. Genetic and epigenetic pathways in myelodysplastic syndromes: A brief overview / S.C. Jhanwar // Advances in Biological Regulation. -2015. - №58. - С. 34-35. - DOI: 10.1016/jjbior.2014.11.002

9. Pati H. Myelodysplastic Syndrome/Myeloproliferative Neoplasm (MDS/MPN) Overlap Syndromes: Molecular Pathogenetic Mechanisms and Their Implications / H. Pati, K. Kundil Veetil // Indian Journal of Hematology and Blood Transfusion. - 2019. - Т. 35, №1. - С. 7-10. - DOI: 10.1007/s12288-019-01084-y

10. Odenike O. Myelodysplastic syndrome and myelodysplastic/myeloprolifera tive neoplasms: an update on risk stratification, molecular genetics, and therapeutic approaches including allogeneic hematopoietic stem cell transplantation / O. Odenike, F. Onida, E. Padron // American Society of Clinical Oncology educational book. American Society of Clinical Oncology. Annual Meeting. - 2015. - С. 398-412. - DOI: 10.14694/EdBook_AM.2015.35.e398

11. Ковригина, А. М. Пересмотренная Классификация ВОЗ опухолей гемопоэтической и лимфоидной ткани, 2017 (4-е издание): миелоидные неоплазии / А. М. Ковригина // Архив патологии. - 2018. - № 6. - С. 43-49. - DOI: 10.17116/patol20188006143

12. Swerdlow S. WHO Classification of Haematopoietic and Lymphoid Tissues.

- 2017. ISBN- 978-9-28-324494-3

13. Cargo, C. A. Targeted sequencing identifies patients with preclinical MDS at high risk of disease progression / C.A. Cargo, N. Rowbotham, P. Evans et al. // Blood.

- 2015. -Т. 126, № 21. - С. 2362-2365. - DOI: 10.1182/blood-2015-08-663237

14. Malcovati, L. The genomic landscape of myeloid neoplasms with myelodysplasia and its clinical implications / L. Malcovati, I. Ambaglio, C. Elena // Current Opinion in Oncology. - 2015. - Т.27, № 6. - С. 552-556. - DOI: 10.1097/Cœ.0000000000000229

15. Ganguly B.B. Mutations of myelodysplastic syndromes (MDS): An update / B.B. Ganguly, N.N. Kadam // Mutation research. Reviews in mutation research. - 2016.

- Т. 769. - С. 47-62. - DOI: 10.1016/j.mrrev.2016.04.009

16. Gill H. Molecular and Cellular Mechanisms of Myelodysplastic Syndrome: Implications on Targeted Therapy / H. Gill, A. Leung, Y.L. Kwon // International Journal of Molecular Sciences. - 2016. - Т. 17, № 4. - С. 440-451. - DOI: 10.3390/ijms17040440

17. Voso M.T. Epigenetic therapy of myelodysplastic syndromes and acute myeloid leukemia. / M.T. Voso, F. Lo-Coco, L. Fianchi // Current opinion in oncology. - 2015. - Т. 27, № 6. - С. 532-539. - DOI: 10.1097/CCO.000000000000 0231

18. Семочкин, С. В. Эпидемиология миелодиспластических синдромов в Г. Москве по данным регионального регистра / С. В. Семочкин, Г. А. Дудина, Т. Н. Толстых // Медицинский вестник Башкортостана. - 2017. - Т. 12. - № 2(68). - С. 153-156. ISSN: 1999-6209

19. Sweeney M.R. Medical conditions and modifiable risk factors for myelodysplastic syndrome: a systematic review / M.R. Sweeney, K.M. Applebaum, H. Arem et al. // Cancer epidemiology, biomarkers & prevention: a publication of the American Association for Cancer research, cosponsored by the American Society of Preventive Oncology. - 2019. - Т. 28, № 9. - С. 1502-1517. - DOI: 10.1158/1055-9965.EPI-19-0106

20. Rydén J. Male sex and the pattern of recurrent myeloid mutations are strong independent predictors of blood transfusion intensity in patients with myelodysplastic syndromes / J. Rydén, G. Edgren, M. Karimi et al. // Leukemia. - 2019. - Т. 33, № 2. -С. 522-526. - DOI: 10.1038/s41375-018-0256-0

21. van Spronsen M. F. The non-erythroid myeloblast count rule in myelodysplastic syndromes: fruitful or futile? / Margot F. van Sprosen, Theresia M. Westers, Birgit I. Lissenberg-Witte et al. // Haematologica. 2019. - Т. 104, № 12. - С. 547-550. - DOI: 10.3324/haematol.2018.212563

22. Ma X. Epidemiology of myelodysplastic syndromes. / X. Ma // The American journal of medicine. 2012. - Т. 125, №7 - S2-5. -DOI:10.1016/j.amjmed.2012.04.014

23. Ma X. Myelodysplastic syndromes: incidence and survival in the United States. / X. Ma, M. Does, A. Raza et al. // Cancer. - 2007. - Т. 109, № 8. - С. 1536-1542. - DOI: 10. 1002/cncr .22570

24. Saarni M.I. Preleukemia. The hematologic syndrome preceding acute leukemia / M.I. Saarni, J.W. Linman // The American journal of medicine. - 1973. - T. 55. C. 38-48. - DOI: 10.1016/0002-9343(73)90148-4

25. Cogle C. R. Incidence and Burden of the Myelodysplastic Syndromes / Cogle C. R. // Current hematologic malignancy reports. - 2015. - T. 10, № 3. - C. 272280. - DOI: 10.1007/s11899-015-0269-y

26. Aul C. Epidemiological features of myelodysplastic syndromes: results from regional cancer surveys and hospital-based statistics / C. Aul, A. Giagounidis, U. Germing // International journal of hematology. - 2001. - T. 73, № 4. - C. 405-410. -DOI: 10.1007/BF02994001

27. Aul C. Primary myelodysplastic syndromes: analysis of prognostic factors in 235 patients and proposals for an improved scoring system. / Aul C, Gattermann N., Heyll A., Germing U. // Leukemia. - 1992. - T. 6, № 1. - C. 52-59. ISSN 0887-6924

28. Vardiman J. The classification of MDS: from FAB to WHO and beyond. / Vardiman J. // Leukemia research. - 2012. - T. 36, № 12. - C. 1453-1458. -DOI:10.1016/j.leukres.2012.08.008

29. Vardiman J. The 2008 revision of the World Health Organization (WHO) classification of myeloid neoplasms and acute leukemia: rationale and important changes. / Vardiman J, Thiele J, Arber DA, Brunning RD, Borowitz MJ, Porwit A, Harris N.L., Le Beau M.M., Hellstrom-Lindberg E., Tefferi A., Bloomfield C.D. // Blood. - 2009. - T. 114. - C. 938-949. - DOI: 10.1182/blood-2009-03-209262

30. Germing U. No increase in age-specific incidence of myelodysplastic syndromes / U. Germing, C. Strupp, A. Kundgen et al. // Haematologica. - 2004. - T. 89. - C. 905-909. - DOI:10.3324/ %25x

31. Strom, S. S. Epidemiology of Myelodysplastic Syndromes / S.S. Strom, V. Velez-Bravo, E.H. Estey // Seminars in Hematology. - 2008. - T. 45, № 1. - C. 8-13. -DOI: 10.1053/j .seminhematol.2007.10.003

32. Bejar R. Recent developments in myelodysplastic syndromes / R. Bejar, D.P. Steensma // Blood. - 2014. - T. 124, № 18. - C. 2795-2803. - DOI: 10.1182/blood-2014-04-522136

33. Rollison D.E. Epidemiology of myelodysplastic syndromes and chronic myeloproliferative disorders in the United States, 2001-2004, using data from the NAACCR and SEER programs / D.E. Rollison, N. Howlader, M.T. Smith et al. // Blood.

- 2008. - T. 112, № 1. - C. 45-52. - DOI: 10.1182/blood-2008-01-134858

34. Roman E. Myeloid malignancies in the real-world: Occurrence, progression and survival in the UK's population-based Haematological Malignancy Research Network 2004-15 / E. Roman, A. Smith, S. Appleton et al. // Cancer Epidemiol. - 2016.

- T. 42. - C. 186-198. - DOI: 10.1016/j.canep.2016.03.011

35. Mayer R, Cannellos G. Primary myelodysplastic syndrome and secondary preleukemic disorders, in Henderson E, Lister T, Greaves M (eds). / R. Mayer, G. Cannellos // Leukemia. - 1996. - T. 6. - C. 513-534. ISSN 0887-6924

36. Buenrostro J.D. Integrated Single-Cell Analysis Maps the Continuous Regulatory Landscape of Human Hematopoietic Differentiation / J. D. Buenrostro, M. R. Corces, C. A. Lareau et al. // Cell. - 2018. - T. 173, № 6. - C. 1535-1548. - DOI: 10.1016/j.cell.2018.03.074

37. Haas S. Causes and Consequences of Hematopoietic Stem Cell Heterogeneity / S. Haas, A. Trumpp, M. D. Milsom // Cell Stem Cell. - 2018. - T. 22. -C. 627-638. - DOI: 10.1016/j.stem.2018.04.003

38. Blokzijl F. Tissue-specific mutation accumulation in human adult stem cells during life / F. Blokzijl, J. de Ligt, M. Jager et al. // Nature. - 2016. - T. 538, №7624. -C. 260-264. - DOI: 10.1038/nature19768

39. Clevers H. Defining Adult Stem Cells by Function, not by Phenotype / H. Clevers, F. M. Watt // Annu Rev Biochem. - 2018. - T. 87. - C. 1015-1027. - DOI: 10.1146/annurev-biochem-062917-012341

40. Niemeyer C. M. Myelodysplastic syndrome in children / C. M. Niemeyer, I. Baumann // Semin Hematol. -2008. - T. 45, № 1. - C. 60-70. - DOI: 10.1053/j.seminhematol.2007.10.006

41. Greenberg P. L. Myelodysplastic Syndromes, Version 2.2017, NCCN Clinical Practice Guidelines in Oncology / P. L. Greenberg, R. M. Stone, A. Al-Kali et

al. // Journal of the National Comprehensive Cancer Network. - 2017. - Т. 15, № 1. - С. 60-86. - DOI: 10.6004/jnccn.2017.0007

42. Patnaik M. M. Prognostic irrelevance of ring sideroblast percentage in World Health Organization defined myelodysplastic syndromes without excess blasts / M. M. Patnaik, C. A. Hanson, N. H. Sulai // Blood. - 2012. - Т. 119, № 24. - С. 5674-5677. -DOI: 10.1182/blood-2012-03-415356

43. Hanahan D. Hallmarks of cancer: the next generation / D. Hanahan, R.A. Weinberg // Cell. - 2011. - Т. 144. - С. 646-674. - DOI: 10.1016/j.cell.2011.02.013

44. Jones P.A. Epigenetic determinants of cancer / P.A. Jones, S.B. Baylin // Cold Spring Harbor perspectives in biology. - Т. 8, № 9. - DOI: 10.1101/cshperspect.a019505

45. Zhou X. SAHA (vorinostat) facilitates functional polymer-based gene transfection via upregulation of ROS and synergizes with TRAIL gene delivery for cancer therapy / X. Zhou, Z. Liu, H. Wang et al. // Journal of drug targeting. - 2019. - Т. 27, № 3. - С. 306-314. - DOI: 10.1080/1061186X.2018.1519028

46. Тигунцев В.В. Малые некодирующие РНК как перспективные биомаркеры: биогенез и терапевтические стратегии / Тигунцев В.В., Иванова С.А., Серебров В.Ю., Бухарева М.Б. // Бюллетень сибирской медицины. - 2016. - Т. 15. - №. 2. C. 112-122. - DOI 10.20538/1682-0363-2016-2-112-126

47. Smith R.E. Acute myeloid leukemia and myelodysplastic syndrome after doxorubicin-cyclophosphamide adjuvant therapy for operable breast cancer: the National Surgical Adjuvant Breast and Bowel Project Experience / R.E. Smith, J. Bryant, A. DeCillis et al. // Journal of clinical oncology. - 2003. - Т. 21, № 7. - С. 1195-2037. -DOI: 10.1200/Jœ.2003.03.114

48. Rosenberg P. S. The incidence of leukemia and mortality from sepsis in patients with severe congenital neutropenia receiving long-term G-CSF therapy / P.S. Rosenberg, B. P. Alter, A.A. Bolyard et al. // Blood. - 2006. - Т. 107, №12. - С. 4628. -DOI: 10.1182/blood-2005-11-4370

49. Finazzi G. Acute leukemia in polycythemia vera: ananalysis of 1638 patients enrolled in a prospective observational study / G. Finazzi, V. Caruso, R. Marchioli et al. // Blood. - 2005. -T. 105. - C. 2664. - DOI: 10.1182/blood-2004-09-3426

50. Hayes R. Mortality among benzene-exposed workers in China / R. Hayes, S. Yin, M. Dosemeci et al. // Environmental health perspectives. - 1996. - T. 104. - C. 13491352. - DOI: 10.1289/ehp.961041349

51. Yin S. A cohort study of cancer among benzene-exposed workers in China: Overall results / S. Yin, R. Hayes, M. Linet et al. // American journal of industrial medicine. -1996. - T. 29. - C. 227-235. - DOI: 10.1002/(SICI)1097-0274(199603)29:3<227::AID-AJIM2>3.0.C0,2-N

52. Rigolin G. M., Exposure to myelotoxic agents and myelodysplasia: Case-control study and correlation with clinicobiological findings / G.M. Rigolin, A. Cuneo, M.G. Roberti et al. // British journal of haematology. -1998. - T. 103. - C. 189-197. -DOI: 10.1046/j.1365-2141.1998.00963.x

53. Nisse C. Exposure to occupational and environmental factors in myelodysplastic syndromes: Preliminary results of a case-control study / C. Nisse, C. Lorthois, V. Dorp et al. // Leukemia. - 1995. - T. 9. - C. 693-699. ISSN 0887-6924

54. Strom S.S. Risk factors of myelodysplastic syndromes: A case-control study / S.S. Strom, Y. Gu, S.K. Gruschkus et al. // Leukemia. -2005. - T. 19, № 11. - C. 19121918. - DOI: 10.1038/sj.leu.2403945

55. Goldberg H. Survey of exposure to genotoxic agents in primary myelodysplastic syndrome - Correlation with chromosome patterns and data in patients without haematological disease / H. Goldberg, E. Lusk, J. Moore et al. // Cancer research. - 1990. - T. 50, № 21. - C. 6876-6881. ISSN: 0008-5472

56. Brownson R. Cigarette smoking and adult leukemia: A meta-analysis / R. Brownson, T. Novotny, M. Perry // Archives of internal medicine. - 1993. - T. 153, № 4. - C. 469-475. - DOI:10.1001/archinte.1993.00410040037006

57. Pasqualetti P. Tobacco smoking and risk of haematological malignancies in adults: A case-control study / P. Pasqualletti, V. Festucca, P. Acitelli et al. // British

journal of haematology. -1997. - Т. 97. - С. 659-662. - DOI: 10.1046/j.1365-2141.1997.942910.x

58. Ido M. A case-control study of myelodysplastic syndromes among Japanese men and women / M. Ido, C. Nagata, N. Kawakami et al. // Leukemia research. -1996. -Т. 20. - С. 727-731. - DOI: 10.1016/0145-2126(96)00042-2

59. Bjork J. Smoking and myelodysplastic syndromes / J. Bjork, M. Albin, N. Mauritzson et al. // Epidemiology. - 2000. - Т. 11, № 3. - С. 285-291. - DOI: 10.1097/00001648-200005000-00010

60. Nisse C. Occupational and environmental risk factors of the myelodysplastic syndromes in the North of France / C. Nisse, J.M. Haguenoer, B. Granbastuen et al. // British journal of haematology. - 2001. - Т. 12. - С. 927-935. - DOI: 10.1046/j.1365-2141.2001.02645.x

61. Du Y. Smoking and alcohol intake as risk factors for myelodysplastic syndromes (MDS) / Y. Du, J. Fryzek, M.A. Sekeres et al. // Leukemia research. - 2009. - Т. 9. - С. 9. - DOI: 10.1016/j.leukres.2009.08.006

62. Gao Q. Susceptibility gene for familial acute myeloid leukemia associated with loss of 5q and/or 7q is not localized on the commonly deleted portion of 5q / Q. Gao, M. Horwitz, D. Roulston et al. // Genes, chromosomes & cancer. - 2000. - Т. 28. - С. 164. ISSN 1045-2257

63. Fenaux P. ESMO Guidelines Working Group. Myelodysplastic syndromes: ESMO Clinical Practice Guidelines for diagnosis, treatment and follow-up / P. Fenaux, D. Haase, G. F. Sanz et al. // Annals of oncology. - 2014. - Т. 25. - С. 57. - DOI: 10.1093/annonc/mdu180

64. Williamson B. T. Higher Risk Myelodysplastic Syndromes in Patients with Well-Controlled HIV Infection: Clinical Features, Treatment, and Outcome / B. T. Williamson, H. A. Leitch // Case reports in hematology. - 2016. - DOI: 10.1155/2016/8502641

65. Kaner J. D. HIV portends a poor prognosis in myelodysplastic syndromes / J. D. Kaner, S. Thibaud, S. Jasra et al. // Leukemia & lymphoma. - 2019. - Т. 8. - С. 16. - DOI: 10.1080/10428194.2019.1633631

66. Urban C. Stem cell transplantation in 6 children with parvovirus B19-induced severe aplastic anaemia or myelodysplastic syndrome / C. Urban, H. Lackner, E. Müller et al. // Klinische Padiatrie. - 2011. - T. 223, № 6. - C. 332-334. - DOI: 10.1055/s-0031-1287839

67. Lv L. Case-control study of risk factors of myelodysplastic syndromes according to World Health Organization classification in a Chinese population / L. Lv, G. Lin, X. Gao et al. // American journal of hematology. - 2011. - T. 86, № 2. - C. 163169. - DOI: 10.1002/ajh.21941

68. Kumar B. "KSHV Entry and Trafficking in Target Cells-Hijacking of Cell Signal Pathways, Actin and Membrane Dynamics" / B. Kumar, B. Chandran // Viruses.

- 2016. - T. 8, № 11. - C. 305. - DOI: 10.3390/v8110305

69. Copley G. B. Hospital-Based Case-Control Study of MDS Subtypes and Benzene Exposure in Shanghai / G. B. Copley, A. R. Schnatter, T. W. Armstrong et al. // Journal of occupational and environmental medicine. - 2017. - T. 59, № 4. - C. 349-355.

- DOI: 10.1097ATOM.0000000000000952

70. Qu S. Impacts of cytogenetic categories in the Revised International Prognostic Scoring System on the prognosis of primary myelodysplastic syndromes: results of a single-center study / S. Qu, Z. Xu, Y. Zhang et al. // Leukemia & lymphoma.

- 2012. - T. 53. - C. 940-946. - DOI: 10.3109/10428194.2011.634049

71. Matsuda A. Difference in clinical features between Japanese and German patients with refractory anaemia in myelodysplastic syndromes / A. Matsuda, U. Germing, I. Jinnai et al. // Blood. - 2005. - T. 106. - C. 2633-2640. - DOI: 10.1182/blood-2005-01 -0040

72. Weiss G. Anemia of inflammation / G. Weiss, T. Ganz, L. T. Goodnough // Blood. - 2019. - T. 133, № 1. - C. 40-50. - DOI: 10.1182/blood-2018-06-856500

73. Madu A. J. Anaemia of Chronic Disease: An In-Depth Review / A. J. Madu, M. D. Ughasoro // Medical principles and practice. -2017. - T. 26, № 1. - C. 1-3. - DOI: 10.1159/000452104

74. Moldawer L. L. Cachectin/tumor necrosis factor-alpha alters red blood cell kinetics and induces anemia in vivo / L. L. Moldawer, M. A. Marano, H. Wei et al. //

FASEB journal: official publication of the Federation Of American Societies For Experimental Biology. - 1989. - T. 3, № 5. - C. 1637-1643. - DOI: 10.1096/fasebj.3.5.2784116

75. Nemeth E. Anemia of inflammation / E. Nemeth, T. Ganz // Hematology/oncology Clinics of North America. - 2014. - T.28, № 4. - C. 671-678. -DOI: 10.1016/j.hoc.2014.04.005

76. Fraenkel P. G. Anemia of inflammation: a review / P. G. Fraenkel // The Medical Clinics of North America. - 2017. - T. 101, № 2. - C. 285-293. - DOI: 10.1016/j.mcna.2016.09.005

77. Pugh C. W. New horizons in hypoxia signaling pathways / C. W. Pugh, P. J. Ratcliffe // Experimental cell research. - 2017. - T. 356, № 2. - C. 116-121. - DOI: 10.1016/j.yexcr.2017.03.008

78. Schito L. Hypoxia-Inducible Factors: Master Regulators of Cancer Progression / L. Schito, G. L. Semenza // Trends in Cancer. - 2016. - T. 2, № 12. - C. 758-770. - DOI: 10.1016/j.trecan.2016.10.016

79. Park S. Clinical effectiveness and safety of erythropoietin-stimulating agents for the treatment of low- and intermediate-1-risk myelodysplastic syndrome: a systematic literature review / S. Park, P. Greenberg, A. Yucel et al. // British journal of haematology.

- 2019. - T. 184, № 2. - C. 134-160. - DOI: 10.1111/bjh.15707

80. Greenberg P. L. Cytopenia levels for aiding establishment of the diagnosis of myelodysplastic syndromes / P. L. Greenberg, H. Tuechler, J. Schanz et al. // Blood. -2016. - T. 128. - C. 2096-2097. - DOI: 10.1182/blood-2016-07-728766

81. Valent P. Minimal diagnostic criteria for myelodysplastic syndromes and separation from ICUS and IDUS: update and open questions / P. Valent, H. P. Horny // European journal of clinical investigation. - 2009. - T. 39, № 7. - C. 548-553. - DOI: 10.1111/j.1365-2362.2009.02151.x

82. Hodes, A. The challenging task of enumerating blasts in the bone marrow / A. Hodes, K. R. Calvo, A. Dulau et al. // Seminars in Hematology. - 2019. - T. 56, №1.

- C. 60-64. - DOI: 10.1053/j.seminhematol.2018.07.001

83. Valent P. Idiopathic cytopenia of undetermined significance (ICUS) and idiopathic dysplasia of uncertain significance (IDUS), and their distinction from low risk MDS / P. Valent, B. J. Bain, J. M. Bennett et al. // Leukemia research. -2012. - T. 36, №1. - C. 1-5. - DOI: 10.1016/j.leukres.2011.08.016

84. Valent P. Anaemia of the elderly (AOE): does it exist and does it matter in clinical practice? / P. Valent // European journal of clinical investigation. - 2008. - T. 38.

- C. 782-783. - DOI: 10.1111/j.1365-2362.2008.02013.x

85. Valent P. Minimal diagnostic criteria for myelodysplastic syndromes and separation from ICUS and IDUS: update and open questions / P. Valent, H. P. Horny // European journal of clinical investigation. - 2009. - T. 39. - C. 548-553. - DOI: 10.1111/j.1365-2362.2009.02151.x

86. Wimazal F. Idiopathic cytopenia of undetermined significance (ICUS) versus low risk MDS: the diagnostic interface / F. Wimazal, C. Fonatsch, R. Thalhammer et al. // Leukemia research. - 2007. - T. 31, №11. - C. 1461-1468. - DOI: 10.1016/j.leukres.2007.03.015

87. Valent P. Standards and impact of hematopathology in myelodysplastic syndromes (MDS) / P. Valent, A. Orazi, G. Büsche et al. // Oncotarget. - 2010. - T. 1. -C. 483-492. - DOI: 10.18632/oncotarget.101104

88. Greenberg P. International scoring system for evaluating prognosis in myelodysplastic syndromes / P. Greenberg, C. Cox, M. M. LeBeu et al. // Blood. - 1997.

- T. 89, № 6. - C. 2079-2088. - DOI:10.1182/BLOOD.V89.6.2079

89. Greenberg P. L. Revised international prognostic scoring system for myelodysplastic syndromes / P. L. Greenberg, H. Tuechler, J. Schanz et al. // Blood. -2012. - T. 120, № 12. - C. 2454-2465. - DOI: 10.1182/blood-2012-03-420489

90. Breems D. A. Monosomal karyotype in acute myeloid leukemia: a better indicator of poor prognosis than a complex karyotype / D.A. Breems, W.L. Van Putter, G.E. De Greef et al. // Journal of clinical oncology. - 2008. - T. 26. № 29. - C. 47914797. - DOI: 10.1200/Jœ.2008.16.0259

91. Schanz J. Monosomal karyotype in MDS: explaining the poor prognosis? / J. Schanz, H. Tuchker, F. Sole et al. // Leukemia. - 2013. - T. 27, № 10. - C. 1988-1995. - DOI: 10.1038/leu.2013.187

92. Deeg H. J. Five-group cytogenetic risk classification, monosomal karyotype, and outcome after hematopoietic cell transplantation for MDS or acute leukemia evolving from MDS / H.J. Deeg, B.L. Scott, M. Fang et al. // Blood. - 2012. - T. 120, № 7. - C. 1398-1408. - DOI: 10.1182/blood-2012-04-423046

93. de Witte T. Use of hematopoietic cell transplantation for patients with myelodysplastic syndrome and chronic myelomonocytic leukemia / T. de Witte, D. Bowen, M. Robin et al. // Blood. - 2017. - T. 130. - C. 92. - DOI: 10.1182/blood-2016-06-724500

94. Lamarque M. The 4 Cytogenetics of MDS revised IPSS is a powerful tool to evaluate the outcome of MDS patients treated with azacitidine: the GFM experience / M. Lamarque, S. Raynaud, R. Itzykson et al. // Blood. - 2012. - T. 120, № 25. - C. 50845085. - DOI: 10.1182/blood-2012-09-453555

95. Gangat, N. Myelodysplastic syndromes: Contemporary review and how we treat / N. Gangat, M.M. Patnaik, A. Tefferi // American journal of hematology. - 2016. -T. 91, № 1. - C. 76-89. - DOI: 10.1002/ajh.24253

96. Malcovati L. Impact of the degree of anemia on the outcome of patients with myelodysplastic syndrome and its integration into the WHO classification-based prognostic scoring system (WPSS) / L. Malcovati, M.G. Della Porta, C. Strupp et al. // Haematologica. - 2011. - T. 96, № 10. - C. 1433-1440. - DOI: 10.3324/haematol.2011.044602

97. Della Porta M. G. Validation of WHO classification-based prognostic scoring system (WPSS) for myelodysplastic syndromes and comparison with the revised international prognostic scoring system (IPSS-R). A study of the international working group for prognosis in myelodysplasia (IWG-PM) / M.G. Della Porta, H. Tuechler, L. Malcovati et al. // Leukemia. - 2015. - T. 29, № 7. - C. 1502-1513. - DOI: 10.1038/leu.2015.55

98. Garcia-Manero G. A prognostic score for patients with lower risk myelodysplastic syndrome / G. Garcia-Manero, J. Shan, S. Faderl et al. // Leukemia. -2008. - T. 22, № 3. - C. 538-543. - DOI: 10.1038/sj.leu.2405070

99. Kantarjian H. Proposal for a new risk model in myelodysplastic syndrome that accounts for events not considered in the original international prognostic scoring system / H. Kantarjian, S. O'Brien, F. Ravandi et al. // Cancer. - 2008. - T. 113, № 6. -C. 1351-1361. - DOI: 10. 1002/cncr.23 697

100. Pfeilstocker M, Tuechler H, Sanz G, Schanz J, Garcia-Manero G, Solé F, Greenberg PL. Time-dependent changes in mortality and transformation risk in MDS / M. Pfeilstocker, H. Tuechler, G. Sanz et al. // Blood. - 2016. - T. 128, № 7. - C. 902910. - DOI: 10.1182/blood-2016-02-700054

101. Malcovati L. SF3B1 mutation identifies a distinct subset of myelodysplastic syndrome with ring sideroblasts / L. Malcovati, M. Karimi, E. Papaemmanuil et al. // Blood. - 2015. - T. 126, № 2. - C. 233-241. - DOI: 10.1182/blood-2015-03-633537

102. Rivera. C. M. Mapping Human Epigenomes. / Rivera. C.M., Ren. B. // Cell.

- 2013. - T. 155, № 1. - C. 39-51. - DOI: 10.1016/j.cell.2013.09.011

103. Lyon M.F. Gene action in the X-chromosome of the mouse (Mus musculus L.) / M.F. Lyon // Nature. - 1961. - T. 190. - C. 372-373. - DOI: 10.1038/190372a0

104. Surani M. A. Development of reconstituted mouse eggs suggests imprinting of the genome during gametogenesis / M.A. Surani, S.C. Barton, M.L. Norris // Nature.

- 1984. - T. 308. - C. 548-550. - DOI: 10.1038/308548a0

105. McGrath J. Completion of mouse embryogenesis requires both the maternal and paternal genomes / J. McGrath, D. Solter // Cell. - 1984. - T. 37. - C. 179-183. -DOI: 10.1016/0092-8674(84)90313-1

106. Turner B. M. Decoding the nucleosome / B.M. Turner // Cell. - 1993. - T. 75, № 1. - C. 5-8. - DOI:10.1016/S0092-8674(05)80078-9

107. Dhalluin, C. Structure and ligand of a histone acetyltransferase bromodomain. / C. Dhalluin // Nature. - 1999. - T. 399. - C. 491-496. - DOI: 10.1038/20974

108. Strahl B. D. The language of covalent histone modifications / B.D. Strahl, C.D. Allis // Nature. - 2000. - T. 403. - C. 41-45. - DOI: 10.1038/47412

109. Jenuwein T. Translating the histone code / T. Jenuwein, C.D. Allis // Science.

- 2001. - T. 293. - C. 1074-1080. - DOI: 10.1126/science.1063127

110. Ahmad K. The histone variant H3.3 marks active chromatin by replication-independent nucleosome assembly / K. Ahmad, S. Henikoff // Mol. Cell. - 2002. - T. 9.

- C. 1191-1200. - DOI: 10.1016/s1097-2765(02)00542-7

111. Tagami H. Histone H3. 1 and H3.3 complexes mediate nucleosome assembly pathways dependent or independent of DNA synthesis / H. Tagami, D. Ray-Gallet, G. Almouzni et al. // Cell. - 2004. - T. 116. - C. 51-61. - DOI: 10.1016/s0092-8674(03)01064-x

112. Smith S. Purification and characterization of CAF-I, a human cell factor required for chromatin assembly during DNA replication in vitro / S. Smith, B. Stillman // Cell. - 1989. - T. 58. - C. 15-25. - DOI: 10.1016/0092-8674(89)90398-x

113. Kayne P. S. Extremely conserved histone H4N terminus is dispensable for groWTh but essential for repressing the silent mating loci in yeast / P.S. Kayne, U.J. Kim, M. Han et al. // Cell. - 1988. - T. 55. - C. 27-39. - DOI: 10.1016/0092-8674(88)90006-2

114. Megee P. C. Genetic analysis of histone H4: essential role of lysines subject to reversible acetylation / P.C. Megee, B.A. Morgan, B.A. Mittman et al. // Science. -1990. - T. 247. - C. 841-845. - DOI: 10.1126/science.2106160

115. Allfrey V. G. Acetylation and methylation of histones and their possible role in the regulation of RNA synthesis / V.G. Allfrey, R. Faulkner, A.E. Mirsky // Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. -1964. - T. 51. - C. 786-794. - DOI: 10.1073/pnas.51.5.786

116. Verdin E. 50 years of protein acetylation: from gene regulation to epigenetics, metabolism and beyond / E. Verdin, M. Ott // Nature reviews. Molecular cell biology. - 2015. - T. 16. - C. 258-264. - DOI: 10.1038/nrm3931

117. Roth S.Y. Histone acetyltransferases / S.Y. Roth, J.M. Denu, C.D. Allis // Annual review of biochemistry. - 2001. -T. 70. - C. 81-120. - DOI: 10.1146/annurev.biochem .70.1.81

118. Taunton J. A mammalian histone deacetylase related to the yeast transcriptional regulator Rpd3p / J. Taunton, C.A. Hassig, S.L. Schreiber // Science. -1996. - T. 272. - C. 408-411. - DOI: 10.1126/science.272.5260.408

119. Greer E. L. Histone methylation: a dynamic mark in health, disease and inheritance / E.L. Greer, Y. Shi // Nature reviews. Genetics. - 2012. - T. 13, № 5. - C. 343-357. - DOI: 10.1038/nrg3173

120. Albert M. Histone methyltransferases in cancer / M. Albert, K. Helin // Seminars in cell & developmental biology. - 2010. - T. 21, № 2. - C. 209-220. - DOI: 10.1016/j.semcdb.2009.10.007

121. Herz H. M. SET for life: biochemical activities and biological functions of SET domain-containing proteins / H.M. Herz, A. Garruss, A. Shilatifard // Trends in biochemical sciences. - 2013. - T. 38, №12. - C. 621-639. - DOI: 10.1016/j .tibs.2013.09.004

122. Boyer L. A. Polycomb complexes repress developmental regulators in murine embryonic stem cells / L.A. Boyer, K. Plath, J. Zeitlinger et al. // Nature. - 2006. - T. 441, № 7091. - C. 349-353. - DOI: 10.1038/nature04733

123. Bernstein B. E. A bivalent chromatin structure marks key developmental genes in embryonic stem cells / B.E. Bernstein, T.S. Mikkelsen, X. Xie et al. // Cell. -2006. - T. 125, № 2. - C. 315-326. - DOI: 10.1016/j.cell.2006.02.041

124. Azuara V. Chromatin signatures of pluripotent cell lines / V. Azuara, P. Perry, S. Sauer et al. // Nature cell biology. - 2006. - T. 8, № 5. - C. 532-538. - DOI: 10.1038/ncb1403

125. Barski A. High-resolution profiling of histone methylations in the human genome / A. Barski, S. Cuddapah, K. Cui et al. // Cell. - 2007. - C. 129. - P. 823-837. -DOI: 10.1016/j.cell.2007.05.009

126. Grün D. Single-cell messenger RNA sequencing reveals rare intestinal cell types / D. Grün, A. Lyubimova, L. Kester et al. // Nature. - 2015. - T. 525, № 7568. - C. 251-255. - DOI: 10.1038/nature14966

127. Battich, N. Control of transcript variability in single mammalian cells / N. Battich, T. Stoeger, L. Pelkmans // Cell. - 2015. - T. 163. - C. 1596-1610. - DOI: 10.1016/j.cell.2015.11.018

128. Morris, K. V. The rise of regulatory RNA / K.V. Morris, J.S. Mattick // Nature reviews. Genetics. - 2014. - T. 15. - C. 423-437. - DOI: 10.1038/nrg3722

129. Whetstine J. R. Reversal of histone lysine trimethylation by the JMJD2 family of histone demethylases / J.R. Whetstine, A. Nottke, F. Lan et al. // Cell. - 2006.

- T. 125, № 3. - C. 467-481. - DOI: 10.1016/j.cell.2006.03.028

130. Fodor B.D. Jmjd2b antagonizes H3K9 trimethylation at pericentric heterochromatin in mammalian cells / B.D. Fodor, S. Kubicek. M. Yonezawa et al. // Genes & development. - 2006. - T. 20, № 12. - C. 1557-1562. - DOI: 10.1101/gad.388206

131. Klose R.J. The transcriptional repressor JHDM3A demethylates trimethyl histone H3 lysine 9 and lysine 36 / R.J. Klose, K. Yamane, Y. Bae et al. // Nature. - 2006.

- T. 442, № 7100. - C. 312-316. - DOI: 10.1038/nature04853

132. Razin A. DNA methylation and gene function / A. Razin, A.D. Riggs // Science. - 1980. - T. 210. - C. 604-610. - DOI: 10.1126/science.6254144

133. Bird A. A fraction of the mouse genome that is derived from islands of nonmethylated, CpG-rich DNA / A. Bird, M. Taggart, M. Frommer et al. // Cell. - 1985.

- T. 40. - C. 91-99. - DOI: 10.1016/0092-8674(85)90312-5

134. Holliday R. DNA modification mechanisms and gene activity during development / R. Holliday, J.E. Pugh // Science. - 1975. - T. 187. - C. 226-232. -DOI: 10.1126/science. 187.4173.226

135. Thomson J. P. CpG islands influence chromatin structure via the CpG-binding protein Cfp1 / J.P. Thomson, P.J. Skene, J. Selfridge et al. // Nature. - 2010. - T. 464, № 7291. - C. 1082-1086. - DOI: 10.1038/nature08924

136. Blackledge N. P. CpG islands recruit a histone H3 lysine 36 demethylase / N.P. Blackledge, J.C. Zhou, M.Y. Tolstorukov et al. // Molecular cell. - 2010. - T. 38, № 2. - C. 179-90. - DOI: 10.1016/j.molcel.2010.04.009

137. Domcke S. Competition between DNA methylation and transcription factors determines binding of NRF1 / S. Domcke, A.F. Bardet, P. Adrian Ginno et al. // Nature.

- 2015. - T. 528, № 7583. - C. 575-579. - DOI: 10.1038/nature16462

138. Allis C. D. The molecular hallmarks of epigenetic control / C.D. Allis, T. Jenuwein // Nature reviews. Genetics. - 2016. - T. 17, №8. - C. 487-500. - DOI: 10.1038/nrg.2016.59

139. Feinberg A. P. Hypomethylation distinguishes genes of some human cancers from their normal counterparts / A.P. Feinberg, B. Vogelstein // Nature. - 1983. - T. 301.

- C. 89-92. - DOI: 10.1038/301089a0

140. Feinberg A. P. The history of cancer epigenetics / A.P. Feinberg, B. Tycko // Nat. Rev. Cancer. - 2004. - T. 4. - C. 143-153. - DOI: 10.1038/nrc1279

141. Taylor, S. M. Multiple new phenotypes induced in 10T1/2 and 3T3 cells treated with 5-azacytidine / S.M. Taylor, P.A. Jones // Cell. - 1979. - T. 17. - C. 771779. - DOI: 10.1016/0092-8674(79)90317-9

142. Tahiliani M. Conversion of 5-methylcytosine to 5-hydroxymethylcytosine in mammalian DNA by MLL partner TET1 / M. Tahiliani, K.P. Koh, Y. Shen et al. // Science. - 2009. - T. 324, № 5929. - C. 930-935. - DOI: 10.1126/science.1170116

143. Kriaucionis S. The nuclear DNA base 5-hydroxymethylcytosine is present in Purkinje neurons and the brain / S. Kriaucionis, N. Heintz // Science. - 2009. - T. 324.

- C. 929-930. - DOI: 10.1126/science.1169786

144. Ito S. Role of Tet proteins in 5mC to 5hmC conversion, ES-cell self-renewal and inner cell mass specification / S. Ito, A.C. D'Alessio, O.V. Taranova et al. // Nature.

- 2010. - T. 466. - C. 1129-1133. - DOI: 10.1038/nature09303

145. He Y. F. Tet-mediated formation of 5-carboxylcytosine and its excision by TDG in mammalian DNA / Y.F. He, B.Z. Li, Z. Li et al. // Science. - 2011. - T. 333, № 6047. - C. 1303-1307. - DOI: 10.1126/science.1210944

146. Hall, I. M. et al. Establishment and maintenance of a heterochromatin domain / I.M. Hall, G.D. Shankaranarayna, K. Noma et al. // Science. - 2002. - Т. 297. -С. 2232-2237. - DOI: 10.1126/science.1076466

147. Volpe T.A. Regulation of heterochromatic silencing and histone H3 lysine 9 methylation by RNAi / T.A. Volpe, C. Kidner, M. Hall et al. // Science. - 2002. - Т. 297, № 5588. - С. 1833-1837. - DOI: 10.1126/science.1074973

148. Taverna S.D. Methylation of histone H3 at lysine 9 targets programmed DNA elimination in Tetrahymena / S.D. Taverna, R.S. Coyne, C.D. Allis // Cell. - 2002. - Т. 110. - С. 701-711. - DOI: 10.1016/s0092-8674(02)00941-8

149. Mochizuki K. Analysis of a piwi-related gene implicates small RNAs in genome rearrangement in Tetrahymena / K. Mochizuki, N.A. Fine, T. Fujisawa et al. // Cell. - 2002. - Т. 110. - С. 689-699. - DOI: 10.1016/s0092-8674(02)00909-1

150. Martienssen R. RNAi and heterochromatin assembly / R. Martienssen, D. Moazed // Cold Spring Harbor perspectives in biology. - 2015. - Т. 7, № 8. - DOI: 10.1101/cshperspect.a019323

151. Chalker D. L. Epigenetics of ciliates / D.L. Chalker, E. Meyer, K. Mochizuki // Cold Spring Harbor perspectives in biology. - 2013. - Т. 5, № 12. - DOI: 10.1101/cshperspect.a017764

152. Reyes-Turcu F. E. Defects in RNA quality control factors reveal RNAi-independent nucleation of heterochromatin / F.E. Reyes-Turcu, K. Zhang, M. Zofall et al. // Nature structural & molecular biology. - 2011. - Т. 18. - P. 1132-1138. - DOI: 10.1038/nsmb.2122

153. Paralkar V. R. Long noncoding RNAs in biology and hematopoiesis / V.R. Paralkar, M.J. Weiss // Blood. - 2013. - Т. 121, № 24. - P. 4842-4846. - DOI: 10.1182/blood-2013-03-456111

154. Dawson, M.A. Cancer epigenetics: from mechanism to therapy / M.A. Dawson, T. Kouzarides // Cell. - 2012. - Т. 150. - P. 12-27. - DOI: 10.1016/j.cell.2012.06.013

155. Савченко В.Г. Национальные клинические рекомендации по диагностике и лечению миелодиспластических синдромов взрослых. / Савченко

В.Г., Паровичникова Е.Н., Кохно А.В. и соавт. // Гематология и трансфузиология.

- 2016. - Т. 61. - № 1-S4. - С. 1-32. - DOI: 10.18821/0234-5730-2016-61-1(Прил.4)

156. Groselj B. Histone deacetylase inhibitors as radiosensitisers: effects on DNA damage signaling and repair / B. Groselj, N.L. Sharma, F.C. Hamdy et al. // British journal of cancer. - 2013. - Т. 108. - P. 748-754. - DOI: 10.1038/bjc.2013.21

157. Audia J. E. Histone modifications and cancer / J.E. Audia, R.M. Campbell // Cold Spring Harbor perspectives in biology. - 2015 - Т. 8, № 4. - DOI: 10.1101/cshperspect.a019521

158. Jhanwar S.C. Genetic and epigenetic pathways in myelodysplastic syndromes: A brief overview / S.C. Jhanwar // Advances in biological regulation. - 2015.

- Т. 58. - P. 28-37. - DOI: 10.1016/j.jbior.2014.11.002

159. Liang S. Prognostic value of DNMT3A mutations in myelodysplastic syndromes: a meta-analysis / S. Liang, X. Zhou, H. Pan et al. // Hematology. - 2019. -Т. 24, № 1. - P. 613-622. - DOI: 10.1080/16078454.2019.1657613

160. Ward P. S. The common feature of leukemia-associated IDH1 and IDH2 mutations is a neomorphic enzyme activity converting alpha-ketoglutarate to 2-hydroxyglutarate / P.S. Ward, J. Patel, D.R. Wise et al. // Cancer Cell. - 2010. - Т. 17, № 3. - P. 225-234. - DOI: 10.1016/j.ccr.2010.01.020

161. Figueroa M. E. Leukemic IDH1 and IDH2 mutations result in a hypermethylation phenotype, disrupt TET2 function, and impair hematopoietic differentiation / M.E. Figueroa, O. Abdel-Wahab, C. Lu et al. // Cancer Cell. - 2010. - Т. 18. - P. 553-567. - DOI: 10.1016/j.ccr.2010.11.015

162. Patnaik M. M. Differential prognostic effect of IDH1 versus IDH2 mutations in myelodysplastic syndromes: a Mayo Clinic study of 277 patients / M.M. Patnaik, C.A. Hanson, J.M. Hodnefield et al. // Leukemia. - 2012. - Т. 26, № 1. - С. 101-105. - DOI: 10.1038/leu.2011.298

163. Mardis E. R. Recurring mutations found by sequencing an acute myeloid leukemia genome / E.R. Mardis, L. Ding, D.J. Dooling et al. // The New England journal of medicine. - 2009. - Т. 361, № 11. - С. 1058-1066. - DOI: 10.1056/NEJMoa0903840

164. Stein E. M. Enasidenib in mutant IDH2 relapsed or refractory acute myeloid leukemia / E.M. Stein, C.D. DiNaro, D.A. Pollyea et al. // Blood. - 2017. - T. 130, № 6.

- C. 722-731. - DOI: 10.1182/blood-2017-04-779405

165. Lin C. C. IDH mutations are closely associated with mutations of DNMT3A, ASXL1 and SRSF2 in patients with myelodysplastic syndromes and are stable during disease evolution / C.C. Lin, H.A. Hou, W.C. et al. // American journal of hematology. -2014. - T. 89. - C. 137-144. - DOI: 10.1002/ajh.23596

166. Lin C. C. Prognostic score including gene mutations in chronic myelomonocytic leukemia / C.C. Lin, H.A. Hou, W.C. Chou et al. // Journal of clinical oncology. - 2013. - T. 31. - C. 2428-2436. - DOI: 10.1200/JC0.2012.47.3314

167. Ko M. Impaired hydroxylation of 5-methylcytosine in myeloid cancers with mutant TET2 / M. Ko, Y. Huang, A.M. Jankowska et al. // Nature. - 2010. - T. 468. - C. 839-843. - DOI: 10.1038/nature09586

168. Busque L. Recurrent somatic TET2 mutations in normal elderly individuals with clonal hematopoiesis / L. Busque, J.P. Patel, M.E. Figueroa et al. // Nature genetics.

- 2012. - T. 44. - C. 1179-1181. - DOI: 10.103 8/ng.2413

169. Bejar R. Validation of a prognostic model and the impact of mutations in patients with lower-risk myelodysplastic syndromes / R. Bejar, K.E. Stevenson, B.A. Caughey et al. // Journal of clinical oncology. - 2012. - T. 30. - C. 3376-3382. - DOI: 10.1200/jœ.2011.40.7379

170. Zhang L. The molecular basis and clinical significance of genetic mutations identified in myelodysplastic syndromes / L. Zhang, E. Padron, J. Lancet // Leukemia research. - 2015. - T. 39. - C. 6-15. - DOI: 10.1016/j.leukres.2014.10.006

171. Ernst T. Inactivating mutations of the histone methyltransferase gene EZH2 in myeloid disorders / T. Ernst, A.J. Chase, J. Score et al. // Nature genetics. - 2010. - T. 42. - C. 722-726. - DOI: 10.1038/ng.621

172. Abdel-Wahab O. ASXL1 mutations promote myeloid transformation through loss of PRC2-mediated gene repression / O. Abdel-Wahab, M. Adli, L. LaFave et al. // Cancer Cell. - 2012. - T. 22. - C. 180-193. DOI: 10.1016/j.ccr.2012.06.032

173. Lee E. J. The evolving field of prognostication and risk stratification in MDS: Recent developments and future directions / E.J. Lee, N. Podoltsev, S.D. Gore et al. // Blood reviews. - 2016. - T. 30, № 1. - C. 1-3. - DOI: 10.1016/j.blre.2015.06.004

174. Milne T.A. The Additional sex combs gene of Drosophila is required for activation and repression of homeotic loci, and interacts specifically with polycomb and super sex combs / T.A. Milne, D.A. Sinclair, H.W. Brock // Molecular & general genetics. - 1999. - T. 261, № 4-5. - C. 753. - DOI: 10.1007/s004380050018

175. Scheuermann J.C. Histone H2A deubiquitinase activity of the polycomb repressive complex PR-DUB / J.C. Scheuermann, A.G. de Ayala Alonso, K. Oktaba et al. // Nature. - 2010. - T. 465, №7295. - C. 243. - DOI: 10.103 8/nature08966

176. Fisher C.L. Characterization of ASXL1, a murine homolog of additional sex combs, and analysis of the Asx-like gene family / C.L. Fisher, F. Randazzo, R.K. Humphries et al. // Gene. - 2006. - T. 369. - C. 109. - DOI: 10.1016/j.gene.2005.10.033

177. Fisher C.L. A human homolog of additional sex combs, ADDITIONAL SEX COMBSLIKE 1, maps to chromosome 20q11 / C.L. Fisher, J. Berger, F. Randazzo et al. // Gene. - 2003. - T. 306. - C. 115. - DOI: 10.1016/s0378-1119(03)00430-x

178. Micol J.B. Frequent ASXL2 mutations in acute myeloid leukemia patients with t(8, 21)/RUNX1-RUNX1T1 chromosomal translocations / J.B. Micol, N. Duployez, N. Boissel et al. // Blood. - 2014. - T. 124, № 9. - C. 1445. - DOI: 10.1182/blood-2014-04-571018

179. Duployez N. Unlike ASXL1 and ASXL2 mutations, ASXL3 mutations are rare events in acute myeloid leukemia with t(8,21) / N. Duployez, J.B. Micol, N. Boissel et al. // Leukemia & lymphoma. - 2016. - T. 57, № 1. - C. 199. - DOI: 10.3109/10428194.2015.1037754

180. Asada S. The role of ASXL1 in hematopoiesis and myeloid malignancies / S. Asada, T. Fujino, S. Goyama et al. // Cellular and molecular life sciences. - 2019. - T. 76, № 13. - C. 2515-2519. - DOI: 10.1007/s00018-019-03084-7

181. Bejar R. TET2 mutations predict response to hypomethylating agents in myelodysplastic syndrome patients / R. Bejar, A. Lord, K. Stevenson et al. // Blood. -2014. - T. 124, № 17. - C. 2705. - DOI: 10.1182/blood-2014-06-582809

182. Traina F. Impact of molecular mutations on treatment response to DNMT inhibitors in myelodysplasia and related neoplasms / F. Traina, V. Visconte, P. Elson et al. // Leukemia. - 2014. - T. 28, № 1. - C. 78. - DOI: 10.1038/leu.2013.269

183. Inoue D. SETBP1 mutations drive leukemic transformation in ASXL1-mutated MDS / D. Inoue, J. Kitaura, H. Matsui et al. // Leukemia. - 2015. - T. 29, № 4.

- C. 847. - DOI: 10.1038/leu.2014.301

184. Makishima H. Somatic SETBP1 mutations in myeloid malignancies / H. Makishima, K. Yoshida, N. Nguyen et al. // Nature genetics. - 2013. - T. 45, № 8. - C. 942. - DOI: 10.1038/ng.2696

185. Metzeler K.H. Spectrum and prognostic relevance of driver gene mutations in acute myeloid leukemia / K. H. Metzeler, T. Herold, M. Rothenberg-Thurley et al. // Blood. - 2016. - T. 128, № 5. - C. 686. - DOI: 10.1182/blood-2016-01-693879

186. Pratcorona M. Acquired mutations in ASXL1 in acute myeloid leukemia: prevalence and prognostic value / M. Pratcorona, S. Abbas, M.A. Sanders et al. // Haematologica. - 2012. - T. 97, № 3. - C. 388. - DOI: 10.3324/haematol.2011.051532

187. Metzeler K.H. ASXL1 mutations identify a high-risk subgroup of older patients with primary cytogenetically normal AML within the ELN favorable genetic category / K.H. Metzeler, H. Becker, K. Maharry et al. // Blood. - 2011. - T. 118, № 26.

- C. 6920. - DOI: 10.1182/blood-2011-08-368225

188. Paschka P. ASXL1 mutations in younger adult patients with acute myeloid leukemia: a study by the German-Austrian Acute Myeloid Leukemia Study Group / P. Paschka, R.F. Schlenk, V.I. Gaidzik et al. // Haematologica. - 2015. - T. 100, № 3. - C. 324. - DOI: 10.3324/haematol.2014.114157

189. Chou W.C. Distinct clinical and biological features of de novo acute myeloid leukemia with additional sex comb-like 1 (ASXL1) mutations / W.C. Chou, H.H. Huang, H.A. Hou et al. // Blood. - 2010. - T. 116, № 20. - C. 4086. - DOI: 10.1182/blood-2010-05-283291

190. Molenaar R.J. Clinical and biological implications of ancestral and non-ancestral IDH1 and IDH2 mutations in myeloid neoplasms / R.J. Molenaar, S. Thota, Y. Nagata et al. // Leukemia. - 2015. - T. 29, № 11. - C. 2134. - DOI: 10.1038/leu.2015.91

191. Nagase R. Expression of mutant ASXL1 perturbs hematopoiesis and promotes susceptibility to leukemic transformation / R. Nagase, D. Inoue, A. Pastore et al. // The Journal of experimental medicine. - 2018. - T. 215, № 6. - C. 1729. - DOI: 10.1084/jem.20171151

192. Carbuccia N. Mutations of ASXL1 gene in myeloproliferative neoplasms / Carbuccia N., Murati, A., Trouplin, V. et al // Leukemia. - 2009. - T. 23. - C. 2183-2186 - DOI:10.1038/leu.2009.141

193. Sallman D.A. ASXL1 frameshift mutations drive inferior outcomes in CMML without negative impact in MDS / D.A. Sallman, R. Komrokji, T. Cluzeau et al. // Blood cancer journal. - 2017. - T. 7, № 12. - C. 633. - DOI: 10.1038/s41408-017-0004-0

194. Cui Y, Tong H, Du X, Li B, Gale RP, Qin T et al (2015) Impact of TET2, SRSF2, ASXL1 and SETBP1 mutations on survival of patients with chronic myelomonocytic leukemia. Experimental hematology & oncology. - 2015. - T. 4, № 14. C. 3. - DOI: 10.1186/s40164-015-0009-y

195. Cui Y. TET2 mutations were predictive of inferior prognosis in the presence of ASXL1 mutations in patients with chronic myelomonocytic leukemia / Cui, Y., Tong, H., Du, X. et al. // Stem cell investigation. - 2016. - T. 3, № 50. - C. 2-4. -DOI:10.21037/sci.2016.09.04

196. Patnaik M.M. Prognostic interaction between ASXL1 and TET2 mutations in chronic myelomonocytic leukemia / Patnaik MM, Lasho TL, Vijayvargiya P, Finke CM, Hanson CA, Ketterling RP et al // Blood cancer journal. - 2016. - T. 6, № 1. - C. 1-5. -DOI: 10.1038/bcj.2015.113

197. Duchmann M. Prognostic role of gene mutations in chronic myelomonocytic leukemia patients treated with hypomethylating agents / Duchmann M, Yalniz FF, Sanna A, Sallman D, Coombs CC, Renneville A et al. // EBioMedicine. - 2018. - T. 31. - C. 174. - DOI: 10.1016/j.ebiom.2018.04.018

198. Steensma D.P. Clonal hematopoiesis of indeterminate potential and its distinction from myelodysplastic syndromes. / Steensma DP, Bejar R, Jaiswal S, Lindsley

RC, Sekeres MA, Hasserjian RP et al // Blood. - T. 126, № 1. - C. 9. - DOI: 10.1182/blood-2015-03 -631747

199. Jaiswal S. Age-related clonal hematopoiesis associated with adverse outcomes / Jaiswal S, Fontanillas P, Flannick J, Manning A, Grauman PV, Mar BG et al // The New England journal of medicine. - 2014. - T. 371, № 26. - C. 2488. - DOI: 10.1056/NEJMoa1408617

200. Yoshizato T. Somatic mutations and clonal hematopoiesis in aplastic anemia / Yoshizato T, Dumitriu B, Hosokawa K, Makishima H, Yoshida K, Townsley D et al // The New England journal of medicine. - 2015. - T. 373, № 1. - C. 35. - DOI: 10.1056/NEJMoa1414799

201. Fuster J. J. Clonal hematopoiesis associated with TET2 deficiency accelerates atherosclerosis development in mice / Fuster JJ, MacLauchlan S, Zuriaga MA, Polackal MN, Ostriker AC, Chakraborty R et al // Science. - 2017. - T. 355, № 6327. -C. 842. - DOI: 10.1126/science.aag1381

202. Hsu J. I. PPM1D mutations drive clonal hematopoiesis in response to cytotoxic chemotherapy / Hsu JI, Dayaram T, Tovy A, De Braekeleer E, Jeong M, Wang F et al // Cell Stem Cell. - 2018. - T. 23, № 5. - C. 700. - DOI: 10.1016/j.stem.2018.10.004

203. Zhang P. Chromatin regulator ASXL1 loss and Nf1 halpoinsufficiency cooperate to accelerate myeloid malignancy / Zhang P, He F, Bai J, Yamamoto S, Chen S, Zhang L et al // The Journal of clinical investigation. - 2018. - T. 128, № 12. - C. 5383. - DOI: 10.1172/JCI121366

204. Thieme S.The histone demethylase UTX regulates stem cell migration and hematopoiesis / Thieme, S., Gyarfas, T., Richter, C., Ozhan, G., Fu, J., Alexopoulou, D., Muders, M.H., Michalk, I., Jakob, C., Dahl, A., et al. // Blood. - 2013. - T. 121. - C. 2462-2471. - DOI: 10.1182/blood-2012-08-452003

205. Nebbioso A. Genetic mutations in epigenetic modifiers as therapeutic targets in acute myeloid leukemia / Nebbioso, A., Benedetti, R., Conte, M., Iside, C., Altucci, L. // Expert opinion on therapeutic targets. - 2015. - T. 19. - C. 1187-1200. - DOI: 10.1517/14728222.2015.1051728

206. Walter M. J. Clonal architecture of secondary acute myeloid leukemia / Walter, M.J., Shen, D., Ding, L., Shao, J., Koboldt, D.C., Chen, K., Larson, D.E., McLellan, M.D., Dooling, D., Abbott, R., et al. // The New England journal of medicine.

- 2012. - T. 366. - C. 1090-1098. - DOI: 10.1056/NEJMoa1106968

207. Steensma D. P. Clonal hematopoiesis of indeterminate potential and its distinction from myelodysplastic syndromes / Steensma, D.P., Bejar, R., Jaiswal, S., Lindsley, R.C., Sekeres, M.A., Hasserjian, R.P., Ebert, B.L. // Blood. - 2015. - T. 126. -C. 9-14. - DOI: 10.1182/blood-2015-03 -631747

208. Kwok B. MDS associated somatic mutations and clonal hematopoiesis are common in idiopathic cytopenia of undetermined significance / Kwok, B., Hall, J.M.,Witte, J.S., Xu, Y., Reddy, P., Lin, K., Flamholz, R., Dabbas, B., Yung, A., Al-Hafidh, J., et al. // Blood. - 2015. - T. 126. - C. 2355-2358. - DOI: 10.1182/blood-2015-08-667063

209. Bejar R. Somatic mutations predict poor outcome in patients with myelodysplastic syndrome after hematopoietic stem-cell transplantation / Bejar, R., Stevenson, K.E., Caughey, B., Lindsley, R.C., Mar, B.G., Stojanov, P., Getz, G., Steensma, D.P., Ritz, J., Soiffer, R., et al. // Journal of clinical oncology. - 2014. - T. 32.

- C. 2691-2696. - DOI: 10.1200/Jœ.2013.52.3381

210. Gill H. Molecular and Cellular Mechanisms of Myelodysplastic Syndrome: Implications on Targeted Therapy / Gill H, Leung AY, Kwong YL. // International journal of molecular sciences. - 2016. - T. 17, № 4. - C. 444-450. - DOI: 10.3390/ijms17040440

211. Bejar R. et al. Somatic mutations predict poor outcome in patients with myelodysplastic syndrome after hematopoietic stem-cell transplantation / Bejar, R., Stevenson, K. E., Caughey, B., Lindsley, R. C., Mar, B. G., Stojanov, P., Getz, G., Steensma, D. P., Ritz, J., Soiffer, R., Antin, J. H., Alyea, E., Armand, P., Ho, V., Koreth, J., Neuberg, D., Cutler, C. S., & Ebert, B. L. // Journal of clinical oncology. - 2014. - T. 32. - №. 25. - C. 2691. - DOI: 10.1200/Jœ.2013.52.3381

212. Gangat N. et al. Mutations and prognosis in myelodysplastic syndromes: karyotype-adjusted analysis of targeted sequencing in 300 consecutive cases and

development of a genetic risk model / Gangat, N., Mudireddy, M., Lasho, T. L., Finke, C. M., Nicolosi, M., Szuber, N., Patnaik, M. M., Pardanani, A., Hanson, C. A., Ketterling, R. P., & Tefferi, A. //American journal of hematology. - 2018. - T. 93. - №. 5. - C. 692695. - DOI: 10.1002/ajh.25064

213. Jung S. H. et al. Somatic mutations predict outcomes of hypomethylating therapy in patients with myelodysplastic syndrome / Jung, S. H., Kim, Y. J., Yim, S. H., Kim, H. J., Kwon, Y. R., Hur, E. H., Goo, B. K., Choi, Y. S., Lee, S. H., Chung, Y. J., & Lee, J. H. / Jung, S. H., Kim, Y. J., Yim, S. H., Kim, H. J., Kwon, Y. R., Hur, E. H., Goo, B. K., Choi, Y. S., Lee, S. H., Chung, Y. J., & Lee, J. H. // Oncotarget. - 2016. - T. 7. -№. 34. - C. 55264. - DOI: 10.18632/oncotarget.10526

214. Lin C. C. et al. IDH mutations are closely associated with mutations of DNMT3A, ASXL1 and SRSF2 in patients with myelodysplastic syndromes and are stable during disease evolution / Lin, C. C., Hou, H. A., Chou, W. C., Kuo, Y. Y., Liu, C. Y., Chen, C. Y., Lai, Y. J., Tseng, M. H., Huang, C. F., Chiang, Y. C., Lee, F. Y., Liu, M. C., Liu, ... Tien, H. F. //American journal of hematology. - 2014. - T. 89. - №. 2. - C. 139141. - DOI: 10.1002/ajh.23596

215. Martin I. et al. Negative impact on clinical outcome of the mutational cooccurrence of SF3B1 and DNMT3A in refractory anemia with ring sideroblasts (RARS) / Martín, I., Such, E., Navarro, B., Vicente, A., López-Pavía, M., Ibáñez, M., Tormo, M., Villamón, E., Gómez-Seguí, I., Luna, I., Oltra, S., Pedrola, L., Sanz, M. A., Cervera, J., & Sanz, G. // Leukemia & lymphoma. - 2017. - T. 58. - №. 7. - C. 1687-1691. - DOI: 10.1080/10428194.2016.1246725

216. Traina F. et al. Impact of molecular mutations on treatment response to DNMT inhibitors in myelodysplasia and related neoplasms / Traina, F., Visconte, V., Elson, P., Tabarroki, A., Jankowska, A. M., Hasrouni, E., Sugimoto, Y., Szpurka, H., Makishima, H., O'Keefe, C. L., Sekeres, M. A., Advani, A. S., Kalaycio, M., Copelan, E. A., Saunthararajah, Y., Olalla Saad, S. T., Maciejewski, J. P., & Tiu, R. V. // Leukemia. - 2014. - T. 28. - №. 1. - C. 78-87. - DOI: 10.1038/leu.2013.269

217. Walter M. J. et al. Recurrent DNMT3A mutations in patients with myelodysplastic syndromes / Walter, M. J., Ding, L., Shen, D., Shao, J., Grillot, M.,

McLellan, M., Fulton, R., Schmidt, H., Kalicki-Veizer, J., O'Laughlin, M., Kandoth, C., Baty, J., Westervelt, P., DiPersio, J. F., Mardis, E. R., Wilson, R. K., Ley, T. J., & Graubert, T. A. // Leukemia. - 2011. - T. 25. - №. 7. - C. 1156-1157. - DOI: 10.1038/leu.2011.44

218. Xu F. et al. Exploration of the role of gene mutations in myelodysplastic syndromes through a sequencing design involving a small number of target genes / Xu, F., Wu, L. Y., He, Q., Wu, D., Zhang, Z., Song, L. X., Zhao, Y. S., Su, J. Y., Zhou, L. Y., Guo, J., Chang, C. K., & Li, X. // Scientific reports. - 2017. - T. 7. - №. 1. - C. 1-10. -DOI: 10.1038/srep43113

219. Xu Y. et al. Implications of mutational spectrum in myelodysplastic syndromes based on targeted next-generation sequencing / Xu, Y., Li, Y., Xu, Q., Chen, Y., Lv, N., Jing, Y., Dou, L., Bo, J., Hou, G., Guo, J., Wang, X., Wang, L., Li, Y., Chen, C., & Yu, L. // Oncotarget. - 2017. - T. 8. - №. 47. - C. 82475. - DOI: 10.18632/oncotarget. 19628

220. Zhou J. D. et al. GPX3 methylation in bone marrow predicts adverse prognosis and leukemia transformation in myelodysplastic syndrome / Zhou, J. D., Lin, J., Zhang, T. J., Ma, J. C., Yang, L., Wen, X. M., Guo, H., Yang, J., Deng, Z. Q., & Qian, J. //Cancer medicine. - 2017. - T. 6. - №. 1. - C. 267-271. - DOI: 10.1002/cam4.984

221. Lin Y. Prognostic significance of ASXL1 mutations in myelodysplastic syndromes and chronic myelomonocytic leukemia: A meta-analysis / Y. Lin, Y. Zheng, Z. C. Wang et al. // Hematology. - 2016 - T. 21, № 8. - C. 455-457. - DOI: 10.1080/10245332.2015.1106815

222. Montes-Moreno S, Routbort MJ, Lohman EJ, et al. Clinical molecular testing for ASXL1 c.1934dupG p.Gly646fs mutation in hematologic neoplasms in the NGS era / Montes-Moreno S, Routbort MJ, Lohman EJ, et al. // PLoS One. - 2018. - T. 13, № 9. -DOI:10.1371/journal.pone.0204218

223. Wang L, Birch NW, Zhao Z, et al. Epigenetic targeted therapy of stabilized BAP1 in ASXL1 gain-of-function mutated leukemia / Wang L, Birch NW, Zhao Z, et al. // Nature cancer. - 2021. - T. 2, № 5. - C. 518-524. - DOI:10.1038/s43018-021-00199-4

224. Yannakou C. K. et al. ASXL1 c. 1934dup, p. Gly646Trpfs x 12-a true somatic alteration requiring a new approach / Yannakou, C. K., Jones, K., McBean, M., Thompson, E. R., Ryland, G. L., Doig, K., Markham, J., Westerman, D., & Blombery, P. // Blood cancer journal. - 2017. - T. 7. - № 12. - C. 2-4. - DOI: 10.1038/s41408-017-0025-8

225. Larizza L, Magnani I, Beghini A. The Kasumi-1 cell line: a t(8,21)-kit mutant model for acute myeloid leukemia / Larizza, L., Magnani, I., & Beghini, A. // Leukemia & lymphoma. - 2005. - T. 46. - № 2. - C. 247-250. -DOI:10.1080/10428190400007565

226. Berenstein R. et al. Comparative examination of various PCR-based methods for DNMT3A and IDH1/2 mutations identification in acute myeloid leukemia / Berenstein, R., Blau, I. W., Kar, A., Cay, R., Sindram, A., Seide, C., & Blau, O. // Journal of Experimental & Clinical Cancer research. - 2014. - T. 33. - № 1. - C. 2-10. - DOI: 10.1186/1756-9966-33-44

227. Yuan Xiao-Qing et al. DNMT3A R882 Mutations Predict a Poor Prognosis in AML: A Meta-Analysis From 4474 Patients / Yuan, X. Q., Peng, L., Zeng, W. J., Jiang, B. Y., Li, G. C., & Chen, X. P. // Medicine (Baltimore). - 2016. - T. 95. - № 18. -DOI:10.1097/MD.0000000000003519

228. Ghada M. Elsayed et al. / Ghada M. Elsayed, Abd Elgawad A. Fahmi, Nevine F. Shafik, Reham A.A. Elshimy, Heba K. Abd Elhakeem, Sara A. Attea // Egyptian Journal of Medical Human Genetics. - 2018. - T. 19. - № 4. - C. 315-319. - DOI: 10.1016/j.ejmhg.2018.05.005

229. Lin M. E. et al. Dynamics of DNMT3A mutation and prognostic relevance in patients with primary myelodysplastic syndrome / Lin, M. E., Hou, H. A., Tsai, C. H., Wu, S. J., Kuo, Y. Y., Tseng, M. H., Liu, M. C., Liu, C. W., Chou, W. C., Chen, C. Y., Tang, J. L., Yao, M., Li, C. C., Huang, S. Y., Ko, B. S., Hsu, S. C., Lin, C. T., & Tien, H. F. // Clinical epigenetics. - 2018. - T. 10. - № 42. - DOI: 10.1186/s13148-018-0476-1

ПРИЛОЖЕНИЕ А. Наиболее изученные гены эпигенетической регуляции и частота их соматических мутаций

Рисунок А.1 - Общий мутационный ландшафт генов эпигенетической регуляции МДС, ОМЛ и МПЗ

Таблица А.1 - Гены эпигенетической регуляции и некоторое их значение при МДС

Функция Ген Локализация в хромосоме Мутация; эффект Частота при МДС, % Встречается в здоровой популяции ^ижение общей выживаемости

Метилирование ДНК DNMT3A 2p23 Миссенс, измененная функция <30 + +-

ТЕТ 2 4q24 Нонсенс/делеции и инсерции; нефункциональны й домен 20-30 + -

ЮН1 2q33.3 Миссенс; измененная функция 5-10 - +

ЮН 2 Щ26.1 Миссенс; измененная функция 1 - -

Продолжение Таблицы А. 1

Функция Ген Локализация в хромосоме Мутация; эффект Частота, % Встречается в здоровой популяции ^ижение общей выживаемости

Модификация гистонов ASXL1 20q11 Миссенс; измененная функция 20 - +

Е2Н2 7q35-36 Миссенс; нарушение функции 10 - +-

итх Xp11.3 Митеенс; измененная функция 1 - -

ПРИЛОЖЕНИЕ Б. Классификация МДС ВОЗ, 2017

Таблица Б.1 - Варианты МДС в соответствии с критериями ВОЗ от 2017

года

Вариант Дисплазия (ростки) Цитопения (ростки) Кольцевые сидеробласты Бласты в КМ и ПК Особенности кариотипа

с линейной дисплазией 1 1-2

с мультилинейно 2-3 1-3

й дисплазией

<15 %/<5 % КМ<5 % Любой, кроме

с кольцевыми ПК<1 %

сидеробластами и линейной 1 1-2 Палочек Ауэра нет

дисплазией

с кольцевыми

сидеробластами

и 2-3 1-3

мультилинейно

й дисплазией

с делеция 5q-, за

изолированной 1-3 1-2 исключением

делецией 5q 7q

Нет или любой уровень КМ<10 %

с избытком бластов-1/2 1-3 1-3 ПК<5 % Палочки Ауэра +/- Любой

ПРИЛОЖЕНИЕ В. Пересмотренная прогностическая шкала IPSS-R (РХ.

Greenberg и соавт., 2012)

Таблица В.1 - Прогностическая шкала IPSS-R

Баллы

Факторы

0 0.5 1 1.5 2 3 4

del(7q);

+8; +19;

Кариотип У; del(11q) - Норма, del(5q); (12р); (20q) - i(17q); любая другая изолирова нная или двойная аберрация 7; /del(3q); двойная аберрация с -7^- Комплекс ный

Бласты в КМ, % <2 3-4 - 5-10 >10

НЬ, г.л >100 80-100 <80

Тромбоциты, X 109/л >100 50-99 <50

Нейтрофилы, х 109/л >0,8 <0,8 -

ПРИЛОЖЕНИЕ Г. Прогностическая шкала WPSS Ма1^аИ и соавт., 2011) Таблица Г.1 - Прогностическая шкала WPSS

Параметры Баллы

0 1 3

Вариант по классификации ВОЗ рефрактерная анемия, рефрактерная анемия с кольцевыми сидеробластами, ЩСс изолированной делецией 5q рефрактерная цнтопения с мультилинейной дисплазией рефрактерная анемия с избытком бластов 1 рефрактерная анемия с избытком бластов 2

Кариотип норма. -У. <1е1(5я): del(20q) все другие аномалии кариотипа комплексные аномалии >3 аберраций и любые изменения 7 хромосомы -

Минимум одна трансфузия донорских эритроцитов каждые 8 недель на протяжении 4 мес. Нет Да - -

ПРИЛОЖЕНИЕ Д. Шкала коморбидности MDS-CI (Porta M. Delia и соавт.,

2011)

Таблица Г.1 - Шкала коморбидности для больных МДС

Сопутствующие заболевания Балл

Сердечно-сосудистые 2

Хронические заболевания печени 1

Хронические респираторные 1

Хронические заболевания почек 1

Опухоль в анамнезе 1

Примечание: прогностический вариант MDS-CI: низкий (0 батлов), промежуточный (1-2 балла) н высокий (> 3 баллов).

ПРИЛОЖЕНИЕ Е. Протоколы выделения ДНК из цельной венозной крови

Выделение ДНК из клеток венозной крови с помощью набора «ДНК-

ЭКСТРАН-1» (Синтол, Россия)

1. Промаркировать пробирки объёмом 1,5 или 2 мл. Подготовить отрицательный контроль.

2. Смешать в отдельной пробирке: лизирующий раствор и сорбент.

3. Внести 170 мкл полученной смеси в промаркированные пробирки. Добавить 100 мкл периферической крови в соответствующую пробирку. Закрыть крышки пробирок. Встряхнуть пробирки на микроцентрифуге 3-5 с.

4. Термостатировать пробирки 10 мин при 50 °С. Центрифугировать пробирки при 13000 об/мин в течение 1 мин.

5. Удалить надосадочную жидкость. Добавить к осадку 400 мкл раствора №1, закрыть крышки пробирок и встряхнуть пробирки на микроцентрифуге 3-5 с. Центрифугировать пробирки при 13000 об/мин в течение 1 мин.

6. Повторить предыдущие действия дважды, добавив поэтапно к осадку по 200 мкл растворов №2 и №3.

7. Удалить надосадочную жидкость. Открыть крышки пробирок и термостатировать их 5 мин при 50 °С.

8. Добавить 300 мкл элюирующего раствора, закрыть крышки пробирок и встряхнуть их на микроцентрифуге 3-5 с. Термостатировать пробирки 5 мин при 50 °С. Центрифугировать пробирки при 13000 об/мин в течение 1 мин.

Выделение ДНК из клеток венозной крови с помощью набора ExtractDNA

Blood&Cells (Евроген, Россия)

Рисунок Е.1 - Схема выделения ДНК