Особенности мутаций генов эпигенетической регуляции: ASXL1 и DNMT3A у больных миелодиспластическим синдромом тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 00.00.00, кандидат наук Липилкин Павел Викторович

• Липилкин Павел Викторович
• кандидат наук
• 2024

Оглавление диссертации кандидат наук Липилкин Павел Викторович

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Особенности заболеваемости и этиология МДС

1.1.1.Заболеваемость

1.1.2. Взаимосвязь этиологии и эпигенетических нарушений

1.2. Клиническая и лабораторная характеристика МДС

1.2.1. Диагностические критерии

1.2.2. Прогностические шкалы IPSS, IPSS-R, WPSS, LR-PSS и MDS-a

1.3. Эпигенетические нарушения при МДС

1.3.1. Варианты эпигенетической регуляции

1.3.2. Мутации в генах эпигенетической регуляции при МДС, ОМЛ и МПЗ

1.3.3. Особенности соматических мутаций эпигенетических регуляторов ASXL1 и

ОЫМТЗЛ при МДС

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. Характеристика исследуемых групп

2.1.1. Клинико-лабораторные обследования и забор биоматериала для молекулярно-генетических исследований

2.2. Молекулярно-генетические исследования

2.2.1. Выделение ДНК из периферической крови

2.2.2. Аллель-специфическая ПЦР для обнаружения мутации c.1934dupG в гене ASXL1

2.2.3. Рестрикционный анализ для обнаружения мутации R882H в гене ВИМТ3Л50

2.3. Сравнительное секвенирование по Сэнгеру и условия его проведения

2.4. Статистическая обработка данных

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

3.1. Адаптация к реальной клинической практике протокола аллель-специфической ПЦР из работы Yannakou и соавт. для обнаружения мутации c.1934dupG в гене ASXL1

3.2. Результаты рестрикционного анализа мутации R882H в гене ОИМТЗА в исследуемых группах и проведение HRM-анализа

3.2.1. Адаптация к реальной клинической практике протокола рестрикционного анализа из работы Berenstem и соавт

3.2.2. HRM-анализ и его сравнение с рестрикционным анализом на химически синтезированной ДНК с различной концентрацией мутации R882H в гене БЫМТЗА

3.2.3. Разработка праймеров для HRM-анализа

3.2.4. Результаты HRM-анализа

3.2.5. Результаты контрольного рестрикционного анализа

3.3. Результаты сравнительного секвенирования по Сэнгеру

3.4. Результаты аллель-специфической ПЦР мутации c.1934dupG в гене ASXL1 у исследуемых групп

3.5. Анализ общей выживаемости пациентов с МДС

3.6. Анализ влияния мутации c.1934dupG в гене ASXL1 на прогноз и течение МДС

3.7. Алгоритм тактики возможной терапии МДС у пациентов с мутацией c.1934dupG в гене ASXL1, выявленной аллель-специфической ПЦР

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

ПЕРСПЕКТИВЫ РАЗРАБОТКИ ТЕМЫ

ПЕРЕЧЕНЬ СОКРАЩЕНИЙ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

ПРИЛОЖЕНИЕ А. Наиболее изученные гены эпигенетической регуляции и

частота их мутаций

ПРИЛОЖЕНИЕ Б. Классификация МДС ВОЗ,

ПРИЛОЖЕНИЕ В. Пересмотренная прогностическая шкала IPSS-R

(P.L. Greenberg и соавт., 2012)

ПРИЛОЖЕНИЕ Г. Прогностическая шкала WPSS (L. Malcovati и соавт., 2011)

ПРИЛОЖЕНИЕ Д. Шкала коморбидности MDS-CI (Porta M. Della и соавт., 2011)

ПРИЛОЖЕНИЕ Е. Протоколы выделения ДНК из цельной венозной крови

ПРИЛОЖЕНИЕ Ж. Экстерьер технических разработок

ВВЕДЕНИЕ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Особенности мутаций генов эпигенетической регуляции: ASXL1 и DNMT3A у больных миелодиспластическим синдромом»

Актуальность темы исследования

Миелодиспластический синдром (МДС) (МКБ-046) - группа клональных заболеваний, которые возникают после воздействия негативных факторов на плюрипотентные гемопоэтические стволовые клетки (ПГСК), что приводит к их соматическим мутациям. Появление таких мутаций определяет формирование патологического клона гемопоэтических клеток за счет выключения в них процессов апоптоза и может привести к трансформации МДС в острый миелоидный лейкоз (ОМЛ). Помимо этого, нарушения гемопоэза приводят к интенсификации апоптоза нормальных кроветворных клеток, формируя цитопении в периферической крови [125]. Наиболее частыми причинами смерти больных МДС являются последствия цитопении (инфекции, геморрагические осложнения), лейкозные поражения внутренних органов [1; 12]. Наиболее трудной в диагностике и определении прогноза заболевания является группа больных МДС с нормальным кариотипом клеток красного костного мозга (КМ), что подтверждает вариабельность общей выживаемости этого контингента пациентов [85]. Диагностика МДС является результатом исключения других патологических состояний, сопровождающихся гемопоэтическими нарушениями и цитопенией [6].

Ряд авторов предполагают, что в формировании патогенеза и клинической манифестации МДС важная роль отводится эпигенетическим нарушениям [89; 127]. При этом нет единого консенсуса во мнении о том, какие нарушения (генетические или эпигенетические) в гемопоэтических клетках являются значимыми для изучения, так как клональная эволюция заболевания сопровождается совместным их наличием. Поэтому установить превалирующее влияние генетических или эпигенетических нарушений на особенности течения МДС независимо друг от друга на сегодня не представляется возможным.

Несмотря на наличие исследований в этой области, по-прежнему неизвестно, какие именно мутации в генах эпигенетической регуляции формируют особенности течения МДС и закономерности трансформации этого заболевания в ОМЛ [98]. Некоторые мутации генов эпигенетической регуляции (TET2, DNMT3A, ANSXL1) не всегда специфичны для МДС, так как могут встречаться при Ph-негативных миелопролиферативных заболеваниях (МПЗ) и, по мнению некоторых исследователей, определяют риск трансформации в ОМЛ [158; 153].

Наличие данных о соматических мутациях кроветворных клеток при МДС привело к попытке создания новых прогностических маркеров этого заболевания [2; 190], но не позволило значимо объективизировать прогнозирование этого патологического процесса.

Исследование C. A. Cargo и соавт. (2015) эпигенетического профиля в когорте пациентов с клональными нарушениями гемопоэза неопределенного потенциала (CHIP) показало ассоциацию эпигенетических нарушений со снижением общей выживаемости, но с неопределённой клинической точностью ввиду отсутствия контрольной группы [37]. Анализ мутационного ландшафта при МДС показал, что чаще всего можно обнаружить мутации в генах эпигенетической регуляции TET2, DNMT3A, ASXL1, но с наибольшей прогностической значимостью и возможностью выделения доминирующей мутации в генах DNMT3A и ASXL1 [130].

Таким образом, можно утверждать, что гены DNMT3A и ASXL1, вероятно, определяющие патогенез МДС, не являются достаточно изученными для широкого применения в клинической практике с целью прогнозирования этого заболевания. Анализ литературных данных позволяет нам отметить недостаток в используемых способах лабораторной идентификации мутаций в генах DNMT3A и ASXL1 [67; 72; 212].

В связи с вышеизложенным, изучение мутаций генов DNMT3A и ASXL1 при МДС считаем актуальным и клинически значимым. Выявление указанных

генетических нарушений, вероятно, позволит определить их прогностическое значение при МДС, дополнит имеющуюся информацию о патогенезе гемопоэтических нарушений при этом патологическом состоянии.

Актуальным является определение взаимосвязи миссенс-мутации R882H и мутации со сдвигом рамки считывания c.1934dupG в генах ОЫМТЗА и ASXL1 соответственно с прогнозом и тяжестью течения МДС и трансформацией заболевания в ОМЛ, а также доработка лабораторной идентификации точечных мутаций.

Степень разработанности темы

За последние годы были достигнуты значительные успехи в исследовании механизмов развития МДС в части определения сопутствующих различных генетических нарушений. Но несмотря на то, что есть научные данные о распространенности и некоторой роли эпигенетических нарушений при МДС, практически отсутствуют достоверные данные о конкретном влиянии отдельных частых мутаций в эпигенетических регуляторах на клинические особенности и прогноз заболевания. В частности, до конца не определена клиническая роль мутаций R882H в гене ОИМТЗА и c.1934dupG в гене ASXL1 при МДС, а также не представлено рекомендаций и данных о целевых группах пациентов для проведения молекулярно-генетических исследований по идентификации данных мутаций.

Цель исследования

Определить значимость различных методов выявления миссенс-мутации c.2645G>A ^882Н) в гене DNMT3A и мутации со сдвигом рамки считывания c.1934dupG в гене ASXL1 для верификации и прогнозирования особенностей течения МДС.

Задачи исследования:

1. Адаптировать методики рестрикционного анализа и аллель-специфической ПЦР для исследования ДНК из клеток венозной крови больных МДС по детекции мутаций R882H в гене ЭЫМТЗА, c.1934dupG в гене ASXL1, а затем сопоставить с методом секвенирования по Сэнгеру или другими методами ПЦР.

2. Установить особенности и ограничения рестрикционного анализа и аллель-специфической ПЦР по детекции мутаций R882H в гене ОИМТЗА и c.1934dupG в гене ASXL1 в ДНК из клеток венозной крови.

3. Изучить результативность адаптированных методик рестрикционного анализа и аллель-специфической ПЦР по идентификации мутаций R882H в гене БЫМТЗА, c.1934dupG в гене ASXL1 в ДНК из клеток венозной крови у больных МДС и сопоставить с результатами в группах ОМЛ, МПЗ и у лиц без гематологической патологии.

4. Оценить влияние мутаций R882H в гене ЭЫМТЗА и c.1934dupG в гене ASXL1 на общую выживаемость и особенности течения МДС.

5. Разработать алгоритм применения рестрикционного анализа и аллель-специфической ПЦР для выявления мутаций R882H в гене ЭЫМТЗА и c.1934dupG в гене ASXL1 на основе установленных результатов и ограничений анализов.

Научная новизна исследования

Впервые определена роль мутаций R882H в гене ЭЫМТЗА и c.1934dupG в гене ASXL1 в формировании особенностей течения МДС и получены данные по частоте этих мутаций у больных, проживающих на территории Российской Федерации. Исследована концепция прогнозирования тяжести течения МДС, основанная на идентификации генных мутаций R882H в гене ОИМТЗА и c.1934dupG в гене ASXL1 при помощи рестрикционного анализа и аллель-специфической ПЦР, которая может объективизировать риски у пациентов с этой

патологией. Было впервые установлено, что мутация c.1934dupG в гене ASXL1 не является самостоятельным прогностическим маркером МДС, но чаще идентифицируется у мужчин, у которых, при трансформации МДС в ОМЛ, будет тяжёлое и резистентное течение гемобластоза, что позволяет включить их в группу кандидатов для ТГСК и в качестве претендентов для разработки таргетной терапии мутации c.1934dupG в гене ASXL1.

Теоретическая и практическая значимость работы

По результатам диссертационной работы доказано, что мутация c.1934dupG в гене ASXL1 является объективным критерием клональности поражения КМ, встречается при разных вариантах МДС, чаще у мужчин, и не предопределяет тяжёлое течение заболевания.

В проведенном исследовании внедрены методики определения мутаций R882H в гене DNMT3A и c.1934dupG в гене ASXL1 при помощи ПЦР в реальном времени. Сопоставлены разные способы идентификации мутации R882H в гене DNMT3A, оценены их качественные характеристики. Определена рекомендация для идентификации мутации R882H в гене DNMT3A и разработана тактика возможной терапии МДС при идентификации мутации c.1934dupG в гене ASXL1 методикой аллель-специфической ПЦР, что позволит оптимизировать молекулярно-генетические исследования в реальной клинической практике.

Методология и методы исследования

Диссертационная работа выполнена на базе ФГБОУ ВО РостГМУ Минздрава России и была одобрена Локальным независимым этическим комитетом (протокол № 14/20 от 24 сентября 2020 г.). В работе были использованы клинические, лабораторные и статистические методы исследования.

Положения, выносимые на защиту:

1. Мутация R882H в гене DNMT3A не идентифицировалась рестрикционным анализом или HRM-анализом у всех респондентов, проживающих в Южном и Северо-Кавказском федеральных округах.

2. Для аллель-специфической ПЦР по идентификации мутации c.1934dupG в гене ASXL1 необходима ДНК из клеток венозной крови меньшей концентрации, чем для секвенирования по Сэнгеру, что делает её методикой выбора при цитопении.

3. Мутация c.1934dupG в гене ASXL1 определялась чаще в группах обследуемых больных МДС, чем установленная ранее по данным литературы частота всех мутаций в гене ASXL1 при МДС, что связано с более низким порогом идентификации мутантной ДНК.

4. Мутация c.1934dupG в гене ASXL1 выявлялась во всех группах анализируемых больных МДС, чаще у мужчин.

5. Мутация c.1934dupG в гене ASXL1 не коррелировала с тяжестью МДС. Однако было отмечено, что мужчины с мутацией c.1934dupG в гене ASXL1 при трансформации МДС в ОМЛ формируют группу больных с низкой выживаемостью.

Степень достоверности и апробация результатов

Основные положения диссертационной работы и результаты, полученные автором, были представлены и доложены на научных мероприятиях:

1. Научно-практическая конференция ученых России и Хорватии (4 октября 2019 г., Москва).

2. VII Международная конференция молодых ученых: биофизиков, биотехнологов, молекулярных биологов и вирусологов (27-29 октября 2020 г., Новосибирск).

3. Школа-конференция: генетические технологии в фундаментальных и прикладных исследованиях (2-4 декабря 2020 г., Москва).

4. IV Международный симпозиум «Единое здоровье» (28 апреля 2021 г., Ростов-на-Дону).

5. The EHA 2021 Virtual Congress (9-17 июня 2021 г., Гаага).

6. European Human Genetics Conference (28-31 августа 2021 г., Вена).

7. 8-я итоговая научная сессия молодых учёных, проводимая в рамках XI Всероссийской научно-практической конференции «Непрерывное образование в России: состояние и перспективы» (29 сентября 2021 г., Ростов-на-Дону).

8. 9-я итоговая научная сессия молодых учёных РостГМУ (19 декабря

2022 г., Ростов-на-Дону).

9. Межрегиональная научно-практическая конференция «Оптимизация диагностики и лечения заболеваний системы крови» (25-26 ноября 2022 г., Ростов-на-Дону).

10. Выступление на заседании кафедральной конференции (27 февраля

2023 г., Ростов-на-Дону).

11. II Международный Евроазиатский Форум врачей внутренней медицины (15-16 ноября 2023 г., Уфа).

По теме диссертации опубликованы 17 печатных работ, из них 2 - в журналах, рекомендованных ВАК РФ; 1 - в международных базах Scopus/Web of Science; 1 - в базе RSCI; 1 патент РФ.

Соответствие диссертации паспорту научной специальности

Диссертация соответствует паспорту научной специальности 3.1.28. Гематология и переливание крови. Результаты исследования соответствуют пунктам: 1 - в части использования морфологических, иммунологических и генетических методов исследования МДС; 3 - в части исследования взаимосвязи МДС и мутаций R882H в гене DNMT3A и c.1934dupG в гене ASXL1; 4 - в части изучения клинического течения МДС в зависимости от статуса мутаций R882H в гене DNMT3A и c.1934dupG в гене ASXL1.

Внедрение результатов исследования

Доработанные методики определения мутаций R882H в гене DNMT3A и c.1934dupG в гене ASXL1 используются в научно-исследовательской деятельности Академии биологии и биотехнологии им. Д. И. Ивановского ЮФУ, при чтении лекций и проведении практических занятий кафедр «Биоинженерия» и «Фундаментальная медицина» Донского государственного технического университета. Применяются в клинической работе гематологического отделения клиники при ФГБОУ ВО РостГМУ Минздрава России.

Личный вклад автора

Автор совместно с научным руководителем участвовал в выборе направления исследования и темы. Лично автором проведены анализ литературных источников, планирование исследования, постановка задач, сбор биологического материала, доработка и адаптация методик молекулярно-генетического исследования венозной крови, осуществлено ведение первичной документации и анализ информации из историй болезни, статистическая обработка и обобщение полученных результатов.

Структура и объём диссертации

Структура диссертации включает разделы: введение, обзор литературы, материалы и методы исследования, результаты, обсуждение, выводы, практические рекомендации, список литературы и приложения. Объём диссертации составляет 144 страницы машинописного текста и включает 27 рисунков, 23 таблицы, 230 источников литературы и 7 приложений.

Благодарности

Автор выражает огромную признательность младшему научному сотруднику Академии биологии и биотехнологии им. Д. И. Ивановского ЮФУ Кулаевой Елизавете Дмитриевне за содействие и помощь на всех этапах выполнения научного исследования.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 1.1. Особенности заболеваемости и этиология МДС

1.1.1. Заболеваемость

В Российской Федерации отсутствуют точные данные о заболеваемости МДС [4]. Важным критерием МДС считается плохой прогноз по 5-летней относительной выживаемости, что обусловлено модифицируемыми и немодифицируемыми факторами риска, пожилым, как правило, возрастом пациентов и сопутствующей патологией [189; 174]. Мужчины болеют чаще женщин [207]. По данным регистра программы эпиднадзора (SEER) Национального института рака Соединенных Штатов Америки (NCI) большинство случаев МДС обнаруживаются у пациентов от 60 лет и старше (медиана возраста - 76 лет) [122; 123].

Изначально МДС считался орфанным заболеванием. Так, в 1973 г. в США было зарегистрировано лишь 150 случаев специфического состояния дисмиелопоэза, предшествующего ОМЛ [175]. Первые данные об особенностях заболеваемости населения МДС были опубликованы в 1990 г. [41]. Причём тогда установили важные характеристики пациентов с этой патологией: пожилой и старческий возраст, мужчины болели чаще женщин. Была предложена числовая прогностическая система «Bournemouth scoring system», которая указывала совокупный риск в зависимости от уровня гемоглобина, числа нейтрофилов, тромбоцитов и бластных клеток в КМ. Несколько позднее Aul C. и соавт. применили в своем исследовании критерии франко-американо-британской экспертной группы (классификация FAB) и определили, что точное число случаев МДС неизвестно, потому что долгий промежуток времени не существовало объективных диагностических критериев этого заболевания [15]. При этом исследователям удалось разработать собственную версию числовой прогностической системы МДС - «Dusseldorf scoring system», которая отличалась

от «Bournemouth scoring system» дополнительным учётом уровня лактатдегидрогеназы сыворотки крови (ЛДГ) [16].

В 2001 г. Всемирная организация здравоохранения (ВОЗ) предложила первую единую классификацию МДС на основе ранее существовавшей классификации FAB, с последующим её пересмотром в 2008 г. [209; 208]. Позже, согласно классификационным критериям ВОЗ 2008 г., был проведён фундаментальный анализ заболеваемости МДС в Дюссельдорфе [70], где только 5,8 % пациентов были моложе 50 лет, а самая высокая заболеваемость выявлена в возрастной группе от 80 до 90 лет. Важное уточнение данных было представлено в исследовании Strom S. и соавт., а именно учёт МДС у детей [186]. Однако фактическая заболеваемость МДС в отдельных странах, как и во всем мире, неизвестна, и её текущая оценка, по данным разных авторов, широко варьируется: от 10 000 до 30 000-55 000 новых случаев в год [20; 170].

МДС встречается во всем мире и везде имеет схожую характеристику заболеваемости. Обзор данных по Великобритании выявил колебания заболеваемости МДС [171]. Например, при использовании стандарта регистра до 1996 г. (когда МДС не входил в онкологические регистры) [135] показатель заболеваемости оказался ниже практически в 2,5 раза, чем при использовании регистра с включением МДС в онкологические заболеваний при расчёте на 100 000 населения.

Хотя точных эпидемиологических данных по заболеваемости МДС в Российской Федерации не представлено, отдельные клинические случаи или наблюдения в лечебно-профилактических учреждениях, описанные исследователями, демонстрируют однородную с зарубежными данными характеристику пациентов.

1.1.2. Взаимосвязь этиологии и эпигенетических нарушений

Этиология МДС до настоящего времени остается неизвестной. Считается, что МДС является полиэтиологическим заболеванием. Развитию этой патологии

предшествует реализация генетически обусловленной предрасположенности к факторам окружающей среды, которые запускают патологические процессы, воздействующие на геном ПГСК. До настоящего времени не разработан способ предотвращения развития и прогрессирования МДС, и любые предлагаемые исследователями профилактические меры являются обобщёнными, хотя часть факторов риска являются модифицируемыми.

У молодых пациентов и детей необходимо принимать во внимание состояния с наследственными нарушениями гемопоэза. Анализ доступной литературы позволяет констатировать, что у пожилых пациентов МДС возникает на фоне совокупных факторов риска или приобретённых заболеваний крови и носит стохастический характер [34].

ПГСК участвуют в поддержании необходимого количества клеток крови за счет асимметричного деления и однонаправленной дифференциации [82; 30]. Активное деление одной ПГСК может привести к вытеснению другой. Такая конкуренция в итоге может формировать участок (очаг) в КМ, который теряет клоны нормальных ПГСК, в то время как оставшиеся в участке клоны с генетическими нарушениями становятся все многочисленнее [40; 150]. Риск развития и прогрессии МДС обусловлен генетическими, эпигенетическими и иммунными изменениями в ПГСК, которые приводят к формированию опухолевых клонов в КМ, менее чувствительных к регулирующим факторам (ГЬ 3 и ГЬ 6, гранулоцитарные и макрофагальные колониестимулирующие факторы и т. д.), что закономерно стимулирует процессы апоптоза в зрелых клетках периферической крови [77; 161].

Эпигенетические изменения экспрессии ДНК происходят без изменения генотипа за счёт внегеномных механизмов. Роль таких эпигенетических механизмов в процессах развития организма человека проявляется на стволовых клетках, ДНК которых одинаковы, но при этом в результате их пролиферации и дозревания возникает множество различающихся между собой специализированных клеток организма человека. Выявлено, что приобретенные в

онтогенезе эпигенетические модификации, которые не всегда доброкачественны, могут передаваться по наследству, влияя на фенотипические проявления, у ближайших двух поколений [84].

В целом эпигенетический контроль поддерживает идентичность клеток и их репрограммирование. Исследования в области онкологии преимущественно сосредоточены на изучении нарушений разных эпигенетических механизмов реализации, которые способствуют онкогенезу и ведут к приобретению ключевых признаков злокачественной опухоли [100]. При этом изучение реакций метилирования является преимущественным, поскольку такие реакции охватывают геном и протеом человека, в то время как ацетилирование происходит только в протеоме.

Рядом исследователей было выявлено потенциальное клиническое значение - нарушения посттрансляционной модификации гистонов при Т-клеточных лимфомах, что стало основанием для разработки эпигенетической терапии [230]. Обнаружено, что все малые РНК, которые вовлечены в процессы пролиферации, дифференцировки и апоптоза клеток, функционируют на основе механизма РНК-интерференции, и их экспрессия сама по себе различна в тканях и может зависеть от сопутствующего патологического процесса [5].

Первое, с чем связывали причину возникновения МДС, было использование химиотерапии (особенно алкилирующих агентов или ингибиторов топоизомеразы) и/или радиотерапии в онкологии [180], которые улучшали выживаемость при злокачественных новообразованиях. Но эти методы лечения порой имели побочный эффект в виде индукции вторичного МДС, в том числе у лиц молодого возраста и детей. Латентный период до развития вторичного МДС после воздействия алкилирующих агентов или лучевой терапии составляет от 5 до 10 лет, и риск дозозависимый [172; 59].

Рядом исследователей зарегистрирована корреляция между возникновением МДС и воздействием некоторых химических агентов, таких как бензол [86; 224], причём степень риска возрастала с увеличением интенсивности и количества лет

воздействия. Некоторые авторы [168; 151; 187; 74] сообщали о возникновении МДС вследствие воздействия пестицидов и гербицидов и прогнозировали высокий уровень риска последующей трансформации МДС в ОМЛ. С другой стороны, упомянутые вещества являются общепризнанными канцерогенами и заведомо не могут быть специфическими для возникновения МДС, хотя, вероятно, могут негативно влиять на эпигенетический контроль кроветворных клеток.

В некоторых исследованиях была установлена ассоциация между табакокурением и развитием МДС [33; 157], а также хромосомными аберрациями (делеции 5q и 7^ [93; 28; 152]. При анализе риска возникновения МДС от табакокурения и употребления алкоголя результаты были противоречивыми [51], поэтому нельзя утверждать наличие причинно-следственной связи между данными вредными привычками и наличием МДС. Однако МДС чаще встречается у мужчин, чем у женщин. Это может быть связано с тем, что прошлые поколения мужчин чаще курили и подвергались воздействию негативных условий труда (химических и физических факторов), что не противоречит сохранению негативных эпигенетических модификаций в последующих поколениях, несмотря на текущий образ жизни.

Редкие семейные случаи МДС были описаны в связи с делецией 5q или 7q, а также трисомией 8 хромосомы [68; 57]. Особую категорию риска возникновения МДС составляют люди с нарушением гемопоэза на фоне гемоконтактных вирусных и бактериальных инфекций [219; 102; 201; 120; 108].

Для МДС в настоящее время не установлено различий в заболеваемости в зависимости от расовой и географической идентичности. Но в странах Восточной Азии регистрируется большее количество пациентов с хромосомными аномалиями (трисомия 8 хромосомы) [42; 165; 134].

Анемия, индуцируемая хроническим заболеванием (АХЗ), приводит к снижению физиологических уровней эритропоэтина и развитию гематологических злокачественных заболеваний [217]. Известно, что

заболеваемость АХЗ, как и МДС, увеличивается с возрастом [124], а патогенез базируется на угнетении эритропоэза цитокинами: ^N-7, TGF-P и TNF-a [143]. Сам снижает количество и активность эритропоэтина, а также снижает

экспрессию фактора роста стволовых клеток (SCF) [149; 63]. Очевидно, что анемия в таких ситуациях сама по себе потенцирует гипоксию тканей, в том числе КМ (как кроветворных, так и стромальных клеток). Причём гипоксия является сопутствующим патологическим процессом при злокачественных заболеваниях [164; 179]. Большинство больных МДС имеют устойчивую к терапии эритропоэз-стимулирующими компонентами анемию [155].

Таким образом, можно выделить следующие факторы риска возникновения МДС с точки зрения влияния на эпигенетическую модификацию: пожилой и старческий возраст, мужской пол, наличие в прошлых поколениях вредных условий труда и окружающей среды или определённых хронических инфекционных, гематологических заболеваний.

1.2. Клиническая и лабораторная характеристика МДС

1.2.1. Диагностические критерии Необходимые диагностические критерии МДС [76] приведены в таблице 1.

Таблица 1 - Диагностические критерии МДС ^геепЬе^ Р. L. и соавт., 2016)

Критерий Характеристика

Обязательный - регистрируемые анемии или цитопении более 6 месяцев

Продолжение таблицы 1

Критерий Характеристика

Решающий - дисплазия КМ не менее 10 % от всех клеток или 15 % кольцевых форм сидеробластов, или 5-19 % бластных клеток; - обнаружение цитогенетических нарушений (трисомия по 8 хромосоме, делеция 7q, 5q и 20q)

Дополнительный - молекулярно-генетические маркеры и иммунофенотипирование бластных клеток КМ

Любая цитопения может соответствовать манифестации МДС. Гораздо важнее, чем степень цитопении, - их продолжительность, особенно в группах МДС низкого риска, без четких цитогенетических или молекулярно-генетических особенностей. В этих случаях цитопения должна присутствовать не менее 6 месяцев для более достоверной диагностики [204]. Существующие методы лабораторной диагностики однозначно несут пользу для объективной верификации и контроля МДС. И всё же, несмотря на имеющиеся достижения в исследовании патогенеза и этиологии МДС, по-прежнему остаётся доля субъективности врача и применяемых им методов. Так, Hodes А. и соавт. в своем исследовании [90] пришли к выводу о том, что с определённой частотой встречаются расхождения результата расчёта бластов биоптата КМ с имеющимся цифровым эталоном, и это приводит к неверной интерпретации диагноза МДС или ОМЛ. Поскольку один и тот же врач может интерпретировать один и тот же препарат по-разному, необходимо принимать во внимание, что подсчёт бластов в аспирате КМ имеет значение в дифференциальной диагностике МДС и ОМЛ.

Более того, дисплазия КМ не обязательно сопровождается изменениями в периферической крови или наоборот, что негативно отражается на возможности скрининга при использовании рутинных гематологических исследований. У

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Липилкин Павел Викторович, 2024 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Грицаев, С.В. Трансформация вторичного миелодиспластического синдрома в атипичный хронический миелолейкоз у больной острым миелоидным лейкозом / С.В. Грицаев, И.И. Кострома, И.М. Запреева и соавт. // Терапевтический архив. - 2016. - Т. 88, № 7. - С. 104-107. - ISSN 2309-5342

2. Ковригина, А.М. Пересмотренная Классификация ВОЗ опухолей гемопоэтической и лимфоидной ткани, 2017 (4-е издание): миелоидные неоплазии / А.М. Ковригина // Архив патологии. - 2018. - Т. 80, № 6. - С. 43-48. - DOI: 10.17116/patol20188006143

3. Савченко, В.Г. Национальные клинические рекомендации по диагностике и лечению миелодиспластических синдромов взрослых. / В.Г. Савченко, Е.Н. Паровичникова, А.В. Кохно и соавт. // Гематология и трансфузиология. - 2016. - Т. 61, № 1-S4. - С. 3-32. - DOI: 10.18821/0234-5730-2016-61-1(Прил.4)

4. Семочкин, С.В. Эпидемиология миелодиспластических синдромов в г. Москве по данным регионального регистра / С.В. Семочкин, Г.А. Дудина, Т.Н. Толстых // Медицинский вестник Башкортостана. - 2017. - Т. 12, № 2(68). - С. 153-156. - ISSN: 1999-6209

5. Тигунцев, В.В. Малые некодирующие РНК как перспективные биомаркеры: биогенез и терапевтические стратегии / В.В. Тигунцев, С.А. Иванова, В.Ю. Серебров и соавт. // Бюллетень сибирской медицины. - 2016. - Т. 15, №. 2. - C. 112-122. - DOI 10.20538/1682-0363-2016-2-112-126

6. Abaigar, M. Prognostic impact of the number of methylated genes in myelodysplastic syndromes and acute myeloid leukemias treated with azacytidine / M. Abaigar, F. Ramos, R. Benito et al. // Annals of Hematology. - 2013. -Т. 92, № 11. -С. 1543-1552. - D0I:10.1007/s00277-013-1799-9.

7. Abdel-Wahab, O. ASXL1 mutations promote myeloid transformation through loss of PRC2-mediated gene repression / O. Abdel-Wahab, M. Adli, L. LaFave et al. // Cancer Cell. - 2012. - T. 22. - C. 180-193. DOI: 10.1016/j.ccr.2012.06.032

8. Ahmad, K. The histone variant H3.3 marks active chromatin by replication-independent nucleosome assembly / K. Ahmad, S. Henikoff // Molecular Cell. - 2002. -T. 9. - C. 1191-1200. - DOI: 10.1016/s1097-2765(02)00542-7

9. Albert, M. Histone methyltransferases in cancer / M. Albert, K. Helin // Seminars in cell & developmental biology. - 2010. - T. 21, № 2. - C. 209-220. - DOI: 10.1016/j.semcdb.2009.10.007

10. Allfrey, V.G. Acetylation and methylation of histones and their possible role in the regulation of RNA synthesis / V.G. Allfrey, R. Faulkner, A.E. Mirsky // Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. -1964. - T. 51. - C. 786-794. - DOI: 10.1073/pnas.51.5.786

11. Allis, C.D. The molecular hallmarks of epigenetic control / C.D. Allis, T. Jenuwein // Nature reviews. Genetics. - 2016. - T. 17, №8. - C. 487-500. - DOI: 10.1038/nrg.2016.59

12. Arber, D.A. The 2016 revision to the World Health Organization classification of myeloid neoplasms and acute leukemia / D.A. Arber, A. Orazi, R. Hasserjian et al. // Blood. - 2016. - T. 12, № 720. - C. 2391-2405. - DOI: 10.1182/blood-2016-03-643544

13. Asada, S. The role of ASXL1 in hematopoiesis and myeloid malignancies / S. Asada, T. Fujino, S. Goyama et al. // Cellular and molecular life sciences. - 2019. -T. 76, № 13. - C. 2515-2519. - DOI: 10.1007/s00018-019-03084-7

14. Audia, J.E. Histone modifications and cancer / J.E. Audia, R.M. Campbell // Cold Spring Harbor perspectives in biology. - 2016 - T. 8, № 4. - C. 3-25. - DOI: 10.1101/cshperspect.a019521

15. Aul, C. Epidemiological features of myelodysplastic syndromes: results from regional cancer surveys and hospital-based statistics / C. Aul, A. Giagounidis, U. Germing // International journal of hematology. - 2001. - T. 73, № 4. - C. 405-410. -DOI: 10.1007/BF02994001

16. Aul, C. Primary myelodysplastic syndromes: analysis of prognostic factors in 235 patients and proposals for an improved scoring system. / C. Aul, N. Gattermann, A. Heyll et al. // Leukemia. - 1992. - T. 6, № 1. - C. 52-59. - ISSN 0887-6924

17. Azuara, V. Chromatin signatures of pluripotent cell lines / V. Azuara, P. Perry, S. Sauer et al. // Nature cell biology. - 2006. - T. 8, № 5. - C. 532-538. - DOI: 10.1038/ncb1403

18. Barski, A. High-resolution profiling of histone methylations in the human genome / A. Barski, S. Cuddapah, K. Cui et al. // Cell. - 2007. - T. 129. - C. 823-837. - DOI: 10.1016/j.cell.2007.05.009

19. Battich, N. Control of transcript variability in single mammalian cells / N. Battich, T. Stoeger, L. Pelkmans // Cell. - 2015. - T. 163. - C. 1596-1610. - DOI: 10.1016/j.cell.2015.11.018

20. Bejar, R. Recent developments in myelodysplastic syndromes / R. Bejar, D.P. Steensma // Blood. - 2014. - T. 124, № 18. - C. 2795-2803. - DOI: 10.1182/blood-2014-04-522136

21. Bejar, R. Somatic mutations predict poor outcome in patients with myelodysplastic syndrome after hematopoietic stem-cell transplantation / R. Bejar, K.E Stevenson., B. Caughey et al. // Journal of clinical oncology. - 2014. - T. 32. - C. 2692-2696. - DOI: 10.1200/jœ.2013.52.3381

22. Bejar, R. Somatic mutations predict poor outcome in patients with myelodysplastic syndrome after hematopoietic stem-cell transplantation / R. Bejar, K.E. Stevenson, B. Caughey et al. // Journal of clinical oncology. - 2014. - T. 32. - №. 25. -C. 2691. - DOI: 10.1200/jœ.2013.52.3381

23. Bejar, R. TET2 mutations predict response to hypomethylating agents in myelodysplastic syndrome patients / R. Bejar, A. Lord, K. Stevenson et al. // Blood. -2014. - T. 124, № 17. - C. 2705. - DOI: 10.1182/blood-2014-06-582809

24. Bejar, R. Validation of a prognostic model and the impact of mutations in patients with lower-risk myelodysplastic syndromes / R. Bejar, K.E. Stevenson, B.A.

Caughey et al. // Journal of clinical oncology. - 2012. - T. 30. - C. 3376-3382. - DOI: 10.1200/JCO.2011.40.7379

25. Berenstein, R. Comparative examination of various PCR-based methods for DNMT3A and IDH1/2 mutations identification in acute myeloid leukemia / R. Berenstein, I.W. Blau, A. Kar et al. // Journal of Experimental & Clinical Cancer research. - 2014. - T. 33, № 1. - C. 2-10. - DOI: 10.1186/1756-9966-33-44

26. Bernstein, B.E. A bivalent chromatin structure marks key developmental genes in embryonic stem cells / B.E. Bernstein, T.S. Mikkelsen, X. Xie et al. // Cell. -2006. - T. 125, № 2. - C. 315-326. - DOI: 10.1016/j.cell.2006.02.041

27. Bird, A. A fraction of the mouse genome that is derived from islands of nonmethylated, CpG-rich DNA / A. Bird, M. Taggart, M. Frommer et al. // Cell. -1985. - T. 40. - C. 91-99. - DOI: 10.1016/0092-8674(85)90312-5

28. Bjork, J. Smoking and myelodysplastic syndromes / J. Bjork, M. Albin, N. Mauritzson et al. // Epidemiology. - 2000. - T. 11, № 3. - C. 285-291. - DOI: 10.1097/00001648-200005000-00010

29. Blackledge, N.P. CpG islands recruit a histone H3 lysine 36 demethylase / N.P. Blackledge, J.C. Zhou, M.Y. Tolstorukov et al. // Molecular cell. - 2010. - T. 38, № 2. - C. 179-90. - DOI: 10.1016/j.molcel.2010.04.009

30. Blokzijl, F. Tissue-specific mutation accumulation in human adult stem cells during life / F. Blokzijl, J. de Ligt, M. Jager et al. // Nature. - 2016. - T. 538, №7624. - C. 260-264. - DOI: 10.1038/nature 19768

31. Boyer, L.A. Polycomb complexes repress developmental regulators in murine embryonic stem cells / L.A. Boyer, K. Plath, J. Zeitlinger et al. // Nature. -2006. - T. 441, № 7091. - C. 349-353. - DOI: 10.1038/nature04733

32. Breems, D.A. Monosomal karyotype in acute myeloid leukemia: a better indicator of poor prognosis than a complex karyotype / D.A. Breems, W.L. Van Putter, G.E. De Greef et al. // Journal of clinical oncology. - 2008. - T. 26. № 29. - C. 47914797. - DOI: 10.1200/Jœ.2008.16.0259

33. Brownson, R. Cigarette smoking and adult leukemia: A meta-analysis / R. Brownson, T. Novotny, M. Perry // Archives of internal medicine. - 1993. - T. 153, № 4. - C. 469-475. - DOI:10.1001/archinte.1993.00410040037006

34. Buenrostro, J.D. Integrated Single-Cell Analysis Maps the Continuous Regulatory Landscape of Human Hematopoietic Differentiation / J.D. Buenrostro, M.R. Corces, C.A. Lareau et al. // Cell. - 2018. - T. 173, № 6. - C. 1535-1548. - DOI: 10.1016/j.cell.2018.03.074

35. Busque, L. Recurrent somatic TET2 mutations in normal elderly individuals with clonal hematopoiesis / L. Busque, J.P. Patel, M.E. Figueroa et al. // Nature genetics. - 2012. - T. 44. - C. 1179-1181. - DOI: 10.1038/ng.2413

36. Carbuccia, N. Mutations of ASXL1 gene in myeloproliferative neoplasms / N. Carbuccia, A. Murati, V. Trouplin et al // Leukemia. - 2009. - T. 23. - C. 21832186. - DOI:10.1038/leu.2009.141

37. Cargo, C. A. Targeted sequencing identifies patients with preclinical MDS at high risk of disease progression / C.A. Cargo, N. Rowbotham, P. Evans et al. // Blood. - 2015. -T. 126, № 21. - C. 2362-2365. - DOI: 10.1182/blood-2015-08-663237

38. Chalker, D.L. Epigenetics of ciliates / D.L. Chalker, E. Meyer, K. Mochizuki // Cold Spring Harbor perspectives in biology. - 2013. - T. 5, № 12. - C. 320. - DOI: 10.1101/cshperspect.a017764

39. Chou, W.C. Distinct clinical and biological features of de novo acute myeloid leukemia with additional sex comb-like 1 (ASXL1) mutations / W.C. Chou, H.H. Huang, H.A. Hou et al. // Blood. - 2010. - T. 116, № 20. - C. 4086. - DOI: 10.1182/blood-2010-05-283291

40. Clevers, H. Defining Adult Stem Cells by Function, not by Phenotype / H. Clevers, F.M. Watt // Annu Rev Biochem. - 2018. - T. 87. - C. 1015-1027. - DOI: 10.1146/annurev-biochem-062917-012341

41. Cogle, C.R. Incidence and Burden of the Myelodysplastic Syndromes / C. R. Cogle // Current hematologic malignancy reports. - 2015. - T. 10, № 3. - C. 272280. - DOI: 10.1007/s11899-015-0269-y

42. Copley, G.B. Hospital-Based Case-Control Study of MDS Subtypes and Benzene Exposure in Shanghai / G.B. Copley, A.R. Schnatter, T.W. Armstrong et al. // Journal of occupational and environmental medicine. - 2017. - T. 59, № 4. - C. 349355. - DOI: 10.1097ATOM.0000000000000952

43. Cui, Y. Impact of TET2, SRSF2, ASXL1 and SETBP1 mutations on survival of patients with chronic myelomonocytic leukemia. / Y. Cui, H. Tong, X. Du et al. // Experimental hematology & oncology. - 2015. - T. 4, № 14. C. 3. - DOI: 10.1186/s40164-015-0009-y

44. Cui, Y. TET2 mutations were predictive of inferior prognosis in the presence of ASXL1 mutations in patients with chronic myelomonocytic leukemia / Y. Cui, H. Tong, X. Du et al. // Stem cell investigation. - 2016. - T. 3, № 50. - C. 2-4. -DOI:10.21037/sci.2016.09.04

45. Dawson, M.A. Cancer epigenetics: from mechanism to therapy / M.A. Dawson, T. Kouzarides // Cell. - 2012. - T. 150. - C. 12-27. - DOI: 10.1016/j .cell .2012.06.013

46. de Witte, T. Use of hematopoietic cell transplantation for patients with myelodysplastic syndrome and chronic myelomonocytic leukemia / T. de Witte, D. Bowen, M. Robin et al. // Blood. - 2017. - T. 130. - C. 92. - DOI: 10.1182/blood-2016-06-724500

47. Deeg, H.J. Five-group cytogenetic risk classification, monosomal karyotype, and outcome after hematopoietic cell transplantation for MDS or acute leukemia evolving from MDS / H.J. Deeg, B.L. Scott, M. Fang et al. // Blood. - 2012. -T. 120, № 7. - C. 1398-1408. - DOI: 10.1182/blood-2012-04-423046

48. Della Porta, M.G. Validation of WHO classification-based prognostic scoring system (WPSS) for myelodysplastic syndromes and comparison with the revised international prognostic scoring system (IPSS-R). A study of the international working group for prognosis in myelodysplasia (IWG-PM) / M.G. Della Porta, H. Tuechler, L. Malcovati et al. // Leukemia. - 2015. - T. 29, № 7. - C. 1502-1513. -DOI: 10.1038/leu.2015.55

49. Dhalluin, C. Structure and ligand of a histone acetyltransferase bromodomain. / C. Dhalluin // Nature. - 1999. - T. 399. - C. 491-496. - DOI: 10.1038/20974

50. Domcke, S. Competition between DNA methylation and transcription factors determines binding of NRF1 / S. Domcke, A.F. Bardet, P. Adrian Ginno et al. // Nature. - 2015. - T. 528, № 7583. - C. 575-579. - DOI: 10.1038/nature16462

51. Du, Y. Smoking and alcohol intake as risk factors for myelodysplastic syndromes (MDS) / Y. Du, J. Fryzek, M.A. Sekeres et al. // Leukemia research. - 2009.

- T. 9. - C. 9. - DOI: 10.1016/j.leukres.2009.08.006

52. Duchmann, M. Prognostic role of gene mutations in chronic myelomonocytic leukemia patients treated with hypomethylating agents / M. Duchmann, F.F. Yalniz, A. Sanna et al. // EBioMedicine. - 2018. - T. 31. - C. 174. -DOI: 10.1016/j.ebiom.2018.04.018

53. Duployez, N. Unlike ASXL1 and ASXL2 mutations, ASXL3 mutations are rare events in acute myeloid leukemia with t(8,21) / N. Duployez, J.B. Micol, N. Boissel et al. // Leukemia & lymphoma. - 2016. - T. 57, № 1. - C. 199. - DOI: 10.3109/10428194.2015.1037754

54. Ernst, T. Inactivating mutations of the histone methyltransferase gene EZH2 in myeloid disorders / T. Ernst, A.J. Chase, J. Score et al. // Nature genetics. -2010. - T. 42. - C. 722-726. - DOI: 10.1038/ng.621

55. Feinberg, A.P. Hypomethylation distinguishes genes of some human cancers from their normal counterparts / A.P. Feinberg, B. Vogelstein // Nature. - 1983.

- T. 301. - C. 89-92. - DOI: 10.1038/301089a0

56. Feinberg, A.P. The history of cancer epigenetics / A.P. Feinberg, B. Tycko // Nature reviews. Genetics. - 2004. - T. 4. - C. 143-153. - DOI: 10.1038/nrc1279

57. Fenaux, P. ESMO Guidelines Working Group. Myelodysplastic syndromes: ESMO Clinical Practice Guidelines for diagnosis, treatment and follow-up / P. Fenaux, D. Haase, G.F. Sanz et al. // Annals of oncology. - 2014. - T. 25. - C. 57. -DOI: 10.1093/annonc/mdu180

58. Figueroa, M.E. Leukemic IDH1 and IDH2 mutations result in a hypermethylation phenotype, disrupt TET2 function, and impair hematopoietic differentiation / M.E. Figueroa, O. Abdel-Wahab, C. Lu et al. // Cancer Cell. - 2010. -T. 18. - C. 553-567. - DOI: 10.1016/j.ccr.2010.11.015

59. Finazzi, G. Acute leukemia in polycythemia vera: ananalysis of 1638 patients enrolled in a prospective observational study / G. Finazzi, V. Caruso, R. Marchioli et al. // Blood. - 2005. -T. 105. - C. 2664. - DOI: 10.1182/blood-2004-09-3426

60. Fisher, C.L. A human homolog of additional sex combs, ADDITIONAL SEX COMBSLIKE 1, maps to chromosome 20q11 / C.L. Fisher, J. Berger, F. Randazzo et al. // Gene. - 2003. - T. 306. - C. 115. - DOI: 10.1016/s0378-1119(03)00430-x

61. Fisher, C.L. Characterization of ASXL1, a murine homolog of additional sex combs, and analysis of the Asx-like gene family / C.L. Fisher, F. Randazzo, R.K. Humphries et al. // Gene. - 2006. - T. 369. - C. 109. - DOI: 10.1016/j.gene.2005.10.033

62. Fodor, B.D. Jmjd2b antagonizes H3K9 trimethylation at pericentric heterochromatin in mammalian cells / B.D. Fodor, S. Kubicek, M. Yonezawa et al. // Genes & development. - 2006. - T. 20, № 12. - C. 1557-1562. - DOI: 10.1101/gad.388206

63. Fraenkel, P.G. Anemia of inflammation: a review / P.G. Fraenkel // The Medical Clinics of North America. - 2017. - T. 101, № 2. - C. 285-293. - DOI: 10.1016/j.mcna.2016.09.005

64. Fuster, J.J. Clonal hematopoiesis associated with TET2 deficiency accelerates atherosclerosis development in mice / J.J. Fuster, S. MacLauchlan, M.A. Zuriaga et al. // Science. - 2017. - T. 355, № 6327. - C. 842. - DOI: 10.1126/science.aag1381

65. Gangat, N. Mutations and prognosis in myelodysplastic syndromes: karyotype-adjusted analysis of targeted sequencing in 300 consecutive cases and development of a genetic risk model / N. Gangat, M. Mudireddy, T.L. Lasho et al. //

American journal of hematology. - 2018. - Т. 93, №. 5. - С. 692-695. - DOI: 10.1002/ajh.25064

66. Gangat, N. Myelodysplastic syndromes: Contemporary review and how we treat / N. Gangat, M.M. Patnaik, A. Tefferi // American journal of hematology. - 2016.

- Т. 91, № 1. - С. 76-89. - DOI: 10.1002/ajh.24253

67. Ganguly, B.B. Mutations of myelodysplastic syndromes (MDS): An update / B.B. Ganguly, N.N. Kadam // Mutation research. Reviews in mutation research. -2016. - Т. 769. - С. 47-62. - DOI: 10.1016/j.mrrev.2016.04.009

68. Gao, Q. Susceptibility gene for familial acute myeloid leukemia associated with loss of 5q and/or 7q is not localized on the commonly deleted portion of 5q / Q. Gao, M. Horwitz, D. Roulston et al. // Genes, chromosomes & cancer. - 2000. - Т. 28.

- С. 164. - ISSN 1045-2257

69. Garcia-Manero, G.A prognostic score for patients with lower risk myelodysplastic syndrome / G. Garcia-Manero, J. Shan, S. Faderl et al. // Leukemia. -2008. - Т. 22, № 3. - С. 538-543. - DOI: 10.1038/sj.leu.2405070

70. Germing U. No increase in age-specific incidence of myelodysplastic syndromes / U. Germing, C. Strupp, A. Kundgen et al. // Haematologica. - 2004. - Т. 89. - С. 905-909. - DOI:10.3324/ %25x

71. Ghada, M. Elsayed et al. Study of DNA methyl transferase 3A mutation in acute myeloid leukemic patients / M. Ghada, A. Abd Elgawad, F. Nevine et al. // Egyptian Journal of Medical Human Genetics. - 2018. - Т. 19, № 4. - С. 315-319. -DOI: 10.1016/j.ejmhg.2018.05.005

72. Gill, H. Molecular and Cellular Mechanisms of Myelodysplastic Syndrome: Implications on Targeted Therapy / H. Gill, A. Leung, Y.L. Kwon // International Journal of Molecular Sciences. - 2016. - Т. 17, № 4. - С. 440-451. -DOI: 10.3390/ijms17040440

73. Gill, H. Molecular and Cellular Mechanisms of Myelodysplastic Syndrome: Implications on Targeted Therapy / H. Gill, A.Y. Leung, Y.L. Kwong et al.

// International journal of molecular sciences. - 2016. - T. 17, № 4. - C. 444-450. -DOI: 10.3390/ijms17040440

74. Goldberg, H. Survey of exposure to genotoxic agents in primary myelodysplastic syndrome - Correlation with chromosome patterns and data in patients without haematological disease / H. Goldberg, E. Lusk, J. Moore et al. // Cancer research. - 1990. - T. 50, № 21. - C. 6876-6881. - ISSN: 0008-5472

75. Greenberg, P. International scoring system for evaluating prognosis in myelodysplastic syndromes / P. Greenberg, C. Cox, M.M. LeBeu et al. // Blood. - 1997. - T. 89, № 6. - C. 2079-2088. - DOI:10.1182/BLOOD.V89.6.2079

76. Greenberg, P.L. Cytopenia levels for aiding establishment of the diagnosis of myelodysplastic syndromes / P.L. Greenberg, H. Tuechler, J. Schanz et al. // Blood. -2016. - T. 128. - C. 2096-2097. - DOI: 10.1182/blood-2016-07-728766

77. Greenberg, P.L. Myelodysplastic Syndromes, Version 2.2017, NCCN Clinical Practice Guidelines in Oncology / P.L. Greenberg, R.M. Stone, A. Al-Kali et al. // Journal of the National Comprehensive Cancer Network. - 2017. - T. 15, № 1. - C. 60-86. - DOI: 10.6004/jnccn.2017.0007

78. Greenberg, P.L. Revised international prognostic scoring system for myelodysplastic syndromes / P.L. Greenberg, H. Tuechler, J. Schanz et al. // Blood. -2012. - T. 120, № 12. - C. 2454-2465. - DOI: 10.1182/blood-2012-03-420489

79. Greer E. L. Histone methylation: a dynamic mark in health, disease and inheritance / E.L. Greer, Y. Shi // Nature reviews. Genetics. - 2012. - T. 13, № 5. - C. 343-357. - DOI: 10.1038/nrg3173

80. Groselj, B. Histone deacetylase inhibitors as radiosensitisers: effects on DNA damage signaling and repair / B. Groselj, N.L. Sharma, F.C. Hamdy et al. // British journal of cancer. - 2013. - T. 108. - C. 748-754. - DOI: 10.1038/bjc.2013.21

81. Grün, D. Single-cell messenger RNA sequencing reveals rare intestinal cell types / D. Grün, A. Lyubimova, L. Kester et al. // Nature. - 2015. - T. 525, № 7568. -C. 251-255. - DOI: 10.1038/nature14966

82. Haas, S. Causes and Consequences of Hematopoietic Stem Cell Heterogeneity / S. Haas, A. Trumpp, M. D. Milsom // Cell Stem Cell. - 2018. - T. 22. -C. 627-638. - DOI: 10.1016/j.stem.2018.04.003

83. Hall, I.M. Establishment and maintenance of a heterochromatin domain / I.M. Hall, G.D. Shankaranarayna, K. Noma et al. // Science. - 2002. - T. 297. - C. 2232-2237. - DOI: 10.1126/science.1076466

84. Hanahan, D. Hallmarks of cancer: the next generation / D. Hanahan, R.A. Weinberg // Cell. - 2011. - T. 144. - C. 646-674. - DOI: 10.1016/j.cell.2011.02.013

85. Hasle, H. International prognostic scoring system (IPSS) for childhood MDS and JMML / H. Hasle, I. Baumann, E. Bergstrasser et al. // Leukemia. - 2004. -T. 18, №12. - C. 2008-2013. - DOI: 10.1038/sj.leu.2403489

86. Hayes, R. Mortality among benzene-exposed workers in China / R. Hayes, S. Yin, M. Dosemeci et al. // Environmental health perspectives. - 1996. - T. 104. - C. 1349-1352. - DOI: 10.1289/ehp.961041349

87. He, Y.F. Tet-mediated formation of 5-carboxylcytosine and its excision by TDG in mammalian DNA / Y.F. He, B.Z. Li, Z. Li et al. // Science. - 2011. - T. 333, № 6047. - C. 1303-1307. - DOI: 10.1126/science.1210944

88. Herz, H.M. SET for life: biochemical activities and biological functions of SET domain-containing proteins / H.M. Herz, A. Garruss, A. Shilatifard // Trends in biochemical sciences. - 2013. - T. 38, №12. - C. 621-639. - DOI: 10.1016/j .tibs.2013.09.004

89. Heuser, M. Epigenetics in myelodysplastic syndromes / Heuser, M., Yun, H., & Thol, F. // Seminars in Cancer Biology. - 2018. - №51. - C. 170-173. - DOI: 10.1016/j.semcancer.2017.07.009

90. Hodes, A. The challenging task of enumerating blasts in the bone marrow / A. Hodes, K.R. Calvo, A. Dulau et al. // Seminars in Hematology. - 2019. - T. 56, №1. - C. 60-64. - DOI: 10.1053/j.seminhematol.2018.07.001

91. Holliday, R. DNA modification mechanisms and gene activity during development / R. Holliday, J.E. Pugh // Science. - 1975. - T. 187. - C. 226-232. -DOI: 10.1126/science. 187.4173.226

92. Hsu, J.I. PPM1D mutations drive clonal hematopoiesis in response to cytotoxic chemotherapy / J.I. Hsu, T. Dayaram, A. Tovy et al. // Cell Stem Cell. - 2018.

- T. 23, № 5. - C. 700. - DOI: 10.1016/j.stem.2018.10.004

93. Ido, M. A case-control study of myelodysplastic syndromes among Japanese men and women / M. Ido, C. Nagata, N. Kawakami et al. // Leukemia research. -1996. - T. 20. - C. 727-731. - DOI: 10.1016/0145-2126(96)00042-2

94. Inoue, D. SETBP1 mutations drive leukemic transformation in ASXL1-mutated MDS / D. Inoue, J. Kitaura, H. Matsui et al. // Leukemia. - 2015. - T. 29, № 4.

- C. 847. - DOI: 10.1038/leu.2014.301

95. Ito, S. Role of Tet proteins in 5mC to 5hmC conversion, ES-cell self-renewal and inner cell mass specification / S. Ito, A.C. D'Alessio, O.V. Taranova et al. // Nature. - 2010. - T. 466. - C. 1129-1133. - DOI: 10.1038/nature09303

96. Jaiswal, S. Age-related clonal hematopoiesis associated with adverse outcomes / S. Jaiswal, P. Fontanillas, J. Flannick et al. // The New England journal of medicine. - 2014. - T. 371, № 26. - C. 2488. - DOI: 10.1056/NEJMoa1408617

97. Jenuwein, T. Translating the histone code / T. Jenuwein, C.D. Allis // Science. - 2001. - T. 293. - C. 1074-1080. - DOI: 10.1126/science.1063127

98. Jhanwar, S.C. Genetic and epigenetic pathways in myelodysplastic syndromes: A brief overview / S.C. Jhanwar // Advances in Biological Regulation. -2015. - №58. - C. 34-35. - DOI: 10.1016/j.jbior.2014.11.002

99. Jhanwar, S.C. Genetic and epigenetic pathways in myelodysplastic syndromes: A brief overview / S.C. Jhanwar // Advances in biological regulation. -2015. - T. 58. - C. 28-37. - DOI: 10.1016/j.jbior.2014.11.002

100. Jones P.A. Epigenetic determinants of cancer / P.A. Jones, S.B. Baylin // Cold Spring Harbor perspectives in biology. - T. 8, № 9. - C. 3-27 - DOI: 10.1101/cshperspect.a019505

101. Jung, S.H. Somatic mutations predict outcomes of hypomethylating therapy in patients with myelodysplastic syndrome / S.H. Jung, Y.J. Kim, S.H. Yim et al. // Oncotarget. - 2016. - T. 7, №. 34. - C. 55264. - DOI: 10.18632/oncotarget.10526

102. Kaner, J.D. HIV portends a poor prognosis in myelodysplastic syndromes / J.D. Kaner, S. Thibaud, S. Jasra et al. // Leukemia & lymphoma. - 2019. - T. 8. - C. 16. - DOI: 10.1080/10428194.2019.1633631

103. Kantarjian, H. Proposal for a new risk model in myelodysplastic syndrome that accounts for events not considered in the original international prognostic scoring system / H. Kantarjian, S. O'Brien, F. Ravandi et al. // Cancer. - 2008. - T. 113, № 6. -C. 1351-1361. - DOI: 10.1002/cncr.23697

104. Kayne, P.S. Extremely conserved histone H4N terminus is dispensable for groWTh but essential for repressing the silent mating loci in yeast / P.S. Kayne, U.J. Kim, M. Han et al. // Cell. - 1988. - T. 55. - C. 27-39. - DOI: 10.1016/0092-8674(88)90006-2

105. Klose, R.J. The transcriptional repressor JHDM3A demethylates trimethyl histone H3 lysine 9 and lysine 36 / R.J. Klose, K. Yamane, Y. Bae et al. // Nature. -2006. - T. 442, № 7100. - C. 312-316. - DOI: 10.1038/nature04853

106. Ko, M. Impaired hydroxylation of 5-methylcytosine in myeloid cancers with mutant TET2 / M. Ko, Y. Huang, A.M. Jankowska et al. // Nature. - 2010. - T. 468. - C. 839-843. - DOI: 10.1038/nature09586

107. Kriaucionis, S. The nuclear DNA base 5-hydroxymethylcytosine is present in Purkinje neurons and the brain / S. Kriaucionis, N. Heintz // Science. - 2009. - T. 324. - C. 929-930. - DOI: 10.1126/science.1169786

108. Kumar, B. "KSHV Entry and Trafficking in Target Cells-Hijacking of Cell Signal Pathways, Actin and Membrane Dynamics" / B. Kumar, B. Chandran // Viruses. - 2016. - T. 8, № 11. - C. 305. - DOI: 10.3390/v8110305

109. Kwok, B. MDS associated somatic mutations and clonal hematopoiesis are common in idiopathic cytopenia of undetermined significance / B. Kwok, J.M. Hall, J.S. Witte et al. // Blood. - 2015. - T. 126. - C. 2355-2358. - DOI: 10.1182/blood-2015-08-667063

110. Lamarque, M. The 4 Cytogenetics of MDS revised IPSS is a powerful tool to evaluate the outcome of MDS patients treated with azacitidine: the GFM experience /

M. Lamarque, S. Raynaud, R. Itzykson et al. // Blood. - 2012. - T. 120, № 25. - C. 5084-5085. - DOI: 10.1182/blood-2012-09-453555

111. Larizza, L. The Kasumi-1 cell line: a t(8,21)-kit mutant model for acute myeloid leukemia / L. Larizza, I. Magnani, A. Beghini // Leukemia & lymphoma. -2005. - T. 46, № 2. - C. 247-250. - DOI:10.1080/10428190400007565

112. Lee, E.J. The evolving field of prognostication and risk stratification in MDS: Recent developments and future directions / E.J. Lee, N. Podoltsev, S.D. Gore et al. // Blood reviews. - 2016. - T. 30, № 1. - C. 1-3. - DOI: 10.1016/j.blre.2015.06.004

113. Liang, S. Prognostic value of DNMT3A mutations in myelodysplastic syndromes: a meta-analysis / S. Liang, X. Zhou, H. Pan et al. // Hematology. - 2019. -T. 24, № 1. - C. 613-622. - DOI: 10.1080/16078454.2019.1657613

114. Lin, C.C. IDH mutations are closely associated with mutations of DNMT3A, ASXL1 and SRSF2 in patients with myelodysplastic syndromes and are stable during disease evolution / C.C. Lin, H.A. Hou, W.C. Chou et al. // American journal of hematology. - 2014. - T. 89. - C. 137-144. - DOI: 10.1002/ajh.23596

115. Lin, C.C. IDH mutations are closely associated with mutations of DNMT3A, ASXL1 and SRSF2 in patients with myelodysplastic syndromes and are stable during disease evolution / C.C. Lin, H.A. Hou, W.C. Chou et al. // American journal of hematology. - 2014. - T. 89, №. 2. - C. 139-141. - DOI: 10.1002/ajh.23596

116. Lin, C.C. Prognostic score including gene mutations in chronic myelomonocytic leukemia / C.C. Lin, H.A. Hou, W.C. Chou et al. // Journal of clinical oncology. - 2013. - T. 31. - C. 2428-2436. - DOI: 10.1200/Jœ.2012.47.3314

117. Lin, M.E. Dynamics of DNMT3A mutation and prognostic relevance in patients with primary myelodysplastic syndrome / M.E. Lin, H.A. Hou, C.H. Tsai et al. // Clinical epigenetics. - 2018. - T. 10, № 42. - C. 2-10. - DOI: 10.1186/s13148-018-0476-1

118. Lin, Y. Prognostic significance of ASXL1 mutations in myelodysplastic syndromes and chronic myelomonocytic leukemia: A meta-analysis / Y. Lin, Y. Zheng,

Z.C. Wang et al. // Hematology. - 2016 - Т. 21, № 8. - С. 455-457. - DOI: 10.1080/10245332.2015.1106815

119. Lipilkin, P.V. Prognostic value of ASXL1 mutations in acute myeloid leukemia: a meta-analysis / P.V. Lipilkin, E.D. Kulaeva, E.V. Mashkina // Leukemia Research. - 2022. - Т. 120. - 106910. - DOI: 10.1016/j.leukres.2022.106910

120. Lv, L. Case-control study of risk factors of myelodysplastic syndromes according to World Health Organization classification in a Chinese population / L. Lv, G. Lin, X. Gao et al. // American journal of hematology. - 2011. - Т. 86, № 2. - С. 163-169. - DOI: 10.1002/ajh.21941

121. Lyon, M.F. Gene action in the X-chromosome of the mouse (Mus musculus L.) / M.F. Lyon // Nature. - 1961. - Т. 190. - С. 372-373. - DOI: 10.1038/190372a0

122. Ma, X. Epidemiology of myelodysplastic syndromes. / X. Ma // The American journal of medicine. 2012. - Т. 125, № 7A. - C. 2-5. -DOI:10.1016/j.amjmed.2012.04.014

123. Ma, X. Myelodysplastic syndromes: incidence and survival in the United States. / X. Ma, M. Does, A. Raza et al. // Cancer. - 2007. - Т. 109, № 8. - С. 15361542. - DOI: 10.1002/cncr.22570

124. Madu, A.J. Anaemia of Chronic Disease: An In-Depth Review / A.J. Madu, M.D. Ughasoro // Medical principles and practice. -2017. - Т. 26, № 1. - С. 1-3. -DOI: 10.1159/000452104

125. Makishima, H. Sequential acquisition of mutations in myelodysplastic syndromes / H. Makishima // Rinsho Ketsueki. - 2017. - Т. 58, № 10. - С. 1828-1837. - DOI: 10.11406/rinketsu.58.1828

126. Makishima, H. Somatic SETBP1 mutations in myeloid malignancies / H. Makishima, K. Yoshida, N. Nguyen et al. // Nature genetics. - 2013. - Т. 45, № 8. - С. 942. - DOI: 10.1038/ng.2696

127. Malcovati, L. European Leukemia Net. Diagnosis and treatment of primary myelodysplastic syndromes in adults: recommendations from the European

LeukemiaNet / L. Malcovati, E. Hellström-Lindberg, D. Bowen et al. // Blood. - 2013.

- T. 122, №17. - C. 2943-2964. - DOI: 10.1182/blood-2013-03-492884

128. Malcovati, L. Impact of the degree of anemia on the outcome of patients with myelodysplastic syndrome and its integration into the WHO classification-based prognostic scoring system (WPSS) / L. Malcovati, M.G. Della Porta, C. Strupp et al. // Haematologica. - 2011. - T. 96, № 10. - C. 1433-1440. - DOI: 10.3324/haematol.2011.044602

129. Malcovati, L. SF3B1 mutation identifies a distinct subset of myelodysplastic syndrome with ring sideroblasts / L. Malcovati, M. Karimi, E. Papaemmanuil et al. // Blood. - 2015. - T. 126, № 2. - C. 233-241. - DOI: 10.1182/blood-2015-03-633537

130. Malcovati, L. The genomic landscape of myeloid neoplasms with myelodysplasia and its clinical implications / L. Malcovati, I. Ambaglio, C. Elena // Current Opinion in Oncology. - 2015. - T.27, № 6. - C. 552-556. - DOI: 10.1097/Cœ.0000000000000229

131. Mardis, E.R. Recurring mutations found by sequencing an acute myeloid leukemia genome / E.R. Mardis, L. Ding, D.J. Dooling et al. // The New England journal of medicine. - 2009. - T. 361, № 11. - C. 1058-1066. - DOI: 10.1056/NEJMoa0903840

132. Martienssen, R. RNAi and heterochromatin assembly / R. Martienssen, D. Moazed // Cold Spring Harbor perspectives in biology. - 2015. - T. 7, № 8. - C. 8-14.

- DOI: 10.1101/cshperspect.a019323

133. Martin, I. Negative impact on clinical outcome of the mutational cooccurrence of SF3B1 and DNMT3A in refractory anemia with ring sideroblasts (RARS) / I. Martin, E. Such, B. Navarro et al. // Leukemia & lymphoma. - 2017. - T. 58, №. 7.

- C. 1687-1691. - DOI: 10.1080/10428194.2016.1246725

134. Matsuda, A. Difference in clinical features between Japanese and German patients with refractory anaemia in myelodysplastic syndromes / A. Matsuda, U.

Germing, I. Jinnai et al. // Blood. - 2005. - T. 106. - C. 2633-2640. - DOI: 10.1182/blood-2005-01 -0040

135. Mayer, R. Primary myelodysplastic syndrome and secondary preleukemic disorders, in Henderson E, Lister T, Greaves M (eds). / R. Mayer, G. Cannellos // Leukemia. - 1996. - T. 6. - C. 513-531. - ISSN 0887-6924

136. McGrath, J. Completion of mouse embryogenesis requires both the maternal and paternal genomes / J. McGrath, D. Solter // Cell. - 1984. - T. 37. - C. 179-183. - DOI: 10.1016/0092-8674(84)90313-1

137. Megee, P.C. Genetic analysis of histone H4: essential role of lysines subject to reversible acetylation / P.C. Megee, B.A. Morgan, B.A. Mittman et al. // Science. - 1990. - T. 247. - C. 841-845. - DOI: 10.1126/science.2106160

138. Metzeler, K.H. ASXL1 mutations identify a high-risk subgroup of older patients with primary cytogenetically normal AML within the ELN favorable genetic category / K.H. Metzeler, H. Becker, K. Maharry et al. // Blood. - 2011. - T. 118, № 26. - C. 6920. - DOI: 10.1182/blood-2011-08-368225

139. Metzeler, K.H. Spectrum and prognostic relevance of driver gene mutations in acute myeloid leukemia / K.H. Metzeler, T. Herold, M. Rothenberg-Thurley et al. // Blood. - 2016. - T. 128, № 5. - C. 686. - DOI: 10.1182/blood-2016-01-693879

140. Micol, J.B. Frequent ASXL2 mutations in acute myeloid leukemia patients with t(8, 21 )/RUNX1 -RUNX1T1 chromosomal translocations / J.B. Micol, N. Duployez, N. Boissel et al. // Blood. - 2014. - T. 124, № 9. - C. 1445. - DOI: 10.1182/blood-2014-04-571018

141. Milne, T.A. The Additional sex combs gene of Drosophila is required for activation and repression of homeotic loci, and interacts specifically with polycomb and super sex combs / T.A. Milne, D.A. Sinclair, H.W. Brock // Molecular & general genetics. - 1999. - T. 261, № 4-5. - C. 753. - DOI: 10.1007/s004380050018

142. Mochizuki, K. Analysis of a piwi-related gene implicates small RNAs in genome rearrangement in Tetrahymena / K. Mochizuki, N.A. Fine, T. Fujisawa et al. // Cell. - 2002. - T. 110. - C. 689-699. - DOI: 10.1016/s0092-8674(02)00909-1

143. Moldawer, L.L. Cachectin/tumor necrosis factor-alpha alters red blood cell kinetics and induces anemia in vivo / L.L. Moldawer, M.A. Marano, H. Wei et al. // FASEB journal: official publication of the Federation Of American Societies For Experimental Biology. - 1989. - T. 3, № 5. - C. 1637-1643. - DOI: 10.1096/fasebj.3.5.2784116

144. Molenaar, R.J. Clinical and biological implications of ancestral and non-ancestral IDH1 and IDH2 mutations in myeloid neoplasms / R.J. Molenaar, S. Thota, Y. Nagata et al. // Leukemia. - 2015. - T. 29, № 11. - C. 2134. - DOI: 10.1038/leu.2015.91

145. Montes-Moreno, S. Clinical molecular testing for ASXL1 c.1934dupG p.Gly646fs mutation in hematologic neoplasms in the NGS era / S. Montes-Moreno, M.J. Routbort, E.J. Lohman et al. // PLoS One. - 2018. - T. 13, № 9. - C. 2-8. -D01:10.1371/journal.pone.0204218

146. Morris, K.V. The rise of regulatory RNA / K.V. Morris, J.S. Mattick // Nature reviews. Genetics. - 2014. - T. 15. - C. 423-437. - DOI: 10.1038/nrg3722

147. Nagase, R. Expression of mutant ASXL1 perturbs hematopoiesis and promotes susceptibility to leukemic transformation / R. Nagase, D. Inoue, A. Pastore et al. // The Journal of experimental medicine. - 2018. - T. 215, № 6. - C. 1729. - DOI: 10.1084/jem.20171151

148. Nebbioso, A. Genetic mutations in epigenetic modifiers as therapeutic targets in acute myeloid leukemia / A. Nebbioso, R. Benedetti, M. Conte et al. // Expert opinion on therapeutic targets. - 2015. - T. 19. - C. 1187-1200. - DOI: 10.1517/14728222.2015.1051728

149. Nemeth, E. Anemia of inflammation / E. Nemeth, T. Ganz // Hematology/oncology Clinics of North America. - 2014. - T.28, № 4. - C. 671-678. -DOI: 10.1016/j.hoc.2014.04.005

150. Niemeyer, C.M. Myelodysplastic syndrome in children / C.M. Niemeyer, I. Baumann // Semin Hematol. - 2008. - T. 45, № 1. - C. 60-70. - DOI: 10.1053/j.seminhematol.2007.10.006

151. Nisse, C. Exposure to occupational and environmental factors in myelodysplastic syndromes: Preliminary results of a case-control study / C. Nisse, C. Lorthois, V. Dorp et al. // Leukemia. - 1995. - T. 9. - C. 693-699. - ISSN 0887-6924

152. Nisse, C. Occupational and environmental risk factors of the myelodysplastic syndromes in the North of France / C. Nisse, J.M. Haguenoer, B. Granbastuen et al. // British journal of haematology. - 2001. - T. 12. - C. 927-935. -DOI: 10.1046/j.1365-2141.2001.02645.x

153. Odenike, O. Myelodysplastic syndrome and myelodysplastic/myeloprolifer ative neoplasms: an update on risk stratification, molecular genetics, and therapeutic approaches including allogeneic hematopoietic stem cell transplantation / O. Odenike, F. Onida, E. Padron // American Society of Clinical Oncology educational book. American Society of Clinical Oncology. Annual Meeting. - 2015. - C. 398-412. - DOI: 10.14694/EdBook_AM.2015.35.e398

154. Paralkar, V.R. Long noncoding RNAs in biology and hematopoiesis / V.R. Paralkar, M.J. Weiss // Blood. - 2013. - T. 121, № 24. - C. 4842-4846. - DOI: 10.1182/blood-2013-03-456111

155. Park, S. Clinical effectiveness and safety of erythropoietin-stimulating agents for the treatment of low- and intermediate-1-risk myelodysplastic syndrome: a systematic literature review / S. Park, P. Greenberg, A. Yucel et al. // British journal of haematology. - 2019. - T. 184, № 2. - C. 134-160. - DOI: 10.1111/bjh.15707

156. Paschka, P. ASXL1 mutations in younger adult patients with acute myeloid leukemia: a study by the German-Austrian Acute Myeloid Leukemia Study Group / P. Paschka, R.F. Schlenk, V.I. Gaidzik et al. // Haematologica. - 2015. - T. 100, № 3. - C. 324. - DOI: 10.3324/haematol.2014.114157

157. Pasqualetti, P. Tobacco smoking and risk of haematological malignancies in adults: A case-control study / P. Pasqualletti, V. Festucca, P. Acitelli et al. // British journal of haematology. - 1997. - T. 97. - C. 659-662. - DOI: 10.1046/j.1365-2141.1997.942910.x

158. Pati, H. Myelodysplastic Syndrome/Myeloproliferative Neoplasm (MDS/MPN) Overlap Syndromes: Molecular Pathogenetic Mechanisms and Their

Implications / H. Pati, K. Kundil Veetil // Indian Journal of Hematology and Blood Transfusion. - 2019. - T. 35, №1. - C. 7-10. - DOI: 10.1007/s12288-019-01084-y

159. Patnaik, M.M. Differential prognostic effect of IDH1 versus IDH2 mutations in myelodysplastic syndromes: a Mayo Clinic study of 277 patients / M.M. Patnaik, C.A. Hanson, J.M. Hodnefield et al. // Leukemia. - 2012. - T. 26, № 1. - C. 101-105. - DOI: 10.1038/leu.2011.298

160. Patnaik, M.M. Prognostic interaction between ASXL1 and TET2 mutations in chronic myelomonocytic leukemia / M.M. Patnaik, T.L. Lasho, P. Vijayvargiya et al. // Blood cancer journal. - 2016. - T. 6, № 1. - C. 1-5. - DOI: 10.1038/bcj.2015.113

161. Patnaik, M.M. Prognostic irrelevance of ring sideroblast percentage in World Health Organization defined myelodysplastic syndromes without excess blasts / M.M. Patnaik, C.A. Hanson, N.H. Sulai // Blood. - 2012. - T. 119, № 24. - C. 56745677. - DOI: 10.1182/blood-2012-03 -415356

162. Pfeilstocker, M. Time-dependent changes in mortality and transformation risk in MDS / M. Pfeilstocker, H. Tuechler, G. Sanz et al. // Blood. - 2016. - T. 128, № 7. - C. 902-910. - DOI: 10.1182/blood-2016-02-700054

163. Pratcorona, M. Acquired mutations in ASXL1 in acute myeloid leukemia: prevalence and prognostic value / M. Pratcorona, S. Abbas, M.A. Sanders et al. // Haematologica. - 2012. - T. 97, № 3. - C. 388. - DOI: 10.3324/haematol.2011.051532

164. Pugh, C.W. New horizons in hypoxia signaling pathways / C.W. Pugh, P.J. Ratcliffe // Experimental cell research. - 2017. - T. 356, № 2. - C. 116-121. - DOI: 10.1016/j.yexcr.2017.03.008

165. Qu, S. Impacts of cytogenetic categories in the Revised International Prognostic Scoring System on the prognosis of primary myelodysplastic syndromes: results of a single-center study / S. Qu, Z. Xu, Y. Zhang et al. // Leukemia & lymphoma. - 2012. - T. 53. - C. 940-946. - DOI: 10.3109/10428194.2011.634049

166. Razin, A. DNA methylation and gene function / A. Razin, A.D. Riggs // Science. - 1980. - T. 210. - C. 604-610. - DOI: 10.1126/science.6254144

167. Reyes-Turcu, F.E. Defects in RNA quality control factors reveal RNAi-independent nucleation of heterochromatin / F.E. Reyes-Turcu, K. Zhang, M. Zofall et

al. // Nature structural & molecular biology. - 2011. - T. 18. - C. 1132-1138. - DOI: 10.1038/nsmb.2122

168. Rigolin, G.M., Exposure to myelotoxic agents and myelodysplasia: Case-control study and correlation with clinicobiological findings / G.M. Rigolin, A. Cuneo, M.G. Roberti et al. // British journal of haematology. - 1998. - T. 103. - C. 189-197. -DOI: 10.1046/j.1365-2141.1998.00963.x

169. Rivera, C.M. Mapping Human Epigenomes. / C.M. Rivera, B. Ren. // Cell. - 2013. - T. 155, № 1. - C. 39-51. - DOI: 10.1016/j.cell.2013.09.011

170. Rollison, D.E. Epidemiology of myelodysplastic syndromes and chronic myeloproliferative disorders in the United States, 2001-2004, using data from the NAACCR and SEER programs / D.E. Rollison, N. Howlader, M.T. Smith et al. // Blood. - 2008. - T. 112, № 1. - C. 45-52. - DOI: 10.1182/blood-2008-01-134858

171. Roman, E. Myeloid malignancies in the real-world: Occurrence, progression and survival in the UK's population-based Haematological Malignancy Research Network 2004-15 / E. Roman, A. Smith, S. Appleton et al. // Cancer Epidemiol. - 2016. - T. 42. - C. 186-198. - DOI: 10.1016/j.canep.2016.03.011

172. Rosenberg, P.S. The incidence of leukemia and mortality from sepsis in patients with severe congenital neutropenia receiving long-term G-CSF therapy / P.S. Rosenberg, B.P. Alter, A.A. Bolyard et al. // Blood. - 2006. - T. 107, №12. - C. 4628. -DOI: 10.1182/blood-2005-11-4370

173. Roth, S.Y. Histone acetyltransferases / S.Y. Roth, J.M. Denu, C.D. Allis // Annual review of biochemistry. - 2001. - T. 70. - C. 81-120. - DOI: 10.1146/annurev.biochem .70.1.81

174. Rydén, J. Male sex and the pattern of recurrent myeloid mutations are strong independent predictors of blood transfusion intensity in patients with myelodysplastic syndromes / J. Rydén, G. Edgren, M. Karimi et al. // Leukemia. -2019. - T. 33, № 2. - C. 522-526. - DOI: 10.1038/s41375-018-0256-0

175. Saarni, M.I. Preleukemia. The hematologic syndrome preceding acute leukemia / M.I. Saarni, J.W. Linman // The American journal of medicine. - 1973. - T. 55. - C. 38-48. - DOI: 10.1016/0002-9343(73)90148-4

176. Sallman, D.A. ASXL1 frameshift mutations drive inferior outcomes in CMML without negative impact in MDS / D.A. Sallman, R. Komrokji, T. Cluzeau et al. // Blood cancer journal. - 2017. - T. 7, № 12. - C. 633. - DOI: 10.1038/s41408-017-0004-0

177. Schanz, J. Monosomal karyotype in MDS: explaining the poor prognosis? / J. Schanz, H. Tuchker, F. Sole et al. // Leukemia. - 2013. - T. 27, № 10. - C. 19881995. - DOI: 10.1038/leu.2013.187

178. Scheuermann, J.C. Histone H2A deubiquitinase activity of the polycomb repressive complex PR-DUB / J.C. Scheuermann, A.G. de Ayala Alonso, K. Oktaba et al. // Nature. - 2010. - T. 465, № 7295. - C. 243. - DOI: 10.1038/nature08966

179. Schito, L. Hypoxia-Inducible Factors: Master Regulators of Cancer Progression / L. Schito, G.L. Semenza // Trends in Cancer. - 2016. - T. 2, № 12. - C. 758-770. - DOI: 10.1016/j.trecan.2016.10.016

180. Smith, R.E. Acute myeloid leukemia and myelodysplastic syndrome after doxorubicin-cyclophosphamide adjuvant therapy for operable breast cancer: the National Surgical Adjuvant Breast and Bowel Project Experience / R.E. Smith, J. Bryant, A. DeCillis et al. // Journal of clinical oncology. - 2003. - T. 21, № 7. - C. 1195-2037. - DOI: 10.1200/Jœ.2003.03.114

181. Smith, S. Purification and characterization of CAF-I, a human cell factor required for chromatin assembly during DNA replication in vitro / S. Smith, B. Stillman // Cell. - 1989. - T. 58. - C. 15-25. - DOI: 10.1016/0092-8674(89)90398-x

182. Steensma, D.P. Clonal hematopoiesis of indeterminate potential and its distinction from myelodysplastic syndromes. / D.P. Steensma, R. Bejar, S. Jaiswal et al. // Blood. - 2015. - T. 126, № 1. - C. 9. - DOI: 10.1182/blood-2015-03-631747

183. Steensma, D.P. Clonal hematopoiesis of indeterminate potential and its distinction from myelodysplastic syndromes / D.P. Steensma, R. Bejar, S. Jaiswal et al. // Blood. - 2015. - T. 126. - C. 10-14. - DOI: 10.1182/blood-2015-03-631747

184. Stein, E.M. Enasidenib in mutant IDH2 relapsed or refractory acute myeloid leukemia / E.M. Stein, C.D. DiNaro, D.A. Pollyea et al. // Blood. - 2017. - T. 130, № 6. - C. 722-731. - DOI: 10.1182/blood-2017-04-779405

185. Strahl, B.D. The language of covalent histone modifications / B.D. Strahl, C.D. Allis // Nature. - 2000. - T. 403. - C. 41-45. - DOI: 10.1038/47412

186. Strom, S.S. Epidemiology of Myelodysplastic Syndromes / S.S. Strom, V. Velez-Bravo, E.H. Estey // Seminars in Hematology. - 2008. - T. 45, № 1. - C. 8-13. -DOI: 10.1053/j .seminhematol.2007.10.003

187. Strom, S.S. Risk factors of myelodysplastic syndromes: A case-control study / S.S. Strom, Y. Gu, S.K. Gruschkus et al. // Leukemia. - 2005. - T. 19, № 11. -C. 1912-1918. - DOI: 10.1038/sj.leu.2403945

188. Surani, M.A. Development of reconstituted mouse eggs suggests imprinting of the genome during gametogenesis / M.A. Surani, S.C. Barton, M.L. Norris // Nature. - 1984. - T. 308. - C. 548-550. - DOI: 10.1038/308548a0

189. Sweeney, M.R. Medical conditions and modifiable risk factors for myelodysplastic syndrome: a systematic review / M.R. Sweeney, K.M. Applebaum, H. Arem et al. // Cancer epidemiology, biomarkers & prevention: a publication of the American Association for Cancer research, cosponsored by the American Society of Preventive Oncology. - 2019. - T. 28, № 9. - C. 1502-1517. - DOI: 10.1158/1055-9965.EPI-19-0106

190. Swerdlow, S. WHO Classification of Haematopoietic and Lymphoid Tissues. - 2017. - ISBN- 978-9-28-324494-3

191. Tagami, H. Histone H3.1 and H3.3 complexes mediate nucleosome assembly pathways dependent or independent of DNA synthesis / H. Tagami, D. Ray-Gallet, G. Almouzni et al. // Cell. - 2004. - T. 116. - C. 51-61. - DOI: 10.1016/s0092-8674(03)01064-x

192. Tahiliani, M. Conversion of 5-methylcytosine to 5-hydroxymethylcytosine in mammalian DNA by MLL partner TET1 / M. Tahiliani, K.P. Koh, Y. Shen et al. // Science. - 2009. - T. 324, № 5929. - C. 930-935. - DOI: 10.1126/science.1170116

193. Taunton, J. A mammalian histone deacetylase related to the yeast transcriptional regulator Rpd3p / J. Taunton, C.A. Hassig, S.L. Schreiber // Science. -1996. - T. 272. - C. 408-411. - DOI: 10.1126/science.272.5260.408

194. Taverna, S.D. Methylation of histone H3 at lysine 9 targets programmed DNA elimination in Tetrahymena / S.D. Taverna, R.S. Coyne, C.D. Allis // Cell. -2002. - T. 110. - C. 701-711. - DOI: 10.1016/s0092-8674(02)00941-8

195. Taylor, S.M. Multiple new phenotypes induced in 10T1/2 and 3T3 cells treated with 5-azacytidine / S.M. Taylor, P.A. Jones // Cell. - 1979. - T. 17. - C. 771779. - DOI: 10.1016/0092-8674(79)90317-9

196. Thieme, S. The histone demethylase UTX regulates stem cell migration and hematopoiesis / S. Thieme, T. Gyarfas, C. Richter et al. // Blood. - 2013. - T. 121. - C. 2462-2471. - DOI: 10.1182/blood-2012-08-452003

197. Thomson, J.P. CpG islands influence chromatin structure via the CpG-binding protein Cfp1 / J.P. Thomson, P.J. Skene, J. Selfridge et al. // Nature. - 2010. -T. 464, № 7291. - C. 1082-1086. - DOI: 10.1038/nature08924

198. Traina, F. Impact of molecular mutations on treatment response to DNMT inhibitors in myelodysplasia and related neoplasms / F. Traina, V. Visconte, P. Elson et al. // Leukemia. - 2014. - T. 28, № 1. - C. 78. - DOI: 10.1038/leu.2013.269

199. Traina, F. Impact of molecular mutations on treatment response to DNMT inhibitors in myelodysplasia and related neoplasms / F. Traina, V. Visconte, P. Elson et al. // Leukemia. - 2014. - T. 28, №. 1. - C. 79-87. - DOI: 10.1038/leu.2013.269

200. Turner, B.M. Decoding the nucleosome / B.M. Turner // Cell. - 1993. - T. 75, № 1. - C. 5-8. - DOI:10.1016/S0092-8674(05)80078-9

201. Urban, C. Stem cell transplantation in 6 children with parvovirus B19-induced severe aplastic anaemia or myelodysplastic syndrome / C. Urban, H. Lackner, E. Müller et al. // Klinische Padiatrie. - 2011. - T. 223, № 6. - C. 332-334. - DOI: 10.1055/s-0031-1287839

202. Valent, P. Anaemia of the elderly (AOE): does it exist and does it matter in clinical practice? / P. Valent // European journal of clinical investigation. - 2008. - T. 38. - C. 782-783. - DOI: 10.1111/j.1365-2362.2008.02013.x

203. Valent, P. Idiopathic cytopenia of undetermined significance (ICUS) and idiopathic dysplasia of uncertain significance (IDUS), and their distinction from low

risk MDS / P. Valent, B.J. Bain, J.M. Bennett et al. // Leukemia research. -2012. - T. 36, №1. - C. 1-5. - DOI: 10.1016/j.leukres.2011.08.016

204. Valent, P. Minimal diagnostic criteria for myelodysplastic syndromes and separation from ICUS and IDUS: update and open questions / P. Valent, H.P. Horny // European journal of clinical investigation. - 2009. - T. 39, № 7. - C. 548-553. - DOI: 10.1111/j.1365-2362.2009.02151.x

205. Valent, P. Minimal diagnostic criteria for myelodysplastic syndromes and separation from ICUS and IDUS: update and open questions / P. Valent, H.P. Horny // European journal of clinical investigation. - 2009. - T. 39, № 7. - C. 551-552. - DOI: 10.1111/j.1365-2362.2009.02151.x

206. Valent, P. Standards and impact of hematopathology in myelodysplastic syndromes (MDS) / P. Valent, A. Orazi, G. Büsche et al. // Oncotarget. - 2010. - T. 1. -C. 483-492. - DOI: 10.18632/oncotarget.101104

207. van Spronsen, M.F. The non-erythroid myeloblast count rule in myelodysplastic syndromes: fruitful or futile? / M.F. van Sprosen, T.M. Westers, B.I. Lissenberg-Witte et al. // Haematologica. 2019. - T. 104, № 12. - C. 547-550. - DOI: 10.3324/haematol.2018.212563

208. Vardiman, J. The 2008 revision of the World Health Organization (WHO) classification of myeloid neoplasms and acute leukemia: rationale and important changes. / J. Vardiman, J. Thiele, D.A. Arber et al. // Blood. - 2009. - T. 114. - C. 938949. - DOI: 10.1182/blood-2009-03-209262

209. Vardiman, J. The classification of MDS: from FAB to WHO and beyond. / J. Vardiman // Leukemia research. - 2012. - T. 36, № 12. - C. 1453-1458. -DOI:10.1016/j.leukres.2012.08.008

210. Verdin, E. 50 years of protein acetylation: from gene regulation to epigenetics, metabolism and beyond / E. Verdin, M. Ott // Nature reviews. Molecular cell biology. - 2015. - T. 16. - C. 258-264. - DOI: 10.1038/nrm3931

211. Volpe, T.A. Regulation of heterochromatic silencing and histone H3 lysine 9 methylation by RNAi / T.A. Volpe, C. Kidner, M. Hall et al. // Science. - 2002. - T. 297, № 5588. - C. 1833-1837. - DOI: 10.1126/science.1074973

212. Voso, M.T. Epigenetic therapy of myelodysplastic syndromes and acute myeloid leukemia. / M.T. Voso, F. Lo-Coco, L. Fianchi // Current opinion in oncology. - 2015. - T. 27, № 6. - C. 532-539. - DOI: 10.1097/Cœ.000000000000 0231

213. Walter, M.J. Clonal architecture of secondary acute myeloid leukemia / M.J. Walter, D. Shen, L. Ding et al. // The New England journal of medicine. - 2012. -T. 366. - C. 1090-1098. - DOI: 10.1056/NEJMoa1106968

214. Walter, M.J. Recurrent DNMT3A mutations in patients with myelodysplastic syndromes / M.J. Walter, L. Ding, D. Shen et al. // Leukemia. - 2011.

- T. 25, №. 7. - C. 1156-1157. - DOI: 10.1038/leu.2011.44

215. Wang, L Epigenetic targeted therapy of stabilized BAP1 in ASXL1 gain-of-function mutated leukemia / L. Wang, N.W. Birch, Z. Zhao, et al. // Nature cancer. -2021. - T. 2, № 5. - C. 518-524. - DOI:10.1038/s43018-021-00199-4

216. Ward, P.S. The common feature of leukemia-associated IDH1 and IDH2 mutations is a neomorphic enzyme activity converting alpha-ketoglutarate to 2-hydroxyglutarate / P.S. Ward, J. Patel, D.R. Wise et al. // Cancer Cell. - 2010. - T. 17, № 3. - C. 225-234. - DOI: 10.1016/j.ccr.2010.01.020

217. Weiss, G. Anemia of inflammation / G. Weiss, T. Ganz, L.T. Goodnough // Blood. - 2019. - T. 133, № 1. - C. 40-50. - DOI: 10.1182/blood-2018-06-856500

218. Whetstine, J.R. Reversal of histone lysine trimethylation by the JMJD2 family of histone demethylases / J.R. Whetstine, A. Nottke, F. Lan et al. // Cell. - 2006.

- T. 125, № 3. - C. 467-481. - DOI: 10.1016/j.cell.2006.03.028

219. Williamson, B.T. Higher Risk Myelodysplastic Syndromes in Patients with Well-Controlled HIV Infection: Clinical Features, Treatment, and Outcome / B.T. Williamson, H.A. Leitch // Case reports in hematology. - 2016. - DOI: 10.1155/2016/8502641

220. Wimazal, F. Idiopathic cytopenia of undetermined significance (ICUS) versus low risk MDS: the diagnostic interface / F. Wimazal, C. Fonatsch, R.

Thalhammer et al. // Leukemia research. - 2007. - T. 31, №11. - C. 1461-1468. - DOI: 10.1016/j.leukres.2007.03.015

221. Xu, F. Exploration of the role of gene mutations in myelodysplastic syndromes through a sequencing design involving a small number of target genes / F. Xu, L.Y. Wu., Q. He et al. // Scientific reports. - 2017. - T. 7, №. 1. - C. 1-10. - DOI: 10.1038/srep43113

222. Xu, Y. Implications of mutational spectrum in myelodysplastic syndromes based on targeted next-generation sequencing / Y. Xu, Y. Li, Q. Xu et al. // Oncotarget. - 2017. - T. 8, №. 47. - C. 82475. - DOI: 10.18632/oncotarget.19628

223. Yannakou, C.K. ASXL1 c. 1934dup, p. Gly646Trpfs x 12-a true somatic alteration requiring a new approach / C.K. Yannakou, K. Jones, M. McBean et al. // Blood cancer journal. - 2017. - T. 7, № 12. - C. 2-4. - DOI: 10.1038/s41408-017-0025-8

224. Yin, S. A cohort study of cancer among benzene-exposed workers in China: Overall results / S. Yin, R. Hayes, M. Linet et al. // American journal of industrial medicine. - 1996. - T. 29. - C. 227-235. - DOI: 10.1002/(SICI)1097-0274(199603)29:3<227::AID-AJIM2>3.0.œ,2-N

225. Yoshizato, T. Somatic mutations and clonal hematopoiesis in aplastic anemia / T. Yoshizato, B. Dumitriu, K. Hosokawa et al. // The New England journal of medicine. - 2015. - T. 373, № 1. - C. 35. - DOI: 10.1056/NEJMoa1414799

226. Yuan, X.Q. DNMT3A R882 Mutations Predict a Poor Prognosis in AML: A Meta-Analysis From 4474 Patients / X.Q. Yuan, P. Leng, W.J. Zeng et al. // Medicine (Baltimore). - 2016. - T. 95, № 18. - C. 4-8. - DOI:10.1097/MD.0000000000003519

227. Zhang, L. The molecular basis and clinical significance of genetic mutations identified in myelodysplastic syndromes / L. Zhang, E. Padron, J. Lancet // Leukemia research. - 2015. - T. 39. - C. 6-15. - DOI: 10.1016/j.leukres.2014.10.006

228. Zhang, P. Chromatin regulator ASXL1 loss and Nf1 halpoinsufficiency cooperate to accelerate myeloid malignancy / P. Zhang, F. He, J. Bai et al. // The

Journal of clinical investigation. - 2018. - T. 128, № 12. - C. 5383. - DOI: 10.1172/JCI121366

229. Zhou, J.D. GPX3 methylation in bone marrow predicts adverse prognosis and leukemia transformation in myelodysplastic syndrome / J.D. Zhou, J. Lin, T.J. Zhang et al. // Cancer medicine. - 2017. - T. 6, №. 1. - C. 267-271. - DOI: 10.1002/cam4.984

230. Zhou, X. SAHA (vorinostat) facilitates functional polymer-based gene transfection via upregulation of ROS and synergizes with TRAIL gene delivery for cancer therapy / X. Zhou, Z. Liu, H. Wang et al. // Journal of drug targeting. - 2019. -T. 27, № 3. - C. 306-314. - DOI: 10.1080/1061186X.2018.1519028

ПРИЛОЖЕНИЕ А. Наиболее изученные гены эпигенетической регуляции и частота их мутаций

Рисунок А.1 - Общий мутационный ландшафт генов эпигенетической регуляции для МДС, ОМЛ и МПЗ

Таблица А.1 - Гены эпигенетической регуляции и некоторое их значение при МДС

Функция Ген Локализация в хромосоме Мутация; эффект Частота при МДС, % Встречается в здоровой популяции Снижение общей выживаемос ти

Миссенс,

БЫМТЗА 2р23 измененная <30 + +-

функция

Метилирован ие ДНК ТЕТ 2 4q24 Нонсенс/дел еции и инсерции; нефункцион альный домен 20-30 + -

Продолжение таблицы А. 1

Функция Ген Локализация в хромосоме Мутация; эффект Частота при МДС, % Встречается в здоровой популяции Снижение общей выживаемос ти

Модификация гистонов ЮИ1 2q33.3 Миссенс; измененная функция 5-10 - +

ЮН 2 Щ26.1 Миссенс; измененная функция 1 - -

ASXL1 20q11 Миссенс; измененная функция 20 - +

Продолжение таблицы А. 1

Функция Ген Локализация в хромосоме Мутация; эффект Частота при МДС, % Встречается в здоровой популяции Снижение общей выживаемост и

Модификация гистонов EZH2 7q35-36 Миссенс; нарушение функции 10 - +-

UTX Хр11.3 Миссенс; измененная функция 1 - -

ПРИЛОЖЕНИЕ Б. Классификация МДС ВОЗ, 2017

Таблица Б.1 - Варианты МДС в соответствии с критериями ВОЗ от 2017 г.

Вариант Дисплазия (ростки) Цитопения (ростки) Кольцевые сидеробласты Бласты в КМ и ПК Особенности кариотипа

с линейной дисплазией 1 1-2

с мультилинейно 2-3 1-3

й дисплазией

с кольцевыми сидеробластами и линейной 1 1-2 <15 %/<5 % КМ<5 % ПК<1 % Любой, кроме

дисплазией Палочек Ауэра

нет

с кольцевыми

сидеробластами

и 2-3 1-3

мультилинейно

й дисплазией

с делеция 5q-, за

изолированной 1-3 1-2 исключением

делецией 5q 7q

с избытком бластов-1/2 1-3 1-3 Нет или любой уровень КМ<10 % ПК<5 % Палочки Ауэра +/- Любой

ПРИЛОЖЕНИЕ В. Пересмотренная прогностическая шкала IPSS-R

(РХ. Greenberg и соавт., 2012)

Таблица В.1 - Прогностическая шкала IPSS-R

Факторы Баллы

0 0.5 1 1.5 2 3 4

Кариотип Y; del(11q) - Норма, del(5q); (12р); (20q) - del(7q); +8, 19; i(17q); другая аберрация 7; ^(3)Л(3с|) /del(3q); двойная аберрация с -7/7с- Комплекс ный

Бласты в КМ, % <2 3-4 - 5-10 >10

Гемоглобин, г.л >100 80-100 <80

Тромбоциты, X 109/л >100 50-99 <50

Нейтрофилы, х 109/л >0,8 <0,8 -

ПРИЛОЖЕНИЕ Г. Прогностическая шкала WPSS (Ь. Malcovati и соавт., 2011)

Таблица Г.1 - Прогностическая шкала WPSS

Параметры Баллы

0 1 3

Вариант по классификации ВОЗ рефрактерная анемия, рефрактерная анемия с кольцевыми сидеробластами, ШС С изолированной дeлeциeй5q рефрактерная цитопения с ыультилинейной дисплазией рефрактерная анемия с избытком бластов 1 рефрактерная анемия с избытком бластов 2

Кариотип норма. Т. ёе1(5я): <1е1(20я) все другие аномалии кариотипа комплексные аномалии >3 аберраций и любые изменения 7 хромосомы -

Минимум одна трансфузия донорских эритроцитов каждые 8 недель на протяжении 4 мес. Нет Да - -

ПРИЛОЖЕНИЕ Д. Шкала коморбидности MDS-CI (Porta M. Delia и соавт.,

2011)

Таблица Д.1 - Шкала коморбидности для больных МДС

Сопутствующие заболевания Балл

Сердечно-сосудистые 2

Хронические заболевания печени 1

Хронические респираторные 1

Хронические заболевания почек 1

Опухоль в анамнезе 1

Примечание: прогностический вариант МЕ)8-С1: низкий (0 б&тюв). промежуточный (1-2 балла) н высокий (> 3 баллов).

ПРИЛОЖЕНИЕ Е. Протоколы выделения ДНК из цельной венозной крови

Выделение ДНК из клеток венозной крови с помощью набора «ДНК-

ЭКСТРАН-1» (Синтол, Россия)

1. Промаркировать пробирки объёмом 1,5 или 2 мл. Подготовить отрицательный контроль.

2. Смешать в отдельной пробирке: лизирующий раствор и сорбент.

3. Внести 170 мкл полученной смеси в промаркированные пробирки. Добавить 100 мкл периферической крови в соответствующую пробирку. Закрыть крышки пробирок. Встряхнуть пробирки на микроцентрифуге 3-5 с.

4. Термостатировать пробирки 10 мин при 50 °С. Центрифугировать пробирки при 13000 об/мин в течение 1 мин.

5. Удалить надосадочную жидкость. Добавить к осадку 400 мкл раствора №1, закрыть крышки пробирок и встряхнуть пробирки на микроцентрифуге 3-5 с. Центрифугировать пробирки при 13000 об/мин в течение 1 мин.

6. Повторить предыдущие действия дважды, добавив поэтапно к осадку по 200 мкл растворов №2 и №3.

7. Удалить надосадочную жидкость. Открыть крышки пробирок и термостатировать их 5 мин при 50 °С.

8. Добавить 300 мкл элюирующего раствора, закрыть крышки пробирок и встряхнуть их на микроцентрифуге 3-5 с. Термостатировать пробирки 5 мин при 50 °С. Центрифугировать пробирки при 13000 об/мин в течение 1 мин.

Выделение ДНК из клеток венозной крови с помощью набора ExtractDNA

Blood&Cells (Евроген, Россия)

Рисунок Е.1 - Схема выделения ДНК

ПРИЛОЖЕНИЕ Ж. Экстерьер технических разработок

Рисунок Ж.1 - Компьютерная модель второго модуля тест-панели в формате STEP

Рисунок Ж.2 - Изготовленный с использованием 3D-печати лабораторный образец второго модуля тест-панели, устройство которого позволяет комплексом изымать пробирки из центрифуги в рабочую область для выполнения процедуры выделения ДНК из венозной крови

Рисунок Ж.3 - Размещение части второго модуля тест-панели в устройстве микроцентрифуги

Модуль для ПЦР (АБх!. 1) Масштаб 1:2

О о о о о о о ©

о о о о о о о о

о о о о о о о О

о о о о о о о о

о О о о о о о о

о о о о о о о о

о о о о о о о о

о о о о о о о о

о о о о о о о о

о о о о о о о о

о о о о о о о о

о о о о о о о о

014

Парафин Смесь для реакции (Все, кроме матрицыI

Рисунок Ж.4 - Чертёж модуля тест-системы для ПЦР-исследования мутации с.1934ёирО в гене А8ХЫ

Рисунок Ж.5 - Изготовленный лабораторный образец тест-системы для ПЦР-исследования мутации c.1934dupG в гене ASXL1