Особенности молекулярной подвижности и межмолекулярного взаимодействия белков сыворотки крови в норме и при патологии тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.02, кандидат физико-математических наук Бойко, Анна Витальевна

• Бойко, Анна Витальевна
• кандидат физико-математических наук
• 2005

Оглавление диссертации кандидат физико-математических наук Бойко, Анна Витальевна

Введение.

Глава 1. Основные свойства белковых молекул.

1.1. Состав и строение белков.

1.2. Поведение белковых молекул в растворе. Теория Дебая-Хюккеля.

1.3. Основные белки сыворотки крови.

Глава 2. Рассеяние света в растворах биополимеров.

2.1. Метод статического светорассеяния.

2.1.1. Основные положения теории рассеяния света.

2.1.2. Теория Рэлея-Дебая. Определение молекулярного веса рассеивающих частиц.

2.2. Метод динамического светорассеяния.

2.2.1. Теоретические основы метода динамического рассеяния света.

2.2.2. Теория Джеймса-Эванса.

Глава 3. Трехкомпонентные лиотропные системы (Обзор литературных данных).

3.1. Поведение коэффициента межмолекулярного взаимодействия в трехкомпонентных растворах. Теория Скэтчарда.

3.2. Исследование рассеивающих свойств растворов белков, содержащих малые ионы.

Глава 4. Экспериментальное исследование водных растворов белков методами статического и динамического светорассеяния.

4.1. Объекты исследования и подготовка образцов.

4.2. Создание моделей сыворотки крови.

4.3. Описание экспериментальной установки.

4.4. Результаты экспериментального исследования водных растворов белков методом интегрального светорассеяния.

4.5. Описание и калибровка фотонно-корреляционного спектрометра.

4.6. Результаты экспериментального исследования оптических параметров белков методом динамического рассеяния света.

4.7. Результаты исследования смеси белков альбумина и 7-глобулина при их различных массовых соотношениях.

4.8. Обсуждение результатов и выводы главы 4.

Глава 5. Использование методов статического и динамического светорассеяния для диагностики онкологических и сосудистых заболеваний.

5.1. Метод диагностики онкологических заболеваний, основанный на статическом рассеянии света.

5.2. Сравнительное исследование параметров белков плазмы и сыворотки крови здоровых пациентов и онкологических больных.

5.3. Методы получения образцов сыворотки крови животных с искусственно вызванной сосудистой патологией.

5.4. Сравнительные результаты экспериментов с сывороткой крови животных с искусственно вызванной ишемией.

5.5. Результаты экспериментов с сывороткой крови крыс при искусственно вызванном геморрагическом инсульте.

5.6. Обсуждение результатов и выводы главы 5.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Особенности молекулярной подвижности и межмолекулярного взаимодействия белков сыворотки крови в норме и при патологии»

Белки - высокомолекулярные природные органические вещества, играющие фундаментальную роль в структуре и жизнедеятельности организмов. Изучение белков как основного составного элемента живой природы, а также оценка влияния внешних факторов на белковые системы представляет собой огромный интерес для современной медицинской биофизики, молекулярной физики и экологии.

Макромолекулы белков и биополимеров являются уникальными для исследования с помощью методов молекулярной оптики, поскольку масса белковой макромолекулы строго определена для каждого типа белка, при этом поверхность белковой молекулы имеет определенную величину заряда, которую можно изменять путем изменения рН раствора. Кроме того, молекулы белков обладают высокими значениями дипольного момента порядка несколько сотен Дебай (В).

Актуальность темы исследования связана с тем, что белки в виде водных растворов присутствуют во всех живых организмах, определяя многие жизненно важные функции. Развитие патологических процессов в организме, таких как сердечно-сосудистые и онкологические заболевания сопровождается изменениями ряда молекулярных параметров в клетках, тканях, а также в сыворотке крови. Поэтому исследование поведения белковых макромолекул в растворах, которые при определенных условиях могут быть использованы в качестве моделей сыворотки крови или лимфы, является очень важным для понимания процессов, происходящих в живых организмах.

Решающую роль в успешном лечении распространенных заболеваний и, прежде всего, сердечно-сосудистых и онкологических играет их ранняя диагностика. В последние годы для этих целей применяется сложная дорогостоящая аппаратура типа ЯМР - томографа. К сожалению, такая уникальная аппаратура, имеющаяся в единичных экземплярах в наиболее крупных медицинских центрах, не может обеспечить массовую профилактическую диагностику заболеваний на ранних стадиях их развития. Поэтому создание достаточно простых, недорогих, но эффективных диагностических методов остается актуальной проблемой практической массовой медицины. Совершенно очевидно, что успешная разработка новых физических методов диагностики распространенных заболеваний зависит от понимания молекулярных механизмов, лежащих в основе данного заболевания.

Металлы необходимы для нормальной жизнедеятельности человеческого организма. Более 5% веса человеческого тела составляют натрий, калий, кальций и магний. Другие металлы, такие как железо, кобальт, медь, молибден, цинк и др., присутствуют в организме в связанном состоянии (гемоглобин, ферменты), а их содержание составляет менее 1% веса тела [8,12,13,24]. Тем не менее, превышение допустимой концентрации металлов в окружающей среде создает серьезную угрозу здоровью человека. Особенно опасны тяжелые металлы (ТМ). Попадая в кровь и другие биологические жидкости, они даже в небольших концентрациях способны серьезно нарушить нормальное течение физиологических процессов в организме.

Сравнительно недавно в работах [76,77,78,79,81] было обнаружено новое явление - образование наночастиц - молекулярных кластеров в растворах белков в присутствии солей тяжелых металлов. Детальное исследование взаимодействия ионов металлов с белками в растворе показало общность механизмов образования макромолекулярных кластеров при развитии онкологического заболевания и при наличии ионов тяжелых металлов в растворе.

Основной целью данной работы было исследование молекулярно-динамических процессов, происходящих в растворах белков сыворотки крови при воздействии различных параметров методами статического и динамического рассеяния света, а также проверка возможности использования этих методов для диагностики онкологических и сердечнососудистых заболеваний.

Исходя из общей цели, в диссертации ставился ряд практических задач:

- иследование растворов макромолекул белков при изменении ряда физико-химических параметров среды, в том числе при взаимодействии с ионами легких и тяжелых металлов с помощью методов статического и динамического светорассеяния;

- исследование водных растворов белков в качестве модели сыворотки крови методами светорассеяния;

- использование метода статического рассеяния света для диагностики онкологических заболеваний;

- исследование растворов сыворотки крови крыс в норме и при искусственно вызванной ишемии мозга;

- исследование молекулярных параметров сыворотки крови крыс при искусственно вызванном геморрагическом инсульте.

Существует большое число физических методов исследования как коллективных форм теплового молекулярного движения, так и динамики отдельных молекул или их фрагментов. Ультразвуковая спектроскопия, ядерный магнитный резонанс, рассеяние медленных нейтронов, спектроскопия диэлектрической релаксации, а также оптические методы -рэлеевское и комбинационное рассеяние света, люминесцентная спектроскопия, - позволяют получать сведения о взаимодействиях и движениях молекул в конденсированных средах.

В рамках преследуемых в работе целей наиболее информативным и удобным для решения поставленных задач является метод интегрального рэлеевского рассеяния света. С помощью этого метода определялись массы и поляризационные свойства рассеивающих частиц, исследовался характер межмолекулярного взаимодействия при изменении концентрации ионов металлов в растворе и зарядовых свойств поверхности белковой молекулы.

Научная новизна диссертации обусловлена рядом экспериментальных результатов, впервые полученных в данной работе:

1. С помощью методов статического и динамического светорассеяния проведено систематическое исследование водных растворов альбуминов (BSA, HSA) и 7-глобулина при изменении ряда параметров среды, таких как концентрация макромолекул, рН (определяющий поверхностный заряд белков) и ионная сила (определяемая концентрацией ионов солей).

2. Впервые показано, что молекулярно-динамические свойства макромолекулы 7-глобулина в растворе, такие как коэффициент деполяризации, коэффициент межмолекулярного взаимодействия и коэффициент трансляционной диффузии - зависят от концентрации белка, ионной силы и знака поверхностного заряда на белке и имеют экстремумы в изоэлектрической точке.

3. Обнаружено образование наночастиц - белковых кластеров в водных растворах 7-глобулина, содержащих ионы тяжелых металлов, в частности ионы свинца.

4. Впервые обнаружена возможность возникновения двух структурных переходов в растворе т-глобулина, содержащего ионы легких или тяжелых металлов.

5. Проведены эксперименты с растворами белков (альбумины, 7-глобулин), взятых в различных соотношениях по концентрации в качестве моделей сыворотки крови, что позволило лучше понять результаты исследований нативных образцов сыворотки крови.

6. Показано, что статические и динамические параметры макромолекул белков сыворотки крови в растворах могут значительно различаться по величине для здоровых людей и пациентов с онкологическими заболеваниями. Подтверждено, что в растворах сыворотки крови онкологических больных коэффициент межмолекулярного взаимодействия макромолекул белков имеет отрицательную величину и может рассматриваться как основной диагностический параметр.

7. Впервые методами статического и динамического рассеяния света изучены изменения молекулярных параметров белков сыворотки крови крыс при искусственно вызванной сосудистой патологии. Из сравнения полученных данных с контрольными значениями обнаружено изменение усредненных масс рассеивающих частиц и соответствующих коэффициентов трансляционной диффузии при развитии ишемии и геморрагического инсульта.

8. Впервые обнаружено, что при развитии сердечно-сосудистых и онкологических заболеваний поведение молекулярных параметров белков сыворотки существенно различается.

В качестве основных результатов на защиту выносятся следующие положения:

1. На основании полученных в работе экспериментальных данных по коэффициентам межмолекулярного взаимодействия впервые показана возможность возникновения двух структурных переходов в растворе т-глобулина, содержащего ионы легких или тяжелых металлов.

2. Обнаружено образование наночастиц - белковых кластеров в водных растворах 7-глобулина в присутствии ионов тяжелых металлов, таких как ионы свинца.

3. Установлено, что некоторые параметры макромолекул белков сыворотки крови, а именно коэффициенты межмолекулярного взаимодействия, эффективные массы рассеивающих частиц и коэффициенты трансляционной диффузии могут значительно различаться по величине для здоровых людей и пациентов с онкологическими заболеваниями.

4. Обнаружено изменение усредненных масс рассеивающих частиц и соответствующих коэффициентов трансляционной диффузии при развитии ишемии и геморрагического инсульта у экспериментальных животных.

Практическая ценность предлагаемого исследования заключается в том, что полученные в работе результаты способствуют развитию представлений о молекулярно-динамических процессах, происходящих в растворах белковых макромолекул, содержащих ионы легких и тяжелых металлов, а также вносят вклад в понимание природы межмолекулярных взаимодействий.

Изученное в работе поведение белковых макромолекул в растворах и их взаимодействие с ионами различных солей, в том числе с ионами тяжелых металлов, позволяет установить возможный молекулярный механизм патологических изменений в сыворотке крови. Данное исследование имеет практическое значение для решения задач экологии и медицины.

Материалы диссертации могут быть использованы при разработке физических методов диагностики распространенных заболеваний, а также для создания диагностических приборов [62,67,68,69]. Методы молекулярной оптики позволяют проводить диагностику распространенных заболеваний на ранних стадиях их развития и дают возможность отличать онкологические заболевания от других, например сердечно-сосудистых.

Заключение диссертации по теме «Биофизика», Бойко, Анна Витальевна

выводы

По результатам работы сделаны следующие выводы:

1. Впервые показана возможность возникновения двух структурных переходов в растворе у-глобулина, содержащего ионы легких или тяжелых металлов.

2. Обнаружено образование наночастиц — белковых кластеров в водных растворах у-глобулина в присутствии ионов тяжелых металлов, таких как ионы свинца.

3. Обнаружена нелинейная зависимость коэффициента трансляционной диффузии £), от поверхностного заряда с минимумом в изоэлектрической точке белка.

4. Обнаружена аномальная зависимость коэффициента трансляционной диффузии Д от концентрации у-глобулина в растворе.

5. Установлено, что некоторые параметры макромолекул белков сыворотки крови, а именно коэффициенты межмолекулярного взаимодействия, эффективные массы рассеивающих частиц могут значительно различаться по величине для здоровых людей и пациентов с онкологическими заболеваниями.

6. Обнаружено изменение усредненных масс рассеивающих частиц и соответствующих коэффициентов трансляционной диффузии при развитии ишемии и геморрагического инсульта у экспериментальных животных.

Список литературы диссертационного исследования кандидат физико-математических наук Бойко, Анна Витальевна, 2005 год

1. Cabannes J. "La Diffusion Moleculaire de La Lumiere " // Paris, 1929.

2. Debye P. "Light Scattering in Solutions" //J. App. Phys., 1944, V.15, P.338-349.

3. Debye P.J. "Molecular-weight determination by light scattering" // Appl. Phys., 15, P.338-349, 1946.

4. Scatchard G.J., Batchelder A.C., Brown A. "Osmotic equilibrium in solution of serum albumin and sodium chloride " // J. Am. Chem. Soc. 68, P.2315-2323. 1946.

5. Scatchard G. J. "The attraction of protein for small molecules and ions " // Ann. N.Y. Acad. Sei., 1949, V.51, P.2315.

6. Edsall J.T. et al. "Light Scattering in Solutions of Serum Albumin: effects of charge and ionic strength "// J. of American Chem. Soc., 1950, V. 72, P.4641.

7. Волькенштейн M.B. "Молекулярная оптика"//ГИТТЛ, М.Л., 1951.

8. Leeper R. W., Summers L., Gilman H. //Chem. Revs. 1954, 54, №1, 101.

9. K.R.Stacey. "Light Scattering in Physical Chemistry" // Acad.Press. New York, 1956.

10. Heupam Г., Eeiuiu К. "Белки"//Изд. ИЛ, МЛ, 1958.

11. Tanford Ch. "Physical Chemistry of Macromolecules " // Willey, New York, 1961.

12. Lyman T. "Metals handbook"// V.l. Ohio, 1961

13. Лебедева КВ. "Техника безопасности в металлургии свинца и цинка " //Москва, 1963.

14. Реми Г. "Курс неорганической химии" // под ред. Новоселовой A.B., Москва, ИЛ, 1963.

15. Цветков В.Н., Эскин В.Е., Френкель С.Я. "Структура макромолекул в растворах " //Изд. Наука, 1964.

16. ФабелинскийИ.Л. "Молекулярноерассеяние света"//M. Наука, 1965.

17. Тенфорд Ч. "Физическая химия полимеров" // Изд. Химия, Москва, 1965.

18. Эйнштейн А. "Собрание научных трудов"//М. Наука, 1966.

19. Мартин Р. "Введение в биофизическую химию " // М. Мир, 1966.20. "Популярная медицинская энциклопедия" // М, Советская энциклопедия, 1966, 1040 с.

20. BierJ. "Electrophoresis"//N.Y., 1968.

21. Perrin D.D. "Dissociation constants of inorganic acids and bases " // Butterworths, London, 1969.

22. Shannon R.D., Prewitt C.T. //Acta Crystallogr., V.B26, 1046, 1970.

23. Williams A.P. "The Metals of Life " //NewYork, Willey, 1971.

24. Steinhard J., Zaiser E.M. //Adv. Protein Chem., V.10. P. 152.

25. Эскин B.E. "Рассеяние света растворами полимеров " // Изд. Наука, Москва, 1973.

26. ЛенинджерА. "Биохимия"//М., 1974.28. "Краткий справочник физико-химических величин" // под ред. Мищенко К.П., Равделя A.A., Л., Химия, 1974.

27. Вукс М.Ф. "Рассеяние света в газах, жидкостях и растворах" //Л., 1977.

28. Пилипенко А. Т. "Справочник по элементарной химии " //М., 1977.31. "Вредные вещества в промышленности. Справочник для химиков, инженеров и врачей. Неорганические и элементоорганические соединения"// 7-е изд. т.З, Л., Химия, 1977, 608 е.

29. Habbard J.В., WolymzP.G. //J. Chem. Phys., 1978, V.69, N.3, P.998.

30. Уайт Л. и др. "Основы биохимии"//M., 1981, Т.1.

31. Madden P., Kivelson D. //J. Chem. Phys., 1982, V.38, N.21, P.4244.

32. Дэвид P. "Введение в биофизику"//M., 1982.

33. Флайгер У. "Строение и динамика молекул" // М. Мир, 1982.

34. Букс. М.Ф. "Электрические и оптические свойства молекул и конденсированных сред " //Л. ЛГУ, 1984.

35. Блументаль Г. и др. "Анорганикум" // Т.1, под ред. Колъдица Л., Москва, Мир, 1984.

36. Долин П.А. "Справочник по технике безопасности" // М., Энергоатомиздат, 1985, 824 е.

37. Barlow D.J. Thornton J.M. "The distribution of charged groups in proteins"//Biopolimers, 25, P. 1717-1733, 1986.

38. ДебайП.П. "Избранные труды" // Москва, 1987, С.363.

39. Дебай П. "Определение молекулярного веса методом рассеяния света"//Л., Наука, 1987.

40. ЛенинджерА. "Биохимия"//Мир, 1987.

41. Петрова Г.П., Петрусевич Ю.М., Ширкова И.И., Ревокатов О.П. "Взаимодействие сывороточного альбумина с водой при различных концентрациях водородных ионов по данным рэлеевского рассеяния" //Вестник МГУ, Сер. Физ. Астр, 1987, Т.28, №2, С.59-63.

42. Petrova G.P. Petrusevich Yu.M. "Interaction of serum albumin with water in various concentrations of hydrogen ions investigated by light scattering" //Moscow University Physics Bulletin 28, P. 59-63, 1987.

43. Волькенштейн M.B. "Биофизика"//Изд. Наука, Москва, 1988.

44. Petrova G.P., Petrusevich Yu.M., Borisov B.A. "Anisotropic Polaris ability and Diffusion of Proteins in Water Solution Studied by Laser Light Scattering" // SPIE, 1990, Vol.1403 Laser Applications in Life Sciences, P.387-389.

45. Петрова Г.П., Петрусевич Ю.М. "Способ определения изоэлектрической точки белка" // Авторское свидетельство №1578597, 15.03.1990 (приоритет 01.06.1988).

46. Лебедев Ю.А. "Второе дыхание марафонца" // М., Металлургия, 1990, 144 с., С. 65.

47. Давыдова C.J1. "О токсичности ионов металлов"//Химия, N93, 1991.51. "Справочник биохимика"//Москва, Мир, 1991.

48. ЭмслиДж. ""Элементы"//Москва, Мир, 1991.

49. Петрусевич Ю.М. "Взаимодействие биополимеров в растворе" // Докт. ducc. М., 1992.

50. Petrusevich Yu.M., Petrova G.P. "Electrostatic Interaction in Biopolymer Solutions Investigated by NMR and Laser Light Scattering " // SPIE, 1993, Vol.1884, P. 70-76.

51. Эйхлер В. "Яды в нашей пище"//М., Мир, 1993, 189 е., с.60-62. .

52. ЭмслиДж. "Элементы"//М., Мир, 1993,256с.

53. Левшин Л.В., Салецкий A.M. "Оптические методы исследования молекулярных систем" // Изд. Московского университета, 1994.

54. Петрова Г.П., Петрусевич Ю.М. "Электростатические взаимодействия в растворах биополимеров по данным рэлеевского рассеяния света" // Вестник МГУ, Сер. Физ. Астр., 1994, Т.35, №3, С.45-50.

55. Petrova G.P. Petrusevich Yu.M. "Electrostatic interactions in biopolymer solutions studied by Rayleigh light scattering" // Moscow University Physics Bulletin 49, P.41-46, 1994.

56. Petrova G.P., Petrusevich Yu.M. "Anomalous Depolarization of Light Scattering in Dilute Solutions of Blood Proteins " // European Biomedical Optics Week BIOS EUROPE '95, Barcelona, Spain, 1995, N.2629-09.

57. Petrova G.P., Petrusevich Yu.M. "Optical Parameters of Blood Serum Aqueous Solutions " // European Biomedical Optics Week BIOS EUROPE '95, Barselona, Spain, 1995, N.2628-08.

58. Г. Камминс, Е. Пайк "Спектроскопия оптического смешения и корреляция фотонов"//изд-во "Мир", Москва, 1978.

59. Суворов А.В., Никольский А.Б. "Общая химия" // Москва, Высшая школа, 1995.65. "Общая химия в формулах, определениях, схемах"//Минск, 1996.

60. Бриллиантов Н.В., Ревокатов О.П. "Молекулярная динамика неупорядоченных сред " //МГУ, 1996.

61. Petrusevich Yu. М., Petrova G.P. "The method of light scattering measurement in tumour diagnostics" // SPIE, The Int. Soc. for Opt. Engineering, CIS Selected Papers, Laser Use in Oncology. 1996. Vol. 2728. P.2-9.

62. Petrova G.P., Petrusevich Yu.M., S.G.Alexeev,A.V.Ivanov "The method of light scattering in the investigation of plasma blood proteins " // LALS-96 (6-Int. Conf. on las. Appl. in life Sci.) Jena, 1996, P.2-7.

63. Петрова Г.П., Петрусевич Ю.М., Евсеевичева A.H. "Роль тяжелых металлов в образовании белковых кластеров в водных растворах " // Физические проблемы экологии. Всероссийская научн. конф., Москва, 1997. Тезисы докладов. T.l. С.58-59.

64. Evseevicheva A.N., Petrova G.P., Petrusevich Yu.M. "Laser Identification of Macromolecule Nanosize Dipole Clusters" // ALT-97, Limoge, France. 1997, Book of Abstracts., P. 36.

65. Лидии P.A. "Справочник no общей и неорганической химии " //Москва, Просвещение, 1997.

66. Velev O.D., Kaler E.W., Lenhoff A.M. "Protein Interactions in Solution Characterized by Light and Neutron Scattering: Comparison of Lysozyme and Chymotrypsinogen" //Biophysical J., V.75, December 1998, P.2682— 2697.

67. Petrova G.P., Petrusevich Yu.M., Evseevicheva A.N. "Molecular Clusters in Water Protein Solutions in The Presence of Heavy Metal Ions" // General Physiology and Biophysics, 1998, V.17(2), 97-104, Bratislava, Slovakia.

68. Petrusevich Yu.M., Petrova G.P., Evseevicheva A.N. "Instability of Proteins in The Solution at The Presence of Toxic Heavy Metals" // Ecology of Cities. Int. Conf. Proceedings, Rhodes, Greece, 1998, P.304-313.

69. Петрова Г.П., Петрусевич Ю.М., Евсеевичева A.H. "Роль тяжелых металлов в образовании белковых кластеров в водных растворах" // Вестник МГУ, Сер. Физ. Астр., 1998, №4, С.71-76.

70. Петрова Г.П., Петрусевич Ю.М., Евсеевичева А.Н. "Физические методы мониторинга токсических тяжелых металлов" // II Всероссийская научная конференция: Физические проблемы экологии, Москва, 1999, Тезисы докладов, Т. 1.

71. Петрова Г.П., Петрусевич Ю.М., Евсеевичева А.Н., Батюк В.А., Тен Д.И. "Физические методы мониторинга токсических тяжелых металлов" // Сб. Физическая экология (Физические проблемы экологии), № 5, МГУ, физический ф-т, 1999, С. 172-181.

72. Petrova G.P., Petrusevich Yu.M., Evseevicheva A.N. "The Role of Heavy Metals in The Formation of Protein Clusters in Aqueous Solution" // Moscow University Phys. Bulletin, V.53, N.4, P.91-97, 1999, Allerton Press.

73. Петрусевич Ю.М, Петрова Г.П. "Сильные электростатические взаимодействия в растворах заряженных биополимеров" // Всероссийский съезд биофизиков, Август 1999, Москва, Тезисы докладов, Т. 1, С. 71.

74. Petrova G.P., Petrusevich Yu.M., Evseevicheva A.N., Ten D.I. "Laser Investigation of Metal Ions Adsorption on Protein Charge Surface" // International Conference ALT-99 (Italy, 1999), Book of Abstracts, №20.

75. Петрова Г.П. "Молекулярная подвижность и межмолекулярные взаимодействия в оптически анизотропных жидких системах" // Докт. диссертация, 1999.

76. Liu Y, Ma C.Q., Li К.А., Xie F.C., Tong S.Y. "Rayleigh light scattering study on the reaction of nucleic acids and methyl violet" //Anal Biochem., 268(2), 187-92 (1999 Mar 15).

77. Mukherjee A., Lutkenhaus J., "Analysis of FtsZ assembly by light scattering and determination of the role of divalent metal cations" // J. Bacteriol., 181(3), 823-32 (1999 Feb).

78. Kartel M. Т., Kupchik L.A., Veisov B.K., "Evaluation of Pectin Binding of Heavy Metal Ions in Aqueous Solutions" // Chemosphere, V.38, N.ll, P.2591, 1999.

79. Reedijk J. "Medicinal Applications of Heavy-metal Compounds " // Chem. Biology, 3, 1999, P.236.89. "Экология, охрана природы, экологическая безопасность " // под ред. Никитина А.Т., Степанова С.А., Москва, МНЭПУ, 2000.

80. Ершов Ю.А, Попков В.А., Берлянд A.C. и др. "Общая химия. Биофизическая химия. Химия биогенных элементов " // Учеб. для вузов, 2-е изд., М., Высш. шк., 2000, 560 е., с.288-295.

81. Petsev D.N., Thomas B.R., Yau S.T., Vekilov P.G. "Interactions and Aggregation of Apoferritin Molecules in Solution: Effects of Added Electrolytes" // Biophysical J., V.78, April 2000, P.2060-2069.

82. Petrova G.P., Petrusevich Yu.M., Evseevicheva A.N., Ten D.I. "Laser Investigation of Metal Ions Adsorption on Protein Charge Surface» // Proceedings of SPIE (Advanced Laser Technologies), V.4070 (2000), P.430-437.

83. Евсеевичева A.H., Петрова Г.П., Петрусевич Ю.М., Тен Д.И. "Токсическое воздействие ионов свинца и меди на белки плазмы крови" // III Всероссийская научная конференция Физические проблемы экологии, МГУ, физический ф-т, 2001.

84. Petrova G.P., Petrusevich Yu.M., Ten D.I. "Formation Of Dipole Complexes In Protein Solutions With Low Concentrations Of Heavy Metal Ions: Diagnostics By The Method Of Laser Radiation Scattering" // Quantum Electronics, 32(10), 2002, p.897-901.

85. Петрова Г.П., Тен Д.И., Пшеничная НА. "Взаимодействие ионов тяжелых металлов с макромолекулами белков в водных растворах " //

86. Сб. расширенных тезисов докладов: Ломоносовские чтения. Секция физики. (Апрель 2002) С.5-9.

87. Petrova G.P., Petrusevich Yu.M., Evseevicheva A.N. and Ten D.I. "Laser Light Scattering Study of Supermolecular Structures in Blood Protein Solutions in The Presence of Heavy Metal Ions " // LA T 2002, Moscow, Technical Digest JsuF 19, P. 173.

88. Petrova G.P., Petrusevich Yu.M. and Ten D.I. "Temperature Effect on Submolecular Dipole Structures in Aqua Albumin Solutions in Presence of Pb Ions"//LAT 2002, Moscow, Technical Digest, JsuF 36, P. 181.

89. Petrova G.P., Petrusevich Yu.M., Ten D.I., Evseevicheva A.N., Boiko A. V., Fadyukova O.E. "Laser Light Scattering Diagnostic of Blood Proteins Solutions" // International Conference ALT-02 (Switzerland, Adelboden, 2002), Technical Digest, P. 138.

90. Петрова Г.П., Петрусевич Ю.М., Тен Д.И. "Образование дипольных комплексов в растворах белков с малой концентрацией ионов тяжелых металлов: диагностика методом лазерного светорассеяния"//Квантовая электроника, 2002, 32, №10, С. 1-5.

91. Petrova G.P., Petrusevich Yu.M., and Ten D.I., Evseevicheva A.N, Boiko A. V, Fadyukova O.E. "Laser Light Scattering Diagnostics of Blood Protein Solutions" // Proceedings of Int. Conf. Advanced Laser Technologies ALT-02, 2002, SPIE. (В печати)

92. Евсеевичева A.H., Петрова Г.П., Петрусевич Ю.М., Тен Д.И. "Токсическое воздействие ионов тяжелых металлов на белки плазмы крови" //Вестник МГУ, 2003 (В печати).

93. Интернет: "Эковестник Дубны. Геоэкологическая обстановка и оценка геоэкологической опасности детских дошкольных учреждений города Дубна ", 1998-1999: http://eco. dubna. ru/pro ject/dou/c. html.

94. Интернет: "Экологическая ситуация по г. Сургуту", 1991-2003: http://priroda. admsurgut. ru/monned.

95. Интернет: Загорский В.В. "Лекции по общей и неорганической химии для студентов биологического фак-та (биофизика)", 2001/2002: http://www.chem.msu.su/rus/teaching/general.

96. Интернет: Авторский коллектив МГУПБ "Химия для всех", 1999: http://school-sector, relarn. ru/nsm/chemistry/Rus/chemy. html.

97. Ш.Интернет: "Офиц.сервер Госкомэкологии России", 1999-2000: http://www, ecocom. ru/archiv/ecocom/index. html.