Организация транспорта белков через комплекс Гольджи тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.25, доктор биологических наук Безнусенко, Галина Владимировна

• Безнусенко, Галина Владимировна
• доктор биологических наук
• 2007

Оглавление диссертации доктор биологических наук Безнусенко, Галина Владимировна

Список используемых сокращений. Введение (общая характеристика работы)

Глава 1. Обзор литературы.

1.1 Основные модели транспорта через комплекс Гольджи.

1.1.1 Модели диссоциации.

1.1.2 Везикулярная модель.

1.1.3 Модель прогрессии.

1.1.4 Модель прогрессии и созревания цистерн.

1.1.5 Модель созревания и прогрессии переносчика транспортируемого белка.

1.1.6 Диффузионная модель (или модель непрерывных коммуникаций).

1.1.7 Модель болюса.

1.2 Транспорт от эндоплазматического ретикулюма к комплексу Гольджи.

1.3 Механизмы транспорта через комплекс Гольджи.

1.3.1 Транспорт белков через комплекс Гольджи согласно везикулярной модели.

1.3.2 Этапы переноса белков через комплекс Гольджи по модели созревания и прогрессии цистерн.

1.3.3 Процесс транспорта белков через комплекс Гольджи согласно модели созревания и прогрессии мембранного переносчика.

1.3.4 Транспорт белков через комплекс Гольджи по механизму латеральной диффузии.

1.3.5 Комбинированные модели о транспорте белков через комплекс Гольджи.

1.4 Транспорт от комплекса Гольджи к плазматической мембране.

1.4.1 Везикулярный транспорт от комплекса Гольджи согласно везикулярной модели.

1.4.2 Транспорт от комплекса Гольджи в специальных мембранных переносчиках по модели созревания и прогрессии цистерн.

1.4.3 Непрерывность коммуникаций и транспорт от комплекса Гольджи по модели латеральной диффузии.

1.4.4 Регулируемая непрерывность и последовательные слияния согласно модели созревания и прогрессии переносчика на этапе транспорта от комплекса Гольджи к плазматической мембране.

Глава 2. Материалы и методы.

2.1 Клеточные линии, ДНК-конструкции, антитела и химические реагенты.

2.2 Условия роста культуры клеток.

2.3 Трансфекция.

2.3.1 Трансформация бактерий с помощью температурного шока (высокой температуры).

2.3.2 Длинный путь приготовления плазмидной ДНК (Large scale).

2.3.3 Трансфекция клеток путем электропорации.

2.4 Инфицирование клеток вирусом везикулярного стоматита (vesicular stomatitis virus, VSV).

2.5 Синхронизационные протоколы.

2.6 Иммунофлуоресцентная микроскопия.

2.6.1 Материалы, использованные для проведения иммуно-флуоресцентной микроскопии.

2.6.2 Метод проведения иммунофлуоресцентного специфического окрашивания.

2.6.3 Метод измерения уровня колокализации иммуно-флуоресцентных протеинов.

2.7 Конфокальная микроскопия.

2.8 Электронная микроскопия.

2.8.1 Материалы, использованные для проведения обычной электронной микроскопии, так же в сочетании с иммуномечением.

2.8.2 Метод приготовления образцов для электронной микроскопии.

2.8.3 Способы улучшение контраста.

2.8.4 Методы иммуномечения препаратов для электронной микроскопии (ЕМ) перед заключением в эпоксидные смолы.

2.8.4.1 Метод золотого усиления.

2.8.4.2 Диаминобензидиновая реакция (ДАБ-реакция).

2.8.4.3 Двойное окрашивание.

2.8.5 Методы иммуноцитохимии после заключения (постэмбеддинг). Криосрезы.

2.8.5.1 Материалы, использованные для приготовления криосрезов и их иммуномечения.

2.8.5.2 Получение ультратонких криосрезов.

2.8.5.3 Иммуномечение криосрезов.

2.8.6 Морфометрический анализ.

2.8.7 Метод быстрого замораживания и криозамещения.

2.8.8. Электронная томография.

2.8.9. Коррелятивная микроскопия.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Организация транспорта белков через комплекс Гольджи»

Клетки синтезируют различные макромолекулы как для секреции их во внеклеточную среду, так и для внутриклеточных процессов. Белки, синтезированные на рибосомах гранулярного эндоплазматического ретикулюма (ЭР), проходят длинный путь, прежде чем достигнут плазматической мембраны и других органелл. Эта система различных внутриклеточных компартментов образует секреторный или эндоцитозный путь (Миронов A.A. и др. 1998; Банин В.В., 1999). Если ЭР является местом синтеза и обеспечивает вхождение макромолекул: белков и липидов, в последующие компартменты мембранной системы клетки, то пластинчатый комплекс или комплекс Гольджи (КГ) является местом их посттрансляционной модификации, сортировки и последующей рассылки по различным направлениям. Регуляция и механизмы транспорта на этом участке чрезвычайно сложны и являются предметом активного изучения и горячих научных споров среди ученых ведущих лабораторий в области современной клеточной и молекулярной биологии. В настоящее время рассматриваются следующие теории и модели транспорта внутри-Гольджи (Mironov A.A., et al. 2005): везикулярная теория, предполагающая, что секретируемые белки транспортируется между стабильно существующими цистернами в везикулах, причем в обоих, в антероградном и ретроградном, направлениях; теория прогрессии и созревания самих цистерн в сочетании с ретроградным транспортом ферментов везикулами; модели, основанные на непрерывности соединений КГ; модели созревания и прогрессии мембранного домена содержащего транспортируемый белок.

Первые две модели имеют существенные недостатки. Везикулярная модель, предложенная Дж. Паладе (Farquhar M.G. and G.E. Palade, 1981) несколько десятилетий назад, кажется на первый взгляд простой, красивой, доказанной множеством исследований. Она предполагает концентрацию транспортируемых белков (карго) в покрытых, окаймленных почках (бадах), формирующихся на проксимальном (вышележащем) компартменте. Шейка бада схлопывается, и сформированная таким образом везикула, отщепляется, теряет свое белковое покрытие и переносит транспортируемые белки в следующую цистерну, сливаясь с ней. Она излагается во многих учебниках и руководствах на правах уже не гипотезы, а доказанной теории.

Тем не менее, с точки зрения везикулярной теории сложно объяснить отсутствие в везикулах многих известных транспортируемых молекул (альбумин, проинсулин, вирусные белки и др.), а также понять, как осуществляется транспорт таких больших молекулярных комплексов, как например, проколлаген, размеры которого в 5 раз превышают средний размер везикулы. Не менее сложно представить себе как везикула может найти нужный компартмент для стыковки и слияния. Основные исследования, послужившие доказательством везикулярной теории, были выполнены в условиях in vitro и методами биохимии. Однако разработанные в последнее время морфо-функциональные подходы позволяют усомниться с абсолютной "доказанности" везикулярной теории транспорта.

Классический вариант модели созревания и прогрессии цистерн предполагает, что транспортируемый белок, оставаясь в составе цистерны, постепенно направленно продвигается по стаку («стопке») КГ от цис-полюса к транс-полюсу. Такая прогрессия белка сопровождается возвратом (рециклингом) ферментов, который осуществляется везикулами, имеющими СОР I-покрытие (Glick B.S. at al. 1997; Glick B.S. and Malhotra V. 1998).

Данная модель тоже не может быть принята безоговорочно, т.к. последние исследования не выявили в везикулах повышенного содержания ферментов гликозилирования (Orci L. et al., 2000; Kweon H.S. et al., 2004), которые являются основным функциональным компонентом КГ. Между тем, согласно данной модели, эти ферменты в процессе транспорта должны рециклировать именно в составе везикул КГ. Модель созревания и прогрессии цистерн не может также объяснить рециклинг ферментов транс-цистерн (например, сиалилтрансферазы) (Mironov А.А. et al., 2005), поскольку на этой цистерне не образуются "СОР Г'-зависимые везикулы (Ladinsky M.S.et al., 1999).

Таким образом, несмотря на множество работ, посвященных моделям транспорта белков и липидов через КГ, до сих пор так и не сложилось единого мнения о механизме транспорта через эту органеллу.

Комплекс Гольджи состоит из трех основных типов структур: плоских цистерн имеющих в своем составе неперфорированную и перфорированную часть, тубул различного диаметра и везикул. В частности, следует отметить, что площадь поверхность тубул КГ и ассоциированных с ними перфорированных зон эквивалентна площади поверхности цистерн (Ladinsky M.S. et al., 1999). Существование такого большого, динамически изменяющегося домена КГ предполагает, что данное образование должно играть важную роль в процессе транспорта. В последнее время был опубликован ряд работ, выполненных, с использованием электронной томографии. Эти работы доказывают факт образования тубулярных соединений между цистернами комплекса Гольджи в клетках осуществляющих активный транспорт (Ladinsky M.S. et al., 1999; 2002; Trucco A. et al., 2004).

Однако вышеописанные соединения не были найдены в условиях блокирования транспорта (Тгиссо А. е1 а1., 2004).

На основании этого была предложена еще одна модель — перемещение транспортируемого белка (карго) по межцистернальным соединениям. Однако, если для карго, имеющего небольшие размеры и обладающего способностью к диффузии (например, альбумина), эти представления еще могут быть близкими к действительности, то для больших, не способных к диффузии белков, таких как агрегаты проколлагена I, размеры которых составляют 300 нм, гипотеза сталкивается с непреодолимыми трудностями — диаметр тубулярных соединений не превышает 50-60 нм. Несмотря на убедительные доказательства существования соединений между различными цистернами КГ, остается открытым вопрос: всегда ли данные соединения присутствуют на всех уровнях стопки цистерн КГ? Возможно, они существуют, в основном, между цистернами, к которым в этот момент присоединен мембранный переносчик транспортируемого белка.

Согласно модели созревания и прогрессии переносчика транспортируемых белков и липидов, обоснованию которой, собственно, и посвящена данная работа, предполагается, что образовавшийся на выходе из ЭР мембранный переносчик сливается с промежуточным компартментом и цис-цистерной КГ, формируя смешанный компартмент, так называемый «карго-домен». Он представляет собой динамичную мембранную структуру достаточно большого размера, в просвете и мембранах которой содержатся транспортируемые белки. Затем происходит сегрегация переносчика и его слияние с медиальным (срединным) компартментом комплекса Гольджи, что является сигналом для физического отделения данного мембранного переносчика от промежуточного компартмента и цис-цистерны. Такая же последовательность событий (слияние, смешивание, повторяющаяся сегрегация) происходит на других этапах транспорта через комплекс Гольджи. Один из возможных механизмов сегрегации белков при последовательном формировании и перемещении переносчиков базируется на известной разнице в толщине мембран на протяжении стака КГ.

Из этой модели можно вывести ряд следствий, которые поддаются экспериментальной проверке. Например, можно предположить, что во время прохождения мембранного домена, содержащего карго, по стаку, поочередно, на уровне его локализации, длина соответствующих цистерн должна увеличиваться (поскольку к ним добавляются мембраны), в то время как другие цистерны должны оставаться той же длины, что и до прихода карго. По результатам наблюдений за проходом карго по изолированным министакам, образованным под воздействием нокодазола, разница в длине между разноуровневыми цистернами в стопке КГ выявлена не была, однако мы смогли подтвердить увеличение длины цистерн при проходе карго (Trucco A. et al., 2004). Учитывая вышеописанные данные, оригинальная версия модели созревания и прогрессии мембранного переносчика белков может быть принята за основу, однако она требует существенного дополнения и переосмысления.

Более того, в литературе мы находим множество противоречий в описании структурны КГ. Так, например, по данным одних исследователей (Ladinsky M.S. et al., 1999) цис-цистерна не является перфорированной, что противоречит описанию данной структуры приводимой в других работах (Rambourg A. and Clermont Y., 1990, 1997). Кроме того в реконструкциях Ладинского (Ladinsky M.S. et al., 1999, 2002) около КГ отсутствуют везикулярно-тубулярные кластеры, которые служат местом выхода секретируемых белков из ЭР и являются промежуточным компартментом на пути транспорта из ЭР в КГ. Еще более противоречивыми выглядят данные о наличии множества везикул по данным одних авторов (Ladinsky M.S. et al., 1999; Marsh BJ. et al., 2001), и описание крайнего малого количества свободных везикул с точки зрения других (Rambourg A. and Clermont Y., 1990;. Trucco A. et al., 2004). He ясным остается описание последней цистерны и ее взаимотношение с вышележащими цистернами и транс-Гольджи сетью (Ladinsky M.S. et al., 1999).

Устранение этих противоречий путем детального анализа структурной организации КГ является необходимой основой для построения моделей функционирования и описание собственно структуры этой сложной органеллы в зависимости от интенсивности транспорта. В нашей работе путем комплексного применения современных методов исследования, а именно: флуоресцентной, лазерной конфокальной микроскопии, электронно-микроскопической техники, включающей иммуномечение и ЭМ-томографию, а так же коррелятивную микроскопию, мы попытаемся частично решить выше описанные противоречия.

Цель работы - анализ механизмов транспорта белков через комплекс Гольджи и разработка на его основе содержательной модели, позволяющей согласовать результаты современных исследований, посвященных изучению переноса через комплекс Гольджи.

Задачи исследования включали:

1. Изучение путей, скорости и механизмов перемещения мембранных и растворимых белков различной молекулярной массы и размера через комплекс Гольджи.

2. Разработку методологического подхода, позволяющего совместить изучение ультраструктуры и трехмерной организации мембранных переносчиков белков в комплексе Гольджи с исследованием кинетики их транспорта в живой клетке.

3. Ультраструктурный анализ трехмерной организации путей переноса протеинов через комплекс Гольджи.

4. Выявление зависимости структуры комплекса Гольджи и распределения его ферментов от интенсивности транспорта белка.

5. Создание на основе полученных экспериментальных данных и современных молекулярно-биологических представлений эффективной модели транспорта белков через комплекс Гольджи.

Основные положения, выносимые на зашиту.

1. Существующие в настоящее время модели транспорта белков через комплекс Гольджи пересмотрены с учетом результатов исследований, основанных на новых, разработанных нами, методологических подходах.

2. Комплекс Гольджи следует рассматривать как весьма динамичную мембранную органеллу, структура которой, в значительной мере определяется интенсивностью синтеза и транспорта белков.

3. Скорость и механизмы перемещения мембранных и растворимых белков через комплекс Гольджи (от момента входа до момента выхода из данной органеллы) не зависят от молекулярной массы и размера транспортируемых белков.

4. Ферменты, характерные для каждого компартмента комплекса Гольджи, отсутствуют или содержатся в низких концентрациях в СОР I - везикулах и локализуются, преимущественно, в перфорированных зонах на краях цистерн комплекса Гольджи.

5. Межцистернальные тубулярные сообщения открывают возможность рециркуляции ферментов комплекса Гольджи и их возврата в проксимальный компартмент посредством латеральной диффузии в мембранах.

6. Созревание и прогрессия мембранного переносчика транспортируемого белка являются основными механизмами транспорта через комплекс Гольджи. Модель прогрессии мембранного домена, содержащего транспортируемые белки, наиболее полно отражает процесс транспорта на данном участке секреторного пути.

Научная новизна.

Предлагаемая работа представляет собой специальное комплексное исследование с применением частично модифицированных и вновь разработанных нами современных технологий клеточной биологии, основанных на синхронизации транспорта белков через пластинчатый комплекс, световой и электронной микроскопии в сочетании с электронной томографией и трехмерной реконструкцией ультраструктур. В работе впервые продемонстрировано, что:

1) Везикулярная модель транспорта белков через пластинчатый комплекс не верна, т.к. отсутствует концентрация транспортируемых молекул белка в СОР1-везикулах;

2) Скорости транспорта для образующего крупные молекулярные агрегаты белка проколлагена и для легко диффундирующего мембранного в-протеина вируса везикулярного стоматита (УЗУС) одинаковы;

3) Путем выполнения трехмерной реконструкции комплекса Гольджи на основе электронно-микроскопической томографии образцов, фиксированных с помощью сверхбыстрого замораживания, была поставлена под сомнение теория, основанная на мегавезикулах, т.к. в результате проведенных исследований не было выявлено мегавезикул, а точнее мембранных расширений, содержащих проколлагеновые макромолекулярные агрегаты, которые были бы совершенно изолированы от других мембранных структур;

4) В работе опровергнута классическая модель созревания и прогрессии цистерн, предполагающая рециклинг ферментов гликозилирования, локализующихся в аппарате Гольджи. Основанием послужили данные о крайне низкой концентрации ферментов гликозилирования в СОР1-везикулах;

5) Проведен комплексный экспериментальный анализ и дано обоснование модели прогрессии через комплекс Гольджи мембранного переносчика, содержащего транспортируемые белки. В результате было показано, что данная модель наиболее полно соответствует имеющимся экспериментальным наблюдениям.

Научно-практическое значение.

Экспериментальные данные, полученные при проверке существующих моделей транспорта через комплекс Гольджи, представляют собой не только теоретическую базу для понимания истинных механизмов транспорта на этом участке секреторного пути. Они позволяют начать целенаправленный поиск новых лекарственных средств для лечения заболеваний, механизмы которых связаны с нарушениями транспорта через пластинчатый комплекс.

Создание модели транспорта белков через комплекс Гольджи дает возможность проверки уже существующих специфических лекарств, способных оказывать строго направленное воздействие на транспорт определенного белка и существенно снизить затраты на проведение исследований по созданию экспериментальных систем для тестирования лекарственных средств. Таким образом, эта модель может стать полезным инструментом не только в клеточной и молекулярной биологии, но и в фармакологии. Содержащиеся в работе фактический материал, выводы и положения могут быть широко использованы в преподавании соответствующих разделов клеточной биологии и цитологии.

Они используются в учебном процессе на кафедрах гистологии и эмбриологии лечебного и педиатрического факультетов РГМУ, на кафедре химии, биологии и экологии Шуйского государственного педагогического университета. Разработанные нами новые методы ультраструктурного исследования применяются в Институте эволюционной физиологии и биохимии им. И.М.Сеченова РАН и в Институте цитологии РАН.

Заключение диссертации по теме «Гистология, цитология, клеточная биология», Безнусенко, Галина Владимировна

ВЫВОДЫ

1. Результаты изучения кинетики и топологии переноса различных белков через комплекс Гольджи, полученные с помощью взаимодополняющих методов: флуоресцентной (лазерной конфокальной) микроскопии и иммуно-электронномикроскопической техники, свидетельствуют о том, что существующие в настоящее время модели транспорта белков вдоль экзоцитозного пути нуждаются в существенном пересмотре.

2. Как показали эксперименты с различными протоколами синхронизации транспорта, белки, существенно отличающиеся по своим характеристикам — размерам, положению и принадлежности (проколлаген I и в-белок вируса везикулярного стоматита (УБУв)), доставляются к комплексу Гольджи из эндоплазматической сети практически одновременно и проходят через данную органеллу с равными скоростями.

3. Крупные секреторные белки (проколлаген I) и небольшие мембранные протеины (УБУв) колокализуются в процессе переноса через комплекс Гольджи в одних и тех же компартментах и цистернах.

4. Трехмерное реконструирование комплекса Гольджи на основе данных ЭМ томографии и иммуно-электронномикроскопических исследований не выявило крупных везикулярных переносчиков (мегавезикул) и не подтвердило их участие в транспорте на данном участке секреторного пути.

5. Небольшой мембранный белок УБУв при умеренной стимуляции транспорта проходит через комплекс Гольджи, последовательно перемещаясь по цистернам в направлении от цис - к транс- полюсу. При увеличении объема транспортируемого белка отмечается более пологий градиент его концентрации, с максимумом в цистернах соответствующего компартмента.

6. Несмотря на различия по основным характеристикам (размерам, диффузионной способности, положению в просвете или в мембране), исследованные белки (проколлаген I, VSVG, секретируемая пероксидаза хрена в трансфектируемых клетках) совершенно исключаются из СОР I-окаймленных везикул или содержатся в них в низких концентрациях.

7. Вышеперечисленные результаты позволяют утверждать, что доминирующая в настоящее время «везикулярная гипотеза» переноса белков-карго через комплекс Гольджи с помощью СОР 1-окаймленных везикул не может быть достаточно обоснована.

8. Неправомочность гипотезы созревания и прогрессии цистерн, последовательно переносящих модифицируемые белки, подтверждается результатами, полученными при исследованиях «in vivo» и «in vitro» в бесклеточной системе:

-СОР I - кайма выявляется не только в везикулах и бадах, но и, в перфорированных зонах цистерн стопок комплекса Гольджи; -как показали результаты трехмерной реконструкции, округлые мембранные профили, содержащие ферменты комплекса Гольджи, являются не СОР I везикулами, а сечениями тубул, связанных с перфорированными зонами цистерн;

-ферменты, характерные для каждого компартмента комплекса Гольджи отсутствуют или содержатся в низких концентрациях в СОР I везикулах и в образующих их окаймленных бадах, но локализуются, преимущественно, в перфорированных зонах на периферии цистерн.

9. Трехмерные реконструкции на основе данных ЭМ томографии выявили непрерывные тубулярные коммуникации между различными цистернами стопки комплекса Гольджи и между стопками. Эти сообщения открывают возможность рециркуляции ферментов комплекса Гольджи и их возврата в проксимальный компартмент посредством диффузии в просвете и латеральной диффузии в мембранах. Структура комплекса Гольджи и частота непрерывных коммуникаций между его цистернами зависят от интенсивности транспорта белков через данную органеллу.

10. В качестве модели, наиболее отвечающей современным данным о переносе белков через комплекс Гольджи, представлена модель прогрессии мембранного домена, содержащего транспортируемые белки. В соответствии с этой моделью, мембранный домен последовательно переносится от цистерны к цистерне, при использовании молекулярных механизмов, обеспечивающих слияние и разделение мембран. Это позволяет обеспечить доступ белков-карго к резидентным ферментам комплекса Гольджи в соответствующем компартменте и, тем самым, их созревание (модификацию). Прогрессия мембранного домена регулирует образование непрерывных тубулярных сообщений между соответствующими компартментами комплекса Гольджи.

11. В соответствии с предложенной моделью прогрессии мембранного домена, комплекс Гольджи следует рассматривать как весьма динамичную мембранную органеллу, актуальная структура которой, в значительной мере, зависит от интенсивности синтеза и транспорта белков.

Заключение.

Морфо-функциональные принципы транспорта через комплекс Гольджи, несмотря на долгие годы исследований, остаются неясными, что весьма затрудняет понимание молекулярных механизмов регуляции транспорта. Однако, благодаря новым подходам и технологиям морфология комплекса Гольджи (КГ) из описательной науки превратилась в динамичную, способную понять изменения данной органеллы во времени и пространстве, как в нормальных, физиологических условиях, так и в сложных экспериментальных системах. В данной работе приведены основные положения концепции внутри-Гольджи транспорта, а так же анализ основных моделей этого процесса.

Понимание процесса переноса вновь синтезированных в эндоплазматическом ретикулюме протеинов к местам их непосредственного применения стало основной задачей клеточной биологии на протяжении последних десятилетий. Ключевым решением данной проблемы стало применение новых морфологиеских технологий в комбинации с точными синхронизационными протоколами внутри-Гольджи транспорта.

Суммируя накопленные клеточной биологией данные о структуре и динамике мембран секреторного пути, приходишь к пониманию того факта, что произошедший в последние годы значительный скачек в молекулярной биологии не сопровождался углублением знаний о строении и функции органелл. Причинами такой ситуации, вероятно, стали "исторические" и технологические факторы, замедлившие прогресс в данном направлении. К "историческим" факторам следует отнести многолетнее господство везикулярной теории (Palade G., 1997). Предложенная Дж. Палладе, благодаря своей простоте и элегантности, подкрепленная в основном лишь исследованиями на молекулярном уровне "in vitro", однако принятая как догма, данная теория оказала сдерживающее влияние на разработку новых моделей транспорта. Однако, несмотря на множество исследований, открытий новых молекул, справедливость везикулярной теории так и не была доказана на живых клетках. Отсутствовал так называемый критический эксперимент, показывающий "in vivo" каким образом происходит перемещение молекул, покидающих, например, компартмент А, и входящих в СОР I - окаймленные везикулы, и как они, отпочковываясь, сливаются и перемещаются в компартмент В. Наконец, наибольшую трудность представляла собой задача создания доступных экспериментальных технологий, позволяющих ответить на эти и многие другие вопросы, посвященные внутриклеточному транспорту. Так, например, движение карго на пути от ЭР к Гольджи было характеризовано на светооптическом уровне благодаря появлению методов наблюдения живых клеток, однако из-за недостаточной разрешающей способности трудно было понять, какую органеллу приставляет та и ли иная движущаяся флуоресцентная частица (Griffiths G. et al., 1993). Электронная микроскопия, как подход к изучению ультраструктурного строения клетки, весьма статична и не позволяет следить за процессами в динамике, она двумерна, и не способна отразить тонкие детали строения органелл в трехмерном пространстве.

В последние несколько лет с развитием новых технологических подходов в сфере изучения внутриклеточного транспорта и накоплением фактов становится все более видимой несостоятельность везикулярной модели, не способной дать им объяснение (Mironov A. et al., 1997; Bannykh S.I. et al, 1997; Glick B.S. and Malhotra V., 1998; Griffiths G., 2000). Необходимость переосмысления уже имеющихся и вновь полученных данных определяет интерес к разработке новых методик по изучению внутриклеточного транспорта. Исключительно быстрое развитие световой микроскопии в последние годы обусловлено постановкой методов с использованием конструкций с зеленым флуоресцентным протеином (green fluorescent protein (GFP)) при изучении живых клеток (Lippincott-Schwartz J. et al, 2001), так же разработанной в лаборатории Стефана Хелла (S. Hell) нового типа светового микроскопа (STED

4Pi), позволяющего значительно увеличить разрешающую способность за счет разрушения дифракционного барьера путем открытия новых принципов интерференции для лазерного луча. Данный микроскоп позволил добиться визуализации органелл в клетке с ультравысоким для световой микроскопии разрешением - 100 нм на живых клетках и до 50 нм в фиксированных (Hell S., 2003). Другой современной технологией, позволившей наблюдать взаимодействие протеинов " in vivo "(с разрешением до 6 нм), стал FRET (fluorescent resonance energy transfer) (Ballestrem C. and Geiger В., 2004; Meng J.J.et al., 2004; Vereb G. et al., 2004). Несмотря на появление этих новых инструментов световой микроскопии, она так и не достигла уровня разрешения ЭМ, однако, имеет неоспоримое достоинство, а именно, возможность динамического наблюдения.

Разработанный в нашей лаборатории метод коррелятивной микроскопии сделал возможным сочетание двух подходов к изучению внутриклеточного транспорта: видео-световой микроскопии и ЭМ. Это позволило, нивелируя их недостатки (Mironov A.A., et al, 2000) и в полной мере используя преимущества, добиться одновременного мониторинга динамики и ультраструктуры (Polishchuk R.S. et al., 2000, Deerinck T.J. et al., 1994). Коррелятивная микроскопия в сочетании с электронной томографией с последующей трехмерной реконструкцией химически фиксированных препаратов и препаратов после криофиксации позволила получить новые данные о тонком строении внутриклеточных структур, например, о существовании тубулярных соединений между компартментами. (Мс Intosh J.R., 2001; Koster, A.J., et al., 1997; Ladinsky M.S.et al., 1999; Mironov A.A., et al., 2001). Следующим важным этапом в работе по изучению механизмов транспорта явилась разработка и усовершенствование протоколов синхронизации, а так же специализированных синхронизированных клеточных систем (Bonfanti L. et al., 1994; Mironov A.A. et al., 2001,; Volchuk A., 2000). Таким образом, анализирую результаты исследования, полученные с помощью вышеописанных новых методов и технологий, нам удалось показать, что везикулярный транспорт (даже если допустить вероятность существования антроградного везикулярного транспорта) не является основным механизмом транспорта на участке КГ, что обусловило необходимость новых интерпретаций и построение новых моделей организации внутриклеточного транспорта.

Однако, для понимания того, как же на самом деле секретируемый материал проходит через Гольджи стак, необходимо было сначала детально изучить строение самого КГ, который, несмотря на неисчислимое количество работ остается малоизученным, особенно в момент прохождения карго. Попытки систематизации и анализа данных о строении КГ, а так же резидентных белков участвующих в транспорте через Гольджи (Beznoussenko G.V.i Mironov A.A., 2002; Polishchuk R.S. and Mironov A.A., 2004) позволили приблизиться к пониманию морфо-функциональных принципов транспорта на данном этапе экзоцитозного пути. Одним из наиболее приемлемых способов движения в этом направлении стал для нас метод моделирования работы КГ на основе экспериментальных данных.

Начало переосмысления основ везикулярной модели, которая за последние десятилетия стала "везикулярной парадигмой", было положено работами, демонстрирующими, что большие агрегаты проколлагена I (PC I) не способны входить в СОР I- везикулы (размеры агрегатов проколлагена I в 5-6 раз превышают размер СОР I-везикулы), и транспортируются через Гольджи стак, не покидая просвет цистерн (Mironov A.A. et al., 2001; Bonfanti L.,et al., 1998). Тем самым подрывались основы везикулярной модели (Orci L. et al., 1986). Логично было бы предположить, что большие агрегаты проколлагена I (PC I) являются исключением из правил, а более мелкие молекулы могут транспортироваться везикулами. Однако, мы показали, что 5060 нм везикулы обеднены и другими карго-протеинами (см. Табл. 3), причем как в интактных клетках (Trucco А. et al., 2004) так и при проведении экспериментов с использованием синхронизационных протоколов ((Mironov A.A. et al., 2001). Анализируя полученные нами результаты экспериментов и данные других исследователей можно прийти к выводу, что пока не найдено ни одного типа карго-протеина, для которого был бы экспериментально доказан транспорт через Гольджи стак в составе везикул, или его концентрация в их просвете. Нами было показано, что не зависимо от размеров и способности к диффузии (недиффундирующие большие агрегаты проколлагена I и дуффундирующие маленькие молекулы VSVG) проходят через Гольджи с одинаковой скоростью и при этом не входят ни в СОР I-везикулы, ни в мегавезикулы (Mironov A.A. et al., 2001). Таким образом, нами была экспериментально доказана несостоятельность везикулярной модели для различных по дуффузионнной мобильности типов карго.

Классический вариант модели созревания и прогрессии цистерн предполагает, что карго, оставаясь в составе цистерн постепенно направленно продвигается по стаку от цис-полюса к трансполюсу. Такая прогрессия карго сопровождается рециклингом ферментов, который осуществляется СОР I-везикулами (Glick B.S. and Malhotra V., 1998; Glick B.S. at al., 1997), а, следовательно, COP I-везикулы должны быть обогащены ферментами Гольджи, во всяком случае, они не должны быть обеднены данными ферментами. Другими словами, концентрация ферментов в СОР I-везикулах хотя бы не должна быть ниже таковой в цистернах (Glick B.S. and Malhotra V.,

1998). В литературе можно найти работы в поддержку данной гипотезы (Martinez-Menarguez, J.A. et al., 2001), показывающие, что определенная популяция окаймленных круглых профилей (авторы расценили их как СОР I-везикулы), содержат фермент Гольджи маннозидазу II "in vivo" в концентрации, близкой к концентрации данного фермента в цистернах. Другая группа исследователей (Lanoix J., et al, 2001) обнаружила в экспериментах, проведенных "in vitró", что после инкубации изолированных Гольджи мембран с цитозолем и GTP, маленькие мембранные фрагменты, формирование которых зависит от работы СОР I покрытия и функции ARF 1 и содержащие в своем составе какую-то часть СОР I везикул, были обогащены ферментами Гольджи (Lanoix J. et al, 2001). Однако принять модель созревания и прогрессии цистерн в данном варианте не представляется возножным по ряду причин. А именно, 1) концентрация фермента маннозидазы II, обнаруженная в везикулах не превышает таковую в цистернах (Martinez-Menarguez J.A. et al., 2001); 2) в нашей работе и ряде работ других лабораторий был продемонстрировано обеднение круглых профилей, находящихся в непосредственной близости к КГ, ферментом маннозидазой II (Orci L.et al., 2000; Cosson P. at al., 2002; Kweon H.S. et al., 2004); 3) нами было показано, что значительная часть круглых профилей в зоне Гольджи, содержащие Гольджи фермент маннозидазу II, представляют собой поперечные срезы тангенциальных тубул или перфорированных зон цистернальных римов; 4) маннозидаза II стала единственным эндогенным ферментом, наличие которого в круглых профилях было показано "ш vivo" и "in vitro" (Martinez-Menarguez J.A. et al., 2001; Lanoix J. et al, 2001). Напротив, в ходе проведенного нами детального анализа экспериментов "ш vivo" и "ш v/íro" по локализации многих ферментов Гольджи было выявление обеднение истинных СОР I- везикул всеми ферментами (Kweon H.S. et al., 2004), что соответствует и данным других исследователей (Orci L.et al., 2000; Cosson P. at al., 2002).

Согласно модели созревания и профессии цистерн СОР I-бады, а следовательно, и СОР I-везикулы, должны формироваться на всех цистернах Гольджи от цис- до транс-стороны для осуществления рециклинга ферментов и поддержания таким образом полярности расположения ферментов. Однако СОР I-бады не были найдены на транс-цистерне (Ladinsky M.S., et al., 1999; Ladinsky M.S., et al., 2002), в то время как ряд ферментов, например, сиалилтрасфераза и фукозилтрансфераза присутствуют в транс-цистерне (Rabouille et al, 1995). Модель созревания и прогрессии цистерн предполагает, что выход карго должен осуществляться только из последней трансцистерны, однако ранее было показано, что карго может покидать Гольджи из трех последних цистрн (Ladinsky M.S. et al., 2002). Аналогичное несоответствие между данной моделью и результатами исследований наблюдается и при описании процесса входа карго в КГ. Теоретически можно представить минимум два сценария этого процесса. Первый из них, новая цис-цистерна формируется из вновь прибывающих мембран, путем из слияния между собой, а второй сценарий подразумевает слияние прибывающих мембран с карго с уже существующими цистернами Гольджи. Наши данные показали, что ЭР-Гольджи переносчики карго могут сливаться сразу с двумя или тремя уже существующими цистернами на цис-полюсе КГ, лишь частично принимая участие в формировании первой цис-цистерны (Тгиссо А. е1 а1., 2004), что противоречит первому сценарию, а, следовательно и самой модели созревания и прогрессии цистерн. Поэтому данная модель не может быть принята, по крайней мере, в ее классическом варианте, и должна быть пересмотрена.

Отсутствие в СОР 1-зависимых везикулах и карго-протеинов и ферментов Гольджи заставило нас задуматься над тем, какие же структурные элементы выполняют важнейшую функцию перемещения карго через стопку цистерн КГ. Одним из наиболее вероятных кандидатов на эту роль, несомненно, являются межцистернальные тубулярные соединения, детальное изучение которых стало доступным благодаря применению такой новой технологии как электронная томография. Другим интересным моментом, обусловившим такой интерес к данным структурам, стала серия наблюдений, указывающих на увеличение количества межцистернальных тубулярных соединений при активном транспорте (Trucco A. et al., 2004; March B.J. at al., 2004). С другой стороны, когда транспорт был ингибирован путем низкотемпературных блоков или воздействием циклогексамида, тубулярные соединения исчезали ((Trucco A. et al., 2004). Таким образом, такая тесная зависимость образования межцистернальных тубулярных соединений от транспорта позволяет предполагать фундаментальную роль данных структурных элементов в процессе прогрессии карго через стак и требует кардинального пересмотра существующих и возможных моделей с учетом этого факта.

В последние годы был предложен ряд моделей, указывающих на возможную роль мембранных соединений между гетерогенными цистернами КГ в перемещении карго через КГ (Mironov А.А., et al., 1997; Griffiths G. et al., 2000; Mironov A.A., et al., 1998). Однако, если для карго, имеющего меленькие размеры и обладающего способностью к диффузии, эти модели могут, представляются весьма близкими к действительности, то для больших, неспособных к диффузии, таких как агрегаты проколлагена I, размеры которых составляют 300 нм, они сталкиваются с непреодолимыми трудностями, т.к. диаметр тубулярных соединений не превышает 5060 нм.

Согласно модели созревания цистерн, основанной на рециклинге ферментов по тубулярным соединениям, на этапе ЭР-Гольджи транспорта переносчики карго по прибытию в зону КГ сливаются с двумя первыми цистернами на цис-полюсе стака. Это приводит к активации механизмов, ответственных за образование межцистернальных тубулярных соединений и образованию таких соединений на всех уровнях Гольджи стака. Часть промежуточного компартмента формирует новую цистерну на цис-полюсе, а другая его часть сливается с уже существующими цистернами. Прогрессия карго (проколлагена I и УБУв) согласно данной модели осуществляется тем же самым способом, который описывает классическая модель созревания цистерн, т.е. сформированные на цис-полюсе созревшие при проходе через стак цистерны отправляются с транс-полюса. Отличие состоит только в способе рециклинга ферментов, который в классической модели созревания цистерн представлен ретроградным транспортом ферментов в составе СОР I- везикул, а согласно данной модели осуществляется по тубулярным соединениям обусловленный раличными физико-химическими условиями внутри разных цистернах КГ. Предполагается, что три основных механизма вносят свой вклад в процесс образования новой цис-цистерны. Первым из их является постоянное прибытие в Гольджи стак мембран из промежуточного компартмента с последующим формированием соединений между новой и старой (существовавшей до прибытия карго) цистернами. Вторым - ретроградное перемещение мембран из дистальной цистерны во вновь формирующуюся цис-цистерну по тубулярных соединениям. Косвенным доказательством существования ретроградных тубул, явились наблюдения, полученные в ходе исследования матриксного белка GM 130 на живых клетках (Marra Р. et al., 2001), продемонстрировавшие рост и движение тубул, покрытых этим белком от ГК. Впоследствии для таких тубул была предположена роль в формировании цис-систерны, происходящем путем захвата с последующим слиянием тубул с промежуточным компартментом. Согласно данной гипотезе матриксные протеины, такие как GM 130, способствуют трансформации тубул в плоскую цистерну (диск). Карго исключается из растущих ретроградных тубул, однако, Гольджи ферменты могут ретроградно двигаться по тубулам через весь стак, от транс-цистерны до цис-цистрены, синхронно с процессом формирования и поглощения цистерн. Третий механизм образования цис-цистерны предстявляет собой сочетание первой и второй моделей.

Осмысление факта, почему механизм движения по межцистернальным тубулярным соединениям не функционирует для таких карго-протеинов как проколаген I и VSVG, представляется на сегодняшний день крайне сложной задачей. И если для агрегатов проколлагена I логично предположить, что они, имея средний размер 300 нм просто не могут пройти в тонкие тубулы, то для маленьких молекул УБУв должна быть другая причина, ограничивающая их движение по тубулам, которая остается неясной. Известно, что УБУв может, находясь в цистерне формировать кластеры (Ога Ь.,е1 а1., 1986), если предположить, что данные кластеры слишком велики и ригидны чтобы войти в просвет тубул, то причина становится понятной. Однако, согласно результатам наших исследований и данным других исследователей (Мнопоу А. а1., 1997; \Veidman РЛ. 1995; ШгесЫзе^ К. е1 а1., 1998) некоторые виды карго (маленькие протеины, демонстрирующие быструю свободную диффузию по КГ и липиды) способны свободно перемешаться по межцистернальным тубулярным соединениям.

До настоящего времени неясным остается механизм поддержания полярности расположения ферментов в стаке. Единственной гипотезой, объясняющей этот феномен может стать гипотеза основанная на наличии в каждой цистерне особых физико-химических условий, оптимальных для определенной группы ферментов и малоприемлемых для других. Такими физико-химическими условиями могут быть толщина липидного бислоя цистернальных мембран и его липидная композиция (наличие холестерола и сфинголипидов), определенная кислотность среды (рН), а так же композиция межцистерналыюго матрикса. По всей видимости, свой вклад в поддержание полярности расположения ферментов в Гольджи стак вносят различные факторы, нельзя ислючить и роль соседних компартментов (ЭР-Гольджи промежуточного компартмента и эндосомальной системы). Известно, что цис-полюс обменивается мембранными элементами с промежуточным компартментом (Pelham H.R. 1991), а транс- полюс -с эндосомальной системой (Mukherjee S. et al.,1998). Эти два соседствующие с КГ компартмента значительно отличаются друг от друга по описанным нами выше физико-химическими характеристикам и не могут не оказывать слияние не изменение баланса среды и мембранного состава, тесно взаимодействующих с ними полюсов Гольджи стака, а этим, следовательно, и может быть обусловлен градиент между данными полюсами (цис - и транс-Гольджи). Особенно, прибытие с транс-стороны толстых мембран может способствовать ретроградной миграции Гольджи ферментов, а опустошенный от ферментов мембранный домен на транс-стороне, содержащий зрелое карго, подготавливается, таким образом, к отправке на плазматическую мембрану. Таким образом, ретроградный поток Гольджи ферментов "автоматически" синхронизируется с антроградным движением карго через Гольджи стак, как и согласно модели созревания цистерн. Другим фактором, который может вносить вклад в организацию полярности ферментов является синтез сфинголипидов, происходящий одновременно с прогрессией транспорта (Holthuis L.S. et al., 2001). Таким образом, открытие механизмов, участвующих в образовании полярности распределения Гольджи ферментов, является необходимым условием принятия модели созревания цистерн, основанной на рециклинге ферментов по тубулярным соединениям. Несмотря на убедительные доказательства существования соединений между различными цистернами КГ, остается открытым вопрос: всегда ли данные соединения присутствуют на всех уровнях Гольджи стака, не смотря на уровень прогрессии карго? Наши наблюдения показали, что агрегаты проколлагена I и молекулыУБУС проходят через стак с одинаковой скоростью (Mironov A.A. et al., 2001), что дает возможность предположить связь только между цистернами, к которым в этот момент присоединен карго-домен.

Мы полагаем, что наиболее вероятной и обоснованной моделью транспорта через КГ, является модель созревания переносчика (Mironov A. at al. 2001; Beznoussenko G. and Mironov A. 2002). Данная модель не противоречит результатам исследований. Более того, эти результаты можно считать убедительным подтверждением эффективности предлагаемой модели. Согласно модели созревания и прогрессии мембранного переносчика после прибытия транспортируемых молекул в промежуточный компартмент и цис-сеть комплекса Гольджи активируется процесс слияния СОР I-везикул с цистернами, что приводит к восстановлению способности цистерн к слиянию и образованию межцистернальных соединений (Миопоу А. гА., 2005). Непрерывность мембран цистерн КГ обеспечивает диффузию липидов и позволяет достигнуть их быстрого перераспределения, что ведет к выравниванию длины цистерн (Тгиссо А. е1 а1., 2004). Мембранный переносчик, транспортирующий секретируемые белки, сливается вначале с медиальми цистернами, а затем с транс-цистернами. Таким образом, перемещение (прогрессия) карго происходит без его диссоциации от цистерн, в крупных, отличных от везикул, мембранных переносчиках, всегда связанных с цистернами КГ тубулярными коммуникациями (Мпопоу А. е1 а1, 2001). Лишь частичное «перемешивание» с ферментами КГ, концентрация которых особенно велика на краях цистерн (К\уеоп Н-Б. е1 а1., 2004), доказывает существование карго-домена, сохраняющего свою идентичность при его переносе через стопку цистерн КГ и доступного для ферментов гликозикирования. Заключительное слияние с транс-сетью, по всей вероятности, имеет важное значение для подготовки переносчика к следующему этапу транспорта: от комплекса Гольджи к плазматической мембране. Однако регуляция пост-Гольджи транспорта заслуживает специального исследования.

Список литературы диссертационного исследования доктор биологических наук Безнусенко, Галина Владимировна, 2007 год

1. Банин В.В. Куда ведет "путь Гольджи"? (к 100-летию открытия комплекса Гольджи) // Морфология 1999. - Том. 115. - №3. - С. 90-7.

2. Миронов А.А., Комиссарчик Я.Ю., Миронов А.А. Мл., Снигиревская Е.С., Луини А. Современные представления о структуре и функции пластинчатого комплекса // К столетию открытия Камилло Гольджи // Цитология 1998. - Том. 40. - №6. - С. 483-496.

3. Снигиревская Е.С., Соколова Ю.Я., Комиссарчик Я.Ю. Структурно-функциональная организация аппарата Гольджи // Цитология- 2006. -Том. 48. -№1. С. 483-496.

4. Acharya U., Jacobs R., Peters J.M., Watson N., Farquhar M.G., Malhotra V. The formation of Golgi stacks from vesiculated Golgi membranes requires two distinct fusion events // Cell 1995. - Vol. 82. -P. 895-904.

5. Achler C., Filmer D., Merte C., Drenckhahn D. Role of microtubules in polarized delivery of apical membrane proteins to the brush border of the intestinal epithelium // J. Cell Biol. 1989. - Vol. 109. - P. 179-189.

6. Alcalde J., Bonay P., Roa A., Vilaro S., Sandoval I. V. Assembly and disassembly of the Golgi complex: two processes arranged in a cis-trans direction // J. Cell Biol. 1992. - Vol. 116. - P. 69-83.

7. Allan D. and K. J. Kallen. Is plasma membrane lipid composition defined in the exocytic or the endocytic pathway? // Trends in Cell Biol. -1994.-№4.-P. 350-353.

8. Allan V.J., and T.E. Kreis. A microtubule-binding protein associated with membranes of the Golgi apparatus // J. Cell Biol. 1986. - Vol. 103. -P. 2229-2239.

9. Aniento F., Gu F., Parton R.G., Gruenberg J. An endosomal beta COP is involved in the pH-dependent formation of transport vesicles destined for late endosomes // J. Cell Biol. 1996. - Vol. 133. - P. 29-41.

10. Antonny B. and R. Schekman. ER export: public transportation by the COPII coats // Curr. Opin. Cell Biol. 2001. - № 4 - P. 438-443.

11. Aridor M., Bannykh S.I., Rowe T., Balch W.E. Sequential coupling between COPII and COPI vesicle coats in endoplasmic reticulum to Golgi transport // J. Cell Biol. 1995. - Vol. 131. - P. 875-93.

12. Aridor M., Bannykh S I., Rowe T., Balch W.E. Cargo can modulate COPII vesicle formation from the endoplasmic reticulum // J. Biol Chem. -1999. Vol. 274. - P.4389-4399.

13. Aridor M., Fish K.N., Bannykh S., Weissman J., Roberts T.H., Lippincott-Schwartz J., Balch W.E. The Sari GTPase coordinates biosynthetic cargo selection with endoplasmic reticulum export site assembly // J. Cell Biol. 2001. - Vol. 152. P. - 213-229.

14. Aridor M., Weissman J., Bannykh S., Nuoffer C., Balch W. E. Cargo selection by the COPII budding machinery during export from the ER // J. Cell Biol. 1998. - Vol. 141. - P. 61-70.

15. Ayala J. Transport and internal organization of membranes: vesicles, membrane networks and GTP-binding proteins // J. Cell Sci. 1994. Vol. 107.-P. 753-763.

16. Balch W.E., Dunphy W.G., Braell W.A., Rothman J.E. Reconstitution of the transport of protein between successive compartments of the Golgi measured by the coupled incorporation of N-acetylglucosamine // Cell 1984.-Vol. 39. P.-405-416.

17. Balch W.E., Glick B.S., Rothman, J.E. Sequential intermediates in the pathway of intercompartmental transport in a cell-free system //Cell 1984. -Vol. 39.-P. 525-536.

18. Balch W.E., Michael McCaffery J., Plutner H., Farquhar M.G. Vesicular Stomatitis Virus Glycoprotein is sorted and concentrated during export from the endoplasmic rericulum // Cell 1994. - Vol. 76. - P. 841852.

19. Band A.M., Maatta J., Kaariainen L., Kuismanen, E. Inhibition of the membrane fusion machinery prevents exit from the TGN and proteolytic processing by furin // FEBS Lett. 2001. - Vol. 505. - P. 118 -124.

20. Bannykh S.I., and W.E. Balch. Membrane dynamics at the endoplasmic reticulum-Golgi interface // J. Cell Biol. 1997. - Vol. 138: -P. 1-4.

21. Barnard R.J., Morgan A., Burgoyne R.D. Domains of alpha-SNAP required for the stimulation of exocytosis and for N-ethylmalemidesensitive fusion protein (NSF) binding and activation // Mol. Biol. Cell. 1996. - № 7.-P. 693-701.

22. Bannykh S.I., Nishimura N., Balch W.E. Getting into the Golgi // Trends in Cell Biol. 1998. - № 8. - P. 21-25.

23. Barr F.A. Inheritance of the endoplasmic reticulum and Golgi apparatus // Curr. Opin. Cell Biol. 2002. - № 14. - P.496-499.

24. Barr F.A., Nakamura N., Warren G. Mapping the interaction between GRASP65 and GM130, components of a protein complex involved in the stacking of Golgi cisternae // EMBO J. 1998. - Vol. 17. - P. 3258-3268.

25. Barr F.A., Puype M., Vandekerckhove J., Warren G. GRASP65, a protein involved in the stacking of Golgi cisternae // Cell 1997. - Vol. 91. - P. 253-262.

26. Barr F.A. and B. Short. Golgins in the structure and dynamics of the Golgi apparatus // Curr. Opin. Cell. Biol. 2003. - Vol. 15. - P. 405-413.

27. Becker B., Bolinger B., Melkonian M. Anterograde transport of algal scales through the Golgi complex is not mediated by vesicles // Trends Cell Biol. 1995. -№ 5. - P. 305-307.

28. Beckers C.J., Keller D.S., Balch W.E. Semi-intact cells permeable to macromolecules: use in reconstitution of protein transport from the endoplasmic reticulum to the Golgi complex // Cell 1987. - Vol. 50. - P. 523-534.

29. Bednarek S.Y., Ravazzola M., Hosobuchi M., Amherdt M., Perrelet A., Schekman R., Orci L. COPI- and COPII-coated vesicles bud directly from the endoplasmic reticulum in yeast // Cell. 1995. - Vol. 83. - P. 1183-1196.

30. Bergmann J.E. Using temperature-sensitive mutants of VSV to study membrane protein biogenesis // Methods Cell Biol., 1989. - Vol. 32. - P. 85-110.

31. Beznoussenko G.V. and A.A. Mironov. Models of intracellular transport and evolution of the Golgi complex // Anat. Rec. 2002. - Vol. 268. - P. - 226-238.

32. Breitfeld P.P., McKinnon W.C., Mostov K.E. Effect of nocodazole on vesicular traffic to the apical and basolateral surfaces of polarized MDCK cells // J. Cell Biol. 1990. - Vol. 111. - P. 2365-2373.

33. Bretscher M.S. and S. Munro. Cholesterol and the Golgi apparatus // Science 1993. - Vol. 261. - P. 280-281.

34. Brown W.J. and Farquhar M.G. Immunoperoxidase methods for the localization of antigens in cultured cells and tissue sections by electron microscopy// Methods Cell Biol. 1989. - Vol. 31. - P. 553-569.

35. Brown Jr., R. M. Movement of the protoplast and function of the Golgi apparatus in the algae // Publ. Wiss. Film Sekt. Biol. 1971. - № 7. -P.361.

36. Bruckner P. and E.F. Eikenberry. Procollagen is more stable in cellulo than in vitro // Eur. J. Biochem. 1984. - Vol. 140. - P. 397-399.

37. Cabrera-Poch N., Pepperkok R., Shima D.T. Inheritance of the mammalian Golgi apparatus during the cell cycle // Biochim. Biophys Acta. 1998 - Vol. 1404. - P.139-151.

38. Chavrier P. and B. Goud. The role of ARF and Rab GTPases in membrane transport // Curr. Opin. Cell Biol. 1999. - Vol. 11. - P. 466475.

39. Cho M. I. and P.R. Garant. An electron microscopic radioautographic study of collagen secretion in periodontal ligamant fibroblast of the mouse: I Normal fibroblast // Anat. Rec. 1981. - Vol. 201. - P. 577-586.

40. Chen C., Ma J., Lazic A., Backovic M., Colley K.J. Formation of insoluble oligomers correlates with ST6Gal I stable localization in the Golgi // J. Biol. Chem. 2000. - Vol. 275. - P. 13819-13826.

41. Claude A. Growth and differentiation of cytoplasmic membranes in the course of lipoprotein granule synthesis in the hepatic cell. I. Elaboration of elements of the Golgi complex // J. Cell Biol. 1970. - Vol. 47. - P. 74566.

42. Clermont Y., Rambourg A., Hermo L. Segregation of secretory material in all elements of the Golgi apparatus in principal epithelial cells of the rat seminal vesicle // Anat. Rec. 1992. - Vol. 232. - P. 349-358.

43. Clermont Y., Rambourg A., Hermo L. Connections between the various elements of the cis- and mid-compartments of the Golgi apparatus of early rat spermatids // Anat. Rec. 1994. - Vol. 240. - P. 469-480.

44. Clermont Y., Rambourg A., Hermo L. Trans-Golgi network (TGN) of different cell types: three-dimensional structural characteristics and variability // Anat. Rec. 1995. - Vol. 242. - P. 289-301.

45. Cluett E.B. and W.J. Brown. Adhesion of Golgi cisternae by proteinaceous interactions: intercisternal bridges as putative adhesive structures //J. Cell Sci. 1992. - Vol. 103. - P. 773-784.

46. Cluett E.B., Kuismanen E., Machamer C.E. Heterogeneous distribution of the unusual phospholipid semilysobisphosphatidic acid through the Golgi complex // Mol. Biol. Cell. 1997. - Vol. 8. - P. 2233-2240.

47. Cluett E.B. and C.E. Machamer. The envelope of vaccinia virus reveals an unusual phospholipid in Golgi complex membranes // J. Cell Sci. 1996. -Vol. 109.-P. 2121-2131.

48. Cluett E.B., Wood S.A., Banta M., Brown W.J. Tubulation of Golgi membranes in vivo and in vitro in the absence of brefeldin A // J. Cell Biol. 1993.-Vol. 120.-P. 15-24.

49. Cole N.B., Ellenberg J., Song J., DiEuliis D., Lippincott-Schwartz J. Retrograde transport of Golgi-localized proteins to the ER // J. Cell Biol. -1998.-Vol. 140.-P. 1-15.

50. Cole N.B., Sciaky N., Marotta A., Song J., Lippincott-Schwartz J. Golgi dispersal during microtubule disruption: regeneration of Golgi stacks at peripheral endoplasmic reticulum exit sites // Mol. Biol. Cell. 1996b. -Vol. 7.-P. 631-650.

51. Cole N.B., Smith C.L., Sciaky N., Terasaki M., Edidin M, Lippincott-Schwartz J. Diffusional mobility of Golgi proteins in membranes of living cells // Science. 1996a. - Vol. 273. - P. 797-801.

52. Colley K.J. Golgi localization of glycosyltransferases: more questions than answers // Glycobiology. 1997. Vol. 7. - P. 1-13.

53. Connolly C.N., Futter C.E., Gibson A., Hopkins C.R., Cutler D.F. Transport into and out of the Golgi complex studied by transfecting cells with cDNAs encoding horseradish peroxidase // J.Cell Biol. 1994. - Vol. 127.-P.641-652.

54. Cosson P., Letourneur F. Coatomer interaction with di-lysine endoplasmic reticulum retention motifs // Science 1994. - Vol. 263. - P. 1629-1631.

55. Cosson P., Amherdt M., Rothman J.E., Orci L. A resident Golgi protein is excluded from peri-Golgi vesicles in NRK cells // Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 2002. - Vol. 99. - P. 12831-12834.

56. Dahan S., Ahluwalia J.P., Wong L., Posner B.I., Bergeron J.J. Concentration of intracellular hepatic apolipoprotein E in Golgi apparatussaccular distensions and endosomes // J. Cell Biol. 1994. - Vol. 127. - P. 1859-1869.

57. Davidson H.W. and W.E. Balch. Differential inhibition of multiple vesicular transport steps between the endoplasmic reticulum and trans Golgi network // J. Biol Chem. 1993. - Vol. 268. - P. 4216-4226.

58. Dal ton A.J. and D. Felix. Cytologic and cytochemical characteristics of the Golgi substance of epithelial cells of the epididymis in situ, in homogenates and after isolation // Am. J. Anat. 1954. - Vol. 94. - P. 171207.

59. Di Lazzaro C., Campadelli-Fiume G., Torrisi M.R. Intermediate forms of glycoconjugates are present in the envelope of herpes simplex virions during their transport along the exocytic pathway//Virology. 1995. - Vol. 214.-P. 619-623.

60. Donaldson J.G., Cassel D., Kahn R.A., Klausner R.D. ADP-ribosylation factor, a small GTP-binding protein, is required for binding ofthe coatomer protein beta-COP to Golgi membranes // Proc. Natl. Acad. Sei. USA.- 1992. Vol. 89. P. 6408-6412.

61. Donaldson J.G., Finazzi D., Klausner R.D. Brefeldin A inhibits Golgi membrane-catalysed exchange of guanine nucleotide onto ARF protein // Nature 1992. - Vol. 360. - P. 350-352.

62. Donaldson J.G., Kahn R.A., Lippincott-Schwartz J., Klausner R.D. Binding of ARF and beta-COP to Golgi membranes: possible regulation by a trimeric G protein // Science 1991. - Vol. 254. - P. 1197-1199.

63. Donaldson J.G. and R. D. Klausner. ARF: a key regulatory switch in membrane traffic and organelle structure // Curr. Opin. Cell Biol. 1994. -Vol. 6. - P. 527-532.

64. Donaldson J.G., Lippincott-Schwartz J., Bloom G.S., Kreis T.E., Klausner R.D. Dissociation of a 110-kD peripheral membrane protein from the Golgi apparatus is an early event in brefeldin A action. // J. Cell Biol. 1990.-Vol. 111.-P. 2295-2306.

65. D'Souza-Schorey C., Li G., Colombo M.I., Stahl P.D. A regulatory role for ARF6 in receptor-mediated endocytosis // Science 1995. - Vol. 267.-P. 1175-1178.

66. Duden R., Griffiths G., Frank R., Argos P., Kreis T.E. Beta-COP, a 110 kd protein associated with non-clathrin-coated vesicles and the Golgi complex, shows homology to beta-adaptin // Cell 1991 - Vol. 64. - P. 649-665.

67. Dylewski D.P., Haralick R.M, Keenan T.W. Three-dimensional ultrastructure of the Golgi apparatus in bovine mammary epithelial cells during lactation // J. Ultrastruct. Res. 1984. - Vol. 87 - P. 75-85.

68. Eilers U., Klumperman J., Hauri H.P. Nocodazole, a microtubule-active drug, interferes with apical protein delivery in cultured intestinal epithelial cells (Caco-2) // J. Cell Biol. 1989. - Vol. 108. - P. 13-22.

69. Eisner M., Hashimoto H., Nilsson T. Cisternal maturation and esicle transport: join the band wagon! // Mol. Membr. Biol. 2003. - Vol. 20. - P. 221-229.

70. Erk I., Nicolas G., Caroff A., Lepault J. Electron microscopy of frozen biological objects: a study using cryosectioning and cryosubstitution // J. Microsc. 1998. - Vol. 189. - P. 236-248.

71. Farquhar M.G., Palade G.E. The Golgi apparatus (complex)-(1954-1981)-from artifact to center stage // J. Cell Biol. 1981. - Vol. 91. - P. 77103.

72. Farquhar M.G. and H-P Hauri. Protein sorting and vesicular traffic in the Golgi apparatus. // In: The Golgi apparatus. Birkhauser Verlag, Basel 1997-P. 63-129.

73. Featherstone C., Griffiths G., Warren G. Newly synthesized G protein of vesicular stomatitis virus is not transported to the Golgi complex in mitotic cells // J Cell Biol. 1985. - Vol. 101. - P. 2036-2046.

74. Fujiwara T., Oda K., Yokota S., Takatsuki A., Ikehara Y. Brefeldin A causes disassembly of the Golgi complex and accumulation of secretory proteins in the endoplasmic reticulum // J. Biol. Chem. 1988. Vol. 263. -P. 18545-18552.

75. Gaynor, E.C. and S.D. Emr. COPI-independent anterograde transport: cargo-selective ER to Golgi protein transport in yeast COPI mutants // J. Cell Biol. 1997. - Vol. 136. - P. 789-802.

76. Gaynor E.C., te Heesen S., Graham T.R., Aebi M., Emr S.D. Signalmediated retrieval of a membrane protein from the Golgi to the ER in yeast // J. Cell Biol. 1994. - Vol. 127. - P. 653-665.

77. Gillingham A. K., Munro S. Long coiled-coil proteins and membrane traffic // Biochim. Biophys. Acta. 2003 - Vol. 1641. - P. 71-85.

78. Gleeson PA. Targeting of proteins to the Golgi apparatus // Histochem. Cell Biol. 1998. - Vol. 109. - P. 517-32.

79. Glick B.S., Elston T., Oster G. A cisternal maturation mechanism can explain the asymmetry of the Golgi stack // FEBS Lett. G. Vol. 414. - P. 177-181.

80. Glick B.S. and V. Malhotra. The curious status of the Golgi apparatus // Cell 1998. - Vol. 95. - P. 883-889.

81. Godi A. ADP ribosylation factor regulates spectrin binding to the Golgi complex // Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1998. - Vol. 95. - P. 86078612.

82. Golgi C. Intorno alia struttura delle cellule nervose. XXV. Sulla struttura delle cellule nervose dei gangli spinali // Bollettino Societa Medico-Chirurgica di Pavia. 1898. - Vol. 1. - P. 655-665.

83. Gomez M., Scales S.J., Kreis T.E., Perez F. Membrane recruitment of coatomer and binding to dilysine signals are separate events // J.Biol.Chem. 2000. - Vol. 275. - P. 29162-29169.

84. Goud B., Zahraoui A., Tavitian A., Saraste J. Small GTP-binding protein associated with Golgi cisternae // Nature 1990. - Vol. 345. - P. 553-556.

85. Graham T.R., Scott P.A., Emr S.D. Brefeldin A reversibly blocks early but not late protein transport steps in the yeast secretory pathway. // EMBO J. 1993. - Vol. 12. - P. 869-877.

86. Grassè P.P. Ultrastructure, polarité et reproducion de l'appareil de Golgi // Comptes Rendus de l'Accadémie des Sciences Vol. 245. - P. 1278-1281.

87. Griffiths G. Gut thoughts on the Golgi complex // Traffic 2000. -Vol. l.-P. 738-745.

88. Griffiths G., Doms R.W., Mayhey T., Lucocq J. The bulk flow hypothesis: not quite the end. Trends in Cell Biology. 1995. - Vol. 5. - P. 9-13.

89. Griffiths G., Pepperkok R., Locker J.K., Kreis T.E. Immuno-cytochemical localisation of beta-COP to the ER-Golgi boundary and the TGN // J. Cell Sci. 1995a. - Vol. 108. - P. 1839-2856.

90. Griffiths G. and K. Simons. The trans Golgi network: sorting at the exit site of the Golgi complex // Science. 1986. - Vol. 234. - P. 438-443.

91. Guo Q., Vasile E., Krieger M. Disruptions in Golgi structure and membrane traffic in a conditional lethal mammalian cell mutant are corrected by epsilon-COP // J. Cell Biol. 1994. - Vol. 125. - P. 12131224.

92. Happe S., Cairns M., Roth R., Heuser J., Weidman P.J. Coatomer vesicles are not required for inhibition of Golgi transport by G-protein activators // Traffic. 2000. - Vol. 1. - P. 342-353.

93. Hauri H.P., Schweizer A. The endoplasmic reticulum-Golgi intermediate compartment // Curr. Opin. Cell Biol. 1992. - Vol. 4. - P. 600608.

94. Hauri H.P., Kappeler F., Andersson H., Appenzeller C. ERGIC-53 and traffic in the secretory pathway // J. Cell Sci. 2000. - Vol. 113. - P. 587596.

95. Heuser J.E., Reese T.S., Dennis M.J., Jan Y., Jan L., L. Evans. Synaptic vesicle exocytosis captured by quick freezing and correlated with quantal transmitter release // J.Cell. Biol. 1979. - Vol. 81: - P. 275-300.

96. Hay J.C., Klumperman J., Oorschot V., Steegmaier M., Kuo C.S., Scheller R.H. Localization, dynamics, and protein interactions reveal distinct roles for ER and Golgi SNAREs // J. Cell Biol. 1998. - Vol. 141. -P. 1489-1502.

97. Helms J.B. and J. E. Rothman. Inhibition by brefeldin A of a Golgi membrane enzyme that catalyses exchange of guanine nucleotide bound to ARF // Nature. 1992. - Vol. 360. - P. 352-354.

98. Hermo L. and C.E. Smith. The structure of the Golgi apparatus: a sperm's eye view in principal epithelial cells of the rat epididymis // Histochem. Cell Biol. 1998. - Vol. 109. - P. 431-447.

99. Ho W.C., Allan V.J., van Meer G., Berger E.G., Kreis T.E. Reclustering of scattered Golgi elements occurs along microtubules // Eur. J. Cell Biol. 1989. - Vol. 48. - P. 250-263.

100. Hohl T.M., Parlati F., Wimmer C., Rothman J.E., Sollner T.H., Engelhardt H. Arrangement of subunits in 20 S particles consisting of NSF, SNAPs, and SNARE complexes // Mol. Cell. 1998. - Vol. 2. - P.539-548.

101. Holthuis J.C., Pomorski T., Raggers R.J., Sprong H., Van Meer G. The organizing potential of sphingolipids in intracellular membrane transport // Physiol. Rev. 2001. - Vol. 81. - P. 1689-1723.

102. Hong W. Protein transport from the endoplasmic reticulum to the Golgi apparatus // J.Cell Sci. Vol. 111. - P. 2831- 2839.

103. Hong W. SNAREs and traffic // Biochim. Biophys. Acta. 2005. -Vol. 1744, -P.493-517.

104. Hopkins C.R., Gibson A. Shipman M. Miller K. Movement of internalized ligand-receptor complex along a continuous endosomal reticulum // Nature 1990. - Vol. 346. - P. 335-339.

105. Horton A.C. and M.D. Ehlers. Dual modes of endoplasmic reticulum-to-Golgi transport in dendrites revealed by live-cell imaging // J. Neurosci. 2003. - Vol. 23 - P. 6188-6199.

106. Ioannou Y.A., Bishop D.F., Desnick R.J. Overexpression of human alpha-galactosidase A results in its intercellular aggregation, crystallization in lyzosomes, and selective secretion // J. Cell Biol. 1992. - Vol. 119. - P. 1137-1150.

107. Inoue T. and H. Osatake. A new drying method of biological specimens for scanning electron microscopy: the t-butyl alcohol freeze-drying method // Arch. Histol. Cytol. 1988. - Vol. 51. - P. 53-59.

108. Inoue T. Complementary scanning electron microscopy: technical notes and applications // Arch. Histol. Cytol. 1992. - Vol. 55. - P. 45-51.

109. Jamieson J.D. and G.E. Palade. Role of the Golgi complex in the intracellular transport of secretory proteins // Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 1966. - Vol. 55. - P. 424-431.

110. Jamora C., Takizawa P.A., Zaarour R.F., Denesvre C., Faulkner D.J., Malhotra V. Regulation of Golgi structure through heterotrimeric G proteins // Cell. 1997. - Vol. 91. - P. 617-626.

111. Jamora C., Yamanouye N., Van Lint J., Laudenslager J., Vandenheede J.R., Faulkner D.J., Malhotra V. Gbetagamma-mediated regulation of Golgi organization is through the direct activation of protein kinase D // Cell. 1999. - Vol. 98. - P. 59-68.

112. Jeckel D., Karrenbauer A., Birk R., Schmidt R.R, Wieland F. Sphingomyelin is synthesized in the cis Golgi // FEBS Lett. 1990. - Vol. 261.-P. 155-157.

113. Jokitalo E., Cabrera-Poch N., Warren G., Shima D.T. Golgi clusters and vesicles mediate mitotic inheritance independently of the endoplasmic reticulum // J. Cell Biol. 2001. - Vol. 154. - P. 317-330.

114. Keller P., Simons K. Post- Golgi biosynthetic trafficking // J. Cell. Sci. 1997. - Vol. 110. - P. 3001-3009.

115. Keller P., Toomre D., Diaz E., White J., Simons K. Multicolour imaging of post-Golgi sorting and trafficking in live cells // Nat. Cell Biol. -2001.-Vol.3.-P. 140-149.

116. Klausner R.D., Donaldson J.G., Lippincott-Schwartz J. Brefeldin A: insights into the control of membrane traffic and organelle structure // J. Cell Biol.- 1992.-Vol. 116.-P. 1071-1080.

117. Klumperman J., Schweizer A., Clausen H., Tang B.L., Hong W., Oorsschot V., Hauri H.P. The recycling pathway of protein ERGIC-53 and dynamics of the ER-Golgi intermediate compartmant // J.Cell. Sci. 1998. -Vol. 111.-P. 3411-3425.

118. Klumperman J. Transport between ER and Golgi // Curr Opin. Cell. Biol.-Vol. 12.-P. 445-449.

119. Knowles B.B., Howe C.C., Aden D.P. Human hepatocellular carcinoma cell lines secrete the major plasma proteins and hepatitis B surface antigen // Science. Vol. 209. - P. 497-499.

120. Kornfeld R. and S. Kornfeld. Assembly of asparagine-linked oligosaccharides // Annu. Rev. Biochem. 1985. - Vol. 54. - P. 631-664.

121. Koster A.J, Grimm R., Typke D., Hegerl R., Stoschek A., Walz J., Baumeister W. Perspectives of molecular and cellular electron tomography // J Struct Biol. 1997. - Vol. 120. - P. 276-308.

122. Kreis T.E. and R. Pepperkok. Coat proteins in intracellular membrane transport // Curr. Opin. Cell Biol. 1994. - Vol. 6. - P. 533-537.

123. Kremer J.R., D.N. Mastronarde, Mcintosh J.R. Computer visualization of tree-dimensional image data using IMOD. // Jstruct. Biol. -1996.-Vol. 116.-P. 71-76.

124. Kuehn, M.J., Herrmann J.M., Schekman R. COPII-cargo interactions direct protein sorting into ER-derived transport vesicles // Nature 1998. -Vol. 391.-P. 187-190.

125. Kuismanen E. and J. Saraste. Low temperature-induced transport blocks as tools to manipulate membrane traffic // Methods Cell Biol. -1989.-Vol. 32.-P. 257-274.

126. Ladinsky M.S., Kremer J.R, Furcinitti P.S. Mcintosh J.R. Howell K.E. 1994. HVEM tomography of the trans-Golgi network: structural insights and identification of a lace-like vesicle coat // J. Cell.Biol. 1994 -Vol. 127. - P.29-38.

127. Ladinsky M.S., Mastronard D.N., Mcintosh J. R., Howell K.E., Staehelin L.A. Golgi structure in three dimensions: functional insights from the normal rat kidney cell // J. Cell Biol. 1999. - Vol. 144. - P. 11351149.

128. Ladinsky M.S., Wu C.C., Mcintosh S., Mcintosh J.R., Howell K.E. Structure of the Golgi and distribution of reporter molecules at 20°C reveals the complexity of the exit compartments // Mol. Biol. Cell. 2002. - Vol. 13.-P. 2810-2825.

129. Lanoix J., Ouwendijk J., Lin C.C., Stark A., Love H.D., J. Ostermann, Nilsson T. GTP hydrolysis by arf-1 mediates sorting and concentration of Golgi resident enzymes into functional COP I vesicles // EMBO J. 1999. - Vol. 18. - P. 4935-4948.

130. Lanoix J., Ouwendijk J., Stark A., Szafer E., Cassel D., Dejgaard K., Weiss M., Nilsson T. Sorting of Golgi resident proteins into different subpopulations of COPI vesicles: a role for ArfGAPl // J. Cell Biol. 2001. -Vol. 155.-P. 1199-1212.

131. Leblond C.P. Synthesis and secretion of collagen by cells of connective tissue, bone, and dentin // Anat. Rec. 1989. - Vol. 224. - P. 123-138.

132. Lewis MJ. and H.R. Pelham. Ligand-induced redistribution of a human KDEL receptor from the Golgi complex to the endoplasmic reticulum // Cell. 1992. - Vol. 68. - P. 353-364.

133. Lewis M.J. and H.R. Pelham. SNARE-mediated retrograde traffic from the Golgi complex to the endoplasmic reticulum. // Cell 1996. - P. 85.-P. 205-215.

134. Liljedahl M., Maeda Y.,Colanzi A., Ayala I., Van Lint J., Malhotra V. Protein kinase D regulates the fission of cell surface destined transport carriers from the trans-Golgi network // Cell -2001. Vol. 104. - P. 409420.

135. Lindsey J.D. and M. H. Ellisman. The neuronal endomembrane system. II. The multiple forms of the Golgi apparatus cis element // J. Neurosci. 1985. - Vol. 5. - P. 3124-3134.

136. Linstedt A.D. and H.P. Hauri. Giantin, a novel conserved Golgi membrane protein containing a cytoplasmic domain of at least 350 kDa // Mol. Biol. Cell. 1993. - Vol. 4. - P. 679-693.

137. Lippincott-Schwartz J. Cytoskeletal proteins and Golgi dynamics // Curr. Opin. Cell Biol. 1998. - Vol. 10. - P. 52-59.

138. Lippincott-Schwartz J., Roberts T.N., Hirschberg K. Secretory protein trafficking and organelle dynamics in living cell // Annu. Rev. Cell. Dev.Biol 2000. - Vol. 16. - P.557-589.

139. Lippincott-Schwartz J., Yuan L.C., Bonifacino J.S., Klausner R.D. Rapid redistribution of Golgi proteins into the ER in cells treated with brefeldin A: evidence for membrane cycling from Golgi to ER. // Cell. -1989.-Vol. 56.-P. 801-813.

140. Lodish H.F., Kong N., Snider M., Strous G.J. Hepatoma secretory proteins migrate from rough endoplasmic reticulum to Golgi at characteristic rates // Nature. 1983. - Vol. 304. - P. 80-83.

141. Lotti L.V., Torrisi M.R., Pascale M.C., Monatti S. Immunocytochemical analysis of the transfer of vesicular stomatitis virus G glycoprotein from the intermediate compartment to the Golgi complex // J. Cell. Biol. 1992. - Vol. 118. - P. 43-50.

142. Love H.D., Lin C.C., Short C.S., Ostermann J. Isolation of functional Golgi-derived vesicles with a possible role in retrograde transport // J. Cell Biol. 1998. - Vol. 140. - P. 541-551.

143. Lowe M. and T.E. Kreis. Regulation of membrane traffic in animal cells by COPI // Biochim. Biophys. Acta. 1998. - Vol. 1404. - P. 53-66.

144. Lu L., Horstmann H., Ng C., Ng C., Hong W. Regulation of Golgi structure and function by ARF-like protein 1 (Aril) // J.Cell Sci. 2001 -Vol. 114.-P. 4543-4555.

145. Lucocq J. Unbiased 3-D quantitation of ultrastructure in cell biology // Trends Cell Biol. 1993. - Vol. 3. - P. 354-358.

146. Machamer C.E. Golgi retention signals: do membranes hold the key? // Trends in Cell Biol. 1991. - Vol. 1. - P. 141-144.

147. Machamer C.E. Targeting and retention of Golgi membrane proteins // Curr. Opin. Cell Biol. 1993. - Vol. 5. - P. 606-612.

148. Malhotra V., Orci L., Glick B.S., Block M.R., Rothman J.E. Role of an N-ethylmaleimide-sensitive transport component in promoting fusion of transport vesicles with cisternae of the Golgi stack // Cell 1988. - Vol. 54. P. 221-227.

149. Malhotra V., Serafini T., Orci L., Shepherd J.C., Rothman J.E. Purification of a novel class of coated vesicles mediating biosynthetic protein transport through the Golgi stack // Cell 1989. - Vol. 58. - P. 329-336.

150. Marsh B.J., Volkmann N., Mcintosh J.R., Howell K.E. Direct continuities between cisternae at different levels of the Golgi complex in glucose-stimulated mouse islet beta cells // Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. // 2004. Vol. 1012. - P. 5565-5570.

151. Martinez O., Antony C., Pehau-Arnaudet G., Berger E.G., Salamero J., Goud B. GTP-bound forms of rab6 induce the redistribution of Golgi proteins into the endoplasmic reticulum // Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. -1997.-Vol. 94.-P. 1828-1833.

152. Martinez O., Schmidt A., Salamero J., Hoflack B., Roa M., Goud B. The small GTP-binding protein rab6 functions in intra-Golgi transport // Cell Biol. 1994. - Vol. 127. - 1575-1588.

153. Martinez-Menarguez J.A., Geuze H.J, Slot J.W., Klumperman J. Vesicular tubular clusters between the ER and Golgi mediate concentration of soluble secretory proteins by exclusion from COPI-coated vesicles // Cell.-Vol. 98.-P. 81-90.

154. Maxfield F.R. and D. Wustner. Intracellular cholesterol transport // J. Clin Invest. Vol. 110. - P. 891-898.

155. McFadden G. I. and M. Melkonian. Golgi apparatus activity and membrane flow during scale biogenesis in the green flagellate Scherfellia dubia (Prasinophyceae) //1. Flaggellar regeneration. Protoplasma. 1986. -Vol. 130.-P. 186-198.

156. McNew J.A., Parlati F., Fukuda R., Johnston R.J., Paz K., Paumet F., Sollner T.H., Rothman J.E. Compartmental specificity of cellular membrane fusion encoded in SNARE proteins // Nature. 2000. - Vol. 407.-P. 153-159.

157. Melan^on P., Glick B.S., Malhotra V., Weidman P.J., Serafini T., Gleason M. L., Orci L., Rothman J.E. Involvement of GTP-binding "G" proteins in transport through the Golgi stack // Cell. 1987. - Vol. 51. - P. 1053-1062.

158. Melkonian M., Becker B., Becker D. Scale formation in algae // J. Electron Microsc. Tech. 1991. - Vol. 17. - P. 165-178.

159. Mellman I., Simons K. The Golgi complex: in vitro Veritas? // Cell. -1992. Vol. 66. - P. 829-840.

160. Mellman I., Warren G. The road taken: past and future foundation of membrane traffic // Cell. 2000. - Vol. 100. - P. 99-112.

161. Mironov A.A., Beznoussenko G.V., Polishchuk R.S., Trucco A. Intra-Golgi transport. A way to a new paradigm? // BBA-Molecular Cell Research 2005. - Vol. 1744. - P. 340350.

162. Mironov A.A., Weidman P., Luini A. Variations on the intracellular transport theme: maturing cisternae and trafficking tubules // J. Cell Biol. --Vol. 138.-P. 481-484.

163. Mironov Jr. A., Luini A., Mironov A.A. A synthetic model of intra-Golgi traffic // FASEB J. 1998. - Vol. 12. - P. 249-252.

164. Misteli T, Warren G. COP-coated vesicles are involved in the mitotic fragmentation of Golgi stacks in a cell-free system // J. Cell Biol. 1994. -Vol. 125.-P. 269-282.

165. Misteli T., Warren G. Mitotic disassembly of the Golgi apparatus in vivo // J. Cell Sci. 1995. - Vol. 108. - P. 2715-2727.

166. Misteli T., Warren G. A role for tubular networks and a COP I-independent pathway in the mitotic fragmentation of Golgi stacks in a cellfree system // J. Cell Biol. 1995. - Vol. 130. - P. 1027-1039.

167. Mollenhauer H.H., Morre D.J. The tubular network of the Golgi apparatus // Histochem. Cell Biol. 1998. - Vol. 109. -P. 533-543.

168. Monck J.R., Alvarez de Toledo G., Fernandez J.M. Tension in secretory granule membranes causes extensive membrane transfer through the exocytotic fusion pore // Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 1990. - Vol. 87. - P. 7804-7808.

169. Morin-Ganet M.N., Rambourg A., Deitz S.B, Franzusoff A., Kepes F. Morphogenesis and dynamics of yeast Golgi apparatus //Traffic 2000. -Vol. l.-P. 56-68.

170. Morre D.J., Keenan T.W. Golgi apparatus buds vesicles or coated ends of tubules? // Protoplasma - 1994. - Vol. 179. - P. 1-4.

171. Mukherjee S., Zha X., Tabas I., Maxfield F.R. Cholesterol distribution in living cells: fluorescence imaging using dehydroergosterol as a fluorescent cholesterol analog // Biophys.J. 1998. - Vol. 75. - P.1915-1925.

172. Munro S. Localization of proteins to the Golgi apparatus // Trends in Cell Biol. 1998. - Vol. 8. -P. 11-15.

173. Munro S. An investigation of the role of transmembrane domains in Golgi protein retention // EMBO J. 1995. - Vol. 14. - P. 4695-4704.

174. Nakamura N. Rabouille C., Watson R., Nilsson T., Hui N., Slusarewicz P., Kreis T.E., Warren G. Characterization of a cis-Golgi matrix protein, GM130 // J. Cell Biol. 1995. - Vol. 131. - P. 1715-1726.

175. Nakamura N., Lowe M., Levine T.P., Rabouille C., Warren G. The vesicle docking protein pi 15 binds GM130, a cis-Golgi matrix protein, in a mitotically regulated manner // Cell. 1997. - Vol. 89. - P. 445-455.

176. Neumann U., Brandizzi F., Hawes C. Protein transport in plant cells: in and out of the Golgi // Ann. Bot. 2003. - Vol. 92. - P. 167-180.

177. Nilsson T., Slusarewicz P., Hoe M.H., Warren G. Kin recognition. A model for the retention of Golgi enzymes // FEBS Lett. 1993. Vol. 330. -P. 1-4.

178. Nilsson T., Hoe M.H., Slusarewicz P., Rabouille C., Watson R., Hunte F., Watzele G., Berger E.G., Warren G. Kin recognition between medial Golgi enzymes in HeLa cells // EMBO J. 1994. - Vol. 13. - P. 562-574.

179. Novikoff P.M., Novikoff A.B., Quintana N. Hauw J.J. Golgi apparatus, GERL, and lysosomes of neurons in rat dorsal root ganglia, studied by thick section and thin section cytochemistry // J. Cell Biol. -1971.-Vol. 50.-P. 859-886.

180. Ojakian G.K., and R. Schwimmer. Antimicrotubule drugs inhibit the polarized insertion of an intracellular glycoprotein pool into the apical membrane of Madin-Darby canine kidney (MDCK) cells // J. Cell Sci. -1992. Vol. 103. - P. 677-687.

181. Opat A. S., Houghton F., Gleeson P.A. Medial Golgi but not late Golgi glycosyltransferases exist as high molecular weight complexes. Role of luminal domain in complex formation and localization // J. Biol. Chem. 2000. Vol. 275. - P. 11836-11845.

182. Oprins A., Duden R., Kreis T.E., Geuze H.J., Slot J.W. Beta-COP localizes mainly to the cis-Golgi side in exocrine pancreas // J. Cell Biol. -1993.-Vol. 121.-P. 49-59.

183. Orci, L., Amherdt M., Ravazzola M., Perrelet A., Rothman J.E. Exclusion of Golgi residents from transport vesicles budding from Golgi cisternae in intact cells // J. Cell Biol. 2000. - Vol. 150. - P. 1263-1270.

184. Orci L., Glick B.S., Rothman J.E. A new type of coated vesicular carrier thet appears not to contain clathrin: its possible role in protein transport within the Golgi stack // Cell. 1986. Vol. 46. - P. 171-184.

185. Orci L., Palmer D.J., Ravazzola M., Perrelet A., Amherdt M., Rothman J.E. Budding from Golgi membranes requires the coatomer complex of non-clathrin coat proteins // Nature. 1993 - Vol. 362. - P. 648-652.

186. Orci L., Perrelet A., Rothman J.E. Vesicles on strings: morphological evidence for processive transport within the Golgi stack // Proc. Natl. Acad. Sei. U. S. A. 1998. - Vol. 95. - P. 2279-2283.

187. Orci L., Stamnes M., Ravazzola M., Amherdt M., Perrelet A., Sollner T.H., Rothman J.E. Bidirectional transport by distinct populations of COPI-coated vesicles // Cell. 1997. - Vol. 90. - P. 335-349.

188. Ostermann J., Orci L., Tani K., Amherdt M., Ravazzola M., Elazar Z., Rothman J. E. Stepwise assembly of functionally active transport vesicles // Cell. 1993. - Vol. 75. - P. 1015-1025.

189. Palade G. Intracellular aspects of the process of protein synthesis // Science. 1975. - Vol. 89. - P. 347-358.

190. Parczyk K., Haase W., Kondor-Koch C. Microtubules are involved in the secretion of proteins at the apical cell surface of the polarized epithelialcell, Madin-Darby canine kidney // J. Biol. Chem. 1989. - Vol. 264. - P. 16837-16846.

191. Parent J.B., Bauer H.C., Olden K. Three secretory rates in human hepatoma cells // Biochim. Biophys. Acta. 1985. - Vol. 846. - P. 44-50.

192. Pavelka M. and A. Ellinger. Early and late transformations occurring at organelles of the Golgi area under the influence of brefeldin A: an ultrastructural and lectin cytochemical study // J. Histochem. Cytochem. -1993. Vol. 41. - P. 1031-1042.

193. Pavelka M., Ellinger A., Debbage P., Loewe C., Vetterlein M., Roth J. Endocytic routes to the Golgi apparatus // Histochem. Cell Biol. 1998. -Vol.-109.-P. 555-570.

194. Pelham H.R. Recycling of proteins between the endoplasmic reticulum and Golgi complex // Curr Opin Cell Biol. 1991. - № 3. - P. 585-591.

195. Pelham H.R., Roberts L.M., Lord J.M. Toxin entry: how reversible is the secretory pathway? // Trends Cell Biol. 1992. - № 2. - P. 183-185.

196. Pelham H.R. About turn for the COPs? // Cell 1994. - Vol. 79. - P. 1125-1127.

197. Pelham H.R. 1997 Membrane transport. Green light for Golgi traffic. Nature 389:17-19.

198. Pelham H.R. Getting stuck in the Golgi // Traffic. 2000. - №. 1. - P. 19119-2.

199. Pelham H. R. Traffic through the Golgi apparatus // J. Cell Biol. -2001.-Vol. 155.-P. 1099-1101.

200. Pelham H.R., J.E. Rothman. The debate about transport in the Golgi-two sides of the same coin? // Cell. 2000. - Vol. 102. - P. 713-719.

201. Pereira-Leal J.B., M.C. Seabra. Evolution of the Rab family of small GTP-binding proteins // J. Mol. Biol. 2001. - Vol. 313. - P.889-901.

202. Pepperkok R., Scheel J., Horstmann H., Hauri H.P., Griffiths G. Kreis T.E. Beta-COP is essential for biosynthetic membrane transport from the endoplasmatic reticulum to the Golgi complex in vivo // Cell 1993. -Vol. 74.-P. 71-82.

203. Peters P. Cryoimmunogold electron microscopy // In Current Protocols in Cell Biology. John Wiley & Sons, New York. 1999.

204. Pfeffer S. R. Constructing a Golgi complex // J. Cell Biol. 2001. -Vol. 155.-P. 873-875.

205. Polishchuk R.S. and A.A. Mironov. Structural aspects of Golgi function // Cell Mol. Life Sci. 2004. - Vol. 61. - P. 146-158.

206. Presley J. F., Cole N.B., Schroer T.A., Hirschberg K., Zaal K.J., Lippincott-Schwartz J. ER-to-Golgi transport visualized in living cells // Nature. 1997. - Vol. 389. P. 81-85.

207. Preuss D., Mulholland J., Franzusoff A., Segev N., D. Botstein. Characterization of the Saccharomyces Golgi complex through the cell cycle by immunoelectron microscopy // Mol Biol Cell. 1992. - Vol. 3: P. 789-803.

208. Pullikuth A.K. and Weidman P.J. In vitro transport on cis and trans-sides of the Golgi involves two distinct types of coatomer and ADP-ribosylation factor-independent transport intermediates // J. Biol Chem. 2002. Vol. 277. - P. 50355-50364.

209. Rabouille C., Hui N., Hunte F., Kieckbusch R., Berger E.G., Warren G., Nilsson T. Mapping the distribution of Golgi enzymes involved in the construction of complex oligosaccharides // J. Cell Sci. Vol. 1995. Vol. 108.-P. 1617-1627.

210. Rabouille C., Kuntz D.A., Lockyer A., Watson R., Signorelli T., Rose D.R., van den Heuvel M., Roberts D.B. The Drosophila GMII gene encodes a Golgi alpha-mannosidase II // J. Cell Sci. 1999. - Vol. 112. - P. 3319-3330.

211. Rambourg A. and Y. Clermont. Three-dimensional electron microscopy: structure of the Golgi apparatus // Eur. J. Cell Biol. 1990. -Vol. 51.-P. 189-200.

212. Rambourg A. and Y. Clermont. Three dimensional structure of the Golgi apparatus in mammalian cells // In: The Golgi Apparatus. 1997. -Berger E.G. and J. Roth, editor. Birkhauser Verlag, Basel (CH). - P.37-62.

213. Rambourg A. and Y. Clermont. Tridimensional structure of the Golgi apparatus in type A ganglion cells of the rat // Am. J. Anat. 1986. Vol. 176. -P. 393-409.

214. Rambourg A., Clermont Y., Hermo L. Three-dimensional architecture of the Golgi apparatus in Sertoli cells of the rat // Am. J. Anat. 1979. - Vol. 154. - P. 455-476.

215. Rambourg, A., Clermont Y., Ovtracht L., Kepes F. Three-dimensional structure of tubular networks, presumably Golgi in nature, in various yeast strains: a comparative study // Anat. Rec. 1995. Vol 243. -P. 283-293.

216. Rindler M.J., Ivanov I.E., Sabatini D.D. Microtubule-acting drugs lead to the nonpolarized delivery of the influenza hemagglutinin to the cell surface of polarized Madin-Darby canine kidney cells // J. Cell Biol. -1987.-Vol. 104.-P. 231-241.

217. Robinson M.S. and J.S. Bonifacino. Adaptor-related proteins // Curr. Opin. Cell Biol. 2001. - Vol. 13. - P.444-453.

218. Rogalski A.A., J.E. Bergmann, Singer S.J. Effect of microtubule assembly status on the intracellular processing and surface expression of an integral protein of the plasma membrane // J. Cell Biol. 1984. - Vol. 99. -P. 1101-1109.

219. Rojo M., Pepperkok R., Emery G., Kellner R., Stang E., Parton R.G., Gruenberg J. Involvement of the transmembrane protein p23 in biosynthetic protein transport // J. Cell Biol. 1997. - Vol. 139. - P. 1119 - 1135.

220. Rose J.K. and J.E. Bergmann. Altered cytoplasmic domains affect intracellular transport of the vesicular stomatitis virus glycoprotein // Cell. -1983. Vol. 34.-P. 513-524.

221. Rossanese O.W. and B.S. Glick. Deconstructing Golgi inheritance // Traffic 2001. Vol. 2. - P. 589-596.

222. Roth J. Topology of glycosylation in the Golgi apparatus // In: The Golgi Apparatus. 1997. Birkhauser Verlag, Basel (CH). - P. 131-161.

223. Rothman J.E. Mechanisms of intracellular protein transport // Nature. 1994. - Vol. 372. - P. 55-63.

224. Rothman J.E., Miller R.L., Urbani L.J. Intercompartmental transport in the Golgi complex is a dissociative process: facile transfer of membrane protein between two Golgi populations // Cell Biol. 1984a. - Vol. 90. -P.260-271.

225. Rothman J.E, L.J. Urbani, R. Brands. Transport of protein between cytoplasmic membranes of fused cells: correspondence to processes reconstituted in a cell-free system // J. Cell Biol. 1984b - Vol. 99. - P. 248-259.

226. Rothman J. E. and F. T. Wieland. Protein sorting by transport vesicles // Science 1996. - Vol. 272. - P. 227-234.

227. Rothman J.E. and G. Warren. Implications of the SNARE hypothesis for intracellular membrane topology and dynamics // Curr. Biol. 1994. -Vol. 4. - P. 220-233.

228. Rowe T., Dascher C., Bannykh S., Plutner H., Balch W.E. Role of vesicle-associated syntaxin-5 in the assembly of pre-Golgi intermediates // Science. 1998. - Vol. 279. - P. 696-700.

229. Sabesin S.M. and S. Frase. Electron microscopic studies of the assembly, intracellular transport, and secretion of chylomicrons by rat intestine // J. Lipid Res. 1977. - Vol. 18. - P. 496-511.

230. Salama N.R. Schekman R.W. The role of coat proteins in the biosyntesis of secretory proteins // Curr. Opin. Cell.Biol. 1995. - Vol. 7. -P.536-543.

231. Saraste J. and E. Kuismanen. Pre- and post-Golgi vacuoles operate in the transport of Semliki Forest Virus membrane glycoproteins to the cell surface // Cell 1984. - Vol. 38. - P. 535-549.

232. Sasaki T. Ultrastructure and cytochemistry of the Golgi apparatus and related organelles of the secretory ameloblasts of the rat incisor // Arch. Oral. Biol. 1983. - Vol. 28 - P. 895-905.

233. Scales S.J., Pepperkok R., Kreis T.E. Visualization of ER-to-Golgi transport in living cells reveals a sequential mode of action for COPII and COPI // Cell 1997 - Vol. 90. - P. 1137-1148.

234. Scheel J., Matteoni R., Ludwig T., Hoflack B., Kreis T.E. Microtubule depolymerization inhibits transport of cathepsin D from the Golgi apparatus to lysosomes // J. Cell Sci. 1990. - Vol. 96. - P. 711-720.

235. Schekman R. and I. Melmann. Does COPI go both ways? // Cell 1997.-Vol. 90.-P. 197-200.

236. Schekman R. and Orci L. Coat proteins and vesicle budding // Science. 1996. - Vol. 271. - P. 1526-1533.

237. Schnitzer T.J., Dickson C., Weiss R.A. Morphological and biochemical characterization of viral particles produced by the ts045 mutant of vesicular stomatitis virus at restrictive temperature // J. Virol. -1979.-Vol. 29.-P. 185-195.

238. Schweizer R., Matter K., Ketcham C. A., Hauri H. The isolated ER-Golgi intermediate compartment exhibits properties that are different from ER and cis-Golgi // J. Cell Biol. 1991. - Vol. 113. - P. 45-54.

239. Sciaky N., Presley J., Smith C., Zaal K.J., Cole N., Moreira J.E., Terasaki M., Siggia E., Lippincott-Schwartz J. Golgi tubule traffic and the effects of brefeldin A visualized in living cells // J. Cell Biol. 1997. - Vol. 139.-P. 1137-1155.

240. Seemann J., Jokitalo E.J., Warren G. The role of the tethering proteins pi 15 and GM130 in transport through the Golgi apparatus in vivo // Mol. Biol. Cell. 2000. - № 11. - P. 635-645.

241. Short B. and F.A. Barr. Membrane traffic: a glitch in the Golgi matrix // Curr. Biol. 2003. - № 13. - P. 311-313.

242. Shorter J. and G. Warren. A role for the vesicle tethering protein, pi 15, in the post-mitotic stacking of reassembling Golgi cisternae in a cellfree system // J. Cell Biol. 1999. - Vol. 146. - P. 57-70.

243. Shorter J. and G. Warren. Golgi architecture and inheritance // Annu. Rev. Cell Dev. Biol. 2002. - № 18. - P. 379-420.

244. Sitia R. and J. Meldolesi. Endoplasmic reticulum: a dynamic patchwork of specialized subregions // Mol. Biol. Cell. 1992. - № 3. - P. 1067-1072.

245. Sjostrand F.S., and V. Hanzon. Ultrastructure of Golgi apparatus of exocrine cells of mouse pancreas // Exp. Cell Res. 1954. - № 7. - P. 415429.

246. Slusarewicz P., Nilsson T., Hui N., Watson R., Warren G. Isolation of a matrix that binds medial Golgi enzymes // J Cell Biol. 1994. -Vol. 124.-P. 405-413.

247. Sollner T., Whiteheart S.W., Brunner M., Erdjument-Bromage H., Geromanos S., Tempst P., Rothman J.E. SNAP receptors implicated in vesicle targeting and fusion // Nature. 1993. - Vol. 362. - P. 318-324.

248. Somsel Rodman J. and A. Wandinger-Ness. Rab GTPases coordinate endocytosis // J. Cell Sci. 2000. - Vol. 113.-P. 183-1.

249. Sonnichsen B., Watson R., Clausen H., Misteli T., Warren G. Sorting by COP I-coated vesicles under interphase and mitotic conditions // J. Cell Biol. 1996. - Vol. 134. - P. 1411-1425.

250. Stinchcombe J.C., Nomoto H., Cutler D.F., Hopkins C.R. Anterograde and retrograde traffic between the rough endoplasmic reticulum and the Golgi complex // J. Cell Biol. 1995. - Vol.131. - P. 1387-1401.

251. Storrie B. and T. Nilsson. The Golgi apparatus: balancing new with old // Traffic. 2002. - № 3. - P. 521-529.

252. Storrie B., Pepperkok R., Nilsson T. Breaking the COPI monopoly on Golgi recycling // Trends Cell Biol. 2000. - № io. - P.385-391.

253. Stults N.L., Fechheimer M., Cummings R.D. Relationship between Golgi architecture and glycoprotein biosynthesis and transport in Chinese hamster ovary cells // J. Biol. Chem. 1989. - Vol. 264. - P. 19956-19966.

254. Tanaka K., and H. Fukudome. Three-dimensional organization of the Golgi complex observed by scanning electron microscopy // J. Electron Microsc. Tech. 1991. - № 17. - P. 15-23.

255. Tanaka K., Mitsushima A., Fukudome H., Kashima Y. Three-dimensional architecture of the Golgi complex observed by high resolution scanning electron microscopy // J. Submicrosc. Cytol. 1986. - № 18. -P.l-9.

256. Tang B.L., Low S.H., Hauri H.P., Hong W. Segregation of ERGIC53 and the mammalian KDEL receptor upon exit from the 15 degrees C compartment//Eur. J. Cell Biol. 1995. -№ 68. - P.398-410.

257. Tang B.L., Wong S.H, Qi X.L., Low S.H., Hong W. Molecular cloning, characterisation, subcellular localization and dynamics of p23, the mammalian KDEL receptor // J. Cell Biol. 1993. - Vol.120. - P.325-328.

258. Tanigawa G., Orci L., Amherd M., Ravazzola M., Helms J.B., Rothman J.E. Hydrolysis of bound GTP by ARF protein triggers uncoating of Golgi-derived COP-coated vesicles // J. Cell Biol. 1993.- Vol. 123. -P. 1365-1371.

259. Taylor T.C., Kahn R.A., Melancon P. Two distinct members of the ADP-ribosylation factor family of GTP-binding proteins regulate cell-free intra-Golgi transport // Cell. 1992. - Vol. 70. - P. 69-79.

260. Taylor T.C., Kanstein M., Weidman P., Melangon P. Cytosolic ARFs are required for vesicle formation but not for cell-free intra-Golgi transport: evidence for coated vesicle-independent transport // Mol. Biol. Cell. 1994. - № 5. p. 237-252.

261. Thyberg J. and S. Moskalewski. Microtubules and the organization of the Golgi complex // Exp. Cell Res. 1985. - Vol. 159. P. 1-16.

262. Thyberg J. and S. Moskalewski. Role of microtubules in the organization of the Golgi complex // Exp. Cell Res. 1999. - Vol. 246. P. 263-279.

263. Thorne-Tjomsland G., Dumontier M., Jamieson J.C. 3D topography of non-compact zone Golgi tubules in rat spermatids: a computer-assisted serial section reconstruction study // Anat. Rec. 1998. - Vol. 250. -P.381-96.

264. Varki A. Factors controlling the glycosylation potential of the Golgi apparatus // Trends in Cell Biol. 1998. - № 8. - P. 34-40.

265. Velasco A., Hendricks L., Moremen K.W., Tulsiani D.R., Touster O., Farquhar M.G. Cell type-dependent variations in the subcellular distribution of alpha-mannosidase I and II // J. Cell Biol. 1993. - Vol. 122. - P.39-51.

266. Warren G. and V. Malhotra. The organisation of the Golgi apparatus // Curr. Opin. Cell Biol. 1998. - № 10. - P. 493-498.

267. Weber T., Zemelman B.V., McNew J.A., Westermann B., Gmachl, F. Parlati M., Sollner T.H., J. E. Rothman. SNAREpins: minimal machinery for membrane fusion // Cell 1998. - Vol. 92. -P. 759-772.

268. Weidman P.J. Anterograde transport through the Golgi complex: do Golgi tubules hold the key? // Trends Cell Biol. 1995. - № 5. - P. 302305.

269. Weidman P., Roth R., Heuser J. Golgi membrane dynamics imaged by freeze-etch electron microscopy: views of different membrane coatings involved in tubulation versus vesiculation // Cell 1993. - Vol. 75. -P.123-133.

270. Weidman P.J. and W.M. Winter. The G protein-activating peptide, mastoparan, and the synthetic NH2-terminal ARF peptide, ARFpl3, inhibit in vitro Golgi transport by irreversibly damaging membranes // J. Cell Biol. 1994. Vol. 127. P. 1815-1827.

271. Weiss M. and T. Nilsson. Protein sorting in the Golgi apparatus: a consequence of maturation and triggered sorting // FEBS Lett. 2000. -Vol. 486. - P. 2-9.

272. Weisz O.A., Swift A.M., Machamer C.E. Oligomerization of a membrane protein correlates with its retention in the Golgi complex // J. Cell Biol. 1993. - Vol. 122.-P. 1185-1196.

273. Whitney J.A., Gomez M., Sheff D., Kreis T. E., Mellman I. Cytoplasmic coat proteins involved in endosome function // Cell 1995. -Vol. 83.-P. 703-713.

274. Wilson B.S., Nuoffer C., Meinkoth J.L., McCaffery M., Feramisco J.R., Balch W.E., M.G. Farquhar. A Rabl mutant affecting guanine nucleotide exchange promotes disassembly of the Golgi apparatus // J. Cell Biol. 1994. - Vol. 125. - P. 557-571.fa

275. Wooding S. and H.R. Pelham. The dynamics of Golgi protein traffic visualized in living yeast cells. Mol.Biol // Cell. 1998. - № 9. - P.2667-2680.

276. Yang J.S., Lee S.Y., Gao M., Bourgoin S., Randazzo P.A., Premont R.T., Hsu V.W. ARFGAP1 promotes the formation of COPI vesicles, suggesting function as a component of the coat // J. Cell Biol. 2002. -Vol. 159. - P. 69 - 78.

277. Yang W. and B. Storrie. Scattered Golgi elements during microtubule disruption are initially enriched in trans-Golgi proteins // Mol. Biol. Cell. -1998.-№9.-P. 191-207.